BILIRRUBINA

USO DEL PRODUCTO

Para la determinacin de Bilirrubina Directa y Total en Suero o
Plasma. Mtodo Color Diazo-Reaccin.
SIGNIFICACION CLINICA
Las causas ms comunes del aumento de la bilirrubina directa
son las enfermedades hepatocelulares y de los conductos biliares. El aumento de la bilirrubina indirecta, puede indicar ;
1)Un aumento de la produccin (hemlisis )
2)Disminucin en el transporte (anticuerpos y medicamentos)
3)Defecto en la captacin ( defecto o bloqueo de los receptores )
4)Defecto en la conjugacin (enfermedad de Gilbert ,
entre otras )
FUNDAMENTO DEL MTODO
Se basa en la produccin de azopigmento rojo en medio neutro, por reaccin directa de la bilirrubina conjugada con el
cido sulfanilico diazotado con nitrilo.
Para la reaccin de la bilirrubina no conjugada (indirecta) es
necesario el agregado de un acelerador que aumente la
solubilidad del pigmento en medio acuoso.
REACTIVOS PROVISTOS
Acelerador: solucin acuosa de cafena: 257 mmol/I, benzoato
de sodio: 510 mmol/I, acetato de sodo: 860 mmol/I.
Sulfanlico: cido sulfanlco: 13 mmol/I en HCI: 0,18 mmol/I.
Nitrito: nitrito de sodio: 72 mmol/l en solucin acuosa.
Reactivo Diazo: Se prepara mezclando 20 partes del reactivo
Sulfanilico y una parte del reactivo Nitrito. (Ej: 1 ml y una gota
50). Estable 15 das a (2-8C)
Estndar: Vial conteniendo 500 g de bilirrubina (provisto separadamente) y frasco con Solucin Disolvente.
REACTIVOS Y MATERIAL AUXILIAR NO PROVISTOS
-Bao Maria de 37C
-Timmer
-Pipetas y micropipetas
-Tubos y Cubetas de Vidrio
-Fotmetro o Espectrofotmetro
Conservacin de los Reactivos provistos
Todos los reactivos deben conservarse a temperatura ambiente
y protegidos de la luz. La estabilidad alcanza la fecha de vencimiento indicada en la caja.
El Reactivo Diazo debe prepararse en cantidades suficientes para
el trabajo diario.
Precaucines y advertencias sobre el uso de los Reactivos
Todos los reactivos deben conservarse a temperatura (5-25 C)
y protegidos de la luz. La estabilidad alcanza la fecha de vencimiento indicada en la caja.
Indicios de inestabilidad o deterioro
Cambio de color o presencia de sedimentos es indice de
deterioro.
MUESTRA
Suero o plasma recogido con heparina.
Condiciones de conservacin de las muestras
Hasta el momento de realizarse la determinacin, las muestras
deben conservarse PROTEGIDAS DE LA LUZ. Procesar en el da.

De no ser posible, realizarlo dentro de las 48 horas conservando

la muestra en el refrigerador.
Sustancias nterferentes
Ligera a moderada hemlisis causa interterencia.
Manipulacin y descarte
Las muestras de pacientes deben manipularse considerndolas
potencialmente infecciosas, al igual que el material descartable
y los utilizados en el ensayo, que hayan estado en contacto con
las mismas. Un procedimiento aconsejado para descartarlos es
el siguiente: autoclavado a 121C durante una hora y el tratamiento de los liquidas residuales con hipoclorito de sodio durante una hora a una concentracin final del 5%.
ENSAYO
Bilirrubina en suero o plasma
Procedimiento: En tres tubos rotulados colocar: (NOTA 1)
Bilirrubina
B

Directa

Total

Muestra

200 l

200 l

200 l

H2O dest.

2,5ml.

2,5ml.

Acelerador

2,5ml.

Sulfanlico

0,2ml.

Rvo. Diazo

0,2ml.

0,2ml.

Mezclar cada tubo por inversin inmediatamente despus

del agregado del reactivo Diazo. Reposar a temp. ambiente.
A los 5 minutos exactos leer Bilirnubina Directa.
Entre 5-15 minutos leer Bilrrubina total. Espectrofotmetro a
530 nm o fotocolormetro a 520-550 nm llevado a cero con
agua destilada.
CALCULOS
Previamente corregir las lecturas de las muestras T y D,
restndoles el Blanco.
Bilirrubina Total mg/l = lect. corregida x fct.
Bilirrubina Directa mg/I = ect. corregida x fct.
Bilirrubina indirecta mg/l = Total - Directa
CURVA DE CALIBRACION.
Factor colorimetro
Reconstitucin del Estndar de bilirrubina
(PROTEGER SIEMPRE DE LA LUZ)
Agregar en el vial 5 ml exactamente medidos de Solucin
Disolvente. Dejar reposar a temperatura ambiente unos 10
minutos. Agitar otros 5 minutos hasta disolucin total.
La concentracin resultante es de: bilirrubina 100 mg/l.
Se recomienda su utilizacin dentro de la hora de preparado
para obtener mxima precisin en el clculo del lactar. La estabilidad de la solucin mantenida en el congelador es de por lo
menos 48 horas.
Procedimiento: En tubos rotulados colocar:

concentracin
mg/l

25

50

100

Intraensayo

Tubo

B1

B2

B3

Nivel Medio

Rango

D.S.

