706548

Universidade Federal do Rio de Janeiro
Faculdade de Farmcia
Programa de Ps Graduao em Cincias Farmacuticas
Filtros Solares em Nanocosmticos:

Desenvolvimento e Avaliao da
Segurana e Eficcia
Mariana Sato de S de B Monteiro
Rio de Janeiro
2008
Filtros Solares em Nanocosmticos: Desenvolvimento

e Avaliao da Segurana e Eficcia
Mariana Sato de S B Monteiro
Dissertao de Mestrado apresentada ao Programa de PsGraduao em Cincias Farmacuticas da Faculdade de

Farmcia da Universidade Federal do Rio de Janeiro, como
parte dos requisitos necessrios obteno do ttulo de
Mestre em Cincias Farmacuticas.
Orientadora: Profa. Dra. Elisabete Pereira dos Santos

Co-Orientadora: Dra. Zaida Maria Faria de Freitas
Rio de Janeiro
2008
Filtros Solares em Nanocosmticos: Desenvolvimento

e Avaliao da Segurana e Eficcia
Orientadora
Profa Dra Elisabete Pereira dos Santos
Faculdade de Farmcia - UFRJ
Co-Orientadora
Dra. Zaida Maria Faria de Freitas
Banca Examinadora
Prof Dr. Lucas Antnio Miranda Ferreira

Faculdade de Farmcia - UFMG
Profa Dra. Carla Holandino Quaresma

Prof Dr. Eduardo Ricci Junior

Agradecimentos
Antes de tudo quero agradecer a Deus pela determinao e perseverana que me
permitiram concluir este trabalho.
Aos meus pais, Claudia e Luis, e ao Joo, por todo carinho, suporte e incentivo para que
eu pudesse concluir mais esta etapa.
Aos meus avs Geraldo, Marly e Maria Helena, as minhas tias Ktia e Cristiane, as
minhas primas, Cristine e Caroline, e a toda a minha famlia pelo apoio e incentivo.
A minha orientadora Elisabete Pereira dos Santos que me proporcionou a oportunidade
de realizar este trabalho, e contribuiu de forma direta para o meu crescimento
profissional e pelos ensinamentos transmitidos.
A minha co-orientadora Zaida Maria Faria de Freitas, pelo empenho, carinho e
orientao durante a realizao deste projeto.
A minha banca de acompanhamento, professores Eduardo Ricci e Nancy Barbi, pelo
incentivo, sugestes e por auxiliarem na concluso deste trabalho.
Ao Dr Andr Vergnanini e toda a sua equipe da ALLERGISA, pela parceria e pela
realizao dos testes in vivo das amostras, contribuindo para o sucesso do trabalho.
Ao Venicio Fo da Veiga do Instituto de Microbiologia Paulo Ges da UFRJ pela ajuda
na microscopia ptica.
Ao Prof Marcos Kneip Fleury pela colaborao nos ensaios de microscopia ptica.
A Profa Nadia Maria Volpato pela colaborao nos tratamentos estatsticos realizados
neste trabalho.
Ao LASSBIO pela colaborao nas anlises do Infravermelho.
Aos professores Lucio Mendes Cabral e Camila Dornelas pela colaborao nas anlises
de difrao de raio X.
Ao NPPN pela colaborao nas anlises de RMN 1H.
4
Ao Centro Brasileiro de Pesquisas Fsicas pela colaborao nas anlises para

determinao do tamanho dos lipossomas, por espalhamento dinmico da luz.
A todos da Farmcia Universitria da UFRJ: Maria Amlia, Profa Naira, Profa Rita,
Clo, Carlinhos, Paulo, Ricardo e toda a sua equipe por participarem destes ltimos 5
anos da minha vida, pelo carinho e apoio fsico e estrutural, pelo ambiente agradvel e
acolhedor que vocs proporcionaram.
Ao LABCQ pela colaborao nas anlises de Cromatografia Lquida de Alta Eficincia,
e toda sua equipe: Eliane, Maria, Monique, Tailane, Yara, Lus Francisco, Daniela e
Bianca pela ajuda e troca de idias durante o trabalho e tambm pelos momentos de
descontrao e os cafs.
A todas as amigas do LADEG: Mariana da Volta, Ana Karla, Glucia e Brbara por
compartilharem de perto todos os momentos destes ltimos 2 anos, e pelas palavras de
incentivo.
Aos professores da ps-graduao pelos grandes ensinamentos e contribuio na minha
formao.
A Profa Dra Gisella Ortiz, pelo apoio no excerccio do papel de coordenadora do
Programa de Ps Graduao em Cincias Farmacuticas.
As minhas amigas, em especial: Nandol, Fernanda, Flavinha, Flvia, Dbora, Camila
que tornaram esses anos estressantes muito mais divertidos. Especialmente Flavinha e
Fernanda que ajudaram na limpeza das orelhas. E a todos os meus amigos de faculdade
pelos momentos compartilhados.
CAPES, rgo que financiou a bolsa de estudo para a realizao deste trabalho.
A todos que contriburam direta ou indiretamente para a conluso deste trabalho.
RESUMO
MONTEIRO, MARIANA S. S. B. Filtros Solares em Nanocosmticos: Desenvolvimento e
Avaliao da Segurana e Eficcia. Rio de Janeiro. 2008. Dissertao (Mestrado em Cincias
Farmacuticas)-Faculdade de Farmcia, Universidade Federal do Rio de Janeiro, 20008.
A exposio excessiva luz solar pode causar diversos efeitos indesejveis,
como queimaduras e cncer de pele. Os filtros solares so recomendados como uma
medida preventiva aos efeitos nocivos da luz solar. Diversos estudos in vitro e in vivo
mostram que alguns filtros solares possuem atividade estrognica, evidenciando que
pode ocorrer a absoro sistmica destes ativos. Portanto, torna-se necessrio o
desenvolvimento de preparaes anti-solares seguras e eficazes. O objetivo deste
trabalho consistiu em avaliar a eficcia e a segurana de quatro nanocosmticos
desenvolvidos, na forma de gel creme, contendo o filtro solar p-metoxicinamato de
octila (MCO) a 8% livre e incluso nos sistemas nanoestruturados: -ciclodetrina e
lipossoma. Foram desenvolvidas quatro formulaes: gel creme contendo MCO livre; ciclodextrina/MCO; lipossoma/MCO e -ciclodextrina/MCO + lipossoma/MCO. A
eficcia das formulaes foi avaliada pelos testes de FPS in vivo a seco e aps a imerso
em gua. A segurana dos nanocosmticos foi avaliada pelos testes de liberao,
penetrao e/ou permeao in vitro utilizando um sistema bicompartimental de difuso
vertical, empregando membrana sinttica (acetato de celulose) e membrana natural (pele
suna), respectivamente. No teste de FPS in vivo a seco, a formulao contendo ambos
os sistemas -ciclodextrina/MCO + lipossoma/MCO, obteve o maior valor de FPS =
11,6 1,6. A formulao contendo o sistema lipossoma/MCO tambm demonstrou um
alto valor de FPS a seco = 11,0 1,3 e apresentou um alto valor de FPS aps imerso
em gua = 10,3 2,2. Nos testes de penetrao a formulao contendo o sistema
lipossoma/MCO apresentou melhor desempenho, pois foi encontrada uma maior
quantidade de MCO na epiderme 18,04 1,17 g e uma baixa quantidade de MCO na
derme 9,4 2,36 g, evidenciando o efeito reservatrio do lipossoma no estrato crneo.
Dessa forma, o sistema nanoestruturado lipossoma/MCO o mais vantajoso, pois
capaz de aumentar a quantidade de ativo na epiderme e aumentar o FPS da formulao.
ABSTRACT
MONTEIRO, MARIANA S. S. B. Filtros Solares em Nanocosmticos: Desenvolvimento e
Avaliao da Segurana e Eficcia. Rio de Janeiro. 2008. Dissertao (Mestrado em Cincias
Farmacuticas)-Faculdade de Farmcia, Universidade Federal do Rio de Janeiro, 20008.
Excessive exposure to ultraviolet radiation could cause several side effects, such
burns and skin cancer. The sunscreens have been widely recommended as a preventive
measure for the harmful effects of sunlight. Several in vivo and in vitro studies have
reported estrogen-like activity for some sunscreens, showing systemic absorption for
these molecules. Therefore, it is necessary to develop anti solar preparations safe and
effective. The aim of this work was to evaluate the efficacy and safety of four
sunscreens formulations developed, gel cream containing the sunscreen p-octyl
methoxycinnamate (OMC) at 8% and containing the release system: -cyclodextrins
and liposomes. Four formulations were developed: gel cream containing OMC free, cyclodextrin/OMC; liposome/OMC and liposome/OMC + -cyclodextrin/OMC
systems. The effectiveness of these formulations was evaluated by in vivo SPF values
and after water immersion SPF values. The safety of preparations was evaluated by in
vitro release and penetration test using a bicompartimental vertical diffusion system,
employing a synthetic (cellulose acetate) and natural (pigskin) membrane, respectively.
The preparation containing both release systems liposome/OMC + -cyclodextrin/OMC
showed the best result in the in vivo FPS test = 11.6 1.6. The formulation containing
only the liposome/OMC system had also a high value of in vivo FPS = 11.0 1.3 and
showed the best resistance to water FPS = 10.3 2.2. In penetration tests the
formulation containing the liposome/OMC system had a better performance because
were found high amount of OMC in the epidermis 18.04 1.17 g and low amount of
OMC in the dermis 9.4 2.36 g, showing there is an interaction between the liposome
and stratum corneum, promoting a reservoir effect. Thus, the liposome/OMC system is
the most advantageous release systems due to this ablility of increase the amount of
OMC in epidermis and increase the FPS formulation.
LISTA DE FIGURAS
Pg
FIGURA 1: Ilustrao esquemtica do espectro eletromagntico.
26
FIGURA 2: Penetrao da radiao UV e visvel na pele.
30
FIGURA 3: As trs camadas da pele: epiderme, derme e hipoderme.
31
FIGURA 4: Representao diagramtica do transporte de frmacos atravs da

principal via no estrato crneo: o espao intercelular.
34
FIGURA 5: Representao grfica do lag-time.
37
FIGURA 6: Frmula estrutural genrica da maioria dos filtros solares
40
orgnicos.
FIGURA 7: Estrutura do p-metoxicinamato de octila.
42
FIGURA 8: Estrutura do lipossoma.
46
FIGURA 9: Demonstrao do efeito reservatrio do lipossoma.
47
FIGURA 10: Classificao dos lipossomas de acordo com o tamanho e nmero de

lamelas.
49
FIGURA 11: Estrutura das ciclodextrinas naturais: A- CD; B- -CD e

C- -CD.
52
FIGURA 12: Estrutura da -CD: (a) Estrutura tronco-cone e (b) Estrutura vista
do topo.
53
FIGURA 13: Processo de obteno dos lipossomas atravs do mtodo de

hidratao do filme lipdico.
74
FIGURA 14: Representao esquemtica do mtodo de Bartlett para a

determinao do teor de fsforo.
79
FIGURA 15: rea demarcada nas costas dos voluntrios para a determinao do
teste de FPS in vivo.
90
FIGURA 16: Preparo da orelha suna.
95
FIGURA 17: Demonstrao do aparato experimental e retirada da pele.
98
FIGURA 18: Espectro de UV-Vis do MCO.
100
FIGURA 19: Representao da curva padro mdia do MCO por espectroscopia

de UV utilizando como solvente etanol P.A.
101
FIGURA 20: Espectro de Infravermelho do MCO (filme entre cristais de NaCl).
103
FIGURA 21: Espectro de RMN 1H do MCO.
105
FIGURA 22: Espectro de RMN 1H do sistema -CD/MCO.
105
FIGURA 23: Molcula do MCO.
106
FIGURA 24: Difratograma da -CD.
107
FIGURA 25: Difratograma da -CD-mistura fsica.
108
FIGURA 26: Difratograma do sistema -CD/MCO.
108
FIGURA 27: Espectro de IV da matria prima -CD.
109
FIGURA 28: Espectro de IV do sistema -CD/MCO.
110
FIGURA 29: Micrografia ptica dos lipossomas com MCO a 72,00 mM

frao no diluda. Aumento de 100 x.
114
FIGURA 30: Micrografia ptica da frao filtrada em membrana 0,4 m dos

lipossomas com MCO a 72,00 mM diludos em 10 mL de soluo
etanlica a 25 %. Aumento de 100.
114
FIGURA 31: Micrografia ptica da frao filtrada em membrana 0,4 m dos

lipossomas com MCO a 72,00 mM diludos em 20 mL de soluo
etanlica a 25 %. Aumento de 100x.
115
FIGURA 32: Micrografia ptica contendo medidas aleatrias da frao

filtrada em membrana 0,4 m dos lipossomas com MCO a 72,00 mM
diludos em 10 mL de soluo etanlica a 25%. Aumento de 100x.
115
FIGURA 33: Tamanho das partculas nos lipossomas com MCO 72,00 mM
frao filtrada.
117
FIGURA 34: Distribuio do tamanho dos lipossomas MCO 72,00 mM frao

filtrada.
FIGURA 35: Representao de uma das curvas de calibrao de fsforo utilizada
para a determinao do teor de fosfolipdios na frao lipossomal
por espectroscopia de UV/VIS.
117
FIGURA 36: Cromatograma do branco e da formulao contendo MCO livre,

ambos na concentrao de 10 g/ mL obtido por CLAE com
de 310 nm.
123
FIGURA 37: Representao das trs curvas de calibrao obtidas na faixa de

concentrao de 2,5 a 20 g/mL de MCO.
124
120
FIGURA 38: Valores de FPS in vivo a seco e aps imerso em gua nas
formulaes desenvolvidas.
133
FIGURA 39: Perfil de liberao in vitro do MCO a partir das formulaes

desenvolvidas. Erro das barras indica mdia desvio padro.
137
FIGURA 40: Curvas padro de MCO 0,1 a 20,0 g/mL.
141
FIGURA 41: Cromatogramas obtidos na extrao de MCO da pele suna

empregando metanol: gua (87:13), para a avalio da especificidade
do mtodo.
FIGURA 42: Massas absolutas de MCO extrada da epiderme e derme aps 6
horas de contato das formulaes com a pele, em uma rea de
1,96 cm2.
142
144
10
LISTA DE EQUAES:
Pg
EQUAO 1: Primeira Lei de Fick.
36
EQUAO 2: Segunda Lei de Fick
37
EQUAO 3: Equao tlag
38
EQUAO 4: Fator de Proteo Solar.
58
EQUAO 5: Clculo do FPS segundo Mansur.
88
11
LISTA DE TABELAS
Pg
TABELA 1: Composio da suspenso lipossomal.
73
TABELA 2: Composio do gel creme com MCO livre, com os sistemas

nanoestruturados -CD/MCO, Lipo/MCO e com ambos -CD/MCO
e Lipo/MCO.
81
TABELA 3: Relao entre o efeito eritematognico e a intensidade da radiao

em cada comprimento de onda.
89
TABELA 4: Frmula da emulso padro utilizada nos testes de FPS in vivo.
91
TABELA 5: Parmetros observados na anlise por ultravioleta do MCO.
100
TABELA 6: Comparao das principais bandas de absoro do espectro de

infravermelho do MCO.
102
TABELA 7: Alteraes nos deslocamentos qumicos do MCO incluso.
106
TABELA 8: Principais bandas de absoro no espectro de infravermelho da

-CD e do MCO.
111
TABELA 9: Determinao do rendimento da incluso do complexo -CD/MCO

por espectrofotometria de UV.
112
TABELA 10: Determinao da quantidade de filtro solar incorporado na

suspenso lipossomal por espectrofotometria de UV.
119
TABELA 11: Resultados obtidos na determinao da concentrao de

fosfolipdios na matria prima Lipoid 100% e Lipossoma.
121
TABELA 12: Respostas obtidas pelas curvas de calibrao de MCO em cada dia
de anlise.
125
TABELA 13: Anlise da preciso inter e intra dia nos cinco nveis de
concentrao do MCO.
126
TABELA 14: Concentraes de MCO nas formulaes desenvolvidas obtidas por

CLAE.
128
TABELA 15: Valores de absorbncia e do FPS in vitro das formulaes

desenvolvidas (mdia desvio padro relativo).
129
TABELA 16: Valores de FPS in vivo das formulaes desenvolvidas.
131
TABELA 17: Valores de FPS in vivo aps a imerso em gua das formulaes
desenvolvidas.
132
12
TABELA 18: Valores obtidos para a solubilidade do MCO nas solues

receptoras testadas.
135
TABELA 19: Fluxo no estado estacionrio (Jss) para cada uma das formulaes
estudadas.
137
TABELA 20: Quantidade mdia de MCO cedida de cada formulao em cada

tempo D.P (n = 6).
138
TABELA 21: Recuperao mdia de MCO na epiderme e derme para trs nveis
de concentrao D.P (n = 3).
141
TABELA 22: Massa de MCO obtida na epiderme suna em uma rea de

1,96 cm2, aps 6 horas de contato com a formulao.
144
TABELA 23: Massa de MCO obtida na derme suna em uma rea de 1,96 cm2,
aps 6 horas de contato com a formulao.
144
13
LISTA DE ABREVIATURAS E SMBOLOS

Abs Absorbncia.
DNA cido desoxirribonuclico.
PABA cido p-aminobenzico.
ANVISA Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria.
ANOVA Anlise de varincia.
BZ-3 Benzofenona 3.
-CD Beta ciclodextrina.
BHT-Butilhidroxitolueno.
BMDM Butilmetxidibenzoil metano.
BP Farmacopia Britnica.
cm centmetro (s).
cm2- centmetro(s) quadrado (s).
CD Ciclodextrina.
r Coeficiente de correlao.
r2 Coeficiente de determinao.
Coeficiente de extino molar.
COLIPA Comitee de La Liasion des Associations Europeans de L`Industries de
La Parfumerie, de Produits Cosmetiques et de Toilette (Comit das Associaes
Europias das Industrias de Perfumaria, Cosmtico e produtos de Toucador).
Comprimento de onda.
mx Comprimento de onda em que ocorre a maior absorbncia.
CG Cromatografia com fase Gasosa.
CLAE Cromatografia lquida de alta eficincia.
Da Dalton.
D.P Desvio padro.
14
DPR Desvio padro relativo.

DL - Difrao a Laser.
XDR Difrao de Raio X.
DMSO- d6- Dimetilsulfxido deuterado.
DME Dose mnima de eritema.
EE Efeito Eritematognico.
EFC Espectroscopia de correlao de ftons.
EC Estrato crneo.
FPS Fator de proteo solar.
FDA Food and Drug Administration.
PC Fosfatidilcolina.
g grama (s).
o
C Graus Celsius.
HP--CD - hidroxipropil ciclodextrina.

h hora (s).
IV Infravermelho.
I Intensidade da Luz Solar.
Lipo Lipossoma.
L litro (s).
MHz- Megahertz.
MD Mdia.
3,4 MBC 3-(4-metilbenzilideno) cnfora.
m metro (s).
g micrograma (s).
g/mL micrograma/mililitro.
15
L microlitro.
m micrmetro.
MET - Microscopia eletrnica de transmisso.
MV - Microscopia de varredura.
mg miligrama (s).
mg/cm2- miligramas/ centmetro quadrado.
mg/L miligrama/ Litro.
mL mililitro (s).
mm milmetro (s).
M milimolar.
min minuto (s).
n nmero de rplicas.
ng/mL nanograma/mililitro.
ng/g nanograma/grama.
nm nanmetro.
nM nanomolar (nanomoles/Litro).
p Nvel de probabilidade.
Nvel de significncia.
P.A. Para anlise.
MCO p-metoxicinamato de octila.
% - Percentual.
pH Potencial de hidrognio inico.
q.s.p quantidade suficiente para.
rf Radiofreqncia.
RDC Resoluo da diretoria colegiada.
16
RMN 1H - Ressonncia Magntica Nuclear de Hidrognio.

RMN 13P Ressonncia Magntica Nuclear de Fsforo.
PM Rotaes por minuto.
Tlag Lag-time
Theta.
TRIS Tris-hidrximetilaminometano.
UV Ultravioleta.
UVA - Ultravioleta A.
UV A1 Ultravioleta A1.
UV-A2 Ultravioleta A2.
UVB Ultravioleta B.
UVC Ultravioleta C.
UV-VIS Ultravioleta visvel.
VMGs- Vesculas multilamelares grandes.
VUGs - Vesculas unilamelares grandes.
VUPs - Vessulas unilamelares pequenas.
W Watts.
17
SUMRIO
Pg
1. Introduo.
22
2. Objetivos.
25
3. Reviso Bibliogrfica.
26
3.1. Radiao Solar.
26
3.1.1. Radiao Ultravioleta.
27
3.1.2. Efeitos Benficos da Radiao Ultravioleta.
28
3.1.3. Efeitos Nocivos da Radiao Ultravioleta.
28
3.2. Pele, Estrutura e Vias de Penetrao.
30
3.2.1. Aspectos Tericos Sobre Mecanismos de Penetrao Cutnea.
35
3.3. Filtros Solares.
38
3.3.1. Filtros Inorgnicos.
39
3.3.2. Filtros Orgnicos.
40
3.3.3. p-Metoxicinamato de Octila.
41
3.4. Lipossomas.
44
3.5. Ciclodextrinas.
51
3.5.1. Derivados das Ciclodextrinas.
55
3.5.2. Formao do Complexo de Incluso.
55
3.6. Eficcia dos Filtros Solares.
58
3.7. Segurana das Formulaes Fotoprotetoras.
60
4. Materiais.
63
4.1. Equipamentos e Acessrios.
63
4.2. Reagentes.
65
4.3 Matrias Primas.
66
18
5. Mtodos.
67
5.1. Caracterizao Fsico-Qumica do MCO.
67
5.2.1 Anlise do Espectro de Absoro na Regio do Ultravioleta.
67
5.2.2. Anlise do Espectro de Absoro na Regio do Infravermelho.
68
5.3. Formao do Sistema Nanoestruturado -CD/ MCO.
68
5.3.1. Sistema Nanoestruturado -CD/ MCO.
68
5.3.2. Purificao do Sistema Nanoestruturado -CD/ MCO.
69
5.3.3. Caracterizao do Sistema Nanoestruturado -CD/ MCO.
69
5.3.4. Determinao da Quantidade de MCO Incorporado no Sistema

Nanoestruturado -CD/ MCO.
71
5.4. Formao do Sistema Nanoestruturado Lipo/MCO.
72
5.4.1. Normalizao dos Lipossomas.
74
5.4.2. Verificao da Formao dos Lipossomas por Microscopia ptica.
75
5.4.3. Espalhamento Dinmico da Luz.
76

Nanoestruturado Lipo/MCO.
76
5.4.5. Determinao da Quantidade de Fosfolipdio na Matria- Prima

Lipoid 100%, na Suspenso Lipossomal.
77
5.5. Desenvolvimento das Formulaes.
80
5.6. Padronizao da Metodologia de Anlise das Formulaes por

Cromatografia Lquida de Alta Eficincia.
83
5.6.1 Preparo das Solues de Trabalho.
84
5.6.2. Preparo das Amostras Para a Quantificao do Teor de MCO nos

Nanocosmticos Desenvolvidos.
85
5.6.3. Parmetros Avaliados por CLAE.
85
5.7. Eficcia das Formulaes Anti-solares.
87
5.7.1. Determinao do FPS in vitro.
88
19
5.7.2. Determinao do FPS in vivo a Seco.
89
5.7.3. Determinao do FPS in vivo Aps a Imerso em gua.
91
5.8. Anlise Estatstica.
92
92
5.9.1. Estudo da Solubilidade do MCO e Escolha da Soluo Receptora.
92
5.9.2. Estudo de Liberao in vitro.
93
5.10. Estudo de Penetrao e/ou Permeao Cutnea.
94
5.10.1. Obteno e Limpeza da Pele suna.
94
5.10.2. Validao da Metodologia Para a Extrao e Quantificao de MCO na

Epiderme e Derme Suna.
95
5.10.3. Metodologia de Extrao de MCO na Epiderme e Derme Suna.
96
5.10.4. Protocolo da Penetrao/Permeao Cutnea das Formulaes Contendo

MCO.
97
6. Resultados.
99
6.1. Caracterizao Fsico Qumica do Filtro MCO.
99
6.1.1. Determinao dos Parmetros de Absoro na Regio do UV.
99
6.1.2. Determinao dos Parmetros do Espectro de Absoro do MCO na

Regio do Infravermelho.
101
6.2. Formao e Purificao do Sistema Nanoestruturado -CD/MCO.
103
6.2.1. Caracterizao do Sistema -CD/MCO por Espectrometria de

Ressonncia Magntica Nuclear de Hidrognio (RMN 1H).
103
6.2.2. Caracterizao do Sistema -CD/MCO por Difrao de Raio X.
106
6.2.3. Caracterizao do Sistema -CD/MCO por Espectroscopia de

Infravermelho.
108
6.2.4. Determinao do Rendimento de Incluso do Sistema Nanoestruturado

-CD/MCO por Espectrometria de Ultravioleta.
6.3. Caracterizao dos Lipossomas.
111
112
112
20
6.3.2. Determinao do Tamanho dos Lipossomas por Espalhamento Dinmico

da Luz Laser.
116
6.3.3 Determinao da Quantidade de MCO Incorporado na Suspenso

Lipossomal.
119
6.3.4 Anlise de Fsforo nos Fosfolipdios (Lipoid 100%) e no Lipossoma.
120
6.4. Anlise Quantitativa por Cromatografia Lquida de Alta Eficincia.
122
6.4.1 Condies Cromatogrficas Para Anlise do MCO.
122
6.4.2. Seletividade.
122
6.4.3. Linearidade.
123
6.4.4. Preciso Intra e Inter dia.
125
6.4.5. Determinao da Concentrao de MCO nas Formulaes Desenvolvidas

por CLAE.
126
6.5. Eficcia das Formulaes Anti-Solares
128
128
6.5.2. Determinao do FPS in vivo a Seco.
130
6.5.3. Determinao do FPS in vivo Aps Imerso em gua.
131
6.6. Segurana das Formulaes Anti-Solares
134
134
137
6.6.3. Estudo de Permeao/Penetrao in vitro Utilizando a Pele Suna.
140
6.6.3.1. Desenvolvimento e Validao do Mtodo Para a Extrao e

Quantificao de MCO na Epiderme e Derme Suna.
141
6.6.3.2. Resultados da Penetrao de MCO na epiderme e derme suna.
143
7. Concluso.
148
8. Referncias Bibliogrficas.
151
21
1. Introduo.
A radiao solar subdividida em: luz visvel (400-800 nm), que corresponde
cerca de 45% do total da energia incidente; radiao infravermelha (acima de 800 nm)
tambm chamada radiao calrica, que correponde a aproximadamente 50% da energia
incidente e a radiao ultravioleta (< 400 nm). Esta ltima se divide em: UVC (200-290
nm), completamente absorvida pelo oznio e oxignio da atmosfera; UVB (290-320
nm), parcialmente absorvida pela camada de oznio e UVA (320-400 nm) que no
absorvida pela camada de oznio (HIRSCHBERG, SANTUS & KOHEN, 1995;
MERWALD et al., 2005).
Os efeitos nocivos da luz solar na pele humana so bem conhecidos,
especialmente os da radiao ultravioleta. Esta pode causar danos irreparveis como
queimaduras solares, fotoenvelhecimento e cncer de pele, sendo este tlimo o mais
grave (SCALIA, 2002; MERWALD et al., 2005; KULLAVANIJAYA & LIM, 2005;
SCALIA, 2006). Devido aos fatores citados, houve uma conscientizao por parte da
populao resultando no aumento do uso de produtos fotoprotetores.
Os filtros solares tm sido largamente recomendados como uma medida
preventiva contra os raios ultravioletas (SCALIA et al., 1998; URBACH, 2001). Estes
so frequentemente aplicados e espalhados em grandes reas do corpo, sendo
recomendadas reaplicaes aps o contato com gua, consequentemente aumentando a
quantidade do produto que ser utilizada. Alm disso, filtros solares so incorporados
em produtos para uso dirio, como hidratantes e produtos para cabelo (GONZALES,
FARBROT & LARK, 2002).
Na tentativa de tornar os filtros solares mais resistentes gua, os fabricantes os
tornam mais lipoflico o que pode levar a um aumento de absoro cutnea, favorecendo
sua presena nas camadas mais internas da pele, o que no desejvel. Um filtro solar
22
deve cobrir e proteger a pele, desenvolvendo suas atividades nas camadas superiores do
tecido cutneo (estrato crneo (EC)), evitando, assim, uma possvel absoro sistmica
(PETRAZZUOLI, 2000; NOHYNEK & SCHAEFER, 2001; KULLAVANIJAYA &
LIM, 2005).
De acordo com Sarveiya, Risk & Benson (2004), uma quantidade significativa
dos filtros solares como oxibenzona, p-metoxicinamato de 2-etil-hexila, octilsalicilato e
homosalato foram encontrados em camadas mais profundas do EC, 30 minutos aps a
aplicao em voluntrios. Esta quantidade encontrada diminuiu 4 horas aps a
aplicao, sugerindo que pode ter ocorrido absoro para camadas mais profundas da
pele, e aproximadamente 1% da dose aplicada de oxibenzona e seus metablitos foram
encontrados na urina, aps uma nica aplicao. Alm disso, estes filtros solares
tambm foram detectados em amostras de leite materno de voluntrios (HANY &
NAGEL, 1995). Sendo assim, a quantidade absorvida pode ser significativa mesmo que
o grau de permeao seja baixo (SARVEIYA, STACEY & BENSON, 2004).
O p-metoxicinamato de 2-etilhexila ou octilmetoxicinamato (MCO) um filtro
solar qumico derivado da classe dos cinamatos que absorve na faixa do UVB e
apresenta absoro mxima em 310 nm. Apesar de ser mundialmente empregado em
formulaes antisolares, apresenta uma perda de atividade de 5% sob ao da luz, a qual
est associada ao processo de formao dos ismeros E-Z. Esta perda de atividade
implica no emprego de concentraes mais elevadas (5 a 10%) (HUONG et al., 2007).
Por isso, este filtro solar foi escolhido para o desenvolvimento e avaliao dos sistemas
nanoestruturados (lipossomas e ciclodextrinas) e preparo dos nanocosmticos na
concentrao de 8 %.
Sistemas nanoestruturados, como lipossomas e ciclodextrinas, tm sido
empregados para garantir a presena de filtros solares na epiderme. Estes sistemas
23
podem melhorar as propriedades deste ativo, aumentando sua reteno no EC,

diminuindo sua permeao cutnea, aumentando seu Fator de Proteo Solar (FPS),
controlando sua liberao e tornando-o mais fotoestvel (GARCIA, 1998; SCALIA,
1998; PERUGINE, 2002; SCALIA, 2002; YENER, 2003; JIMNEZ).
A eficcia dos nanocosmticos pode ser avaliada pela determinao do FPS in
vivo a seco e aps imerso em gua. O FPS a medida de um fotoprotetor frente
radiao UVB, e definida pela razo de tempo de exposio radiao UV necessria
para produzir dose mnima de eritema (DME) na pele protegida pelo tempo de
aparecimento do mesmo eritema na pele desprotegida (ANVISA, 2006).
A segurana das formulaes cosmticas pode ser avaliada por tcnicas in vitro,
empregando um modelo bicompartimental, conhecido como clula de difuso vertical e
pele natural (humana ou animal). Dentre os vrios tipos de pele animal podem ser
utilizadas as de rato, cobaio, camundongo com e sem plo, macaco rhesus e cobra. No
entanto, tem-se empregado a pele suna devido a sua similaridade com a pele humana
(SEKKAT, KALIA & GUY, 2002; MEDI & SINGH, 2003).
A determinao da velocidade de liberao do ativo das formulaes
interessante para avaliar a disponibilidade do ativo para a pele. Pois, a liberao
imediata da dose total administrada ou a ausncia de liberao do ativo so situaes
no desejadas. Para avaliar a velocidade de liberao, pode-se empregar o mesmo
sistema bicompartimental com membranas artificiais, como acetato de celulose, nitrato
de celulose e polissulfona (HAIGH & SMITH, 1994; UNITED STATES, 1997), as
quais so apenas suportes que no oferecem resistncia passagem do ativo do
compartimento doador para o compartimento receptor da clula de difuso,
proporcionando, desta forma, sua quantificao neste ltimo, em funo da partio
entre o veculo e o meio aceptor.
24
2. Objetivos.
Desenvolver e caracterizar sistemas nanoestruturados: lipossomas e -ciclodextrina
contendo o filtro solar p- metoxicinamato de octila (MCO);
Desenvolver nanocosmticos na forma de gel creme contendo os sistemas
nanoestruturados desenvolvidos;
Avaliar a eficcia, atravs dos testes de FPS in vivo a seco e aps a imerso em
gua, dos nanocosmticos desenvolvidos;
Avaliar a segurana dos nanocosmticos desenvolvidos, atravs dos testes de

liberao,
penetrao
e/ou
permeao
in
vitro
utilizando
um
sistema
bicompartimental de difuso vertical, empregando membrana sinttica (acetato de

celulose) e membrana natural (pele suna), respectivamente.
25
3. Reviso Bibliogrfica.
3.1 Radiao Solar.
A radiao solar abrange todo o espectro eletromagntico, incluindo energia
csmica de alta e baixa energia; raios gama; raios ultravioletas (UV) de alta e baixa
energia; luz visvel; radiao infravermelha (IV); microondas, e finalmente ondas de
rdio (FIGURA 1). Radiao com comprimento de onda de alta energia ( < 10 nm)
desloca os eltrons das molculas para formar ons, e so consideradas radiaes
ionizantes. Radiao UV, visvel e IV com baixo comprimento de onda, no possuem a
energia requerida para esse processo e so classificadas como no ionizantes
(KIRCHOFF, 1995; SHAATH et al., 2005).
Os comprimentos de onda das radiaes que alcanam a superfcie terrestre
esto compreendidos entre 290-2000 nm. A radiao ultravioleta corresponde a 5% do
total de radiao solar que atinge a superfcie terrestre, sendo a responsvel por
ocasionar danos pele (SANTOS, 1986; VIGLIOGLIA, 1989; IARC, 1992; RAMOS,
1995, FREITAS, 1997).
FIGURA 1: Ilustrao esquemtica do espectro eletromagntico. Disponvel em

<http://www.cptec.inpe.br/glossario/fotos/035g.jpg.
26
3.1.1. Radiao Ultravioleta.

