XX SIMPSIO NACIONAL DE BIOPROCESSOS

XI SIMPSIO DE HIDRLISE ENZIMTICA DE BIOMASSA

01 a 04 de setembro de 2015
Fortaleza, Cear, Brasil

EFEITO DO PH E CONCENTRAO DO HIDROLISADO

HEMICELULOSICO DE CASCAS DE BANANA PARA PRODUO
DE ETANOL PELA BACTRIA ZYMOMONAS MOBILIS

Juliana Ferreira1*, Amanda A. Lopes1 e Crispin H. Garca-Cruz1

1

Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho - Instituto de Biocincias, Letras e Cincias Exatas
(UNESP/IBILCE), Departamento de Engenharia e Tecnologia de Alimentos. Laboratrio de Biopolmeros - So
Jos do Rio Preto, So Paulo.
*

E-mail para contato: ju_ferreirams@hotmail.com

RESUMO
As pesquisas atuais sinalizam como tecnologia emergente a produo de etanol combustvel a
partir de biomassas residuais de composio lignocelulsica. Diversos materiais lignocelulsicos tem
sido objeto de estudos, dentre eles, grande destaque para os resduos agrcolas, como as cascas de
frutas. O interesse em Zymomonas mobilis tem sido reavivado, devido s vantagens de sua
utilizao sobre a tradicional levedura Saccharomyces cerevisiae, como o seu alto rendimento de
converso de acar a etanol e sua elevada resistncia s altas concentraes de etanol. Dentro
desse contexto, o objetivo desse trabalho foi avaliar a produo de bioetanol pela bactria
Zymomonas mobilis, utilizando cascas de banana, variando a concentrao de slidos totais e o pH
inicial do meio de fermentao. De acordo com as anlises realizadas, somente a concentrao de
slidos totais teve influncia significativa na produo de etanol, resultando em uma concentrao
mxima de 1,6 g L-1 e uma produtividade de 0,2 g L-1 h-1.

1. INTRODUO
O etanol de segunda gerao apresenta-se como uma alternativa potencial para atender a
demanda mundial de novas fontes ou tecnologias para produo de combustveis, menos
poluentes e renovveis.
As pesquisas atuais sinalizam como tecnologia emergente para a produo de etanol combustvel a
partir de biomassas residuais de composio lignocelulsica. Pode-se dizer de uma maneira
simples, que a obteno de etanol a partir de biomassa envolve duas etapas. A primeira consiste na

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hidrlise dos polissacardeos, gerando mono e dissacardeos. A segunda etapa envolve a

fermentao desses polissacardeos em etanol (Ogeda; Petri, 2010), por leveduras ou bactrias.
Diversos materiais de composio lignocelulsicos tm sido estudados, como bagao de cana-deacar, madeira, resduos agrcolas, com grande destaque para as cascas de frutas.
A cultura da banana ocupa o segundo lugar em volume de frutas produzidas no Brasil, perdendo
apenas para a laranja. Segundo IBGE, a produo de banana na safra de 2014 foi de 7.198.160
toneladas, em uma rea de 488.717 hectares, apresentando um rendimento mdio de 14.729
kg/h. Considerando-se que a porcentagem da produo de banana que industrializada neste pas
de 3% (Folegatti; Matsuura, 2008), e que a casca da banana corresponde a 40% do seu peso, temse uma gerao de resduo industrial anual de cerca de 86.378 toneladas de cascas de banana.
Alm disso, das bananas que so colhidas nas lavouras, somente cerca de 40 a 50% chegam
efetivamente s mos dos consumidores (Sanches et al., 2004). O resto perdido em diversas
fases, desde o plantio at o consumidor final. Portanto, a produo de etanol de segunda gerao
pode ser uma alternativa para aproveitamento desses resduos.
O interesse em Zymomonas mobilis tem sido reavivado, devido s vantagens de sua utilizao sobre
a tradicional levedura Saccharomyces cerevisiae, como o seu alto rendimento de converso de
acar a etanol e sua elevada resistncia s altas concentraes de etanol (Sprenger, 1996; Bai et
al., 2008). Dentro desse contexto, o objetivo desse trabalho foi avaliar a produo de bioetanol pela
bactria Z. mobilis, utilizando cascas de banana como fonte de carbono, variando a concentrao
de slidos totais e o pH inicial do meio de fermentao.

2. MATERIAL E MTODOS
2.1.

Matria prima

Foram utilizadas cascas de banana madura Musa cavendischii, popularmente conhecida como
banana nanica. As cascas foram coletadas no Restaurante Universitrio da Universidade Estadual
Paulista Jlio de Mesquita Filho, Campus de So Jos do Rio Preto - SP. As cascas foram secas ao
sol, trituradas, acondicionadas e armazenadas em frascos de vidro a temperatura ambiente, at sua
utilizao.
2.2.

