Professional Documents
Culture Documents
de amapola.
Abstracto
Adormidera (Papaver somniferum) es una de las plantas medicinales ms
antiguas del mundo y sigue siendo la nica fuente comercial para la morfina
analgsicos narcticos, la codena y sus derivados semisintticos como la
oxicodona y la naltrexona. La planta tambin produce varios otros alcaloides
bencilisoquinolina con propiedades farmacolgicas potentes como la
papaverina vasodilatador, el supresor de la tos y el potencial noscapina
medicamento contra el cncer y el agente antimicrobiano sanguinaria.
Adormidera ha servido como un sistema modelo para investigar la biosntesis
de alcaloides bencilisoquinolina en las plantas. La aplicacin de la genmica
bioqumicos y funcionales ha dado lugar a un reciente aumento en el
descubrimiento de los genes biosintticos implicados en la formacin de los
principales alcaloides bencilisoquinolina de adormidera. La disponibilidad de
gran cantidad de herramientas de gentica bioqumica y la informacin relativa
a bencilisoquinolina alcaloide metabolismo est facilitando el estudio de una
amplia gama de fenmenos que incluye la biologa estructural de nuevos
catalizadores, la organizacin genmica de los genes biosintticos, la
localizacin celular y subcelular de las enzimas biosintticas y una variedad de
aplicaciones biotecnolgicas. En esta revisin, se destacan los acontecimientos
recientes y resumimos las fronteras del conocimiento en relacin con la
bioqumica, biologa celular y biotecnologa de la biosntesis de alcaloides
bencilisoquinolina de adormidera.
Palabras clave
biosinttica descubrimiento de genes compartimentacin celular Genmica
funcional laticfero Papaver somniferum Tamiz elemento metabolismo
Especializada.
Abstracto
adormidera (Papaver somniferum) es una de las plantas medicinales ms
antiguas del mundo y sigue siendo la nica fuente comercial para la morfina
analgsicos narcticos, la codena y sus derivados semisintticos como la
oxicodona y la naltrexona. La planta tambin produce varios otros alcaloides
bencilisoquinolina con propiedades farmacolgicas potentes como la
papaverina vasodilatador, el supresor de la tos y el potencial noscapina
medicamento contra el cncer y el agente antimicrobiano sanguinaria.
adormidera ha servido como un sistema modelo para investigar la biosntesis
de alcaloides bencilisoquinolina en las plantas. La aplicacin de la genmica
bioqumicos y funcionales ha dado lugar a un reciente aumento en el
descubrimiento de los genes biosintticos implicados en la formacin de los
principales alcaloides bencilisoquinolina de adormidera. La disponibilidad de
(S) -Reticuline
Biosntesis BIA comienza con la condensacin de dos derivados de L-tirosina, 4hydroxyphenylacetaldehyde (4HPAA) y dopamina, a travs de la
descarboxilacin, meta-hidroxilacin y transaminacin produciendo el
precursor de todos los dems BIA, (S) -norcoclaurine (Fig. 1). En la formacin de
4HPAA, L-tirosina puede someterse transaminacin por aminotransferasa Ltirosina (TyrAT) (Lee y Facchini 2011) y la posterior descarboxilacin por una
enzima no identificado aislado como 4-hidroxifenilpiruvato descarboxilasa
(4HPPDC) (Rueffer y Zenk 1987). meta-hidroxilacin de L-tirosina y / o tiramina
por otra enzima no caracterizado (referido como 3'OHase en la Fig. 1) produce
L-dihidroxifenilalanina
(DOPA)
y
la
dopamina,
respectivamente.