A radiao ultravioleta a regio do espectro eletromagntico compreendida
entre 100 e 400 nm, sendo dividida, segundo sua faixa de comprimento de onda, em trs
regies distintas: UVA ( = 320-400 nm), UVB ( = 290- 320 nm) e UVC ( = 100290 nm). A radiao UVA ainda pode ser subdividida em UV-A1 ( = 340-400 nm), e
UV-A2 ( = 320-340 nm) (SHAATH et al., 2005).
Existem vrios fatores que podem influenciar os nveis de radiao ultravioleta que
chegam superfcie terrestre (IARC, 1992):
Horrio do dia: a quantidade de radiao recebida varia com os ngulos de
incidncia com que esta radiao chega superfcie terrestre. No horrio de 6:30
h s 17:30 h observa-se maior incidncia dos raios UVA e das 9:30 h s 15:00 h
maior incidncia dos raios UVB.
Clima: h uma grande variao na quantidade de raios UV que chegam
superfcie terrestre, nas regies de clima temperado. Esta variao muito
menor que nas regies prximas ao Equador.
Latitude: a incidncia anual de raios UV diminui quanto maior a distncia do
Equador.
Altitude: os nveis de radiao UV so muito menores em regies abaixo do
nvel do mar. Observa-se que um aumento de 300 m de altitude aumenta em
cerca de 4% a intensidade da luz solar.
Presena de nuvens: a presena de nuvens reduz os raios UV que chegam
superfcie terrestre. Em dias nublados, recebe-se aproximadamente 10% a menos
da radiao UVB do que em dias ensolarados (RAMOS, 1995).
Aproximadamente 30-40% da radiao UV so absorvidas pelas camadas mais
externas da atmosfera terrestre atravs da camada de oznio. A camada de oznio filtra
27
a radiao UV abaixo de 290 nm. Portanto, as radiaes UVC e UVB de baixo

comprimento de ondas so bloqueadas, e uma quantidade mnima da radiao UVA
filtrada (SHAATH et al., 2005).
A depleo da camada de oznio tem um impacto direto sobre o aumento da
exposio da radiao UV na superfcie terrestre. Estima-se que 1% da diminuio da
camada de oznio ocasione um aumento de 1 a 2% dos casos de melanomas malignos
(KULLAVANIJAYA & LIM, 2005).
3.1.2 Efeitos Benficos da Radiao Ultravioleta.

A exposio luz solar, dependendo da intensidade, freqncia e caractersticas
individuais, pode resultar em efeitos benficos ao ser humano: sensao de bem estar
fsico e mental; estmulo da circulao sangnea perifrica; elevao na capacidade de
formao da hemoglobina; preveno e cura do raquitismo; melhora no tratamento da
psorase e de certas infeces cutneas e estmulo da produo de melanina, com
conseqente
bronzeamento
(VELASCO
DE
PAOLA
&
RIBEIRO,
1998;
KULLAVANIJAYA & LIM, 2005). Entretanto, a radiao solar tambm pode causar
danos ao organismo, caso no se tome os devidos cuidados com o tempo de exposio.
3.1.3 Efeitos Nocivos da Radiao Ultravioleta.

A radiao UVA predomina sobre os raios UVB na superfcie terrestre e penetra
profundamente na derme (FIGURA 2). Os efeitos em curto prazo desencadeados pela
exposio solar, na faixa da radiao UVA (315 a 400 nm) so: pigmentao imediata
da pele, que provocada pelo aumento da atividade da tirosinase e pela fotooxidao da
melanina existente; mudanas na distribuio dos melancitos na epiderme e eritema
que pode ser induzido por ambas s radiaes UVA e UVB. A resposta radiao UVA
28
varivel para cada indivduo (SHAATH et al., 2005; SCHUELLER &

ROMANOWSKI, 2000).
A exposio solar crnica, ou seja, a exposio prolongada e excessiva na faixa
da radiao UVA resulta no fotoenvelhecimento, que ocorre quando elementos chaves
de suporte da pele so danificados por esta radiao. Trata-se de um processo
cumulativo que contribui para a formao de rugas, flacidez e outros sinais de
envelhecimento precoce e como conseqncia mais grave, pode-se citar a induo ao
cncer de pele, dependendo da tonalidade da pele, tempo e intensidade de exposio
(VELASCO DE PAOLA & RIBEIRO, 1998).
A radiao UVA tambm pode causar danos no DNA por processos oxidativos
atravs da gerao de espcies reativas de oxignio. Estas espcies reativas induzem ao
aumento da sntese de melanina, ocasionando o brozeamento da pele. Alm disto, pode
causar peroxidao das membranas lipdicas das clulas gerando inflamao cutnea.
Esta oxidao de lipdios e protenas pode afetar no reparo do DNA. Deste modo, a
radiao UVA danifica o DNA pela quebra dos filamentos e pela oxidao dos cidos
nuclicos (SHAATH et al., 2005).
A radiao UVB predominante na superfcie terrestre no perodo entre 10 e 14
horas. Ela afeta principalmente a camada epidrmica da pele (FIGURA 2), onde causa
eritema (queimadura solar), que aparece de 3 a 4 horas aps a exposio e se intensifica
de 12 a 24 horas. acompanhado por edemas, dores, prurido, pela formao de bolhas e
espessamento da epiderme e da derme (KULLAVANIJAYA & LIM, 2005).
A exposio excessiva frente radiao UVB pode causar fotoenvelhecimento,
imunosupresso e fotocarcinognese, pois as bases do DNA e das protenas so capazes
de absorver a radiao UVB. Quando os cidos nuclicos absorvem esta radiao so
formados fotoprodutos, como dmeros de pirimidina. Esses fotoprodutos podem ser
29
mutagnicos ou citotxicos se no forem reparados (VELASCO DE PAOLA &

RIBEIRO, 1998; OSTERWALDER, LUTHER & HERZOG, 2000).
Os raios UVC so portadores de elevada energia, caracterstica que os torna
extremamente lesivos aos seres vivos. So absorvidos pelas camadas mais elevadas da
atmosfera e estratosfera e a camada de oznio impede que atinjam a superfcie terrestre.
Esta propriedade justifica a preocupao com a destruio desta camada (VELASCO
DE PAOLA & RIBEIRO, 1998).
FIGURA 2: Penetrao da radiao UV e visvel na pele. Disponvel

<http://www.corpore.org.br/.../dicas. 1-radiacao. pele.jpg.
3.2. Pele, Estrutura e Vias de Penetrao Cutnea.

A pele o maior rgo do corpo humano, correspondendo a aproximadamente
15% do peso corporal. A pele humana composta principalmente de duas partes:
epiderme e derme. A epiderme constituda por tecido epitelial de revestimento e a
derme por tecido conjuntivo, que correspondem s fibras colgenas e elsticas envoltas
por substncia fundamental (gel composto principalmente por mucopolissacardeos
cidos); vasos sanguneos e linfticos; nervos e terminaes nervosas, alm dos
30
folculos pilosebceos e glndulas sudorparas (FIGURA 3). A epiderme apresenta

como principal funo a proteo e o equilbrio hidroeletroltico e a derme possui
funes de termoregulao, percepo e proteo (AZULAY & AZULAY, 1999;
DANGELO & FANTINI, 2005; RIBEIRO, 2006).
FIGURA 3: As trs camadas da pele: epiderme, derme e tecidos subcutneos.

Disponvel em <http://www. afh.bio.br/sentidos/img/sentidos%20pele.jpg.
A epiderme a camada mais externa da pele e sua espessura varia de acordo

com a regio do corpo. um tecido epitelial estratificado, avascular e possui uma
estrutura multilamelar (AZULAY & AZULAY, 1999; ANSEL, POPOVICH &
ALLEN, 2000), sendo subdividida em: camada crnea, a mais externa, camada
granulosa, camada espinhosa e por ltimo a camada basal. Em movimento ascendente
de proliferao da camada basal, as clulas se alteram de forma ordenada,
metabolicamente ativa e divididem-se em clulas densas, funcionalmente mortas e
queratinizadas. As ltimas clulas so envolvidas por bicamada lipdica multilamelar
constituindo a ltima camada da epiderme, o estrato crneo (EC) (DANGELO &
FANTINI, 2005).
31
Na epiderme, encontra-se o sistema melanoctico formado pelos melancitos. Os

melancitos so clulas produtoras de melanina e localizam-se ao nvel da camada
basal. A melanina um pigmento capaz de refletir e absorver a radiao visvel e UV, e
dissip-la, preferencialmente, na forma de calor, protegendo a pele (KULLANIJAYA &
LIM, 2005).
O cido urocnico, tambm localizado na epiderme, tem absoro mxima em
277 nm, constituindo um papel importante na proteo do tecido contra a radiao solar
(KULLANIJAYA & LIM, 2005).
A camada basal ou camada germinativa composta por clulas jovens,
colunares e justapostas, responsveis pela renovao das clulas da epiderme. As
clulas da camada espinhosa apresentam projees citoplasmticas, os desmossomas,
que ancoram as clulas umas s outras. Nos estratos mais externos da camada
espinhosa, a clula comea a se tornar mais parecida com as clulas do estrato
granuloso. A camada granulosa constituda por clulas granulosas, que possuem
grnulos de querato-hialina em seu citoplasma e so precursores da queratina do EC
(ZATZ, 1993; AZULAY & AZULAY, 1999; MENON, 2002).
A camada crnea ou EC a camada mais externa da pele, sendo formada por
cerca de 18 a 21 camadas de clulas mortas, secas, alongadas, chamadas de cornecitos.
Os cornecitos so os produtos finais da diferenciao dos queratincitos, que so as
clulas produzidas na epiderme vivel; so compostos principalmente de queratina
(MENON, 2002).
O espao entre os cornecitos preenchido por lipdios, dessa maneira
possvel observar na barreira da pele dois componentes: o componente hidroflico, a
queratina, e o componente hidrofbico, os lipdios. Portanto, o EC pode ser descrito
como uma parede de tijolos. Os cornecitos repletos de queratina podem ser
32
simbolizados por tijolos, enquanto as regies lipdicas entre as clulas agem como
cimento (MOSER, 2001; BOUWSTRA, 2002; MENON, 2002).
Os lipdios encontrados no EC esto organizados em camada dupla, formando
estruturas arredondadas. Essa barreira de lipdeos composta de 40-49% de ceramidas;
20-25% de colesterol; 10% de sulfato de colesterila; 0,7% de ster de colesterila; 0,1%
de fosfolipdios; 2,6% de triacilgliceris e cerca de 25% de cidos graxos livres. Os
lipdios so responsveis pela funo de barreira perda de gua e entrada de
substncias no EC. A quantidade de lipdios varia de 3 a 46% nas diferentes reas do
corpo (MOSER, 2001; BOUWSTRA, 2002).
A camada crnea a principal barreira fsica contra a entrada de substncias na
pele e a perda de gua, embora seja levemente permevel gua; impede a penetrao
da radiao UV, sendo capaz de refletir de 5 a 10% da luz solar (MENON, 2002;
LPORI, 2002).
A permeao de substncias na pele pode ocorrer por difuso passiva atravs da
penetrao transcelular, intercelular e transanexal por meio dos folculos pilosos,
glndulas sudorparas e dispositivos pilosebceos (FIGURA 4). Entretanto, a penetrao
dos ativos pelos apndices no significativa, uma vez que estas estruturas representam
uma pequena frao da rea superficial da pele (apenas 1%) (SUHONEN, 1999;
BARRY, 2001; HADGRAFT, 2001).
A via transcelular requer mltipla partio dos ativos entre os cornecitos e os
lipdios intercelulares, o que dificulta a permeao por esta via (MIGRATORI, 2000).
Na via intercelular, a molcula passa atravs dos domnios lipdicos, situados entre os
cornecitos. Este transporte envolve uma interao do soluto com os componentes
lipdicos do espao intercelular. considerada a principal via para a permeao da
maioria dos frmacos (SUHONEN, 1999). Entretanto, para ambas as vias, a estrutura do
33
EC controla a difuso dos permeantes, pois se comporta como uma membrana artificial
semi-permeavl.
FIGURA 4: Representao diagramtica do transporte de frmacos atravs da principal via no

estrato crneo: o espao intercelular. Adaptado de BARRY, 1987.
De acordo com Blanco e colaboradores (2003), as substncias administradas

pela via tpica ou transdrmica deveriam possuir propriedades fsico-qumicas
especficas para possibilitar sua penetrao na pele: elevada lipofilicidade, solubilidade
em leo e possuir baixo peso molecular, em geral menor que 500 Da. Desta forma, o
ativo destinado proteo solar deve ter peso molecular superior, pois ser mais difcil
sua permeao. Caso contrrio, poder passar pelos domnios lipdicos entre os
cornecitos e difundir-se atravs das diferentes camadas da epiderme implicando em
alguma absoro sistmica (MARTINI & SEILLER, 2006).
importante ainda, que os filtros solares apresentem uma adequada
lipofilicidade, propriedade essencial para que estas molculas fiquem aderidas aos
domnios lipdicos do EC (ALVAREZ-ROMN et al., 2001). Devido a estes fatores
citados, tornam-se necessrios realizar ensaios para avaliar a penetrao/permeao
cutnea destas molculas.
34
Outro fator que deve ser considerado a natureza dos componentes da

formulao, pois estes podem promover modificaes nas propriedades do EC,
alterando sua resistncia natural, retendo ou liberando a substncia ativa para a pele.
Dentre eles pode-se citar: gua; tensoativos; cidos graxos; lcoois, lcoois graxos e
glicis; uria e outros (LEONARDI & CAMPOS, 1997; WILLIAMS & BARRY,
2004); assim como, sistemas nanoestruturados como lipossomas e ciclodextinas
(LEONARDI & CHORILLI, 2006; LOFTSSON & MASSON, 2001).
Os fatores biolgicos que podem alterar a permeabilidade da pele incluem: o
estado da pele; a presena de alguma patologia; a idade da pele; o fluxo sanguneo; o
metabolismo; regio da aplicao; grau de hidratao e o modo de aplicao de uma
formulao (ANSEL, POPOVICH & ALLEN, 2000; AULTON, 2005).
3.2.1 Aspectos Tericos sobre Mecanismos de Penetrao Cutnea.

A penetrao cutnea de ativos na pele ocorre atravs da difuso passiva e tem
como etapa limitante a camada com maior resistncia difuso, o EC. No processo de
difuso passiva, as molculas se movem de uma regio do sistema mais concentrada
para outra regio menos concentrada, sem que haja gasto de energia. Este processo
ocorre de maneira aleatria e depende de um gradiente de concentrao (HADGRAFT,
2001; NETZ, GONZALEZ & ORTEGA, 2002).
O processo de difuso de ativos atravs do EC pode ser explicado atravs de trs
etapas:
1) O ativo difunde-se dentro da formulao para a superfcie do EC;
2) Ocorre a passagem do ativo para o interior do EC, controlada pelo coeficiente de
partio;
3) O ativo difunde-se atravs do EC.
35
O processo de transporte de ativos na/atravs da pele pode ser descrito pela

primeira Lei de Fick (EQUAO 1). A hiptese bsica que a taxa de transferncia da
substncia difundida, por unidade de rea de uma seo, proporcional ao gradiente de
concentrao, medido perpendicularmente a esta seo (AULTON, 2005).
EQUAO 1: Primeira Lei de Fick.
Jss = D.Kp.(C1- C2)

h
A primeira lei de difuso de Fick empregada para descrever o fluxo (J) que se
estabelece no estado estacionrio (SS) por rea. Relacionando: a partio do permeante
entre a formulao aplicada e a pele (Kp), o coeficiente de difuso (D), a diferena de
concentrao do permeante atravs da pele (C1 C2) e do comprimento difusional (h)
em funo do tempo, obedecendo condio sink (MOSER, 2001; HADGRAFT,
2001).
Esta Lei aplicvel somente para membranas homogneas, isto , que no
apresentem variao no coeficiente de permeabilidade ao longo de sua espessura.
Portanto, o fluxo de passagem de uma substncia constante desde o incio. Porm, isso
no observado para uma membrana heterognea como a pele, ou mais especificamente
para o EC (AULTON, 2005).
A segunda lei de Fick leva em considerao as variaes que uma membrana
heterognea e complexa como a pele oferece. A segunda lei aplicada para saber como
varia a concentrao do frmaco no interior da membrana em funo do tempo (SINGH
& SINGH, 1993). A mudana na quantidade cumulativa do frmaco (Q) que passa
36
atravs da membrana, por unidade de rea, como funo do tempo est representada na
FIGURA 5.
FIGURA 5: Representao grfica do lag-time (tlag). Adpatado de Freitas (2005).
Quando a linha do SS extrapolada at o eixo x (tempo), o intercepto

corresponde ao tlag (ROUGIER et al., 1990), que definido como o tempo em que o
gradiente de concentrao do frmaco se estabiliza no interior da membrana.
Assumindo que a concentrao do frmaco no compartimento doador
constante, que a condio sink perfeita, que no h degradao ou ligao do
permeante na membrana e que o equilbrio na interface instantneo, o desdobramento
matemtico da 2 lei de Fick, resultar no tempo infinito, na expresso abaixo
(EQUAO 2):
EQUAO 2: Equao do estado estacionrio.
Q/A = Kp D Cd /h (t-h2/6D)
Quando Q = 0 (extrapolao da linha SS), o intercepto no eixo X corresponde ao

tlag (FIGURA 5); a equao acima resultar em (EQUAO 3):
EQUAO 3: Equao tlag.
tlag = h2/6D
37
De modo que, pode-se estimar o coeficiente de difuso (D), conhecendo-se a

espessura da membrana (h).
3.3. Filtros Solares.

Durante os ltimos 40 anos, um grande nmero de diferentes molculas foi
introduzido no mercado mundial para atuarem como filtro solar: cido tnico (1925);
salicilato de benzila (1931); derivados do cido para-aminobenzico (PABA) e
derivados de 2-fenilimidazis (1942); cido antranlico (1950); vrios cinamatos (1954);
e benzofenonas (1965) (URBACH, 2001).
Atualmente, a Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (ANVISA) disponibiliza a
listagem das substncias qumicas orgnicas e inorgnicas que podem ser utilizadas
como filtros solares (ANVISA, 2006).
Na ltima dcada, os filtros solares tm sido utilizados como uma proteo contra o
fotoenvelhecimento, fotoalergias, cncer de pele e danos causados por radicais livres.
As preparaes anti-solares mais modernas utilizam uma combinao de diversos filtros
orgnicos e inorgnicos, para garantir proteo frente radiao ultravioleta
(NOHYNEK & SCHAEFER, 2001; DAMIANI et al., 2006).
3.3.1. Filtros Inorgnicos.

Os filtros solares inorgnicos, dixido de titnio e dixido de zinco, refletem e
dispersam a radiao ultravioleta e visvel. Porm, dependendo do tamanho da partcula,
tambm podem absorver a radiao ultravioleta. Estes filtros so muito foto-estveis e
devido as suas propriedades de espalhamento de luz; apresentam menor variabilidade no
seu efeito fotoprotetor quando comparados aos filtros orgnicos. Alm disso, no
38
apresentam propriedades irritantes nem sensibilizantes a pele humana (SHAATH,
1997; LAUTENSCHLAGER, WULF & PITTELKOW, 2007).

De uma maneira geral, os filtros inorgnicos so considerados mais seguros. De
acordo com Lautenschlager, Wolf & Pittelkow (2007), no foram encontradas
evidncias da penetrao do dixido de titnio e do xido de zinco em estudos in vitro
empregando sistema bicompartimental de difuso vertical e pele animal (pele suna).
Assim como nos estudos de reteno in vitro, atravs da tcnica de tape stripping
utilizando pele suna, no foi demonstrada a penetrao dos filtros inorgnicos atravs
do EC (SCHULZ et al., 2002), indicando que estes filtros no tm a capacidade de
permear a pele, evitando efeitos adversos.
Os filtros inorgnicos so cosmeticamente inaceitveis devido a sua opacidade e
oclusividade, pois proporcionam uma pelcula branco-leitosa sobre a pele.
Recentemente, tm-se desenvolvido filtros solares inorgnicos micronizados e
encapsulados de alta qualidade. Com a reduo do tamanho das partculas para 10-50
nm ocorre a diminuio do espalhamento da luz visvel, levando ao desenvolvimento de
um produto cosmtico esteticamente mais aceitvel (FLOR, DAVOLOS & CORREA,
2007; LAUTENSCHLAGER, WOLF & PITTELKOW, 2007).
As preparaes anti-solares que contm somente filtros inorgnicos so
geralmente recomendadas para crianas, isto ocorre devido baixa penetrao e
subsequente degradao destas substncias no corpo. Observa-se ausncia de relatos de
casos de fotoalergia e de fototoxicidade in vivo com estes tipos de preparaes
(LAUTENSCHLAGER, WOLF & PITTELKOW, 2007).
39
3.3.2. Filtros Orgnicos.

A maioria dos filtros orgnicos so compostos aromticos, dissubstitudos, com
um grupamento carbonila (do tipo cetona ou ster), e um substituinte com par de
eltrons livres (amina ou metoxila) doadores de eltrons, normalmente em posio orto
ou para ao grupamento carbonila (FIGURA 6). Ao absorverem a radiao ultravioleta,
os eltrons situados no orbital HOMO (orbital molecular preenchido de mais alta
energia) so excitados para o orbital * LUMO (orbital molecular vazio de mais baixa
energia) e ao retornarem para o estado inicial, o excesso de energia liberado em forma
de calor. As transies eletrnicas que esto envolvidas durante a absoro da luz
ultravioleta ocorrem entre a diferena de energia HOMO-LUMO (FLOR, DAVOLOS,
& CORREA, 2007).
X C O
X C
R
Y
Y = OH, OCH3, NH2, N(CH3)2

X = nenhum substituinte ou
CH CH
R = C3H4, OH, OR' (R' = metil, octil, amil, mentil, homentil)

FIGURA 6 - Frmula estrutural genrica da maioria dos filtros solares orgnicos.
Adaptado de SHAATH, 1997.
Sendo assim, substncias que apresentam a configurao citada acima absorvem

a radiao ultravioleta de menor comprimento de onda, ou seja, comprimento de onda
que transporta alta energia, e liberam esta energia na forma de uma radiao de
elevado comprimento de onda, ou seja, baixa energia. A energia absorvida da radiao
40
ultravioleta corresponde energia requerida para causar uma excitao fotoqumica na

molcula do filtro solar.
Os filtros solares orgnicos so classificados em filtros solares UVA e UVB
dependendo do tipo de radiao a qual eles conferem proteo (SHAATH, 1997):
Filtros solares UVA absorvem radiao entre 320 a 360 nm. Exemplo:
benzofenonas e antranilatos.
Filtros solares UVB absorvem radiao entre 290 e 320 nm. Exemplo:
PABA, salicilatos e cinamatos.
Formulaes antisolares contendo filtros solares UVB j so utilizadas com
freqncia por dcadas, enquanto que as com filtros solares UVA e de amplo espectro
foram
desenvolvidas
mais
recentemente
(LAUTENSCHLAGER,
WULF
&
PITTELKOW, 2007).
3.3.3. p-Metoxicinamato de octila.

O p-metoxicinamato de octila ou p-metoxicinamato de 2-etil-hexila ou
octilmetoxicinamato (MCO) (FIGURA 7) um filtro solar qumico derivado da classe
dos cinamatos que absorve na faixa do UVB e apresenta absoro mxima em 310 nm.
Na estrutura molecular dos cinamatos h uma insaturao extra conjugada com o
anel aromtico e o grupamento carbonila que permite a maior distribuio eletrnica. A
energia capaz de gerar essa transio eletrnica corresponde ao comprimento de onda
nas proximidades de 305 nm. A presena do grupamento 2-etilhexil no carbono 8 da
molcula do MCO diminui sua solubilidade em gua aumentando a substantividade das
formulaes fotoprotetoras que o contm (SHAATH, 1997).
41
FIGURA 7: Estrutura do p-metoxicinamato de octila (SCALIA et al., 2002).
O MCO foi desenvolvido na dcada de 50 e atualmente empregado na maioria

das preparaes antisolares. De acordo Summers e colaboradores (2005), dentre os 105
produtos fotoprotetores analisados, 88,2% continham MCO. Alm disso, foram
relatados poucos casos de reaes de fotoalergias e fotosensibilizaes induzidos por
esta molcula (PATTANAARGSON, 2004).
O MCO um lquido oleoso, transparente, levemente amarelado, inodoro,
insolvel em gua, solvel em etanol e leo mineral. Seu peso molecular 290,4 e o
ponto de ebulio est na faixa de 185-195C (THE MERK INDEX, 2001;
MARTINDALE, 1999).
O principal problema relacionado ao uso do MCO a sua capacidade de sofrer
fotoisomerizao. O produto originado da foto decomposio do MCO o cis-MCO. O
ismero cis tem uma reduzida absortividade no UV quando comparado com o transMCO (SUMMERS, 2005). Nos estudos de Huong (2007), foi verificado que uma taxa
de isomerizao de 20% do MCO acarretou a diminuio de aproximadamente 10% do
FPS na formulao e, para uma taxa de isomerizao de 60% do MCO, a queda no FPS
pode variar entre 29% e 38%.
Segundo Schlumpf e colaboradores (2004) o MCO foi capaz de estimular a
proliferao in vitro de clulas MCF-7 (clulas sensveis ao estrognio) e apresentar
atividade estrognica no teste uterotrfico com ratas Long-Evans jovens. Em relao a
aes hormonais, este filtro apresentou atividade antiandrognica nas concentraes de
1,0 nM at 10,0 nM, quando testados em receptores de clulas MDA-kb2 de carcinoma
42
de mama humana (MA et al., 2003). Outro estudo demonstrou o aumento da produo
de vitelogenina, um marcador clssico de atividade estrognica, em peixes Medaka
machos (INUI et al., 2003).
Os fabricantes na tentativa de tornar os filtros solares mais resistentes gua os
tornam mais lipoflicos. Sendo que o aumento da lipofilicidade destas molculas pode
favorecer a absoro cutnea das mesmas, o que no desejvel. O filtro solar deve
cobrir e proteger a pele, desenvolvendo suas atividades nas camadas superiores do
tecido cutneo, no EC (PETRAZZUOLI, 2000; NOHYNEK & SCHAEFER, 2001;
KULLAVANIJAYA & LIM, 2005).
Segundo Gonzalez (2006), uma formulao contendo 4% de benzofenona-3
(BP-3) que foi aplicada topicamente em 25 voluntrios, cerca de 3,7 % desta quantidade
de BP-3 foi encontrada na urina, durante os 10 dias da aplicao. Este ativo continou
sendo encontrado na urina, de 24 voluntrios, cinco dias aps a ltima aplicao. No
estudo de Suzuki e colaboradores (2005), as benzofenonas hidroxiladas demonstraram
uma atividade estrognica in vitro sobre as clulas mamrias cancergenas MCF-7.
De acordo com Sarveiya, Risk & Benson (2004) uma quantidade significativa
dos filtros solares como oxibenzona, p-metoxicinamato de 2-etil-hexila, octilsalicilato e
homosalato foram encontrados em camadas mais profundas do EC, 30 minutos aps a
aplicao em voluntrios. Esta quantidade encontrada diminuiu 4 horas aps a
aplicao, sugerindo que pode ter ocorrido absoro para camadas mais profundas da
pele, e aproximadamente 1% da dose aplicada de oxibenzona e seus metablitos foram
encontrados na urina aps uma nica aplicao. Alm disso, estes filtros solares
tambm foram detectados em amostras de leite materno de voluntrias (total de 16-417
ng/g de gordura) (HANY & NAGEL, 1995).
43
Sistemas nanoestruturados como lipossomas, ciclodextrinas, microsferas

polimricas e nanosferas, tm sido empregados para assegurar a presena de filtros
solares nas ltimas
camadas da pele, proporcionando maior eficcia dos
nanocosmticos. As vantagens da veiculao de ativos cosmticos em sistemas

nanoestruturados so: melhoria das propriedades biofarmacotcnicas dos ativos, como o
aumento da reteno dos ativos no EC, diminuindo sua permeao cutnea e
aumentando seu Fator de Proteo Solar (FPS); controle da liberao e aumento da
fotoestabilidade (GARCIA, 1998; SCALIA, 1998; PERUGINE, 2002; SCALIA, 2002;
YENER, 2003; JIMNEZ, 2004; MOTA, 2005).
3.4. Lipossomas.
Bargham e colaboradores (1963) foram os primeiros a descrever o
comportamento de fosfolipdios, quando colocados em soluo aquosa, formando
lipossomas a partir da agregao espontnea de molculas (BARGHAM et al., 1963).
Os lipossomas so vesculas, nas quais o veculo aquoso totalmente cercado
pela membrana composta de molculas lipdicas (FIGURA 8). As vesculas possuem
uma ou mais bicamadas lipdicas que aprisionam compartimentos aquosos. A estrutura
bsica em bicamada dos lipossomas similar das membranas celulares (ANSEL,
POPOVICH & ALLEN, 2000; GMEZ-HENZ & FERNANDEZ-ROMERO, 2006).
Os lipossomas podem ser preparados a partir de molculas de fosfolipdios que
podem ser extradas e purificadas de fontes naturais ou de sntese qumica e podem
conter outros constituintes na bicamada, como o colesterol e os polmeros hidroflicos
(LIAM & HO, 2001).
Inicialmente, os lipossomas tiveram um grande interesse como carreadores de
frmacos para a administrao intravenosa, uma vez que os lipossomas podem fundir-se
44
com a membrana plasmtica das clulas do stio alvo. Entretanto, a meia-vida dessas
substncias foi encurtada devido aos mecanismos de defesa do sistema mononuclear
fagocitrio, retirando os lipossomas rapidamente da circulao (GLAVAS-DODOV et
al., 2002).
Nos ltimos anos os lipossomas (FIGURA 8) passaram a assumir um papel
importante nas reas da dermatologia e cosmetologia. Os lipossomas tm sido
amplamente utilizados como veculo em formulaes cosmticas, em razo da sua
estrutura, a qual proporciona a encapsulao de substncias ativas hidroflicas e
lipoflicas. Os ativos lipoflicos podem ser incorporados na bicamada lipdica, e os
ativos hidroflicos so solubilizados no interior do espao aquoso (ANSEL, POPOVICH
& ALLEN, 2000; MEHNERT & MADER, 2001). Alm disto, a sua estrutura de
bicamada semelhante estrutura das membranas celulares, os que os tornam capazes
de interagir com as clulas do organismo (RAMN et al., 2005).
Sendo assim, as principais vantagens para a utilizao dos lipossomas so: baixa
toxicidade do sistema vesicular, diminuio de efeitos adversos de farmcos, aumento
da eficcia teraputica, que consiste na reduo das concentraes dos ativos nas
formulaes
lipossomais para a obteno
do mesmo efeito
teraputico
biodegradabilidade. A biodegradabilidade e a baixa toxicidade dos lipossomas so

conferidas pelos fosfolipdios que os constituem, garantindo uma grande similaridade
com as membranas celulares (SUZUKI & SAKON, 1990; NEW, 1997).
45
FIGURA 8: Estrutura do lipossoma. Disponvel em <http://www.uni-magdeburg.de.
Os lipossomas foram desenvolvidos para melhorar a biodistribuio de frmacos

em locais especficos do corpo humano. Portanto, passaram a ser reconhecidos como
transportadores de compostos biologicamente ativos, tendo a capacidade de
potencializar e/ou modificar a atividade dos compostos com os quais eles esto
associados. Este efeito dependente da composio qumica e da estrutura fosfolipdica
(GMEZ-HENZ & FERNANDEZ-ROMERO, 2006).
A transferncia ou troca de lipdios tem um efeito especial na aplicao
cosmtica, j que os lipossomas podem alterar as propriedades cutneas atravs do
fornecimento de fosfolipdios, ceramidas e colesterol e outros componentes para a pele.
Segundo Imbert e colaboradores (1994), os lipossomas aumentam as concentraes do
ativo, tanto na epiderme como na derme, e reduzem a absoro sistmica (BETZ et al.,
2005).
O caratr mimtico do lipossoma em relao s estruturas lipidicas do EC sugere
que os fosfolipdios deste sistema ligam-se superficialmente camada de queratina do
EC, recobrindo a pele com um filme lipdico. A forte afinidade da queratina pelos
lipossomas leva ruptura de algumas vesculas, e, posteriormente, os fosfolipdios no
ligados bicamada lipdica, podem penetrar nas camadas mais profundas da pele,
46
podendo desorganizar a estrutura de bicamada do EC, diminuindo a funo de barreira

