INTRODUCCIN

La enzima lacasa se encuentra ampliamente distribuida en plantas y hongos

degradadores de la lignina, lo que permite suponer que la lacasa cumple un papel
importante en la madera y en la delignificacin de la pulpa. Bajas concentraciones
de varias lacasas se producen en la madera y en cultivos de hongos sumergidos,
mientras que altas concentraciones son inducidas por la adicin de compuestos
aromticos como la xilidina y el cido ferlico
Las lacasas son glicoprotenas producidas por algunos hongos y bacterias,
que catalizan la oxidacin de diferentes compuestos fenlicos. Son enzimas
excepcionalmente verstiles, que pueden ser empleadas en diversos procesos
industriales (bioblanqueo y depuracin de los efluentes de industrias papeleras,
degradacin de compuestos fenlicos contaminantes, etc).
Los fenoles son sustancias txicas frecuentemente encontradas en los
ambientes acuticos como resultado de la contaminacin a partir de una gran
variedad de fuentes (industriales, biogeoqumicos, degradacin de pesticidas,
entre otras). La alta toxicidad de los compuestos fenlicos ha hecho que la
Agencia de Proteccin Ambiental de los Estados Unidos de Amrica (USEPA) y
la Comunidad Econmica

Europea, los consideren como contaminantes

prioritarios. En tal sentido, la remocin de fenoles de las aguas residuales

industriales tiene gran importancia ambiental.
La degradacin de los compuestos fenlicos puede ser llevada a cabo por
organismos procariotas y eucariotas, tanto en condiciones aerbicas (oxgeno
como aceptor final de electrones) como anaerbicas (nitrato, sulfato, iones
metlicos o dixido de carbono como aceptores finales de electrones
De los muchos mtodos existentes aplicables para la degradacin de fenol, el
tratamiento biolgico empleando la lacasa es especialmente recomendable porque
tiene un potencial capaz de degradar casi completamente el fenol generndose
productos finales inocuos.

MARCO TERICO
Gianfreda et al. (1999) reportan que la lacasa (p-difenol:oxgeno oxidorreductasas)
son glicoprotenas extracelulares que contienen cobre y un peso molecular en el rango de
60.000 y 80.000. Tienen la capacidad de reducir el oxgeno molecular a dos molculas de
agua y simultneamente, trabajan en la oxidacin de un electrn de muchos sustratos
aromticos. El rango de sustratos oxidables es amplio, e incluye polifenoles, monofenoles,
aminas aromticas y otros compuestos aromticos fcilmente oxidables.
Generalmente las lacasas son ms estables en pH alcalinos que en pH cidos, lo
cual se debe probablemente a la inhibicin del grupo hidrxido sobre el proceso de autooxidacin. Las lacasas tambin se pueden inactivar por la prdida de los tomos de cobre o
por condiciones de protelisis o desnaturalizacin, entre otras. En condiciones idnticas,
las lacasas termfilas generalmente son ms termoestables que las lacasas mesflas.
Las lacasas conservan su actividad en un rango de pH de 3 a 10 y en un
rango de temperatura de 5 a 55 C. La formacin de las lacasas amarillas-marrones es el resultado del enlace de molculas derivadas de la lignina a la protena de
la enzima. Esto sucede en cultivos de fermentacin en estado slido, y no presentan el espectro tpico de las oxidasas.
Son enzimas del tipo fenol-oxidasa dependiente de cobre que tiene la
capacidad de catalizar reacciones de desmetilacin. Este es un paso importante en
la biodegradacin de polmeros que contengan grupos aromticos fenlicos.
Debido a esta propiedad, la lacasa es utilizada en la oxidacin del ndigo
(colorante de tipo fenlico) en la preparacin de telas para jeans. Esta enzima es
extrada de hongos, como Trametes hirsuta y Sclerotium rolfsii .
Adems, en procesos de oxidacin de muchos compuestos (principalmente de
compuestos fenlicos) la lacasa presenta una gran especificidad para un gran
nmero de compuestos no biodegradables, por lo cual se empez a utilizar en
tratamientos de efluentes industriales.