Alternativamente, L-tirosina y DOPA se convierten a la tiramina y la dopamina
por tirosina-descarboxilasa (TYDC) (Facchini y De Luca 1994). El
estereoselectiva condensacin Pictet-Spengler de (S) -norcoclaurine de 4HPAA
y la dopamina es catalizada por la sintasa de norcoclaurine (NCS), que es un
miembro de la relacionada con la patognesis (PR) / Bet v 1 familia de
protenas 10 (Liscombe et al. 2005 ; Samanani et al 2004;. Lee y Facchini
2010). Adems de un tipo PR10 NCS, se report una similitud compartir
segunda enzima (CjNCS1) con las probabilidades para catalizar la formacin de
(S) -norcoclaurine en Coptis japonica (Minami et al., 2007). Sin embargo, el
papel fisiolgico real de esta enzima no se conoce. Muchos BIA se derivan a
partir del intermedio (S) -reticuline va central, que se forma a travs de 3'hidroxilacin y una serie de O- y N-metilaciones (Fig. 1). El orden de conversin
fue inferida por la preferencia de sustrato de las enzimas relevantes aunque la
evidencia reciente sugiere que la va no es lineal, sino ms bien opera como
una cuadrcula (Desgagn-Penix y Facchini 2012). (S) -Norcoclaurine se
convierte primero por norcoclaurine-6-O-metiltransferasa (6OMT) a (S)
-coclaurine (Morishige et al 2000;.. Ounaroon et al 2003), que es aceptada por
coclaurina N-metiltransferasa (CNMT) (Choi et al. 2001). N-Methylcoclaurine es
hidroxilado por (S) -N-methylcoclaurine 3'-hidroxilasa (NMCH) (Pauli y Kutchan
1998;. Frick et al 2007) para 3'-hidroxi-N-methylcoclaurine, que se convierte
por 3'-hidroxi -N-methylcoclaurine 4 '-O-metiltransferasa (4'OMT) (Morishige et
al. 2000) a (S) -reticuline. Curiosamente, slo NMCH ha informado para mostrar
estricta sustrato y especificidad estereoismero, aceptando (S) -Nmethylcoclaurine y no el correspondiente (R) N-methylcoclaurine o compuestos
N-desmetil. En contraste, el O- y N-metiltransferasas normalmente aceptan una
variedad de (R) - y (S) -tetrahydroisoquinolines. Reticulina puede ser metilado
an ms por reticulina 7-O-metiltransferasa (7OMT) (Ounaroon et al. 2003)
laudanine rendimiento, que puede ser totalmente O-metilado a laudanosina por
un no identificado 3'-O-metiltransferasa (indicado como 3'OMT en Figura 1).
Papaverina
Se han propuesto dos rutas para la biosntesis de papaverina: (1) una va de Nmetil participacin de (S) -reticuline y la N-desmetilacin de un compuesto
intermedio no especificado por una enzima hipottica y (2) una ruta de Ndesmetil participacin de (S) - norreticuline y se opone a la exigencia de Ndesmetilacin (Fig. 1). La incorporacin eficiente de compuestos N-desmetil
radiomarcados (Brochmann-Hanssen et al 1975;.. Uprety et al 1975) y la
identificacin de un norreticuline 7-O-metiltransferasa (N7OMT), que slo
acepta norlaudanine norreticuline rendimiento (Pienkny et al. 2009),
proporciona soporte para la bioqumica de la va N-desmetil. Un estudio
reciente utilizando la espectrometra de masas y pesado etiquetado de
istopos estables de (S) -reticuline, (S) laudanine y (S) -laudanosine sugiri que
la N-metilados 1-bencilisoquinolina se incorporan en la papaverina en niveles
bajos (Han et al. 2010 ), que proporciona cierto apoyo a la va N-metilo. Sin
embargo, la mayor parte de la (S) -reticuline marcado se incorpora en
alcaloides de morfinano. El uso de la inducida por el virus de silenciamiento
gnico (GEA) demostr adems que la principal va a la papaverina es
probablemente a travs de la va N-desmetil y demostr que norreticuline y
otros desmethyled-N1-bencilisoquinolina son metabolitos naturales de
adormidera (Desgagn-Penix y Facchini 2012). La supresin mediada por VIGS
de los niveles de transcripcin CNMT en plantas de adormidera aument la
acumulacin de papaverina, mientras que la reduccin de los niveles de
transcripcin de N7OMT, que es especfico para la va N-desmetil, disminucin
de los niveles de papaverina. Por el contrario, la supresin de los niveles de
transcripcin 7OMT no afect la acumulacin de papaverina en un mayor
apoyo de la va N-desmetil como la principal va a la papaverina. Sin embargo,
una contribucin menor de la ruta de N-metilo para la biosntesis de la
papaverina no se puede descartar. Otro estudio utiliz un enfoque
transcriptmica para comparar cultivares de alta y baja papaverina (Patahnk et
al. 2013). Del mismo modo, las transcripciones que codifican enzimas en la
ruta N-desmetil se upregulated, mientras que los transcritos correspondientes
a 7OMT se downregulated. El paso final de la biosntesis de la papaverina
implica la oxidacin de la tetrahydropapaverine compuesto totalmente Ometilado y N-desmetil por dihydrobenzophenanthridine oxidasa (DBOX), una
enzima que tambin cataliza la etapa final en la formacin de la cuaternario
benzo [c] fenantridina sanguinarina (Hagel et al. 2012). Curiosamente, las
transcripciones DBOX aparecen exclusivamente en las races de adormidera
que sugieren la posible translocacin sistmica de la papaverina desde las
races a los rganos areos.
