UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE

GROHMANN
NUEVOS TIEMPOS, NUEVOS LDERES, NUEVAS
PERSPECTIVAS
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA ACADMICA PROFESIONAL DE FARMACIA Y
BIOQUMICA

PRCTICA DE LABORATORIO N
03
ESPECTROFOTOMETRA
PRESENTADO POR
Maryori Thania.

Gmez Mamani,

CDIGO

2014-125030.

CURSO

Bioqumica clnica I.

DOCENTE

Q.F. Nelson Arteaga.

AO

3er ao.

FECHA DE ENTREGA

Martes 24 de mayo.

GRUPO DE LABORATORIO :

A.

TACNA-PER
2016

PRCTICA DE LABORATORIO N 03
ESPECTROFOTOMETRA

I. OBJETIVOS:

Realizar el barrido espectral para el Azul de metileno.

Graficar la curva de calibracin para el Azul de metileno.
Realizar el barrido espectral para la Violeta de genciana.
Graficar la curva de calibracin para la Violeta de genciana.

II. MARCO TERICO:

2.1. Espectrofotometra:
La espectrofotometra es la medicin de la cantidad de energa
radiante que absorbe o transmite un sistema qumico en funcin de la
longitud de onda; es el mtodo de anlisis ptico ms usado en las
investigaciones qumicas y bioqumicas. El espectrofotmetro es un
instrumento que permite comparar la radiacin absorbida o
transmitida por una solucin que contiene una cantidad desconocida
de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma
sustancia.

En esta tcnica se mide la cantidad de luz absorbida como funcin de

la longitud de onda utilizada. La absorcin de las radiaciones
ultravioletas, visibles e infrarrojas depende de la estructura de las
molculas, y es caracterstica de cada sustancia qumica.

La espectrofotometra ultravioleta-visible utiliza haces de radiacin

del espectro electromagntico, en el rango UV de 180 a 380 nm, y en
el de la luz visible de 380 a 780 nm, por lo que es de gran utilidad
para caracterizar los materiales en la regin ultravioleta y visible del
espectro.

La espectrofotometra es el mtodo de anlisis ptico ms usado en

las investigaciones biolgicas. El espectrofotmetro es un
instrumento que permite comparar la radiacin absorbida o
transmitida por una solucin que contiene una cantidad desconocida
de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma
sustancia.

Todas las sustancias pueden absorber energa radiante, aun el vidrio

que parece ser completamente transparente absorbe longitud de
ondas que pertenecen al espectro visible; el agua absorbe
fuertemente en la regin del infrarrojo.

La absorcin de las radiaciones ultravioleta, visibles e infrarrojas

depende de la estructura de las molculas, y es caracterstica para
cada sustancia qumica.

Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la energa es

absorbida; la energa radiante no puede producir ningn efecto sin
ser absorbida.

El color de las sustancias se debe a que stas absorben ciertas

longitudes de onda de la luz blanca que incide sobre ellas y solo
dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda no
absorbida.
2.2. Mtodos fotomtricos de anlisis:

2.2.1. Naturaleza de la radiacin electromagntica:

La Radiacin Electromagntica es una forma de Energa

radiante que se propaga en forma de ondas. En este fenmeno
ondulatorio se define:

a) Longitud de onda (l): es la distancia entre dos mximos de

un ciclo completo del movimiento ondulatorio. Se expresa,
segn el S.I. en nanmetros (nm) y sus equivalencias son: 1nm
= 1mm =10 A0 = 10-9m.
b) Frecuencia (n): es el nmero de ciclos por segundo. Es
inversa a la longitud de onda. Su frmula es: n = c/l, y se mide
en ciclos por segundo o hertzios.
c) Fotones: la luz est formada por fotones, y estos son
paquetes discontinuos de E. La E de un fotn depende de la
frecuencia y de la longitud de onda, segn la siguiente
expresin: E = h x n = h x c/n (h = Cte. de Planck = 6,62.10 27
erg/seg.). La Energa Electromagntica se mide el Ergios. La
relacin entre la longitud de onda y la Energa es inversa, por lo
tanto a menor longitud de onda mayor Energa y viceversa.
d) Espectro Electromagntico: cubre un amplio intervalo de E
radiante, desde los rayos g de longitud de onda corta hasta las
ondas de radio, de longitud de onda larga. Se divide en varias
regiones, las ms interesantes para nosotros son:
Regin Ultravioleta: l = 10-380 nm
Regin Visible: l = 380-780 nm
Regin Infrarroja: l = 780-30.000 nm
En la Regin Visible, la luz se descompone en colores. La luz
blanca contiene todo el espectro de longitudes de onda. Si
interacciona con una molcula puede ser dispersada o
absorbida.
2.2.2. Fenmenos de interaccin entre luz y materia:

2.2.2.1. Fenmeno de absorcin:

Cuando una partcula que se encuentra en estado de
reposo o estado fundamental interacciona con un haz de
luz, absorbe E y se transforma en una partcula en estado
excitado. La molcula absorbe la E de la onda y aumenta
su energa, y ese aumento de energa es igual a la E de la
Radiacin Electromagntica absorbida (E = h.v). La
partcula en estado excitado tiende a volver de forma
espontnea a su estado de reposo desprendiendo la E
absorbida en forma de calor.
Espectro de Absorcin. Cada especie absorbente, que
recibe el nombre de cromgeno, tiene un determinado

espectro de absorcin. El espectro de absorcin es un

grfico donde se representa en ordenadas la Absorbancia
y en abscisas la longitud de onda. La medida de la
cantidad de luz absorbida por una solucin es el
fundamento de la espectrofotometra de absorcin.
Por eso es importante trabajar a la longitud de onda a la
que la sustancia estudiada absorbe la mayor cantidad de
luz (a mayor cantidad de luz, mayor cantidad de
sustancia).

2.2.2.2. Fenmeno de emisin:

Algunos compuestos, tras ser excitados por la luz,

vuelven al estado fundamental produciendo la emisin de
energa radiante. En este caso, lo que se mide es la
energa emitida y, en este fenmeno se basa la
fotometra de llama o la fluorescencia.

2.3. Transmitancia y Absorvancia:

A mayor concentracin, menos transmitancia, mayor

absorbancia.
2.4. Ventajas de la espectrofotometra:
Las principales ventajas de la espectrofotometra son:
Sensibilidad relativa elevada.
Facilidad para realizar mediciones rpidas.
Grado de especificidad relativamente elevado.

2.5. Ley de Beer:

La Ley de Beer afirma que la cantidad de luz absorbida por un
cuerpo depende de la concentracin en la solucin.

Por ejemplo, en un vaso de vidrio tenemos agua con azcar

disuelta y en otro vaso tenemos la misma cantidad de agua
pero con mayor cantidad de azcar en solucin. El detector es
una celda fotoelctrica, y lo que se mide es la concentracin de
la solucin de azcar.

Segn la ley de Beer, si hiciramos que un rayo de luz

atravesara el primer vaso, la cantidad de luz que saldra del
otro lado sera mayor que si repitiramos esto en el segundo,
ya que en este ltimo las ondas electromagnticas chocan
contra un mayor nmero de tomos o/y molculas y son
absorbidos por estos.
2.6. Ley de Lambert:
La Ley de Lambert dice que la cantidad de luz absorbida por un
objeto depende de la distancia recorrida por la luz.

Por ejemplo, retomando el ejemplo de los vasos, pensemos que

ambos tienen la misma cantidad de agua y la misma
concentracin de azcar; pero el segundo tiene un dimetro
mayor que el otro.

Segn la ley de Lambert, si hiciramos que un rayo de luz

atravesara el primer vaso, la cantidad de luz que saldra del
otro lado seria mayor que si repitiramos esto en el segundo,
ya que en este ltimo las ondas electromagnticas chocan
contra un mayor nmero de tomos o/y molculas y son
absorbidos por estos, tal como se explic en la ley de Beer.
2.7. Limitaciones a la Aplicabilidad de la Ley de Beer:

*Se llaman desviaciones o limitaciones aparentes porque

reflejan
dificultades
experimentales
ms
que
alguna
insuficiencia de la Ley de Beer por s misma.

Limitaciones reales de la ley de Beer:

La ley de Beer es solamente aplicable a disoluciones en las

cuales las interacciones, dependientes de la concentracin,
entre molculas o iones absorbentes sean mnimas. Estas
interacciones, que generalmente comienzan a aparecer a
concentraciones superiores a 001M, alteran las absortividades
molares, , y, por tanto, conducen a una relacin no lineal
entre A y c.

