PRCTICA 5:

NUMERACIN
DE BACTERIAS
COLIFORMES,
COLIFORMES
FECALES Y E.
Coli
Microbiologa Agroindustrial
Paulino Ninaquispe

III. MATERIALES

Muestra (Agua)
Placas Petri
Tubos de ensayo 16x150
Tubos de ensayo 13x100
Pipetas de 10 y 1mL.
Campanas de Durham de 10x75
Gradilla
Mechero Bunsen
Caldo lactosa bilis verde brillante
(BRILLA)
Caldo triptonado o peptonado.
Estufa regulada a 35-37C
Bao mara regulado a 44C
Reactivo KOVACS

Microbiologa Agroindustrial
Paulino Ninaquispe

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Paulino Ninaquispe

Microbiologa Agroindustrial
Paulino Ninaquispe

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Paulino Ninaquispe

IV.
PROCEDIMIENTO
A) Determinacin de Coliformes Totales

B)

Figura 1. Determinacin de Coliformes totales.

Determinacin de Coliformes Fecales y E. Coli

Figura 2. Determinacin de Coliformes Fecales y E.

Coli.

V.

R
ESULTADOS
Microbiologa Agroindustrial
Paulino Ninaquispe

Segn la tabla NMP.

Numero de tubos positivos en
cada nivel de dilucin
Dilucin
Dilucin
Dilucin
-1
-2
10
10
10-3
0
1
0
1
0
0
1
0
1
1
1
0
1
2
0
2
0
0
2
0
1
2
1
0
2
1
1
2
2
0
3
0
0
3
0
1
3
1
0
3
1
1
3
2
0
3
2
1
3
2
2

Lmites
NMP por confianza
g.
99%

95%

3
4
7
7
11
9
14
15
20
21
23
40
40
70
90
150
210

<1
<1
1
1
2
1
3
3
5
5
4
10
10
20
20
30
50

<1
1
2
2
4
2
5
5
8
8
7
10
20
20
30
50
80

17
21
27
28
35
38
48
50
61
63
129
180
210
280
390
510
640

200

100

100

1400

500

100

200

2400

1100

200

300

4800

23
28
35
36
44
50
62
65
77
80
177
230
290
370
520
660
820
190
0
320
0
640
0

de

CUADRO DE RESULTADOS PARA MUESTRA A Y B

ANALISIS

MICROORGANISM
O

ANALISIS DE
COLIFORMES
COLIFORMES
NMERO
TOTALES
MS
PROBABLE

CARAC.
OPTICAS

DILUCIN

Turbidez
10-1
y
presencia
de O2 en
10-2
las
campana
s
de
10-3
Durham.

Cuadro n1

Microbiologa Agroindustrial
Paulino Ninaquispe

N
DE
TUBOS
POSITIVOS
3

Segn el cuadro n1, nuestros resultados (3-3-3) para la

muestra A y B no se encuentran definidos en la tabla de
NMP. Esto hace imposible calcular el NMP por g, ya que en la
tabla no hay tal resultado.

VI. DISCUSIN
Segn Secretaria de Comercio y Fomento industrial (1987)
Para la prueba confirmatoria
coliformes fecales y E.coli

para

coliformes

totales,

Si se observa turbidez y produccin de gas: La prueba se considera

POSITIVA, debiendo anotar el nmero de tubos positivos para
posteriormente hacer el clculo del NMP.
Si en ninguno de los tubos se observa produccin de gas, aun cuando se
observe turbidez: Se consideran NEGATIVOS, establecindose el Cdigo
0,0,0 para efecto del clculo del NMP.
Si todos los tubos dan negativos todos dan positivos, con base en los
grados de dilucin analizados, considerar la necesidad de repetir el anlisis
a partir de grados de dilucin menores (mayores volmenes de muestra)
mayores (menores volmenes de muestra), respectivamente.
En la prctica realizada la mayora de los tubos de la dilucin 10 -1 se
obtuvieron como resultado un efecto positivo, siendo as considerada un
defecto para el producto y el consumidor.

Segn CETESB (1978)

La determinacin del NMP de bacterias coliformes en una muestra se hace a
partir de la tcnica de tubos mltiples, en la cual volmenes decrecientes de
la muestra son involucradas en un medio de cultivo adecuado. El mtodo
consta de tres etapas: presuntiva, confirmativa y prueba complementaria.
La prueba presuntiva consiste en colocar volmenes determinados de
muestra en una serie de tubos contenidos de caldo triptonado y son
incubados a 35-38C, durante 24.48horas. En esta prueba presuntiva, se
presenta la formacin de gas. La prueba confirmativa consiste en transferir
todos los tubos positivos de la prueba presuntiva a tubos conteniendo caldo
verde brillante y son incubados durante 24-48h. a 35-28C. Esta prueba
reduce la posibilidad de resultados falsos gas-positivo. Si hay presencia de
gas en la prueba confirmativa significa que hay presencia de coliformes. La
prueba complementaria consiste en transferir la inoculacin en estras. Se
consideran positivas las colonias tpicas que son nucleadas con o sin brillo
metlico y las colonias atpicas que son opacas, anucleadas y color rosado.

Microbiologa Agroindustrial
Paulino Ninaquispe

En la prctica realizada se evaluaron las 3 pruebas, obteniendo as como

resultado que si hay presencia de coliformes totales, fecales y E.coli.

VII. CONCLUSIONES
Se aprendi a utilizar el mtodo de recuento, especialmente el
nmero ms probable (NMP).
En la prctica realizada se logr identificar las bacterias coliformes
totales, fecales y E. Coli en un alimento, el cual en la prctica se
utiliz el jugo de papaya de dos diferentes jugueras.
En la prctica realizada no se pudo hacer el conteo de nmero ms
probable (NMP), porque los resultados obtenidos que son 3-3-3, no se
pueden hacer lectura en la tabla gua brindada.
La presencia de coliformes totales es un indicador de prcticas
higinicas inadecuadas y que el consumidor podra estar expuesto a
patgenos entricos cuando ingiere el alimento.

VIII. REFERENCIA BIBLIOGRFICA

Secretaria de Comercio y Fomento industrial. 1987. NNX-AA-42-1987.
Calidad del agua determinacin del nmero ms probable (NMP) de
coliformes totales, coliformes fecales (termotolerantes) y Escherichia Coli
presuntiva. 21 p.
CETESB. Anlisis microbiolgico de Aguas. Normalizado tcnica saneamento
ambiental, NT-08. Sau Paulo, 1978

Microbiologa Agroindustrial
Paulino Ninaquispe

IX. ANEXO
Cuadro 2. Nmero ms probable (NMP) de bacterias, sembrando tres tubos
por cada dilucin.
Fuente: Gavidia, Blanca C., Manual de prcticas de Microbiologa de
Alimentos, 1997, Bogot
Colombia,
Carrera de Bacteriologa PUJ.
Microbiologa
Agroindustrial
Paulino Ninaquispe

Microbiologa Agroindustrial
Paulino Ninaquispe