Contedo

MEIOS DE CULTURA ................................................................................................................... 1

Bsicos ................................................................................................................................ 2
Especiais ............................................................................................................................. 2
Objetivos .................................................................................................................................. 2
APLICAO DOS MEIOS DE CULTURA .......................................................................................... 2
Meios de pr-enriquecimento .............................................................................................. 2
Meios de Enriquecimento ..................................................................................................... 2
Diferenciais ......................................................................................................................... 3
Seletivos .............................................................................................................................. 3
Meios de triagem ................................................................................................................. 3
Identificao ........................................................................................................................ 3
Dos agem .............................................................................................................................. 3
Contagem ............................................................................................................................. 3
Estocagem ou manuteno ................................................................................................. 3
PREPARO DE MEIOS DE CULTURA ............................................................................................... 4
Caldo Simples - formulao: ................................................................................................ 4
Preparao ...................................................................................................................... 4
gar Simples ........................................................................................................................ 5
Funo das substncias do gar e Caldo simples .......................................................... 5
MEIOS DE CULTUR A
At cerca de 1880 os microrganismos eram cultivados em meios lquidos, quando
Robert Koch e sua equipe introduziram os meios de cultura slidos, os quais permitiram o
es tudo de espcies isoladas (culturas puras), separando -as de espcies contaminantes.
Meios de cultura consistem da associao qualitativa e quantitativa de substncias
que fornecem os nutrientes necessrios ao desenvolvimento (cultivo) de microrganismos
fora do seu meio natural. Tendo em vista a ampla diversidade metabli ca dos
microrganismos, existem vrios tipos de meios de cultura para satisfazerem as variadas
exigncias nutricionais. A lm dos nutrientes preciso fornecer condies ambientais
favorveis ao desenvolvimento dos microrganismos, tais como pH, presso osmt ica,
umidade, temperatura, atmosfera (aerbia, microaerbia ou anaerbia), dentre outras.
Os meios de cultura so classificados quanto ao es tado fs ico em slidos , quando
contm agentes solidificantes, principalmente gar (cerca de 1 a 2,0 %); semi-s lidos ,
quando a quantidade de gar e ou gelatina de 0,075 a 0,5 %, dando uma consistncia
intermediria, de modo a permitir o crescimento de microrganismos em tenses variadas de
oxignio ou a verificao da motilidade e tambm para conservao de culturas; e lquidos,
sem agentes solidif icantes, apresentando -se como um caldo, utilizados para ativao das
culturas , repiques de microrganismos, provas bioqumicas, dentre outros.

Os meios de cultura podem ainda ser classificados quanto procedncia dos

cons tituintes em naturais ou complexos , quando usa ingredientes com compos io
qumica no definida , tais como extratos de vegetais (malte, tomate, amido de tubrculos,
peptona de soja, etc.) de animais (carne, crebro, fgado, casena, etc.) e de
microrganismos (levedura) e artificiais , s intticos ou ainda quimicamente definidos
quando a compos io qumica conhecida (usados para trabalhos de pesquisa) e seus
componentes servem para suprir as exigncias nutritivas dos microrganismos, em fontes de
carbono, nitrognio, vitaminas, energia, sais minerais, dentre outros, quando ento so
conhecidas as necessidades nutricionais especficas. Quanto composio qumica podem
ser s imples (meios bsicos) ou complexos.

Bsicos

So aqueles que permitem o crescimento bacte riano, sem satisfazer , contudo nenhuma
exigncia em especial (Ex. caldo e gar simples).
Especiais

Quando cumprem com as exigncias vita is de determinados microrganismos, como meio de

infus o de crebro e corao, gar suco de tomate, gar sangue, meio de Loeffler (com soro
bovino), gar chocolate ( gar simples fundido, adicionado de sangue e aquecido a 80C),
Meio de Tarozzi (com fragmento de fgado - para anaerbios), Meio de Low enstein, meios
Shahidi Ferguson Perfringens (SFP), Triptose Sulfito Ciclosser ina (TSC), Baird-Parker (com
gema de ovo) (meios ricos ou meios enriquecidos com as substncias citadas), etc.
Objeti vos
Es ta parte trata de familiarizar o aluno com o preparo e esterilizao de meios de cultura,
bem como conhecer e discutir a aplicao dos diversos tipos de meios de cultura.