El fenol es un constituyente comn de las aguas residuales originarias de

varias industrias. Es txico aun a bajas concentraciones y es por ello que son
necesarios mtodos de tratamiento eficientes para reducir la concentracin de
fenol en las aguas residuales a niveles aceptables. De los muchos mtodos
existentes aplicables para la degradacin de fenol, el tratamiento biolgico es
especialmente recomendable porque tiene un potencial capaz de degradar casi
completamente el fenol generndose productos finales inocuos. El pentaclorofenol
es el ms txico de los clorofenoles y el trinitrofenol (cido pcrico) es el
compuesto ms txico de los nitrofenoles.
Denominaciones:
N CAS: 108-95-2 Nombre registrado: Fenol
Nombre qumico: Fenol
Sinnimos/nombres comerciales: cido fnico, cido carblico, hidroxibenceno,
monohidroxibenceno, hidrxido de fenilo, cido fenil
Nombre qumico (ingls): Phenol, carbolic acid, hydroxybenzene, oxybenzene,
monohydroxybenzene, phenic acid, phenyl hydrate, phenyl hydroxide, phenyl
acid
Aspecto general: Sustancia incolora a blanco rosado o masa fundida incolora; de
olor dulzn.
Datos fsico-qumicos bsicos:

Frmula emprica:

C6H6O

Masa molecular relativa:

94,11 g

Densidad:

1,07 g/cm3 a 20 C

Densidad relativa del gas:

3,24

Punto de ebullicin:

181,75C

Punto de fusin:

40,8C

Presin de vapor:

0,2 hPa a 20C

3,5 hPa a 50C
54 hPa a 100C

Punto de inflamacin:

82C

Temperatura de ignicin:

595C

Lmites de explosividad:

1,3-9,5% V

Umbral de olor:

0,18 mg/m3 = 0,046 ppm

En agua: 82 g/l; se disuelve

Solvlisis:

fcilmente
cloroformo,

en

alcohol,

grasas

ter,
aceites

esenciales.
Factores de conversin:

1 ppm = 3,91 mg/m3

1 mg/m3 = 0,26 ppm

Los vapores y lquidos del fenol son txicos y pueden ingresar fcilmente
al cuerpo por va cutnea de los seres humanos. Los vapores inhalados lesionan
las vas respiratorias y el pulmn. El contacto del lquido con la piel y los ojos
produce severas quemaduras (el fenol es un poderoso txico protoplasmtico). La
exposicin prolongada paraliza el sistema nervioso central y produce lesiones
renales y pulmonares. La parlisis puede desembocar en la muerte. Los sntomas
que acompaan la afeccin son cefalalgias, zumbido en los odos, mareos,
trastornos gastrointestinales, obnubilacin, colapso, intoxicacin, prdida del
conocimiento, respiracin irregular, paro respiratorio (apnea), paro cardaco y, en
algunos casos, convulsiones. Segn HORN (1989), el fenol ejerce efectos
teratgenos y cancergenos. Segn el ensayo Ames, el fenol carece de potencial
mutagnico.

En el medio ambiente el fenol incide notablemente en:

Agua: El fenol es ms pesado que el agua y se hunde. Se disuelve lentamente y

forma, incluso en dilucin soluciones txicas, y se encuadra en el grupo de
sustancias clasificadas como "Amenaza para el agua" debido a su considerable
toxicidad en este medio.
Aire: Los vapores son ms pesados que el aire y, expuestos al calor, forman
mezclas explosivas. La oxidacin del fenol en el aire se acelera por efecto de la
luz o de impurezas que actan como catalizadores.
Suelo: Debido a la degradacin microbiana (aerbica o anaerbica) la
acumulacin de fenol en el suelo es escasa; el nivel de esta acumulacin depende
de la presencia de minerales arcillosos (gran afinidad con el xido de aluminio).
Cadena alimentaria: Se produce poca acumulacin en los alimentos. Los
fumadores estn ms expuestos, porque el humo del cigarrillo contiene fenoles. La
presencia de fenol en aguas subterrneas tambin contamina el agua potable, la
que ya no se podr consumir debido a su sabor desagradable.
ESTUDIOS REALIZADOS
Actualmente, los estudios van dirigidos a la bsqueda de nuevas lacasas con
mayor estabilidad, y, sobre todo, al empleo de enzimas inmovilizadas. La
inmovilizacin no solo contribuye a la estabilizacin de la protena, sino que
facilita la reaccin enzimtica a gran escala. Los soportes empleados para ello son
muy diversos: celulosas modificadas, chitosano, carbn activado, perlas de vidrio,
entre otros. La unin se puede efectuar a travs de enlaces covalentes con el
soporte o con un agente entrelazante, o bien por adsorcin inica a la matriz.
En 1997 Muoz et al. caracterizaron las iso-enzimas I y II de lacasa a partir
de P. eryngii, y reportaron que stas eran glicoprotenas monomricas con 7 y 1%
de carbohidratos y peso molecular de 65 y 61 KDa. La tasa de oxidacin ms alta
del ABTS (Acido 2,2'-azinobis(3-etilbenzotiazolin -6-sulfnico) con la lacasa I se
obtuvo a 65 C y pH 4. En el caso de la lacasa II ocurri a 55 C y pH 3. En este
mismo estudio se report que las dos isoenzimas fueron estables a pH alto (8-12),
manteniendo una actividad del 60 al 70% despus de 24 horas. Ensayos con

