UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

ESCUELA
PROFESIONAL DE METALURGICA

QUIMICA ORGANICA Y POLIMEROS

SOLUCIONARIO DEL CUESTIONARIO DE
CONOCIMIENTOS SOBRE MICROSCOPIA
ELECTRONICA
Alumno: Morales Bravo Diomedes Ral
Cdigo: 19850732k

Fecha de entrega: 16/05/2016

SOLUCIONARIO
DEL
CUESTIONARIO SOBRE MICROSCOPIA
ELECTRONICA
(I)

TEMATICO

1)

(2 Pts.) Qu entiende por Microscopia de Electrnica de Barrido?

SOLUCION:
Entiendo que haciendo uso del microscopio electrnico de barrido, un campo
magntico permite enfocar los rayos catdicos (electrones) y obtener una imagen
tridimensional, por el examen de la superficie de las estructuras, permitiendo la
observacin y la caracterizacin de materiales orgnicos e inorgnicos.

Microscopio electrnico de barrido

2)
(2 Pts.) Qu tipo y tamao de morfologas pueden observarse en un
Microscopio Electrnico de Barrido?
SOLUCION:

Los tipos de morfologas que pueden observarse son materiales solidos de

todo tipo como: metales, cermicos, polmeros, biolgicos, etc. Con
excepcin de muestreas lquidas.
El tamao de las morfologas que pueden observarse son de 3 nm
(nanmetros). lo cual indica que el microscopio electrnico de barrido (MEB)
puede estudiar caractersticas de los materiales a una escala muy pequea.
http://www.cciqs.uaemex.mx/index.php?
option=com_content&view=article&id=81&Itemid=83


Imgenes obtenidas con un microscopio electrnico de barrido. Muestran el interior
del canal central de una mdula espinal de lamprea. Se pueden observar
numerosos cilios (con ms detalle en B) y pequeas micro vellosidades en los
dominios

apicales de las clulas que forman las paredes de dicho canal.

(Ver imagen de barrido de estomas de una hoja).

3)

(2 Pts.) Qu entiende por Microscopia de Electrnica de Trasmisin?

SOLUCION:
Entiendo que haciendo uso de un microscopio de electrnica de transmisin se puede

que se producen cuando un haz de

electrones suficientemente acelerado colisiona con una muestra delgada
convenientemente preparada. Cuando los electrones colisionan con la muestra, en
funcin de su grosor y del tipo de tomos que la forman, parte de ellos son dispersados
selectivamente, es decir, hay una gradacin entre los electrones que la atraviesan
directamente y los que son totalmente desviados. Todos ellos son conducidos y
modulados por unas lentes para formar una imagen final sobre una CCD que puede
tener miles de aumentos con una definicin inalcanzable para cualquier otro
instrumento. La informacin que se obtiene es una imagen con distintas intensidades
de gris que se corresponden al grado de dispersin de los electrones incididos.
aprovechar los fenmenos fsicos-atmicos

Microscopio electrnico de transmisin (TEM2)

http://www.upv.es/entidades/SME/info/indexnormalc.html

4)
(2 Pts.) Qu tipo y tamao de morfologas pueden observarse en un
Microscopio Electrnico de Transmisin?
SOLUCION:

Los tipos de morfologas que pueden observarse son clulas, bacterias,

virus, tejidos de animales y vegetales.
El tamao de las morfologas pueden observarse desde 0.3 nm (nanmetros).

https://sumsaiumu.wordpress.com/trabajo/tecnicas-2/

(II)

CONTROL DE LECTURA

(a)

NIVEL LITERAL

5)
(2 Pts.) Qu otros tipos de equipos de microscopia electrnica son
ampliamente conocidos?
SOLUCION:
* Microscopia Con focal y de fluorescencia: propia para la observacin de imgenes
topogrficas con carcter tridimensional de sus estructuras en diferentes tipos de
muestras.
* Microscopia electrnica de Barrido y micro anlisis de rayos X: Explora las
superficies de las muestras realizando un paneo sobre la misma y capturando la
radiacin reflejada la cual se codifica en datos computacionales con la idea de
reconstruir

la

imagen

del

espcimen.

* Microscopia electrnica de Fuerza Atmica: Una aguja de punta muy fina casi a

nivel atmico explora la superficie de la muestra generando entre ambas un campo

electro-magntico. El campo sufre variaciones correspondientes a las variaciones de
rugosidad de la superficie muestreada. Las variaciones electromagnticas
ocasionadas generan una informacin de corriente elctrica que debidamente
tratada

reconstruye

la

imagen

de

la

superficie

observada.

* Microscopia electrnica de Efecto Tnel: Conserva el mismo principio que el

microscopio de fuerza atmica salvo que la intensidad del campo es mayor y realiza
exploraciones

bajo

la

superficie.