(ELSAYED et al., 2007).
A analogia estrutural do EC com o lipossoma permite que o tecido cutneo
retenha este sistema nanoestruturado, promovendo um efeito reservatrio, com
liberao sustentada do ativo, proporcionando ao prolongada, melhorando a atividade
do ativo no stio alvo (VAN DER BERGH et al., 1999; BETZ et al., 2005).
A FIGURA 9 faz a comparao entre uma formulao de uso tpico
convencional e outra contendo lipossoma. Na formulao com lipossoma pode-se
observar maior concentrao deste sistema na epiderme e consequentemente maior
concentrao de ativos, e menor absoro sistmica, o que desejvel em uma
formulao tpica (PUGLIA et al., 2004; ELSAYED et al., 2007).
FIGURA 9: Demonstrao do efeito reservatrio do Lipossoma. Adaptado do Catlogo

Lipo Chemicals INC. and Biozone Laboratories INC.
A forma e o tamanho dos lipossomas depende do mtodo de preparao, da

composio dos lipdios, da fora inica do meio e do pH. Portanto, os lipossomas
47
podem ser classificados com base na sua composio, tamanho e nmero das bicamadas
lipidicas (NEW, 1997; ANSEL, POPOVICH & ALLEN, 2000).
Dentre os diferentes fosfolipdios que podem fazer parte na formao das
bicamadas vesiculares lipossomais pode-se citar: fosfatidilcolina, fosfatidilglicerol,
fosfatidilcolina hidrogenada, 1,2 dioleoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DOPC), 1-palmitoil2-oleoil-sn-glicero-3-fosfocolina
(POPC),
colesterol,
1,2-diolenoil-sn-glicero-3-
fosfoetanolamina (DOPE), diestearoilfosfatidiletanolamina (DSPE) (MELO et al.,

2003). Entretanto, as molculas de fosfatidilcolina (PC) so as mais utilizadas por
possurem carga neutra e inrcia qumica. A PC obtida de fontes naturais constituda
por uma mistura de fosfatidilcolinas, cada uma com cadeias de tamanhos diferentes e
com vrios graus de insaturao (NEW, 1997). No mercado existe uma variedade de
fosfolipdios sintticos que podem ser utilizados nas preparaes lipossomais (VEMURI
& RHODES, 1995; GMEZ-HENS & FERNNDEZ-ROMERO, 2005).
O colesterol e os agentes indutores de carga facilitam a interao das bicamadas
no processo de formao das vesculas, estabilizam os lipossomas evitando o processo
de fuso e coalscencia das vesculas e o esvaziamento do material incorporado.
Portanto, o uso de colesterol aumenta a estabilidade, e a resistncia das vesculas pela
diminuio da fluidez da membrana lipossomal. Embora o colesterol no seja essencial
para a formao dos lipossomas, ele traz outros benefcios, como o aumento da reteno
de substncias hidrossolveis e resistncia biodegradao in vivo. Na literatura
descrita a faixa de 30%-50% como uma quantidade tima de colesterol em relao
massa da membrana do lipossoma (YAROSH, 2001; LIAN & HO, 2001; ELSAYED et
al., 2007).
A FIGURA 10 mostra que o tamanho dos lipossomas pode variar de vesculas
muito pequenas (0,025 m) at vesculas grandes (3500 nm). Estes sistemas
48
nanoestruturados podem possuir membranas simples ou mltiplas bicamadas. Baseado

nesses dois parmetros, tamanho e nmero de bicamadas, os lipossomas podem ser
classificados em trs categorias: vesculas multilamelares grandes (VMG) so formadas
por mltiplas bicamadas, com dimetro que varia de 400 a 3500 nm e apresentam
grande capacidade de encapsulaode de ativos lipofilicos. Tem como principal
vantagem, a facilidade de preparo, a qual requer um mnimo de equipamentos.
Apresentam ainda maior estabilidade podendo ser armazenadas por longos tempos
(SHARMA & SHARMA, 1997); vesculas unilamelares pequenas (VUP) so formadas
por uma bicamada nica, com dimetro que varia de 25 a 50 nm. A principal vantagem
a populao de vesculas relativamente homognea. Porm, so consideradas
termodinamicamente instveis, susceptveis a agregao e fuso. Existem tambm as
vesculas unilamelares grandes (VUG), so formadas por uma bicamada nica com
elevada razo entre volume aquoso e taxa lipdica. Seu dimetro varia de 200 a 1000 nm
e sua vantagem alta capacidade de encapsulamento de ativos hidroflicos (SHARMA
& SHARMA, 1997).
VUP
VMG
VUG
VMG
FIGURA 10: Classificao dos lipossomas de acordo com o tamanho e nmero de

lamelas. Disponvel em <http://www.azonano.com/.../image002.gif.
49
A natureza e as caractersticas dos lipossomas so condicionadas pelo seu

mtodo de preparo. As VMGs geralmente so obtidas atravs do mtodo de hidratao
do filme lipdico (SANTOS & CASTANHO, 2002; ELSAYED et al., 2007). As VUGs
podem ser obtidas por diversos mtodos, como: injeo de solvente (ter ou etanol),
fuso induzida por clcio e tcnicas de evaporao em fase reversa (VEMURI &
RHODES, 1995). As VUPs podem ser preparadas a partir das VMGs ou por tcnicas
comumente empregadas como sonicao das VUGs, extruso, injeo de solvente ou
por um mtodo alternativo, atravs da injeo de etanol (SHARMA & SHARMA,
1997).
Algumas limitaes so encontradas durante o processo de manufatura e
desenvolvimento dos lipossomas, como a falta de reprodutibilidade do tamanho das
vesculas, o alto custo dos processos de produo, a instabilidade e a baixa encapsulao
dos ativos. A instabilidade fsica e qumica um fator muito importante a ser
considerado. A instabilidade fsica est relacionada com a fuso e com o crescimento
dos lipossomas, formando vesculas maiores, este processo conhecido como
coalescncia. Este processo pode levar ao rompimento das vesculas e ao
extravasamento do material encapsulado (MEHNERT & MADER, 2001; EDWARDS &
BAEUMNER, 2006). A instabilidade qumica est relacionada com a oxidao ou
hidrlise dos lipdios utilizados na formao dos lipossomas. Na hidrlise, ocorre a
formao da lisofosfatidilcolina. Estes processos qumicos resultam em mudanas na
permeabilidade da bicamada, podendo ser minimizados pela adio de antioxidantes
como -tocoferol ou BHT ou atravs da armazenagem dos lipossomas sob uma
atmosfera de nitrognio (HARRIGAN, MADDEN & CULLIS, 1990; EDWARDS &
BAEUMNER, 2006).
50
A caracterizao detalhada das estruturas dos lipossomas, incluindo distribuio

de tamanho, nmero de bicamadas e volume de encapsulao importante, pois, estes
parmetros fornecem informaes sobre diferenas na estrutura causada por mudanas
no mtodo de preparo e na composio lipdica (RUOZI et al., 2005).
A lamelaridade dos lipossomas pode ser avaliada atravs de RMN31P,
microscopia eletrnica, tcnicas baseadas nas mudanas de sinais visveis e atravs da
fluorescncia de lipdios marcados com reagentes (EDWARDS & BAEUMNER, 2006).
A determinao do tamanho mdio dos lipossomas pode ser avaliada atravs do
espalhamento dinmico de luz laser (DLS), espectroscopia de correlao de ftons
(ECF) e por diferentes tipos de microscopia, tais como: microscopia de transmisso
(MET), microscopia de varredura (MEV), tcnica de criofatura e microscopia de fora
atmica (RUOZI et al., 2005).
O contedo de fosfolipdios dos lipossomas pode ser determinado atravs do
ensaio de Bartlett, por mtodos enzimticos, por tcnicas cromatogrficas, como
cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE) e cromatografia gasosa (CG). Os
mtodos utilizados para a determinao da eficincia de encapsulao dependem da
natureza
do
material
encapsulado,
entretanto,
podem
ser
empregados:
espectrofotometria, fluorescncia, mtodos enzimticos, tcnicas eletroqumicas e

cromatogrficas (EDWARDS & BAEUMNER, 2006).
3.5. Ciclodextrinas.
As ciclodextrinas (CDs) foram descobertas por Villiers em 1891 e caracterizadas
no incio do sculo XX por Schardinger. Entretanto, estes trabalhos no resultaram na
aplicao da CD. Somente nos ltimos vinte anos seu valor foi reconhecido, devido
51
sua capacidade de incluir molculas hspedes na sua cavidade (SZEJTLI, 1988;

BREWSTER & LOFTSSON, 2007).
Atualmente, as CDs constituem uma nova classe de excipientes farmacuticos.
Estas so utilizadas principalmente com a finalidade de aumentar a solubilidade,
estabilidade e biodisponibilidade de medicamentos. A incorporao de CDs em sistemas
farmacuticos j uma realidade consolidada. Existem mais de 30 medicamentos
comercializados no mercado mundial com a presena deste excipiente em sua
composio (CUNHA-FILHO & S-BARRETO, 2007).
As CDs ou cicloamiloses so um grupo de molculas naturais cclicas
constitudas por unidades de glicopiranose unidas por ligaes 1-4. Estes
oligossacardeos so obtidos da degradao enzimtica do amido atravs da ao da
enzima ciclodextrina glicosil transferase (CGTase), que proveniente de diversos tipos
de bacilos (MASSON et al., 1999; BREWSTER & LOFTSSON, 2007) .
De acordo com espcie do bacilo e das condies da reao, trs principais CDs
podem ser produzidas: alfa (CD), beta (-CD) e gama (-CD), formadas por 6, 7 ou 8
unidades de glicopiranose, respectivamente (FIGURA 11). Portanto, estas trs CDs
naturais diferem em seu dimetro, devido ao nmero de unidades de glucopiranose
(MASSON et al., 1999; LOFTSSON & MASSON, 2001; LOPEZ et al., 2000).
FIGURA 11: Estrutura das ciclodextrinas naturais: A- CD; B- -CD e C- -CD. Disponvel
em <http://www.pharmainfo.net/files/images/stories/artic.
52
As CDs possuem forma troncocnica, como pode ser observado na FIGURA

12. Como conseqncia da conformao C1 das unidades de glicose (em forma de
cadeira), as hidroxilas secundrias (ligados a C2 e C3 das unidades de glicose) esto
localizadas no topo do lado mais largo da estrutura, enquanto que as hidroxilas
primrias (ligados a C6) esto posicionadas do lado oposto (LOFTSSON & MASSON,
2001).
FIGURA 12: Estrutura da -CD: (a) Estrutura tronco-cone e (b) Estrutura vista do topo
(UEKAMA et al., 1998).
Desta forma, as hidroxilas esto orientadas para o exterior da molcula,

tornando-a relativamente hidroflica; por outro lado, a cavidade da molcula apresentase hidrofbica devido ao carter apolar determinado pelos anis dos grupos C-H (H3 e
H5) e pelo anel dos tomos de oxignio incluindo as ligaes glicosdicas (O4 e O4`)
(VEIGA, 2002). Portanto, resultam molculas de superfcie exterior polar e uma
cavidade apolar. Devido ao carter hidroflico da superfcie exterior, as CDs so
solveis na gua, ao mesmo tempo em que disponibilizam uma cavidade apolar capaz
de formar complexo de incluso com vrios tipos de molculas hspedes.
Em soluo aquosa, a cavidade apolar das CDs contm molculas de gua que se
organizam em um agregado. Estas molculas podem ser facilmente substitudas por
outras, que sejam menos polares e possuam o tamanho adequado para se adaptarem ao
53
interior das CDs (MASSON et al., 1999; LOPEZ et al., 2000; VEIGA, 2002;
DUCHENE et al., 2003; SIMEONI et al., 2004).
As CDs so molculas relativamente grandes, com uma superfcie externa
hidratada e sob condies normais, no permeam as membranas biolgicas. Portanto, as
CDs e os seus complexos dificilmente podem ser absorvidos atravs da pele, isto ,
apenas a frao livre de frmaco vai sendo absorvida aps a descomplexao. Existe um
equilbrio dinmico entre o frmaco ligado ao complexo e o frmaco em soluo
(LOFTSSON et al., 1998b).
A membrana relativamente lipoflica tem baixa afinidade pelas molculas de
CDs hidroflicas. As CDs solubilizam ativos lipoflicos em veculos aquosos e os
disponibilizam na superfcie da pele, que podem migrar para a barreira lipoflica do EC.
Somente uma quantidade insignificante de CD e seus complexos so capazes de
penetrar na pele intacta (LOFTSSON & MASSON, 2001).
As CDs tambm podem atuar como promotores de permeao por aumentar a
biodisponibilidade do frmaco na superfcie das barreiras biolgicas. Segundo Loftsson
& Masson (2001), as CDs podem interagir com o EC alterando a sua funo de barreira,
uma vez que, podem extrair alguns componentes lipoflicos desta estrutura como
colesterol e fosfolipdios. Desta forma, aumentam a permeabilidade de frmacos atravs
da pele, mas podem causar irritao cutnea, quando utilizadas em elevadas
concentraes (BENTLEY et al., 1997; MASSON et al., 1999; LOFTSSON &
MASSON, 2001).
54
3.5.1. Derivados das ciclodextrinas.

Recentemente, vrias espcies de derivados das CDs tm sido preparadas com o
objetivo de expandir suas propriedades fsico-qumicas e a capacidade de formao de
complexo de incluso.
Em geral, os derivados das CDs podem ser divididos em trs grupos:
hidroflicos, hidrofbicos e ionizveis. Os derivados hidroflicos incluem as CDs
metiladas como a 2,6-dimetil--ciclodextrina (DM--CD), hidroxi-alquiladas, como a 2hidroxipropil--ciclodextrina (HP--CD) e CDs ramificadas tais como maltosil- ciclodextrina (G2--CD), que podem aumentar a solubilidade aquosa e a velocidade de
dissoluo de frmacos pouco solveis em gua (VEIGA, 2002).
Os derivados hidrofbicos incluem as CDs etiladas tais como 2,6-dietil-ciclodextrina (DE--CD), que pode retardar a velocidade de dissoluo de frmacos
solveis em gua. Os derivados ionizveis incluem O-carboximetil--ciclodextrina
(CM--CD) e sulfato--ciclodextrina que podem realizar aumento da capacidade de
incluso, modificaes na velocidade de dissoluo de frmacos e a reduo dos efeitos
irritante de alguns frmacos, enquanto que os hidrofbicos podem modular a liberao
de frmacos dos veculos (MATSUDA & ARIMA, 1999).
3.5.2. Formao do complexo de incluso.

Molculas ou grupos funcionais das molculas com dimenses adaptveis a
cavidade das CDs, que sejam menos hidroflicas que a gua, so candidatas incluso.
Estes sistemas podem formar complexos de incluso com muitas molculas lipoflicas
atravs de um processo, nos quais as molculas de gua localizadas dentro da sua
cavidade so substitudas pelas molculas do ativo, ou mais frequentemente, por
55
algumas estruturas lipoflicas da molcula (MASSON et al., 1999; LOFTSSON &

MASSON, 2001).
A fora que dirige a formao do complexo, pelo menos no caso da -CD e seus
derivados parece ser a liberao das molculas de gua de dentro da cavidade da CD
para o meio externo, pois no conseguem manter o potencial de ligao de hidrognio.
Sendo assim, a formao do sistema nanoestruturado ocorre atravs de interaes do
tipo Van der Walls e/ou interaes hidrofbicas. Estas interaes podem promover a
liberao estrutural das cadeias e mudanas na tenso superficial do ativo incluso.
Ligaes covalentes no esto envolvidas na formao do complexo e as molculas
localizadas dentro da cavidade esto em equilbrio dinmico com as molculas do ativo
livre que esto em soluo (MASSON et al., 1999; LOFTSSON & MASSON, 2001;
SIMEONI, SCALIA & BENSON, 2004).
As vantagens da incluso de ativos na cavidade das CDs tm sido descrita por
vrios autores (DUCHENE et al., 1996; DUCHENE et al., 2003; SIMEONI, SCALIA
& BENSON, 2004):
Aumento da estabilidade de um ativo frente hidrlise, oxidao e fotlise;
Proteo do frmaco incluso contra a ao enzimtica;
Aumento da solubilidade;
Aumento da biodisponibilidade;
Liberao controlada do ativo;
Correo de sabor e odor desagradvel;
Modificao do estado fsico do produto incluso;
Diminuio de efeitos indesejveis, efeitos secundrios e toxicidade de ativos.

No existe uma metodologia nica para realizar a formao do sistema
nanoestruturado. O mtodo de preparo deve considerar: o rendimento, a simplicidade e
56
a rapidez (DUCHENE & WOUESSIDJEWE, 1990; VEIGA, 2002; MURA,

MAESTRELLI & CIRRI, 2003). Na literatura esto descritos vrios mtodos, como:
complexao em soluo, em suspenso, macerao, co-precipitao e liofilizao
(SZEJTLI, 1988, BUDAL, 2003; CUNHA-FILHO & S BARRETO, 2007).
As propriedades fsico-qumicas das CDs e dos ativos livres so relativamente
diferentes das que estes compostos possuem quando esto complexados. Portanto,
qualquer metodologia que tenha sensibilidade suficiente pode ser utilizada para
caracterizar o sistema nanoestruturado formado. A seguir, esto descritos os mtodos
mais
empregados
na
caracterizao
destes
complexos
(LOFTSSON,
1995;
FROMMING & SZEJTLI, 1994; BUDAL, 2003; CUNHA-FILHO & S BARRETO,

2007): no estado slido, os mtodos de deteco e caracterizao mais utilizados so:
termogravimetria (TG), sistemas termoanalticos (TAS), calorimetria diferencial
exploratria (DSC), espectroscopia de infravermelho com transformata de Forrier e
Raman e difrao de raio-X; complexos em soluo podem ser caracterizados por:
espectroscopia de ressonncia magntica nuclear (RMN) de prton (1H) ou de carbono
(13C), espectroscopia de fluorescncia e UV-VIS.
3.6. Eficcia dos Filtros Solares.

A eficcia dos filtros solares depende de sua incorporao em veculos
apropriados. As propriedades hidroflicas e lipoflicas, pH, estabilidade em
temperaturas elevadas e propriedades emolientes do veculo, influenciam o fator de
proteo solar (FPS) (MARTINI & SEILLER, 2006). Alm disto, a eficcia de uma
formulao contendo filtro solar comumente determinada atravs da maior ou menor
proteo proporcionada contra a queimadura (PETRAZZUOLI, 2000; SCHULZ et al.,
2002).
57
De acordo com a ANVISA, o FPS definido pela razo de tempo de exposio

radiao ultravioleta necessrio para produzir dose mnima de eritema (DME) na pele
protegida pelo tempo de aparecimento do mesmo eritema na pele desprotegida
(EQUAO 4) (RUVOLO JNIOR, 1997; ANVISA, 2006). A DME definida como
a dose mnima de radiao ultravioleta requerida para produzir a primeira reao
eritematosa perceptvel com bordas claramente definidas, observadas entre 16 e 24
horas aps a exposio radiao ultravioleta (ANVISA, 2006).
EQUAO 4: Fator de Proteo Solar.
FPS =
Dose mnima de eritema na pele protegida

Dose mnima de eritema na pele no protegida
Alm disto, para um filtro solar ser eficaz na pele humana, ele deve: absorver a
radiao UV dissipando a energia absorvida com o mnimo impacto para os tecidos
(epiderme e derme), impedindo a formao de espcies reativas; possuir um alto
coeficiente de extino molar () na faixa de absoro do UV e ser fotoestvel.
Diversos filtros solares podem ser degradados pela radiao UV gerando subprodutos
que ao entrarem em contato direto com a pele podem promover fototoxicidade ou
dermatite de contato. A interao de produtos de fotodegradao com os demais
excipientes ou com componentes da pele pode levar formao de compostos com
propriedades toxicolgicas desconhecidas (GASPAR & MAIA CAMPOS, 2006). Os
filtros solares devem ser resistentes gua, no devem penetrar na pele e devem
permanecer aderidos na superfcie cutnea, ou seja, no EC, formando um filme
protetor.
58
Um fator que deve ser considerado durante a utilizao de formulaes

fotoprotetoras a quantidade aplicada na pele. Segundo Kullavanijaya & Lim (2005),
a maioria das pessoas aplica uma quantidade em torno de 0,5 mg/cm2 que menor que
a necessria para uma fotoproteo eficaz (2,0 mg/cm2). A reaplicao da formulao
tambm poder aumentar a eficcia da fotoproteo, e a principal razo para esta
reaplicao a de repor a quantidade de filtro solar que pode ter sido removido pela
gua, suor, frico ou areia (DIFFEY, 2002).
A substantividade ou resistncia gua de uma formulao antisolar uma
caracterstica muito importante, uma vez que, os fotoprotetores so usados ao ar livre
onde o suor abundante e as imerses em gua so freqentes (SHAATH, 1997;
PETRAZZUOLI, 2000).
De acordo com a ANVISA (2006), a eficcia das formulaes antisolares pode
ser avaliada empregando metodologias in vivo, pela determinao do FPS a seco e aps
imerso em gua, em voluntrios sadios (10 a 20) com diferentes tipos de pele (I, II, III
e IV), de ambos os sexos, com sensibilidade mediana radiao ultravioleta.
Devido aos custos envolvidos nos ensaios com voluntrios, o emprego da
metodologia in vitro uma ferramenta normalmente utilizada para os estudos
preliminares da determinao do FPS de novos filtros solares e na rotina do controle de
qualidade destas formulaes (MANSUR et al., 1986; DIFFEY, 1997; SPRINGSTEEN
et al., 1999; RIBEIRO et al., 2004).

pele natural (humana ou animal) (WISSING & MULLER, 2002; SIMEONI, SCALIA
& BENSON, 2004; JIMENEZ et al., 2004; MARTINI & SEILLER, 2006).
59
Esta metodologia tem por objetivo: conhecer o fluxo, o perfil de penetrao e/ou
permeao da substncia ativa na pele; determinar a quantidade do ativo retido nas
diferentes camadas cutneas (epiderme/derme) e a possvel presena do ativo nos
fluidos biolgicos (TOUITOU et al., 1998). Acredita-se que este comportamento
observado in vitro reflita os aspectos determinantes do processo in vivo, e por isso, esta
metodologia pode ser utilizada para determinar a disponibilidade relativa de produtos
dermatolgicos (SKELLY et al., 1987).
A pele humana seria ideal para estes estudos, porm devido baixa
disponibilidade e questes ticas e legais, modelos animais tm sido bastante utilizados,
como a pele de rato, cobaio, camundongo com e sem plo, macaco rhesus, cobra,
coelho, cachorro e sunos (HAIGH & SMITH, 1994; SCHMOOK, 2001; SHAH, 2005).
A pele suna tem sido a mais empregada devido a sua similaridade com a pele
humana (SCHMOOK, 2001; SEKKAT; KALIA & GUY, 2002; MEDI & SINGH,
2003). As caractersticas histolgicas e bioqumicas da pele suna e humana so
semelhantes em relao espessura e composio da epiderme, densidade dos plos,
contedo dos lipdios e morfologia em geral (FERRY, ARGENTIERI & LOCHNER,
1995; ANDEGA, KANIKKANNAN & SINGH, 2001).
A soluo receptora deve fornecer condies sink, ou seja, o volume empregado
deve ser cinco vezes maior que do ponto de saturao do frmaco (ZATZ, 1995). Uma
soluo tampo mais adequada para substncias hidroflicas. Para substncias
lipoflicas, o uso de aditivos solubilizantes, como, por exemplo, tensoativos ou
solventes orgnicos, s vezes se faz necessrio (MOSER, 2001). A soluo receptora
deve ser compatvel com a metodologia analtica empregada para a quantificao do
ativo.
60
Por outro lado, a determinao da velocidade de liberao do ativo destas

formulaes pode prover o controle de qualidade das mesmas. Para tal, pode-se
empregar o mesmo sistema bicompartimental com membranas artificiais como acetato
de celulose, nitrato de celulose e polissulfona (UNITED STATES, 1997; HAIGH &
SMITH, 1994), as quais no oferecem resistncia passagem do ativo do
compartimento doador para o compartimento receptor, proporcionando, desta forma,
sua quantificao neste ltimo, em funo da partio entre o veculo e o meio aceptor.
A membrana sinttica serve como um suporte para separar a formulao do meio
receptor, devendo ser quimicamente inerte para no reagir com a formulao ou com o
meio aceptor e no deve ser velocidade limitante nos processos de liberao do ativo
(HAIGH & SMITH, 1994).
Pesquisas crescentes tm sido realizadas em busca do aparato mais adequado
para avaliar a velocidade de liberao/penetrao/permeao in vitro para produtos
tpicos dermatolgicos, uma vez que, oficialmente, no existe uma padronizao que
possa ser aplicada para todas as formulaes semi-slidas.
Sendo assim, encontram-se descritos na literatura vrios modelos de clulas de
difuso, tipos de membranas artificiais, que so empregados na avaliao da velocidade
de liberao in vitro de ativos em diferentes formas farmacuticas (ALVAREZROMN et al., 2001; WISSING & MULLER, 2002; GODWIN, KIM & FELTON,
2002; YENER, INCEGL & YENER, 2003; JIMENEZ et al., 2004; SIMEONI,
SCALIA & BENSON, 2004; TURSILLI et al., 2007; MONTENEGRO et al., 2008).
Os
principais
objetivos
deste
trabalho
consistiram
em:
desenvolver
nanocosmticos contendo os sistemas nanoestruturados (lipossomas/MCO e ciclodextrina/MCO)
desenvolvidos;
avaliar
eficcia
destes
nanocosmticos
desenvolvidos, atravs dos testes de FPS in vivo a seco e aps a imerso em gua; e
61
avaliar a segurana destes nanocosmticos, atravs dos testes de penetrao e/ou

permeao in vitro utilizando um sistema bicompartiomental e membrana natural (pele
suna).
62
4. Material
4.1. Equipamentos e Acessrios
Agitador de tubos Phoenix modelo AP 56;
Agitador magntico Marte modelo MAG 15;
Agitador mecnico Fisaton modelo 713 D;
Aparelho Zetasizer Malvern modelo 210L;
Balana analtica Mettler Toledo modelo AG 204;
Balana de preciso Bioprecisa modelo FA 2104N;
Banho de gua Bunchi modelo B-480;
Banho termostatizado Quimis;
Banho de ultra-som Thorntron modelo T14;
Clulas de difuso tipo Franz, com rea de 1,96 cm2 e 7 mL de capacidade;
Centrfuga Beckman- Coulter modelo J-25;
Cubeta de cristal de quartzo;
Destilador Quimis modelo NT 425;
Difratmetro de raio- X Rigaku modelo Miniflex;
Eletrodo Digimed modelo DME CVC1;
Espectrofotmetro de Infravermelho ABB Inc modelo FTLA 2000-100;
Espectrofotmetro de Ressonncia Magntica Nuclear Varian Gemini 200

MHZ;
Espectrofotmetro Shimadzu UV modelo 1601;
Membrana de acetato de celulose marca Sigma: 27 mm de dimetro, tamanho do

poro 0,2m, 43 mm de espessura;
Membrana Filtrante 0,45 m Millipore;
Membranas de policarbonato Isospore com poro de 0,4 m;

63
Microscpio ptico Olympus, modelo BH-100, com objetiva de 100X, equipado

com cmera digital Olympus DP-100 e software de captura de imagem
FlashPath;
Microscpio ptico com luz polarizada Zeiss, modelo Axioplan 2 acoplado a

cmera digital Colorview XS e programa gerenciador de imagens Analysis;
Moinho de bolas;
Potencimetro Digimed modelo DM 21;
Placa de aquecimento com agitao magntica Corning;
Pipetas automticas 200, 1000 e 5000 L (Gilson)
Pipeta automtica para semi-slidos (modelo Transferpettor Digital 200 1000

L, marca Brand);
Rotaevaporador Bchi modelo R-114;
Seringas descartveis de 5,0 mL Beckton & Dickson;
Sistema de Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (CLAE) isocrtico:

Bomba para CLAE Waters 510
Coluna cromatogrfica Hibar LiChrosorb RP -18 de 5 e 25 cm;
Detector Ultravioleta Waters 486
Injetor manual Rheodyne 7725
Integrador Waters 746
Sistema filtrante Millipore 142 mm filter holder;
Ultra Turraz
Unidade filtrante descartvel 0,45 m de poro, Millipore;
64
4.2. Reagentes
Acetonitrila para CLAE;
cido actico glacial;
cido clordrico P.A;
gua destilada;
cido sulfrico P.A;
Brometo de potssio;
Cloreto de sdio;
Clorofrmio P.A;
Etanol P.A;
Fosfato de sdio dibsico;
Fosfato de potssio monobsico;
Metanol para CLAE;
Metanol P.A;
Molibdato de amnio;
Perxido de Hidrognio;
Soluo de etanol a 25% (v/v);
Soluo de molibdato de amnio;
Soluo padro de fsforo 0,65 mM;
Soluo tampo TRIS pH = 6,8;
TRIS Tris [hidroximetil] aminometano;
Tween 80 P.S;
65
4.3. Matrias Primas
cido ascrbico;
Ciclodextrina grau farmacutico;
Butilhidroxitolueno (BHT);
Colesterol;
Disperso de metilparabeno, propilparabeno, etil e butilparabenos dispersos em

fenoxietanol (Phenova);
Fosfatidilcolina (Lipoid 100 );
Fosfato de Hidroxipropilamido (Structure XL);
Lauril glucosido, poligliceril 2- dipolihidroxiestearato e glicerina (Emulgin VL

75);
p- Metoxicinamato de Octila.
66
5. Mtodos.
5.1. Caracterizao Fsico-Qumica do Filtro Solar p- Metoxicinamato de Octila
(MCO).
No nicio deste trabalho, no havia no mercado substncia qumica de referncia
para MCO, desta forma, utilizou-se como padro de trabalho a matria prima com teor
de pureza declarado, adquirida atravs da empresa Galena. Esta matria prima foi
avaliada de acordo com os espectros de ultravioleta e infravermelho, sendo comparada
com os resultados obtidos com especificaes encontradas na literatura.
5.2.1 Anlise do Espectro de Absoro na Regio do Ultravioleta do MCO.

