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ENZIMAS EM MEDICAMENTOS E
DIAGNSTICOS
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Maria Eugnia M Cruz
Manuela Gaspar
University of Lisbon
University of Lisbon
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ENZIMAS EM MEDICAMENTOS
E DIAGNSTICOS
Maria Eugnia M. Cruz, Maria Brbara Martins,
Maria Lusa Corvo, Maria Manuela Gaspar,
Edna Maria Morais Oliveira e Maria Antonieta Ferrara
SUMRIO
O uso teraputico de enzimas remonta ao final do sculo 19, quando preparaes brutas de enzimas pancreticas de origem suna j eram empregadas no tratamento de desordens gastrointestinais. Atualmente, existe no mercado uma ampla variedade de medicamentos base de enzimas para aplicao como auxiliares digestivos, antiinflamatrios, tratamento de cogulos sangneos, cncer, fibrose cstica, gota e deficincias metablicas, dentre outras. Como exemplos podem ser citados o uso de estreptoquinase
como agente antitrombtico, de asparaginase no tratamento de leucemia e de glicocerebrosidase no controle da doena de Gaucher. Outro importante uso teraputico das
enzimas na ativao seletiva de pr-frmacos, uma alternativa de superao da
toxicidade de determinados quimioterpicos.
O desenvolvimento de novas estratgias de formulao envolvendo o confinamento
em sistemas de transporte e direcionamento, como os lipossomas, ou conjugao qumica com molculas de baixo peso molecular ou polimricas, como o polietilenoglicol, permite contornar limitaes relacionadas instabilidade dos biocatalisadores, suscetibilidade ao ataque de proteases, dificuldade de acesso ao rgo alvo e antigenicidade.
O grande desenvolvimento experimentado pela terapia enzimtica nos ltimos
anos deve-se identificao, purificao e caracterizao de enzimas e metablitos relevantes e ainda ao advento das tcnicas de DNA recombinante e de processos de produo em larga escala que possibilitam a produo de enzimas em grandes quantidades e
com custos mais convenientes.
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INTRODUO
A alta especificidade e eficincia cataltica das enzimas so caractersticas importantes
que aliceram sua aplicao como agentes teraputicos. Assim sendo, a relevncia do
uso de enzimas como medicamento relaciona-se ao fato de que pequenas quantidades
do catalisador biolgico podem produzir efeitos bastante especficos em condies
fisiolgicas.
O grande desenvolvimento experimentado pela terapia enzimtica nos ltimos
anos deve-se principalmente identificao, purificao e caracterizao de enzimas e
metablitos relevantes e ainda ao advento das tcnicas de DNA recombinante e de processos de produo em larga escala, que possibilitam a obteno de elevados
rendimentos, em larga escala e com custos relativamente baixos.
Da mesma forma, o uso de enzimas em diagnsticos foi facilitado pelos avanos recentes e, atualmente, muitas enzimas com elevada especificidade ao substrato foram desenvolvidas e so empregadas como catalisadores em diagnsticos.
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Tabela 13.1 Exemplos de enzimas teraputicas (TRAMPER e POULSEN, 2000; CHAPLIN, 2002,
MARSHALL et alii, 2003;WALSH, 2003)
Enzima
Nmero EC
Uso/indicao
teraputica
Reao
Asparaginase*
3.5.1.1
L-asparagina + H2O
L-aspartato + NH3
Leucemia
Colagenase
3.4.24.3
Hidrlise de colgeno
lceras de pele
Fator VII
3.4.21.21
Plasminognio plasmina
Cogulo sangneo
Hialuronidase
3.2.1.35
Hidrlise do hialuronato
Ataque cardaco
Lisozima
3.2.1.17
Antibitico
Rodanase
2.8.1.1
Envenenamento com
cianeto
Ribonuclease
3.1.26.4
Hidrlise de RNA
Antiviral
b-lactamase
3.5.2.6
Penicilina peniciloato
Alergia a penicilina
Estreptoquinase
3.4.22.10
Plasminognio plasmina
Cogulo sangneo
Tripsina
3.4.21.4
Hidrlise de protena
Inflamao
Uricase*
1.7.3.3
Urato + O2 alantona
Gota
Uroquinase
3.4.21.31
Plasminognio plasmina
Cogulo sangneo
Superxido dismutase
1.15.1.1
Radical superxido
Inflamao
perxido de hidrognio + O2
b-glucocerebrosidade*
3.2.1.45
Terapia de reposio
enzimtica
Doena de gaucher
Galactosidase*
3.2.1.23
Terapia de reposio
enzimtica
Doena de Fabry
Catalase
1.11.1.6
perxido de hidrognio
H2O + O2
Inflamao / stress
oxidativo
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Aplicaes
Enzimas digestivas
Desde o final do sculo 19, preparaes brutas de enzimas pancreticas de origem suna
vm sendo empregadas no tratamento de desordens gastrointestinais (TRAMPER e
POULSEN, 2000). Atualmente, existe no mercado uma ampla variedade de medicamentos base de enzimas para problemas digestivos. Estes medicamentos podem conter em sua formulao, alm de proteases, amilases, lipases, celulases, sais biliares e
outros.
