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MARIA ANTONIA MALAJOVICH

BIOTECNOLOGIA
Segunda Edio (2016)
ISBN: 978-85-921077-0-3

MARIA ANTONIA MALAJOVICH

BIOTECNOLOGIA
2 EDIO

Rio de Janeiro
Maria Antonia Muoz de Malajovich
2016
BIOTECNOLOGIA: ENSINO E DIVULGAO (http://bteduc.com)

Copyright 2016 Maria Antonia Muoz de Malajovich

BIOTECNOLOGIA
Maria Antonia Malajovich
ISBN: 978-85-921077-0-3

Figuras e fotos dos embries de Kalanchoe (capa e contracapa) da autora.


O meu agradecimento a Elisabeth Lissovsky pela reviso do portugus.

ii

SUMRIO

Seguir o link para ir diretamente ao captulo de interesse.

C A P T U L O 1. O QUE BIOTECNOLOGIA.......................................................................................................... 1
A biotecnologia tradicional. A biotecnologia moderna. As definies de biotecnologia. O impacto da biotecnologia.
Biotecnologia e desenvolvimento. A histria da biotecnologia.

C A P T U L O 2. CLULAS E CROMOSSOMOS........................................................................................................9
A clula como unidade estrutural e funcional dos seres vivos. Tcnicas laboratoriais. Toda clula deriva de outra preexistente.
Os cromossomos e a teoria cromossmica da hereditariedade. As primeiras manipulaes gnicas. Nature vs nurture. Clulas
e cromossomos como agentes biolgicos.

C A P T U L O 3. OS MICRORGANISMOS.............................................................................................................20
A diversidade microbiana (Eubactrias, algas, arqueas, fungos e vrus). As tcnicas microbiolgicas. Biossegurana e
biosseguridade. Os microrganismos como agentes biolgicos.

C A P T U L O 4. ENZIMAS E ANTICORPOS..........................................................................................................32
As protenas. Estrutura. O proteoma. As bases de algumas tcnicas laboratoriais. As enzimas. A catlise enzimtica. Os
anticorpos. A reao antgeno- anticorpo. A produo de anticorpos no organismo e no laboratrio. A utilizao dos
anticorpos.

C A P T U L O 5. OS CIDOS NUCLEICOS..............................................................................................................46
Os cidos nucleicos. A dupla hlice. O cdigo gentico. A expresso gnica. O fluxo da informao gentica em clulas
procariticas e eucariticas. O complexo mundo dos RNAs. A diversidade existente. Interferncia e silenciamento gnico. O
genoma humano: mapeamento e avanos posteriores. O DNA e o RNA como agentes biolgicos.

C A P T U L O 6. BIOPROCESSOS...........................................................................................................................58
Bioprocessos, processos fermentativos e indstria. Os microrganismos industriais. Noes sobre o metabolismo primrio e
secundrio. As fases de crescimento da populao microbiana. Meios de cultura e matria-prima. A obteno das linhagens.
Os diferentes tipos de bioprocessos (tradicionais e submersos). Do laboratrio indstria (mudana de escala, conduo do
processo e recuperao do produto. Bioprocessos na indstria: o cido ctrico e os biofertilizantes.

C A P T U L O 7. O CULTIVO DE CLULAS E TECIDOS...........................................................................................71


A manipulao in vitro de clulas e tecidos vegetais: as primeiras tentativas, os meios de cultura, as etapas do processo, as
diferentes modalidades, melhoramento e conservao da biodiversidade vegetal, a difuso da tecnologia. A manipulao in
vitro das clulas animais: as primeiras tentativas, as diferentes modalidades, os meios de cultivo, as linhagens celulares,
condies de cultivo, do laboratrio indstria.

C A P T U L O 8. A TECNOLOGIA DO DNA ...........................................................................................................83


As ferramentas disponveis: as nucleases ou enzimas de restrio, a eletroforese do DNA, hibridizao e sondas gnicas, o
mtodo de Southern, o Fingerprint, a sntese e amplificao de DNA, o sequenciamento do DNA. Os arrays.

C A P T U L O 9. A ENGENHARIA GENTICA.........................................................................................................95
O nascimento da biotecnologia moderna: as primeiras experincias, mitos e realidade. As bibliotecas de genes. A construo
de um microrganismo recombinante: Encontrar o gene, inserir o gene e identificar os microrganismos recombinantes. A
chegada da comunidade DIY. A construo de plantas transgnicas: o transgene, a transferncia dos genes a clulas vegetais,
do laboratrio ao campo. Clulas e animais transgnicos: a transferncia gnica a clulas animais, aplicaes. As novas
tecnologias de edio gnica baseadas no RNA interferente, nas nucleases stio-dirigidas: ZFNS E TALEN, na imunidade
bacteriana: CRISPR-CAS9.Biossegurana e regulao.

C A P T U L O 10. BIOTECNOLOGA E INDSTRIA...............................................................................................114


O processo Weizmann. A indstria qumica: as vias qumica e biotecnolgica. Os produtos biotecnolgicos: metablitos de
interesse comercial, enzimas, biopolmeros e bioplsticos. Os biocombustveis: etanol, biogs, biodiesel. Panorama atual.
Biorrefinarias e novas bioindstrias: os casos Amyris e Solazyme (TerraVia).

C A P T U L O 11. BIOTECNOLOGIA E MEIO AMBIENTE........................................................................................131


O desenvolvimento sustentvel. As tecnologias limpas: substituio de processos industriais e de insumos agrcolas. A
reduo dos resduos: degradao do lixo, tratamento das guas residuais, tratamento dos efluentes industriais, emisses de
gases e efeito estufa. A recuperao de recursos naturais: o petrleo, a minerao. O diagnstico de contaminao ambiental:
indicadores biolgicos, tcnicas genticas e imunolgicas, biossensores. A biorremediao: os vazamentos de petrleo, a
radiao. Organismos novos na natureza e biossegurana.

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C A P T U L O 12. BIOTECNOLOGIA E BIODIVERSIDADE.......................................................................................149


A desapario dos ecossistemas naturais. O homem e as plantas alimentcias, comerciais e medicinais. A biodiversidade
ameaada: eroso gentica, expanso do agronegcio, transgnese. A proteo da biodiversidade: centros de diversificao,
conservao da biodiversidade. O CGIAR o centro internacional da batata. O protocolo de Cartagena de biossegurana.

C A P T U L O 13. BIOTECNOLOGIA E AGRICULTURA...........................................................................................162


A evoluo das prticas agrcolas. A obteno de novas variedades: mutao gnica e seleo, alterao do nmero de
cromossomos, engenharia gentica. A biossegurana e o princpio de precauo. As PGMs de interesse agronmico:
tolerncia a herbicidas, resistncia a insetos, resistncia a vrus, coexistncia entre plantas convencionais e PGMs. O cultivo
de outros tipos de PGMs: interesse nutricional, produo de medicamentos. O agronegcio: As primeiras empresas
produtoras de sementes, os gigantes gnicos, a cadeia produtiva da semente, patentes e inovao tecnolgica. A adoo dos
cultivos biotecnolgicos no mundo: os Estados Unidos e a Unio Europeia, Israel, frica subsaariana, China. A chegada das
novas tecnologias.

C A P T U L O 14. BIOTECNOLOGIA E CRIAO DE ANIMAIS.................................................................................179


A nutrio dos animais a necessidade de raes, de Liebig vaca louca, variaes sobre a composio das raes, as raes
transgnicas. O melhoramento gentico do gado: o controle da reproduo, as novas tecnologias. A aquicultura. A sade dos
animais: os modificadores metablicos, a resistncia a doenas, preveno e tratamento. Novas utilizaes dos animais
domsticos: modelos de estudo para doenas humanas, xenotransplantes, os animais como biorreatores, o marco conceitual
dos trs Rs. Os animais de estimao.

C A P T U L O 15. BIOTECNOLOGIA E ALIMENTOS............................................................................................... 194


O po. O vinho: a vinificao, o cultivo da videira, o rol da levedura na vinificao. A cerveja. Os queijos e iogurtes: a produo
de laticnios, o rol de microrganismos e enzimas. A protena de clula nica. Os aditivos: os diversos tipos, os adoantes. Os
alimentos biofortificados. Segurana alimentar

C A P T U L O 16. BIOTECNOLOGIA E NOVOS ALIMENTOS...................................................................................206


A entrada dos transgnicos na cadeia alimentar: melhorando a conservao, as propriedades industriais e as caractersticas
nutricionais. A favor ou contra? O que o consumidor precisa saber: a noo de segurana, a ingesto de DNA, os marcadores
de resistncia a antibiticos, a composio qumica, a produo de toxinas, a produo de alrgenos, o risco de cncer, a
utilizao de um promotor viral (CaMV), outros efeitos, perspectiva histrica. Como garantir a segurana alimentar? O
princpio de equivalncia substancial, a avaliao de riscos, a rotulagem dos alimentos, rtulo e informao, o rastreamento
de um transgene.

C A P T U L O 17. BIOTECNOLOGIA E SADE / VACINAS.......................................................................................216


As doenas infecciosas. A aquisio de imunidade. Os diferentes tipos de vacinas: as vacinas tradicionais ou de primeira
gerao. As novas vacinas ou de segunda gerao, a ltima gerao. A produo de vacinas: pesquisa e desenvolvimento, o
marco tico, operaes industriais, o mercado das vacinas, um setor estratgico para a sociedade. As vacinas e a erradicao
da doena: a varola, a poliomielite, a influenza, tuberculose, malria e HIV/AIDS. A ameaa das doenas emergentes.
Bioterrorismo e biosseguridade.

C A P T U L O 18. BIOTECNOLOGIA E SADE / OS TESTES DIAGNSTICOS...........................................................233


As tendncias atuais: dispositivos miniaturizados, o que um bom teste, as tcnicas com base bioqumica, base imunolgica
e base gentica. O diagnstico das doenas infecciosas. A tipificao de tecidos: sangue, outros tecidos e rgos. O
diagnstico de doenas genticas: as limitaes dos testes, as estratgias seguidas, diagnstico preventivo e preditivo. As
patentes. O esporte. A prtica forense.

C A P T U L O 19. BIOTECNOLOGIA E SADE / A INDSTRIA DE MEDICAMENTOS...............................................247


O desenvolvimento de um medicamento novo. Patentes, genricos e biossimilares. Os princpios ativos das plantas: o caso
da aspirina, os fitoterpicos, as tendncias recentes, a importncia de um marco legal. As substncias antibiticas: o caso da
penicilina, os limites ao uso de antibiticos, a necessidade de inovao. As primeiras molculas teraputicas: o caso da
insulina, a substituio do produto natural. As protenas recombinantes: as bases tecnolgicas, os produtos e suas utilizaes.
Os medicamentos personalizados: a farmacogenmica, a farmacogentica, as doenas rfs. O mercado dos
biomedicamentos: a tendncia geral, Amrica Latina.

C A P T U L O 20. BIOTECNOLOGIA E SADE / OS NOVOS TRATAMENTOS....................................................... 264


A aprovao de um tratamento experimental. Os transplantes: os transplantes de rgos, os xenotransplantes. A engenharia
de tecidos: as terapias celulares, fraudes e desatinos. As imunoterapias: o progresso, os anticorpos monoclonais, o desafio
da barreira hematoenceflica. O cncer: uma doena de origem gentica, as terapias biolgicas, os vrus oncolticos, as
vacinas teraputicas. As terapias gnicas: terapia somtica e germinal, os altos e baixos de uma tecnologia, os resultados
alcanados, a FIV triparental. As promessas do RNA: as ribozimas, a tecnologia anti-sense, o RNA interferente, a edio gnica

C A P T U L O 21. CONSIDERAES FINAIS.......................................................................................................... 278


B I B L I O G R A F I A............................................................................................................................................ 280

iv

SUMRIO

LISTA DE FIGURAS
FIGURA 1.1. O campo da Biotecnologia
FIGURA 2.1. Representaes esquemticas da estrutura celular
FIGURA 2.2. As clulas-tronco embrionrias
FIGURA 2.3: Os cromossomos
FIGURA 2.4. Mitose e meiose
FIGURA 3.1. Bactrias, clones e intercmbio de material gentico
A. A Formao de clones
B. B Mecanismos de transferncia lateral ou horizontal de material gentico

FIGURA 3.2. Os vrus


A.
B.
C.
D.

Estrutura fundamental
Morfologia de diferentes vrus
(Os adenovrus e o HIV parasitam clulas humanas; o bacterifago, bactrias).
A multiplicao de um bacterifago

FIGURA 3.3. Logotipos utilizados como indicao de risco biolgico


FIGURA 4.1. A composio qumica de uma bactria
FIGURA 4.2. Aminocidos e protenas
FIGURA 4.3. Cromatografia em coluna
FIGURA 4.4. Eletroforese
FIGURA 4.5. Difrao de raios X
FIGURA 4.6. O mecanismo da atividade enzimtica
A. O modelo chave-fechadura

B. A enzima diminui a energia de ativao

FIGURA 4.7. A estrutura da molcula de anticorpo (IgG)


FIGURA 4.8. Os anticorpos e o reconhecimento do antgeno
FIGURA 4.9. O encontro do linfcito B e do antgeno, e a seleo clonal
FIGURA 4.10. A produo de anticorpos no laboratrio
FIGURA 4.11. Os ensaios imunolgicos
A. Associao dos anticorpos com molculas fluorescentes
B. Associao dos anticorpos com enzimas

FIGURA 5.1. Composio qumica dos cidos nucleicos


FIGURA 5.2. A molcula de DNA
FIGURA 5.3. O fluxo da informao gentica
FIGURA 5.4. A organizao e regulao dos genes nas clulas procariticas
FIGURA 5.5. A organizao e regulao dos genes nas clulas eucariticas
FIGURA 5.6. As etapas da sntese de protenas (Recapitulao)
FIGURA 5.7. O silenciamento gnico
FIGURA 6.1. O processo fermentativo genrico
FIGURA 6.2. Respirao e fermentao
FIGURA 6.3. As diversas fases do crescimento de uma populao microbiana e a produo de metablitos
A.

As fases de crescimento de uma populao

B. A produo de metablitos primrios e secundrios


FIGURA 6.4. A metodologia HTS para triagem e evoluo dirigida de linhagens bacterianas
FIGURA 6.5. Modelos de biorreatores utilizados em processos tradicionais
A. Biorreator para fermentaes em fase slida
B. A produo de vinagre (Mtodo de Orlans)
FIGURA 6.6. Modelo de biorreator utilizado em fermentaes submersas
FIGURA 6.7. Fermentaes, agentes biolgicos e biorreatores
FIGURA 6.8. A mudana de escala, do laboratrio indstria
FIGURA 6.9. A obteno de cido ctrico por fermentao
FIGURA 7.1. As diversas partes de uma planta angiosperma
FIGURA 7.2. O procedimento a seguir para se obter uma cultura assptica no laboratrio
FIGURA 7.4. A cultura de meristemas
FIGURA 7.5. As diferentes possibilidades dos cultivos de calos
FIGURA 7.6. As possibilidades do cultivo de clulas vegetais
FIGURA 7.7. As culturas de clulas de origem animal
A. Etapas da cultura de leuccitos para a anlise do caritipo
B. Etapas da cultura de clulas a partir de um fragmento de tecido

FIGURA 8.1: As enzimas de restrio (EcoRI corta o DNA na sequncia palindrmica GAATTC)
FIGURA 8.2. A eletroforese do DNA
FIGURA 8.3. Os polimorfismos
FIGURA 8.4. Hibridizao de uma sequncia de DNA com uma sonda complementar marcada
FIGURA 8.5. A tcnica de Southern
FIGURA 8.6. A sntese de oligonucleotdeos

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FIGURA 8.7. A sntese de cDNA por transcriptase reversa


FIGURA 8.8. A reao em cadeia da polimerase
FIGURA 8.9. O sequenciamento de um fragmento de DNA
FIGURA 8.10. Fundamentos da tecnologia de arrays
FIGURA 9.1. Cortar, colar, copiar: a experincia que deu origem engenharia gentica
FIGURA 9.2. Sapobacter ou Bactosapo?
FIGURA 9.3. A construo de bibliotecas de genes
FIGURA 9.4. A produo de somatotropina por engenharia gentica
FIGURA 9.5. Algumas estratgias possveis de clonagem
FIGURA 9.6. A estrutura de um vetor de expresso
FIGURA 9.7. Semelhanas entre os Legos e os Biobricks (www.biochem.hku.hk/synbio/?_id=148)
A. Classificao hierrquica
B. Construes intercambiando as partes
FIGURA 9.8. A construo de uma planta transgnica no laboratrio
FIGURA 9.9. As etapas da construo de uma planta transgnica
FIGURA 9.10. Construo de animais transgnicos
A. Microinjeo.
B. Transfeco de clulas-tronco embrionrias

FIGURA 9.11. A edio gnica com CRISPR-Cas9


FIGURA 10.1. As etapas necessrias para a produo de etanol a partir de diferentes matrias-primas
FIGURA 10.2. A produo de etanol a partir da cana-de-acar
FIGURA 10.3. A biodigesto em condies aerbias e anaerbias.
FIGURA 10.4. As complexas etapas da produo de biogs dentro do biodigestor
FIGURA 10.5. As utilizaes do biogs
FIGURA 10.6. A reao de transesterificao
FIGURA 10.7. O caso Amyris
A. Do quinghaosu artemisina
B. Produtos gerados na plataforma tecnolgica baseada na engenharia metablica da levedura (via dos isoprenoides ou terpenos)
FIGURA 10.8. O caso Solazyme
FIGURA 11.1. A indstria de papel e de celulose.
FIGURA 11.2. Controle biolgico do Aedes aegypti
A.
B.
C.
D.