Hidrlise do material lignocelulsico

A hidrlise cida das cascas foi realizada de acordo com o mtodo proposto por Monsalve et al.
(2006), com algumas modificaes, adicionando-se 50 ml de cido sulfrico (5%) para cada 10 g de
substrato de banana (casca), em autoclave (Phoenix Luferco AV), durante 15 minutos, a 120C.
Aps o pr-tratamento, a soluo foi neutralizada com NaOH, para realizar a hidrlise enzimtica.
Foi utilizado um Complexo de Celulase (NS22086), Xilanase (NS22083), -glucosidase (NS22118) e
um Complexo de Enzimas (NS22119) fornecidas pela Novozymes (Novozymes Latin America Ltda,
Araucria, Brasil). A hidrlise foi realizada em agitador orbital com temperatura controlada (shaker)
(Marconi, MA830, Piracicaba, Brasil), a 50C, 100 rpm durante 24 h.

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2.3.

Microrganismo

O microrganismo utilizado foi a bactria Zymomonas mobilis CCT 4494, adquirida da Coleo de
Culturas Tropical (CCT) da Fundao Andr Tosello - Pesquisa e Tecnologia de Campinas, SP.
2.4.

Meio de manuteno

A linhagem bacteriana foi mantida em geladeira a 4C, aps o crescimento em estufa a 30C por 24
horas, em meio composto por: 20 g.L-1 de glicose, 10 g.L-1 de peptona de carne e 10 g.L-1 de extrato
de levedura, em pH 6,5.
2.5.

Meio de fermentao

O meio de fermentao utilizado teve a seguinte composio em g.L-1: extrato de levedura, 5,0;
KH2PO4, 1,0; (NH4)2SO4, 1,0; MgSO4.7H2O, 1,0. Como fonte de carbono foi utilizado o hidrolisado de
casca de banana. O pH inicial e as concentraes em Slidos Totais do caldo hidrolisado testados,
esto apresentadas na Tabela 1, esses valores foram estabelecidos atravs de testes anteriores. O
teor de slidos totais foi determinado utilizando um refratmetro Quimis.
2.6.

Fermentaes

As fermentaes foram realizadas em frascos erlenmeyer de 250 mL, contendo 50 mL do meio de

fermentao, a 30C, com agitao de 200 rpm, em agitador orbital com temperatura controlada
(shaker) (Marconi - MA 830), durante 8 h. Os ensaios foram feitos em duplicatas.
2.7.

Mtodos analticos

O pH final foi determinado diretamente no caldo fermentado por potenciometria em pHmetro

(Digmed - DM20). A concentrao celular foi monitorada atravs da absorbncia no
espectrofotmetro (Biochrom - Libra S22), no comprimento de onda de 570 nm. Aps a separao
de clulas, fez-se a determinao de etanol, por cromatografia gasosa, com Cromatgrafo - HP5890 Srie II - detector FID (Flame Ionization Detector).
Tabela 1. Variveis independentes codificadas e reais, com seus diferentes nveis.
Variveis independentes
X1 Slidos Totais (%)
X2 pH inicial

-1,41
5
4,5

Nveis Codificados e Reais

-1
0
+1
7,9
15
22,1
4,8
5,5
6,2

+1,41
25
6,5

3. RESULTADOS E DISCUSSO
A hidrlise das cascas de banana, permitiu obter um caldo com concentrao de 15% de slidos
totais, esse caldo foi concentrado, em banho-maria, at 25% para os ensaios de fermentao com

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maior concentrao, e diludo para os que requereram menores concentraes, como apresentado
na Tabela 1.
Na Tabela 2 so apresentadas as mdias dos resultados obtidos na fermentao do hidrolisado
hemicelulsico para produo de etanol. Foi encontrada uma variao de concentrao do produto
na faixa de 0,1 a 1,6 g L-1, nas corridas 2 e 8, respectivamente. Na corrida 8 foi determinada
tambm a maior produtividade de etanol, 0,2 g L-1 h-1.
Tabela 2. Planejamento fatorial completo composto central, com 2 variveis independentes e a
mdia da produo de etanol.
Variveis
Corrida
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11