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Uma das enzimas propostas como agente teraputico para inmeras doenas nas
quais as formas reativas de oxignio tm um papel importante a superxido dismutase
(SOD). Diversos estudos tm sido conduzidos para tentar esclarecer o possvel papel benfico desta enzima na reduo de danos de tecidos em doenas inflamatrias crnicas,
nas quais se inclui a artrite reumatide (REGNAULT et alii, 1996). A proposta do uso de
SOD baseia-se na hiptese de que um aumento da concentrao extracelular da enzima
diminuiria a quantidade de superxido produzido por neutrfilos ativados, impedindo
deste modo quer possveis danos provocados por este radical, quer a sua possvel atividade quimiottica (BARET et alii, 1984). As limitaes potenciais para o uso de SOD
como agente teraputico so a sua rpida eliminao do sangue por filtrao glomerular (GREENWALD, 1991; Dowling et alii, 1993; TAKAKURA et alii, 1994) e o seu tempo
de meia-vida muito reduzido (SOD de origem bovina - 6 min no rato (HUBER et alii,
1977) e 30 min em humanos (HUBER et alii, 1980)).
Enzimas em oncologia
Uma importante estratgia para o combate ao cncer consiste em explorar as diferenas bioqumicas entre as clulas normais e as clulas neoplsicas. Estas ltimas apresentam alteraes substanciais em seus perfis metablicos que esto relacionadas ao aumento da sntese de protenas e dos cidos nuclicos e eliminao ou limitao da sntese de molculas conhecidas como blocos construtores, como os aminocidos, por
exemplo, levando dependncia do suprimento externo destas substncias. As enzimas podem ser empregadas para esgotar o organismo de um determinado nutriente,
privando, seletivamente, as clulas neoplsicas do nutriente, sem afetar clulas e tecidos
normais.
A L-asparaginase, por exemplo, uma enzima muito eficaz no combate a leucemias linfocticas (linfomas) porque esgota os estoques de asparagina circulante, metablito essencial para as clulas tumorais em contraposio s clulas normais, que so capazes de sintetizar este aminocido. Um grande impulso na terapia enzimtica do cncer
surgiu da observao de Broome (1961), que identificou como sendo a asparaginase o
fator antilinfoma presente no soro de porquinhos da ndia. Subseqentemente, foram
identificadas fontes bacterianas e vegetais da enzima (MLLER e BOOS, 1998;
WRISTON e YELLIN, 1973).
A asparaginase foi introduzida no mercado em 1978. As formulaes Elspar, da
Merck, e Erwinase da Speywood, preparadas a partir de enzimas bacterianas produzida
por Escherichia coli e Erwinia carotovora, respectivamente, so utilizadas por via intravenosa, geralmente associadas a agentes alquilantes e outros antagonistas metablicos
(MULLER e BOOS, 1998; NARTA, et alii, 2007). No Brasil, tem-se conhecimento de
que somente o Elspar est em uso.
Apesar de efetiva, a asparaginase apresenta limitaes como o baixo tempo de
meia-vida e o risco de provocar reaes imunolgicas. Adicionalmente, o paciente pode
desenvolver resistncia ao medicamento. Assim, a utilizao da asparaginase est restrita ao ambiente hospitalar com acompanhamento mdico rigoroso. Em 1994, a FDA
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aprovou o uso da L-asparaginase modificada com polietilenoglicol (PEG). Esta modificao da enzima foi positiva porque aumentou a meia-vida do antineoplsico e reduziu
consideravelmente os efeitos imunognicos, ampliando ainda mais o espectro de atividade contra linfomas previamente resistentes. No entanto, as reaes imunognicas
no foram completamente eliminadas e quando ocorrem so de longa durao e,
portanto, mais difceis de controlar.