Ciclo de vida do mosquito Aedes aegypti


Controle por Wolbacchia
Controle por irradiao
Controle por engenharia gentica

FIGURA 11.3. A compostagem


FIGURA 11.4. O tratamento das guas residuais
FIGURA 11.5. O funcionamento de um biossensor
TABELA 11.2. Os principais contaminantes do meio ambiente
FIGURA 11.6. As estratgias de biorremediao
FIGURA 12.1. O transporte de plantas de um continente a outro
FIGURA 12.2. Distribuio da produo agrcola na rea habitvel do planeta
FIGURA 12.3. Os vegetais na alimentao humana
FIGURA 13.1. O milho
FIGURA 13.2. A produo de milho hbrido
FIGURA 13.3. As etapas da construo de uma planta transgnica
FIGURA 13.4. Os elos que integram a cadeia produtiva da semente
FIGURA 14.1. O Controle da reproduo em bovinos
FIGURA 14.2. Dolly, um clone obtido por transferncia nuclear
FIGURA 14.3. O salmo transgnico AquAdvantage (Aquabounty Technologies)
TABELA 14.2. Significado e alcance dos trs Rs (do ingls replacement, reduction, refinement)
FIGURA 15.1. A panificao
FIGURA 15.2. A vinificao
FIGURA 15.4. A produo de laticnios
A. Iogurte tradicional e iogurte batido
B. Queijo. Os agentes biolgicos intervm nas etapas de coagulao e na maturao de alguns produto
FIGURA 15.5. A produo de xarope de frutose
FIGURA 16.1. O que um transgnico?
FIGURA 16.2. A estrutura de um transgene
FIGURA 16.3. O smbolo de transgnico adotado no Brasil.
FIGURA 17.1. As respostas primria e secundria do organismo
FIGURA 17.2. A memria imunolgica
FIGURA 17.3. A utilizao da tecnologia do DNA-recombinante na vacina contra a hepatite B.
FIGURA 17.4. Os diferentes tipos de vacinas
FIGURA 18.1. Imagens comerciais de alguns dispositivos miniaturizados utilizados em testes diagnsticos

vi

SUMRIO

FIGURA 18.2. Imagem comercial dos sistemas API de Biomrieux (http://www.tgw1916.net/Tests/api.html).


FIGURA 18.3. O mtodo direto e indireto de um teste positivo de ELISA.
FIGURA 18.4: As tcnicas com base gentica
FIGURA 18.5. O sistema HLA
A. A herana dos hapltipos.
B. Reao mista ou cross-matching. Colocam-se em contato as clulas do doador com o soro do receptor, em presena de
complemento. Se as clulas do doador ficam intactas, h compatibilidade.

FIGURA 18.6. O uso de arrays no diagnstico de mutaes nos genes BRCA1 e BRCA2
FIGURA 19.1. As etapas do desenvolvimento de um medicamento
FIGURA 19.2: A frmula da aspirina
FIGURA 19.3. A frmula da penicilina
FIGURA 19.4. A insulina humana
A. A molcula de insulina
B. A sntese da insulina.

FIGURA 20.1. O princpio da clonagem teraputica


FIGURA 20.2. A transformao de uma clula normal em cancerosa por mutao (cncer de clon).
FIGURA 20.3. O tratamento com sipuleucel-T (Provenge).
A. Extrao das clulas dendrticas
B. Incubao das clulas com Provenge
C. Reinfuso das clulas modificadas no paciente (3 vezes com 2 semanas de intervalo)

FIGURA 20.4: O princpio da terapia gnica.


FIGURA 20.5: As tecnologias de silenciamento gnico.
A. As ribozimas
B. O RNA anti-sense
C. O RNA interferente

LISTA DE TABELAS
TABELA 1.1. Produtos e servios de origem biotecnolgica, em diferentes setores
TABELA 1.2. A linha do tempo
TABELA 2.1. A funo e a distribuio das estruturas celulares
TABELA 2.2. As clulas como agentes biolgicos
TABELA 3.1. Os microrganismos dentro do marco da uma classificao biolgica atual
TABELA 3.2. As bactrias (Eubactrias e Arqueas) como agentes biolgicos
TABELA 3.3. As algas como agentes biolgicos
TABELA 3.4. Os fungos como agentes biolgicos
TABELA 4.1. As funes das protenas no organismo
TABELA 4.2. A classificao internacional das enzimas
TABELA 4.3. As enzimas como agentes biolgicos
TABELA 4.4. Os anticorpos como agentes biolgicos
TABELA 5.1: O cdigo gentico
TABELA 5.2. Os cidos nucleicos (DNA e RNA) como agentes biolgicos
TABELA 7.1. Os componentes do meio de cultura para clulas vegetais
TABELA 7.2. Os componentes de um meio de cultura bsico para clulas animais
TABELA 7.3. Origem e utilizao de algumas linhagens celulares
TABELA 10.1. Diversidade de produtos derivados de algumas matrias-primas renovveis
TABELA 10.2. Metablitos primrios e secundrios obtidos por fermentao e/ou bioconverso enzimtica
TABELA 10.3. O poder calorfico de vrios combustveis.
TABELA 11.1. Alguns exemplos de utilizao de agentes biolgicos como pesticidas
TABELA 11.2. Os principais contaminantes do meio ambiente
TABELA 12.1. Os principais tipos de vegetais que entram em nossa alimentao
TABELA 12.2. As plantas e a indstria
TABELA 12.3. Os centros de diversificao e os cultivos originrios
TABELA 14.1. O risco de escapamento de um animal transgnico
TABELA 14.2. Significado e alcance dos trs Rs (do ingls replacement, reduction, refinement)
TABELA 16.1. As plantas geneticamente modificadas no mundo (Dados do ISAAA, maro de 2016)
TABELA 17.1. A produo de vacinas no Brasil
TABELA 18.1. As qualidades de um bom teste de diagnstico.
TABELA 18.2. Algumas das mais de 8.000 doenas genticas descritas
TABELA 19.1. A linha do tempo de entrada dos antibiticos e antibacterianos no mercado
TABELA 19.2. Alguns biofrmacos de interesse mdico
TABELA 19.3. Os medicamentos biolgicos mais lucrativos em 2014 (Statista, Phrma)

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CAPTULO 1

O QUE BIOTECNOLOGIA

A BIOTECNOLOGIA TRADICIONAL
Cultivar vegetais, domesticar animais, transformar os alimentos ou aproveitar as propriedades
curativas de algumas plantas so atividades que remontam alvorada da humanidade e se
desenvolveram com base no conhecimento emprico, ignorando a existncia dos microrganismos ou
das leis da hereditariedade.
No incio do sculo XIX, a demanda de mo de obra por uma indstria incipiente estimula a
migrao da populao do campo para a cidade. Em condies sanitrias cada vez mais degradadas,
as doenas e a fome acompanham o homem. Ao mesmo tempo, o progresso exige processos
industriais mais eficientes. A compreenso dos fenmenos naturais torna-se indispensvel para
responder s necessidades da sociedade.
A partir de 1850 surgem novas reas do conhecimento. Nasce a Microbiologia, a Imunologia, a
Bioqumica e a Gentica. A Qumica Industrial desenvolve-se aceleradamente e aumenta, tambm, a
interveno da Engenharia Agrcola e da Pecuria no gerenciamento do campo.
Em 1914, Karl Ereky, um engenheiro agrcola hngaro, desenvolve um gigantesco plano de criao
de sunos visando substituir as prticas tradicionais por uma indstria agrcola capitalista baseada no
conhecimento cientfico. Deve-se a Ereky (1919) a primeira definio de biotecnologia, como a cincia
e os mtodos que permitem a obteno de produtos a partir de matria-prima, mediante a
interveno de organismos vivos. Para ele, a era bioqumica substituiria a era da pedra e do ferro.
O sculo XX assiste a um desenvolvimento extraordinrio da cincia e da tecnologia. Da
convergncia entre ambas resultam logros extraordinrios em vrios setores produtivos, onde os seres
vivos constituem a base de itens to diversos como a produo de variedades vegetais mais produtivas,
a fabricao de novos alimentos, o tratamento do lixo, a produo de enzimas e os antibiticos.
A BIOTECNOLOGIA MODERNA
A proposta de J. D. Watson e F. Crick (1953) de um modelo helicoidal para a molcula de DNA
representa, sem dvida, um marco fundamental na histria da Biologia Molecular. Mas a divisria
entre a Biotecnologia clssica e a Biotecnologia moderna uma srie de experincias realizadas por H.
Boyer e S. Cohen que culmina em 1973 com a transferncia de um gene de sapo a uma bactria. A
partir desse momento possvel mudar o programa gentico de um organismo transferindo-lhe genes
de outra espcie.
A importncia e os riscos inerentes nova tecnologia no passaram despercebidos s pessoas
envolvidas. Fato indito na histria, em 1975, os cientistas reunidos em Asilomar (USA) estabeleceram
uma moratria em seus trabalhos at serem definidas as condies de segurana adequadas, o que
aconteceria pouco tempo mais tarde.
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Na passagem de uma biotecnologia de laboratrio a uma biotecnologia industrial, a Engenharia


Gentica ocupa um lugar de destaque como tecnologia inovadora do sculo XX. Em alguns casos, como
os da insulina e do hormnio do crescimento, a inovao consiste em substituir os mtodos de
obteno tradicionais. Em outros casos, como o dos anticorpos monoclonais ou do Golden Rice, um
arroz com vitamina A, trata-se de produtos inteiramente novos. As tcnicas recentes de edio gnica
ampliam extraordinariamente as possibilidades de manipulao dos genes.
A Biotecnologia abrange uma rea ampla do conhecimento que decorre da cincia bsica (biologia
molecular, microbiologia, biologia celular, gentica etc.), da cincia aplicada (tcnicas imunolgicas e
bioqumicas, assim como tcnicas decorrentes da fsica e da eletrnica), e de outras tecnologias
(fermentaes, separaes, purificaes, informtica, robtica e controle de processos). Trata-se de
uma rede complexa de conhecimentos na qual cincia e tecnologia se entrelaam e se complementam.
AS DEFINIES DE BIOTECNOLOGIA
O impacto causado pelas primeiras experincias em Engenharia Gentica estimulou numerosas
tentativas de redefinio do campo da Biotecnologia. Mediante a substituio da expresso
interveno de organismos vivos por utilizao de processos celulares e moleculares tratou-se de
diferenciar a Biotecnologia clssica da moderna. Porm, devido enorme difuso das tcnicas de
manipulao gnica, elas acabam se superpondo, e, fora do contexto histrico, difcil distinguir o
limite entre ambas.
Por outro lado, como a definio de um setor de atividades depende dos interesses dos grupos
envolvidos, muitas vezes reflete a viso dos setores profissionais predominantes. Por isso, se
revisitarmos os textos da dcada de 1980, anos em que a expresso biotecnologia se expande,
encontraremos mais de uma dzia de definies diferentes do termo. Levantamos, entre as definies
encontradas com maior frequncia, as seguintes:
o OECD - Organisation for Economic Co-Operation and Development: A aplicao dos princpios da
cincia e da engenharia no tratamento de matrias por agentes biolgicos na produo de bens e
servios (1982).
o OTA Office of Technology Assessment: Biotecnologia, de uma forma abrangente, inclui qualquer
tcnica que utiliza organismos vivos (ou partes deles) para obter ou modificar produtos, melhorar
plantas e animais, ou desenvolver microrganismos para usos especficos (1984).
o EFB - European Federation of Biotechnology: Uso integrado da bioqumica, da microbiologia e da
engenharia para conseguir aplicar as capacidades de microrganismos, clulas cultivadas animais ou
vegetais ou parte dos mesmos na indstria, na sade e nos processos relativos ao meio ambiente
(1988).
o E.H. Houwink: o uso controlado da informao biolgica (1989).
o BIO - Biotechnology Industry Organization: em sentido amplo, Biotecnologia "bio" + "tecnologia",
isto o uso de processos biolgicos para resolver problemas ou fazer produtos teis (2003).
Observa-se que, com o tempo, o conceito ganha uma expresso mais simples. As definies mais
recentes no fazem mais referncia aos processos tecnolgicos envolvidos; talvez porque, alm de
complexos e diversos, estes evoluam muito rapidamente.
Neste texto consideraremos a biotecnologia de uma maneira ampla, definida como uma atividade
baseada em conhecimentos multidisciplinares, que utiliza agentes biolgicos para fazer produtos teis
ou resolver problemas. Esta definio suficientemente abrangente para englobar atividades to
variadas como as de engenheiros, qumicos, agrnomos, veterinrios, microbiologistas, bilogos,
mdicos, advogados, empresrios, economistas etc. (Figura 1.1).

O QUE BIOTECNOLOGIA?

O IMPACTO DA BIOTECNOLOGIA
Nascida nos laboratrios de Universidades e Centros de Pesquisa, onde ainda permanece, a
Biotecnologia se desenvolve tambm em empresas pblicas e privadas de diferente porte, gerando
um segmento novo de empresas especializadas em plataformas tecnolgicas avanadas que
disponibilizam insumos para as outras empresas.
J no se trata de promessas ou de perspectivas futuras; os produtos e processos biotecnolgicos
fazem parte de nosso dia a dia, trazendo oportunidades de emprego e investimentos. Incluem-se na
bioeconomia plantas resistentes a doenas, plsticos biodegradveis, detergentes mais eficientes,
biocombustveis, e tambm processos industriais menos poluentes, menor necessidade de pesticidas,
biorremediao de poluentes, centenas de testes de diagnstico e de medicamentos novos (Tabela
1.1).
---------------FIGURA 1.1. O campo da Biotecnologia

Conhecimentos

Agentes biolgicos

Cincia e tecnologia

Organismos, clulas, organelas, molculas

BIOTECNOLOGIA
Fazer produtos teis

Resolver problemas

TABELA 1.1. Produtos e servios de origem biotecnolgica, em diferentes setores

SETORES

TIPOS DE PRODUTOS OU SERVIOS

Energia

Etanol, biogs e outros combustveis (a partir de biomassa).

Indstria

Butanol, acetona, glicerol, cidos, vitaminas etc. Numerosas enzimas para outras indstrias
(txtil, de detergentes etc.).

Meio ambiente

Recuperao de petrleo, biorremediao (tratamento de guas servidas e de lixo, eliminao


de poluentes).

Agricultura

Adubo, silagem, biopesticidas, biofertilizantes, mudas de plantas livres de doenas, mudas de


rvores para reflorestamento. Plantas com caractersticas novas incorporadas (transgnicas):
maior valor nutritivo, resistncia a pragas e condies de cultivo adversas (seca, salinidade etc.).