Morfina
La biosntesis de morfina slo se ha descrito en unas pocas especies de plantas
restringidas a la Papaveraceae, aunque el tetracclico salutaridine
promorphinan alcaloide y varios derivados se han reportado en algunos
miembros de la Euphorbiaceae (Theuns et al. 1986). La biosntesis de la
morfina (Fig. 1) requiere que la epimerizacin de (S) -reticuline a -reticuline (R).
El mecanismo de reaccin se ha propuesto proceder a travs de la
deshidrogenacin de (S) -reticuline a un ion 1,2-dehydroreticulinium (Hirata et
Noscapina
En algunos quimiotipos de amapola, la noscapina phthalideisoquinoline
alcaloide representa la mayora del contenido de alcaloide total en el ltex
(Frick et al. 2005). Noscapina tambin se produce en otros miembros de la
Papaveraceae y Menispermaceae. Debido a su actividad supresor de la tos y el
potencial como un medicamento contra el cncer (Mahmoudian y
RahimiMoghaddam 2009), la biosntesis de noscapina ha sido objeto de
renovado inters (Dang y Facchini 2012; Facchini y otros, 2007;.. Winzer et al
2012). La formacin de la noscapina no ha sido tan extensamente investigado
como otros alcaloides, como la morfina. Durante dcadas, el papel de
scoulerine como intermedio va era la medida de nuestro conocimiento en
relacin con la biosntesis de noscapina.
Con base en el aislamiento de compuestos intermedios de la va pretendidos y
la identificacin de las enzimas implicadas en la formacin de N-
Otros alcaloides
Los alcaloides rhoeadine, algunos de los que son tambin conocidos como
alcaloides papaverrubine, se encuentran exclusivamente en los miembros de la
Papaveraceae, incluyendo adormidera (Montgomery et al. 1983). estudios de
radiomarcaje en amapola Persa (Papaver bracteatum) demostraron que los
precursores de la alpinigenine rhoeadine fueron el protoberberines
tetrahidropalmatina (Rnsch 1972), N-tetrahydropalamatine y la muramine
protopine (Rnsch 1977). Una ruta a travs de protopines se confirm en
Papaver rhoeas por protopine alimentacin, que se convirti en rhoeadine (Tani
y Tagahara 1977). estudios de marcaje tambin mostraron que los pro-S-13hidrgeno de C13 se retira estereoespecfica, lo que sugiere que la ciclacin es
mediada por enzima y no espontnea (Battersby y Staunton 1974). Muchos
rhoeadines aisladas de adormidera son desmetilado 10-O-(Montgomery et al.,
1983). La supresin mediada por VIGS de transcripciones de genes que codifica
CODM, que cataliza la O-desmetilacin y / o O, O-desmetilenacin de
morfinano y protopine alcaloides, result en niveles elevados de alcaloides
rhoeadine, posiblemente debido a la mayor acumulacin de criptopina y 10- Odesmethylcryptopine (Farrow y Facchini 2013). Enzimas implicadas en la
conversin de protopines a rhoeadines no se conocen.
Regulacin hormonal
La activacin del metabolismo fitohormonal BIA se ha utilizado para identificar
los genes de biosntesis en las plantas relacionados con la adormidera. La
adicin de citoquinina a Thalictrum minus cultivos de clulas caus un marcado
incremento en la acumulacin de berberina como resultado de una mayor
expresin de 6OMT (Hara et al. 1994) y Stox (Hara et al. 1995). El etileno
tambin se demostr que la promocin de la biosntesis de la berberina en T.
Regulacin transcripcional
La regulacin transcripcional de la biosntesis de BIA ha sido recientemente
investigado en la adormidera (Kawano et al 2012;. Mishra et al 2013.), Pero ha
sido ms ampliamente estudiado en Coptis japonica (Kato et al 2007;. Yamada
et al 2011.). La importancia del control de la transcripcin en el metabolismo
BIA es particularmente evidente a partir de (1) la localizacin typespecific
celular de transcripciones de genes biosintticos (Bird et al 2003;. Samanani et
al 2006;. Lee y Facchini 2010; Onoyovwe et al 2013.) Y (2 ) la induccin
coordinada de todas las transcripciones expresadas de biosntesis de genes
(Zulak et al 2007) y las protenas correspondientes (Zulak et al 2009;..
Desgagn-Penix et al 2010) en cultivos de clulas de adormidera despus de la
adicin de un inductor de derivados de hongos..