Outras enzimas capazes de decompor aminocidos vm sendo testadas para o tratamento de diversos tipos de tumores: L-glutaminase-L-asparaginase, L-metionina-g-liase, L-fenilalanina amonialiase, L-arginase, L-tirosinase, L-serina dehidratase, L-treonina
desaminase e indolil-3-alcano hidroxilase (BICKERSTAFF, 2003). Esta relao vem
crescendo de forma notvel tendo em vista as novas tcnicas de clonagem e expresso
de enzimas e identificao de metablitos relevantes.
Outro tipo de enzima oncoltica, ainda em fase experimental, a toxina da difteria, cuja ao interrompe a sntese protica. A sensibilidade das clulas tumorais a esta
toxina de 100 a 10.000 vezes maior em relao s clulas normais (AYESH et alii, 2003;
BICKERSTAFF, 2003).
As enzimas que degradam macromolculas (polissacardeos de membrana, protenas estruturais e funcionais ou cidos nuclicos), como neuramidase, ribonuclease e
carboxipeptidase, so tambm promissoras para o tratamento de neoplasias (AYESH et
alii, 2003; BICKERSTAFF, 2003).
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1 prova
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Hidrfila
Figura 1 - A
Enzima
Hidrfoba
Figura 1 - B
tculas hidroflicas, que se incorporam nos espaos internos aquosos - figura 13.1-A; partculas hidrofbicas, que se incorporam na bicamada lipdica - figura 13.1-B; e partculas
anfiflicas, que se distribuem entre os dois meios). Os lipossomas foram preparados
pela primeira vez em 1965 por Bangham para uso como modelos de membranas
(BANGHAM et alii, 1965) e, posteriormente, como transportadores de agentes bioativos in vivo (GREGORIADIS e RYMAN, 1972). Atualmente, possvel preparar
lipossomas com caractersticas bem definidas e adaptadas para cada objetivo em vista,
como por exemplo, o rgo alvo.
De acordo com suas caractersticas e comportamento in vivo aps a administrao
intravenosa, os lipossomas, podem ser classificados em quatro grupos (CRUZ, 1997;
LASIC e PAPAHADJOPOULOS, 1998; WOODLE e STORM, 1998; TORCHILIN e
WEISSIG, 2003):
Lipossomas convencionais, caracterizados por uma captura rpida pelas clulas
do sistema mononuclear fagocitrio (SMF) apresentando, por isso, reduzidos
tempos de circulao na corrente sangunea.
Lipossomas de longo tempo de circulao, que contendo determinadas molculas (como gangliosdeos) ou polmeros (como polietilenoglicol - PEG), apresentam tempos de circulao na corrente sangunea prolongados;
Lipossomas catinicos, contendo fosfolipdios carregados positivamente e adequados para o transporte de material gentico.
Lipossomas direcionadas, contendo ligantes superfcie capazes de reconhecer
especificamente determinadas clulas e, portanto, apropriados para um
direcionamento especfico.
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Atualmente, existem diversas formulaes lipossomais no mercado. A primeira delas foi comercializada em 1990 nos EUA, contendo anfotericina B e utilizada no tratamento de infeces sistmicas fngicas e infeces parasitrias, como a leishmaniose.
Conforme j mencionado, a administrao teraputica de enzimas na forma livre
pode apresentar graves limitaes, como reaes imunognicas severas; dificuldade de
acesso ao rgo alvo, vida mdia curta e rpida inativao aps administrao. Na forma
lipossomal este panorama alterado porque ocorrem modificaes nas propriedades
farmacocinticas e de biodistribuio das enzimas, ocorrendo reduo da sua toxicidade e aumento da eficcia (CRUZ et alii, 1993; JORGE et alii, 1994; GASPAR et alii, 1996,
CORVO et alii,1999).