Pecuria

Embries, animais com caractersticas novas (transgnicos), vacinas e medicamentos para uso
veterinrio.

Alimentao

Panificao (pes e biscoitos), laticnios (queijos, iogurtes e outras bebidas lcteas), bebidas
(cervejas, vinhos e bebidas destiladas) e aditivos diversos (shoyu, monoglutamato de sdio,
adoantes etc.); protena de clula nica (PUC) para raes, alimentos de origem transgnica
com propriedades novas.

Sade

Antibiticos e medicamentos para diversas doenas, hormnios, vacinas, reagentes e testes


para diagnstico, tratamentos novos etc.

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BIOTECNOLOGIA E DESENVOLVIMENTO
Por se tratar de uma coleo de tecnologias diversas, o uso das biotecnologias no se restringe
necessariamente aos pases desenvolvidos. Existe um espao que os pases emergentes podem ocupar,
em funo de suas riquezas naturais, desde que existam prioridades econmicas e polticas definidas
claramente. A condio fundamental contar com instituies competentes que formem uma massa
crtica de pesquisadores e pessoal tcnico treinado.
A China e a ndia contam hoje com uma indstria biotecnolgica avanada e diversificada. Assim
como a Amrica Latina, concentrada principalmente na Argentina, no Brasil, no Chile, na Colmbia, em
Cuba e no Mxico. Pases como Uruguai e Venezuela tambm tm atividade em algumas reas, assim
como, em menor escala, Equador, Costa Rica, Paraguai, Peru e Bolvia. Na regio, numerosas empresas
incidem em vrios setores: meio ambiente e indstria, agroalimentos e pecuria, sade animal e
humana.
No entanto, a Biotecnologia suscita ainda opinies e sentimentos controversos. Enquanto alguns
setores a percebem como uma tecnologia baseada em um slido conhecimento cientfico, para outros
se trata de uma atividade antinatural e perigosa. O enfrentamento de partidrios e opositores ocorre
com menos frequncia no terreno das razes que no das paixes, sejam elas polticas, religiosas ou
ideolgicas. Ao discutir se a biotecnologia progressista ou reacionria, boa ou ruim, se esquece que
o que caracteriza uma tecnologia o uso que fazemos dela.
Produtos e processos inimaginveis cinquenta anos atrs entram em nosso cotidiano antes que os
alicerces cientficos e tecnolgicos correspondentes se insiram em nossa cultura, atravs de uma
divulgao ampla que atinja tambm o sistema educativo em todos os seus nveis. No existe
possibilidade alguma de construir uma sociedade moderna se os seus integrantes ignorarem os
aspectos mais gerais de cincia e tecnologia. O desconhecimento aumenta o risco de rejeitar
tecnologias promissoras, capazes de abrir perspectivas novas, com vistas a um desenvolvimento
sustentvel em reas to crticas como a sade, a produo de alimentos, a energia e o meio ambiente.
A proposta deste livro revisar os fundamentos das biotecnologias e mostrar como se aplicam em
diversos setores produtivos da sociedade, destacando como exemplos alguns empreendimentos
latino-americanos bem-sucedidos. Esperamos que ele seja de ajuda para todos os que nos
preocupamos com os alcances desta fascinante (r)evoluo tecnolgica.
A HISTRIA DA BIOTECNOLOGIA
A Tabela 1.2 rene alguns dos mais importantes acontecimentos relacionados com a Biotecnologia.
---------------TABELA 1.2. A linha do tempo
DATA

ACONTECIMENTOS FUNDAMENTAIS

ANTIGUIDADE
Preparao e conservao de alimentos e bebidas por fermentao (po, queijo, cerveja, vinho
e vinagre); cultivo de plantas (batata, milho, cevada, trigo etc.); domesticao de animais;
tratamento de infeces (com produtos de origem vegetal tais como p de crisntemo e
derivados de soja com fungos).
IDADE MDIA
Sculo XII

Destilao do lcool.

O QUE BIOTECNOLOGIA?

IDADE MODERNA
Sculo XVI

Cronistas registram a colheita de algas para alimentao, nos lagos do Mxico, pelos astecas.

Sculo XVII

Incio da produo comercial de cerveja; extrao de metais por ao microbiana na Espanha;


cultivo de fungos na Frana; Hooke descobre a existncia de clulas (1665).

Sculo XVIII

Invento da mquina a vapor (1752). A partir de 1750, cresce o cultivo de leguminosas na Europa
e se difunde a prtica de rotao de cultivos, aumentando a produtividade e melhorando o uso
da terra.

IDADE CONTEMPORNEA
1797

Jenner inocula uma criana com um vrus que o protege contra a varola.

1809

Appert utiliza o calor para esterilizar e conservar comida, processo que ser utilizado nas
campanhas napolenicas.

1835 a 1855

Schleiden, Schwann e Virchow enunciam a teoria celular.

1863 a 1886

Pasteur inventa um processo para conservar alimentos sem alterar suas propriedades
organolpticas (Pasteurizao, 1863), derruba a teoria da abiognese (1864), investiga as
doenas do bicho-da-seda (1865), identifica a levedura como o agente responsvel pela
fermentao alcolica (1876), usa microrganismos atenuados para obter vacinas contra o antraz
e a clera (1881), faz os primeiros testes de uma vacina contra a raiva (1881). Paralelamente,
Koch inicia o desenvolvimento de tcnicas fundamentais para o estudo dos microrganismos
(1876) e enuncia quatro postulados sobre os agentes infecciosos como causa de doenas. Em
1865 Mendel apresenta o seu trabalho Experincias de hibridizao em plantas.

1887

Inaugurao em Paris do Instituto Pasteur.

1892

Descoberta do vrus do mosaico do tabaco; introduo do trator na agricultura.

1897

Bchner mostra que enzimas extradas da levedura podem transformar acar em lcool.

1899

Primeiro transplante de um rgo: o rim de um cachorro a outro cachorro.

1900

Redescobrimento das leis da hereditariedade, j enunciadas por Mendel em 1865, porm


esquecidas.

1905

O primeiro transplante de crnea se realiza com sucesso; isto porque a crnea no tem
antgenos.

1906

Ehrlich descobre o primeiro agente quimioterpico, chamado Salvarsan, que ser utilizado
contra sfilis.

1910

Em Manchester, na Inglaterra, comeam a ser introduzidos os sistemas de purificao de esgoto


baseados na atividade microbiana.

1912 a 1914

Rhm obtm a patente de uma preparao enzimtica para a lavagem de roupas; Weizmann
consegue a produo de acetona e butanol por microrganismos.

1915

Morgan publica Mechanism of Mendelian Heredity.

1916

Imobilizam-se as enzimas, uma tcnica que facilita sua utilizao em processos industriais.

1918

Morrem de gripe espanhola mais de vinte milhes de pessoas, um nmero de vtimas superior
ao da Primeira Guerra Mundial. Constroem-se biodigestores para a produo de metano (China
e ndia).

1919

O engenheiro agrcola hngaro Ereky utiliza pela primeira vez a palavra biotecnologia.

1927

Muller descobre que os raios X causam mutaes.

1928

F. Griffith descobre a transformao, isto , a transferncia de informao gentica de uma


linhagem bacteriana a outra.

1933

Comercializao do milho hbrido, isto , de sementes de milho mais produtivas.

1936

Obteno de cido ctrico por fermentao.

1938

Na Frana, produo comercial de um biopesticida (Bacillus thuringiensis).

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1940 a 1950

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Avanos na mecanizao do trabalho agrcola.

1944

Produo em grande escala da penicilina (descoberta por Fleming em 1928, desenvolvida por
Florey e Chain).

1951

Inseminao artificial de gado utilizando smen congelado. Descoberta da presena de genes


saltatrios no milho por Brbara Mc Clintock.

1953

J. D. Watson e F. Crick propem o modelo (dupla hlice) da estrutura do DNA.

1958

L.Stevens reconhece a existncia de clulas de camundongo pluripotentes.

1959

Reinart regenera plantas de cenoura a partir de uma cultura de clulas (calo).

1960

Aumento da produo de cido lctico, cido ctrico, acetona e butanol por via fermentativa.

1961

Descoberta do cdigo gentico. Desenvolvimento de uma protease alcalina para uso em sabes
para a lavagem de roupas pela empresa dinamarquesa Novo. Inicia-se o cultivo in vitro de
clulas-tronco embrionrias pluripotentes.

1962

Plantio de novas variedades de trigo mais produtivas, no Mxico, dando incio ao que ser
chamado de Revoluo Verde.

1965

Hayflick observa que as clulas cultivadas se dividem um nmero finito de vezes antes de
morrer.

1967

Primeiro transplante de corao, na frica do Sul; o paciente sobrevive 18 dias.

1968

Produo industrial de aminocidos utilizando enzimas imobilizadas.

1973

Havendo desenvolvido tcnicas de corte e reunio do DNA, Cohen e Boyer transferem um gene
a um organismo de outra espcie. Lanado no Brasil o programa de produo de lcool a partir
de biomassa (Prolcool).

1975

G. J. F. Khler e C. Milstein desenvolvem a tecnologia de hibridomas e obtm anticorpos


monoclonais. A empresa Novo produz xarope com alto contedo de frutose por via enzimtica
como adoante alternativo sacarose.

1975

A Conferncia de Asilomar pede ao National Institute of Health (NIH) que sejam estabelecidas
normas para a regulao dos experimentos com DNA-recombinante, o que acontecer meses
mais tarde.

1976

Utilizao da tcnica de hibridizao molecular no diagnstico pr-natal da alfa talassemia.

1977

F.Sanger e W.Gilbert elaboram o primeiro mtodo de sequenciamento do DNA.

1978

Genentech, Inc., a primeira empresa biotecnolgica, fundada um ano antes por Boyer e
Swanson, obtm a protena somatotropina (hormnio de crescimento) mediante a tecnologia
do DNA-recombinante. Nasce na Inglaterra Louise Brown, o primeiro beb de proveta.

1979

Produo do hormnio de crescimento humano, utilizando a tecnologia do DNA-recombinante.

1980

A Suprema Corte de Justia dos Estados Unidos aprova o princpio de patentes para as formas
de vida de origem recombinante. As primeiras patentes so de A. N. Chakrabarty, para um
microrganismo para biorremediao de petrleo, e de H. Cohen e S.Boyer, pelo processo de
1973. Erradicao da varola.

1982

A insulina humana de origem recombinante da Genentech, Inc. comercializada. Uma licena


ser obtida mais tarde pela empresa Eli Lilly, que a vender com o nome de Humulina. A
primeira vacina de DNA-recombinante para o gado comercializada na Europa. S. Prusiner
descobre os prons.

1983

Realizam-se as primeiras experincias de Engenharia Gentica em plantas (petnia). Syntex


Corporation recebe a aprovao da Food and Drug Administration (FDA) de um teste para
Chlamydia trachomatis baseado na utilizao de anticorpos monoclonais. Isolado o vrus HIV no
Instituto Pasteur (Frana) e no NIH (National Institute of Health, Estados Unidos). Anunciada a
obteno das primeiras plantas geneticamente modificadas por quatro grupos independentes
da Universidade de Washington (St. Louis), a empresa Monsanto (Missouri), e a Universidade de
Gent (Blgica). K. Mullis aporta modificaes fundamentais tcnica da Reao em Cadeia de
Polimerase (PCR).

O QUE BIOTECNOLOGIA?

1984

A. Jeffreys introduz a tcnica do Fingerprint (impresses digitais), que, um ano depois, ser
utilizada pelos tribunais para a identificao de suspeitos. Clonagem e sequenciamento do
genoma do HIV pela empresa Chiron Corp.

1986

A Environmental Protection Agency (EPA) dos Estados Unidos aprova a liberao de plantas de
tabaco transgnicas. Um grupo de especialistas em segurana em Biotecnologia da Organizao
para a Cooperao Econmica e o Desenvolvimento (OECD) declara que a previsibilidade das
mudanas genticas obtidas por Engenharia Gentica frequentemente maior que a
correspondente s tcnicas tradicionais, e que os riscos associados com organismos transgnicos
podem ser avaliados do mesmo modo que os riscos associados aos outros organismos. Aprovada
a primeira vacina biotecnolgica para uso humano, trata-se de Recombivax-HB, contra a
hepatite B. alfa interferon para tratamento de cncer (Biogen)

1987

Advanced Genetic Sciences libera em campo bactrias DNA-recombinante (Frostban) que


inibem a formao de gelo nos cultivos de morango, na Califrnia; a FDA aprova o fator ativador
de plasminognio, obtido por engenharia gentica, para o tratamento de ataques cardacos.

1988

A Universidade de Harvard obtm a patente de um rato transgnico desenvolvido especialmente


para o estudo do cncer; na mesma dcada, os europeus obtero a patente de outro rato
transgnico, sensvel a substncias carcinognicas. Genencor International Inc. obtm a patente
de um processo que permite obter enzimas (proteases) resistentes a alvejantes (processo
bleach) para a fabricao de sabes para a lavagem de roupa.

1989

Com a criao do National Center for Human Genome Research se inicia o mapeamento do
genoma humano. Amgem libera o Epogen para tratamento de anemia.

1990

Primeira experincia de terapia gnica para uma doena rara (ADA) em uma menina de 4 anos.
Pfizer comercializa Chy-Max TM, uma enzima de origem recombinante para a preparao de
queijos. GenPharm International, Inc. consegue uma vaca transgnica que produz no leite
protenas humanas para alimentao infantil. A Universidade da Califrnia (UCSF) e a
Universidade de Stanford contabilizam 100 patentes relativas ao DNA-recombinante. Aplicao
da cultura de clulas na produo de agentes bioteraputicos.

1991

Obtida por engenharia gentica a enzima -glucorcerebrosidase para a doena de Gaucher


(Genzyme). Affymax lana os primeiros chips de DNA.

1992

Uma tcnica, elaborada por cientistas americanos e britnicos, permite testar anormalidades
como a fibrose cstica e a hemofilia em embries in vitro. A FDA declara que os alimentos de
origem transgnica no demandam uma regulao especial. Conveno Internacional sobre
Diversidade Biolgica (CDB).

1993

Aprovada a utilizao do hormnio de crescimento bovino rBGH/rBST, produzido por Monsanto


Co., para aumentar a produo de leite.

1994

Lanamento no mercado do tomate FlavSavr, que, devido inativao de um gene, amadurece


na planta.

1995

Decifrado o primeiro genoma de uma bactria, Haemophilus influenzae.

1996

Sequenciado o primeiro genoma de um organismo eucarionte, a levedura Saccharomyces


cerevisiae. Desenvolve-se o primeiro GeneChip (Stanford, Affymetrix). Isolamento e cultivo das
primeiras clulas-tronco extradas de embries humanos supernumerrios originados por
fecundao in vitro.

1997

No Reino Unido, nascem Dolly, uma ovelha clonada, e, meses mais tarde, uma segunda ovelha,
Polly, clonada e geneticamente modificada. Os cultivos transgnicos so introduzidos em vrios
pases.

1998

Contabilizam-se mais de 1.500 empresas de Biotecnologia nos Estados Unidos e mais de 3.000
no mundo. Clulas-tronco embrionrias so utilizadas para regenerar tecidos. Sequenciamento
do primeiro genoma animal, o verme Caenorrabditis elegans. Isolada a primeira linhagem de
clulas-tronco embrionrias humanas. A.Z. Fire e C. Mello descobrem o silenciamento gnico, a
resposta antiviral a um RNA de filamento duplo.

1999

Sequenciamento do primeiro cromossomo humano. Pesquisadores descobrem que as clulastronco podem ser induzidas a se diferenciar em diversos tipos celulares.

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2000

O rascunho do sequenciamento do genoma humano anunciado simultaneamente por Collins,


do Consrcio do Genoma Humano, e Venter, da Celera Inc. Sequenciados tambm o genoma da
mosca Drosophila melanogaster, o primeiro genoma de uma planta (Arabidopsis thaliana) e, no
Brasil, o de uma bactria que ataca os ctricos (Xylella fastidiosa). Protocolo de Cartagena.
Moratria relativa ao uso da tecnologia Terminator, previamente patenteada por Delta&Pine.