La primera regulador transcripcional del metabolismo de BIA se identific a
partir C. japonica utilizando RNAi para silenciar cinco factores reguladores
putativos que muestra la reduccin de expresin en una lnea de clulas
cultivadas con los niveles de transcripcin de genes de biosntesis
relativamente bajas BIA (Kato et al. 2007). El silenciamiento transitorio de un
candidato (CjWRKY1) dio como resultado una marcada disminucin en la
transcripcin de genes de biosntesis de berberina. Por el contrario, la
sobreexpresin de CjWRKY1 aumento de los niveles de transcripcin de genes
biosintticos de berberina. Un regulador de la transcripcin bHLH implicado en
la biosntesis de la berberina se aisl utilizando un enfoque similar (Yamada et
al. 2011). Por el contrario, las heridas y otros estmulos para inducir una
respuesta de defensa se utiliz para identificar etiquetas de secuencias
expresadas correspondientes a las transcripciones de genes inducidos en
plantas de adormidera (Mishra et al. 2013). Un factor de transcripcin putativo
wKRY se aisl y se demostr que se una conservada WRKY elementos en
Ingeniera metablica
Plantas
Ingeniera metablica se ha utilizado para modular la composicin de
alcaloides y el rendimiento en plantas de adormidera, con resultados mixtos.
Plantas de adormidera diseados con expresa de forma constitutiva o
antisentido-suprimido NMCH mostr modulaciones sustanciales en el contenido
de alcaloides en general, pero el perfil BIA no fue alterada (Frick et al., 2007).
Por el contrario, la sobreexpresin de COR (Larkin et al. 2007) y Salat (Allen et
al. 2008) dio como resultado especficamente en aumento de la acumulacin
de morfinano alcaloide. Sorprendentemente, el silenciamiento RNAi mediada
de COR (Allen et al. 2004) no dio lugar a la acumulacin de codena, sino ms
bien caus una acumulacin sustancial de (S) -reticuline y una disminucin
concomitante en los niveles de productos intermedios de la va corriente abajo
de la morfina salutaridine. La base bioqumica para la acumulacin de un
intermedio de varios pasos enzimticos aguas arriba del gen silenciado no se
conoce, pero sugerencias incluyen la posible aparicin de (1) regulacin de la
retroalimentacin y (2) canales metablicos (Allen et al. 2004). La aparicin de
complejos multienzimticos en la biosntesis de la morfina es apoyado por la
supresin de Salat en el uso de RNAi (Allen et al. 2008). plantas silenciadasSalat mostraron niveles de salutaridine, que normalmente no es abundante en
la adormidera aument. La acumulacin de salutaridine fue inesperado ya que
el sustrato enzimtico Salat (salutaridinol) no se acumula. Por lo tanto,
salutaridine podra ser canalizada a travs de tebana un complejo enzimtico
que incluye SALR y Salat. Por ltimo, la sobre expresin de A. thaliana
reguladores transcripcionales en adormidera dado lugar a una mayor
acumulacin de la tebana y la codena asociada con la regulacin positiva de
varios enzimas biosintticas BIA (Apuya et al. 2008).
Los microbios
Los microbios ingeniera gentica para expresar genes que codifican enzimas
de biosntesis de BIA-proporcionan un nuevo enfoque para el desarrollo de
procesos de fabricacin escalables. La disponibilidad de un gran nmero de
genes de biosntesis de BIA de adormidera y plantas relacionadas ha facilitado
Perspectivas de futuro
Nuestro conocimiento de la biosntesis de alcaloides de opio ha sido objeto de
dos perodos de mayor avance: el primero hace, desde hace varias dcadas,
que implica la elucidacin de la qumica de algunas vas y la segunda, en la
ltima dcada, destacando el aislamiento de la mayora de los genes
biosintticos claves en gran medida facilitados por los rpidos avances en la
genmica. La disponibilidad de las vas completas a nivel gentico facilitar
renovados avances en el mejoramiento de las plantas y de la ingeniera
metablica y podra conducir a la creacin de sistemas de produccin
alternativos, tal vez los ms revolucionarios que son los microbios. Ms all del
aislamiento y la caracterizacin de las enzimas, los aspectos de la biosntesis
de alcaloides que an requieren una considerable investigacin incluyen (1) la
regulacin va, en los niveles tanto de la expresin gnica y la bioqumica
metablica, y (2) la biologa celular, especialmente la inter e intra-celular
procesos de transporte implicados en la formacin y almacenamiento de
compuestos. Los esfuerzos dedicados de un nmero relativamente pequeo de
grupos de investigacin en el ltimo medio siglo han generado un
impresionante cuerpo de la informacin y la adormidera elevada a la categora
de un sistema modelo para el estudio de la biosntesis de alcaloides en las
plantas.