Aps incorporao em lipossomas, a localizao da enzima no interior da vescula
depende da sua solubilidade: as enzimas hidrossolveis localizam-se no espao interno
aquoso e as lipossolveis, na matriz lipdica. O mecanismo de ao das enzimas incorporadas depende de sua localizao no lipossoma. Assim, as enzimas hidrossolveis s podem degradar os substratos aps a ruptura dos lipossomas (figura 13.1-A); enquanto
que as lipossolveis, capazes de expor o centro ativo para o exterior do lipossoma, podem exercer a sua atividade enzimtica (efeito teraputico) independentemente da
ruptura do lipossoma (figura 13.1-B).
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Enzima nativa
(hidrfila)
protena
modificada
H2
H2
-NH
-NH
pH > pKa
-NH2
O
C
Cl
cloreto de acilo
insolvel em gua (C>10)
instvel em gua
afinidade para
bicamadas
bicamada
lipidica
Enzima
modificada
-NH 2
-N
-NH 2
-NH 2
-NH 2
-N
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Estabilizavel em meio
aquoso
ultra-sons
micelas de tensioactivo
B
A figura 13.2 apresentada esquematicamente a modificao de uma enzima por ligao a cadeias hidrofbicas, a insero de uma enzima modificada numa bicamada lipdica e um exemplo de conjugao por intermdio da reao covalente entre o grupo carbonilo de um cloreto de acilo e os grupos laterais ee- NH2 dos resduos de lisina da enzima.
Com o objetivo de aumentar o carter hidrofbico da enzima, outros autores estudaram a reao de modificao da L-asparaginase por ligao a cadeias acila utilizando
o reagente de modificao convenientemente disperso em micelas. (MARTINS e
CRUZ, 1988; MARTINS et alii, 1990, 1996; MARTINS, 1998; CRUZ et alii, 2005).
O efeito da presena de substrato no meio reacional, adicionado para proteger o
centro ativo da enzima durante a reao de modificao, e da relao cloreto de acilo:enzima, para uma reao em meio heterogneo, apresentado na figura 13.3. Os resultados
do estudo demonstraram que possvel aumentar o grau de modificao at ser atingido
um percentual de grupos modificados mximo, sem alterar a atividade cataltica da enzima Acil-L-asparaginase. Foi ainda avaliado o efeito de meios heterogneos nos parmetros cinticos do bioconjugado e realizado um estudo comparativo de propriedades da
enzima modificada e da enzima nativa, tais como a mobilidade eletrofortica, potencial
zeta a determinados valores de pH, perfis de pH e de temperatura, estabilidade em soro
humano e estabilidade ao armazenamento (MARTINS et. alii, 1996).
Estudos semelhantes de otimizao da reao de modificao com cloreto de palmitolo e de caracterizao da enzima modificada foram realizados para as enzimas uricase, superxido dismutase e catalase (Martins, 1998; Aguiar et alii, 1998). No caso da
superxido dismutase e da catalase, estudou-se o efeito dos comprimentos de cadeia de
cloretos de acila no grau de modificao das enzimas. Os resultados obtidos para a
enzima superxido dismutase podem ser observados na figura 13.4.
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percentagem (%)
80
60
40
20
0
0
200
400
600
800
1000
1200
1400
1600
% modificao
reteno de actividade
% modificao
reteno de actividade
Figura 13.3 Efeito da relao molar cloreto de acilo:enzima no grau de modificao e na reteno
de atividade da enzima, quer na ausncia de substrato quer na presena de substrato no meio
reacional.
35
C16
C18
C14
30
C8
25
20
15
10
5
0
0
100
200
300
400
500
600
Figura 13.4 Evoluo do grau de modificao da enzima superxido dismutase em funo da razo
molar cloreto de acila /protena e do comprimento da cadeia aclica.
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A figura 13.5 mostra esquematicamente a incorporao destas enzimas na estrutura de um lipossoma multilamelar e a destruio da estrutura lipossomal com liberao
gradual da enzima incorporada nas bicamadas.
soro
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enzima obtido por ligao de cadeias de cido palmtico aos grupos amina da enzima
(Ac-L-asparaginase). A utilizao de derivados acilados teve como finalidade a obteno
de uma nova entidade enzimtica com carter hidrofbico e maior afinidade pelas bicamadas lipdicas dos lipossomas contrariamente L-asparaginase nativa, de carter hidroflico (JORGE et alii, 1994).