anticuerpos contra lacasa I reaccionaron con lacasa II, junto con lacasas de P.
ostreatus y P. pulmonaris.
Biorremediacin enzimtica de hidrocarburos aromticos policclicos (PAHs) en
vertidos marinos. (Miguel Alcalde Galeote)
Los hidrocarburos aromticos policclicos (PAHs) son un grupo de
xenobiticos muy peligroso (mutagnicos, carcinognicos y teratognicos) que se
encuentran distribuidos ampliamente en ambientes terrestres y acuticos. Las
principales fuentes de emisin proceden de vertidos marinos (el 52,7% del
contenido total del fuel del buque Prestige fueron PAHs), los motores de los
vehculos, procesos industriales o incendios forestales. Las ltimas tendencias en
eliminacin de PAHs apuntan a la combinacin de mtodos qumicos y biolgicos
como tratamiento de choque para la oxidacin de estos nocivos compuestos. Sin
embargo, los PAHs de alto peso molecular (los ms recalcitrantes y nocivos) no
pueden ser biodegradados con xito por las poblaciones bacterianas, ya sean
autctonas o introducidas, en aplicaciones in situ o ex-situ (bio-reactores). El
nico grupo de organismos conocidos capaces de oxidar eficazmente PAHs de
alto peso molecular (ms de 4 anillos aromticos) son los hongos de la
podredumbre blanca. Estos organismos no se han implantado con xito todava en
procesos de biorremediacin a gran escala, debido a numerosos factores. Una
reciente tecnologa qumica en constante desarrollo es la utilizacin de
biocatalizadores (enzimas) en biotratamiento de PAHs. De las enzimas secretadas
por los hongos de la podredumbre blanca, la enzima multicobre lacasa es el
sistema ms prometedor y verstil en la oxidacin de PAHs. Se proponemos la
utilizacin de lacasas fngicas en detoxificacin de PAHs, tanto de alto como de
bajo peso molecular, presentes en vertidos marinos y aguas residuales. La
dependencia de mediadores redox y la inestabilidad de la lacasa han limitado su
aplicacin prctica. Por ello, el estudio de la lacasa en detoxificacin de PAHs
ser abordada desde tres vertientes principales:
1.- Ingeniera del biocatalizador por evolucin molecular dirigida (mutagnesis
aleatoria o recombinacin y screening) para aumentar la estabilidad de la enzima

frente a disolventes orgnicos. El principal problema en biorremediacin es la

biodisponibilidad de los xenobiticos. La presencia de disolventes aumentara la
solubilidad de los PAHs y por ende disminuira los problemas de transferencia de
masa.
2.-El incremento del potencial redox del biocatalizador aumentar la velocidad de
oxidacin de PAHs por la lacasa y la har menos dependiente de mediadores. Se
realizar la construccin de genotecas combinatorias mediante mutagnesis
saturada, buscando aumentar el potencial de ionizacin de la lacasa.
3.-Se inmovilizar el biocatalizador en soportes acrlicos y se disear un bioreactor de lecho fijo donde se harn pruebas con efluentes contaminados con
PAHs y fuel donado por la compaa petroqumica Repsol-YPF (quien apoya la
candidatura de esta propuesta).
Remocin de contaminantes en aguas artificialmente contaminadas utilizando
lacasa producida por Pleurotus ostreatus. (Mara del Rosario Castro Oropeza)
Los efluentes lquidos son residuos lquidos o residuos lquidos mezclados
con slidos. Desde el punto de vista de su origen, resultan de la combinacin de
los lquidos o desechos arrastrados por el agua, procedentes de las viviendas,
instituciones y establecimientos comerciales e industriales, ms las aguas
subterrneas, superficiales o de precipitacin que pudiera agregarse. Los efluentes
industriales vertidos al medio ambiente provocan diferente impacto sobre ste en
funcin de su naturaleza. El color pocas veces considerado una forma de
contaminacin a pesar de los daos que provoca, puede estar asociado a la
presencia de compuestos txicos y grupos cromforos o polmeros. Uno de los
hongos de la podredumbre blanca capaz de mineralizar una gran variedad de
hidrocarburos aromticos policclicos es Pleurotus ostreatus. Este hongo juega un
papel primordial en la descomposicin de lignocelulosa, la lignina es degradada
por la interaccin de un complejo de enzimas extracelular, principalmente
peroxidasas y lacasas. La lacasa (p-difenol:dioxigeno:oxido-reductasa), es una