Tambin surgen desviaciones reales debido a que la de una

sustancia depende del ndice de refraccin de la disolucin, que
a su vez es dependiente de la concentracin de analito, cuando
las concentraciones son mayores de 001M.

Desviaciones qumicas:

Se producen desviaciones aparentes de la Ley de Beer cuando

las especies absorbentes experimentan disociacin, asociacin
o reaccin con el disolvente, originando productos con
caractersticas absorbentes distintas de las del analito. Estos
efectos que producen una alteracin del equilibrio qumico
pueden ser debidos al pH, presencia de complejantes,
reacciones laterales, etc.

Desviaciones instrumentales:

La ley de Beer es una ley lmite en el sentido de que una

linealidad verdadera entre absorbancia y concentracin
requiere la utilizacin de radiacin monocromtica (una sola ).

En la prctica, se producen desviaciones significativas cuando

se mide en una banda de absorcin que no se corresponde con
el mximo de absorbancia en el espectro (ver figura). En estas
circunstancias se originan grandes cambios de absorbancia en
funcin de y la deja de ser constante producindose una
curva en vez de una recta al representar A en funcin de c.
Tambin pueden darse desviaciones instrumentales debido a
los efectos de fatiga de los detectores, falta de linealidad de los
amplificadores de seal, inestabilidad de las fuentes de energa
radiante etc. Sin embargo, con los instrumentos modernos para
espectrofotometra estos problemas se han resuelto en gran
parte.

Advertencia: Por muy moderno que sea un espectrofotmetro

debemos de verificar el equipo instrumental antes de suponer
que se cumple la Ley de Beer para un sistema qumico
determinado.

2.8. Aplicaciones:
Las aplicaciones principales son:
Determinar la cantidad de concentracin en una solucin de
algn compuesto utilizando las frmulas ya mencionadas;
Ayudar en la determinacin de estructuras moleculares;
La identificacin de unidades estructurales especficas, ya que
estas tienen distintos tipos de absorbancia (grupos funcionales
o isomeras);
Determinar constantes de disociacin de indicadores cidobase.

2.9. Tipos de espectrofotometra:

Espectrofotometra
Espectrofotometra
Espectrofotometra
Espectrofotometra
Espectrofotometra
Espectrofotometra

de absorcin molecular VIS-UV. 13,

de absorcin molecular IR.15.
de absorcin y emisin atmica.
con atomizadores electrotrmicos.
de emisin con plasma.
de fluorescencia molecular.

2.10. Colores de la luz visible:

III. MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS:

3.1. Materiales:

Figura
01:
precipitado

Vaso

Figura 03: Matraz de 100

ml

Figura 05: Cubetas

Figura 02: Pipetas 10 ml

Figura
succin

04:

Pera

de

Figura
ensayo

06:

Tubos

de

Figura 07: Gradilla

Figura
09:
milimetrado

Figura 08: Rotulador

Papel

Figura 10: Guantes

Calculadora

Figura
Espectrofotmetro

3.2. Equipos:

Figura 11:
cientfica

12:

3.3. Reactivos:

Figura 13: Agua destilada

Figura
14:
metileno

Azul

de

Figura 15: Violeta de genciana

IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:

4.1. EXPERIMENTO 1: AZUL DE METILENO EN EL
ESPECTROFOTMETRO:
1. Prender el espectrofotmetro y dejar esperar por 15 minutos para
luego calibrar.
2. Realizar el barrido espectral para el azul de metileno (AM).
4.1.1. BARRIDO ESPECTRAL:
A continuacin la tabla para llenar:

BARRIDO ESPECTRAL
Colorante: Azul de metileno [ ] = 0,04 mg/ml
380 410 440 470 500 530 560 590 620 65
0

A
3. Completar la tabla de barrido espectral con la ayuda de un
espectrofotmetro.
4. Graficar con los datos obtenidos del barrido espectral.
4.1.2. CURVA DE CALIBRACIN:
5. Realizar una curva de calibracin a partir del barrido espectral.
6. Con los datos obtenidos en el espectrofotmetro, hallar las
diferentes concentraciones de los 5 tubos.
7. Completar la tabla para la curva de calibracin:
Tubos
[ ] mg/ml
A