2001

O rascunho do sequenciamento do Genoma Humano publicado simultaneamente nas revistas


Science e Nature. Sequenciamento do genoma de plantas de interesse agronmico para os
pases em desenvolvimento (arroz, banana). Sequenciamento do genoma de bactrias de
importncia agronmica. Obteno de clulas sanguneas a partir de clulas-tronco
embrionrias.

2002

Completados o rascunho do proteoma funcional da levedura e o sequenciamento do genoma


do agente e do vetor transmissor da malria. Identificam-se mais de 200 genes envolvidos na
diferenciao das clulas-tronco. Descoberta da participao de molculas de RNA na regulao
de vrios processos celulares. Em diversos pases inicia-se a utilizao de clulas-tronco adultas
para o tratamento experimental de diversas doenas (leucemia, mal de Chagas, diabetes e
anemia falciforme).

2003

Comercializao como mascote, do GloFish, um peixe transgnico que brilha na escurido,


originalmente criado para detectar poluentes. Clonagem de vrios tipos de animais e de espcies
ameaadas de extino. O Genoma Humano completado. O Massachussets Institute of
Technology (MIT) organiza a primeira iGEM (International Genetically Engineered Machine).

2004

Comercializao de novos medicamentos (Avastin ou bevacizumab) e testes de diagnsticos.


Comercializao do peixe GloFish.

2005

Publicao dos resultados do projeto HApMap com o mapa das variaes do Genoma Humano.

2006

O grupo de pesquisadores liderado por S. Yamanaka consegue induzir a pluripotencialidade


celular em clulas somticas. Criada a Biobricks Foundation, um registro de Partes Biolgicas
Standard - Open Source. Mantida a moratria sobre a tecnologia Terminator (Curitiba).

2007

As autoridades europeias de segurana alimentar concluem que os genes marcadores de


resistncia aos antibiticos no apresentam riscos relevantes para a sade humana ou animal
nem para o meio ambiente. Vacina contra o papilomavrus humano: primeira vacina contra o
cncer. Nova tcnica mais eficiente de sequenciamento.

2008

Pesquisadores japoneses desenvolvem a primeira rosa azul, geneticamente modificada.


Plataformas next generation diminuem os custos e aumentam a velocidade do sequenciamento.
Uma equipe de pesquisadores de Harvard cria linhagens de clulas-tronco para 10 doenas
genticas.

2009

Um grupo internacional obtm as primeiras clulas-tronco iPS, sem utilizar virus.


Comercializao de soja com alta concentrao de mega 3, o primeiro alimento biofortificado.

2010

Autorizada na Unio Europeia a comercializao da batata transgnica Amflora (Basf) para uso
industrial. Pesquisadores do Instituto Craig Venter constroem a primeira clula sinttica.
Desvendado o genoma do Neanderthal. Primeiro teste clnico com clulas-tronco.

2012

Publicao dos resultados do Projeto ENCODE descrevendo as regies ativas do genoma


humano. J.Doudna e E. Charpentier descrevem a tcnica CRISPR-Cas de edio de genomas.

2013

F.Zangh mostra que CRISPR/Cas9 tambm funciona em clulas de mamferos, inclusive


humanas.

2014

Publicado o primeiro rascunho do proteoma humano.

CAPTULO 2

CLULAS E CROMOSSOMOS

A CLULA COMO UNIDADE DOS SERES VIVOS


UNIDADE ESTRUTURAL

A clula a unidade estrutural dos seres vivos. Trate-se de bactrias, amebas,


espermatozoides ou neurnios, todas as clulas so formadas por gua, ons inorgnicos e
molculas orgnicas (protenas, carboidratos, lipdios e cidos nucleicos). E todas elas
apresentam uma membrana plasmtica que separa o citoplasma do meio externo e permite
o intercmbio de molculas entre ambos.
As clulas procariticas se encontram exclusivamente no reino Monera. Pequenas (0,001 a
0,005 mm) e com requerimentos nutricionais simples, estas clulas se multiplicam
rapidamente. A informao gentica se encontra em um cromossomo circular formado por
uma molcula de DNA e associado a uma invaginao da membrana plasmtica (mesossomo).
Pequenas molculas circulares adicionais (plasmdeos) podem tambm estar presentes.
Numerosos ribossomos asseguram a sntese proteica (Figura 2.1).
Bem mais complexa a estrutura das clulas eucariticas, presentes nos quatro reinos
restantes (Protista, Fungo, Planta e Animal). Com um tamanho variando entre 0,01 e 0,10 mm,
estas clulas so dez vezes maiores que as procariticas. A presena de compartimentos
diferenciados, ou organelas, que cumprem atividades especficas, resulta em uma subdiviso
do trabalho que garante a eficincia do funcionamento celular (Figura 2.2).
O citoplasma percorrido por um sistema de membranas, o retculo endoplasmtico, que
est associado aos ribossomos e, por conseguinte, sntese de protenas. Processados no
aparelho de Golgi, os produtos celulares so secretados ou distribudos em outras estruturas
(lisossomos, membrana celular).
O metabolismo energtico est associado a organelas citoplasmticas, complexas e
rodeadas de membranas (mitocndrias, cloroplastos e peroxissomos). Um citoesqueleto,
formado por tbulos e filamentos proteicos, mantm a forma da clula, alm de assegurar o
transporte interno das organelas e os movimentos celulares. A informao gentica est
distribuda em cromossomos, cada um deles formado por uma molcula linear de DNA
associada a protenas.

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FIGURA 2.1. Representaes esquemticas da estrutura celular

Clula procaritica (bacteriana)

Clula eucaritica (vegetal)

Clula eucaritica (animal)

10

CLULAS E CROMOSSOMOS

Os cromossomos e o nuclolo se encontram no ncleo, que funciona como um centro de controle


celular. A membrana nuclear, um envoltrio com poros que separa o ncleo do citoplasma, permite o
intercmbio de substncias entre ambos.
Apesar de ter uma organizao muito parecida, as clulas animais diferem das clulas vegetais em
alguns aspectos (Tabela 2.1). Nas clulas vegetais encontramos uma parede celular ao redor da
membrana plasmtica; o citoplasma contm cloroplastos, onde ocorre a fotossntese, e grandes
vacolos, onde se armazenam substncias e degradam macromolculas. Nenhuma dessas estruturas
se observa nas clulas animais; estas tm um centrolo que falta nas clulas vegetais.
A clula tambm a unidade funcional de um organismo. O citoplasma uma soluo viscosa onde
continuamente ocorrem reaes de sntese e degradao de substncias, consumindo ou liberando
energia. Estas reaes constituem o que denominamos metabolismo.
---------------TABELA 2.1. A funo e a distribuio das estruturas celulares

Estrutura

FUNO

CLULA BACTERIANA

CLULA
ANIMAL

CLULA
VEGETAL

Parede celular

Manuteno da forma e
proteo da clula.

Presente ou ausente

Ausente

Presente

Membrana plasmtica

Manuteno da
estabilidade do meio
intracelular; controle das
trocas entre a clula e o
meio extracelular.

Carioteca ou
membrana nuclear

Controle do fluxo de
substncias entre o
ncleo e o citoplasma.

Cromossomo(s)

Presente

Ausente

Presente

Controle da estrutura e
do funcionamento celular.

nico e circular;
apenas DNA.

Mltiplos e lineares; DNA e


protenas.

Nuclolo(s)

Formao de ribossomos.

Ausente(s)

Presente(s)

Centrolos

Formao de clios e
flagelos; participao na
diviso celular.

Ausentes

Ribossomos

Sntese de protenas.

Retculo endoplasmtico rugoso

Sntese de protenas.

Retculo endoplasmtico liso

Sntese de lipdios;
armazenamento e
inativao de substncias.

Presentes

Ausentes

Presentes

Ausentes

Complexo de Golgi

Secreo celular.

Mitocndrias

Respirao celular
aerbia.

Vacolo central

Equilbrio osmtico e
armazenamento.

Lisossomos

Digesto intracelular.

Cloroplastos

Fotossntese.

Ausentes

Citoesqueleto

Manuteno da forma
celular; contrao e
ancoragem de organelas.

Ausente

Presentes

Ausente

Presente
Presentes

Ausentes

Ausentes

Presentes

Presente

11

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UNIDADE FUNCIONAL
As reaes metablicas so facilitadas por protenas com atividade cataltica, denominadas enzimas.
Assim como as protenas estruturais, as enzimas se sintetizam nos ribossomos, que so pequenos
componentes citoplasmticos, no membranosos. A estrutura das protenas depende da informao
gentica codificada no cido desoxirribonucleico (DNA), transcrita no cido ribonucleico (RNA) e
traduzida nos ribossomos.
As semelhanas de estrutura e funcionamento celulares decorrem de uma origem evolutiva
comum, aproximadamente 3,8 bilhes de anos atrs. Os dois tipos celulares que reconhecemos hoje,
as clulas procariticas e as eucariticas, apareceram entre um e um bilho e meio de anos mais tarde.
TCNICAS LABORATORIAIS
O estudo das clulas se v facilitado por um conjunto de tcnicas laboratoriais, tais como:
o Tcnicas microscpicas que permitem uma visualizao detalhada da clula.
-

Microscopia ptica, que se utiliza para observar os cortes de tecidos. Geralmente, estes so fixados
(lcool, cido actico, formaldedo) e tingidos com corantes que reagem com as protenas ou com os
cidos nucleicos, aumentando o contraste da imagem.

Microscopia de contraste de fase, que transforma as diferenas de espessura ou de densidade do


fragmento observado em diferenas de contraste.

Microscopia fluorescente, que associa anticorpos especficos a um reagente como o PVF (protena verde
fluorescente de medusa), de forma a marcar as molculas e visualizar sua distribuio nas clulas.

Microscopia confocal, que combina a microscopia fluorescente com a anlise eletrnica da imagem,
fornecendo uma imagem tridimensional.

Microscopia eletrnica, que permite a observao em um plano de cortes tingidos com sais de metais
pesados (microscopia de transmisso) e a observao tridimensional de clulas (microscopia de
varredura).

Microscopia de tunelamento, com os diversos tipos de microscpios de varredura por sonda (SPM, do
ingls scanning probe microscope) que, alm de fornecer uma imagem de molculas e tomos,
permitem medies e a manipulao de molculas e tomos.

Nanoscopia, baseada na utilizao de molculas fluorescentes, permite a visualizao de molculas


individuais dentro da clula viva (STED, do ingls Stimulated emission depletion microscopy; SMM, do
ingls single-molecule microscopy).

o Tcnicas fsicas como a centrifugao diferencial (ultracentrifugao, centrifugao em gradiente)


para separar os componentes celulares para estudos bioqumicos posteriores.
o Tcnicas instrumentais que possibilitam a contagem de clulas e a separao de populaes
celulares (cell sorter) ou de cromossomos (flow sorter).
o Tcnicas de cultura de clulas com objetivos diversos.
TODA CLULA DERIVA DE OUTRA PREEXISTENTE
Assim como uma planta se forma a partir de outra planta e um animal de outro animal, toda clula
deriva de outra preexistente. Este conceito, enunciado por R. Virchow em 1855, no foi plenamente

12

CLULAS E CROMOSSOMOS

aceito at dez anos mais tarde, quando L. Pasteur mostrou experimentalmente que a proliferao de
microrganismos em um meio orgnico estril se deve contaminao deste com os microrganismos
presentes no ar, que, ao encontrar um meio propcio, se multiplicam rapidamente.
Todo organismo multicelular resulta da multiplicao de uma nica clula-ovo ou zigoto. As clulas
embrionrias diferenciam-se, formando centenas de tipos celulares com funes especficas, cuja
integrao assegura a unidade do organismo. Nos vegetais, a persistncia de tecidos embrionrios
totipotentes (meristemas) na planta adulta permite o crescimento e a regenerao durante a vida toda
do organismo. Em condies apropriadas, clulas especializadas podem reverter a um estado no
diferenciado com a capacidade de regenerar um organismo completo. Nessa propriedade se
fundamenta a propagao de plantas in vitro.
Nos animais superiores, a totipotncia se restringe s clulas do embrio com menos de quatro
dias, que so as nicas capazes de regenerar um organismo inteiro. Contudo, uma vez passado esse
perodo, algumas clulas internas pluripotentes do blastcito (clulas-tronco embrionrias) conservam
a capacidade de originar todos os tecidos do organismo (Figura 2.2).
Algumas clulas-tronco permanecem nos tecidos adultos, onde se multiplicam durante longos
perodos de tempo sem que ocorra a diferenciao. Estas clulas tm sido encontradas em rgos
como a medula ssea e o cordo umbilical, o sangue, a crnea e a retina, a polpa dentria, o fgado, a
pele, o trato digestivo e o pncreas.
Em determinadas condies fisiolgicas, as clulas-tronco adultas originam clulas especializadas
de vrios tipos que asseguram a manuteno e o reparo do tecido onde se encontram. Um nico tipo
de clula-tronco multipotente da medula ssea, por exemplo, gera todas as clulas sanguneas
(hemcias, leuccitos e plaquetas). Na pele, clulas-tronco unipotentes se diferenciam unicamente na
linhagem celular dos queratincitos.
As clulas-tronco adultas encontraram rapidamente aplicaes teraputicas promissoras, como o
transplante de clulas-tronco hematopoticas em casos de leucemia aguda ou de linfoma. No
aconteceu o mesmo com as clulas-tronco embrionrias, cuja utilizao est limitada a pesquisas e
estudos laboratoriais.
As clulas-tronco embrionrias podem ser extradas de um embrio obtido por transferncia de um
ncleo a um ovcito anucleado, ou dos embries supranumerrios congelados nas clnicas de
fertilizao assistida. Os dois mtodos suscitaram grandes debates ticos em torno de quem forneceria
os ovcitos e do status do embrio.
---------------FIGURA 2.2. As clulas-tronco embrionrias
As clulas-tronco embrionrias extradas do blastcito (5 a 7 dias) e cultivadas in vitro diferenciam-se, em
condies experimentais adequadas, nos diferentes tipos celulares.