APLIC A O DOS MEIOS DE CULTUR A

De acordo com a finalidade bacteriolgica ou micolgica os meios especiais podem ser
class ificados em:

Meios de pr-enriquecimento
So aqueles que permitem a dessensibiliza o de microrganismos injuriados, i.e., para
amos tras que sofreram algum tipo de tratamento (trmico ou qumico). Ex. gua peptonada,
caldo lactosado (isolamento de salmonelas de leite em p).

Meios de Enriquecimento
Quando proporcionam nutrientes adequa dos ao crescimento de microrganismos presentes
us ualmente em baixos nmeros ou de crescimento lento, bem como microrganismos
exigentes e fastidiosos. Esses meios tm a propriedade de estimular o crescimento de

determinados microrganismos, mas existem algun s que tambm podem inibir o crescimento
de outros. Ex. Caldo Tetrationato e Selenito -Cistina para cultivo de Salmonelas (lquidos ),
Caldo Tioglicolato para Clostridium perfringens .

Diferenciais
Quando contm substncias que permitem estabelecer diferena s entre microrganismos
muito parecidos, tais como meio de Teague ou Eosina Azul de Metileno (diferencial para
coliformes), gar MacConkey para a diferenciao de enterobactrias, gar sangue, gar
Baird-Parker para isolamento e diferenciao de cocos Gram positivos (slidos).

Seletivos
Os que contm substncias que inibem o desenvolvimento de determinados grupos de
microrganismos, permitindo o crescimento de outros. Exemplo: meios com telurito de
potss io (para isolamento de Corynebacterium diphtheriae ), gar Salmonella -Shigella (SS) e
gar MacConkey, meios com sais biliares e verde brilhante para isolamento seletivo de
Salmonella , meios com 7,5% de cloreto de sdio, meio Baird -Parker, para isolamento de
Staphylococcus aureus , meios com antibiticos para isolamento de diversos microrganismos
(TSC, SFP , meio de Blaser, meio de Skirrow , etc.). A maioria deles tambm diferencial,
permitindo diferenciar as colnias (slidos) dos microrganismos.

Meios de triagem
Meios que avaliam determinadas atividades me tablicas permitindo caracterizao e
identificao perfunctria ou presuntiva de muitos microrganismos (gar trplice acar e
ferro, meio Instituto Adolfo Lutz, uria, etc.);

Identificao
Presta-se para a realizao de provas bioqumicas e verificao de funes fisiolgicas de
organis mos submetidos identif icao (meios Oxidao/Fermentao, gar Citrato, Caldo
nitrato, meio semi-slido, caldo triptofano, meio de Sulfito Indol Motilidade, etc.;

Dosagem
Empregados nas determinaes de vitaminas, antibiticos e aminocidos;

Contagem
Empregados para a determinao quantitativa da populao microbiana (Agar de Contagem
em Placas, TSC, Agar Batata Dextrose, gar Baird -Parker, etc.);
Estocagem ou manuteno

Utilizados para conservao de microrgani smos no laboratrio, i.e. Garantem a viabilidade

de microrganismos (gar Sabouraud, Meios com leite, gar suco de tomate, gar sangue,
gar Simples, meio semi-slido, etc.).

PREPARO DE MEIOS DE CULTUR A

Caldo Simples - formulao:

Extrato de carne... 0,3 g
Peptona... 1,0 g
Cloreto de sdio... 0,5 g
gua destilada... 100,0 ml
O gar simples obtido adicionando -se 1,0 a 1,5 % de gar -gar ao meio de caldo
s imples (o meio pode ficar um pouc o amolecido, a depender da qualidade do gar).
Aumentando-se a concentrao de gar para 2,0% o meio f ica bem slido e se pode evitar
que certos microrganismos se espalhem, como os Proteus .