* Microscopia electrnica de transmisin: A diferencia de los anteriores

microscopios, este no explora superficies , por el contrario el haz de electrones
incidente atraviesa la muestra o espcimen observado y la sombra de detalles finos
o ultra-estructura es capturada en una pantalla fosforescente con propiedades de
emisin de luz, ubicada en la parte inferior de la columna. El tener una adecuada
preparacin de la muestra da lugar a una excelente definicin de imagen. Son
mltiples las facetas en las que interviene este tipo de microscopio. As, en control
de calidad sealamientos morfolgicos, conformacin de agregados, tcnicas
forenses, determinacin de estratos en restauracin y diferenciacin histolgica
entre otros.

(b)

NIVEL INFERENCIAL

6)
(2 Pts.) Cmo son preparadas las muestras a ensayar para el Microscopio
Electrnico de Transmisin?
SOLUCION:
PREPARACION:
El proceso comienza con el tejido altamente hidratado y termina con el tejido
virtualmente

libre

de

agua

preservado

en

una

matriz

de

resina.

Existen muchos caminos para la preparacin de tejidos para Microcopia electrnica

de transmisin, pero los mtodos siguen bsicamente ocho pasos:
1. Fijacin primaria: Busca preservar la estructura del tejido vivo, evitando los
procesos autoliticos. Se realiza con glutaraldehido CHO- CH 2-CH2-CH2-CHO. Su
accin se centra en las protenas as: (COOH-protena-NH2)2 + CHO- CH2-CH2-CH2-CHO
Entonces: COOH-protena-NH=CH-CH2-CH2-CH2-CH=N-proteina-COOH +H2O
La penetracin del glutaraldehido es lenta, esto quiere decir que 1 mm de tejido es
atravesado en una hora por el glutaraldehido.
2.-Lavado:-Normalmente-se-hace-con-un-buffer.
Buffer: es necesario su uso debido a que el pH de los tejidos se baja drsticamente
durante el proceso de fijacin. El uso de buffer mantiene el pH fisiolgico (7,2 a 7,4)

los sistemas de buffer ms comunes son: fosfato, s-collidine, tris-maleato y

cacodylate.
3. Fijacin secundaria: es llevada a cabo por la accin del tetrxido de osmio, el cual
reacciona principalmente con los lpidos. El tetrxido de osmio generalmente no
penetra ms de 0,5 mm en una hora.
4. Deshidratacin: La filosofa de la deshidratacin es el reemplazo del agua usando
etanol en series 70% 85% 95% y etanol absoluto.
5. Infiltracin con solventes transicionales: procedimiento por el cual hay
transmisin de fluidos gradualmente reemplazado por soluciones intermediarias
altamente miscibles con los agentes deshidratantes, la mayora de los protocolos
emplean un solvente transicional entre el deshidratante y la resina.
6. Infiltracin con resina: mezclas de propilen oxidado con Epoxy son introducidas
reemplazando dentro de los tejidos despus de la deshidratacin. La concentracin
del solvente es minimizada gradualmente incrementando las concentraciones de
resina hasta llegar a la resina pura.
7. Inclusin: sumergir el tejido en la resina pura.
8. Polimerizacin de la resina: se logra acelerar el proceso de polimerizacin
aumentando la temperatura.

7)
(2 Pts.) Cmo son preparadas las muestras a ensayar para el Microscopio
Electrnico de Barrido?

SOLUCION:
PREPARACION:
Se debe tener en cuenta el material a observar y guiarse por parmetros especficos
para cada muestra. Los siguientes pasos son utilizados en general y guan acerca de
lo necesario en cada uno.

Limpieza:
Reactivo:-solucin-salina
Objetivo:-Remocin-de-contaminantes-de-la-muestra
Comentarios: En muestras como dientes y huesos es necesario limpiar la muestra
con una bomba de aire. Para epitelio intestinal se utilizan enzimas (quimio tripsina)
que degradan el moco intestinal. En esperma de mamferos es necesario lavar con
solucin salina y posteriormente centrifugar suavemente.

Relajacin:
Reactivo: Cloruro de magnesio, cloretano, hidrato de cloral y anestsicos locales
como-lidocana.
Objetivo: Permitir que organismos marinos o de agua fresca, que utilizan el
encogimiento y extensin para movilizarse, no se contraigan y pueda observarse

toda-la-superficie-de-ste.
Comentarios: Se aplica gradualmente hasta que cese el movimiento del organismo.
Fijacin
Reactivo:

Glutaraldehido,

formaldehdo,

permanganato

acrolena.