O espectro de absoro na regio do ultravioleta visvel (UV) pode auxiliar na
confirmao de identidade de um composto comparando o espectro da substncia em
estudo com a identidade presumida do padro. Os dados de mx e mx podem ser
comparados com valores em tabelas e fornecer indicaes sobre o tipo de cromforo
existente no composto (SOARES, 2006).
A anlise do MCO foi realizada utilizando o espectrofotmetro SHIMADZU
UV1601PC. Os espectros no ultravioleta foram obtidos atravs da leitura em triplicata
de solues etanlicas a 8,22 mg/L, para a determinao do comprimento de onda
mximo ( mx) e clculo do coeficiente de extino molar (). Os parmetros
utilizados foram: varredura de 450 a 220 nm, usando cubetas de quartzo de um cm e
etanol P.A. como branco.
Em estudos anteriores os valores de concentrao e o mximo do MCO foram
determinados e responderam linearmente a lei de Beer. Trs curvas padro foram
construdas, cada uma com cinco pontos (2, 4, 6, 8 e 10 g/mL), sendo utilizada uma
curva padro referente mdia das trs determinaes.
67
Foram pesados 10 mg do MCO, os quais foram diludos em balo volumtrico

de 100 mL em etanol, avolumando-se o mesmo para obter uma soluo de concentrao
igual a 100 g/mL, considerada soluo-me. Em seguida, tomaram-se alquotas desta
soluo me com a finalidade de obter solues de concentraes iguais s citadas
acima. Foram realizadas medidas das absorbncias das solues no comprimento de
onda de absoro mxima do MCO (310 nm).
O coeficiente de correlao e a equao da curva padro foram calculados com
auxlio do programa Excel empregando os valores de absorbncia.
5.2.2. Anlise do MCO por Espectroscopia de Infravermelho.

A espectroscopia de infravermelho (IV) tem se mostrado uma ferramenta muito
til para a confirmao da identidade de grupos funcionais, atravs dos diferentes
modos de vibrao e rotao existentes na molcula. Portanto, esta tcnica fornece
informao estrutural a partir das freqncias de absoro caractersticas de cada grupo
funcional (SOARES, 2006).
Para a obteno do espectro de absoro no IV, uma gota de MCO foi espalhada
entre placas de cristal de cloreto de sdio e em seguida foi realizada a determinao no
aparelho ABB Inc, modelo FTLA 2000- 100, na faixa de 400 a 4000 cm-1, regio de
interesse para fins analticos.
5.3. Formao do Sistema Nanoestruturado -CD/MCO.

5.3.1. Sistema Nanoestruturado -CD/MCO.
A incluso do filtro MCO em -CD foi realizada empregando o mtodo de
kneading ou empastagem. Esta tcnica baseia-se na mistura da ciclodextrina com a
molcula hspede, seguida da adio de pequenas quantidades de solvente. O calor
68
gerado pelo atrito a energia responsvel por catalisar o processo de incluso. Este
mtodo o mais indicado para substncias insolveis em gua (MARQUES, 1994;
DUCHENE et al., 1993, COELHO et al., 2008).
Em um gral de porcelana foram misturados por cinco minutos, com auxlio de
um pistilo, 14,6 g de -CD e 7,4 g de MCO, na proporo de 2:1. Foi adicionado a esta
mistura 1,0 mL de uma soluo de etanol a 70%, adquirindo o conjunto um aspecto
ganulado. O produto restante, 22 g da massa total, foi transferido para um moinho de
bolas constitudo de um cilindro de 11 cm de comprimento por 8 cm de dimetro, que
possui uma carga de bolas de porcelana igual a 75,35 g. A mistura foi deixada no
moinho por 1 hora. A seguir foi seca em estufa a 55C por 30 minutos.
5.3.2. Purificao do Sistema Nanoestruturado -CD/MCO.

A purificao do sistema nanoestruturado -CD/MCO foi realizada de acordo
com Mota (2005). O produto foi colocado sobre o funil de Buncher e lavado com 20 mL
de soluo de metanol 50% v/v, objetivando purificar o complexo. Esta operao foi
realizada apenas 1 vez. Aps este procedimento, o complexo foi triturado em um gral e
levado por mais 1 hora a estufa a 40 C, para retirar o excesso de solvente.
5.3.3. Caracterizao do Sistema Nanoestruturado -CD/MCO.

a) Espectrometria de Ressonncia Magntica Nuclear de Hidrognio (RMN 1H).
Espectrometria de Ressonncia Magntica Nuclear de Hidrognio (RMN 1H)
representa uma das ferramentas mais poderosas para a caracterizao do complexo de
incluso. Esta tcnica fornece informaes estruturais nicas sobre a estequiometria, a
constante de estabilidade e a orientao molecular do frmaco dentro da cavidade da
CD (FIELDING, 2000). Uma amostra pode absorver radiao eletromagntica na regio
69
de radiofreqncia (rf), sendo que esta absoro ser proporcional aos ncleos da
molcula (SILVERSTEIN et al., 1994).
As amostras da matria prima MCO e do sistema nanoestruturado -CD/MCO
purificado foram solubilizadas a uma concentrao de 10 mM em DMSO-d6 e
analisados por espectrofotmetro de ressonncia magntica nuclear Varian Gemini 200 MHZ, uma dimenso.
b) Difrao de Raios X (XDR).

A difrao de raio X (DRX) uma tcnica cristalogrfica muito empregada
devido a sua simplicidade e rapidez. Na DRX a interao entre o vetor eltrico de
radiao X e os eltrons do material a ser analisado resultam em uma disperso. Sendo
assim, quando os raios X sofrem disperses devido a estruturas organizadas presentes
no cristal, ambas as interferncias, construtiva e destrutiva, surgem entre os raios
dispersos, uma vez que as distncias entre os centros de disperso so de mesma ordem
de magnitude do comprimento de onda da radiao, resultando deste modo na difrao
(SOARES, 2006).
As amostras da matria prima -CD, -CD mistura fsica, ou seja, que foi
submetida ao mesmo processo de incluso que o sistema nanoestruturado -CD/MCO
e o sistema nanoestruturado -CD/MCO foram analisadas em Difratmetro de Raios
X operado a 40KV e 30mA. O ngulo de difrao 2 foi registrado de 1 a 20 em
temperatura ambiente e a radiao CuK foi utilizada como fonte dos raios X.
c) Espectrometria de Infravermelho.
A tcnica de espectroscopia de infravermelho muito utilizada na
caracterizao de sistemas slidos com CDs, por serem determinaes rpidas e
70
precisas. Baseiam-se na diferena vibracional das ligaes qumicas presentes em

diversas substncias. Diferenas de polimorfismo, estrutura cristalina, grau de
hidratao ou outras caractersticas macroscpicas das substncias podem gerar
diferenas no espectro, j pequenas impurezas presentes na amostra no alteram
significativamente o espectro (SILVERSTEIN et al., 1994; CUNHA-FILHO & SBARRETO, 2007).
Nesta metodologia, a regio intermediria na faixa de 400 a 4000 cm-1 do
espectro eletromagntico a mais empregada para fins de identificao. Cerca de 3 mg
do sistema nanoestruturado -CD/MCO (amostra slida) foram triturados com 300 mg
de brometo de potssio seco e pulverizado, homogeneizado e introduzido em molde
para a compresso em prensa hidrulica. A pastilha obtida foi fixada em suporte e
submetida leitura. Tambm foi realizada a anlise das matrias primas MCO e -CD
por espectrometria de infravermelho com a finalidade de comparar as diferenas
existentes entre o espectro de infravermelho destas matrias primas com o espectro de
IV do sistema nanoestruturado -CD/MCO.

Nanoestruturado -CD/MCO.
A espectrofotometria de UV um mtodo que se caracteriza por realizar
medidas quantitativas com elevada sensibilidade. Por isso, uma tcnica bastante
utilizada nos estudos de incluso (CUNHA-FILHO & S-BARRETO, 2007).
Para o slido proveniente do mtodo de incluso kneading, foram pesados 60 mg
de cada uma das amostras secas, dissolvidas em 100 mL de solvente (o mesmo utilizado
para a incluso) e dessa soluo, foram retiradas alquotas de 1 mL com a pipeta
volumtrica e posteriormente diludas a 100 mL. Foi realizada a leitura no UV no
71
comprimento de onda de absoro mxima para a molcula hspede (310 nm). A

concentrao foi calculada de acordo com a equao da reta encontrada para o MCO.
5.4. Formao do Sistema Nanoestruturado Lipo/MCO.

Os lipossomas foram obtidos atravs do mtodo de hidratao do filme lipdico.
Este mtodo j foi descrito em estudos anteriores com filtros solares (GARCIA, 1998;
MOTA, 2005), alm disso, permite uma alta capacidade de incorporar substncias
lipofilicas, como por exemplo, o MCO. A concentrao de 72,00 mM de MCO (20%
em relao ao total de lipdios) foi utilizada por j ter sido escolhida como a melhor em
estudos anteriores (GARCIA, 1998).
A fase oleosa foi composta de 280 mMol/mL de fosfatidilcolina (LIPOID
100%), 80 mMol/mL de colesterol e 72 mMol/mL de MCO (TABELA 1). Foram
calculadas as massas de todos os constituintes utilizados para obter 50 mL da suspenso
lipossomal.
A FIGURA 13 descreve o processo de produo dos lipossomas pelo mtodo do
filme fosfolipdico. Foram pesados exatamente cerca de 10,85 g de Lipoid 100%
1,55 g de colesterol e 3,6 g de MCO diretamente em um balo com fundo redondo de 1

L. Esta fase oleosa foi dissolvida com auxlio de aproximadamente 20 mL de
clorofrmio P.A, sendo que a utilizao de solventes orgnicos tambm garante a
distribuio uniforme dos lipdios da bicamada lipdica.
Agitou-se a mistura at
completa solubilizao dos constituintes.

Em seguida o balo de fundo redondo contendo a mistura foi levado ao rota
evaporador, sob vcuo, onde permaneceu sob aquecimento em banho-maria
temperatura de aproximadamente 40 C, com rotao lenta por 2 horas e inclinao do
72
balo de forma a obter um filme fino e homogneo na parede interna. Para garantir toda
a retirada do solvente, o balo permaneceu por 24 horas no dessecador a vcuo. Aps
este tempo, foi verificada a presena de solvente residual, e se ainda houvesse solvente
o balo era levado novamente ao rota evaporador, com a finalidade de remov-lo por
completo.
Somente
aps
evaporao
completa
do
solvente,
foi
adicionado
aproximadamente 50 mL de soluo tampo TRIS pH 6,8, e algumas prolas de vidro

com o objetivo de hidratar o filme lipdico. Este balo foi submetido a agitao em
vrtex at observar o completo desprendimento do filme atravs do atrito destas perlas
com o filme lpidico. Com a hidratao do filme lipdico, as vesculas desprendidas iro
se fechar formando as primeiras vesculas. Este processo lento, portanto o balo foi
deixado em repouso por 96 horas sob refrigerao (4C). Estudos recentes demonstaram
que o aumento do tempo de hidratao de vinte quatro para noventa e seis horas
permitiu a formao de um maior nmero de vesculas, com a liberao de todo filme
aderido ao balo (SANTOS, 2007).
TABELA 1: Composio da suspenso lipossomal.
Componentes
Concentraes
Fase Oleosa
Lipoid 100%
280,00 mM/mL
Colesterol
80,00 mM/mL
p-metoxicinamato de octila
72,00 mM/mL
Fase Aquosa
Tampo TRIS
50 mL
73
FIGURA 13: Processo de obteno dos lipossomas atravs do mtodo de hidratao do filme
lpidico. Etapa 1: Adio dos componentes. Etapa 2: Formao do filme lpidico. Etapa 3:
Adio de soluo aquosa. Etapa 4: Agitao da mistura. Etapa 5: Uniformizao dos
lipossomas (MIRANDA, 2005).
5.4.1. Normalizao dos Lipossomas.

Os lipossomas preparados foram filtrados em filtro Millipore com membrana
de policarbonato de 0,4 m e gs nitrognio para pressionar a passagem do material,
objetivando a normalizao do seu tamanho. A filtrao nesta membrana deveria ser
realizada duas vezes, porm a suspenso lipossomal era muito viscosa e requeria uma
presso muito grande no sistema, impedindo a realizao da mesma, alm de promver
grande perda do material.
Sendo assim, as suspenses lipossomais foram homogeneizadas no Ultra Turraz
a 10000 rpm durante 1minuto. Em seguida, foram filtrados na membrana de 0,4 m, e
por ltimo, os lipossomas foram passados novamente no ultra Turraz a 10000 rpm,
durante 1 minuto, a fim de completar a normalizao de seu tamanho.
74

A tcnica de microscopia ptica no descrita na literatura como uma tcnica
utilizada para avaliar as propriedades morfolgicas dos lipossomas, devido ao tamanho
das vesculas lipossomais estarem na faixa de nanmetros. Entretanto, esta metodologia
pode ser utilizada como uma ferramenta capaz de evidenciar a forma das vesculas
lipossomais grandes, na faixa de micrmetros.
A microscopia ptica foi realizada em microscpio Axoplan 2 da Zeiss, com
sistema de captura de imagem e cmeras de vdeo e fotogrfica acopladas ao
microscpio e ao computador. Aps o preparo e a normalizao da suspenso contendo
os lipossomas, esta foi submetida microscopia ptica de luz polarizada para confirmar
a formao dos lipossomas. A primeira microscopia foi realizada com a suspenso
lipossomal in natura. A amostra foi depositada sobre uma lmina e coberta com uma
lamnula, para a observao em microscpio, utilizando objetiva com aumento de 100
vezes.
A suspenso lipossomal in natura foi diluda objetivando aumentar a resoluo
da visualizao. A diluio foi realizada no momento da visualizao, utilizando uma
soluo de etanol a 25%. Esta diluio deve ser realizada no momento da determinao,
pois o etanol tende a romper as vesculas com o passar do tempo.
Seguindo a metodologia de HENRIQUES (2008) foram pipetados 200 L da
amostra, em um balo volumtrico de 25,0 mL, com etanol a 25 % (v/v). Aps a
homogenizao com auxlio da pipeta Pasteur, foi retirada uma gota desta soluo e
colocada sobre a lmina e coberta com lamnula. As lminas foram observadas
utilizando uma objetiva de 100 vezes, imediatamente aps sua preparao, para evitar o
rompimento das vesculas.
75
5.4.3. Espalhamento Dinmico da Luz.

O espalhamento dinmico da luz est baseado no comportamento de um feixe de
luz emitido por uma lmpada de laser de hlio-neon, por partculas menores que 1 m
suspensas em um meio.
Quando o feixe laser encontra as partculas em suspenso, a luz espalhada,
podendo ser medida a intensidade e a freqncia deste espalhamento, sendo estas
medidas convertidas para o tamanho mdio das partculas em suspenso. Desta forma,
as medidas feitas pelo DLS fornecem os dimetros das partculas em suspenso de trs
formas diferentes: dimetro hidrodinmico (Z), dimetro mdio pelo volume e
dimentro mdio pela intensidade. Caso estes dimetros se assemelhem, pode-se dizer
que se tem uma disperso homognea (LOBO, 2005).
O tamanho, a distribuio do tamanho e o ndice de polidispersividade dos
lipossomas foram determinados por equipamento de luz a laser (Multi Angle Particle
Sizing Option, Brookhaven, USA). O ngulo de deteco foi de 90 e o comprimento de
onda para as leituras foi de 633 nm (ESPOSITO et al, 2007). As amostras foram
diludas em gua purificada na concentrao de 1:1000, sendo procedida leitura em
uma cela de quartzo de 1 cm de caminho ptico. A temperatura foi controlada e mantida
a 25C. As amostras foram analisadas trs vezes. E os dados obtidos foram integrados
com auxlio do software MAS OPTION.

Nanoestruturado Lipo/MCO.
A determinao da quantidade de MCO incluso no sistema nanoestruturado
Lipo/MCO foi realizada por espectrofotometria de UV. Os valores de absorbncia
76
foram determinados no mx (310 nm) caracterstico deste filtro solar. Inicialmente, foi
pesada uma quantidade de filtro solar para o preparo do lipossoma; posteriormente,
foram realizadas diluies das amostras em etanol P.A objetivando obter concentraes
prximas a do ponto central da curva padro (6 g/mL).
A anlise do sistema nanoestruturado Lipo/MCO foi realizada em triplicata,
utilizando etanol P.A como branco. A concentrao e o percentual do MCO
encapsulado foram determinados atravs da equao da reta da curva padro do filtro
solar.
5.4.5.
Determinao
da
Quantidade
de
Fosfolipdio
na
Matria-Prima
Fosfatidilcolina e na Suspenso Lipossomal.

O mtodo utilizado para a anlise de fsforo foi o mtodo de Bartlett
(BARTLETT, 1959). um mtodo indireto e colorimtrico utilizado para dosar a
quantidade dos fosfolipdios nos lipossomas e nas lecitinas comerciais, atravs da
avaliao do contedo de fsforo na amostra.
O ensaio foi realizado em uma placa de aquecimento para tubos de ensaio, na
qual foram colocados 3 tubos para o branco, 3 tubos para cada frao da amostra
analisada (Lipoid 100%) e 4 tubos contendo um volume crescente de uma soluo
padro de fsforo 0,65 mM (50, 100, 150 e 200 L). O mesmo procedimento foi
utilizado para a determinao do teor de fosfatidilcolina nos lipossomas.
As amostras em triplicata foram diludas em etanol, baseando-se na massa
inicial de fosfolipdio presente, para obter solues finais com concentrao de
aproximadamente 1g de fsforo/mL (Lipoid 100%) e solues finais com a
concentrao de 2,1g de fsforo/mL (Lipossoma). Foram pipetados 1,0 mL de cada
soluo diluda para cada tubo de ensaio; em trs tubos foram pipetados 1,0 mL de
77
etanol que serviram de brancos enquanto quatro tubos continham volumes crescentes de
soluo padro de fsforo para a construo da curva padro (FIGURA 14).
Em seguida, foram adicionados 400 L de uma soluo de cido sulfrico a 10%
em todos os tubos de ensaio, com a temperatura variando de 180 a 195oC durante trinta
minutos. Os tubos foram resfriados. Nesta etapa as amostras contendo fosfolipdio
sofreram uma hidrlise cida, transformando os fosfolipdios em fosfato inorgnico.
Na segunda etapa, foram adicionados a todos os tubos de ensaio, 100 L de
soluo de perxido de hidrognio a 10% v/v. Os tubos foram aquecidos novamente
com a temperatura variando de 180 a 195oC durante trinta minutos. Em seguida, os
tubos foram resfriados novamente.
A terceira etapa foi realizada adicionando 4,6 mL da soluo de molibdato de
amnio em todos os tubos. E a ltima etapa consistiu na adio de 500 L de soluo de
cido ascrbico a 10% p/v. Os tubos foram aquecidos a 90 oC em placa de aquecimento
durante 20 minutos. Na etapa final o fosfato inorgnico formado anteriormente reage
com o molibdato de amnio formando o cido fosfomolbdico. Este por sua vez forma
um complexo azul, na presena de cido ascrbico como agente redutor.
A intensidade da cor azul diretamente proporcional quantidade de fsforo
presente e medida espectrofotometricamente. As absorbncias das amostras, branco e
do padro de fsforo foram determinadas em de 800 nm. Dessa forma, foi fornecido o
contedo de fsforo e, consequentemente, o contedo de fosfolipdio atravs de uma
curva padro construda.
Portanto, o objetivo desta anlise para o fosfolipdio (Lipoid 100%) foi
determinar o teor real de fosfatidilcolina na matria prima comparando com o teor
declarado pelo fabricante. No caso da suspenso lipossomal contendo o fosfolpidio, o
78
objetivo foi verificar o rendimento da preparao comparando a quantidade real de

fosfatidilcolina com a massa adicionada.
Amostra diluda
Alquota de 1,0 mL
Etapa I:
1) 0,4 mL H2SO4 10 N
2) Aquecimento 180C/ 30 min
Etapa II:
3) 0,1 mL H2O2 10 %
Etapa III:
5) 4,6 mL Molibdato de amnio
6) 0,5 mL cido ascrbico 10%
8) Leitura em espectrofotmetro, plotar as
absorbncias na curva padro.
Teor de Fosfro
FIGURA 14: Representao esquemtica do mtodo de Bartlett para a determinao do teor de
fsforo (SANTOS, 2007).
79
5.5. Desenvolvimento das Formulaes.

As formulaes do tipo gel creme so constitudas por uma base em gel,
emulsificantes e substncias oleosas, adquirindo um aspecto leitoso. O gel creme uma
emulso cuja fase aquosa previamente gelificada pelo polmero hidrfilo gelificante.
Os agentes gelificantes empregados na formao do gel creme so geralmente os
mesmos utilizados para a obteno de um hidrogel convencional (FERREIRA, 2002;
MARTINI, 2005).
Neste
trabalho,
polmero
gelificante
utilizado
foi
fosfato
de
hidroxipropilamido, que possui um carcter no inico, derivado do amido, compatvel

com a fosfatidilcolina e com a -ciclodextrina; desse modo no interage com os
complexos de incluso e conseqentemente protege a integridade destes sistemas e dos
nanocosmticos desenvolvidos. Alm de apresentar outras vantagens como a facilidade
de preparo e resistncia a uma ampla faixa de pH.
Inicialmente, foi preparado um gel creme contendo 8% do filtro solar livre
(MCO) (TABELA 2), objetivando comparar a segurana e a eficcia desta formulao
com o gel creme contendo os sistemas nanoestruturados (-CD/MCO e lipo/MCO).
80
TABELA 2: Composio do gel creme: com MCO livre e com os sistemas nanoestruturados CD/MCO, Lipo/MCO e com ambos -CD/MCO + Lipo/MCO.
Composio
MCO Livre
-CD/MCO
LIPO/MCO
-CD/MCO +
LIPO/
MCO
5%
5%
5%
5%
q.s.p 100 mL
q.s.p 100 mL
Fase A
Fosfato de
Hidroxipropilamido
gua
q.s.p 100 mL q.s.p 100 mL
Fase B
Lauril glucosido,
poligliceril 2dipolihidroxiestearato
e glicerina
3%
3%
3%
3%
0,5%
0,5 %
0,5 %
0,5 %
8%
4%
4,75 %
4,38 %
0,05%
0,05 %
0,05 %
0,05 %
Complexo -CD/
MCO
13,26 g = 4 g
de MCO
6,63 g = 2 g de
MCO
Complexo Lipo/
MCO
Disperso de
metilparabeno,
propilparabeno, etil e
butilparabenos
dispersos em
fenoxietanol
p- Metoxicinamato de
octila
Butilhidroxitolueno
50 mL = 3,25 25 mL = 1,62 g de
g de MCO
MCO
81
No preparo do gel creme com MCO livre, o polmero fosfato de

hidroxipropilamido foi disperso na gua, lentamente, sob agitao constante.
Separadamente, foi preparada a fase B, solubilizando o MCO com auxlio do lauril
glucosido-poligliceril 2-dipolihidroxiestearato-glicerina, em seguida foi adicionada
disperso de parabenos dispersos em fenoxietanol e o butilhidroxitolueno. A fase A foi
vertida na fase B e mantida sob lenta agitao, at completa homogeneizao das duas
fases.
Na formulao gel creme contendo o sistema nanoestruturado -CD/ MCO parte
dos 8% de MCO (aproximadamente 50%) est incluso na -CD e a quantidade restante
do MCO foi incorporada como filtro livre (TABELA 2). No preparo deste
nanocosmtico, o polmero, fosfato de hidroxipropilamido, foi disperso na gua,
lentamente, sob agitao constante. Separadamente, foi preparada a fase B,
solubilizando o filtro MCO com auxlio do lauril glucosido-poligliceril 2dipolihidroxiestearato-glicerina. O sistema nanoestruturado -CD/MCO foi solubilizado
com gua e agitado lentamente. Verteu-se a fase A sob o complexo solubilizado,
mantendo a agitao at completa homogeneizao. A mistura resultante foi vertida
sobre a fase B e homogeneizada.
Na formulao contendo o sistema nanoestruturado Lipo/MCO parte dos 8% do
MCO (aproximadamente 50%) foi inclusa no lipossoma e o restante foi incorporado
como filtro livre (TABELA 2). O polmero, fosfato de hidroxipropilamido, foi disperso
na gua, lentamente, sob agitao constante. Separadamente, foi preparada a fase B,
solubilizando o filtro MCO com auxlio do lauril glucosido-poligliceril 2dipolihidroxiestearato-glicerina. Adicionou-se o complexo Lipo/MCO formado sobre a
82
fase B. Em seguida, foi adicionada a fase A sob a fase anterior. O sistema foi agitado,
por alguns minutos e em seguida, homogeneizado no ultra turraz.
Na formulao gel creme contendo ambos os sistemas nanoestruturados, CD/MCO e Lipo/MCO, parte dos 8% de MCO, aproximadamente 25% do filtro foi
incluso no lipossoma, aproximadamente 25% do filtro incluso em -CD e
aproximadamente 50% estava sob a forma de filtro livre (TABELA 2). Esta formulao
contendo os dois sistemas foi desenvolvida com o objetivo de avaliar um possvel
sinergismo e/ou interao entre os complexos de incluso desenvolvidos. Nesta
formulao, o polmero fosfato de hidroxipropilamido, foi disperso na gua, lentamente,
sob agitao constante. Separadamente, foi preparada a fase B, solubilizando o filtro
MCO com auxlio do lauril glucosido-poligliceril 2-dipolihidroxiestearato-glicerina. O
sistema nanoestruturado -CD/MCO foi solubilizado em gua e adicionado sobre a fase
B. Em seguida adicionou-se o sistema Lipo/MCO sobre esta fase. Verteu-se a fase A
sobre a fase B e deixou se sob agitao por alguns minutos. Em seguida, foi
homogeneizado no ultra turraz.
5.6. Padronizao da Metodologia de Anlise do MCO nas Formulaes

Desenvolvidas por Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (CLAE).
O MCO possui peso molecular de 290,4 e o ponto de ebulio na faixa de 185195 C, a 1 mbar. um lquido oleoso, insolvel em gua, propilenoglicol e glicerina,
muito solvel em etanol, leo mineral, isopropanol, ter, leos vegetais e leos de
silicones. O coeficiente de partio octanol-gua, de log P = 5,96 (MARTINDALE,
1999; JIMNEZ et al., 2004).
A metodologia analtica utilizada para identificar e quantificar o MCO nos
nanocosmticos desenvolvidos foi baseado nos estudos realizados por MOTA (2005);
83
parmetros como seletividade, linearidade e preciso do mtodo foram co-validados

segundo a legislao vigente (ANVISA, 2003).
Esta anlise foi realizada no cromatgrafo Waters, com injetor manual, provido
de detector ultravioleta e integrador eletrnico. Foi utilizado um sistema CLAE
isocrtico, equipado com a coluna cromatogrfica Hibar LiChrosorb RP 18 de 5 e 25
cm, pr-coluna (C18), mantida a temperatura ambiente, loop de 20 L, fluxo de 1,0
mL/min, tempo de reteno de 7,8 minutos e fase mvel composta por metanol: gua na
proporo de 87:13. O comprimento de onda de deteo foi fixado em 310 nm,
correspondente ao mx encontrado por espectrofotometria de varredura na regio do
UV, de uma soluo de MCO a 10 g/mL preparada na fase mvel metanol: gua
(87:13).
As amostras provenientes dos ensaios de liberao e dos ensaios de
penetrao/permeao cutnea tambm foram analisadas por CLAE, utilizando mesma
metodologia descrita acima.
5.6.1 Preparo das Solues de Trabalho.

Uma soluo de estoque contendo 250 g/mL de MCO foi preparada por meio
da solubilizao de cerca de 0,025 g de MCO, exatamente pesados, em 100 mL de fase
mvel . A partir dessa soluo, foram realizadas cinco diluies, utilizando a fase mvel
como solvente, de modo a obter concentraes de 2,5; 5; 10; 15 e 20 g/mL de MCO.
Todas as solues foram filtradas em filtros Millipore com 0,45 m antes da injeo no
cromatgrafo.
84
5.6.2. Preparo das Amostras para a Quantificao do Teor de MCO nos

Nanocosmticos Desenvolvidos.
Foram pesados com exatido cerca de 0,125 g de cada nanocosmtico
desenvolvido, transferidos para balo volumtrico de 100 mL e diluda com a fase
mvel. As solues foram levadas ao banho de ulra-som por 12 minutos, at a total
solubilizao, e completou-se o volume com a fase mvel. Foi retirada uma alquota de
1,0 mL dessa soluo e transferida para um balo de 10,0 mL, e o volume completado
com a fase mvel. Esta soluo foi filtrada em filtros Millipore com 0,45 m antes da
injeo no cromatgrafo.
5.6.3 Parmetros Avaliados por CLAE.

De acordo com a Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (2003), a validao
deve garantir, atravs de estudos experimentais, que o mtodo atenda s exigncias das
aplicaes analticas, assegurando a confiabilidade dos resultados.
Normalmente, os parmetros analticos encontrados para validao de mtodos
de separao so: seletividade; linearidade e faixa de aplicao; preciso; exatido;
limite de deteco; limite de quantificao e robustez (RIBANI et al., 2004).
A) Seletividade ou Especificidade.
A seletividade ou especificidade de um mtodo instrumental de separao a
sua capacidade de diferenciar e quantificar a substncia de interesse na presena de
outros
componentes
na
amostra
(INTERNATIONAL
CONFERENCE
ON
HARMONISATION, 1995; ANVISA, 2003). A seletividade garante que o pico de

resposta seja exclusivamente do composto de interesse. Esta foi avaliada comparando
uma matriz isenta da substncia de interesse (branco) e uma matriz adicionada com esta
85
substncia (padro) na concentrao de 8%, sendo que nesse caso, nenhum interferente
deve eluir no tempo de reteno da substncia de interesse, ficando separada dos demais
compostos presentes na amostra.
B) Linearidade.
A linearidade de um procedimento corresponde a sua capacidade em fornecer
resultados diretamente proporcionais concentrao da substncia em anlise, dentro de
uma determinada faixa de aplicao (INTERNATIONAL CONFERENCE ON
HARMONISATION, 1995; ANVISA, 2003). A linearidade da curva padro foi
avaliada por meio do coeficiente de determinao (r2).
O intervalo da curva padro deriva do estudo de linearidade do mtodo e
depende do objetivo de sua aplicao (INTERNATIONAL CONFERENCE ON
HARMONISATION, 1995; ANVISA, 2003). A faixa de variao corresponde ao
intervalo entre a concentrao superior e inferior da substncia analisada que atenda aos
requisitos de preciso, exatido e linearidade (RIBANI et al., 2004). O intervalo de
concentrao (2,5, 5, 10, 15 e 20 g/mL de MCO) foi obtido avaliando-se esses
parmetros para os valores utilizados para a construo da curva padro obtida em cada
experimento com padro de trabalho de MCO lote CIQ 0609021702/MERCK.
C) Preciso.
A preciso representa a disperso de resultados entre ensaios independentes,
repetidos de uma mesma amostra, amostras semelhantes ou padres, sob condies
definidas (INTERNATIONAL CONFERENCE ON HARMONISATION, 1995;
ANVISA, 2003). A preciso uma medida, normalmente expressa quantitativamente
em termos de impreciso e computada como desvio padro (s), desvio padro relativo
86
(DPR) ou coeficiente de variao (CV). considerada em trs nveis: repetitividade

(preciso intra-dia), preciso intermediria (preciso inter-dia) e reprodutibilidade. A
preciso foi avaliada pelo desvio padro (s) e desvio padro relativo (DPR) e
repetitividade.
D) Exatido.
A exatido representa o grau de concordncia entre os resultados individuais
encontrados em um determinado ensaio e um valor de referncia aceito como
verdadeiro (INTERNATIONAL CONFERENCE ON HARMONISATION, 1995;
ANVISA, 2003). Os processos mais utilizados para avaliar a exatido de um mtodo
so: materiais de referncia; comparao de mtodos; ensaios de recuperao e adio
de padro (RIBANI et al., 2004). A exatido do mtodo foi avaliada pelo ensaio de
recuperao da quantidade de MCO extrada, adicionada a um branco da matriz em
anlise (pele suna).