8. Graficar la curva de calibracin.

4.2. EXPERIMENTO 2: VIOLETA DE GENCIANA EN EL
ESPECTROFOTMETRO:
1. Prender el espectrofotmetro y dejar esperar por 15 minutos para
luego calibrar.
2. Preparar una disolucin de Violeta de Genciana (VG) a partir del
Reactivo Violeta de Genciana 1% (1g/100ml=10mg/ml) del
laboratorio Alkofarma.
3. Realizar el barrido espectral para VG de la disolucin A [ ]=0,005
mg/ml.

4.2.1. BARRIDO ESPECTRAL:

A continuacin la tabla para llenar:

BARRIDO ESPECTRAL
Colorante: Violeta de Genciana [ ] = 0,00002 g/ml
350
400 450
500 550 600
650

70
0

4. Completar la tabla de barrido espectral con la ayuda de un

espectrofotmetro.
5. Graficar con los datos obtenidos del barrido espectral.

4.2.2. CURVA DE CALIBRACIN:

6. Realizar una curva de calibracin a partir del barrido espectral.
7. Con los datos obtenidos en el espectrofotmetro, hallar las
diferentes concentraciones de los 5 tubos.
8. Completar la tabla para la curva de calibracin:
Tubos
[ ] mg/ml
A

9. Graficar la curva de calibracin.

RECORDAR:
[ ] = gr soluto/ L disolucin = gr/L = mg /ml
No se debe trabajar en g/L ni gr/ml.

V. PRESENTACIN DE RESULTADOS:

5.1. EXPERIMENTO 1: AZUL DE METILENO EN EL

ESPECTROFOTMETRO:
1. Se prendi el espectrofotmetro y se dej esperar por 15 minutos para
luego calibrar.

2. Se hizo el barrido espectral para el azul de metileno (AM).

5.1.1. BARRIDO ESPECTRAL:

A continuacin la tabla para llenar:

BARRIDO ESPECTRAL
Colorante: Azul de metileno [ ] = 0,04 mg/ml
380 410 440 470 500 530 560 590 620 650

3. Se llen la tabla de barrido espectral con la ayuda de un

espectrofotmetro.

Se us:

Azul de metileno [ ] = 0,004

mg/ml

Espectrofotmetro

Se calibr primero con agua destilada en una cubeta que se puso

luego en el espectrofotmetro, luego se la retir. Ya calibrado el
espectrofotmetro; en otra cubeta se agreg el AM [ ] = 0,04
mg/ml y se empez a poner las longitudes de onda. Las longitudes
de onda estaban en un rango de 30, desde 380 nm hasta 650 nm.

Datos obtenidos con el espectrofotmetro:

Colorante:
410
440

380

0,007
1

0,07
1

0,09
2

BARRIDO ESPECTRAL
Azul de metileno [ ] = 0,04 mg/ml
470
500
530
560
590
620
0,14
0

0,21
1

0,35
1

0,65
2

0,95
3

0,92
3

650
0,77
6

4. Se grafic con los datos obtenidos del barrido espectral.

Con estos datos ya obtenidos, se hizo una grfica 01 de Barrido
espectral. (Ver anexo en el final)
De estos datos se consider como longitud de onda del azul de
metileno a 590 nm, por ser el punto ms alto de la grfica.

5.1.2. CURVA DE CALIBRACIN:

5. Se hizo una curva de calibracin a partir del barrido espectral.

Tubo
1

Tubo
2

Tubo
3

Tubo
4

Tubo
5

Procedimiento
Se disolvi las disoluciones
siempre
de
menor
concentracin
a
mayor
concentracin.
Respecto
al
barrido
espectral, se obtuvo como
longitud de onda del Azul de
Metileno a 590 nm, y a esta
longitud de onda se midi
los 5 diferentes tubos para
hallar su absorbancia, todo
esto en diferentes cubetas
para el espectrofotmetro.