Espermatozides
Massa interna de clulas

Clulas de pncreas

vulo

Clulas de
medula ssea
Zigoto
Blastocisto (corte)
5 a 7 dias

Cultura de
clulas-tronco
embrionrias

Clulas de
msculo cardaco

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A polmica esmoreceu em 2006 com o desenvolvimento, por K. Takahashi e S. Yamanaka, da


tecnologia que permite, a partir de clulas somticas, obter clulas iPS (do ingls, induced pluripotent
stem cells). Com algumas pequenas diferenas na expresso gnica, suas propriedades so
semelhantes s das clulas-tronco embrionrias. A induo de pluripotencialidade mediante a insero
de alguns genes em clulas adultas um passo importante, porque acaba com a necessidade de utilizar
embries congelados.
Ainda no terreno laboratorial, a tecnologia de reprogramao celular se desenvolve rapidamente,
aumentando nosso conhecimento sobre o controle gentico da diferenciao e abrindo uma nova
senda para a implementao de testes, medicamentos e tratamentos novos. Entender os mecanismos
que controlam o crescimento e a diferenciao celular um dos maiores desafios atuais, porque as
clulas-tronco possibilitaro novos tratamentos de regenerao celular para doenas cardacas,
diabetes e doena de Parkinson.
---------------FIGURA 2.3: Os cromossomos
Os nucleossomos so pequenas unidades estruturais que se repetem ao longo do cromossomo, formando a
cromatina. Sua condensao explica que 2 m de DNA estejam concentrados em um ncleo de 5 m de dimetro.
A Morfologia do cromossomo

B- Estrutura da cromatina
DNA

Genes
Centrmero

DNA enrolado sobre as histonas (nucleossomos)

Cromtides
irms

Sem duplicar

Nucleossomos compactados (cromatina)

Duplicado

C. Representao dos cromossomos humanos


(Caritipo)
O arranjo segue uma classificao convencional que leva
em conta o tamanho, a posio do centrmero
(tracejado no esquema) e o padro das bandas de cada
cromossomo.
Fonte:
http://www.molecularstation.com/molecular-biologyimages/data/502/karyotype.png

14

CLULAS E CROMOSSOMOS

OS CROMOSSOMOS
A observao microscpica dos cromossomos durante a diviso celular permite diferenci-los pelo
tamanho e a posio do centrmero, uma constrio que os divide em dois braos. Cada cromossomo
est composto por um filamento de DNA enrolado a espaos regulares sobre vrias protenas
(histonas), formando pequenas estruturas denominadas nucleossomos. No resto do ciclo celular, os
cromossomos distendidos formam uma rede de filamentos finos, denominada cromatina, (Figura 2.3).
O nmero de cromossomos (n) constante em todos os indivduos de uma mesma espcie: n = 4
em Drosophila melanogaster e n = 23 no homem, por exemplo. Como nas clulas somticas, os
cromossomos se encontram sempre em pares; na espcie humana, o nmero de cromossomos (2n)
de 46, sendo que um par determina o sexo. Os cromossomos sexuais so idnticos na mulher (46, XX)
e diferentes no homem (46, XY). Em outras espcies, a determinao do sexo segue mecanismos
diversos.
Um pouco antes da diviso de uma clula, os cromossomos se duplicam, de modo que cada uma
das clulas filhas receba (2n) cromossomos. A mitose mantm constante o nmero de cromossomos
nas clulas somticas dos indivduos de uma mesma espcie.
J nas clulas reprodutivas, a meiose reduz a (n) o nmero de cromossomos. Durante o processo,
o entrecruzamento dos cromossomos permite a permuta de material e a recombinao dos genes
(Figura 2.4). Na fecundao, a fuso dos gametas restaura o nmero (2n) caracterstico da espcie.
Durante a formao dos gametas podem ocorrer erros na disjuno dos cromossomos, dando
origem a indivduos com frmulas cromossmicas alteradas. Na sndrome de Down, por exemplo, a
pessoa apresenta geralmente um cromossomo 21 supranumerrio (mulheres 47, XX + 21; homens 47,
XY + 21).
Estima-se que a percentagem de recm-nascidos com alguma anomalia cromossmica estaria em
torno de 0,85%, dos quais s alguns apresentariam algum sintoma. Alteraes cromossmicas tambm
podem ser relacionadas com alguns tipos de cncer. Na leucemia mieloide crnica, por exemplo,
observa-se a translocao recproca de dois pedaos dos cromossomos 9 e 22. De um modo geral,
frequente encontrar alteraes no nmero de cromossomos das clulas cancerosas.
A TEORIA CROMOSSMICA DA HEREDITARIEDADE
Em 1865, Gregor Mendel apresentou seu trabalho Experincias de hibridizao em plantas; este
reunia os resultados experimentais realizados com ervilhas (Pisum sativum), durante sete anos, no
jardim do monastrio Agostino de Brno (Morvia).
Apesar de passar quase despercebido, o trabalho acabou sendo distribudo por vrias bibliotecas
da Europa e Amrica, graas a sua publicao, um ano mais tarde, nos Anais da Sociedade de Histria
Natural.
No texto figuram algumas generalizaes. Conhecida como Primeira Lei de Mendel, Lei de
Segregao ou Monoibridismo, a primeira delas se refere segregao dos fatores (alelos) de um par
(um gene) na formao de gametas. A segunda, que conhecida como Segunda Lei de Mendel, Lei de
Segregao Independente ou Diibridismo, se refere segregao dos fatores (alelos) de dois ou mais
pares (dois ou mais genes) independentes na formao de gametas.
Em 1900, depois de chegar de maneira independente a concluses semelhantes, os pesquisadores
K. Correns, E. Von Tschermak e H.de Vries redescobriram nas bibliotecas o trabalho de Mendel. Nesse
intervalo de 35 anos tinha sido descrita a diviso celular (mitose, 1875; meiose, 1890); o prximo passo
correspondeu a Sutton e Boveri (1902), sugerindo que os fatores hereditrios de Mendel estariam nos
cromossomos.

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A confirmao desta hiptese decorreu dos trabalhos de T.H.Morgan e sua brilhante equipe na
Universidade de Columbia (Nova York), com a mosca da fruta, Drosophila melanogaster. Em 1910,
depois de uma srie de cruzamentos e de anlises estatsticas, Morgan mostrou que a herana da cor
branca do olho do mutante white est associada transmisso do cromossomo X, que determina o
sexo.
Morgan e seus colaboradores identificaram numerosos outros mutantes de Drosophila
melanogaster com um padro mendeliano de hereditariedade. Alm de moscas com olhos brancos em
vez de vermelhos, encontraram outras com asas curtas em vez de longas, com corpo de cor marrom
ou preta em vez de amarela etc. Os genes correspondentes foram classificados em quatro grupos de
ligao, sendo que cada um deles est associado a um dos quatro pares de cromossomos da
Drosophila.
Como durante a meiose se produzem permutas entre segmentos cromossmicos, nos cruzamentos
aparecem indivduos recombinantes, isto , com outras combinaes gnicas diferentes das previstas
pelas leis mendelianas (Figura 2.4). A partir dos dados obtidos em milhares de cruzamentos sobre a
recombinao dos genes de um mesmo grupo de ligao chega-se a estabelecer a distncia gentica
entre eles.
---------------FIGURA 2.4. Mitose e meiose

MEIOSE

16

MITOSE
EIOSE

CLULAS E CROMOSSOMOS

Com a descoberta de clulas com cromossomos gigantes (politnicos) nas glndulas salivares das
larvas de drosfila, comearam os primeiros trabalhos de mapeamento. A observao microscpica
das bandas nos cromossomos mostrou, com enorme riqueza de detalhes, uma sucesso consistente
de bandas largas e estreitas. Da associao entre os mtodos genticos e os mtodos citolgicos
surgiram os primeiros mapas fsicos, associando uma regio cromossmica a cada gene.
Das descobertas de Morgan e sua equipe, nasce a Teoria Cromossmica da Hereditariedade ou
Teoria do Gene, segundo a qual:
o Os caracteres de um indivduo correspondem a elementos pares, os genes.
o Os genes esto ligados uns aos outros nos cromossomos, formando um determinado nmero de
grupos de ligao.
o Os genes de cada par se separam durante a gametognese, de acordo com a Primeira Lei de Mendel
e, em consequncia, cada gameta fica contendo apenas um conjunto de genes.
o Os genes pertencentes a grupos de ligao diferentes segregam independentemente, de acordo
com a Segunda Lei de Mendel.
o Entre os elementos pertencentes a cada grupo de ligao, ocorre uma troca ordenada chamada
permuta ou crossing-over, que leva recombinao dos genes (Figura 2.4). A frequncia da
permuta fornece a prova da linearidade dos genes em cada grupo de ligao e permite determinar
sua posio relativa.
AS PRIMEIRAS MANIPULAES GNICAS
Na gentica clssica, um carter pode ser considerado hereditrio quando duas variaes fenotpicas
podem ser atribudas a dois alelos de um mesmo gene. Os primeiros mutantes de Drosophila
apareceram por acaso e em uma frequncia to baixa que limitava os estudos de anlise gentica. Era
necessrio encontrar um mtodo que acelerasse a obteno de mutantes para poder avanar. J na
dcada de 1920, H. Muller, um dos integrantes do grupo das moscas liderado por Morgan, iniciou os
experimentos de exposio das drosfilas a diferentes tipos de radiao.
O tratamento gerou em poucas semanas mais de 100 mutantes, um nmero equivalente metade
dos mutantes espontneos encontrados nos 15 anos anteriores. A radiao podia causar pequenas
mutaes de ponto, afetando um nico gene e originando uma pequena variao fenotpica. Contudo,
os efeitos da radiao tambm podiam ser letais para a descendncia e/ou produzir vrios tipos de
alteraes cromossmicas: translocaes, inverses, delees, duplicaes.
Muller viu claramente a importncia do tratamento com radiao para a obteno de novas
variveis vegetais e no melhoramento agrcola; datam dessa poca as primeiras mutaes em plantas
de milho. A radiao utilizada como agente mutagnico at os dias de hoje, sendo uma prtica
considerada aceitvel pelos agricultores orgnicos.
Percebendo o risco que a manipulao indiscriminada da radiao representava para o ser humano,
Muller teve um rol preponderante na conscientizao dos trabalhadores da indstria e da sade sobre
medidas de proteo e participou ativamente nas campanhas antinucleares das dcadas de 19401950.
NATURE vs NURTURE
Assim como muitos outros posteriores, os estudos da equipe de Morgan mostraram a complexidade
dos padres de hereditariedade, que incluem casos de:

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o Alelismo mltiplo, quando um gene admite mltiplos alelos; dominantes, recessivos ou


codominantes (Sistema ABO, por exemplo).
o Pleiotropia, quando um gene determina diversos caracteres (pelagem e sobrevivncia em ratos,
por exemplo).
o Herana polignica, quando um carter est determinado por vrios genes de efeito cumulativo
(altura, cor dos olhos).
o Interao gnica, quando uma caracterstica depende da ao de muitos genes.
Contudo, a variao observada nos seres vivos no se deve exclusivamente hereditariedade: o
desenvolvimento de um ser vivo resulta de uma delicada inter-relao entre os genes e o ambiente.
No sculo XX, duas interpretaes extremas sobre sua importncia relativa causaram grandes danos
humanidade.
Uma delas o determinismo gentico, base ideolgica do eugenismo, movimento que postula o
melhoramento gentico do homem mediante a esterilizao dos indivduos considerados deficientes
fsicos ou mentais, uma categoria que inclua tambm os desajustados sociais. Teve grande influncia
nos Estados Unidos, na Inglaterra, nos pases do Bltico, na Alemanha e no Japo.
No outro extremo, encontramos o determinismo ambiental, que, negando a influncia dos genes,
se afirmou na Unio Sovitica durante o perodo staliniano. Defendido por T. Lyssenko, esse preceito
foi uma das principais causas do fracasso da agricultura e da escassez de alimentos sofrida pela
populao no perodo posterior Segunda Guerra Mundial.
Em uma perspectiva histrica, os argumentos utilizados no debate atual sobre os organismos
geneticamente modificados conservariam algumas razes nessa viso antagnica do sculo XX sobre
cincia burguesa reacionria vs cincia proletria progressista, ou ainda capitalismo-direitadeterminismo gentico vs socialismo-esquerda-ambientalismo.
Para os geneticistas, o fentipo de um indivduo o resultado da interao entre o gentipo e o
ambiente em que este se expressa. Os genes determinam o desenvolvimento dos seres vivos, mas
existem muitos traos que no so determinados exclusivamente pelos genes e dependem, em maior
ou menor grau, de influncias ambientais.
CLULAS E CROMOSSOMOS COMO AGENTES BIOLGICOS
Um dos testes pioneiros de diagnstico gentico est baseado na observao microscpica dos
cromossomos de clulas somticas durante a diviso celular (mitose). A identificao se v facilitada
pela presena de regies ou bandas reveladas mediante algumas tcnicas de colorao. O nmero e a
estrutura dos cromossomos so analisados e apresentados em um arranjo (caritipo) que segue uma
classificao convencional (Figura 2.3).
Os testes de diagnstico gentico envolvendo a anlise de caritipos esto amplamente difundidos
na prtica mdica, sendo facilitados atualmente pela utilizao de corantes especficos para cada par
cromossmico.
Como agentes biolgicos, as clulas encontram outras aplicaes (Tabela 2.2). Clulas vegetais
cultivadas in vitro produzem substncias de alto valor agregado, importantes para as indstrias
alimentar, cosmtica e farmacutica. Tambm so utilizadas para regenerar plantas. A multiplicao
de vrus em cultivos de clulas de insetos permite a comercializao de prticas de controle biolgico.
A sntese de algumas substncias importantes para a indstria farmacutica, como o fator ativador
de plasminognio, depende do cultivo in vitro de clulas animais. Estas tambm substituem os animais
nos testes toxicolgicos e so utilizadas na multiplicao de vrus para a preparao de vacinas.
Tambm possibilitam a produo de anticorpos.

18

CLULAS E CROMOSSOMOS

As clulas-tronco so ferramentas fundamentais na pesquisa bsica sobre diferenciao celular. Sua


utilizao tem permitido avanos notveis nos testes de toxicidade, na triagem de medicamentos e na
modelagem de doenas.
Combinando as tcnicas de cultivo celular com o desenvolvimento de materiais biolgicos
semelhantes ao colgeno, uma rea nova de engenharia de tecidos visa a reparao ou substituio
de tecidos lesionados. Os enxertos de pele artificial, cultivada in vitro, saram ferimentos e/ou
queimaduras em seres humanos.
---------------TABELA 2.2. As clulas como agentes biolgicos

Vegetais

Indstria alimentar e cosmtica (adoantes, corantes, flavorizantes e


aromatizantes).
Indstria farmacutica (alcaloides e esteroides).
Estudos toxicolgicos.

CLULAS

Animais
e/ou
humanas

Diagnstico clnico e aconselhamento gentico (caritipos).


Indstria farmacutica (produo de anticorpos e vacinas, testes de toxicidade,
triagem de medicamentos).
Medicina regenerativa (produo de tecidos de substituio).

19

CAPTULO 3

OS MICRORGANISMOS

A DIVERSIDADE MICROBIANA
O termo microrganismos se aplica a um grupo heterogneo de seres que vivem como clulas
independentes ou como agregados celulares: bactrias, arqueas, protozorios, algas e fungos e,
tambm, vrus (Tabela 3.1). Salvo estes ltimos, que esto na fronteira entre o vivo e o no vivo, os
encontramos dentro dos trs domnios em que se classificam os seres vivos: Bacteria, Archaea e
Eukarya.
Os microrganismos mostram uma diversidade surpreendente de estrutura e modos de vida. Alguns
so procariontes, como as bactrias; outros eucariontes, como os protozorios, as algas e os fungos.
Os aerbios crescem se houver oxignio, os anaerbios, se no o houver. Formas livres colonizam
todos os ambientes terrestres, desde o cume das montanhas at as profundidades dos oceanos. Mas
h tambm parasitas que crescem custa de outros seres vivos, onde encontram abrigo e alimento, e
os que mostram diversos graus de dependncia de outros seres vivos.
---------------TABELA 3.1. Os microrganismos dentro do marco da uma classificao biolgica atual
DOMNIO

BACTERIA

ARCHAEA

REINO

EUBACTERIA

ARCHAEBACTERIA

PROTOCTISTA

FUNGI

PLANTAE

ANIMALIA

TIPO DE
CLULA

Procaritica

Procaritica

Eucaritica

Eucaritica

Eucaritica

Eucaritica

ESTRUTURA
CELULAR

Parede celular
com
peptidoglicano.

Parede celular sem


peptidoglicano.

Parede celular de
celulose, em
alguns.
Presena de
cloroplastos, em
alguns.

Parede celular
de quitina.
Ausncia de
cloroplastos.

Parede celular de
celulose.

Sem parede
celular nem
cloroplastos.

Unicelular

Uni ou
pluricelular

Uni ou
pluricelular

Pluricelular

Pluricelular

ORGANIZAO Unicelular

EUKARYA

Presena de
cloroplastos.

NUTRIO (*)

Autotrfica ou
Heterotrfica

Autotrfica ou
Heterotrfica

Autotrfica ou
Heterotrfica

Heterotrfica
(absoro)

Autotrfica

Heterotrfica
(ingesto)

EXEMPLOS

Eubactrias

Arqueas

Protozorios e
Algas

Leveduras,
Mofos, Bolores
e Cogumelos.

Brifitas (musgos),
Pteridfitos
(samambaias),
Gimnospermas e
Angiospermas.

