Practica Cromatografia en Capa Fina

CONOCIMIENTOS PREVIOS
1.
2.
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Fundamentos de cromatografa: definicin, historia, usos.

Componentes de una cromatografa en capa fina.
Tipos de cromatografas.
Aplicaciones de los diferentes tipos de cromatografas.
Por qu la polaridad de los compuestos es tan importante en cromatografa?
Cmo se distribuyen los componentes de una mezcla segn su polaridad en una placa
cromatogrfica? Represntelo por medio de una grfica.
7. Qu hace el yodo para revelar las manchas incoloras de un cromatograma?
8. Para qu sirve la determinacin del factor de retencin?
9. Cul es la diferencia entre un adsorbente y un absorbente?
METODOLOGIA
IV.1. Material y equipo
Vasos de pp. de 250 ml
2
Esptula
Portaobjetos
12
Tubos de ensayo cortos
Capilares
5
Probeta de 10 ml
Vial o frasco pequeo 5
Mechero de Bunsen 1
Pipetas Pasteur
5
M. Enlermeyer de 25 ml
Lmpara de ultravioleta
1
Vidrio de reloj
Mortero con pistilo
1
Papel filtro
Cmaras pequeas para cromatografa
o frascos de boca ancha con tapa y de unos 10 15 cm de altura
5

1
5
2
2

IV. 2. Reactivos y soluciones

Hexano
20 ml
Cloroformo
20 ml
Acetona
20 ml
Acetato de etilo
100 ml
Metanol
20 ml
Yeso
5g
Gel de slice
50 g
Tintas roja, verde y azul

cido acetil saliclico 0.2 g

Cafena
Yodo
Aspirina, pastilla
Panadol, o XL-dol pastilla
Cheracol o cafiaspirina
pastilla
1
Saridm pastilla

IV. 3. Requerimientos de seguridad

0.2 g
1g
1
1

Bata larga
Mascarilla con filtro para gases
Lentes de seguridad
Guantes para acido
Perillas
Campanas de seguridad
Procedimiento
IV.5.a Preparacin y desarrollo de las placas

Preparacin de las placas

En la c.c.f. se usa un adsorbente como fase estacionaria sobre el que se hace correr la muestra. En la
prctica se emplearn placas de gel de slice. Para prepararlas, tome por los cantos con los dedos
pulgar e ndice 2 portaobjetos limpios bien desengrasados, y nalos por una de sus caras. Sumrjalos
momentneamente en una suspensin formada por gel de slice, acetato de etilo al 35% y yeso al 3%.
Squelos, seprelos y deje secar al aire la pelcula de gel de slice que se form en ellos.
2. Preparacin y aplicacin de la muestra
Para la aplicacin de muestras en placas, sta debe estar disuelta en un disolvente adecuado a
temperatura ambiente. Esta solucin, se aplica con un microcapilar a un centmetro y medio
aproximadamente, del extremo inferir de la placa, cuidando que la pelcula de gel de slice no se
estrelle y que la muestra aplicada sea una mancha lo ms pequea posible1.
De esta manera en un vial pequeo haga una mezcla utilizando una gota de tinta roja, verde y azul
respectivamente disuelva la mezcla en 1ml de acetona, con un capilar aplique una sola vez una
pequea mancha sombree la placa, haga la misma aplicacin en tres en tres placas ms. Ver Figura 4.

3. Eleccin del eluyente y desarrollo del cromatograma

La eleccin del disolvente depende de la naturaleza de la sustancia aplicada especficamente de su
polaridad, cuando se tiene nocin de la naturaleza de la sustancia en cuestin es fcil de elegir el
disolvente, pero en la mayora de casos no se tiene conocimiento de estas caractersticas se debe
comenzar a probar con varios disolventes de acuerdo al orden ascendente de polaridad.
El anlisis de los resultados conducir a la eleccin del disolvente o de una mezcla de disolventes con
el fin de obtener una separacin perfecta de cada uno de los constituyentes de una mezcla.
1

Para hacer el micro capilar estire cuidadosamente los capilares con ayuda de una flama. Procure poner la
solucin de la muestra en un solo sitio de aplicacin sobre la placa, poniendo si es necesario 2 ms gotas,
pero dejando secar antes de aplicar la siguiente.

Figura 4. Preparacin y aplicacin de la muestra.

El procedimiento debe efectuarse en una cmara cerrada para evitar la evaporacin del disolvente,
como lo indica la figura 5.

Figura 5. Desarrollo del cromatograma

De acuerdo a lo anterior ponga en un frasco de boca ancha un poco del eluyente seleccionado2 para la
c.c.f. justo a un nivel de 0.5 cm a 1.0 cm de la altura del frasco. Introduzca un trozo de papel filtro y
tape el frasco para que se sature con los vapores del eluyente por un rato.
2

El eluyente es un disolvente o mezcla de disolventes que en la cromatografa corresponde a la fase mvil.