enzima extracelular producida por casi todos los hongos de la podredumbre

blanca, la cual usa al oxigeno molecular como oxidante.
El objetivo de este trabajo fue de remover los colorantes cibacron y
solofenil, as como polimerizar a la anilina y 2-clorofenol en aguas contaminadas
utilizando lacasa de Pleurotus ostreatus
Para ello se utilizo una cepa de Pleurotus ostreatus

proveniente del

Departamento de Investigaciones en Ciencias Agrcolas de la BUAP, la cual se

propago en medio PDA, para la produccin de enzima lacasa se prepararon
medios lquidos minerales a base de fibra 1 de maizoro y bagazo deshidratado de
chayote en las proporciones 100%, 75%-25%, 50%-50% y 25%-75%
respectivamente, se monitoreo la produccin de lacasa en fermentacin liquida a
los 7, 14 y 21 das utilizando como sustrato al 2-metoxifenol como prueba
presuntiva y al ABTS como confirmativa para el ensayo enzimtico. La enzima
con mayor actividad se aplico en aguas contaminadas con los colorantes azul
cibacron y azul solofenil a 50 ppm as como a los compuestos aromticos anilina
y 2-clorofenol a 100 ppm, todas las determinaciones se realizaron por triplicado
utilizando un espectrofotometro Agilent 8453 UV-visible.
El tratamiento con el cual se obtuvo una mayor cantidad de enzima lacasa
es la que tuvo una proporcin 50%-50% de fibra 1 y bagazo de chayote, teniendo
una actividad de 2216 U/L usando 2-metoxifenol como sustrato y 542 UI/mL
utilizando ABTS, es importante resaltar que el bagazo de chayote proviene como
residuo en el proceso de obtencin de zumo utilizado para la purificacin de
peroxidasas. Al aplicar la enzima en las muestras de aguas contaminadas se
tuvieron porcentajes de decoloracin del 94% para azul cibacron y 77% para azul
solofenil, adems se logr demostrar que esta enzima es capaz de polimerizar a la
anilina y al 2-clorofenol, generando productos insolubles que eventualmente
pudieran ser aplicados como conductores.
Caracterizacin parcial de Lacasa y Tirosinasa de Ustilago maydis y su efecto
sobre la actividad antioxidante de compuestos fenlicos (Dra. Rosa Martha
Desentis Mendoza)

Los flavonoides son un grupo de polifenoles de bajo peso molecular con

caractersticas antioxidantes in vitro. En este trabajo se caracterizaron
parcialmente la lacasa y la tirosinasa de Ustilago maydis y se investigaron sus
efectos sobre la actividad antioxidante de algunos compuestos fenlicos. Puesto
que se detect la polimerizacin enzimtica de los compuestos fenlicos, el
tamao de los agregados se determin y relacion con su actividad antioxidante.
La morfologa de los polmeros se analiz por IR y microscopa de fuerza
atmica.
Se encontr un efecto dosis dependiente del polmero sobre la inhibicin
de ROS y lipoperoxidacin en membrana celular en lnea WRL-68. Las menores
concentraciones del polmero inhibieron hasta en un 140% y en lipoperoxidacin
hasta un 137% y present efecto prooxidante hasta en un 460%.
Los resultados demostraron que la polimerizacin de quercetina catalizada
por lacasa y tirosinasa produjo agregados de relativamente bajo peso molecular
pero con mayor actividad antioxidante que la quercetina monomrica. Empleando
kaempferol, los agregados alcanzaron pesos moleculares y longitudes mayores en
las primeras dos horas de reaccin incrementando su actividad antioxidante.
En el caso del kaempferol, los agregados adoptaron formas que pudiesen
tener naturaleza fractal similares al coral en el caso del sistema kaempferol-lacasa
y de helecho en el caso del sistema kaempferol-tirosinasa.
APLICACIONES
El fenol se utiliza para la preparacin de resinas sintticas, colorantes,
medicamentos, plaguicidas, curtientes sintticos, sustancias aromticas, aceites
lubricantes y solventes.
En el grupo de los fenoles, los cresoles y el compuesto base mismo son los
compuestos ms importantes, adems del timol, los naftoles, la fenolftalena, el
triclorofenol y el pentaclorofenol. Los compuestos naturales (pirocatequina,
guayacol y sus derivados) no son txicos. Un derivado conocido de la

pirocatequina es la adrenalina. El fenol se presenta en la Naturaleza en la madera