Invertebrados e
Cordados

* Nutrio
Autotrfica: o organismo produz seu prprio alimento a partir de substncias inorgnicas e de uma fonte de energia. Os seres
autotrficos podem realizar fotossntese (para a qual a fonte de energia a luz solar) ou quimiossntese (para a qual a fonte
de energia uma reao qumica exotrmica).
Heterotrfica: o organismo se alimenta de molculas orgnicas elaboradas por outros seres vivos por absoro (captao de
nutrientes dissolvidos na gua), ou ingesto (entrada de partculas de alimentos no dissolvidas).
BIOTECNOLOGIA: ENSINO E DIVULGAO (http://bteduc.com)

OS MICRORGANISMOS

Os auttrofos sintetizam seus alimentos a partir de dixido de carbono; os fotossintticos utilizam a


luz como fonte de energia; e os quimiossintticos, algumas reaes qumicas inorgnicas. Os
hetertrofos dependem das molculas orgnicas elaboradas pelos auttrofos, que absorvem ou
ingerem.
O fato de mant-los agrupados sob a denominao de microrganismos talvez obedea menos a
uma questo de semelhana que a razes prticas; j que os mesmos mtodos bsicos de estudo
(isolamento, cultura in vitro, identificao) podem ser aplicados, com pequenas variaes, a esses
grupos.
Em condies favorveis de umidade, acidez e temperatura, as bactrias se multiplicam
rapidamente por fisso celular, produzindo em poucas horas milhes de clulas ou clones, em uma
das acepes da palavra. Algumas espcies bacterianas tambm mantm formas de reproduo
sexuada, possibilitando a recombinao do material gentico de plasmdeos. A transferncia
horizontal de genes entre bactrias e arqueas ocorre em consequncia da infeco com bacterifagos
ou simplesmente por entrada de um DNA nu (Figura 3.1).

AS EUBACTRIAS
As eubactrias ou bactrias so organismos unicelulares procariticos em que uma parede celular
pode cumprir uma funo protetora. Alm do DNA cromossmico, podem apresentar molculas
circulares extras de DNA denominadas plasmdeos.
As eubactrias formam um grupo com mais de 5 mil espcies conhecidas. Pequenas (0,0005-0,005
mm) e de formas diversas (esfricas, bastonetes, helicoidais), elas podem ser encontradas isoladas ou
em pares, cadeias ou agregados. Algumas se locomovem livremente, mediante um ou mais flagelos
distribudos na superfcie celular, outras aderem, mediante pelos ou fmbrias, a um organismo
hospedeiro. O grupo inclui as cianobactrias, que sero comentadas mais adiante, junto com as algas.
Em condies desfavorveis, algumas bactrias formam esporos que resistem em forma latente at
que a situao mude, germinando e retomando sua atividade fisiolgica. Um exemplo interessante, na
Europa do sculo XIX, o da existncia de campos malditos, onde as ovelhas no deviam transitar,
devido ao alto risco de contrair o carbnculo ou antraz. De fato, os bacilos presentes nos animais
vitimados pela doena e enterrados nesses campos formavam esporos que, trazidos superfcie pelas
minhocas, contaminavam as pastagens.
Uma tcnica laboratorial (colorao de Gram) permite diferenciar as bactrias pela estrutura da
parede celular. Entre as Gram-positivas, cuja parede celular mais simples, encontramos gneros
como Clostridium, Bacillus, Mycobacterium (com algumas espcies que causam a tuberculose e a lepra)
e os Actinomicetes, como Streptomyces, produtora de antibiticos como a estreptomicina.
Entre as Gram-negativas, encontramos os micoplasmas, Escherichia coli, uma colonizadora do trato
digestivo de muitos organismos; Salmonella, um agente de muitas intoxicaes alimentares; as
cianobactrias fotossintticas; as espiroquetas (Treponema pallidum e Borrelia burgdorferi, causantes
da sfilis e da doena de Lyme, respectivamente); e as clamdias (responsveis por tracoma e uretrites).
Estima-se que as bactrias sejam responsveis por aproximadamente metade das doenas
humanas, porm nem todas so patognicas. As Gram-negativas so mais difceis de tratar que as
Gram-positivas, devido a uma camada adicional na parede celular que as protege e dificulta a entrada
de antibiticos. Assim como o homem, os animais e as plantas tambm so afetados por patgenos
bacterianos. O dano decorre da invaso dos tecidos do hospedeiro ou da liberao de substncias
txicas (exo e endotoxinas).
Pessoas diferentes, em lugares diferentes ou em um mesmo lugar, sejam sadias ou doentes, no
apresentam os mesmos microrganismos. Algumas comunidades microbianas desenvolvem-se na

21

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superfcie e no interior de um organismo. Denominadas microbiomas, essas comunidades so


provavelmente necessrias para o hospedeiro. Tcnicas avanadas de amplificao e sequenciamento
de DNA permitem identificar os microrganismos que se desenvolvem em diferentes localizaes, seja
a pele ou o tubo gastrointestinal.
---------------FIGURA 3.1. Bactrias, clones e intercmbio de material gentico
Por diviso binria, uma bactria gera um clone de bactrias semelhantes. O intercmbio de material gentico
entre bactrias responde a trs mecanismos, mediados por DNA livre (transformao), por plasmdeos
(conjugao) ou por bacterifagos (transduo).
A Formao de clones

Bactria
Clones

B Mecanismos de transferncia lateral ou horizontal de material gentico

Conjugao
Bactria doadora

Bactria receptora

Transduo
Bactria infectada

Bacterifago
com um fragmento
de DNA bacteriano

Infeco

Lise celular

Bactria competente

Incorporao do DNA
exgeno (Lisogenia)

Transformao natural

22

Bactria transformada

OS MICRORGANISMOS

Em relao ao meio ambiente, a participao bacteriana na reciclagem dos elementos fundamental


do ponto de vista ecolgico. Dela dependem o tratamento de resduos e de guas servidas e, tambm,
a eliminao de compostos recalcitrantes (biorremediao) e a extrao de minrios (biolixvia). A
fixao de nitrognio e a produo de toxinas pesticidas por bactrias contribuem para melhorar as
prticas agrcolas.
Devido a suas propriedades metablicas, muitas eubactrias so utilizadas na produo de
alimentos (laticnios, vinagre, picles e azeitonas) e de aditivos (vitaminas, aminocidos, gomas
emulsificantes e estabilizantes), na indstria qumica (acetona, butanol e plsticos biodegradveis) e
na indstria farmacutica (vacinas, toxinas e antibiticos). Tambm so usadas na produo de
enzimas para uso industrial e mdico (Tabela 3.2).
Nos ltimos anos comearam a ser estudados os biofilmes, comunidades microbianas protegidas
em uma matriz extracelular aderente. Tanto se fixam nos dentes, onde formam a placa dentria, como
na cortina do chuveiro, na pia da cozinha, nos tubos metlicos, nos sistemas de ar condicionado, ou
nos cateteres mdicos e equipamentos de hemodilise. Os biofilmes so extremamente resistentes
aos ataques dos agentes antimicrobianos.
AS ARQUEAS
As arqueobactrias, ou arqueas, diferem das eubactrias pela estrutura da parede celular e, tambm,
por alguns aspectos metablicos relacionados com a sntese de protenas que as aproximam dos
eucariontes. Algumas vivem em habitats inspitos, como as solfataras dos vulces ou giseres, a
temperaturas superiores a 60-800C (Islndia, Costa Rica). Outras prosperam em lagos onde a
concentrao salina altssima, como o Grande Lago Salgado (Estados Unidos) ou o Mar Morto (Israel).
Entre as arqueas existem tambm alguns gneros com vias metablicas peculiares que as tornam
dependentes de enxofre ou produtoras de metano. Devido a estas caractersticas, nos ltimos anos
tem-se acelerado a prospeco de arqueas para serem utilizadas em processos industriais que exijam
condies ambientais extremas. Contudo, estudos recentes de ecologia molecular mostram que as
arqueas no se limitam a ambientes extremos e que sua diversidade bem maior do que o imaginado
previamente.
OS PROTOCTISTAS
Os Protozorios se classificam no reino Protoctista, um grupo mal definido de seres eucariticos
unicelulares ou pluricelulares, auttrofos ou hetertrofos, de reproduo sexuada ou assexuada.
Trata-se de organismos unicelulares heterotrficos, cujo tamanho varia entre 0,002 e 1mm.
Alguns vivem livres em ambientes marinhos, de gua doce, ou simplesmente muito midos. Outros
parasitam outras espcies, nas quais causam doenas: Girdia, Amoeba, Trichomonas, Plasmodium,
Toxoplasma, Leischmania etc. De importncia fundamental para o ser humano, do ponto de vista
mdico, sua caracterizao molecular pode dar origem a testes diagnsticos e vacinas.
Classificadas junto com os protozorios no reino Protoctista, as algas so organismos uni ou
pluricelulares, autotrficos e aquticos. Situadas na base das cadeias alimentcias aquticas, as algas
cumprem um papel fundamental na biosfera por serem capazes de fixar gs carbnico e produzir
oxignio. Algumas participam na formao de solos e na fixao de nitrognio.
Apesar de no ter rgos diferenciados, as macroalgas marinhas (algas pardas, algas vermelhas e
parte das algas verdes) formam filamentos e talos que podem chegar a medir mais de trinta metros.
So utilizadas como adubo e, tambm, na alimentao humana (Porphyra ou nori e Laminaria, como
o kombu, no Oriente; cochayuyo, no Chile). Devido a sua capacidade de formar gis e emulses, os
ficocoloides extrados dessas algas (gar, carragenina, alginato) so empregados em anlises clnicas

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(preparao de meios de cultivo para cultivo de bactrias e fungos) e em vrias indstrias, tais como a
alimentcia (sorvetes, cremes, geleias etc.), a farmacutica (laxantes, cpsulas de remdios) e a
cosmtica (cremes, sabonetes, xampus, dentifrcios etc.).
---------------TABELA 3.2. As bactrias (Eubactrias e Arqueas) como agentes biolgicos
AGENTES BIOLGICOS

APLICAES
Tratamento de resduos e de guas servidas.
Produo de energia (metano).
Biorremediao, extrao de minrio.
Indstria qumica (acetona, butanol, cido lctico, cido actico).

Bactrias

Enzimas industriais.
Agricultura (rizbios, biopesticidas).
Alimentos (laticnios, vinagres, picles, azeitonas, silagem).
Indstria de alimentos (vitaminas B12 e -caroteno, aminocidos lisina e cido glutmico;
polissacardeos xantana e dextrana*).
Indstria farmacutica (enzimas de uso mdico, antibiticos, vacinas e toxinas).
(*) A dextrana tambm tem usos mdicos.

TABELA 3.3. As algas como agentes biolgicos


AGENTES BIOLGICOS

APLICAES
Tratamento de efluentes, biomonitoramento de poluio, obteno de energia.

Biomassa

Agricultura (adubo).
Produo de alimentos (alimentao humana, rao para avicultura e aquicultura).

Algas

Indstria de alimentos (aditivos, complementos nutricionais, substitutos proteicos,


espessantes e emulsionantes).
Molculas

Indstria de cosmticos (cidos graxos e outras substncias tais como ficocoloides, pigmentos,
glicerol, abrasivos finos etc.).
Indstria farmacutica (compostos biologicamente ativos, tais como toxinas, antibiticos,
antivirais e antitumorais).

TABELA 3.4. Os fungos como agentes biolgicos


AGENTES BIOLGICOS

APLICAES
Agricultura (controle biolgico de insetos e nematoides, micorrizos).
Produtos de fermentao (etanol, glicerol, cido ctrico).

Fungos

Enzimas industriais.
Biomassa (fermento de padaria, micoprotena).
Indstria de alimentos (panificao, queijaria).
Indstria de bebidas (cervejas e vinhos, destilados).
Produtos metablicos (extrato de levedura, hormnios de crescimento vegetal).
Indstria farmacutica (antibiticos, vitaminas, vacinas, esteroides).

24

OS MICRORGANISMOS

As microalgas representam um grupo extremamente diversificado de umas 25.000 espcies das quais
s um pequeno grupo est bem estudado. Este compreende aproximadamente cinquenta espcies de
microrganismos fotossintticos, tanto eucariontes (diatomceas, dinoflagelados, euglenoides e outras
algas verdes) como procariontes (cianobactrias, antigamente algas azul-esverdeadas).
A proliferao de microalgas como floraes na natureza (mars vermelhas) ou em reservatrios,
geralmente devido eutrofizao das guas, causa a morte de outros organismos, sendo muito
perigosa se estiver acompanhada pela liberao de toxinas. Porm, em alguns sistemas de tratamento
de efluentes, as microalgas so incorporadas nos tanques para remover nutrientes inorgnicos e
adicionar oxignio. Tambm so usadas como indicadores de poluio.
O metano um gs combustvel que resulta da degradao de biomassa de algas por
microrganismos anaerbios. Por outro lado, a produo de hidrognio por algas representa uma
alternativa energtica promissora.
As microalgas so aproveitadas na alimentao animal como rao para a avicultura e a aquicultura.
Algumas das substncias que elas sintetizam so includas na alimentao humana como
complementos nutricionais e substitutos proteicos; trata-se de aminocidos, cidos graxos e vitaminas
(B12, -caroteno ou provitamina A). Tambm so utilizadas na formulao de cosmticos e na indstria
farmacutica (Tabela 3.3).
OS FUNGOS
O Reino Fungi comporta mais de 100.000 espcies. Os fungos so organismos eucariticos, uni ou
pluricelulares, com uma parede celular formada por quitina. Todos eles so hetertrofos e podem se
reproduzir sexuada ou assexuadamente.
As leveduras so fungos unicelulares que se desenvolvem em lugares midos e se reproduzem por
brotamento. Pertence a esse grupo um dos microrganismos de maior importncia econmica:
Saccharomyces cerevisiae, o popular levedo de cerveja (ou, simplesmente, levedura) utilizado
tradicionalmente na preparao de alimentos e de bebidas, assim como na produo de etanol,
vitaminas e outros metablitos.
Transformada mediante tcnicas de engenharia gentica, esta levedura produz uma vacina contra
a hepatite B (Tabela 3.4). Entretanto, nem todas as leveduras so benficas; Candida albicans, um
microrganismo oportunista da flora normal humana pode, em certas condies, proliferar de maneira
anormal, tornando-se patognica.
Nos bolores e mofos, as clulas formam um emaranhado de filamentos ou hifas, denominado
miclio. Os mofos crescem rapidamente por fragmentao do miclio e se disseminam mediante
esporos; como Aspergillus niger, um produtor de cido ctrico; ou como Rhizopus, o fungo preto do
po, que se expande sobre a superfcie deste apesar dos conservantes acrescentados; ou ainda como
Aspergillus flavus, um bolor que ataca as sementes de leguminosas (amendoim, feijo, soja) e produz
uma toxina poderosa, a aflatoxina, causando graves intoxicaes.
Neste grupo tambm se encontra o Penicillium, um gnero que conta com diversas espcies, uma
das quais utilizada na indstria farmacutica, para a produo de penicilina, e outras na indstria de
alimentos, para a maturao de queijos como o Roquefort, o Gorgonzola e o Camembert.
Os cogumelos so os corpos reprodutivos de muitos fungos. Alguns so venenosos (Ammanita),
outros produzem substncia alucingena, tais como a psilobicina, utilizada por grupos nativos
mexicanos em rituais religiosos, ou a ergotamina, sintetizada quimicamente no sculo XX com o nome
de LSD (cido lisrgico). Mas tambm os h comestveis como o Agaricus ou champignon, o Shiitake e
o Pleurotus, que so cultivados e comercializados pelo homem.
Em termos ambientais, um quarto da colheita de frutas e vegetais destrudo pelos fungos; pragas
como a ferrugem do caf, o esporo do centeio e a vassoura-de-bruxa afetam gravemente a