A composio lipdica dos lipossomas tem um efeito importante no s na eficcia
de encapsulao das enzimas, mas tambm na reteno da atividade enzimtica. Assim,
observou-se que alguns lipdios como o dicetilfosfato (DcP) reduziram a atividade cataltica da enzima, enquanto que outros lipdios, como o fosfatidilinositol (PI), a estearilamina (SA) e os gangliosdeos (GM1), conservaram quase 100% da atividade e permitiram a encapsulao da enzima com alta eficcia e elevadas concentraes intralipossomais. A tabela 13.2 apresenta, a ttulo de exemplo, a caracterizao fsico-qumica de
formulaes lipossomais de L-asparaginase e Acil L-asparaginase para o caso da composio lipdica contendo SA.
Tabela 13.2 Caracterizao fsico-qumica de formulaes lipossomais de L-asparaginase e
Acil-L-asparaginase
Enzima Incorporada
Protena final /
Protena inicial
(%)
Eficcia de
encapsulao
(%)
Atividade enzimtica
dos lipossomas
intactos (%)
L-Asparaginase
31 1
52 2
<5
Acil-L-Asparaginase
43 15
74 12
74 11
Composio lipdica fosfatidilcolina: colesterol: estearilamina. Cruz et alii, 1993; Jorge et alii, 1994.
Conforme mencionado acima, as enzimas hidrossolveis, localizadas no espao interno aquoso dos lipossomas, s podem degradar os substratos aps ruptura dos lipossomas; enquanto que as lipossolveis, localizadas na matriz lipdica, podem exercer sua atividade enzimtica independentemente da ruptura do lipossoma. Assim, quando a forma
hidrofbica da enzima, L-asparaginase acilada, foi incorporada em lipossomas, a principal caracterstica foi possibilidade da expresso da atividade enzimtica na forma intacta
dos lipossomas, ao contrrio das formulaes lipossomais da enzima nativa.
Estudos in vitro de citotoxicidade em clulas de ovrio de hamster chins demonstraram que a L-asparaginase encapsulada em lipossomas foi menos txica para as clulas normais em cultura do que a enzima na forma livre (CRUZ et alii, 1993). Uma vez
que a enzima encapsulada em lipossomas liberada lentamente das vesculas, a degradao de asparagina tambm mais lenta, o que d s clulas mais tempo para se recuperar dos danos resultantes do contato da enzima com seu substrato.
De acordo com a composio lipdica e o tipo de lipossomas, os parmetros farmacocinticos da enzima variam: em lipossomas com dimetro inferior a 0,2 m, observou-se um aumento do tempo de meia-vida da enzima nativa de 2h (enzima livre) para
9h (lipossomas convencionais) ou 29 h (lipossomas de longo tempo de circulao)
(GASPAR et alii, 1996). A enzima acilada apresentou um tempo de meia-vida de 3h, que
aps incorporao em lipossomas foi aumentado para 24 h (JORGE et alii, 1994).
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Foi estudada a toxicidade com vistas avaliao da segurana imunolgica das formulaes lipossomais de L-asparaginase e acil-L-asparaginase aps sensibilizao dos
animais por via intra muscular e desafio (challenge) por via intra venosa. Verificou-se
que a encapsulao da enzima nativa em lipossomas impediu a induo de anticorpos
anti-asparaginase uma vez que no ocorreu morte nos grupos de animais pr-sensibilizados que receberam a enzima na forma de lipossoma. Por outro lado, todos os animais
sensibilizados com L-asparaginase na forma livre e tratados com enzima livre sofreram
choque anafiltico e 17% dos animais morreram. No caso da acil-L-asparaginase, embora esta enzima se encontre parcialmente exposta para o exterior, os lipossomas
conseguiram mascarar as reaes imunognicas. (tabela 13.3).
Tabela 13.3 Toxicidade aguda in vivo: influncia da formulao utilizada de L-asparaginase e
Acil-L-asparaginase
Challenge (i.v.)
Animais c/ choque
anafiltico (%)
Livre
Livre
100
17
Livre
Lipossomas
Lipossomas
Livre
100
Lipossomas
Lipossomas
Livre
Livre
66
17
Livre
Lipossomas
Lipossomas
Livre
Lipossomas
Lipossomas
Sensibilizao (i.m.)