y en las agujas de pino, en la orina de los herbvoros (fenolsulfato) y en el
alquitrn de hulla. De los fenoles monohdricos se obtienen numerosas esencias
(aromticas) naturales, como por ejemplo: vainillina, timol, carvacrol,
"zingivern" (en jenjibre), aldehdo saliclico. Entre los fenoles multivalentes
sintticos, el hexaclorofeno es particularmente txico.
El fenol se obtiene a partir de la destilacin del alquitrn de hulla, con 1
tonelada de hulla se obtiene aproximadamente 0,25 kg de fenol. Actualmente, sin
embargo, predomina la produccin sinttica por disociacin del hidroperxido de
cumeno, obtenindose acetona como producto secundario. En parte an se recurre
a la sntesis a partir del benceno, utilizando cido bencenosulfnico o
clorobenceno.
Surgen emisiones por combustin incompleta de la gasolina y del alquitrn
de hulla, en el agua residual de coqueras y como metabolitos en la fotlisis del
benceno y del clorobenzeno
INNOVACIN
Disean la enzima lacasa Mutante R2, potencial base de nuevos frmacos y
biocombustibles
Un equipo del Consejo Superior de Investigaciones Cientficas (CSIC),
junto a cientficos de la Universidad de Lund, en Suecia, y del Instituto
Tecnolgico de California, en Estados Unidos, ha diseado una enzima con alta
resistencia a disolventes orgnicos. La lacasa Mutante R2 ha sido creada mediante
una metodologa conocida como evolucin artificial o dirigida, tcnica que emula
los pasos claves de la evolucin natural y que reduce el proceso de miles de
millones de aos a slo meses o semanas.
Esta nueva enzima podra tener aplicaciones en la eliminacin de
contaminantes ambientales, produccin de biocombustibles o para crear nuevos
frmacos.

10

Con este sistema, se ha diseado una enzima resistente a elevadas

concentraciones

de

disolventes

orgnicos,

necesarios

para

solubilizar

contaminantes ambientales y pueden utilizarse en procesos de sntesis de nuevos

frmacos. La ventaja de la nueva enzima es que no resulta afectada por los
disolventes y puede reutilizarse con mxima eficacia. Adems, este mutante se
est probando para la sntesis de molculas con actividad neuroprotectora, con
posibles aplicaciones en Alzheimer.

REFERENCIAS

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 Albertario Mara. Degradacin biolgica del fenol utilizando tcnicas

respiromtricas Documento en lnea disponible en:
http://64.233.183.104/search?
q=cache:Ec1zsYZf5U4J:www.metrik.cl/aidis/%3Fp
%3D215+degradacion+del+fenol&hl=es&ct=clnk&cd=1&gl=ve
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http://www.porquebiotecnologia.com.ar/educacion/cuaderno/doc/El
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Castro Mara. Remocin de contaminantes en aguas artificialmente
contaminadas utilizando lacasa producida por Pleurotus ostreatus.
Documento
en
lnea
disponible
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http://www.uaemex.mx/Red_Ambientales/docs/congresos/Ciudad
%20Obregon/TECNOLOGIA_Y_BIOTECNOLOGIA_AMBIENTAL/TB
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Efluentes
lquidos.
Documento
en
lnea
disponible
http://www.estrucplan.com.ar/contenidos-efluentes-liquidos-test.asp

en:

Mendoza Rosa. Caracterizacin parcial de Lacasa y Tirosinasa de

Ustilago maydis y su efecto sobre la actividad antioxidante de compuestos
fenlicos. Documento en lnea disponible en:
http://64.233.183.104/search?
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Produccin de enzimas: Aliadas productivas de la industria. Documento
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http://www.bioplanet.net/magazine/bio_sepoct_1999/bio_1999_sepoct_indu
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P.Beyret. Disean la enzima lacasa Mutante R2, potencial base de nuevos
frmacos y biocombustibles. Documento en lnea disponible en:
http://64.233.183.104/search?
q=cache:L7M97W3HLzAJ:www.biotecnologica.com/disenan-la-enzimalacasa-mutante-r2-potencial-base-de-nuevos-farmacos-y-biocombustibles/
+que+es+enzima+lacasa&hl=es&ct=clnk&cd=4&gl=ve. [10.10.07]
UNIVERSIDAD CENTROCCIDENTAL
LISANDRO ALVARADO

12

DECANATO DE AGRONOMIA
PROGRAMA ING. AGROINDUSTRIAL
NCLEO OBELISCO

DEGRADACION DEL FENOL EMPLEANDO

LA LACASA

REALIZADO POR:
Azuaje, Vctor
Freitez, Ivanna
Herrera, Manuel
Luque, Williams
Molina, Maryam
Padron , Roberto
Suarez, Jhoseleine
Octubre, 2008

13