1ml
3ml
5ml
7ml
9ml
de
de
de
de
de
AM
AM
AM
AM
AM
Las soluciones se completaron
hasta 10 ml con agua destilada.
Luego estas disoluciones se fueron
agregando a 5 diferentes cubetas

para luego hallar sus diferentes

absorbancias
en
el
espectrofotmetro.
Resultados:
Tubos
[ ] mg/ml
A

0,038

0,449

0,594

0,843

1,050

6. Con los datos obtenidos en el espectrofotmetro, se hall las diferentes

concentraciones de los 5 tubos.
Tubos
Datos

Soluci
ones:
Hallar
C2
para
cada
tubo.

Tubo 1
V1=1 ml
V2=10 ml
C1=0,04
mg/ml
C2= ?
V1.C1=V2.C
2

C2=(V1.C1)/
V2
C2=(1ml.0,
04mg/ml)/1
0ml
C2=0,004
mg/ml

Tubo 2
V1=3 ml
V2=10 ml
C1=0,04
mg/ml
C2= ?
V1.C1=V2.
C2
C2=(V1.C1)/
V2
C2=(3ml.0,
04mg/ml)/
10ml
C2=0,012
mg/ml

Tubo 3
V1=5 ml
V2=10 ml
C1=0,04
mg/ml
C2= ?
V1.C1=V2.
C2
C2=(V1.C1)/
V2
C2=(5ml.0,
04mg/ml)/
10ml
C2=0,020
mg/ml

Tubo 4
V1=7 ml
V2=10 ml
C1=0,04
mg/ml
C2= ?
V1.C1=V2.
C2
C2=(V1.C1)/
V2
C2=(7ml.0,
04mg/ml)/
10ml
C2=0,028
mg/ml

Tubo 5
V1=9 ml
V2=10 ml
C1=0,04
mg/ml
C2= ?
V1.C1=V2.C
2

C2=(V1.C1)/
V2
C2=(9ml.0,
04mg/ml)/
10ml
C2=0,036
mg/ml

7. Se llen la tabla para la curva de calibracin:

Tubos
[ ] mg/ml
A

1
0,004
0,038

2
0,012
0,449

3
0,020
0,594

4
0,028
0,843

5
0,036
1,050

8. Se grafic la curva de calibracin.

Con estos datos ya obtenidos, se hizo una grfica 02 de para hallar la
curva de calibracin del azul de metileno. (Ver anexo en el final)

5.2. EXPERIMENTO 2: VIOLETA DE GENCIANA EN EL

ESPECTROFOTMETRO:
1. Se prendi el espectrofotmetro y se dej esperar por 15 minutos para
luego calibrar.
2. Se prepar una disolucin de Violeta de Genciana (VG) a partir del
Reactivo Violeta de Genciana 1% del laboratorio Alkofarma.
Se ech una gota de este Reactivo de Violeta de Genciana 1% hasta
100 ml con agua destilada en un matraz de 100 ml.

Si el Reactivo de Violeta de Genciana 1% del laboratorio Alkofarma

tiene 1% de concentracin, entonces:
[ ]Reactivo=1%= (1g/100ml)x(1000mg/1g)=10mg/ml.
Con este dato, se hall la concentracin de la disolucin en el matraz
de 100ml.
Si 20 gotas -----1ml
1 gota ------------X ml
X = 0,05 ml se us para la disolucin de VG en el matraz de
100 ml
Por lo tanto, la concentracin de la disolucin de matraz es:
C1.V1=C2.V2
[10 mg/ml].[0,05 ml]=C2.[100 ml]

C2=0,005 mg/ml
Entonces 0,005 mg/ml sera la concentracin de la disolucin del
matraz de 100 ml, la cual llamaremos Disolucin A.
Para hallar el barrido espectral; se tom 1,5 ml de la Disolucin A en
tubo de ensayo.