Objetivos: Permitir que cese la actividad biolgica de la clula y preservar la

estructura celular. Mantener la integridad de la superficie. Evitar cambios
autoliticos, debido a que al haber remocin del organismo se presenta cambios en
temperatura,-PH-y-concentracin-de-oxgeno-y-nutrientes.
Comentarios: Se puede utilizar vapor de osmio, especficamente cuando se observan
esporas de hongos. Es importante tener en cuenta la concentracin del fijador y de
la muestra, debido a que diversos estudios muestran que a una mayor concentracin
de ste, se dificulta la observacin de la muestra.
Deshidratacin
Reactivo:-Etanol-o-acetona.
Objetivo:-Remover-agua-de-los-tejidos
Comentarios: Se utiliza ms comnmente etanol, debido a que la acetona, puede
daar el secador en el SPC.
Secado-de-punto-crtico
Reactivo:-CO2 lquido-y-gaseoso.
Objetivo: Remocin-total-del-agua-de-la-muestra
Comentarios: Este paso se basa en lo siguiente: el CO 2 a temperatura baja es lquido
y a temperatura alta es gaseoso. Cuando la muestra sale deshidratada por el etanol,
se coloca en el secador de punto crtico (SPC), all, la muestra se purga con
CO2 lquido hasta que el etanol haya sido reemplazado, posteriormente se sella la
cmara y se calienta hasta que la temperatura llegue a 31C, de esta forma el
CO2 lquido se evapora y la muestra queda totalmente seca. Este procedimiento
reduce de tamao la muestra.
Montaje-de-la-muestra
Objetivo-Utilizado:-Porta-muestra-o-stub
Objetivo: Colocar la muestra asegurada para permitir la colocacin en el rociador de
oro.
Comentarios: Para asegurar la muestra en el stub, se utiliza una cinta doble faz
(tejidos) o carbono cemento conductivo CCC (dientes).

Recubrimiento-con-oro-(sputter)
Elementos: Oro,-paladio-o-carbono
Objetivo: Permitir que el haz de electrones primarios choquen contra la muestra
recubierta con un material conductor para que estas sean elctricamente
conductivas.
Comentarios: Este procedimiento se realiza con un rociador o Sputter coater. Se
coloca la muestra en la cmara, se sella y se programa el tiempo de recubrimiento
en el cual el oro cae uniformemente, se hace vaco y automticamente el timer se
enciende y la muestra se recubre totalmente segn el tiempo programado,
aproximadamente son 2 minutos. Cuando el tiempo ha finalizado, lentamente
empieza a ingresar aire

a la cmara y de esta

forma, la muestra est

lista para colocarla en el

MEB.

El

muestra recubierta no se

debe

tocar

stub

con

la

necesario

utilizar pinzas.

Almacenamiento
Objeto-utilizado:-Cmara-Libre-de-humedad
Objetivo: Mantener la muestra totalmente seca para posterior observacin.

8)

(2 Pts.) Cul es la diferencia sustancial entre estos dos tipos de muestras?

SOLUCION:
comienza con el
tejido altamente hidratado y termina con el tejido virtualmente libre de agua y
La diferencia sustancial entre las dos muestras es que en el MET la muestra

preservado en una matriz de resina. Mientras que en el MEB las muestras

son observadas y guiado por parmetros especficos como secado de

punto crtico o remocin total del agua y el recubrimiento con oro para
que el haz de electrones primarios choquen contra la muestra
recubierta.

INVESTIGACION-ADICIONAL:
Comparacin entre microscopia electrnica de transmisin (MET) y microscopia
electrnica de barrido (MEB).

http://www.javeriana.edu.co/Facultades/Ciencias/neurobioquimica/libros/celular/mic
roelectrans.htm

(c)

NIVEL CRTICO

9)
(2 Pts.) En qu tipos de actividades es importante la caracterizacin
microscpica?

SOLUCION:
En la medicina (clulas, protenas, virus).
En la electrnica (semiconductores, circuitos integrados).

En la minera (minerales cristalizados).

En la bioqumica (nano partculas).
10) (2 Pts.) Cul es la importancia de la caracterizacin o determinacin de
caractersticas fundamentales de los materiales usando tecnologa de punta?
SOLUCION:
La importancia de la caracterizacin fundamental de los materiales usando tecnologas de
punta como son los microscopios electrnicos ya sea de transmisin, barrido, otros. Es
que podemos llegar a conocer con precisin las caractersticas y propiedades de las
materias y materiales que nos rodean para el uso apropiado y beneficio de los seres
vivos.
Por ejemplo: actualmente la industria bioqumica ha logrado fabricar productos
nutricionales o alimentos ms pequeos que las clulas (la Micelizacin). Lo cual es muy
eficaz y beneficioso para la salud de los seres humanos.
http://www.saludarnos.com/micelizacion/
DRMB.