L-Asparaginase
Acil-L-Asparaginase
1 prova
320
10
6
400
4
Animais curados
600
200
2
0
Comercial
L - ASNase
Lipossomas
L - ASNase
Semi - sinttica
Ac -L - ASNase
Lipossomas
Ac -L - ASNase
- Animais curados
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No caso da forma modificada da enzima (superxido dismutase acilada), as formulaes lipossomais podem exercer atividade teraputica antes de sua destruio, resultando em efeito teraputico mais rpido.
A enzima superxido dismutase nativa e um derivado obtido por ligao de cadeias de cido palmtico a grupos amina da enzima foram incorporados em lipossomas. A
seguir, foram efetuados estudos de caracterizao das formulaes, de farmacocintica
e biodistribuio e de atividade in vivo usando como modelo a artrite adjuvante de rato.
A utilizao de derivados acilados de superxido dismutase teve como finalidade a obteno de uma nova entidade enzimtica com carter hidrofbico e por isso com maior
afinidade para as bicamadas lipdicas dos lipossomas contrariamente enzima nativa,
de caractersticas hidroflicas. As formulaes lipossomais com superxido dismutase
nativa e acilada foram de dois tipos: lipossomas convencionais contendo estearilamida
(SA) (CORVO, 1997) e de longo tempo de circulao revestidos com polietilenoglicol
(LCL) (CORVO, 1999, 2002). Em todos os estudos comparativos realizados in vivo, as
formulaes lipossomais foram preparadas com razes protena/lipdeo iniciais entre
12 a 15 mg de enzima nativa ou acilada (concentraes intralipossomais de protena)
por mol de lipdeo. Os resultados obtidos so relatados a seguir.
A eficcia de encapsulao da superxido dismutase em lipossomas variou com a
composio lipdica, o tipo de lipossomas e o tamanho, podendo ir at 80% em lipossomas SA (0,2 mm). No entanto, todas as formulaes apresentaram valores de reteno
de atividade enzimtica superiores a 90%.
Os valores mais elevados de eficcias de incorporao observados para superxido
dismutase acilada resultam da maior afinidade desta pela bicamada lipdica dos lipossomas contrariamente superxido dismutase nativa (localizada no espao interno aquoso). Estes resultados esto de acordo com o valor de coeficiente de partio em octanol/gua da enzima modificada, 20 vezes superior ao obtido para a nativa (3,13 contra
0,15, respectivamente) (MARTINS et alii, 1994).
Os lipossomas de superxido dismutase nativa e modificada apresentaram atividades enzimticas na forma intacta bastante diferentes evidenciando a diferente localizao destas duas entidades enzimticas no espao lipossomal. Para os lipossomas da enzima acilada, 40 a 47% da enzima encontrava-se parcialmente exposta superfcie do lipossoma, enquanto que para os lipossomas da forma nativa, este valor era inferior a 5%,
confirmando a sua localizao no espao interno aquoso.
Para os estudos de farmacocintica e biodistribuio, os lipossomas com superxido dismutase nativa e acilada foram marcados radioativamente atravs da co-encapsulao do complexo 111In-DTPA e administrados intravenosamente. A monitorao do
seu comportamento in vivo foi realizada numa cmara g. A anlise das imagens obtidas
(figura 13.7) mostra que no caso das formulaes lipossomais LCL e SA no tempo zero,
o contorno do fgado, bao e regio cardaca eram visveis. No entanto, aps 24 h, no
caso da formulao SA, a regio do corao j no era visvel, evidenciando o desaparecimento da formulao do sangue, enquanto que para a formulao LCL, esta regio
ainda era visvel, mostrando que uma alta percentagem da dose injetada ainda se en-
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322
t = 0h
t = 24h
SA 200nm
LCL 110 nm
Figura 13.7 Imagens obtidas com uma cmara g, s 0 h e 24 h, para os lipossomas SA e lipossomas
LCL (Corvo et alii, 1999).
1 prova
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rente para a dose mais baixa. Comparando os dois sistemas lipossomais, o efeito teraputico da formulao LCL foi superior em todas as doses relativamente aos lipossomas
SA. Observou-se ainda que com 6 administraes, apenas, a formulao LCL j apresentava o seu efeito mximo (CORVO et alii, 2002).