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agricultura. Na Irlanda no sculo XIX, o Phytophtora infestans atacou a batata, destruindo a fonte
bsica de alimentao; a praga causou um milho de mortes e a emigrao forada de boa parte da
populao.
Os liquens resultam da simbiose entre um fungo e uma alga. Alguns so comestveis, supondo-se
que a Lecanora esculenta seja o man referido na Bblia. O grupo no tem sido muito explorado
economicamente, apesar de ter encontrado aplicaes como corantes (tintura de tornassol, um
indicador de pH), no tingimento de tecidos e como fixadores na indstria de perfumes. Tambm so
indicadores de poluio (biomonitoramento).
Em contrapartida, outra associao, desta vez entre um fungo filamentoso e as razes das plantas
vasculares, os micorrizos, ocupam um lugar de destaque na agricultura em solos tropicais por
facilitarem a solubilizao dos fosfatos.
OS VRUS, NA FRONTEIRA DO VIVO E DO NO VIVO
Os vrus so partculas sem nenhuma atividade metablica; atravessam os filtros de porcelana e
cristalizam. O seu tamanho varia entre 20 e 300 nanmetros (1 nm = 10-4 mm). Sendo parasitas
obrigatrios de bactrias, plantas ou animais, ao infetar uma clula viva os vrus passam a utiliz-la
para sua prpria reproduo.
Apesar de variar muito em complexidade, uma partcula viral tpica compreende um cido nucleico
(DNA ou RNA, como filamento simples ou duplo) dentro de uma capa proteica ou capsdeo e algumas
enzimas que sero liberadas dentro da clula hospedeira: DNA polimerase no caso dos poxvirus de
DNA duplo que se multiplicam no citoplasma: transcriptase reversa nos retrovrus; RNA replicase nos
vrus que se replicam sem passar por DNA. Alguns vrus que se integram no genoma da clula infectada
(bacterifagos, retrovrus) tm sido utilizados na engenharia gentica como vetores para introduzir
genes em uma clula hospedeira (Figura 3.2).
A entrada do vrus na clula depende do reconhecimento de um receptor na membrana celular do
hospedeiro, que seja especfico para o vrus e essencial para a clula. A seguir, vrios cenrios so
possveis: morte da clula infectada pelo sistema imune do hospedeiro; lise celular e disperso de
partculas virais (vrus da influenza, poliovrus); brotao e sada envelopada; permanncia latente
(herpesvrus); integrao no hospedeiro e eventual transformao das clulas em cancerosas (tumores
devidos aos vrus da hepatite B e de Epstein-Barr).
Vrias doenas humanas so causadas por vrus (poliovrus, HIV, coronavrus [responsvel pela
sndrome aguda respiratria ou SAR] etc.). A destruio de habitats naturais pelo homem e as
mudanas climticas alteram a dinmica das populaes naturais, em que a relao entre parasita e
hospedeiros est bem estabelecida. O contato dos vrus com outros hospedeiros possibilita a apario
de algumas doenas emergentes como o Ebola, que assolou recentemente vrios pases da frica
ocidental, e o Zika, introduzido recentemente no Brasil. A disperso dos vrus se v acelerada por
fatores culturais e sociais e pelo incremento do comrcio e das viagens internacionais.
Na agricultura, o combate lagarta da soja com o baculovrus evita a aplicao de 1,2 milho de
litros de inseticidas por ano nas lavouras brasileiras. Em relao ao meio ambiente, pouco se sabe do
rol dos vrus, e dos microrganismos, nos oceanos. Uma questo relevante, considerando que 1 litro de
gua de mar contm pelo menos 10 bilhes de micrbios e 100 bilhes de vrus, e que a maioria no
est caracterizada nem identificada. Estudos recentes destacam sua importncia nos ciclos
biogeoqumicos e, particularmente, na reciclagem do carbono; a morte microbiana por infeco viral
libera, na cadeia alimentar, de 370 milhes a 630 milhes de toneladas de carbono por ano.
Os prons so pequenas protenas que podem agir como agentes transmissveis de algumas doenas
raras do sistema nervoso central. Possivelmente ativam mecanismos do hospedeiro para produzir
protenas semelhantes que polimerizam, causando danos locais (Kuru, doena de Creutzfeldt-Jakob).

26

OS MICRORGANISMOS

FIGURA 3.2. Os vrus


A.

Estrutura fundamental
Envelope (s nos vrus que se reproduzem por brotao)
Capsdeo (protena)
cido nucleico (DNA ou RNA)
Enzimas virais (polimerases, transcriptase reversa)

B.

Morfologia de diferentes vrus


(Os adenovrus e o HIV parasitam clulas humanas; o bacterifago, bactrias).
HIV

Adenovrus

Bacterifago

C.

A multiplicao de um bacterifago
A infeco da bactria pelo bacterifago destri a clula (ciclo ltico). Em alguns casos, o DNA viral se integra no cromossomo,
sendo transmitido s clulas filhas; em determinadas condies, o vrus retoma sua atividade, reiniciando o ciclo ltico.

Bacterifago

Bactria
Infeco

DNA viral

O DNA viral se integra no


cromossomo bacteriano
e se transmite s
clulas-filhas
Eventualmente

Infeco

Adeso do bacterifago
parede celular e injeo
e injeo do DNA viral

CICLO LISOGNICO
DNA viral

CICLO LTICO

Lise da bactria e liberao


de novas partculas de vrus

Formao de
novos vrus

Podendo voltar
a se ativar
Multiplicao do DNA viral

Sntese de protenas virais e


destruio do cromossomo bacteriano

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AS TCNICAS MICROBIOLGICAS
Diversos tipos de tcnicas facilitam o trabalho laboratorial. A identificao de um microrganismo
demanda a observao microscpica e a utilizao de alguns mtodos especficos de colorao,
complementados por testes bioqumicos e eventualmente genticos e imunolgicos. Encontrar e
manter um microrganismo no laboratrio demanda a aplicao de tcnicas bacteriolgicas aplicveis
tambm, com algumas variaes, a fungos e algas.
Cultivar microrganismos exige, alm do desenho de um meio nutriente que satisfaa suas
necessidades metablicas, um cuidado especial com as condies de temperatura e iluminao em
que este ser incubado. Os meios nutrientes se empregam lquidos ou solidificados com gar, uma
substncia que lhes confere uma consistncia gelatinosa. Os recipientes mais comuns so tubos de
ensaio e placas circulares de vidro com tampa (placas de Petri); e, para inocular os meios, se utilizam
alas de platina e pipetas de diferentes tipos.
A grande dificuldade do laboratrio microbiolgico est em conseguir a multiplicao do
microrganismo desejado evitando as contaminaes, isto a multiplicao de outros microrganismos.
Trabalha-se em condies asspticas, o que demanda a esterilizao prvia do material de vidro,
dos meios nutrientes e dos instrumentos (alas, pipetas) que sero utilizados. E, na transferncia do
material biolgico, evita-se cuidadosamente toda contaminao com os microrganismos do ar.
Equipamentos especialmente desenhados para trabalhar sob um fluxo de ar esterilizado ajudam o
profissional. Tambm se evitam as contaminaes na hora de eliminar o material utilizado, a fim de
no liberar microrganismos prejudiciais no ambiente.
Os microrganismos so isolados a partir de amostras de solo, gua, ar ou fluidos corporais. As
linhagens obtidas se conservam como culturas puras. Microrganismos com caractersticas diferentes
so obtidos induzindo mutaes e selecionando as linhagens mutantes. Cada laboratrio mantm os
estoques microbianos necessrios, que tambm podem ser solicitados a centros especializados
(Colees de Cultura).
O nmero de microrganismos em uma amostra pode ser estimado por diversos mtodos: contagem
microscpica, contagem eletrnica, contagem em placa, turvao do meio, massa seca, contedo de
nitrognio ou medidas indiretas da atividade microbiolgica.
Em geral, as tcnicas clssicas so trabalhosas e muito demoradas para o diagnstico clnico, por
isso esto sendo substitudas por tcnicas miniaturizadas mais rpidas que identificam os
microrganismos com base em algumas reaes bioqumicas em kits padronizados. A tendncia geral
de automatizao do laboratrio microbiolgico e de utilizao de tcnicas moleculares.
A identificao de bactrias e arqueas pode ser realizada hoje por comparao do RNA ribossmico.
A centrifugao dos ribossomos em gradiente de cloreto de csio separa os componentes, RNA 5S e
RNA 23S na unidade maior e RNA 16S na menor. Modificaes na estrutura primria desta ltima
frao no afetam sua funo, de modo que, se uma pequena parte est altamente conservada, o
restante do rRNA de 16S varia entre as espcies, tendo se transformado em um elemento chave para
a classificao.
A Microbiologia Ambiental nos traz uma nova viso das populaes microbianas presentes na
natureza. Nossa ignorncia ainda enorme: o nmero de espcies que conseguimos cultivar no
laboratrio no representa mais do que 1 a 5 % da totalidade existente. Dependemos dos avanos na
rea da genmica para ampliar nosso conhecimento das comunidades microbianas do ambiente e para
identificar genes de interesse para a indstria (metagenmica).

28

OS MICRORGANISMOS

BIOSSEGURANA E BIOSSEGURIDADE
De acordo com a Organizao Mundial da Sade, o termo biossegurana abrange os princpios,
tcnicas e prticas necessrias para evitar a exposio acidental a patgenos e toxinas assim como sua
liberao acidental (Figura 3.3).
Os microrganismos so classificados segundo o risco de causarem danos aos profissionais que
trabalham com eles e coletividade. Os critrios so: a patogenicidade para o homem, a virulncia, o
modo de transmisso, a endemicidade e a existncia ou no de uma teraputica eficaz. Segundo a
Organizao Mundial da Sade, definem-se assim quatro grupos de risco:
o

Grupo de Risco (nenhum ou baixo risco individual e coletivo). Um microrganismo que


provavelmente no pode causar doena no homem ou num animal. Exemplos: Bacillus cereus,
Bacillus subtilis, Escherichia coli (algumas linhagens), Lactobacillus sp.

Grupo de Risco 2 (risco individual moderado, risco coletivo baixo). Um agente patognico que pode
causar uma doena no homem ou no animal, mas que improvvel que constitua um perigo grave
para o pessoal dos laboratrios, a comunidade, o gado ou o ambiente. A exposio a agentes
infecciosos no laboratrio pode causar uma infeco grave, mas existe um tratamento eficaz, alm
de medidas de preveno, com risco de propagao de infeco limitado. Exemplos: Salmonella,
Toxoplasma, Schistosoma mansoni, Streptococcus sp, vrus da rubola, vrus do sarampo e vrus da
hepatite B.

Grupo de Risco 3 (alto risco individual, baixo risco coletivo). Um agente patognico que causa
geralmente uma doena grave no homem ou no animal, mas que no se propaga habitualmente
de uma pessoa a outra. Existe um tratamento eficaz, bem como medidas de preveno. Exemplos:
Mycobacterium tuberculosis, Bacillus anthracis e vrus da imunodeficincia humana (HIV).

Grupo de Risco 4 (alto risco individual e coletivo). Um agente patognico que causa geralmente
uma doena grave no homem ou no animal e que se pode transmitir facilmente de uma pessoa
para outra, direta ou indiretamente. Nem sempre esto disponveis um tratamento eficaz ou
medidas de preveno. Exemplos: vrus Ebola, vrus Lassa e vrus Marburg.

A classificao anterior vlida exclusivamente para o trabalho laboratorial. A cada grupo de


microrganismos correspondem normas estritas de trabalho, que abrangem desde a arquitetura do
laboratrio e as caractersticas dos equipamentos at as precaues que devem ser tomadas pelos
profissionais e a forma como o lixo ser descartado.
O conceito de biossegurana se complementa com o de biosseguridade, isto , o conjunto de
medidas de proteo de uma instituio e dos trabalhadores necessrias para evitar a perda, o roubo,
o uso incorreto ou a liberao intencional de patgenos e toxinas (bioterrorismo). Um exemplo o
envio de carta com antraz depois do atentado das Torres Gmeas em Nova York (2001), mas existem
outros relacionados com aspectos econmicos, tais como a disseminao de pragas agrcolas do caf,
do cacau, da soja etc.
---------------FIGURA 3.3. Logotipos utilizados como indicao de risco biolgico

Biossegurana

Biosseguridade

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OS MICRORGANISMOS COMO AGENTES BIOLGICOS


A Tabela 3.5 apresenta uma lista dos principais agentes biolgicos microbianos e suas utilizaes.
----------------

TABELA 3.5. Principais destaques entre os agentes biolgicos microbianos


ARQUEOBACTRIAS

UTILIZAO

Thermus aquaticus

Isolada em uma poa do parque nacional de Yellowstone (Estados Unidos), esta bactria
produz uma enzima que copia o DNA a uma temperatura alta. Esta enzima permite
obter milhes de cpias de um fragmento de DNA em um processo automatizado que
revolucionou a Biotecnologia, chamado PCR (Polymerase Chain Reaction ou Reao em
cadeia da polimerase).

Bactrias metanognicas

Vivem em lugares onde h ausncia de oxignio, seja no tubo digestivo de alguns


animais (gado, cupins) ou nos pntanos. Estas bactrias transformam o acetato
resultante da degradao de celulose por outras bactrias em metano, um gs
combustvel.

ALGAS

UTILIZAO

Spirulina

O seu alto teor proteico, que corresponde a 60% do peso seco, lhe confere um elevado
valor nutritivo; as protenas representam aproximadamente 2% do peso seco da batata
e 6-10% do trigo. Quando da chegada dos espanhis, os astecas j preparavam umas
bolachas (tecuitlatl) com a Spirulina coletada no lago Texcoco. Na frica, no lago Tchad,
ainda hoje ela coletada e consumida como alimento. Spirulina, assim como Chlorella,
so vendidas em tabletes como complemento nutritivo.

Dunaliella

Acumula glicerol em condies de alta salinidade, com o qual consegue evitar a


desidratao. Pode crescer no Mar Morto, sendo tambm cultivada em tanques ou
lagoas, perto do Mar Vermelho, para a extrao de outros produtos metablicos
(glicerol e -caroteno).

FUNGOS

UTILIZAO

Saccharomy c es cerevisiae

Conhecido como levedo de cerveja ou levedura, utilizado na preparao de alimentos


(po, biscoitos, fermento de padaria) e de bebidas (cerveja, vinho e destilados), assim
como na produo de outras substncias de importncia industrial (etanol, vitaminas e
outros metablitos). A levedura cresce facilmente em laboratrio. Tambm pode ser
manipulada geneticamente. Nos fermentadores ou biorreatores industriais, onde se
multiplica rapidamente a partir de matrias-primas de baixo custo, ela permanece ativa
durante perodos longos e, ao concluir o processo, pode ser separada por filtrao ou
centrifugao. Com 12.000.000 de pares de bases e 6.000 genes em 16 cromossomos,
Saccharomyces cerevisiae foi, em 1997, o primeiro organismo eucaritico a ter o seu
genoma sequenciado.

Aspergillus

Algumas espcies alcanam grande importncia industrial, como A.niger, utilizada para
a produo de cido ctrico ou de enzimas (em linhagens modificadas geneticamente).

Penicillium

Algumas espcies so utilizadas na indstria farmacutica (penicilina) ou indstria de


alimentos (queijos azuis, como o Roquefort e o Gorgonzola; queijo Camembert).

30

OS MICRORGANISMOS

EUBACTRIAS

UTILIZAO

Bactrias lcticas

Os gneros Lactobacillus e Streptococcus so responsveis por vrios processos, tais


como a elaborao de queijos e de iogurtes, o envelhecimento dos vinhos, a
conservao de alimentos (sauerkraut ou repolho fermentado, silagem para o gado); a
produo de cido lctico, um aditivo utilizado na indstria de alimentos como
acidulante e estabilizante.

Bacillus thuringiensis

Este microrganismo prolifera no solo e na superfcie das plantas, sintetizando uma


toxina fatal para as larvas de insetos. Esta produzida comercialmente h mais de 40
anos, representando 90% das vendas de inseticidas biolgicos e reduzindo a
necessidade de aplicao de pesticidas qumicos nas lavouras. Nos ltimos anos, o gene
codificador da toxina tem sido transferido a plantas (algodo, milho) para que estas
sintetizem diretamente o inseticida.

Streptomyces

Alm do cheiro caracterstico da terra removida, este gnero de bactrias do solo


produz substncias antibiticas (estreptomicina, tetraciclina, eritromicina), antifngicas
(nistatina), herbicidas, antitumorais e supressoras de rejeio a transplantes.

Pseudomonas

Vrias linhagens so utilizadas na eliminao de poluentes. Algumas quebram molculas


de hidrocarbonetos, como os existentes nos acidentes de derramamento de petrleo;
outras podem remover o mercrio aqutico.

Agrobacterium tumefaciens

Agente patognico para as plantas dicotiledneas que desenvolvem um tumor ou galha


quando infectadas. Com a remoo de um gene, perde a capacidade de provocar
tumores, conservando a capacidade infecciosa, utilizada na engenharia gentica de
vegetais.