A eficcia de uma formulao contendo filtro solar comumente determinada
atravs da maior ou menor proteo proporcionada contra a queimadura. De acordo com
ANVISA, o FPS definido pela razo de tempo de exposio radiao ultravioleta
necessria para produzir dose mnima de eritema (DME) na pele protegida pelo tempo
de aparecimento do mesmo eritema na pele desprotegida (aps aplicao de 2 mg/cm2
do produto) (RUVOLO JNIOR, 1997; ANVISA, 2006).
Sendo assim, a eficcia das formulaes anti-solares pode ser avaliada
empregando metodologias in vivo, determinao do FPS a seco e aps imerso em gua,
87
em voluntrios sadios (10 a 20) com diferentes tipos de pele (I, II, III e IV), de ambos os
sexos, com sensibilidade mediana radiao ultravioleta (ANVISA, 2006).
Devido aos custos envolvidos nos ensaios com voluntrios, o emprego da
metodologia in vitro uma ferramenta normalmente utilizada para os estudos
preliminares da determinao do FPS de novos filtros solares e na rotina do controle de
qualidade destas formulaes (MANSUR et al., 1986; DIFFEY, 1997; SPRINGSTEEN
et al, 1999; RIBEIRO et al., 2004).
5.7.1. Determinao do Fator de Proteo Solar (FPS) in vitro.

O FPS in vitro das quatro formulaes desenvolvidas foi determinado atravs do
mtodo de Mansur (MANSUR et al., 1986).
Cada formulao citada acima foi submetida a uma diluio de modo a obter
uma concentrao final de 0,2 l/ml do gel creme em etanol P.A. A seguir, procedeu-se
determinao da absorbncia desta diluio frente ao solvente. Este procedimento foi
realizado em triplicata e a determinao espectrofotomtrica do FPS foi avaliada
empregando o espectrofotmetro (modelo UV - 1601, marca Shimadzu). Os valores de
absorbncia destas amostras foram determinados nos comprimentos de onda de 290 a
320 nm, com um intervalo de cinco nm. Para o clculo do FPS, foi utilizada a equao
matemtica (EQUAO 5), que relaciona o efeito eritematognico e a intensidade da
radiao em cada comprimento de onda (EE x I) (TABELA 3) (MANSUR et al., 1986;
SANTOS et al., 1999; FREITAS et al., 2001):
EQUAO 5: Clculo do FPS segundo Mansur et al., 1986.
320
FPS espectrofotomtrico = FC . EE () . I () . abs ()
290
88
Onde: FC =10 (fator de correo), EE () = efeito eritemognico da radiao de

comprimento de onda () definido pela Tabela 3. I () = intensidade da luz solar no
comprimento de onda () definido pela Tabela 3. Abs () = valor espectrofotomtrico da
absorbncia da soluo da preparao no comprimento de onda () definido pela Tabela
3 (Mansur et al., 1986).
TABELA 3: Relao entre o efeito eritematognico e a intensidade da radiao em cada

comprimento de onda (Mansur et al., 1986).
(nm)
290
295
300
305
310
315
320
EE () x I ()
0,0150
0,0817
0,2874
0,3278
0,1864
0,0839
0,0180
1,0000
5.7.2. Determinao do FPS in vivo a seco.

O FPS in vivo a seco das quatro formulaes desenvolvidas foi determinado de
acordo com o protocolo da associao europia The European Cosmetic, Toiletry and
Perfumery Association (COLIPA, 2006). Foram avaliados 10 voluntrios sadios do
sexo feminino, com idades entre 18 e 59 anos, com fototipos I, II, III, utilizando um
simulador ultravioleta multiport 601 (Solar Light Company, Philadelphia, USA).
Nas costas de cada voluntrio foi demarcada uma rea (0,3 m x 0,3 m). Um
quadrado foi selecionado e utilizado para se determinar a DME na pele no tratada.
Aps 16 a 24 horas, aplicou-se 0,05g (2 L/cm2) da formulao contendo os filtros
solares padro (TABELA 4) e a formulao a ser testada no quadrado adjacente; este foi
subdividido em sub-reas de aproximadamente 1 cm2 (FIGURA 15), onde as amostras
foram aplicadas com a ajuda de uma dedeira e espalhadas de maneira uniforme. Aps
89
20 minutos da aplicao do produto, iniciou-se a irradiao com uma lmpada UV de

300 W (as sub-reas so usadas para definir a exposio em srie luz ultravioleta).
FIGURA 15: rea demarcada nas costas dos voluntrios para a determinao do teste de FPS in
vivo (SHAATH, 1997).
Os tempos de exposio foram selecionados para cada local tratado, baseados na

DME previamente determinada da pele no protegida e no FPS antecipado dos filtros
solares padro (TABELA 4) ou do filtro solar a ser testado.
Todos os locais de teste foram avaliados entre 16 a 24 horas aps a exposio,
para determinar a resposta eritematosa mnima.
As amostras utilizadas, neste ensaio, foram as mesmas utilizadas para a
determinao do FPS in vitro.
90
TABELA 4: Frmula da emulso padro utilizada nos testes de FPS in vivo.
Composio
Fase I
Lanolina
Manteiga de Cacau
Monoestearato de Glicerila SE
cido esterico
Octil Dimetil PABA
Benzofenona -3 (Oxibenzona)
Concentrao (g)
Fase II
gua
Sorbitol
Trietanolamina
Metilparabeno
Propilparabeno
Fase III
lcool benzlico
4,5
2,0
3,0
2,0
7,0
3,0
71,6
5,0
1,0
0,3
0,1
0,5
5.7.3. Determinao do FPS in vivo Aps a Imerso em gua.

Aps a aplicao da radiao ultravioleta nas reas demarcadas nas costas de
cada voluntrio (0,3 m x 0,3 m), tanto para a formulao testada quanto para o controle,
aplicou-se o produto novamente em rea intacta. Aps 15 minutos, cada voluntrio
entrou na banheira de hidromassagem, com gua na temperatura entre 23C e 32C por
um perodo inicial de 20 minutos com agitao moderada da gua. A seguir, cada
voluntrio permaneceu 20 minutos em repouso fora da banheira. Repetiu-se, o
procedimento de agitao por mais 20 minutos. Os voluntrios foram acompanhados
durante a imerso para assegurar que as reas de testes no fossem tocadas. Aps
totalizar 40 minutos em contato com a gua, o voluntrio foi seco com secador eltrico
nas reas de teste e com toalha macia nas demais reas. Os locais de teste foram
expostos luz ultravioleta, utilizando-se o mesmo mtodo aplicado para a determinao
do FPS in vivo a seco.
91
5.8. Anlise Estatstica.

Os dados experimentais consistem do resultado da mdia desvio padro, os
quais foram submetidos a analise estatstica (um fator ANOVA, = 0,05), utilizando
o software SigmaStat para Windows 3.11.

pele natural (humana ou animal) (WISSING & MULLER, 2002; SIMEONI, SCALIA
& BENSON, 2004; JIMENEZ et al., 2004; MARTINI & SEILLER, 2006).
Por outro lado, a determinao da velocidade de liberao do ativo destas
formulaes pode prover o controle de qualidade das mesmas. Para tal, pode-se
empregar o mesmo sistema bicompartimental com membranas artificiais como acetato
de celulose, nitrato de celulose e polissulfona (UNITED STATES, 1997; HAIGH &
SMITH, 1994), as quais no oferecem resistncia passagem do ativo do
compartimento doador para o compartimento receptor, proporcionando, desta forma,
sua quantificao neste ltimo, em funo da partio entre o veculo e o meio aceptor.

Inicialmente, a solubilidade do MCO foi estudada em diferentes meios, com a
finalidade de escolher a melhor soluo receptora para ser utilizada nos estudos de
liberao e penetrao e/ou permeao. As solues receptoras analisadas foram as
citadas abaixo:
Tampo fosfato pH 7,4;
92
Tampo fosfato pH 7,4, com polissorbato 80, nas concentraes de 2,0; 4,0 e 5,0
% (p/v);
Tampo fosfato pH 7,4, com 2,0 % (p/v) de polissorbato 80 e etanol a 30 %

(MOTA, 2005).
As amostras para a determinao da solubilidade foram preparadas adicionando-
se uma quantidade em excesso de MCO a 5 mL de cada meio a ser testado. Estas

amostras foram mantidas sob agitao magntica durante 24 horas, a uma temperatura
ambiente em torno de 25oC. Aps este perodo, as amostras foram centrifugadas a 5000
rpm por 15 minutos. Foram retiradas alquotas de 1,0 mL de cada amostra e diludas nas
solues receptoras descritas acima. A determinao da solubilidade do MCO nestas
solues foi realizada por espectrofotometria de absoro no UV-vsivel ( mx de 310
nm).
A partir das absorbncias encontradas de cada amostra e da curva de calibrao
obtida para cada meio, foram encontradas as concentraes de MCO em g/mL, que
multiplicadas pelo fator de diluio, forneceram a concentrao de saturao do MCO
em cada meio, nas condies utilizadas.
5.9.2. Estudos de Liberao in vitro.

Clulas de difuso vertical tipo Franz foram empregadas. Estas clulas
consistem de um compartimento doador e um receptor, entre os quais colocado uma
membrana (FRANZ, 1975). A rea para difuso foi de 1,96 cm2 e o compartimento
receptor possua um volume de 7,5 mL.
A soluo receptora empregada foi uma mistura de tampo fosfato pH 7,4
contendo 5% de polissorbato 80. As membranas de acetato de celulose com tamanho do
poro de 0,2 m foram submetidas hidratao (em gua, a 100o C, durante cinco
93
minutos por trs vezes) e montadas nas clulas de difuso (HAIGH & SMITH, 1994).
Cada compartimento receptor foi mantido sob agitao constante (900 rpm) por meio de
pequena barra magntica. A presena de bolhas abaixo da membrana foi sempre
monitorada. O sistema de difuso foi preparado 30 minutos antes da aplicao da
amostra no compartimento doador (aproximadamente um grama) para efetuar o
equilbrio entre a membrana e o meio aceptor. Em intervalos de tempo prdeterminados, uma alquota de 1 mL foi retirada para anlise, havendo reposio do
volume com soluo receptora. A presena do MCO na soluo receptora foi
monitorada por 3 horas. As amostras foram submetidas anlise por CLAE de acordo
com as condies estabelecidas em 5.6.
O transporte foi expresso atravs do fluxo, aps equilbrio, definido como
quantidade de frmaco liberado por unidade de rea e por tempo. Os resultados plotados
nas figuras so a mdia desvio padro (d.p) de seis experimentos e os dados obtidos
foram analisados estatisticamente empregando-se anlise de varincia (ANOVA um
fator) com nvel de significncia () de 5%, com auxlio do programa Sigma Stat for
Windows 1.0 (Jandel Corporation, 1994).
5.10. Estudo de Penetrao e/ou Permeao Cutnea .

5.10.1. Obteno e Limpeza da Pele Suna.
Orelhas retiradas de sunos de at seis meses de idade foram obtidas no
matodouro da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, localizado no municpio
de Seropdica.
Logo aps o abate, as orelhas foram retiradas antes do animal prosseguir para
etapa de banho quente. No menor tempo possvel, foram transportadas, sob refrigerao,
ao laboratrio, onde foram lavadas sob gua corrente para remoo de manchas de
94
sangue. A pele da parte posterior da orelha foi excisada com auxlio de bisturi e pina e,
com auxlio de tesoura e pina, o excesso de tecido adiposo foi retirado da parte inferior
da pele. A seguir, pedaos de pele circulares de aproximadamente 11,0 cm2 foram
acondicionados em filme de cloreto de polivinila (PVC) e papel alumnio, com remoo
de ar e devidamente etiquetados e armazenados, a -20oC, por no mximo quatro
semanas antes do uso (FIGURA 16).
FIGURA 16: Limpeza da orelha suna. (A) Orelha suna lavada. (B) Retirada da pele com
auxlio de bisturi. (C) Retirada do excesso de gordura subcutnea. (D) Segmento de pele limpo
(BEMVINDO, 2006).
5.10.2. Validao da Metodologia para a Extrao e Quantificao de MCO na

Epiderme e Derme Suna.
Inicialmente, segmentos de pele suna de um cm2 foram imersos em gua
destilada a 60C, por 60 segundos (BHATIA, GAO & SINGH, 1997), com o objetivo de
95
separar a epiderme da derme com auxlio de bisturi. Os dois estratos cutneos (epiderme
e derme) foram transferidos para tubos de eppendorf.
Adicionou-se 20 L de diferentes solues padro de MCO, diretamente sobre
cada segmento de pele (epiderme e derme), de modo a obter 3 nveis de concentrao de
MCO (1,6; 3,2 e 6,4 g). O procedimento foi realizado em triplicata para cada nvel de
concentrao e para o branco (segmento cutneo mais fase mvel).
Como dito anteriormente, diferentes quantidades de MCO foram adicionados
aos segmentos de um cm2 , tanto para a epiderme quanto para a derme:
1,6 g: 20 L de soluo de MCO a 80 g em fase mvel.
5.10.3. Metodologia de Extrao de MCO na Epiderme e Derme Suna.

Aps trs horas de contato para a impregnao do MCO no tecido e para a
evaporao total do solvente, procedeu-se a extrao do MCO. Cada um dos estratos
cutneos (epiderme e derme) foram transferidos para um tubo eppendorf e adicionados
1,5 mL de fase mvel, agitados por 30 segundos em vortex, seguido de 12 minutos de
banho de ultrassom, e nova agitao. Os eppendorfs foram centrifugados a 6400 rpm
por 10 minutos. O sobrenadante foi filtrado por unidade filtrante com poro de 0,45 m e
analisados por CLAE.
A preciso foi avaliada pelo desvio padro, pelo desvio padro relativo e pela
repetitividade das anlises. A mdia do coeficiente de correlao (r) foi realizada para
n= 5, para verificao da linearidade dentro da faixa de concentrao de 0,1 a 20 g/mL.
96
5.10.4. Protocolo da Penetrao/Permeao Cutnea das Formulaes Contendo

MCO.
Os estudos de penetrao/permeao do MCO foram realizados em clula de
difuso vertical. As clulas de difuso foram montadas da mesma forma que no estudo
de liberao in vitro, descrito no item 5.9.2. Aps o descongelamento, a pele suna total
excisada foi montada horizontalmente sobre a clula de difuso vertical, com o EC
faceando o compartimento doador e a derme em contato com a soluo receptora,
evitando sempre a formao de bolhas.
O compartimento receptor foi preenchido com soluo receptora (tampo fosfato
pH 7,4 adicionado de polissorbato 80 a 5%). Ao longo do experimento, a soluo
receptora permaneceu sob agitao contnua de 900 rpm, por meio de uma pequena
barra magntica, a fim de conservar a homogeneidade. As clulas foram mantidas a 37
C 0,5 por banho termostatizado.
As peles permaneceram durante 1 hora em contato com a soluo receptora,
permitindo estabelecer um equilbrio no ambiente. Aps esse tempo, foi realizada a
coleta de uma alquota de 1 mL de soluo receptora. Em seguida, foi aplicada no
compartimento doador, ou seja, sobre o EC aproximadamente 400 l de formulao,
com auxlio de uma pipeta automtica para semi-slidos. Sendo que uma clula era
sempre utilizada como branco, isto , isenta de formulao. A cada 1 hora era coletada
uma alquota de 1 mL de soluo receptora, perfazendo um perodo de 6 horas. A cada
alquota retirada o volume era reposto com nova soluo receptora.
Essas amostras foram filtradas por unidade filtrante com poro de 0,45 m e
analisadas por CLAE, com a finalidade de verificar se ocorreu permeao do MCO.
Ao trmino das 6 horas de experimento, o sistema foi desmontado, a pele foi
retirada da clula com auxlio de uma pina. O excesso de formulao foi retirado da
97
superfcie da pele, limpando-a duas vezes com algodo umedecido e mais uma vez com
algodo seco. A epiderme foi separada da derme com auxlio do bisturi (FIGURA 17).
FIGURA 17: (A) Retirada do segmento da pele; (B) Pele aps a remoo da formulao; (C)
Separao dos estratos cutneos; (D) (FREITAS, 2005).
Aps a separao dos segmentos cutneos (epiderme e derme) foram submetidos

ao processo de extrao do MCO conforme descrito no item 5.10.3. As amostras foram
submetidas anlise por CLAE de acordo com as condies estabelecidas em 5.6.
98
6. Resultados e Discusso.
6.1. Caracterizao Fsico-Qumica MCO.
A Farmacopia Brasileira no disponibiliza padres primrios para filtros
solares, alm disso, existe a dificuldade em se obter padres farmacopicos
internacionais. Desta forma, foram realizados testes de caracterizao da matria prima
MCO adquirida pela empresa GALENA com procedncia da MERCK, e esta foi
utilizada como padro de trabalho.
O filtro UV utilizado neste trabalho apresentou teor de pureza de 98,4%, e
permitido seu uso em cosmticos, perfumes e produtos de higiene pessoal, de acordo
com a resoluo RDC N 47, de 16 de maro de 2006.
6.1.1. Determinao dos Parmetros de Absoro na Regio do UV.

A anlise realizada no espectro de absoro na regio do UV tornou possvel a
determinao de alguns parmetros, permitindo a identificao da substncia. O
espectro de absoro obtido a partir de uma soluo de MCO a 8,22 g/mL em etanol
mostrou que a molcula apresenta uma absoro mxima em 310 nm (FIGURA 18).
Na avaliao do espectro de MCO foi possvel determinar o mximo, a
absorbncia mxima e calcular o coeficiente de extino molar (), resultados que
contribuem para sua a identificao. O indica o poder de absoro da radiao UV
pela molcula (TABELA 5).
99
FIGURA 18: Espectro de UV-Vis do MCO.
TABELA 5: Parmetros observados na anlise por ultravioleta do MCO.
Parmetros do MCO Avaliados

Teor
Solvente
Concentrao
mximo
mximo literatura*
Abs. Mx.
literatura *
98,4%
Etanol P.A
8,22 g/ mL
311 nm
311 nm
0,766
23297
23300
(SHAAT, 1995)
Com os resultados encontrados na anlise do MCO por espectrofotometria de
UV pode-se concluir que o mximo e obtido na anlise esto de acordo com os

valores de referncia da literatura. Sendo, portanto, um indicativo da identidade para
esta molcula.
100
Segundo Garcia (1998), na elaborao da curva-padro do MCO devem ser

utilizadas concentraes determinadas pela curva de Ringbom. Portanto, a curva de
calibrao foi realizada com cinco pontos (2,0; 4,0; 6,0; 8,0 e 10,0 g/mL).
A reta de calibrao apresentou coeficiente de correlao (r) de 0,996 e
equao da reta y = 0,1008x 0,0413, indicando uma boa linearidade (FIGURA 19). O
coeficiente de determinao (R2) de 0,993 demonstrou uma relao linear para as
concentraes escolhidas (NETO et al., 2002).
1,2
Absorbncia
1
0,8
y = 0,1008x - 0,0413
0,6
R = 0,9926
r = 0,996
0,4
0,2
0
0
10
12
Concentrao (m cg/m L)
FIGURA 19: Representao da curva padro mdia do MCO por espectroscopia de ultravioleta
(UV) utilizando como solvente etanol P.A. y = ax + b; onde y = varivel dependente
(absorbncia); x = varivel independente (concentrao g/mL); a ou coeficiente angular da reta
= 0,1008; b ou coeficiente linear da reta = 0,0413; r ou coeficiente de correlao = 0,996 e R2 ou
coeficiente de determinao = 0,9926.
6.1.2. Determinao dos Parmetros do Espectro de Absoro do MCO na Regio

do Infravermelho.
Os espectros de IV so considerados a impresso digital do composto, pois
demonstram as diferentes interaes que a radiao eletromagntica pode excercer com
a molcula (vibrao e rotao) (SOARES, 2006).
101
No espectro foram selecionadas as principais bandas de absoro e comparadas

com os valores encontrados na literatura. De acordo com a TABELA 6, a amostra
apresentou bandas de absoro com valores prximos ao seu padro da literatura, sendo
um indicativo da similaridade entre a estrutura qumica da amostra e seu respectivo
padro. Foram observadas bandas caractersticas de deformao axial na faixa de 1710 a
1422 cm-1 correspondentes aos grupamentos CH=CH de steres , insaturados; C=O
de carbonila de steres e C=C do anel aromtico, indicando os principais grupamentos
cromforos do MCO responsveis pela absoro na regio do UV. Estas bandas
caractersticas esto demonstradas na FIGURA 20, que corresponde ao Espectro de
Infravermelho do MCO.
TABELA 6: Comparao das principais bandas de absoro do espectro infravermelho do
MCO.
Principais bandas de absoro

Amostra
Literatura (BP, 2004)
1710 cm-1
1700 cm-1 (C=O)
1604 cm-1
1610 cm-1 (C=C aromtico)
1254 cm-1
1200 cm-1 (C-O)
102
FIGURA 20: Espectro de Infravermelho do MCO (filme entre cristais de NaCl).
6.2. Formao e Purificao do Sistema Nanoestruturado -CD/MCO.

O preparo do nanosistema -CD/MCO foi realizado pelo mtodo de kneading
(empastagem), e a purificao com soluo de metanol a 50% (MOTA, 2005).
6.2.1. Caracterizao do Sistema Nanoestruturado -CD/MCO por Espectrometria

de Ressonncia Magntica Nuclear de Hidrognio (RMN 1H).
A interao entre o MCO e a -CD foi investigada por espectroscopia de RMN1
H, que garante as evidncias mais conclusivas da formao do complexo. Sendo que,
103
os deslocamentos qumicos nos prtons diretamente envolvidos na encapsulao

fornecem importantes informaes sobre a geomentria de complexao (CAMERON &
FIELDING, 2001).
A tcnica RMN-1H demonstrou a interao do MCO com a cavidade da -CD,
esta incluso foi evidenciada pela comparao do deslocamento qumico dos principais
hidrognios do MCO livre, H3,H5, H2,H6, H1e H2 (demarcados na FIGURA 21), com o
deslocamento qumico destes mesmos hidrognios aps a incluso do MCO na cavidade
da -CD (demarcados na FIGURA 22) (PERTINHEZ et al., 2007).
A TABELA 7 demonstra as mudanas que ocorreram nos valores do
deslocamento qumico dos prtons do MCO livre e induzida pela presena da -CD. Os
sinais dos prtons que tiveram valores de deslocamento negativos indicam a insero
dessas pores da molcula de MCO na cavidade da CD (CHAN et al., 2000). A
FIGURA 23 demonstra que a poro aromtica da molcula do filtro solar est
localizada dentro da cavidade da CD, com o grupo ster perto da superfcie externa do
macrociclo (SCALIA et al., 2002).
104
H2,H6
H2`
H3,H5
H1`
FIGURA 21: Espectro de RMN 1H do p-metoxicinamato de octila.
H2,H6
H2`
H3,H5
H1`
FIGURA 22: Espectro de RMN 1H do complexo -CD/MCO.
105
FIGURA 23: Molcula de MCO (SCALIA, 2002).

TABELA 7: Alteraes nos deslocamentos qumicos do p- metoxicinamato de octila incluso.
Complexo CD/MCO
(valores de =
complexo MCO)
- 0,30 ppm
Prtons
MCO
(valores de dos
prtons marcados)
H3H5
6,8 ppm
Complexo CD/MCO
(valores de dos
prtons marcados)
6,5 ppm
H2H6
7,6 ppm
7,2 ppm
- 0,40 ppm
H1
6,4 ppm
6,0 ppm
- 0,40 ppm
H2
7,6 ppm
7,1 ppm
- 0,50 ppm
6.2.2. Caracterizao do Sistema Nanoestruturado -CD/MCO por Difrao de

Raio X.
A difrao de raio X baseia-se na comparao dos difratogramas das substncias
puras e do complexo formado (BUDAL, 2003). Os padres de difrao do complexo
formado foram diferentes dos obtidos a partir dos componentes individuais, como pode
ser verificado ao comparar os difratogramas apresentados nas FIGURAS 24, 25 e 26.
As diferenas entre esses difratogramas so evidenciadas atravs do surgimento e o
desaparecimento de picos ou atravs das mudanas na intensidade relativa. Estas
mudanas constituem indcios da formao do complexo (CAO et al., 2005).
A FIGURA 24 corresponde ao difratograma da matria prima -CD, que um
p branco. A FIGURA 25 corresponde ao difratograma da matria prima -CD que foi
106
submetida ao processo de kneading ou empastagem, o qual o complexo de incluso CD/MCO foi submetido. Esta amostra foi denominada de mistura fsica. Este
procedimento foi realizado para verificar se a matria prima -CD quando submetida ao
processo de kneading ou empastagem seria capaz de gerar picos que mascarassem os
picos gerados pelo complexo formado. A FIGURA 26 corresponde ao difratograma do
sistema -CD/MCO.
O padro de difrao de raio X do sistema -CD/MCO difere consideravelmente
da matria-prima -CD (FIGURA 24 e 26). As principais diferenas so observadas
pelo aparecimento de picos mais intensos na regio de 18 a 20 do difratograma e
deslocamento de novos picos na regio inicial do difratograma, significando que houve
a incluso do MCO na cavidade da CD. O difratograma do complexo indica uma nova
fase slida, a do complexo de incluso.
Houve uma pequena mudana no difratograma da mistura fsica em relao ao
difratograma da matria prima -CD, que foi evidenciada atravs da diminuio do sinal
do pico existente na regio inicial do difratograma da mistura fsica. Entretanto, no
houve outras alteraes significativas neste difratograma, desse modo indicando que a
-CD no gera picos que interfiram na identificao do complexo formado.
beta ciclodextrina
5000
CPS
4000
3000
2000
1000
0
0
10
15
20
25
2 theta
FIGURA 24: Difratograma da -CD.
107
mistura fsica (2)

5000
CPS
4000
3000
2000
1000
0
0
10
15
20
25
2 theta
FIGURA 25: Difratograma da -CD/mistura fsica.
CPS
betaCD - filtro solar

4000
3500
3000
2500
2000
1500
1000
500
0
0
10
2 theta
15
20
25
FIGURA 26: Difratograma do sistema -CD/MCO.
6.2.3. Caracterizao do Sistema Nanoestruturado -CD/MCO por Espectroscopia

de Infravermelho.
A espectroscopia de infravermelho baseia-se nos deslocamentos das bandas de
absoro do ativo quando este est incluso na cavidade da CD. O deslocamento
causado pela interao entre grupos de tomos da molcula hspede com a CD,
evidenciando a formao do complexo de incluso (UEKAMA & OTAGIRI, 1987).
108
O espectro de IV do sistema nanoestruturado -CD/MCO (FIGURA 28) foi

comparado com o do p-metoxicinamato de octila (FIGURA 20) e com o da -CD
(FIGURA 27). O espectro de absoro do sistema -CD/MCO apresentou alargamento
dos picos caractersticos do MCO (bandas demarcadas com setas vermelhas na
FIGURA 28). O alargamento dos picos provavelmente ocorrreu devido limitao das
vibraes da molcula de MCO quando inclusa na cavidade da -CD. Tambm observase o deslocamento de algumas bandas de absoro do MCO para uma regio de menor
freqncia. As bandas 1710 cm-1 e 1168 cm-1, caractersticas do MCO, foram
deslocadas aps a incluso em -CD, para a regio de 1708 cm-1 e 1161 cm-1,
respectivamente. Estes efeitos podem ser atribudos a formao do sistema -CD/MCO,
portanto este mtodo evidenciou a formao do complexo.
FIGURA 27: Espectro de IV da matria prima -CD.
109
As bandas de absoro compreendidas na faixa de 846-1640 cm-1 so

caractersticas das vibraes da molcula de -CD. A TABELA 8 descreve as bandas
caractersticas da -CD e do MCO.
FIGURA 28: Espectro de IV do complexo -CD/ MCO.
110
TABELA 8: Principais bandas de absoro da -CD e do MCO.
Principais bandas de absoro

-CD
MCO
3379 cm-1
OH primrias
3361 cm-1
OH secundrias
1710 cm-1
1604 cm-1
(C=O)
(C=C aromtico)
(OCH, CCH)
1420 cm-1
1254 cm-1
(C-O)
1157 cm-1
(C-O-C)
1110 cm-1
(C-O-C)
6.2.4 Determinao do Rendimento de Incluso do Sistema Nanoestruturado CD/MCO por Espectrometria de Ultravioleta.
A quantidade de MCO incorporado no sistema -CD/MCO foi determinada por
espectrofotometria de UV e as absorbncias encontradas foram plotadas na curva
padro, realizada no momento do ensaio. A TABELA 9 demonstra a concentrao de
MCO encontrada no sistema -CD/MCO. O rendimento mdio encontrado foi de 89%
da massa inicial de MCO, este um percentual satisfatrio e corresponde a 6,70 g do
filtro solar presente no nanosistema. Este resultado indica que o mtodo de kneading
ou empastagem e a posterior purificao do complexo formado foram eficazes.
111
TABELA 9: Determinao do rendimento da incluso do complexo -CD/MCO por

espectrofotometria de UV.
Absorbncia
encontrada
0,175 0,005
Concentrao
(mg/ mL)
1,78 0,055
Rendimento
(%)
86 3,10
Rendimento mdio
0,181 0,005
1,84 0,055
88,88 3,10
89 %
0,186 0,005
1,89 0,055
92,20 3,10
6.3. Caracterizao dos Lipossomas.