Deste estudo pode-se concluir que o tipo de lipossomas, seu tamanho, dose e nmero de administraes so fatores importantes. O revestimento de lipossomas com polietilenoglicol confere superioridade a estes sistemas no transporte de superxido dismutase para os locais de inflamao, sendo o seu tamanho (aproximadamente de 0,10
m) um fator crtico.
O efeito teraputico comparativo das formulaes lipossomais, quer LCL quer SA,
de superxido dismutase nativa e acilada, foi avaliado atravs do dimetro da pata inflamada, que mede o inchao da articulao, e do volume da pata, que relaciona a intensidade do edema na articulao e nos tecidos moles. O esquema de tratamento utilizado
foi constitudo por uma injeo nica das diversas formulaes lipossomais com uma
dose de 363 g de SOD por rato. Observou-se reduo mais rpida do volume da pata
inflamada para os lipossomas de superxido dismutase acilada 4 dias aps a injeo das
formulaes comparativamente aos lipossomas da forma nativa (GASPAR et alii, 2007)
A presena de superxido dismutase acilada nas superfcies dos lipossomas permite que
estes exeram o seu efeito teraputico mesmo antes do rompimento das vesculas. Esta
uma vantagem em relao aos lipossomas da enzima nativa, nomeadamente em
situaes de isquemia seguida de reperfuso.
Os exemplos de terapia enzimtica envolvendo a modificao qumica e posteriormente associao a lipossomas podem ser utilizados para a incorporao de outras enzimas de caractersticas hidrofbicas.
1 prova
324
mente automatizados que analisam amostras biolgicas e servem de auxiliares para o diagnstico e tratamento de doenas. Exemplos de enzimas empregadas para este fim so
apresentados na tabela 13.4.
Tabela 13.4 Exemplos de enzimas empregadas em anlises clnicas
Enzima
Substrato avaliado
lcool desidrogenase
lcool
lcool oxidase
lcool
aldedo desidrogenase
catalase/aldedo desidrogenase
cido rico
colesterol oxidase/peroxidase
colesterol
colesterol oxidase
colesterol total
creatinase
creatinina e creatina
creatininase
creatinina
Glicose-6-P desidrogenase/hexoquinase
glicose e ATP
glicose
a-glicosidase
a-amilase
b-glicosidase
a -amilase
b-glucuronidase
esterides
glutamato desidrogenase/urease
uria
glicerol-3-P desidrogenase
lactato desidrogenase
lipase/glicerolquinase/glicerol-3-P
oxidase/peroxidase
triglicrides e glicerol
malato desidrogenase
oxaloacetato e malato
malato desidrogenase/fosfoenolpiruvato
carboxilase
CO2/carbonato
maltose fosforilase
a- amilase
mutarotase/glicose oxidase/peroxidase
glicose
sarcosina oxidase
creatinina e creatina
sacarose fosforilase
fosfato inorgnico
urease
uria
uricase/peroxidase/aldedo desidrogenase
cido rico
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Doena alvo
Fosfatase cida
Alanina aminotransferase
Problemas hepticos
Fosfatase alcalina
Amilase
Pancreatite aguda
Aspartato aminotransferase
Colinesterase
Exposio a organofosfatos
Creatinina quinase
Problemas cardacos/musculares
Gama glutamiltransferase
Problemas hepticos
Lactato desidrogenase
Renina
Hiperaldoteronismo
PERSPECTIVAS
O desenvolvimento de aplicaes de enzimas como medicamentos e em diagnsticos
tem sido considervel nos ltimos anos, refletindo a magnitude da potencialidade destes catalisadores biolgicos. Este um setor com perspectiva de crescimento acentuado
impulsionado pelos avanos em biologia molecular, genmica, protemica e engenharia de protenas. O crescente conhecimento das doenas em nvel molecular permite o
desenvolvimento de terapias mais especficas, portanto mais eficientes e menos sujeitas
a efeitos colaterais, e diagnsticos mais precisos. Adicionalmente, com os conhecimentos adquiridos, teoricamente possvel expressar qualquer protena ouenzima de interesse, proveniente de qualquer fonte, em clulas microbianas, vegetais ou animais, possibilitando a produo de enzimas com rendimentos e custos mais convenientes. esperada tambm uma grande contribuio das novas estratgias de formulao, como
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