3. Se hizo el barrido espectral para VG de la disolucin A [ ]=0,005 mg/ml.

5.2.1. BARRIDO ESPECTRAL:
A continuacin la tabla para llenar:

BARRIDO ESPECTRAL
Colorante: Violeta de Genciana [ ] = 0,005 mg/ml
350
400 450
500 550 600
650

4. Se llen la tabla
espectrofotmetro.

de

barrido

espectral

con

la

ayuda

700

de

un

Se us:
Violeta de Genciana [ ] = 0,005
mg/ml

Espectrofotmetro

Se calibr primero con agua destilada en una cubeta que se puso

luego en el espectrofotmetro, luego se la retir. Ya calibrado el
espectrofotmetro; en otra cubeta se agreg la disolucin A de
Violeta de Genciana [ ] 0,00002 g/ml y se empez a poner las
longitudes de onda. Las longitudes de onda estaban en un rango
de 50, desde 350 nm hasta 700 nm.
Datos obtenidos con el espectrofotmetro:

BARRIDO ESPECTRAL
Colorante: Violeta de Genciana [ ] = 0,005 mg/ml
350
400
450
500
550
600
650
0,028 0,03 0,055 0,13 0,22 0,204 0,040
5
1
4

700
0,015

5.Se grafic con los datos obtenidos del barrido espectral.

Con estos datos ya obtenidos, se hizo una grfica 03 de Barrido
espectral. (Ver anexo)
De estos datos se consider como longitud de onda de VG a 570 nm,
por ser el punto ms alto de la grfica.

5.2.2. CURVA DE CALIBRACIN:

6. Se hizo una curva de calibracin a partir del barrido espectral.

Tubo
1

Tubo
2

Tubo
3

Tubo
4

Tubo
5

Procedimiento
Se disolvi las disoluciones
siempre
de
menor
concentracin
a
mayor
concentracin.
Respecto
al
barrido
espectral, se obtuvo como
longitud de onda de la VG a
570 nm, y a esta longitud de
onda
se
midi
los
5
diferentes tubos para hallar
su absorbancia, todo esto
en diferentes cubetas para
el espectrofotmetro.

1ml
3ml
5ml
7ml
9ml
de
de
de
de
de
AM
AM
AM
AM
AM
Las soluciones se completaron
hasta 10 ml con agua destilada.
Luego estas disoluciones se fueron
agregando a 5 diferentes cubetas
para luego hallar sus diferentes

absorbancias
espectrofotmetro.

en

el

Resultados:
Tubos
[ ] mg/ml
A

0,053

0,0,72

0,099

0,130

0,154

7. Con los datos obtenidos en el espectrofotmetro, se hall las diferentes

concentraciones de los 5 tubos.
Tubos
Datos

Soluc
iones

Tubo 1
V1=1 ml
V2=10 ml
C1=0,005
mg/ml
C2= ?
V1.C1=V2.
C2
C2=(V1.C1)/
V2
C2=(1ml.0,
005mg/ml)
/10 ml
C2=0,0005
mg/ml

Tubo 2
V1=3 ml
V2=10 ml
C1=0,005
mg/ml
C2= ?
V1.C1=V2.C2
C2=(V1.C1)/V
2

C2=(3ml.0,0
05mg/ml)/1
0 ml
C2=0,0015
mg/ml

Tubo 3
V1=5 ml
V2=10 ml
C1=0,005
mg/ml
C2= ?
V1.C1=V2.
C2
C2=(V1.C1)/
V2
C2=(5ml.0,
005mg/ml)
/10 ml
C2=0,0025
mg/ml

Tubo 4
V1=7 ml
V2=10 ml
C1=0,005
mg/ml
C2= ?
V1.C1=V2.
C2
C2=(V1.C1)/
V2
C2=(7ml.0,
005
mg/ml)/10
ml
C2=0,0035
mg/ml

Tubo 5
V1=9 ml
V2=10 ml
C1=0,005
mg/ml
C2= ?
V1.C1=V2.C

4
0,0035
0,130

5
0,0045
0,154

C2=(V1.C1)/
V2
C2=(9ml.0,
005
mg/ml)/10
ml
C2=0,0045
mg/ml

8. Se llen la tabla para la curva de calibracin:

Tubos
[ ] mg/ml
A

1
0,0005
0,053

2
0,0015
0,0,72

3
0,0025
0,099

9. Se grafic la curva de calibracin.

Con estos datos ya obtenidos, se hizo una grfica 04 de para hallar la
curva de calibracin de la Violeta de Genciana. (Ver anexo)
VI. COMENTARIOS:
Esta prctica de laboratorio tuvo como finalidad hallar la curva de
calibracin de dos reactivos con la ayuda de un espectrofotmetro.
Para hallar la curva de calibracin del Azul de metileno, se complet
una tabla, al momento de graficar la curva de calibracin de azul de
metileno con estos resultados de la tabla, se vio que no se obtuvo
una lnea recta, por lo que debemos este error al momento de
pipetear o diluir las diferentes concentraciones. Por otro lado para
hallar la curva de calibracin de la Violeta de genciana, se tuvo ms
cuidado al momento de pipetear y tambin al momento de diluirlas
(siempre de menor concentracin a mayor concentracin), es as que
los resultados se vieron en la grfica de la curva de calibracin de la
Violeta de genciana, donde se mostr una ligera lnea recta.