A microscopia ptica foi realizada aps a normalizao dos lipossomas em filtro
Millipore,
objetivando
verificar
formao
destas
vesculas.
Todas
as
fotomicroscopias foram realizadas por microscopia ptica com aumento de 100 vezes.
Na primeira fotomicroscopia (FIGURA 29), observam-se os lipossomas in
natura, ou seja, sem sofrer nenhuma diluio. Nesta fotomicroscopia foi verificado que
as vesculas estavam muito prximas, comprovando que as mesmas tendem a agruparse formando grandes aglomerados, alm de possurem uma grande mobilidade na
lmina dificultando a visualizao da forma. Esta microscopia foi realizada com a
finalidade de comprovar a formao dos lipossomas; entretanto, no foi possvel
verificar nenhuma caracterstica mais especifica, como tamanho e a populao. Somente
foi possvel verificar o agrupamento das vesculas grandes.
A segunda e a terceira fotomicroscopias (FIGURA 30 e 31) correspondem
suspenso lipossomal diluda em aproximadamente 10 mL e 20 mL de uma soluo
etanlica a 25%, respectivamente. As fraes lipossomais diludas permitiram
visualizar com maior nitidez a morfologia dos lipossomas. Em ambas as fotomicroscopias foram observadas vesculas muito heterognas e a existncia de diversas
112
populaes, sendo que uma populao era composta por vesculas menores e outra
populao por vesculas maiores. Entretanto, todas se apresentaram esfricas e
arredondadas. Contudo, avaliou-se que a diluio dificultou a visualizao no
microscpio ptico, pois os lipossomas continuram a se movimentar intensamente
tornando difcil a fixao na lmina e a focalizao das imagens.
De acordo com Sinko (2008) possvel utilizar um microspio ptico para
medir o tamanho de partculas na faixa de 0,2 a 100 m, aproximadamente. Com
auxlio de um programa gerenciador de imagens acoplado ao microscpio ptico de luz
polarizada, foi possvel realizar medidas aleatrias dos tamanhos das vesculas. A
FIGURA 32 mostra a fotomicroscopia da frao lipossomal, filtrada em membrana 0,4
m dos lipossomas com MCO a 72,00 mM, diludos em 10 mL de soluo etanlica a
25 % contendo as medidas aleatrias.
Embora as medidas tenham sido realizadas aleatoriamente, foi observado um
tamanho mdio das vesculas na ordem de 1000 nm ou 1 m. Alm de comprovar a
heterogeneidade da amostra, pois o tamanho destas vesculas apresentou grandes
variaes.
113
FIGURA 29: Foto microscopia ptica dos lipossomas com MCO a 72,00 mM frao sem
sofrer diluio. Aumento de 100 x, seta vermelha indica as vesculas.
FIGURA 30: Foto microscopia ptica da frao filtrada em membrana 0,4 m dos lipossomas
com MCO a 72,00 mM diludos em 10 mL de soluo etanlica a 25 %. Aumento de 100x, seta
vermelha indica as vesculas.
114
FIGURA 31: Foto microscopia ptica da frao filtrada em membrana 0,4 m dos lipossomas
com MCO a 72,00 mM diludos em 20 mL de soluo etanlica a 25 %. Aumento de 100x, seta
vermelha indica as vesculas.
FIGURA 32: Foto microscopia ptica contendo medidas aleatrias da frao filtrada em
membrana 0,4 m dos lipossomas com MCO a 72,00 mM diludos em 10 mL de soluo
etanlica a 25 %. Aumento de 100x.
115
6.3.2. Determinao do Tamanho dos Lipossomas por Espalhamento Dinmico da

Luz Laser.
O dimetro mdio dos lipossomas preparados com MCO a 72,00 mM foi
caracterizado por espalhamento dinmico de luz laser (DLS).
A FIGURA 33 apresenta os dados de distribuio mdia do dimetro das
vesculas lipossomais. Verificou-se que a frao da suspenso lipossomal apresentou
uma variao de dimetro de 85,8 nm a 1061 nm. Foram encontradas duas populaes
principais, sendo que a primeira apresentou um dimetro mdio de 104,9 nm e a
segunda populao apresentou um dimetro mdio de 867,5 nm. Entretanto, a segunda
populao apresentou uma intensidade mais alta, consequentemente esta populao
representou a maior parte das vesculas na suspenso lipossomal.
A FIGURA 34 corresponde ao grfico de distribuio e a mdia (MD) do
tamanho dos lipossomas (nm) estudado. Observou-se que este grfico possui um
comportamento bimodal, comprovando as duas populaes exitentes na amostra.
Porm, quando calculado o dimetro mdio das duas populaes existentes, observou-se
um valor em torno de 600 nm. Diante dos valores de dimetro observados podem-se
classificar as vesculas como vesculas multilamelares grandes (VML).
A polidispersidade pode ser definida como a medida da largura da distribuio
do tamanho das vesculas (MULLER et al., 2004). Os lipossomas estudados
apresentaram uma polidispersividade mediana (RICCI, 2005) indicando uma adequada
distribuio do tamanho das vesculas (0,376, temperatura de 25C).
116
% Intensidade da Luz
Tamanho das partculas lipossomais

100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
0
85,8
94,9 104,9
116
128,3 709,4 784,5 867,5 959,3 1061
Tamanho (nm)
Intensidade
FIGURA 33: Tamanho das partculas nos lipossomas com MCO 72,00 mM - frao filtrada.
Dimetro (nm)
FIGURA 34: Distribuio do tamanho dos lipossomas MCO 72,00 mM frao filtrada. MD =
600,8 10,5.
O valor encontrado para o dimetro mdio das vesculas lipossomais demonstrou

uma variao pela tcnica de DL e de MO. As vesculas aps serem filtradas, foram
medidas por MO e apresentaram um dimetro mdio na faixa de 1000 nm, enquanto, as
117
medidas feitas por DL se apresentaram na faixa de 867,5 nm para a maior parte da

populao. Esta variao provavelmente ocorreu pela diferena do solvente utilizado em
ambas as tcnicas. Pois, na MO o diluente utilizado foi uma soluo de etanol a 25%
(v/v) e no DLS foi utilizada gua ultra pura.
Segundo Betz e colaboradores (2005) foi demonstrado que o tamanho mdio dos
lipossomas diludos com gua ultra pura era aproximadamente duas vezes menor que o
dos lipossomas diludos com uma soluo de etanol a 25 % (v/v). Segundo Henriques
(2008) tambm foi demonstrado que o contato da soluo etanlica com a amostra
promove um aumento do tamanho das vesculas, e um inchamento, que pode levar a
ruptura das mesmas. Este aumento de tamanho dos lipossomas pode ser explicado pela
reduo da tenso interfacial ocasionada pela presena do etanol.
Na MO o dimetro das vesculas lipossomais foi avaliado com auxlio de um
programa gerenciador de imagens acoplado ao MO, no qual foram realizadas medidas
aleatrias dos tamanhos das vesculas. Dessa forma, as medidas foram realizadas
somente no campo visualizado o que j gera uma resposta limitada sobre a populao
que est sendo analisada. Alm disto, esta tcnica mede com mais facilidade as
vesculas maiores, j que as medidas so realizadas manualmente, o que acaba gerando
uma resposta imprecisa em relao ao tamanho das vesculas.
Ambos os mtodos utilizados, MO e DL, mostraram-se teis. Entretanto, eles
podem ser considerados complementares entre si. Pois, o DL caracteriza a suspenso
lipossomal como um todo, permitindo avaliar se esta homognea ou no e se apresenta
vesculas lipossomais na faixa de 1 a 5000 nm, enquanto que a MO permite visualizar e
analisar a morfologia das vesculas.
118
6.3.3 Determinao da Quantidade de MCO Incorporado na Suspenso

Lipossomal.
A quantidade de MCO incorporado na suspenso lipossomal foi realizada por
espectrofotometria de UV, em triplicata, no mx do MCO (310 nm). As absorbncias
encontradas foram plotadas na curva padro, preparada no momento do ensaio. A
TABELA 10 mostra a concentrao de MCO encontrada na suspenso lipossomal, e
atravs da concentrao foi possvel calcular o rendimento das amostras.
O rendimento mdio de MCO encontrado na suspenso lipossomal foi de
88,88%. Portanto, foi obtida a incluso de 88,88% da massa inicial de MCO, que era
3,66 g, neste nanosistema. O alto rendimento de encapsulao do MCO no lipossoma
demonstrou que o mtodo de hidratao do filme lpidico eficaz. Este mtodo
utilizado foi rpido e de fcil realizao e apresentou boa reprodutibilidade.
Alm disso, no foi observada nenhuma interferncia neste mtodo, j que os
lipdios utilizados na preparao dos lipossomas so detectados na regio de 203-205
nm do espectro de absoro (VEMURI & RHODES, 1995). Portanto, este mtodo
adequado para anlise quantitativa da suspenso lipossomal contendo MCO.
TABELA 10: Determinao da quantidade de filtro solar incorporado na suspenso lipossomal

por espectrofotometria de ultravioleta.
Absorbncia
Encontrada
Concentrao Rendimento
(mg/mL)
(%)
0,550 0,03
5,66 0,3
94,33 4,9
0,510 0,03
5,25 0,3
87,5 4,9
0,495 0,03
5,09 0,3
84,83 4,9
Rendimento Mdio
88,88%
119
6.3.4 Anlise de Fsforo nos Fosfolipdios (Lipoid 100% ) e no Lipossoma.

O mtodo de Bartlett foi empregado com a finalidade de determinar a
concetrao de fosfolipdios presente na matria prima Lipoid 100% e no lipossoma. A
cada anlise foi realizada uma curva de calibrao para o contedo de fsforo, j que o
percetual de fosfolipdios presentes na amostra foi estabelecido atravs da curva de
calibrao construda.
Alm disso, para o clculo do teor de fosfolipdio necessrio utilizar a massa
da matria prima Lipoid 100%, pesada no preparo do lipossoma, e os valores de
absorbncia obtidos para cada amostra analisada. A curva de calibrao de fsforo
apresenta quatro pontos com as concentraes variando de 0,9988 g/mL a 3,991
g/mL (FIGURA 35). A absorbncia de cada padro foi determinada por espectroscopia
de UV/VIS no de 800 nm.
0,7
0,6
Abs
0,5
0,4
y = 0,1558x + 0,007
2
R = 0,9994
r =0,9997
0,3
0,2
0,1
0
0
Conc Fsforo (mcg/mL)
FIGURA 35: Representao de uma das curvas padro de fsforo utilizada para a determinao
do teor de fosfolipdios na frao lipossomal por espectroscopia de UV/VIS. y = ax + b; onde y
= varivel dependente (absorbncia); x = varivel independente (concentrao g/mL); a ou
coeficiente angular da reta = 0,1558; b ou coeficiente linear da reta = 0,007; r ou coeficiente de
correlao = 0,9997 e R2 ou coeficiente de determinao = 0,9994.
120
A TABELA 11 mostra que o teor de fosfatidilcolina na matria prima Lipoid

100% foi de 107,4%. Este alto teor indica a pureza desta matria prima,
consequentemente seu alto contedo de fosfolipdios.
Para a anlise de fsforo do lipossoma foram retirados 100 L de amostra os
quais foram diludos em balo volumtrico de 20,0 mL com etanol. Deste foi retirado
uma alquota de 1 mL para balo volumtrico de 20,0 mL. Esta soluo final com uma
concentrao de 2,1 g/mL de fsforo foi submetida anlise de fsforo. A absorbncia
mdia encontrada para o lipossoma foi de 0,178. A TABELA 11 mostra o teor de
fsforo encontrado no lipossoma que foi de 60,40%.
Quando comparamos os resultados do teor de fsforo da matria prima Lipoid
100% com o teor de fsforo no lipossoma, constatamos uma perda do fosfolipdio, que
indica uma perda do material de formao das lamelas dos lipossomas. Essa perda pode
ser atribuda ao processo de filtrao, no qual houve muita perda da frao lipossomal.
Entretanto, mesmo com a perda significativa de fosfolpidos, ainda foi possvel
aprisionar uma quantidade significativa de MCO, como foi demonstrado na TABELA
10.
TABELA 11: Resultados obtidos na determinao da concentrao de fosfolipdios na matriaprima Lipoid 100% e no Lipossoma.
Lipoid 100%
Teor de Fsforo
(%)
(n=3)
107,4 1,54
Lipossoma
60,40 3,57
121
6.4. Anlise Quantitativa por Cromatografia Lquida de Alta Eficincia.

A CLAE a tcnica analtica de separao mais utilizada, devido a sua
sensibilidade, a fcil adaptao para determinaes quantitativas, sua adequao a
separao de substncias e acima de tudo, sua ampla aplicabilidade.
6.4.1 Condies Cromatogrficas para Anlise do MCO.

A metodologia seguiu os seguintes parmetros cromatogrficos:
1. Coluna cromatogrfica: Hibar LiChrosorb RP -18 de 5 e 25 cm;
2. Fase Mvel = Metanol: gua (87: 13);
3. Fluxo = 1,0 mL/min;
4. Comprimento de onda de deteco () = 310 nm;
5. Loop = 20 L;
6. Temperatura: ambiente (em torno de 25C)
7. Tempo de reteno: 7,8 minutos.
6.4.2. Seletividade
A FIGURA 36 A e B mostra os cromatogramas obtidos no ensaio de
seletividade. Este parmetro foi determinado pela injeo da formulao gel creme base,
ou seja, isenta de MCO, no cromatgrafo, com a finalidade de verificar a interferncia
dos excipientes no comprimento de onda mximo do MCO (310 nm). O cromatograma
B da FIGURA 36 corresponde injeo da formulao contendo MCO, no
cromatgrafo. Este cromatograma foi demonstrado para um efeito comparativo.
122
Figura 36 (A): Cromatograma do branco na concentrao de 10 g/mL obtido por CLAE com
de 310 nm. (B): Cromatograma da formulao contendo o filtro solar MCO livre na
concentrao de 10 g/mL realizada nas mesmas condies cromatogrficas.
Conforme observado na FIGURA 36 A e B, o mtodo proposto seletivo para a

determinao do MCO na formulao gel creme desenvolvida. Pois no se observa a
presena de picos interferentes na regio de reteno correspondente ao MCO. Por se
tratar de uma formulao com muitos excipientes, foi de grande importncia
comprovao da seletividade.
6.4.3. Linearidade
De acordo com a ANVISA (2003), a linearidade a capacidade de uma
metodologia analtica em demonstrar que os resultados obtidos em um ensaio so
diretamente proporcionais concentrao do analito na amostra. A legislao preconiza
que a determinao da linearidade seja realizada atravs da anlise de cinco
123
concentraes diferentes, no mnimo, e que o coeficiente de correlao (r) mnimo

aceitvel deve ser de 0,99.
Portanto, a linearidade foi avaliada calculando-se os valores do intercepto
(a), da inclinao (b) e coeficiente de correlao (r). A linearidade do mtodo foi
comprovada com a determinao de trs curvas de calibrao, em trs dias diferentes,
com injeo em triplicata, na faixa de concentrao de 2,5 - 20,0 g/mL para o MCO. A
FIGURA 37 e a TABELA 12 demonstram os resultados de linearidade referentes s
concentraes de trabalho escolhidas para o MCO.
A TABELA 12 mostrou que os coeficientes de correlao foram adequados.
Uma vez que os coeficientes de correlao (r) obtidos para cada dia de trabalho foram
superiores a 0,99, que o recomendado pela legislao vigente (BRASIL, 2003).
Portanto, o mtodo demonstrou uma boa linearidade para a faixa de 2,5 a 20 g/mL de
MCO, confirmando uma baixa disperso dos dados (RIBANI et al., 2004).
Sequncia 1
Sequncia 2
y = 208957x + 48566
y = 205321x - 44635
Sequncia 3
y = 207381x - 13711
2
R = 0,9963
R =1
R = 0,9987
4500000
4000000
3500000
rea
3000000
2500000
2000000
1500000
1000000
500000
0
0
10
15
Conc mcg/mL
20
25
FIGURA 37: Representao das trs curvas padro obtidas na faixa de concentrao de 2,5 a 20
g/mL de MCO.
124
TABELA 12: Respostas obtidas para as trs curvas padro obtidas na faixa de concentrao de
2,5 a 20 g/mL de MCO.
Dia 1
Dia 2
Dia 3
Mdia dp
Inclinao
208957
205321
207381
207219 1823
Intercepto
48566
-44635
-13711
- 3260 47471,3
0,9987
0,9963
0,9983 0,0018
0,999
0,9999
0,999
0,9995 0,0003
Coeficiente de
2
determinao (R )
Coeficiente de correlao
(r)
6.4.4. Preciso Intra e Inter Dia.

A preciso de um mtodo definida como a avaliao da proximidade dos
resultados obtidos em uma srie de medidas e pode ser expressa como desvio padro ou
como desvio padro relativo, de acordo com RE 899/2003 (ANVISA, 2003). De acordo
com a TABELA 13, observou-se que todos os valores obtidos de DPR, para os cinco
nveis de concentrao da curva padro, foram satisfatrios. Ou seja, apresentaram-se
abaixo de 5%, o que preconizado pela legislao vigente (ANVISA, 2003). Pode-se
concluir que este mtodo preciso.
125
TABELA 13: Anlise da preciso inter e intra dia nos cinco nveis de concentrao de MCO.
Concentrao
(g/ mL)
Dia
1
2,5
2
1
5,0
2
1
10,0
2
1
15,0
2
1
20,0
2
rea sob o
pico
531550
542540
533427
564103
560908
576168
1027814
1039210
1025286
989848
993109
989622
2003272
2009565
1993809
2003439
2023729
2009155
3124418
2967610
2883679
3072747
2998659
3030514
4710263
4769785
4565824
4277967
4466120
4234323
rea mdia
sob o pico
DP
Preciso
intra-dia
DPR (%)
535839
5878,60
1,10
Preciso
inter-dia
DPR (%)
3,30
567059,7
8048,20
1,42
1030770
7417,74
0,72
2,22
990860
1951,25
0,19
2002215
7930,97
0,40
0,49
2012108
10462,30
0,52
2991902
122194,10
4,1
2,79
3033973
37164,95
1,22
4681947
104885,30
2,24
4,48
4326137
123177,50
3,56
6.4.5. Determinao da Concentrao de MCO nas Formulaes Desenvolvidas

por CLAE.
As concentraes de MCO nas formulaes desenvolvidas foram quantificadas
por CLAE, utilizando os parmetros cromatogrficos j descritos anteriormente. Dessa
forma, foi utilizada a mesma metodologia para quantificar o teor de MCO na
formulao com o filtro livre e nas formulaes com o MCO nos sistemas
126
nanoestruturados. Isto foi possvel, pois a -ciclodextrina e os lipdios utilizados na

preparao dos lipossomas no interferem na leitura da amostra, que realizada no
mx do MCO que de 310 nm.
O valor das reas encontradas foi plotado na curva padro realizado a cada dia
de experimento e desse modo foi obtido o valor da concentrao da amostra.
A TABELA 14 demonstra os resultados encontrados nas anlises do teor de
MCO nas formulaes desenvolvidas. Sendo que o percentual de MCO encontrado em
todas as formulaes est de acordo com a especificao usual para o teor, a qual
abrange a faixa de 90,0% a 100,0% da quantidade declarada de ativos.
TABELA 14: Concentraes de MCO nas formulaes desenvolvidas obtidas por CLAE.
Formulao*
MCO livre
Concentrao real de
MCO nas formulaes
8,11 g
Teor de MCO nas

formulaes
101, 32 0,65
-CD/MCO
7,88 g
98,45 1,02
Lipo / MCO
7,98 g
99,75 1,38
-CD/MCO + Lipo/MCO
7,92 g
99,01 1,74
Concentrao terica de MCO na formulao = 8 %

Na TABELA 15 esto apresentadas as absorbncias e os valores de FPS
calculados para as quatro formulaes desenvolvidas. A formulao com MCO livre
apresentou valor de FPS in vitro de 14,65 0,09; a formulao contendo o sistema
nanoestruturado -CD/MCO apresentou valor de FPS de 14,80 0,51; a formulao
contendo o sistema Lipo/MCO apresentou valor de FPS de 15,05 0,53 e a formulao
contendo ambos os sistemas -CD/MCO e Lipo/MCO apresentou valor de FPS de
127
14,67 0,26. Portanto, no existe diferena estatisticamente significativa para os

valores de FPS in vitro entre as formulaes anti-solares desenvolvidas (p = 0,600).
Este mtodo no detectou diferena entre a formulao com MCO livre e as
formulaes contendo os sistemas. Este resultado pode estar relacionado com a
impossibilidade do mtodo em no avaliar a interao da formulao ou do sistema com
a pele, determinando apenas o contedo total de MCO na formulao, j que as
amostras so diludas em etanol P.A, levando ao rompimento dos complexos formados.
A vantagem deste mtodo in vitro ser uma ferramenta til, pois pode ser
utilizado como um pr-teste para a determinao do FPS, no controle em processo
durante a fabricao de formulaes fotoprotetoras, sendo ainda um mtodo fcil, de
rpida execuo, de baixo custo alm de ter apresentado resultados com pequeno desvio
padro.
TABELA 15: Valores de absorbncia e do FPS in vitro das formulaes desenvolvidas: gel
creme com MCO livre, gel creme com o sistema -CD/MCO, gel creme com o sistema
Lipo/MCO e gel creme com ambos os sistemas (mdia desvio padro relativo).
MCO livre
-CD/MCO
Lipo/MCO
-CD/MCO +
Lipo/MCO
290
1,270 0,007
1,283 0,043
1,310 0,047
1,279 0,030
295
1,366 0,008
1,381 0,047
1,407 0,050
1,375 0,032
300
1,433 0,009
1,477 0,049
1,473 0,050
1,441 0,033
305
1,486 0,009
1,503 0,050
1,526 0,054
1,495 0,033
310
1,547 0,007
1,565 0,056
1,588 0,056
1,555 0,036
315
1,472 0,009
1,489 0,052
1,511 0,054
1,414 0,090
320
1,271 0,007
1,286 0,045
1,308 0,047
1,279 0,030
FPS
14,65 0,09
14,80 0,51
15,05 0,53
14,67 0,26
128
6.5.2 Determinao do FPS in vivo a Seco.

A determinao do FPS in vivo a seco das formulaes demonstrou que existe
diferena no valor de FPS entre a formulao com MCO livre e as formulaes
contendo os sistemas nanoestruturados. Isto se deve ao fato que na determinao do
FPS in vivo, pode-se verificar a interao destes sistemas com a pele.
Os valores de FPS in vivo a seco das emulses desenvolvidas esto apresentados
na TABELA 16. A anlise estatstica dos dados demonstrou que os valores de FPS in
vivo das preparaes anti-solares desenvolvidas foram significativamente diferentes
(p<0.001).
A formulao com MCO livre apresentou FPS = 8,4 1,7, a formulao
contendo o sistema -CD/MCO apresentou FPS = 8,5 1,5, a formulao contendo o
sistema Lipo/MCO apresentou FPS = 11,0 1,3 e a formulao contendo ambos os
sistemas de liberao apresentou FPS = 11,6 1,6.
A anlise estatstica demostrou que no h diferena estatsticamente
significativa entre a formulao contendo ambos os sistemas nanoestruturados CD/MCO + Lipo/MCO e a formulao contendo o sistema nanoestruturado Lipo/MCO
(p>0.05). Tambm no existe diferena estatsticamente significativa entre a formulao
com o MCO livre e a formulao contendo o sistema nanoestruturado -CD/MCO
(p>0.05).
A TABELA 16 mostra que a formulao que contm ambos os sistemas
nanoestruturados -CD/MCO e Lipo/MCO e a formulao que contm Lipo/MCO
apresentaram os maiores valores de FPS in vivo a seco. Os lipossomas so capazes de
proteger a molcula do filtro solar da absoro sistmica, da degradao metablica e
fsico qumica; com isso, a molcula do filtro solar permanece intacta por um longo
perodo de tempo na pele (GARCIA, 1998; SCALIA et al., 2002). Alm disto, existe
129
uma interao entre o lipossoma e o estrato crneo, promovendo um efeito reservatrio

do ativo nesta camada, consequentemente aumentando o FPS (EDWARDS &
BAEUMNER, 2006).
TABELA 16: Valores de FPS in vivo das formulaes desenvolvidas: gel creme com MCO
livre, gel creme com o sistema -CD/MCO, gel creme com o sistema Lipo/MCO e gel creme
com ambos os sistemas.
Voluntrio
MCO Livre
-CD/MCO
Lipo/MCO
-CD/MCO +
Lipo/MCO
8,0
8,0
12,6
12,6
10,0
10,0
12,4
8,0
6,4
8,0
10,0
12,6
8,0
10,0
12,6
10,0
8,0
8,0
10,0
10,0
8,0
10,0
10,0
12,6
6,4
5,1
10,0
12,6
8,0
10,0
10,0
12,6
12,6
8,0
10,0
12,6
10
8,0
8,0
12,6
12,6
FPS
8,4 1,7
8,5 1,5
11,0 1,3
11,6 1,6
6.5.3 Determinao do FPS in vivo aps Imerso em gua.

A determinao do FPS in vivo aps a imerso em gua possibilita demonstrar se
existe ou no maior interao das formulaes cosmticas com a pele, possibilitando
assim avaliar uma possvel resitncia gua destas preparaes.
A TABELA 17 demonstra todos os valores de FPS in vivo encontrados aps a
imerso em gua, para todas as formulaes desenvolvidas.
130
TABELA 17: Valores de FPS in vivo aps a imerso em gua das formulaes desenvolvidas:
gel creme com MCO livre, gel creme com o sistema -CD/MCO, gel creme com o sistema
Lipo/MCO e gel creme com ambos os sistemas.
Voluntrios
MCO Livre
-CD/MCO
Lipo/MCO
6,4
6,4
12,6
-CD/MCO +
Lipo/MCO
8,0
10,0
6,4
6,4
8,0
8,0
5,2
8,0
8,0
5,2
7,9
12,6
12,6
10,0
6,4
10,0
10,0
6,4
8,0
12,6
10,0
6,4
6,4
8,0
10,0
6,4
6,4
12,6
8,0
8,0
6,4
10,0
10,0
10
6,4
5,2
10,0
10,0
FPS
7,3 1,6
6,5 0,9
10,3 2,2
9,5 1,4
Os valores de FSP in vivo aps a imerso em gua demonstraram uma diferena

estatsticamente significativa entre a formulao contendo ambos os sistema
nanoestruturados (-CD/MCO e Lipo/MCO) e a formulao com MCO livre e contendo
o sistema -CD/MCO (p<0.05). Tambm existe uma diferena estatsticamente
significativa entre a formulao contendo o sistema nanoestruturado Lipo/MCO e a
formulao com MCO livre e contendo o sistema -CD/MCO (p<0.05).
Porm, novamente no h uma diferena estatsticamente significativa entre a
formulao contendo ambos os sistemas nanoestruturados (-CD/MCO e Lipo/MCO) e
a formulao contendo o sistema Lipo/MCO. Assim como, no existe diferena
estatsticamente significativa entre a formulao com MCO livre e a formulao com o
sistema -CD/MCO (p>0.05).
O sistema nanoestruturado -CD/MCO no apresentou resistncia gua, pois
apresentou menor FPS in vivo aps a imerso em gua quando comparada com a
131
formulao contendo o MCO livre. A CD no aumentou a resistncia gua da

formulao, devido a sua propriedade em aumentar a solubilidade de ativos (SCALIA et
al., 2002; SCALIA et al., 2006).
O valor do FPS in vivo a seco da formulao com o sistema nanoestruturado CD/MCO foi maior quando comparado com a formulao com MCO livre, sugerindo a
possibilidade da estabilizao da molcula de filtro solar ou sua menor metabolizao.
A vantagem de se utilizar o sistema nanoestruturado -CD, que este pode reduzir a
capacidade do MCO de sofrer isomerizao e se converter no seu ismero cis, que tem
reduzida absortividade no UV (SUMMERS & SUMMERS, 2005).
A formulao que possui ambos os sistemas nanoestruturado -CD/MCO e
Lipo/MCO apresentou um resultado relevante no teste do FPS in vivo a seco.
Entretanto, esta formulao apresentou uma perda no valor do FPS in vivo aps a
imerso em gua (p<0.05). Esta perda pode ser atribuda ao fato da CD solubilizar seus
inclusos. A combinao de ambos os sistemas pode ser utilizada em formulaes onde
no necessria a resistncia gua.
A FIGURA 38 demonstra que a incluso do MCO em Lipo aumentou o FPS in
vivo (p < 0.05) e demonstrou uma resistncia gua (p>0.05). A incluso de MCO em
-CD no promoveu o aumento do FPS in vivo (p>0.05) e no demonstrou resistncia a
gua (p<0.05). A formulao contendo o complexo Lipo/MCO demonstrou o melhor
resultado no teste de FPS in vivo aps a imerso em gua, devido ao fato de possuir
somente este complexo.
132
FPS in vivo a seco x aps imerso
FPS in vivo a seco

14
FPS aps imerso em gua
12
10
8
6
4
2
0
1
Formulaes
FIGURA 38: Valores de FPS in vivo a seco a aps a imerso em gua nas formulaes
desenvolvidas (mdia; n = 10). 1- formulao com MCO livre; 2 - formulao com -CD/MCO;
3 - formulao com Lipo/MCO; 4 formulao com -CD/MCO + Lipo/MCO.
6.6. Segurana das Formulaes Anti-Solares.

Na avaliao da liberao in vitro de produtos farmacuticos contendo ativos
com baixa solubilidade em gua, geralmente so utilizadas solues receptoras
contendo surfactantes ou solventes orgnicos para aumentar sua solubilidade e garantir
a manuteno da condio sink (BEMVINDO, 2006).
O FDA (1997) recomenda a utilizao de tampo aquoso e misturas
hidroalcolicas, como soluo receptora no sistema de clulas bicompartimentais
(CDER/U.S. FDA, 1997). De acordo com AAPS (2003) dependendo da solubilidade do
ativo, o meio receptor pode conter surfactantes (FIP/AAPS, 2003).
A TABELA 18 demonstra os valores de solubilidade do MCO obtidos nas
solues receptoras testadas neste trabalho (soluo tampo fosfato pH 7,4 com 30% de
133
etanol (v/v) e 2 % de polissorbato 80, soluo tampo fosfato pH 7,4 e soluo tampo
fosfato pH 7,4 com 2, 4 e 5 % de polissorbato 80).
TABELA 18: Valores obtidos para a solubilidade do MCO nas solues receptoras testadas.
Soluo Receptora
Solubilidade determinada
do MCO (g/mL)
Soluo tampo fosfato pH 7,4
37,2

com 2 % de Tween 80
111,8

com 4 % de Tween 80
215,0

com 5 % de Tween 80
271,0
Soluo tampo fosfato com pH 7,4 com

30 % de etanol (v/v) e 2 % de Tween 80
341,9
De acordo com a TABELA 18, o valor mximo de solubilidade do MCO foi

encontrado na soluo tampo fosfato pH 7,4, contendo 30% de etanol (v/v) e 2% de
Tween 80. Entretanto, esta soluo no foi escolhida como soluo receptora, pois o
etanol pode interferir na anlise da formulao gel creme contendo lipossomas.
Henriques (2008) verificou que uma soluo receptora contendo 25% de etanol (v/v)
destruiu as vesculas lipossomais durante o experimento de liberao in vitro.
A solubilidade do MCO em soluo tampo fosfato pH 7,4 foi de 37,2 g/mL
(TABELA 18). Esta baixa solubilidade pode ser explicada pelo fato do ativo ser
praticamente insolvel em gua. O filtro solar apresentou valores intermedirios de
solubilidade (111,8 g/mL) no meio contendo baixa concentrao de tensoativos, ou
134
seja, 2% de Tween 80. Portanto, os maiores valores de solubilidade para o referido

ativo foram alcanados nos meios contendo altas concentraes de tensoativos, 4 % e
5% de Tween 80 (TABELA 18).
Desta forma, a soluo receptora escolhida foi tampo fosfato pH 7,4 contendo
5% de Tween 80, que proporcionou uma concentrao de saturao de 271 g/mL de
MCO. A concentrao no meio receptor no deve exceder 54,2 g/mL (o que
representa 1/5 de 271 g/mL), para garantir a manuteno da condio sink. Uma vez
que, 50 g/mL de MCO correspondem quantidade mxima deste ativo que poder ser
liberado do compartimento doador para o receptor, portanto admite-se que a condio
sink foi obdecida, no ocasionando aumento aprecivel da concentrao de modo a
ocasionar reduo do fluxo de difuso do MCO do compartimento doador para o
receptor
Esta
soluo
receptora
tambm
foi
empregada
nos
estudos
de
permeao/penetrao in vivo, pois o uso de solventes, como por exemplo, o etanol,

poderia interferir muito na integridade da pele suna, modificando as suas estruturas e
conseqentemente interferindo na passagem do ativo.
Os tensoativos tm a capacidade de diminuir a tenso interfacial entre o soluto e
o solvente em que est contido, j que estes agentes contem grupos hidroflicos e
lipoflicos. O Tween 80 um tensoativo lipoflico, por isto foi empregado na soluo
receptora, com o objetivo de aumentar a solubilidade do MCO na soluo tampo
fosfato (ANSEL, POPOVICH & ALLEN, 2000). O MCO apresenta um carter muito
lipoflico, como pode ser verificado atravs do seu coeficiente de partio (log P) de
5,96 (GODWIN, KIM & FELTON, 2002), explicando sua afinidade pelas micelas de
Tween 80 formadas e conseqentemente aumentando sua solubilidade nos meios que
contm o referido tensoativo.
135

O modelo bicompartimental, conhecido como clula de difuso vertical tipo
Franz e membrana sinttica (acetato de celulose), tm sido empregado para realizar
estudos de liberao in vitro de filtros solares em diferentes formulaes (ALVAREZROMN et al., 2001; WISSING & MULLER, 2002; YENER, INCEGL & YENER,
2003; WANG, KASICHAYANULA & GU, 2006).
Na determinao da liberao in vitro do MCO, uma amostra de
aproximadamente 400 g de cada formulao desenvolvida (MCO livre, -CD/MCO,
Lipo/MCO e -CD/MCO + Lipo/MCO) foi aplicada no compartimento doador e, por
conseguinte, ocorreu a difuso deste ativo para a soluo receptora.
Aps um pequeno lag time inicial, observou-se um perfil linear com o tempo,
permitindo o clculo do fluxo no estado estacionrio (Jss) (TABELA 19). Os fluxos
foram calculados para cada clula, por regresso linear, a partir do tempo 60 minutos,
considerando-se que a partir deste ponto o equilbrio j estaria alcanado.
TABELA 19: Fluxo no estado estacionrio (Jss) para cada uma das formulaes estudadas.
Formulao
Fluxo (Jss) durante 3 h (g/cm2/h)*
MCO livre
1,431 0,536
-CD/MCO
0,222 0,043
Lipossoma/MCO
0,689 0,185
-CD/MCO + Lipossoma/MCO
0,796 0,169
Corresponde mdia d.p de seis unidades de ensaio.
Os resultados plotados na FIGURA 39 e os resultados apresentados na TABELA