Preparao
1. Pesar as substncias e coloc -las em um bquer (a ex ceo do gar)
2. Acrescentar a metade dos 100 ml de gua destilada ou desmineralizada, medida com uma
proveta
3. Diss olver os ingredientes em gua agitando continuamente com um basto de vidro ou
com um agitador eltrico (uso de barra magntica), evitan do a formao de espuma. Aps
a formao de uma suspenso homognea, completar o volume do meio com o restante da
gua
4. Quando necessrio, dissolver os ingredientes do meio de cultura em banho -maria, vapor
fluente em autoclave ou utilizando a chama do b ico de Bunsen, ou chapa aquecedora
eltrica, protegida com tela de amianto, ou ainda em forno de microondas, at a ebulio,
agitando sempre. Evitar o aquecimento desnecessrio
5. Filtrar em papel de filtro qualitativo para retirar as impurezas
6. Verificar o pH atravs de potencimetro ou fita indicadora de pH e ajustar para 7,2
us ando soluo de cido ltico (0,1 %) ou hidrxido de sdio (1,0 N), com pipeta de 1
mililitro, gotejando aos poucos. O pH do gar simples ajustado antes da adio do
gar-gar
7. Dis tribuir 50 ml do meio em tubos de ensaio (5 a 7 ml por tubo)
8. Tamponar os tubos, proteg -los com papel e amarr -los com barbante
9. Es terilizar em autoclave a 121C (1 atmosfera de presso) por 20 minutos. Deixar dois
tubos sem esterilizar, incub-los a 37C por 24 a 48 horas, para constatar a necessidade
de esterilizao.
Obs ervao: A lguns meios de cultura so preparados da mesma forma, porm se for
necessrio utilizar algumas substncias termolbeis (uria) ou que reajam com as
subs tncias dos meios (aminocidos, acares), as mesmas so esterilizadas parte ou por
filtrao utilizando Filtro Seitz ou Filtros contendo membranas (de nitrocelulose ou acetato

de celulose) com poros de 0,22 u m de dimetro (Millipore, Sartorius), e depois incorp oradas,
assepticamente, ao meio previamente esterilizado. A inda, podem ser esterilizados por
tindalizao, tambm conhecida como esterilizao fracionada (100C por 1 hora por 3 dias
consecutivos, intercalados por incubao entre 30 a 45C), ou a 110C por 10 a 15 minutos , a
depender do tipo e carga microbiana.

gar Simples
1. A os 50 ml de caldo simples restantes, acrescentar 0,5 a 1,0 g de gar -gar
2. Colocar o bquer sobre uma tela de amianto (ajustada num trip metlico tendo por baixo
o bico de Bunse n aceso)
3. Diss olver o gar no meio, mexendo sempre com um basto de vidro, para no aderir ao
bquer, at a completa dissoluo, evidenciada pela ausncia de grnulos de gar nas
paredes do recipiente, tornando -se lmpido. Isto somente se consegue com a ebulio do
meio
4. Colocar em Erlenmeyer, tampar, proteger com papel e barbante
5. Es terilizar em autoclave a 121C por 20 minutos
6. Retirar do autoclave, esfri -lo a 50-70C e distribuir (cerca de 15 a 20 ml por cada
placa) em placas de Petri (15 x 1 00mm) estreis. Ou ainda, caso necessrio, colocar em
banho-maria a 45 -55C, adicionar 10 ml de sangue oxalatado de coelho ou de ovino ( gar
Sangue), e distribuir em placas de Petri estreis. (previamente esterilizadas). Se antes
da distribuio este meio for aquecido a 80C at ficar de cor marrom, temos o Agar
chocolate.

Funo das substncias do gar e Caldo simples

Extrato de carne - Fonte de carbono orgnico, nitrognio, vitaminas e sais minerais e, nesse
cas o de energia
Peptona protena semi-digerida que serve como fonte de nitrognio
Cloreto de sdio - aumenta a presso osmtica e mantm a isotonia do meio
gar-gar - Sulfato de cido poligalacturnico extrado de vrias espcies de algas do
gnero Gellidum e outras algas afins. Tem como funo sol idificar os meios e no
metabolizado por bactrias de interesse clnico.
Obs . 1. A adio de extrato de levedura (0,5%) e glicose (0,5 a 1,0 %) ao caldo simples
enriquece o meio fornecendo vitamina B, fonte adicional de nitrognio e carbono, e pode at
permitir o crescimento de alguns microrganismos exigentes. 2. Os meios de cultura aps
es terilizao devem ser incubados em condies ambientais (temperatura e atmosfera)
adequadas para verificao da esterilidade (Prova da esterilidade). 3. A estocagem do s
meios de cultura esterilizados e esfriados deve ser feita acondicionando -os invertidos, em
sacos plsticos fechados, para reduzir a desidratao dos mesmos, colocando -os em
refrigerao por, no mximo 15 dias .