VII. CONCLUSIONES:

Se
Se
Se
Se

realiz el barrido espectral para el Azul de metileno.

grafic la curva de calibracin para el Azul de metileno.
realiz el barrido espectral para la Violeta de genciana.
grafic la curva de calibracin para la Violeta de genciana.

VIII. BIBLIOGRAFA:
https://es.wikipedia.org/wiki/Espectrofotometra
http://perso.wanadoo.es/sergioram1/espectrofotometria.htm
http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/quimicabiologica1/wpcontent/uploads/2010/08/TP-ESPECTROFOTOMETRIA.pdf
http://copro.com.ar/Azul_de_metileno.html
http://www.feriadelasciencias.unam.mx/anteriores/feria22/feria316_0
1_degradacion_de_colorantes_azul_de_metileno_por_rea.pdf

IX. CUESTIONARIO:
7.1. Para qu sirve la curva de calibracin?
Se basa en la existencia de una relacin en principio lineal entre un
carcter medible (por ejemplo la absorbancia en los enfoques de
espectrofotometra) y la variable a determinar (concentracin). Para

ello, se efectan diluciones de unas muestras de contenido conocido

y se produce su lectura y el consiguiente establecimiento de una
funcin matemtica que relacione ambas; despus, se lee el mismo
carcter en la muestra problema y, mediante la sustitucin de la
variable independiente de esa funcin, se obtiene la concentracin de
esta. Se dice pues que la respuesta de la muestra puede cuantificarse
y, empleando la curva de calibracin, se puede interpolar el dato de
la muestra problema hasta encontrar la concentracin del analito. Las
curvas de calibracin suelen poseer al menos una fase de respuesta
lineal sobre la que se realiza un test estadstico de regresin para
evaluar su fiabilidad.
7.2. Cul sera la concentracin de la solucin X de azul de
metileno si el mismo tiene una absorbancia de 0,420?
Referencia del tubo 4 grfica 2
Datos
Solucin
A= 0,843
A=e.l.c
[]= 0,028 mg/ml
E= (A) / l.c
L= 1cm
E= (0,843) / (1cm x 0,028 mg/ml)
E= ? Coeficiente constante
E= 30,10 cm-1 x ml/mg
para el Azul de metileno en
Ya tenemos el coeficiente de
este informe.
absortividad molar.
Problema a resolver
Solucin

Datos
A= 0,420
[]= ?
L= 1cm
E= 30,10 cm-1 x ml/mg

A=e.l.c
C= (A)/(e.l)
C= (0,420) / (30,10 cm-1 x ml/mg x 1
cm)
C= 0,014 mg/ml
Problema a parte
Datos
Solucin
A= 0,449
A=e.l.c
[]= ? Por datos
C= (A)/(e.l)
experimentales es 0,012
C= (0,449) / (30,10 cm-1 x ml/mg x 1
L= 1cm
cm)
-1
E= 30,10 cm x ml/mg
C= 0,015 mg/ml
Matemticamente se observa cmo
debi ser.
Con el dato experimental se hubiese
encontrado un mal coeficiente de
absortividad molar:
E= (0,449) / (1cm x 0,012 mg/ml)
E= 37,40

X. ANEXO:
GRFICA 01: BARRIDO ESPECTRAL DEL AZUL DE METILENO [ ] =
0,04 mg/ml

GRFICA 02: CURVA DE CALIBRACIN PARA EL AZUL DE METILENO

EN BASE DE 590nm

GRFICA 03: BARRIDO ESPECTRAL DE VIOLETA DE GENCIANA [ ] =

0,005 mg/ml

GRFICA 04: CURVA DE CALIBRACIN PARA LA VIOLETA DE

GENCIANA EN BASE DE 570 nm