C.V.%

Estndar

50 l

50 l

100 l

100 l

200 l

200 l

2,1 mg/l

1,9-2,2 mg/l

0,11 mg/l

5,2

H2O dest.

2,6ml

2,6ml

2,5ml

45,2 mg/l

42,3-47,9 mg/l

0,52 mg/l

1,1

Acelerador

2,6ml

2,6ml

2,5ml

Sulfanlico

0,2ml

0,2ml

0,2ml

Nivel Medio

Rango

D.S.

C.V.%

45,1 mg/l

42,2-48,1 mg/l

0,61 mg/l

1,3

Mezclar agitando moderadamente

Rvo.Diazo

0,2ml

0,2ml

0,2ml

Mezclar cada tubo por inversin inmediatamente despus del agregado del reactivo Diazo.
Reposar 5 minutos a temp. (15-25c)
Leer en espectrofotmetro a 530 nm o fotocolormetro a 520-550
nm llevando a cero con agua destilada.Color estable 15 minutos.

Curva De Calibracion.
Si bien la reaccin es lineal hasta 150 mg/l, es conveniente verificar la respuesta del sistema a la longitud de onda de trabajo.
Con los valores de lectura corregidas y los correspondientes a la
concentracin, construir un grfico.
Si se verifica respuesta lineal, calcular para cada tubo:
Factor colorimtrico = Bilirrubina mg/l
--------------------Lect. corregida
factor colorimtrico promedio de los valores de trabajo
(fct) = anteriores
CONTROL DE CALIDAD
Se recomienda procesar juntamente con las muestras, sueros
control normal y anormal para controlar la perfomance del ensayo. Se aconseja el uso de Qualiset Sueros Control Nivel 1 y 2
GT Lab (Cdigos 602105-602205) Cada Laboratorio debe disear su propio sistema de Control de Calidad Interno y establecer
las medidas correctivas si se superan los limites de tolerancia
aceptables.
VALORES DE REFERENCIA
Adultos
Bilirrubina total: hasta 10 mg/l
Bilirrubina Directa: 0-2mg/l
Recin nacido
Hasta 60 mg/l dentro de las primeras 24 horas de vida, pudiendo llegar hasta 100 mg/l al cumplir la semana de vida.
Los valores esperados para prematuros son mayores para los
mismos tiempos ya que la inmadurez heptica es ms
significativa.
SISTEMA ANALTICO
1. Linealidad: Hasta 150 mg/l.
2. Sensibilidad: Dependiendo del espectrofotmetro, alcanza
generalmente a 0,2 mg/l.
3. Precisin:

Interensayo

PRESENTACION
Cdigo 81010: 100 determinaciones
Cdigo 81020: 200 determinaciones
Cdigo 86004: Estndar Bilirrubina 5 ml/6 curvas
NOTAS:
1. Los volmenes de muestras y reactivos a utilizar, pueden disminuir o aumentar siempre que se mantengan las proporciones
establecidas en el procedimiento.
Aplicacines para autoanalizadores se encuentran disponibles.
2.La reaccin colorimtrica sigue la ley de Beer hasta 150 mg/l.
Para valores superiores debe emplearse para la misma tcnica
cantidades inferiores de muestra. (Ej.100 l, 50l 20l). Los resultados obtenidos se corrigen multiplicando por los siguientes
factores:
100 l de muestra: resultado x 1,93
50 l de muestra: resultado x 3,79
20 l de muestra: resultado x 9,38
BIBLIOGRAFIA
1. JENDRASIK, GRAFT: Biochem. 2,297,6 (1938).

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cargo de ningn tipo para el usuario. Todo reclamo de calidad deber efectuarse por
escrito debidamente firmado y sellado por el profesional responsable, con el detalle
del desperfecto, acompaando el producto en cuestin para su exanimacin tcnica
por el Departamento de Control de Calidad de Gt Lab. Los reclamos debern ser enviados a travs del Distribuidor que efectu la venta. Las reposiciones y/o respuestas
tcnicas sern cursadas de forma fehaciente al Profesional usuario

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Elaborado por: GT Laboratorio s.r.l
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Cdigo y Fecha de Revisin: 81090000/14