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Resumo:
A clorofila a um pigmento encontrado em todos os grupos de vegetais e outros organismos
auttrofos sendo frequentemente, utilizada como indicadora da biomassa fitoplanctnica em
ambientes aquticos. A determinao da concentrao de clorofila a e feofitina a uma
ferramenta til em estudos de produtividade primria, na interpretao de resultados de
anlises fsicas e qumicas, como indicadora do estado fisiolgico do fitoplncton e na
avaliao do grau de eutrofizao de um ambiente aqutico. Esta Norma descreve os
procedimentos para a determinao da concentrao de clorofila a e feofitina a pelo mtodo
espectrofotomtrico monocromtico.
Palavras chave
Sumrio
pgina
1 Introduo
2 Objetivo
3 Documentos complementares
4 Definies
6 Execuo do ensaio
7 Resultados
10
12
9 Referncias
12
Anexo
12
Anexo
-Exemplo
de
Modelo
formulrio
de
de
registro
dos
envelope
resultados
da
anlise
13
Anexo
Exemplo
de
boletim
da
anlise
de
clorofila
feofitina
.14
Introduo
ficobilinas,
responsveis
pelo
processo
fotossinttico
(pigmentos
Dinofagela
DiatomFeofc
Criptofceas
Rodofas
Crisof
Clorofcea
Euglenales
GRUPOS Cianobactri
ceas eas
ceas
ceas
dos
Clorofila
a
Clorofila
b
Clorofila
c
Clorofila
Fonte:
- ausncia
Objetivo
Documentos complementares
Definies
filtragem
da
amostra,
extrao
dos
pigmentos
de
interesse,
leitura
em
Execuo do ensaio
10
realizar a primeira leitura nos comprimentos de 664 e 750 nm, anotando os resultados no
a correo para feofitina a feita acidificando-se a soluo contida nas cubetas, aps a 1
leitura (664 e 750 nm), pela adio de 20 a 100 L de cido clordrico 0,1 M;
e)
12
g)
terminadas as leituras, desprezar as solues das cubetas e lav-las com acetona 70%
Resultados
As leituras a 750 nm, antes e depois da acidificao, medem apenas a turbidez da amostra.
Estas leituras devem ser subtradas das densidades pticas lidas a 664 nm antes da
acidificao, e 665 nm depois da acidificao, obtendo-se assim as leituras corrigidas.
Clculo para a correo da Turbidez:
D664c= Densidade ptica a 664 nm, corrigida - obtida antes da acidificao.
Correo: D664 corrigida = D664 D750
D665c= Densidade ptica a 665 nm, corrigida - obtida depois da acidificao.
Correo: D665 corrigida = D665 D750
As concentraes de clorofila a e feofitina a podem ser obtidas a partir das seguintes equaes
monocromticas:
v
Clorofila a (g/L)= 26,73 x (D664c - D665c) x
(V x L)
(1)
13
v
Feofitina a (g/L)= 26,73 x [(1,7 x D665c) D664c] x
(V x L)
(2)
Onde:
V= Volume, em litros, da amostra filtrada
v= Volume, em mL, de acetona 90% usada para extrao L=
Caminho ptico, em cm, da cubeta espectrofotomtrica usada
D664c= Densidade ptica a 664nm, corrigida
D665c= Densidade ptica a 665nm, corrigida
Exemplo
Foram filtrados 700 mL de gua para extrao dos pigmentos.
Foi utilizada uma cubeta espectrofotomtrica de 1 cm de caminho ptico.
Foram utilizados 10 mL de acetona 90% na extrao.
As leituras em absorbncia obtidas antes da acidificao foram:
D750b = 0,002
D664 = 0,106
As leituras obtidas aps a acidificao foram:
D750a = 0,003
D665 = 0,078
Clculo com as leituras antes e depois da acidificao.
Correo da turbidez:
D664 - D750 = D664 corrigido = 0,106 0,002 = 0,104 (antes da acidificao)
D665 - D750 = D665 corrigido: 0,078 0,003 = 0,075 (depois da acidificao)
Substituio dos referidos valores nas equaes (1):
14
v
Clorofila a (g/L)= 26,73 x (D664c-D665c) x
(V x L)
(1)
10
Clorofila a (g/L)= 26,73 x (0,104 0,075) x
(0,7 x 1)
(1)
(1)
(V x L)
(2)
10
Feofitina a (g/L) = 26,73 x [(1,7 x 0,075) 0,104] x
(0,7 x 1)
(2)
(2)
(2)
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Referncias
APHA; AWWA; WEF. Standard methods for the examination of water and wastewater:
online.
Washington, DC, c2006. Disponvel em: <http://www.standardmethods.org/store>. Acesso em:
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Dirio Oficial da Unio: Repblica Federativa do Brasil, Poder Executivo, Braslia, DF, n. 53,
18 mar.
2005. Seo 1, p. 58-63. Com alteraes posteriores. Disponvel em:
<http://www.mma.gov.br/port/conama/legiabre.cfm?codlegi=459>. Acesso em: fev. 2014.
BRANDO, C. J. et al. (Org.). Guia nacional de coleta e preservao de amostras: gua,
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325 p. Disponvel em:
<http://arquivos.ana.gov.br/institucional/sge/CEDOC/Catalogo/2012/GuiaNacionalDeColeta.pdf
>. Acesso em: fev. 2014.
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LORENZEN, C. J. Determination of chlorophyll
equations.
Limnol. Oceanogr.,
16
17
Anexo A - Envelope de papel kraft pardo (6,5 x 8,5 cm) para o acondicionamento do filtro.
-----------------------------------Amostra..........................................
Ponto..............................................
Volume...........................................
pH...................................................
Data de Coleta...............................
Data de Filtragem..........................
Obs.:...............................................
.../Anexo B
Anexo B Exemplo de formulrio para registro dos resultados da anlise de Clorofila a e
Feofitina a
Lote:
Transcrio:
Data da Anlise:
N
N Data
Amostr O Colet
a
Verificao:
AA
DA
RESULTADOS
Mananci
Descri TUB
VO
66
75
66
75 Clorofil
Feofitin
al
L.
aa
aa
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NOME DA EMPRESA
Pg: 1/1
DEPARTAMENTO/SETOR
BOLETIM DE ANLISES
------------------N. XXXXX/2009
DADOS GERAIS
Amostra:
12222333
19
AAAAAA123
Local:
XXX
Coletor(es):
Jos
Hora da coleta:
Conforme
Data do ensaio
62,82 g/L
10/01/2009
Feofitina-a
7,66 g/L
10/01/2009
MTODO
Determinao pelo mtodo espectrofotomtrico conforme o procedimento XXX, baseado em:
(MTODO/NORMA BASE edio mais recente disponvel)
Profissional
responsvel..................
Registro no
Conselho .......................
Endereo da empresa, e-mail e telefone para contato, dados cadastrais,
Este Boletim de Anlise s pode ser reproduzido por inteiro e sem nenhuma
alterao. Os resultados desta anlise referem-se to somente amostra
encaminhada.
Fonte: Adaptado do Boletim da CETESB (2014).
Nota: Exemplo meramente ilustrativo, os formulrios internos esto sujeitos a alteraes.
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