Enseguida introduzca la placa, cuidando que la muestra aplicada no quede sumergida en el eluyente.
Cierre el frasco y deje que el eluyente ascienda por la pelcula de gel de slice hasta que falte por
recorrer medio centmetro aproximadamente de la pelcula adsorbente3.
Retire rpidamente la placa del frasco y marque con un lpiz el frente del disolvente antes de que se
evapore. Eluya la primera cromatoplaca en hexano 100%, la segunda en cloroformo 100%, la tercera
en metanol 100% y para eluir la ltima buscarn, de acuerdo a los resultados obtenidos un disolvente
o una mezcla de disolventes que permita obtener una separacin ptima. Dibuje en los resultados el
aspecto de cada placa.
4. Revelado del cromatograma
Si los compuestos separados por c.c.f. son coloreados, es una gran suerte, pues su separacin se
puede observar a simple vista. Pero la mayora de veces los compuestos son incoloros y la separacin
en la placa solo se puede hacer visible usando algunos reactivos o mtodos. Los reactivos que
colorean las manchas se llaman reactivos de visualizacin. 4
El reactivo ms usado es el yodo, el mtodo de visualizacin ms usado es una lmpara de radiacin
ultravioleta, bajo esta radiacin los compuestos se ven como manchas brillantes sobre la placa. Otro
mtodo muy utilizado y con buenos resultados consiste en adicionar un indicador fluorescente al
adsorbente usado en la preparacin de la placa. A menudo las placas preparadas sin indicador no
revelan con la luz ultravioleta.
En la prctica primero observe la cromatoplaca con luz ultravioleta y marque ligeramente con un lpiz
el contorno de las manchas. Despus introduzca esta misma placa en un frasco con yodo (unos
cuantos granos) y tpelo vern que poco a poco se empiezan a observar manchas cafs o amarillas, es
decir se empieza a revelar la croamtoplaca.
Marque igualmente y determine el factor de retencin Rf de cada una de las manchas mediante la
siguiente frmula y la Figura 6.

Rf

distancia recorrida por el compuesto X

distancia recorrida por el disolvente

No deje que el eluyente llegue al "tope" del adsorbente.

La mayora de los compuestos orgnicos forman complejos coloridos con el yodo. Tambin se usan otros
reveladores que se seleccionan segn la naturaleza de los compuestos. Por ejemplo, cido sulfrico, vainilla,
2,4- dinitrofenilhidrazina, etc.
4

Figura 6. Determinacin del factor de Retencin

(Rf).
IV. 5. b. Pureza de las sustancias
Una de las principales aplicaciones de la c.c.f. es su utilizacin como criterio de pureza, puede ser por
comparacin con un estndar o la simple observacin de una sola mancha en la cromatoplaca. En este
experimento se desea saber cual sustancia es pura, y cual no, para ello se proporcionarn las
muestras A, B y adems verificar la pureza de cada una de las sustancia problema cristalizadas.
Aplique las sustancias A Y B conjuntamente en una cromatoplaca, ensaye con los disolventes hasta
encontrar un eluyente ptimo. Proceda de igual manera con su sustancia problema. Anote sus
conclusiones.

IV. 5. c. Cromatografa en capa fina como criterio parcial de identificacin.

La c.c.f. se puede utilizar como una tcnica auxiliar en la identificacin de compuestos. Esto se hace
comparando un estndar con la sustancia que se sospecha ser igual al estndar, lo cual se manifiesta
porque el estndar y la muestra tendran el mismo Rf.5
En este experimento van a identificar el cido acetil saliclico y la cafena en los analgsicos
comerciales la Aspirina, Panadol o XL-Dol, Saridn, Cafiaspirina o Cheracol.

Una segunda comparacin por c.c.f. en otro eluyente, puede resultar con diferentes valores de Rf, en cuyo
caso, las sustancias son diferentes, si son iguales los valores de R f, podemos suponer que las sustancias son
idnticas, pero generalmente en la prctica, se hace necesario el uso de otra evidencia para identificarlos.

En un mortero macere finamente cada una de las pastillas, enseguida vierta el polvo a un vaso de
precipitado pequeo y agregue una mnima cantidad de metanol precalentado agite vigorosamente
varios minutos, filtre y aplique sobre la placa, busque el disolvente ideal desarrolle y revele segn el
procedimiento habitual.

RESULTADOS
1. Dibuje los resultados del inciso c del experimento 1 y diga cul fue el disolvente o mezcla de
disolvente que eligi para obtener una ptima separacin. Justifique su respuesta
2. En el experimento 1 inciso c elija dos manchas y determine su Rf
3. En el experimento 2, las muestras A y B dadas fueron puras? Cul fue el disolvente ptimo
para su separacin? En los dos casos justifique su respuesta.
4. Dibuje los resultados del experimento 3, cul fue el disolvente ideal para su separacin?, Se
reconoce cada uno de los componentes de las pastillas? Explique detalladamente cada caso.
Determine el Rf de cada mancha. Qu me dice este valor?
Frmula molecular y estructural de cada una de las sustancias utilizadas en la prctica