20 representam a mdia da concentrao de MCO liberada em cada tempo d.p, de seis
unidades de ensaio, para cada formulao desenvolvida.
136
MCOLIVRE
BetaCDMCO
LIPOMCO
LIPOMCO+BetaCDMCO
Quantidade de MCO cedida/rea

(g/cm2)
7
6
5
4
3
2
1
0
-1
30
60
90
120
Tempo (minutos)
150
180
FIGURA 39: Perfil de liberao in vitro do MCO a partir das formulaes desenvolvidas. Erro
das barras indica mdia desvio padro.
TABELA 20: Quantidade mdia de MCO cedida de cada formulao em cada tempo d.p (n =
6).
Tempo (min)
30
60
90
120
150
180
Quantidade cedida/rea (g/cm2) d.p

MCO livre
-CD/MCO
Lipo/MCO
-CD/MCO +
Lipo/MCO
1,38 1,31
0,59 0,21
0,47 0,34
1,24 0,76
2,36 1,48
0,71 0,20
0,62 0,34
1,84 0,74
2,73 1,62
0,80 0,17
1,04 0,51
2,18 0,86
3,63 1,49
0,91 0,19
1,28 0,52
2,41 0,83
4,20 1,68
1,02 0,19
1,58 0,65
2,92 0,66
5,20 1,36
1,15 0,18
2,07 0,49
3,46 0,79
Os dados mostram que o gel creme contendo MCO livre apresentou maior fluxo
1,431 0,536 g/cm2/h, cedendo maior quantidade deste ativo para a soluo receptora
5,20 1,36 g/cm2 em 180 minutos. A formulao apresentou um alto desvio padro
entre as seis clulas indicando uma variabilidade entre as rplicas do ensaio de
liberao. Pelos valores de fluxos encontrados, existe uma diferena estatisticamente
significativa (p<0,001) entre a formulao contendo o filtro livre e as formulaes
137
contendo os sistemas nanoestruturados. Isto pode ser explicado pela caracterstica

lipoflica do ativo, que favoreceu sua liberao da base hidroflica para o compartimento
receptor.
O nanocosmtico contendo -CD/MCO apresentou o menor fluxo 0,222
0,0436 g/cm2/h, cedendo menor quantidade do ativo para a soluo receptora 1,15
0,18 g/cm2 em 180 minutos. Pelos valores de fluxo encontrados existe uma diferena
estatisticamente significativa (p<0,001) entre esta formulao e as demais formulaes
(MCO livre; Lipo/MCO e -CD/MCO + Lipo/MCO). Alm disto, apresentou um baixo
desvio-padro entre as seis clulas, indicando uma pequena variabilidade entre as
rplicas do ensaio de liberao.
Provavelmente, a incluso do MCO na cavidade da -CD pode ter alterado a
atividade termodinmica do ativo. Isto pode ser explicado pela sua menor partio da
formulao para a soluo receptora, uma vez que a solubilidade e o coeficiente de
partio do ativo podem ser modificados pela formao do sistema nanoestruturado, CD/MCO (AULTON, 2005; PUSKS & CSEMPESZ, 2007). Alm disto, esta
formulao contm aproximadamente 13,26 g do sistema, que aumentou visualmente a
consistncia deste nanocosmtico em relao aos demais desenvolvidos. Provavelmente,
a atividade termodinmica do ativo e a consistncia da formulao atuaram em conjunto
para promover uma menor taxa de liberao do MCO.
A formulao contendo o Lipo/MCO apresentou fluxo de 0,689 0,185
g/cm2/h e a quantidade do ativo cedida para a soluo receptora foi de 2,07 0,49
g/cm2 em 180 minutos. Esta formulao tambm apresentou um baixo desvio-padro
entre as seis clulas, indicando uma pequena variabilidade entre as rplicas do ensaio de
liberao. Os valores de fluxo demonstraram que existe uma diferena estatisticamente
significativa (p<0,001) entre esta formulao e as formulaes contendo o filtro livre e
138
o sistema -CD/MCO e que no existe uma diferena estatisticamente significativa

(p>0,001) para a formulao contendo o sistema -CD/MCO + Lipo/MCO.
Provavelmente, o lipossoma alterou a atividade termodinmica do ativo na
formulao, pois o filtro livre possui afinidade pela bicamada fosfolpidica do
lipossoma, dificultando assim, sua partio da formulao para a soluo receptora
(LEONARDI & CHORILLI, 2006).
A formulao contendo os sistemas nanoestruturados -CD/MCO + Lipo/MCO
apresentou fluxo de 0,796 0,169 g/cm2/h e a quantidade do ativo cedida para a
soluo receptora foi de 3,46 0,79 g/cm2, em 180 minutos. Os valores de fluxo
demonstraram que existe uma diferena estatisticamente significativa (p<0.001) entre
esta formulao e as formulaes contendo o filtro livre e o sistema -CD/MCO e no
existe uma diferena estatisticamente significativa (p>0,001) para a formulao que
contm o sistema Lipo/MCO.
A incluso do ativo em ambos os sistemas nanoestruturados -CD e lipossomas
em uma mesma formulao tambm alterou sua atividade termodinmica, este fato pode
ser evidenciado atravs da menor quantidade de MCO cedido para o compartimento
doador. A -CD pode ter interagido com os componentes lipdicos das membranas dos
lipossomas quando presentes em uma disperso aquosa, causando danos e
desestabilizao da bicamada fosfolipdica dos lipossomas, permitindo a liberao
completa ou parcial do ativo a partir das vesculas (PUSKS & CSEMPESZ, 2007).
6.6.3. Estudo de Permeao/Penetrao in vitro Utilizando a Pele Suna.

A pele de orelha de sunos tem sido empregada nos estudos de
permeao/penetrao in vitro de produtos dermatolgicos e cosmticos, devido a sua
similaridade com a pele humana (MEYER & ZSCHEMISC, 2002).
139
6.6.3.1. Desenvolvimento e Validao do Mtodo Para a Extrao e Quantificao

de MCO na Epiderme e Derme Suna.
A avaliao da recuperao da quantidade de MCO adicionado a segmentos
cutneos (epiderme e derme suna) foi realizada por meio da comparao das respostas
obtidas nas amostras e nas spiked solutions correspondentes a cada nvel de massa do
ativo total adicionado.
Os resultados obtidos na validao para o procedimento de extrao do filtro
solar da epiderme e derme esto descritos na TABELA 21.
TABELA 21: Recuperao mdia de MCO na epiderme e derme para trs nveis de
concentrao e seus d.p (n = 3).
Quantidade
adicionada de
Recuperao d.p
Epiderme (g)
Epiderme %
Derme (g)
Derme %
MCO (g)
1,6
1,50 0,22
93,94 13,49
1,34 0,35
83,88 11,74
3,2
2,42 0,94
75,93 9,70
2,34 0,86
73,26 6,85
6,4
5,38 0,05
84,06 0,91
5,37 0,42
83,86 6,56
As taxas de recuperao foram satisfatrias e os desvios padro nos trs

experimentos realizados para cada nvel de concentrao foi considerado aceitvel para
o mtodo bioanaltico (< 15 %, SHAH et al., 1992; ANVISA, 2003), caracterizando,
assim, a sua preciso.
Os resultados referentes s curvas padro (inter e intra dia) esto demonstrados
na FIGURA 40. A mdia do coeficiente de correlao (r) encontrado foi de 0,999
0,0004 para n = 3, indicando que a resposta de CLAE foi linear para as condies de
anlise dentro da faixa de concentrao (0,1 e 20,0 g/mL).
140
Seqncia 1
Seqncia 2
y = 234250x + 108051
r = 0,9996
6000000
Seqncia 3
y = 228991x + 112990
r = 0,9986
y = 222983x + 109935
r = 0,9988
5000000
rea
4000000
3000000
2000000
1000000
0
0
10
15
20
25
Conc mcg/mL
FIGURA 40: Curvas padro de MCO 0,1 a 20,0 g/mL.
A FIGURA 41 apresenta os cromatogramas obtidos das amostras extradas da

epiderme e derme. As setas indicam a ausncia de interferentes no tempo de reteno do
ativo (em torno de 8,45 minutos). Portanto, pode-se observar que existe uma boa
resoluo entre o sinal do MCO e dos interferentes.
O mtodo desenvolvido para a extrao do MCO nas camadas da pele suna,
utilizando fase mvel metanol: gua (87:13) como soluo extratora, agitao em
vortex, mostrou-se exato, preciso e seletivo, sendo adequado para o estudo de
penetrao/permeao cutnea.
Alm disso, Santis (2008) realizou a anlise histolgica da separao dos
segmentos cutneos por microscopia ptica, validando a tcnica para a separao da
epiderme da derme com auxlio do bisturi.
141
a) Epiderme Branco
b) Epiderme + MCO a 6,4 g
c) Derme Branco
d) Derme + MCO a 6,4 g
FIGURA 41: Cromatogramas obtidos na extrao de MCO da pele suna empregando solvente
metanol: gua (87:13), para a avaliao da especificidade do mtodo. a) Branco epiderme, b)
Epiderme + MCO a 6,4 g, c) Derme branco, d) Derme + MCO a 6,4 g. Tempo de reteno 8,45
min.
6.6.3.2. Resultados da Penetrao de MCO na epiderme e derme sunas.

A presena de MCO nos estratos cutneos foi quantificada aps a realizao do
procedimento descrito no item 5.10.4.
As TABELAS 22 e 23 apresentam as massas absolutas do ativo extrado da
epiderme e derme suna, respectivamente, aps 6 horas de experimento, em que a
formulao permaneceu em contato com a pele (rea de 1,96 cm2).
142
TABELA 22: Massa de MCO obtida na epiderme suna em uma rea de 1,96 cm2, aps 6 horas
de contato com a formulao.
Quantidade de MCO na Epiderme (g)

n
MCO livre
-CD/MCO
Lipo/MCO
-CD/MCO +
Lipo/MCO
8,73
15,92
19,73
13,77
11,38
10,88
18,11
16,31
9,35
9,30
18,81
11,78
18,36
8,40
16,96
16,99
Mdia
11,95
11,13
18,04
14,71
Desvio Padro (d.p)
4,41
3,36
1,17
2,39
TABELA 23: Massa de MCO obtida na derme suna em uma rea de 1,96 cm2, aps 6 horas de
contato com a formulao.
Quantidade de MCO na Derme (g)

n
MCO livre
-CD/MCO
Lipo/MCO
-CD/MCO +
Lipo/MCO
13,03
16,77
8,50
12,50
9,97
13,63
12,96
17,73
10,21
17,01
7,97
12,06
16,34
9,31
8,28
18,75
Mdia
12,38
14,18
9,40
15,26
Desvio Padro (d.p)
2,98
3,59
2,36
3,47
A figura 42 mostra a representao grfica dos resultados apresentados nas

tabelas 22 e 23.
143
25
Epiderme
Massa de MCO (g)
Derme
20
15
10
5
0
1
Formulaes
FIGURA 42: Massas absolutas de MCO extrada da epiderme e derme aps 6 horas de contato
das formulaes com a pele, em uma rea de 1,96 cm2. 1- formulao com MCO livre; 2 formulao com -CD/MCO; 3 - formulao com Lipo/MCO; 4 formulao com -CD/MCO
+ Lipo/MCO.
A anlise estatstica demonstrou que no existe diferena estatisticamente

significativa no perfil de penetrao cutnea na epiderme e derme para as formulaes
1, 2 e 4 a nvel de significncia de 5% (p>0,05). Entretanto, existe uma diferena
estatisticamente significativa (p= 0,037) para a quantidade de MCO retido na epiderme
e na derme suna para a formulao 3 (gel creme contendo Lipo/MCO).
A massa mdia de MCO encontrada na epiderme e derme suna, referente
formulao contendo MCO livre, foi de 11,95 4,41 g e 12,38 2,98 g,
respectivamente. A quantidade do ativo retida na epiderme pode ser atribuda sua alta
afinidade pelo EC e epiderme vivel, devido sua natureza altamente lipoflica. Esta
propriedade particularmente importante para os filtros solares, uma vez que, a
quantidade do ativo no EC pode ser diretamente relacionada com o FPS (GODWIN,
2002).
A massa mdia de MCO encontrada na epiderme e derme suna, referente
formulao contendo -CD/MCO, foi de 11,13 3,36 g e 14,18 3,59 g,
144
respectivamente. A maior concentrao do ativo na derme pode ser atribuda ao

comportamento da CD em promover modificaes nas propriedades do EC, alterando
sua resistncia natural, retendo ou liberando a substncia ativa para a pele. Alm disto, o
MCO incluso pode ser liberado pela sua substituio por outras molculas com
dimenses adaptveis a cavidade das CDs, como, os lipdios, fosfolipdeos e colesterol,
presentes na estrutura da pele (LEGENDRE et al., 1995; BENTLEY et al., 1997; IRIE
& UEKAMA, 1997; LOFTSSON & MASSON, 2001).
A massa mdia de MCO encontrada na epiderme e derme suna referente
formulao contendo o Lipo/MCO apresenta uma diferena estatisticamente
significativa (18,041,17 g e 9,4 2,36 g, respectivamente, p=0,037). Este sistema
nanoestruturado promoveu maior reteno do MCO na epiderme, isto pode ser atribudo
ao fato destes lipossomas serem constitudos por uma alta concentrao de
fosfatidilcolina que favoreceu a deposio do referido sistema no EC, resultando em um
efeito reservatrio do ativo (LEONARDI & CHORILLI, 2008).
A massa mdia de MCO encontrada na epiderme e derme suna referente
formulao contendo ambos os sistemas nanoestruturados (Lipo/MCO e -CD/MCO)
no apresentam diferena estatisticamente significativa (14,712,39 g e 15,26 3,47
g, respectivamente (p>0,05). Este resultado demonstra o comportamento individual de
cada sistema, ou seja, a atuao como promotor de permao da -CD e o efeito de
reservatrio do lipossoma, como explicado anteriormente.
A formulao contendo ambos os sistemas nanoestruturados mostrou-se eficaz
frente radiao ultravioleta, pois apresentou maior valor de FPS, in vivo, a seco
quando comparado com as demais formulaes. Entretanto, no apresentou o mesmo
desempenho na avaliao de FPS in vivo aps imerso em gua, ocorrendo uma perda
145
no valor da referida medida. Portanto, a combinao de ambos os sistemas pode ser

utilizada em produtos onde no necessria a resistncia gua.
A formulao contendo o sistema nanoestruturado Lipo/MCO apresentou um
expressivo resultado na avaliao da penetrao in vitro, evidenciando o efeito
reservatrio de MCO no EC. Esta reteno proporcionou relevantes valores de FPS in
vivo tanto a seco quanto aps imerso em gua, garantindo assim, maior ao
fotoprotetora do referido nanocosmtico.
146
7. Concluso.
Com base nos resultados obtidos no presente trabalho, foi possvel concluir que:
A matria-prima MCO foi adequada como padro de trabalho, aps sua

caracterizao por espectroscopia de ultravioleta e infravermelho, apresentando
especificaes de acordo com a literatura.
O mtodo de kneading ou empastagem mostrou-se bastante adequado para a

preparao do sistema nanoestruturado -CD/MCO. Este fato foi evidenciado
atravs da caracterizao deste sistema nanoestruturado por: difrao de raio X,
espectrometria de ressonncia magntica nuclear de hidrognio e espectroscopia
de infravermelho. Estas metodologias comprovaram a incluso do MCO na
cavidade da CD. A quantidade de MCO inclusa no sistema, foi determinada por
espectroscopia de ultravioleta e apresentou um rendimento de 89%, o qual foi
bastante satisfatrio.
O mtodo de hidratao do filme lipdico foi adequado para a preparao do

sistema nanoestruturado Lipo/MCO. Este mtodo demonstrou uma proporo
adequada entre a quantidade de MCO incorporado e os fosfolipdios. Ambos os
mtodos, MO e DL, mostraram-se teis e complementares entre si para a anlise
das vesculas nas preparaes lipossomais. A visualizao por MO permitiu a
confirmao da formao das vesculas. Os dimetros encontrados por DL
demonstraram que os lipossomas obtidos estavam dentro da faixa pretendida
(em torno de 800 nm).
O resultado do FPS in vitro pelo mtodo de Mansur demonstrou que no existe

diferena estatisticamente significativa entre a formulao com MCO livre e as
formulaes contendo os sistemas nanoestruturados (p = 0,600). Este fato pode
147
ser atribudo incapacidade deste mtodo de avaliar a interao destes sistemas

nanoestruturados com a pele.
O resultado do FPS in vivo a seco mostrou que existe diferena estatisticamente

significativa entre as formulaes contendo o sistema nanoestruturado
Lipo/MCO, a formulao com MCO livre e com o sistema -CD/MCO. As
formulaes contendo o sistema Lipossoma/MCO apresentaram os maiores
valores de FPS in vivo, confirmando a possibilidade do lipossoma exercer um
efeito reservatrio no EC.
O resultado do FPS in vivo aps imerso em gua demonstrou que a formulao

com o sistema nanoestruturado -CD/MCO, no apresentou resistncia gua;
ou seja, houve uma perda no seu FPS. Este resultado evidenciou que a CD
capaz de aumentar a solubilidade em gua do seu incluso. A formulao que
apresentou o melhor desempenho, ou seja, a menor perda de FPS, foi a que
continha somente o sistema nanoestruturado Lipo/MCO.
A formulao contendo o sistema nanoestruturado -CD/MCO foi a que

apresentou menor fluxo e cedeu a menor quantidade de MCO para a soluo
receptora, no estudo de liberao in vitro. Entretanto, a formulao contendo o
sistema Lipo/MCO tambm apresentou um fluxo baixo de MCO. Neste estudo,
foi constatado que provavelmente os sistemas nanoestruturados alteraram a
atividade termodinmica do MCO, reduzindo a quantidade de MCO cedida para
a soluo receptora.
O estudo de penetrao in vitro comprovou o efeito reservatrio que o lipossoma

capaz de fazer com o EC. Portanto, a formulao contendo o sistema
nanoestruturado Lipo/MCO produziu acmulo de MCO na epiderme.
148
Os resultados dos testes de FPS in vivo a seco e, aps imerso em gua,

confirmam que o acumulo de MCO na epiderme, ou seja, sua maior reteno na
epiderme foi capaz de aumentar sua propriedade fotoprotetora. Portanto, a
formulao que obteve o melhor desempenho em todos os testes realizados foi o
nanocosmtico contendo o sistema nanoestruturado Lipo/MCO.
149
8. Referncias Bibliogrficas.
ALBERTI, I.; KALIA, Y.N.; NAIK, A.; BONNY, J.D.; GUY, R.H. Effect of
ethanol and isopropyl myristate on the availability of topical terbinafine in
human stratum corneum in vivo. Int J of Pharm, Amsterdam, v.219, p.11-19,
2001b.
ALVAREZ- ROMN, R.; BARR, G.; GUY, R.H.; FESSI, H. Biodegradable

polymer nanocapsules containing a sunscreen agent: preparation and
photoprotection. Eur J of Pharm and Biopharm, v.52, p. 191-195, 2001.
ANDEGA, S.; KANIKKANNAN, N.; SINGH, M. Comparison of the effect of

fatty alcohols on the permeation of melatonin between porcine and human skin.
J of Controlled Release, Amsterdam, v.77, p.17-25, 2001.
ANGELOVA, A.; RINGARD-LEFEBVRE, C.; BASZKIN, A. Drugcyclodextrin association constants determined by surface tension and surface
pressure measurements. II. Sequestration of water insoluble drugs from air-water
interface: retinol--cyclodextrin system. J. of Coll Interfacial Sci, n.212, p. 280285, 1999.
ANSEL, H.C.; POPOVICH, N.G.; ALLEN, L.V.J.R. Farmacotcnica: formas

farmacuticas e sistemas de liberao de frmacos. So Paulo: Premier Editorial,
p.397-400, 2000.
AULTON, M.E. Delineamento de Formas Farmacuticas. 2. ed. Porto Alegre:

Artmed, 2005.
AZULAY, R.D.; AZULAY, D.R. Dermatologia, 2 edio revisada e atualizada

1999.
BARGHAM, A.D. Physical structure and behaviour of lipidis and lipid

enzymes. Adv. Lipid Res, v. 1, p. 65-104, 1963.
BARRY, B.W. Novel mechanisms and devices to enable successful transdermal

drug delivery. Eur. J. of Pharm Sci, n. 14, p.101-114, 2001.
BARTH, A.L. Fator de proteo solar versus coeficiente de carga de filtros

solares qumicos: avaliao fotobiolgica de uma mistura de filtros solares
qumicos. 2000. 90f. Dissertao de Mestrado em Cincias Farmacuticas Faculdade de Farmcia, Universidade Federal do Rio de Janeiro, 2000.
BARTLETT, G.R. Phosphorus assay in column chromatography. J of Biological

Chemistry, v.234, p.466-468, 1959.
BEMVINDO, C.S. Estudo Comparativo da Liberao e Penetrao Cutnea de

Nitrato de Miconazol de Emulses Tpicas Comerciais. 2006. 110 f. Dissertao
150
de Mestrado em Cincias Farmacuticas Faculdade de Frmacia, Universidade

Federal do Rio de Janeiro, 2006.
BENTLEY, M.V.; VIANNA, R.F.; WILSON, F.; COLLETT, J.

Characterization of the influence of some cyclodextrin on the stratum corneum
from hairless mouse. J. Pharm and Pharmacol., London, v.49, p.397-402, 1997.
BENTLEY, M. V.; LOPEZ, R. F. Curso de permeao cutnea in vitro II.

Ribeiro Preto: 2002. Apostila.
BETZ, G. et al. In vivo comparison of various liposome formulations for

cosmetic application. Int. J. Pharm. V. 296, p. 44-54, 2005.
BHATIA, K. S.; GAO, S.; SINGH, J. Effect of penetration enhancers

andiontophoresis in the FT-IR spectroscopy and LHRH permeability through
porcine skin. J of Controlled Release Amsterdam, v.47, p. 81-89, 1997.
BLANCO, M.D.; BERNARDO, M.V.; TEIJN, C.; SASTRE, R.L.; TEIJN,

J.M. Transdermal application of bupivacaine-loaded poly(acrylamide(A)-comonomethyl itaconate) hydrogels. Int. J. Pharm., v.255, p.99-107, 2003.
BORSADIA, S. et al. Factors to be considered in the evaluation of

bioavailability and bioequivalence of topical formulations. Skin Pharmacol.,
Basel, v.5, p.129-145, 1992.
BOUWSTRA, J.A. et al. The role of ceramide composition in the lipid

organisation of the skin barrier. Biochim et Biophys Acta-Biomembranes,
v.1419, n.2, p.127-136, 1999.
BOUWSTRA, J. A.; HONEYWELL-NGUYEN, P.L. Skin structure and mode

of action of vesicles. Advanced drug deliv rev, v.54, Suppl. 1, p. S41-S55, 2002.
BRASIL. Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria. Resoluo RE no 899, de 29

de maio de 2003. Guia para validao de mtodos analticos e bioanalticos.
Dirio Oficial [da] Repblica Federativa do Brasil, Braslia, DF, 02 jun. 2003.
Disponvel em: http://www.e-legis.anvisa.gov.br. Acesso em: 20 de out. 2006.
. Resoluo RDC no 47, de 16 de maro de 2006. Lista de filtros

ultravioletas permitidos para produtos de higiene pessoal, cosmticos e
perfumes. Dirio Oficial [da] Repblica Federativa do Brasil, Braslia, DF, 17
mar. 2006. Disponvel em: http://www.e-legis.anvisa.gov.br. Acesso em: 10 de
fev. 2007.
BREWSTER, M.E.; LOFTSSON, T. Cyclodextrins as pharmaceutical

solubilizers. Adv. Drug. Deliv Rev, v. 59, p. 645-666, 2007.
BRITSH PHARMACOPEIA (BP, Farmacopia Britnica). V. 2, p. 109, 1998.
151
BUDAL, R. M. Estudos de formao de complexos de incluso em

ciclodextrinas. 2003. 197 f. Tese de doutorado em Qumica Programa de Ps
Graduao em Qumica da Universidade Federal de Santa Catarina,
Florianpolis, 2003.
CAMERON, K. S.; FIELDING, L. NMR diffusion spectroscopy as a measure of

host-guest complex association constants and as a probe of complex size. J of
Organic Chem., v. 66, n. 21, p. 6891-6895, 2001.
CAO, F.; GUO, J.; PING, Q. The physicochemical characteristics of freeze dried scutellarin-cyclodextrin tetracomponent complexes. Drug delivery Ind
Pharma, v. 31, n. 8, p. 747-756, 2005.
CHAN, L.W.; KURUP, T. R. R.; MUTHAIAH, A.; THENMOZHIYAL, J. C.

Interaction of p-hydroxybenzoic esters with beta-cyclodextrin. Int. J. Pharm, v.
195, p. 71-79, 2000.
CHATTARAJ, S.C. et al. A simple diffusion cell to monitor drug release from
semi-solid dosage forms. Int J of Pharm, n. 120, p.119-124, 1995.
COELHO, et al. Preparation and Evaluation of inclusion Complexes of

commercial sunscreens in cyclodextrins and Montmorillonites: Performance and
Substantivity Studies. Drug Development and Industrial Pharmacy. v. 34, n. 5, p.
536-546, 2008.
COLIPA- The European Cosmetic, Toiletry and perfumary Association

International Sun Protection Factor (SPF) Test Method- www.colipa.com, 2006.
CUNHA-FILHO, M. S. S.; S-BARRETO, L. C. L. Utilizao de

ciclodextrinas na formao de complexos de incluso de interesse farmacutico.
Revista de Cincias Farmacuticas Bsica e Aplicada, v. 28, n. 1, p. 1-9, 2007.
DAMIANI, E.; ROSATI, L.; CASTAGNA, R.; CARLONI, P.; GRECI, L.

Changes in ultraviolet absorbance and hence in protective efficacy against lipid
peroxidation of organic sunscreens after UVA irradiation. J. of Photochem and
Photobiol B: Biology, v. 82, p. 204-213, 2006.
DANGELO, J.G.; FANTINI, C.A. Anatomia humana sistmica e segmentar.

2.ed. So Paulo: Atheneu, 2005.
DAVIS, S.S.; KHANDERIA, M.S.Viscoelastic properties of pharmaceutical

semisolids: characterization of the plastibases for bioavailability studies. J.
Pharm. Pharmacol, v. 24, p. 176-180, 1972.
DIEMBECK, W. et al. Test Guidelines for In vitro Assessment of Dermal

Absorption and Percutaneous Penetration of Cosmetic Ingredients, Food and
Chemical Toxicol, n. 37, p.191-205, 1999.
152
DIFFEY, B. L. Indices of protection from in vitro assay of sunscrenns. In:

LOWE, N.J.; SHAATH, M.A.; PATHAK, M.A. Sunscreens Development,
Evaluation, and Regulatory Aspects. New York: Marcel Dekker, p. 589-600,
1997.
DIFFEY, B. L. Human exposure to solar ultraviolet radiation. J. Cosmet.

Dermatol., v.1, p.124-130, 2002.
DUCHNE, D.; WOUESSIDJEWE, D. Pharmaceutical uses of cylodextrins

and derivatives. Drug Dev. Ind. Pharm, v. 16, p. 24872499. 1990.
DUCHENE, D.; WOUESSIDJEWE, D. New possibilities for the pharmaceutical

uses of cyclodextrins and their derivates. Chimica Oggi, v.1, n.2, p. 17-24, 1993.
DUCHENE, D.; WOUESSIDJEWE, D.; POELMAN, M. C. Les cyclodextrines

dans les preparations pour usage dermique. In: Seiller, M., Martini, M. C. (Eds),
Formes Pharmaceutiques pour Applications Locales. Lavoisier Tec Doc, Paris,
pp. 480-499, 1996.
DUCHENE, D.; BOCHOT, A.; YU, S. C.; PEPIN, C.; SEILLER, M.

Cyclodextrines and emulsions. Int. J. Pharmac. 266, 85-90, 2003.
EDWARDS, K.A.; BAEUMNER, A.J. Analysis of liposomes. Talanta. V.68,

p.1432-1441, 2006.
ELSAYED, M. M. A.; ABDALLAH, O. Y.; NAGGAR, V. F.;

KHALAFALLAH, N. M. Lipids vesicles for skin delivery of drugs: reviewing
three decades of research. Int. J. of Pharm, v. 332, p. 1-16, 2007.
ESPOSITO, E.; DRECHSLER, M.; MARIANI, P.; SIVIERI, E.; BOZZINI, R.;
MONTESI, L.; MENEGATTI, E.; CORTESI, R. Nanosystems for skin
hydration: a comparative study. Int J of Cosmetic Sci, v.29, p.39-47, 2007.
F.D.A. United States of America Department of Health and Human Services. In:
Guidance Documents, Guidance for Industry: SUPAC-SS Nonsterile Semisolid
Dosage Forms. Scale-up and Postapproval Changes: Chemestry, manufacturing,
and controls; In vitro Release Testing and In vivo Bioequivalence
Documentation, 1997. Disponvel em: http://www.fda.gov.
FERREIRA, A.O.; BRANDO, M. F.; SILVA, M. A. D. C. G. Guia prtico de

farmcia magistral. Juiz de Fora, MG: Ed. Ortofarma, p. 356, 2002.
FERRY, L.L.; ARGENTIERI, G.; LOCHNER, D.H. The comparative histology

of porcine and guinea pig skin with respect to iontophoretic drug delivery.
Pharm.Acta Helv., Amsterdam, v.70, p.43-56, 1995.
FIELDING, L. Determination os Association Constant (Ka) from solution NMR

Data. Tetrahedron, v. 56, p. 6151-6170, 2000.
153
FLOR, J.; DAVOLOS, M. R.; CORREA, M. A. Protetores Solares. Qumica

Nova. V. 30, n. 1, p. 153-158, 2007.
FRANZ, T.J. Percutaneous absorption. On the relevance of in vitro data. Invest.

Dermatol, v. 64, p. 190-195, 1975.
FREITAS, Z.M.F. Sntese e avaliao das propriedades fotoprotetoras de steres

glicerdicos do cido p-metoxicinmico. 1997, 159 p. Dissertao de Mestrado
em Cincias Farmacuticas - Faculdade de Farmcia, Universidade Federal do
Rio de Janeiro,1997.
FREITAS, Z. M. F.; GONALVES, J. C. S.; SANTOS, E. P.; VERGANINI, A.

Glyceridic esters of p-methoxycinnamic acid. A new sunscreen of the cinnamate
class. Int J of Cosmetic Sci, v. 23, p. 147-152, 2001.
FREITAS, Z.M.F. Avaliao biofarmacotcnica de formulaes dermatologicas

semi-slidas de cetoconazol. 2005, 154 f. Tese de Doutorado em Frmacos e
Medicamentos-Faculdade de Cincias Farmacuticas, Universidade de So
Paulo, So Paulo, 2005.
FROMMING, K. H.; SZEJTLI, J. Cyclodextrins in Pharmacy. Kluwer

Academic Publishers, Dordrecht, 1994.
GARCIA, S. Liposomas com Filtro Solar: preparao e controle de qualidade.

1998. 161f. Tese (Doutorado em Cincias Farmacuticas)Faculdade de
Cincias Farmacuticas Universidade de So Paulo, 1998.
GASPAR, L. R.; MAIA CAMPOS, P. M. B. G. Evaluation on the photostability

of different UV filter combinations of a sunscreen. Int. J. Pharm., v. 307, p. 123128, 2006.
GLAVAS-DODOV, M et al. Release profile of lidocaine HCl from topical

liposomal gel formualtion. Int. J. of Pharm. V. 242, p. 381-383, 2002.
GODWIN, A. D.; KIM, N. H.; FELTON, L.A. Influence of Transcutol CG on

the skin accumulation and transdermal permeation of ultraviolet absorbers. Eur.
J of Pharmac and Biopharmac, v. 53, p. 23-27, 2002.
GOMESZ-HENS, A.; FERNNDEZ-ROMERO, J. M. The role of liposomes in

analytical processes. Trends in Analytical Chem., v.24, n. 1, p. 9-19, 2005.
GONZALEZ, H. G.; FARBROT, A.; LARK, O. Percutaneous absorption of

benzophenone-3, a common component of topical sunscreens. Clinical and
Experimental Dermatol, v. 27, p.691-694, 2002.
GONZALEZ, H. G.; FARBROT, A.; LARK, O.; WENNBERG, A. M.