X1
-1
1
-1
+1
-1,41
1,41
0
0
0
0
0

X2
-1
-1
+1
+1
0
0
1,41
+1,41
0
0
0

Resposta
Etanol (gL-1)
1,3
0,1
1,0
0,3
0,9
0,2
1,4
1,6
1,3
0,4
0,7

Para produo de etanol somente a concentrao de Slidos Totais foi significante

estatisticamente, com p<0,05. E o coeficiente de determinao da regresso (R2) = 0,7527 para o
modelo foi vlido, indicando que ele explica 75,27% da variao dos dados observados. Este coeficiente mede a proporo da variao total da resposta que explicada pelo modelo (Barros Neto et
al., 2001). Desse modo, quanto maior o R2 menor ser o erro e melhor o modelo.
A varivel X1 (Slidos Totais) apresentou efeito negativo, como pode ser observado na Figura 1,
quanto menor a concentrao de slidos, maior produo de etanol. Nessa figura pode se observar
tambm a no influencia do pH inicial, tem-se alta concentrao de etanol tanto no menores nveis
(4,5), quanto nos maiores (6,5) avaliados.

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Figura 1. Superfcie de resposta para produo de etanol (g L-1) ao redor da concentrao de slidos totais
(%) e do pH inicial do meio de fermentao.

A Figura 2 apresenta um cromatograma correspondente produo de etanol referente a corrida 8

(1,6 g L-1). Neste, pode-se observar que, alm da presena de etanol, existem tambm outros
compostos que apresentam-se em maiores concentraes do que o etanol. A presena desses
compostos pode justificar uma reduo da produo etanol, uma vez que h a possibilidade do
desvio do metabolismo e tambm o efeito inibitrio provocado por estes componentes. De acordo
com Fein et al. (1983), a presena de outros compostos qumicos no meio de fermentao, como
cido actico, furfural, fenol, cidos alifticos, aromticos etc., podem ser responsveis pela
inibio da fermentao.

Figura 2. Cromatograma de Etanol, obtido no ensaio 8, na fermentao do hidrolisado hemicelulsico de

cascas de banana pela bactria Zymomonas mobilis CCT 4494.

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A composio do hidrolisado utilizado nas fermentaes desconhecida, alm disso, de acordo

com Mussatto e Roberto (2004), o tratamento cido do material lignocelulsico produz diversos
compostos inibidores, como os derivados da degradao do acar e da lignina, componentes
derivados da estrutura lignocelulsica e ons de metais pesados. Por isso, necessrio realizar
anlises mais detalhadas desse hidrolisado, a fim de otimizar a fermentao.

4. CONCLUSO
Para produo de etanol pela bactria Z. mobilis somente a concentrao de slidos totais teve
influncia significativa, resultando em uma concentrao mxima de etanol de 1,6 g L-1 e uma
produtividade de 0,2 g L-1 h-1.

5. REFERNCIAS
Bai, F. W.; Anderson, W. A.; Moo-Young, M., 2008. Ethanol fermentation technologies from sugar
and starch feedstocks. Biotech. Adv. 26, 89105.
Barros Neto, B.; Scarminio, I. S.; Bruns, R. E., 2001. Como fazer experimentos: pesquisa e
desenvolvimento na cincia e na industria. Campinas: EDUNICAMP.
Fein, J. E.; Charley, R. C.; Hopkins, K. A.; Lavers, B.; Lawford, H. G., 1983. Development of a simple
defined medium for continuous ethanol production by Zymomonas mobilis. Biotechnol. Lett. 5, 1-6.
Folegatti, M. I. S.; Matsuura, F. C. A. U., 2008. Processamento. Livro da Banana. Disponvel
em:http://www.agencia.cnptia.embrapa.br/recursos/LivroBananaCap13ID-PA3643xufd.pdf.
Acesso em: 01 dez. 2014.
Monsalve, J. F.; Perez, V. I. M.; Colorado, A. A. R., 2006. Produccin de etanol a partir de La cscara
de banano y almidn de yuca. Dyna. 73, 21-27.
Mussatto, S. I.; Roberto, I. C., 2004. Alternatives for detoxification of diluted-acid lignocellulosic
hydrolyzates for use in fermentative processes: a review. Bioresour. Technol. 93, 110.
Ogeda, T. L.; Petri, D. F. S., 2010. Hidrlise enzimtica de biomassa. Quim. Nova. 33, 1549-1558.
Sprenger, G. A., 1996. Carbohydrate metabolism in Zymomonas mobilis: a catabolic highway with
some scenic routes. FEMS Microbiol. Lett. 145, 301-307.
Sanches, J.; Leal, P. A. M.; Saravali, J. H.; Antoniali, S., 2004. Avaliao de danos mecnicos causados
em banana nanico durante as etapas de beneficiamento, transporte e embalagem. Eng.
Agric. 24, 195-201.