Percutaneous absorption of the sunscreen benzophenone-3 after repeated wholebody applications, with and without ultraviolet irradiation. Photobiology, v. 154,
p. 337-340, 2006.
154
HADGRAFT, J. Skin, the final frontier. Int. J. of Pharm., v.224, p.1-18, 2001.
HAIGH, J.M.; SMITH, E.W. The selection and use of natural and synthetic
membranes for in vitro diffusion experiments. Eur J of Pharm Sci, v.2, p.311330, 1994.
HANY, J.; NAGEL, R. Nachweis von UV-Filtersubstanzen in Muttermilch.

Deustsche Lebensmittel-Rundscahu, n. 11, p. 341-345, 1995.
HARRIGAN, P. R.; MADDEN, T. D.; CULLIS, P. R. Protection of liposomes

during dehydration or freezing. Chem and Physics os Lipids, v. 52, p. 139-149,
1990.
HEDGES, A.R. Industrial applications of cycodextrins. Chem. Rev. 98, 20352044, 1998.
HENRIQUES, B.G. Desenvolvimento e Avaliao de Preparaes Lipossomais

Contendo Filtros Solares Slidos UVA e UVB. 2008. 175 f. Dissertao de
Mestrado em Cincias Farmacuticas - Faculdade de Farmcia, Universidade
Federal do Rio de Janeiro, 2008.
HIRSCHBERG, J.G.; SANTUS, R, KOHEN, E. Photobiology. San Diego:

Academic Press, 1995, 506 p.
HUONG, S. P. The photoisomerization of the sunscreen ethylhexyl p-methoxy

cinnamate and its influence on the sun protection factor. J. Photochem.
Photobiol A Chem., v. 186, n. 1, p. 65-70, 2007.
IARC, Monographs on the Evaluation of Carcinogenic Risks to Humans;

Ultraviolet Radiation; Volume 55. Lyon, France, Sci Publ, 1992.
ICH Q2A., 1995. Text on Validation of Analytical Procedures. Geneva.
IMBERT, D.; WICKETT, R. R. Topical delivery with liposomes. Cosmet.

Toilet, v. 110, p. 32-45, 1994.
INUI, M. et al. Effect of UV screens and preservatives on vitellogenin an

choriogenin production in male medaka (Oryzias latipes). Toxicology, v. 194, n.
1-2, p. 43-50, 2003.
IRIE, T., UEKAMA, K. Pharmaceutical applications of cyclodextrins. III.

Toxicological issues and safety evaluation. J. Pharm. Sci, v. 86, p.147-162,
1997.
JANJUA, N. R. et al. Systemic absorpition of the sunscreens Benzophenone-3,

octyl-methoxycinnamate and 3-(4-Methyl-Benzylidene) Camphor after wholebody topical application and reproductive hormone levels in humans. J. Invest.
Dermatol, v.61, p.57-61, 2004.
155
JANOUSEK, A. Regulatory aspects of sunscreens in Europe. In: LOWE, N.J.;

SHAATH, M.A.; PATHAK, M.A. Sunscreens Development, Evaluation, and
Regulatory Aspects. New York: Marcel Dekker, p.589-600, 1997.
JIMNEZ, M. M.; PELLETIER, J.; BOBIN, M.F.; MARTINI, M.C. Influence

of encapsulation on the in vitro percutaneous absorption of octyl
methoxycinnamate. Int. J. Pharm., v. 272, p. 45-55, 2004.
KIRCHOFF, V. W. J. H. Oznio e radiao UVB. So Jos dos Campos, So

Paulo. Transtec, 1995.
KULLAVANIJAYA, P.; LIM, H.W. Photoprotection. J. Am. Acad. Dermatol,

v.52, p.937-958, 2005.
LAUTENSCHLAGER, S.; WULF, H.; PITTELKOW, M. Photoprotection. The

Lancet, v. 370, n. 9586, p. 528-537, 2007.
LEGENDRE, J.Y., RAULT, I., LUIJTEN, W., et al. Effects of (-cyclodextrins

on skin: implications for the transdermal delivery of piribediland a novel
cognition enhancing drug. Eur. J. Pharm. Sci, v.3, p. 311-322, 1995.
LEONARDI, G. R.; CAMPOS, P. M. B. G. M. Penetrao cutnea. Cosmetics

& Toiletries, v. 9, p. 34- 36, 1997. Ed. Portugus.
LEONARDI, G.R.; CHORILLI, M. Dermofarmcia. . Bases Dermocosmticas,

Microemulses & Lipossomas. RX Editora, So Paulo, 2006, 112 p.
LEPORI, L. R. Miniatlas: a pele. 1 ed., So Paulo: Soriak, 2002.
LIAM, T.; HO, R. J. Y. Trends and developments in liposome drug delivery

systems. J. of Pharm. Sci, v. 90, n. 6, p. 667-679, 2001.
LOBO, B.W. P. Avaliao da estabilidade fsico-qumica de misturas totais de

nutrientes para uso intravenoso neonatal. 2005. 115f. Dissertao de Mestrado
em Cincias Farmacuticas- Faculdade de Frmacia, Universidade Federal do
Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, 2005.
LOFTSSON, T.; BODOR, N. Effects of 2-hydroxipropyl-b-Cyclodextrines on

the aqueous solubility of drugs and transdermal delivery of 17 -estradiol. Acta.
Pharm. Nord., Stockolm, v.1, p.185-194, 1989.
LOFTSSON, T. Effects of Cyclodextrins on the Chemical Stability of Drugs in

Aqueous Solutions- Drug Stability, 1995.
LOFTSSON, T. Increasing the cyclodextrin complexation of drugs and drug

biovailability through addition of water-soluble polymers. Pharmazie., n. 53, p.
733-740, 1998a.
156
LOFTSSON, T.; MASSON, M.; SIGURDSSON, H.H.; MAGNSSON, P.;

GOFFIC, F. Cyclodextrins as co-enhancers in dermal and transdermal drug
delivery. Pharmazie, Berlin, v.53, p. 137-139, 1998b.
LOFTSSON, T.; MASSON, M. Cyclodextrines in topical drug formulations:

theory and practice. Int. J. Pharmac. 225, 15-30, 2001.
LOPEZ, R.F.L.; COLLETT, J.H.; BENTLEY, M.V.L.B. Influence of

cyclodextrin complexation on the in vitro permeation and skin metabolism of
dexamethasone. Int. J. Pharmac. 200, 127-132, 2000.
MA, R. et al. UV filters with antagonistic action at androgen receptors in the

MDA-kb2 cell transcriptional-activation assay. Toxicol. Sci., v.74, p. 43-50,
2003.
MANSUR, J. S.; BREDER, M. N. R.; MANSUR, M. C. A.; AZULAY, R. D.

Determinao do fator de proteo solar por espectrofotometria. Anais Brasileiro
de Dermatologia, v. 61, n. 3, p. 121-124, 1986.
MARTINDALE, The Complete Drug Reference. Thirty Second Edition. Editado

por Katheleen Parfitt, Pharmaceutical Press, London, UK, ISBN: 085369429,
1999, P.1487.
MARTINI, M. C. Introducion a la dermofarmcia y a la cosmetologia.

Zaragoza: Ed. Acribia, 2005, p. 39.
MARTINI, M.C.; SEILLER, M. Actifs et additifs en Cosmetologie. Paris,.

Technique & Documentation, 2006.
MARQUES, H.M.C. Preparation of complexes: evidence for complex

formation. Revista Portuguesa de Frmacia. V. XLIV, n.4, p. 157-163, 1994.
MASSON, M.; LOFTSSON, T.; MASSON, G.; STEFANSSON, E.

Cyclodextrins as permeation enhancers: some theoretical evaluations and in
vitro testing. J. Contr. Rel. 59, 107-118, 1999.
MATSUDA, H.; ARIMA, H. Cyclodextrins in transdermal and rectal delivery.

Adv. Drug. Deliv. Rev.,n. 36, p. 81-99, 1999.
MEDI, M.B.; SINGH, J. Electronically facilitated transdermal delivery of

human parathyroid hormone (1-34). Int. J. Pharm., Washington, v.263, p. 25-33,
2003.
MEHNERT, W.; MDER, K. Solid lipid nanoparticles. Production,

characterization and applications. Adv Drug Deliv Rev., v. 47, p. 165-196, 2001.
MELO, A.L. et al. Enhanced schistosomicidal efficacy of tartar emetic

encapsulated in pegylated liposomes. Int. J. Pharm., v.255, p. 227-230, 2003.
157
MENON, G.K. New insights into skin structure: scratching the surface.
Advanced drug deliv. Rev., v.54, S1, p.S3-S17, 2002.
MERWALD, H.; KLOSNER, G.; KOKESCH, C.; DER-PETROSSIAN, M.;

HONIGSMANN, H.; TRAUTINGER, F. UVA induced oxidative damage and
cytotoxicity depend on the mode of exposure. J. Photochem. Photob. B: Biology,
v.79, p.197-207, 2005.
MIGRATORI, S. In situ determination of partition and diffusion coefficients in

the lipid bilayers of stratum corneum. Pharm. Res., New York, v.17, n.8, 2000.
MIRANDA, M.C. Desenvolvimento de lipossoma com produto repelente de

insetos e metodologia analtica. 2005. 112f. Dissertao (Mestrado em Cincias
Farmacuticas)- Faculdade de Farmcia, Universidade Federal do Rio de
Janeiro, Rio de Janeiro, 2005.
MOSER, K. et al. Passive skin penetration enhancement and its quantification in

vitro. Eur. J. of Pharm. and Biopharm., v.52, p.103-112, 2001.
MOTA, A. C. V. Estudo de Cedncia de Filtros Solares Inclusos em Sistemas de

Liberao. 2005, 84 f. Dissertao de Mestrado em Cincias Farmacuticas,
Faculdade de Frmacia-Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro,
2005.
MONTENEGRO, L. et al. In vitro skin permeation of sunscreen agents from

O/W emulsions. Int. J of Cosmetic. Sci., v.30, p.57-65, 2008.
MLLER, M. et al. Physicochemical characterization of liposomes with

encapsulated local anaesthetics. Int. J. Pharm., v.274, p.139-148, 2004.
MURA, P. et al. Evaluation of transcutol as a clonazepan transdermal

permeation enhancer from hydrophobic gel formulations. Eur. J. Pharm. Sci, v.8,
p. 365-372, 2003.
NETO, B. B.; SCARMINIO, I. S.; BRUNS, R. E. Como fazer experimentos:

Pesquisa e Desenvolvimento na cincia e na indstria. 2 ed., Campinas:
UNICAMP, 2002.
NETZ, P.A; GONZALEZ ORTEGA, O.G. Fenmenos de Transporte. In:

NETZ, P.A; GONZALEZ, O.G. Fundamentos de fsico-qumica. 1. ed. Porto
Alegre: Artmed, cap.8, p.224-245, 2002.
NEW, R. R. C. Liposomes: a pratical approach. Oxford: Oxford University

Press, 1997, p.1-23.
NOHYNEK, G.J.; SCHAEFER, H. Benefit and Risk of organic ultraviolet

filters. Regul. Toxicol. Pharm. v.33, p.285-299, 2001.
OSTERWALDER, U.; LUTHER, H.; HERZOG, B. Novo protetor UVA.

Cosmetics & Toiletries, v. 12, jul/ago, 2000.
158
PATTANAARGSON, S. et al. Photoisomerization of octyl methoxycinnamate.

J. Photochem and Photobiol A: Chemistry., v.161, p.269-274, 2004.
PELLET, M.A.; ROBERTS, M.S.; HADGRAFT, J. Supersaturated solutions

evaluated with an in vitro stratum corneum tape stripping technique. Int. J. of
Pharm., v. 151, p. 91-98, 1997.
PERUGINI, P. et al. Effect of nanoparticle encapsulation on the photostability

of the sunscreen agent, 2-ethylhexyl-p-methoxycinnamate. Int. J. Pharm. V. 246,
p. 37-46, 2002.
PERSHING, L.K.; CORLETT, J.; JORGENSEN, C. In vivo pharmacokinetics

and pharmacodynamics of topical ketoconazole and miconazole in human
stratum corneum. Antimicrob. Agents Chemoter, Bethesda, v.38, p.90-95, 1994.
PERTINHEZ, T.A. et al. Caracterizao do complexo de incluso

ropivacana:-ciclodextrina.Quim. Nova, v.30, n. 5, sept/out, 2007.
PETRAZZUOLI, M. Advances in sunscreens. Curr. Probl. Dermatol, v.12, n. 6,

p. 287-290, 2000.
PUGLIA, C. et al. Evaluation of in vivo- topical anti-inflammatory activity of

indometacin from lipossomal vesicles. J. Pharm. Pharmacol. V. 56, p. 12251232, 2004.
PUSKS, I.; CSEMPESZ, F. Influence of cyclodextrins on the physical stability

of DPPC-liposomes. Colloid. Surf B: Biointerfaces. V. 58, p. 218-224, 2007.
RAMON, E. et al. Liposomes as alternative vehicles for sun filter formulations.

Drug Deliv. V. 12, p. 83-88, 2005.
RAMOS, M.F.S. Perspectivas da utilizao dos extratos de Prpolis, Aloe spp. e

Hamamelis virginiana como agentes antisolares :avaliao espectrofotomtrica e
fototxica. 1995. 155p. Dissertao de Mestrado em Cincias Farmacuticas
Faculdade de Farmcia, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de
Janeiro,1995.
RIBANI, M.; BOTTOLI, C. B. G.; COLLINS C.H.; JARDIM, I.C.S.F.; MELO,

L.F.C. Validao em mtodos cromatogrficos e eletroforticos. Qumica Nova,
v.27, n.5, p.771-780, 2004.
RIBEIRO, R.P. Desenvolvimento e Validao da metodologia de anlise do teor

de filtros solares e determinao do FPS in vitro em formulaes fotoprotetoras
comerciais. 2004. 77p. Dissertao de Mestrado em Cincias Farmacuticas
Faculdade de Farmcia, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro,
2004.
RIBEIRO, C. Cosmetologia aplicada a dermococmtica. So Paulo: Ed.

Pharmabooks, p. 77-120, 2006.
159
RICCI-JNIOR, E. Nanopartculas de cido poli-(ltico-co-gliclico) contendo

zinco (II) ftalocianina para uso na Terapia Fotodinmica. 2005. 185 f. Tese de
Doutorado em Frmacos e Medicamentos-Faculdade de Cincias Farmacuticas
Rib Preto, Universidade de So Paulo, So Paulo, 2005.
RUOZI, B. et al. Atomic force microscopy and photon correlation spectroscopy:

two techniques for rapid characterization of liposomes. Eur. J. Pharm. Sci, v. 25,
p. 81-89, 2005.
RUVOLO JNIOR, E. C. Proteo solar: comparao dos mtodos de

determinao por testes em humanos (in vivo), FDA, COLIPA, SAA. Cosmetics
on line, v. 19, n. 105, p. 37-46, 1997.
SANTIS, A.K. Formas Farmacuticas Semi-Slidas de Uso Tpico Contendo

Nifedipina: Desenvolvimento Galnico e Avaliao Biofarmacotcnica. 2008.
158 f. Dissertao de Mestrado em Cincias Farmacuticas - Faculdade de
Farmcia, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, 2008.
SANTOS, V.M. Preparao de Filtros Solares em Nanosistema Visando a Ao

Prolongada. 2007. 124 f. Dissertao de Mestrado em Cincias Farmacuticas
Faculdade de Frmacia, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro,
2007.
SANTOS, E. P.; SANTOS, R. J. Filtros Solares. Aerossol e Cosmeticos, v. 53,

p. 48-55, 1986.
SANTOS, E. P. et al. In vitro and in vivo determinations of sun protection

factors of sunscreen lotions with octylmethoxycinnamate. Int J of Cosmetics
Sci., v.21, p. 1-5, 1999.
SANTOS, N.C.; CASTANHO, M.A.R.B. Liposomas: a bala mgica acertou?

Qumica Nova, v. 25, n. 6 B, p. 1181-1185, 2002.
SANTOYO, S. et al. In vitro percutaneous absorption of piroxicam through

synthetic membranes and abdominal rat skin. Pharm Acta Helvetiae, v.71,
p.141-146, 1996.
SARVEIYA, V.; STACEY, R.; BENSON, H.A.E. Liquid chromatographic

assay for common sunscreen agents: application to in vivo assessment of skin
penetration and systemic absorption in human volunteers. J. Chromatography B.
v.803, p.225-231, 2004.
SCALIA, S.; VILLANI, S.; SCATTURIN, A.; VANDELLI, M.; FORNI, F.

Complexation of the sunscreen agent, butyl-methoxydibenzoylmethane with
hydroxypropil-beta-cyclodextrin. Int. J. of Pharm, v.175, p.205-213, 1998.
SCALIA, S.; CASOLARI, A.; IACONINOTO, A.; SIMEONI, S. Comparative

studies of the influence of cyclodextrines on the stability of the sunscreen agent,
160
2-ethylhexyl-p-methoxycinnamate. J. Pharmac. Biomed. Analysis. 30, 11811189, 2002.
SCALIA, S.; TURSILLI, R.; BIANCHI, A.; LO NOSTRO, P.; BOCCI, E.;
RIDI, F.; BAGLIONI, P. Incorporation of the susncreen agent, octyl
methoxycinnamate in a cellulosic fabric grafted with - cyclodextrin. Int. J.
Pharm, v. 308, p. 155-159, 2006.
SCHUELLER, R.; ROMANOWSKI, P. Introduo aos Produtos Fotoprotetores.

Cosmetics & Toiletries, v. 12, jul/ago, 2000.
SCHLUMPF, M. et al. Endocrine activity and developmental toxicity of

cosmetic UV filters-na update. Toxicology. V.205, p. 113-122, 2004.
SCHMOOK, F.P.; MEINGASSNER, J.G.; BILLICH, A. Comparision of human

skin or epiderms models with human and animal skin in vitro percutaneous
absorption. Int J of Pharm, v.215, p.51-56, 2001.
SCHULZ, J. et al. Distribution of sunscreen on skin. Advanced Drug Deliv Rev.

V. 54, suppl. 1, s 157-s 163, 2002.
SEKKAT, N.; KALIA, Y. N.; GUY, R. H. Biophysical study of porcine ear skin
in vitro and its comparison to human skin in vivo. J. Pharm. Sci.; Washington,
v.91, n.11, p.2376-2381, 2002.
SHAH, V.P. et al. Determination of in vitro drug release form hidrocortisone

creams. Int J of Pharm, v.53, p.53-59, 1989.
SHAH, V.P. et al. In vitro release of hydrocortisone from topical preparations

and automated procedure. Pharmaceutical Research, v.8, n.1, p.55-59, 1991a.
SHAH, V.P. et al. Analytical methods validation: Bioavailability,

bioequivalence and pharmacokinetics studies. Int J of Pharm, v.82, p.1-7, 1992.
SHAH, V.P. et al. Bioavailability and bioequivalence of transdermal drug

delivery systems. In Shah E Maibach: Topical drug bioavailability,
bioequivalence and penetration. Nova York: Plenum Press, p.415-424, 1993.
SHAH, V.P. et al. Bioequivalence of topical dermatological dosage formsmethods of evaluation of bioequivalence. Pharmaceutical Research, v.15, p.
167-171, 1998.
SHAH, V.P.; ELKINS, J.; WILLIAMS, R.L. Evaluation of the test system used
for in vitro release of drugs for topical dermatological drug products.
Pharmaceutical Develop. Techn., v.4, n.3, p.377-385, 1999.
SHAH, V. P. Progress in methodologies for evaluation bioequivalence of topical

formulations. American. J. of Clinical Dermatol., v. 2, n.5, p. 175-180, 2001.
161
SHAATH, N. A. Enciclopdia de Absorvedores de UV para produtos com filtro

solar. Cosmet. Toilet., v. 7, p. 47-58, 1995.
SHAATH, N. A. Evolution of modern sunscreen Chemicals. In: Lowe,

N.J.;SHAATH, M. A.; PATHAK, M. A. Sunscreens Development, Evaluation,
and Regulatory Aspects. New York: Marcel Dekker, p. 589-600, 1997.
SHAATH, V.P. IV-IVC for topically applied preparations-a critical evaluation.

Eur. J. of Pharm and Biopharm., v.60, n.2, p.309-314, 2005.
SHARMA, A.; SHARMA, U.S. Liposomes in drug delivery: progress and

limitations. Int. J. of Pharm., v. 154, p. 123-140, 1997.
SIEWERT, M.; DRESSMAN, J.; BROWN, C. K.; SHAH, V. P. FIP/AAPS :

Guidelines to Dissolution/ in Vitro Release Testing of Novel/ Special Dosage
Forms. AAPS Pharm Sci Tech, v.4, n. 1, article 7, 2003.
SILVERSTEIN, R. M.; BASSLER, G. C.; MORRIL, T. C. Identificao

espectromtrica de compostos orgnicos. 5 ed. Editora Guanabara Koogan. Rio
de Janeiro. 1994. 387 p. Bibliografia: cap 3 e 4.
SINGH, S.; SINGH, J. Transdermal drug delivery by passive diffusion and

iontophoresis: a review. Med. Res. Ver., New York, v.13, n.5, p.569-621, 1993.
SINKO, J. P. Martin: fsico-farmcia e cincias farmacuticas. So Paulo:

Editora Artmed, 2008, 809p.
SIMEONI, S.; SCALIA, S.; BENSON, H. A. E. Influence of cyclodextrins on in

vitro human skin absorption of the sunscreen, butyl-methoxydibenzoylmethane.
Int. J. Pharmac. 280, 163-171, 2004.
SKELLY, J.P. et al. FDA and AAPS Report of the workshop on principles and
practices of in vitro percutaneous penetration studies: relevance to
bioavailability and bioequivalence. Pharmaceutical Research, v.4, n.3, p.265267, 1987.
SOARES, L.V. Curso Bsico de Instrumentao para Analistas de Alimentos e

Frmacos. 1 ed., So Paulo: Manole, 2006.
SPRINGSTEEN, A; YUREK, R.; FRAZIER, M. et al. In vitro measurement of

sun protection factor of sunscreen by diffuse transmittance. Anal. Chim. Acta, v.
380, p. 155-164, 1999.
SUHONEN, T.M.; BOUWSTRA, J.A.; URTTI, A. Chemical enhancement of

percutaneous absorption in relation to stratum corneum structural alterations. J
of Controlled Release, n.59, p.149-161, 1999.
162
SUMMERS, B.; SUMMERS, R.S.; MULLER, E. A national web-basedsurvery

of sunscreen products as a tool for industry self-regulation, consumer awareness
campaigns and marketing. IFSCC Magazine., v.8, n.3, p.201-204, 2005.
SUZUKI, K.; SAKON, K. The application of liposomes to cosmetics. Cosm.

Toil., v. 105, n. 5, p. 65-78, 1990.
SUZUKI, T. et al. Estrogenic and antiandrogenic activities of 17 benzophenone

derivatives used as UV stabilizers and sunscreens. Toxicol. Appl. Pharmacol, v.
203, n. 1, p. 9-17, 2005.
SZEJTLI, J. Cyclodextrins Technology. Kluwer Academic Publisher, Dordrecht,

1988.
THE MERCK INDEX. Thirteenth Edition, Merck Co. Inc., USA, ISBN:
0911910-13-1, 2001, P.1213.
TOUITOU, E. et al. Methods for quantitative determination of drug localized in

the skin. J of Controlled Release, v.56, p. 7-21, 1998.
TURSILLI, R. et al. Solid lipid microparticles containing the sunscreen agent,

octal-dimethylaminobenzoate: Effect of the vehicle. Eur. J. Pharm. Biopharm.V.
66, p. 483-487, 2007.
UEKAMA, K.; OTAGIRI, M. Cclodextrins in drug carrier systems. CRC Crit.

Rev. Ther. Drug Carrier Syst., v. 3, p. 1-40, 1987.
UEKAMA, K.; HIRAYAMA, F.; IRIE, T. Cyclodextrin drug carrier systems.

Chem. Ver, n. 98, p. 2045-2076, 1998.
URBACH, F. The historical aspects of sunscreen. J. Photochem. and Photobiol.

B, v. 64, p. 99-104, 2001.
U. S. FDA/ CDER. Department of health and human Services. Food and Drug
Administration. Center of Drug Evaluation and Research. Guidance for industry:
nonsterile semisolid dosage forms: scale-up and postapproval changes:
chemistry, manufacturing, and controls; in vitro release testing and in vivo
bioequivalence documentation. 1997.
WAGNER, H., et al. Interrelation of permeation and penetration parameters

obtained from in vitro experiments with human skin and skin equivalents. J. of
Controlled Release., Lebach, v.75, p. 283-295, 2001.
WANG, T.; KASICHAYANULA, S.; GU, X. In Vitro permeation of repellent

DEET and sunscreen oxybenzone across three artificial membranas. Int. J. of
Pharm, v. 310, p. 110-117, 2006.
163
WEIGMANN, H. J. et al. Bioavailability of clobestasol propionatequantification of drug concentrations in the stratum corneum by
dermetopharmacokinetics using tape stripping. Skin Pharmacol and Applied
Skin Physiology, v. 12, p. 46-53, 1999.
WILLIAMS, A.C.; BARRY, B.W. Penetrations enhancers. Adv. Drug Delivery

Rev., v.56, p.603-618, 2004.
WISSING, S.A.; MLLER, R.H. Solid lipid nanoparticles as carrier for

sunscreens: in vitro release and in vivo skin penetration. J Controll. Rel, v. 81, p.
255-233, 2002.
VAN DEN BERGH, B.A.L. et al. Interactions of elstic and rigid vesicles with
human Skin in Vitro: electrn microscopy and two-photon excitation
microscopy. Biochim. Biophys. Acta. V. 1461, p. 155-173, 1999.
VEIGA, F.; MARTINS, M.R.F.M. Promotores de permeao para a liberao

transdrmica de frmacos: uma nova aplicao para ciclodextrinas. Brazilian J
of Pharm Sci., v. 38, n.1, jan/mar, 2002.
VELASCO de PAOLA, M. V.; RIBEIRO, M. E. Interao entre Filtros Solares.

Cosmetics & Toiletries, v. 10, set/out, 1998.
VEMURIS, S.; RHODES, C.T. Preparatin and characterization of liposomes as

therapeutic delivery systems: a review. Pharm Acta Helv, v.70, p.95-111, 1995.
VERMA, D. D.; VERMA, S.; BLUME, G.; FAHR, A. Particle size of liposomes
influences dermal delivery of substances into skin. Int. J of Pharm, v. 258, p.
141-151, 2003.
VIGLIOGLIA, P. Cosmiatria II. Ap Americana de publicaciones S.A, Buenos

Aires , 1989.
YAROSH, D. B. Liposomes in investigative dermatology. Photodermatol,

Photoimmunl & Photomedicine, v. 17, p. 203-212, 2001.
YENER, G.; INCEGIL, T.; YENER, N. Importance of using solid lipid

microspheres as carriers for UV filters on the example octyl methoxy cinnamate.
Int J of Pharm, v.258, p. 203-207, 2003.
ZATZ, J.L. Skin Permeation-Fundamentals and Application. Wheaton: Allured

Publishing Corporation, 1993.
ZATZ, J.L. Drug release from semisolids: effect membrane permeability on

sensitivity to product parameters. Pharmaceutical Research, v. 12, n. 5, p. 787789, 1995.
164

706548

Uploaded by

Document Information

Copyright

Available Formats

Share this document

Share or Embed Document

Sharing Options

Did you find this document useful?

Is this content inappropriate?

Copyright:

Available Formats

706548

Uploaded by

Copyright:

Available Formats

Universidade Federal do Rio de Janeiro

Filtros Solares em Nanocosmticos:

Mariana Sato de S de B Monteiro

Filtros Solares em Nanocosmticos: Desenvolvimento

Mariana Sato de S B Monteiro

Dissertao de Mestrado apresentada ao Programa de PsGraduao em Cincias Farmacuticas da Faculdade de

Orientadora: Profa. Dra. Elisabete Pereira dos Santos

Filtros Solares em Nanocosmticos: Desenvolvimento

Prof Dr. Lucas Antnio Miranda Ferreira

Profa Dra. Carla Holandino Quaresma

Prof Dr. Eduardo Ricci Junior

Ao Centro Brasileiro de Pesquisas Fsicas pela colaborao nas anlises para

FIGURA 2: Penetrao da radiao UV e visvel na pele.

FIGURA 3: As trs camadas da pele: epiderme, derme e hipoderme.

FIGURA 4: Representao diagramtica do transporte de frmacos atravs da

FIGURA 5: Representao grfica do lag-time.

FIGURA 6: Frmula estrutural genrica da maioria dos filtros solares

FIGURA 8: Estrutura do lipossoma.

FIGURA 9: Demonstrao do efeito reservatrio do lipossoma.

FIGURA 10: Classificao dos lipossomas de acordo com o tamanho e nmero de

FIGURA 11: Estrutura das ciclodextrinas naturais: A- CD; B- -CD e

FIGURA 13: Processo de obteno dos lipossomas atravs do mtodo de

FIGURA 14: Representao esquemtica do mtodo de Bartlett para a

FIGURA 16: Preparo da orelha suna.

FIGURA 17: Demonstrao do aparato experimental e retirada da pele.

FIGURA 18: Espectro de UV-Vis do MCO.

FIGURA 19: Representao da curva padro mdia do MCO por espectroscopia

FIGURA 20: Espectro de Infravermelho do MCO (filme entre cristais de NaCl).

FIGURA 21: Espectro de RMN 1H do MCO.

FIGURA 22: Espectro de RMN 1H do sistema -CD/MCO.

FIGURA 23: Molcula do MCO.

FIGURA 24: Difratograma da -CD.

FIGURA 25: Difratograma da -CD-mistura fsica.

FIGURA 26: Difratograma do sistema -CD/MCO.

FIGURA 27: Espectro de IV da matria prima -CD.

FIGURA 28: Espectro de IV do sistema -CD/MCO.

FIGURA 29: Micrografia ptica dos lipossomas com MCO a 72,00 mM

FIGURA 30: Micrografia ptica da frao filtrada em membrana 0,4 m dos

FIGURA 31: Micrografia ptica da frao filtrada em membrana 0,4 m dos

FIGURA 32: Micrografia ptica contendo medidas aleatrias da frao

FIGURA 34: Distribuio do tamanho dos lipossomas MCO 72,00 mM frao

FIGURA 36: Cromatograma do branco e da formulao contendo MCO livre,

FIGURA 37: Representao das trs curvas de calibrao obtidas na faixa de

FIGURA 39: Perfil de liberao in vitro do MCO a partir das formulaes

FIGURA 40: Curvas padro de MCO 0,1 a 20,0 g/mL.

FIGURA 41: Cromatogramas obtidos na extrao de MCO da pele suna

EQUAO 2: Segunda Lei de Fick

EQUAO 3: Equao tlag

EQUAO 4: Fator de Proteo Solar.

EQUAO 5: Clculo do FPS segundo Mansur.

TABELA 2: Composio do gel creme com MCO livre, com os sistemas

TABELA 3: Relao entre o efeito eritematognico e a intensidade da radiao

TABELA 4: Frmula da emulso padro utilizada nos testes de FPS in vivo.

TABELA 5: Parmetros observados na anlise por ultravioleta do MCO.

TABELA 6: Comparao das principais bandas de absoro do espectro de

TABELA 7: Alteraes nos deslocamentos qumicos do MCO incluso.

TABELA 8: Principais bandas de absoro no espectro de infravermelho da

TABELA 9: Determinao do rendimento da incluso do complexo -CD/MCO

TABELA 10: Determinao da quantidade de filtro solar incorporado na

TABELA 11: Resultados obtidos na determinao da concentrao de

TABELA 14: Concentraes de MCO nas formulaes desenvolvidas obtidas por

TABELA 15: Valores de absorbncia e do FPS in vitro das formulaes

TABELA 16: Valores de FPS in vivo das formulaes desenvolvidas.

TABELA 18: Valores obtidos para a solubilidade do MCO nas solues