Bactrias butricas

Na indstria txtil, Clostridium butiricum libera as fibras vegetais durante a macerao


do cnhamo e do linho. Clostridium acetobutyricum utilizado na produo industrial
de acetona e butanol. Clostridium botulinum produz uma toxina poderosssima; calculase que um grama desta bastaria para matar um milho de pessoas. A ingesto de
conservas contaminadas e mal esterilizadas resulta quase sempre em um desfecho fatal.
Devido a sua ao inibitria da contrao muscular, a toxina botulnica utilizada em
concentraes muito pequenas, para reduzir as rugas e marcas de expresso durante
certo tempo (efeito cosmtico).

Escherichia coli

Descoberta em 1855, esta bactria Gram-negativa vive no trato digestivo do homem e


de outros animais. Tem forma de bastonete (0,002 mm de comprimento, 0,0008 mm de
dimetro), 1 a 4 molculas de DNA e 15.000 a 30.000 ribossomos. Flagelos e pelos
permitem que se movimente rapidamente.
Algumas linhagens so patognicas, podendo contaminar os alimentos (carne, leite,
vegetais), que devem ser cozidos adequadamente. Os seus requerimentos nutricionais
bsicos so simples. gua, sais minerais, uma fonte de nitrognio e uma fonte de
energia. Em condies adequadas, se divide a cada 20-40 minutos; tambm pode se
reproduzir de maneira sexuada (conjugao).
Devido facilidade com que ela pode ser cultivada no laboratrio, Escherichia coli tem
se tornado uma ferramenta indispensvel para estudos bioqumicos e genticos,
incluindo a Engenharia Gentica. O seu genoma compreende 4,6 milhes de pares de
bases que codificam em torno de 4.000 protenas diferentes.
A introduo de transgenes em Escherichia coli K12, uma linhagem inofensiva de
laboratrio, possibilitou os primeiros processos de produo de insulina, de interferon
e de hormnio de crescimento. Entretanto, por se tratar de uma clula procaritica,
nem sempre a melhor opo de "fbrica" para a sntese de produtos de origem animal
ou vegetal, tendo sido aos poucos substituda por outras clulas eucariticas, como a
levedura.

31

CAPTULO 4

ENZIMAS E ANTICORPOS

AS PROTENAS
Todos os organismos esto formados por gua e molculas de diversos tipos, inorgnicas e orgnicas
(Figura 4.1). Entre estas ltimas, h um grupo de macromolculas, as protenas, que participam em
numerosas atividades, cumprindo um papel fundamental para os seres vivos (Tabela 4.1). Pertencem
a este grupo as enzimas, molculas de ao cataltica, e os anticorpos, molculas que participam na
defesa do organismo.
---------------FIGURA 4.1. A composio qumica de uma bactria

ons, molculas pequenas (4%)


Fosfolipdios (2%)
DNA (1%)
Outras
molculas
(30%)

RNA (6%)
MACROMOLCULAS

Protenas (15%)

gua (70%)

Polissacardeos(2%)

TABELA 4.1. As funes das protenas no organismo


FUNO

EXEMPLOS

Componentes estruturais

Queratina do cabelo, colgeno da derme, actina e miosina das fibras musculares.

Substncias de reserva

Albumina do ovo, casena do leite.

Ao cataltica

Enzimas que controlam as reaes qumicas celulares.

Outras

Transmisso de informao (hormnios proteicos), participao nos mecanismos de


defesa (anticorpos, citocinas), transporte e armazenamento de pequenas molculas
(hemoglobina).

BIOTECNOLOGIA: ENSINO E DIVULGAO (http://bteduc.com)

ENZIMAS E ANTICORPOS

FIGURA 4.2. Aminocidos e protenas

A. Frmula dos aminocidos


AMINOCIDO 1

AMINOCIDO 2

Grupo carboxila

Grupo carboxila

Grupo amino

Grupo amino

Cadeia lateral

Cadeia lateral

B. Formao da unio peptdica

Aminocido 1

Aminocido 2

Unio peptdica

C. Estrutura de uma protena

Aminocidos

Folha pregueada
(Conformao )

Hlice
(Conformao )
hlice

Folha pregueada
ESTRUTURA PRIMRIA

ESTRUTURA SECUNDRIA

ESTRUTURA TERCIRIA

ESTRUTURA QUATERNRIA

----------------

ESTRUTURA
As protenas so macromolculas formadas por 20 aminocidos diferentes, que se distinguem por ter,
unidos ao tomo de carbono, um grupo amino (bsico), um grupo carboxila (cido) e um radical
varivel (Figura 4.2 A). A presena de um carbono assimtrico resulta em duas formas moleculares (L)
e (D) que diferem por suas propriedades pticas.
Os aminocidos que compem as protenas correspondem forma (L). A reao de condensao
entre o grupo carboxila de um aminocido e o grupo amina de outro cria uma ligao peptdica (Figura
4.2 B). A unio de vrios aminocidos forma uma cadeia peptdica que se caracteriza no s pelo
nmero e tipo de aminocidos que a compem, como pela sequncia em que estes se encontram,
denominada estrutura primria.
Ao se estabelecerem ligaes entre os grupos que formam os enlaces peptdicos, a cadeia adota
uma estrutura regular ou estrutura secundria, geralmente em forma de hlice ou de folha. As
interaes entre as cadeias laterais dos aminocidos causam o dobramento da protena, resultando
uma configurao espacial que chamada de estrutura terciria. A forma final de uma protena
depender ainda da associao entre vrios polipeptdios, no que se denomina de estrutura
quaternria (Figura 4.2 C).
Quando sintetizada dentro da clula, uma protena adotar espontaneamente a configurao

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espacial que decorre de sua estrutura primria. Fatores ambientais como o pH, a concentrao salina
ou a temperatura podem causar alteraes momentneas ou definitivas na forma da molcula.
O PROTEOMA
Uma das grandes surpresas reveladas pelos estudos do genoma humano foi encontrar um nmero
baixo de genes codificadores de protenas, inferior ao esperado quando considerada a diversidade de
protenas necessrias para o funcionamento celular. Diferentes tipos de processamento no ncleo e
modificaes das protenas no citoplasma explicam como, a partir do pequeno nmero de genes
conhecido, se formam todas as protenas necessrias.
Essas observaes chamaram a ateno sobre o proteoma, definido como o conjunto de protenas
que uma clula, um tecido ou um organismo expressam em um momento dado, sob determinadas
condies. Tambm deram origem a uma nova disciplina, a protemica.
Diferente do genoma que permanece essencialmente constante no tempo e em todas as clulas do
organismo, o proteoma abrange uma infinidade de variantes proteicas, diferentes em cada clula e a
cada momento. Publicado em 2014, o primeiro rascunho do proteoma humano identificou os produtos
correspondentes a 84% dos genes codificadores de protenas, que representam 1,5% do genoma.
As aplicaes da protemica abrangem desde os estudos estruturais para elaborar modelos
tridimensionais at a identificao das protenas associadas a uma organela, descobrindo sua funo
e sua relao com outras protenas. Tambm compreendem estudos da expresso quali e quantitativa
das protenas em duas condies, uma normal e a outra alterada por stress ou doena.
Na rea de sade, as modificaes do proteoma em clulas normais e cancerosas possibilitam a
identificao de biomarcadores para diagnstico e monitoramento dos tratamentos. Em agronomia, a
protemica pode esclarecer a inter-relao patgeno-hospedeiro nas infeces microbianas ou na
resposta das plantas aos animais herbvoros. Na rea de microbiologia possibilita o controle de
qualidade nas diferentes etapas de produo de alimentos, com nfase em aspectos de biossegurana.
AS BASES DE ALGUMAS TCNICAS LABORATORIAIS
O estudo das protenas depende do objetivo a alcanar. Se este for simplesmente a obteno de uma
protena para pesquisa ou uso comercial, as etapas a seguir envolvero sua separao, purificao e
medida da concentrao e/ou quantidade obtida. As tcnicas bioqumicas utilizadas so clssicas e
dependem dos recursos disponveis. Mas se o objetivo for a determinao das estruturas primria,
secundria e terciaria dessa protena, as tcnicas so bem mais complexas.
CROMATOGRAFIA
A cromatografia permite separar as substncias de uma mistura com fins analticos e preparativos.
Est baseada na migrao diferencial das molculas de uma mistura, colocada em uma fase mvel,
sobre um suporte estacionrio ou matriz (Figura 4.3). A separao obedece a trs tipos de mecanismos:
o Troca inica. A matriz est formada por pequenas partculas carregadas que retm as molculas de
carga contrria. Como a associao depende de fatores como o pH e a fora inica da soluo, a
modificao destes fatores permite controlar a separao.
o Filtrao em gel. A matriz consiste em partculas porosas que separam as protenas em funo de
seu tamanho, como uma peneira molecular.
o Afinidade. As partculas da matriz esto unidas por ligaes covalentes a molculas (enzimas,
anticorpos) que interagem com a protena de interesse. Para liberar a protena retida na coluna,
muda-se o pH ou a concentrao salina. Desse modo, consegue-se a protena purificada.

34

ENZIMAS E ANTICORPOS

FIGURA 4.3. Cromatografia em coluna


O processo est baseado na velocidade de migrao diferencial das molculas proteicas em uma matriz imersa
em um solvente.

Amostra

Solvente

Matriz

Sada do solvente
Tempo

Fraes coletadas

FIGURA 4.4. Eletroforese


Separao dos peptdeos de uma mistura, por migrao diferencial em um campo eltrico.

Mistura de peptdeos

Ctodo

nodo

Aplicao de um campo eltrico

Migrao e separao dos peptdeos

FIGURA 4.5. Difrao de raios X

Cristais
Raios X
Difrao dos
Raios X
Filme

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Diferentes modalidades dependem das caractersticas da fase estacionria: cromatografia em papel,


em camada delgada, cromatografia em gs, cromatografia lquida etc. Na cromatografia em coluna, a
separao das protenas de uma mistura depende da estrutura da matriz, slida e permevel, que se
encontra imersa em um solvente. A resoluo maior com a tcnica denominada HPLC (do ingls,
High-Pressure Liquid Chromatography), que separa os aminocidos de uma mistura.
ELETROFORESE
Uma tcnica analtica fundamental a eletroforese, baseada na migrao diferencial de molculas
ionizadas colocadas em um campo eltrico. Se a carga for positiva, elas migraro para o polo negativo
ou ctodo e, inversamente, se ela for negativa, a migrao ocorrer na direo do polo positivo ou
nodo (Figura 4.4). Por outro lado, molculas de menor peso molecular migram mais rapidamente que
molculas maiores.
Se uma mistura de peptdeos for colocada em um campo eltrico, eles migraro de acordo com sua
carga, forma e tamanho, formando cada um deles uma banda caracterstica que ser visualizada
mediante um corante ou uma reao qumica especfica. Observe-se que a carga de um peptdeo
resulta da soma das cargas correspondentes aos grupos amina e carboxila terminais e dos radicais dos
aminocidos que o compem, e que essa carga varia com o pH do meio.
A eletroforese permite separar os componentes de uma mistura. Existem numerosas variaes da
tcnica em funo do suporte (papel de filtro, slica-gel, membranas de acetato de celulose, gel de
agarose, amido ou poliacrilamida), da disposio da cuba (horizontal ou vertical), da direo da
migrao (unidirecional ou bidirecional) etc. Na variante SDS-PAGE (do ingls SDS-Polyacrilamide Gel
Electrophoresis), por exemplo, as protenas desnaturalizadas com dodecilsulfato de sdio (SDS)
migram em um gel de poliacrilamida.
OUTRAS TCNICAS
Utilizando mtodos de ionizao adaptados s molculas biolgicas como o MALDI (do ingls, Matrix
Assisted Laser Desorption/Ionization), a espectrometria de massa se tornou nos ltimos anos uma
ferramenta indispensvel na identificao de protenas, por comparao da massa molecular com
outras de um banco de dados. Tambm fornece uma anlise estrutural da molcula, indicando a
sequncia de aminocidos.
A espectrometria de massa permite estudar o conjunto de protenas de um organismo (proteoma)
e dissecar as interaes das protenas com outras molculas. Por ser um mtodo automatizado e
rpido, tem alcanado mltiplas aplicaes em farmacologia e diagnstico.
Os mtodos mais adequados para determinar a estrutura tridimensional das protenas so a
ressonncia magntica nuclear (NMR) e a cristalografia de raios X. O primeiro revela a estrutura
atmica tridimensional de uma macromolcula em uma amostra em soluo, aplicando um campo
magntico e interpretando o espectro resultante. O segundo fornece uma imagem digital
tridimensional da molcula, baseada na difrao dos raios X ao atravessar um cristal (Figura 4.5).
A bioinformtica uma ferramenta fundamental para a modelagem molecular e a interpretao
dos dados. Existem hoje bases de dados de sequncias de protenas de diferentes organismos que
permitem a identificao de molculas e a comparao de sequncias similares.

36

ENZIMAS E ANTICORPOS

AS ENZIMAS
A CATLISE ENZIMTICA
As reaes qumicas que ocorrem nos seres vivos dependem da atividade cataltica de um tipo de
protenas, as enzimas. Estas molculas agem diminuindo a energia de ativao necessria de uma
reao qumica, sendo capazes de promov-las e aceler-las, sem ser alteradas ou destrudas.
A molcula de enzima reconhece um substrato especfico (S), formando com ele um complexo
molecular ou estado de transio (SE). O encaixe no stio ativo da molcula facilita a transformao do
substrato no(s) produto(s) da reao (P). A enzima recuperada no fim da reao, podendo atuar
inmeras vezes (Figura 4.6). A reao pode ser representada como a seguir:

S+E

SE

P+E

A primeira caracterstica das enzimas a especificidade; uma enzima como a lactase, que opera sobre
a lactose, no agir sobre a sacarose; duas enzimas que hidrolisem o amido podero faz-lo cortando
a molcula de maneira diferente, como a -amilase e a -amilase. A segunda que, em funo de sua
origem biolgica, as enzimas so biodegradveis e agem em condies brandas de temperatura e pH.
A ao enzimtica depende do pH, da temperatura, da presena de cofatores inorgnicos (zinco,
ferro, cobre) e/ou orgnicos (coenzimas, muitas das quais so vitaminas). Os metais pesados alteram
a estrutura molecular da enzima de maneira irreversvel, impedindo sua ao cataltica (desnaturao).
Uma inibio da atividade enzimtica ocorre quando molculas muito parecidas com o substrato
competem com este para ocupar o stio ativo da enzima (inibio competitiva), ou quando outras
molculas se ligam a determinadas partes da enzima, alterando a estrutura espacial e dificultando o
encaixe com o substrato (inibio no competitiva).
OS DIVERSOS TIPOS DE ENZIMAS
Uma forma de classificar as enzimas pelo tipo de reao que catalisam, acrescentando o sufixo ase
ao nome do substrato que transformado: protease, lactase, amilase, lipase, celulase. Tambm se
pode adicionar ase ao nome da reao catalisada: hidrolase, oxirredutase. Quando combinadas as
duas regras anteriores, mencionam-se o nome do substrato e da reao catalisada adicionando ase
como, por exemplo, em DNA-polimerase. Porm, algumas enzimas, como a renina ou a trombina,
conservam seus nomes tradicionais (Tabela 4.2).
IMPORTNCIA ECONMICA DAS ENZIMAS
As enzimas apresentam numerosas vantagens quando utilizadas como agentes biolgicos em
processos tecnolgicos: especificidade, operao em condies facilmente controlveis e
biodegradabilidade. De um modo geral, os tratamentos enzimticos diminuem a carga poluidora dos
efluentes industriais.
O mercado se distribui fundamentalmente entre as proteases (59%), as carboidrases (28%) e as
lipases (3%), trs grandes conjuntos de enzimas que so utilizadas por diversas indstrias; os 10%
restantes do mercado correspondem s enzimas analticas e farmacuticas (Tabela 4.3).
Nos sabes lava-roupas, as enzimas prometem ao consumidor roupas limpas e com aparncia de
novas. Um exrcito constitudo por proteases, amilases e lipases digere as manchas difceis (sangue,
leite, molho de tomate, capim, chocolate, batom etc.), enquanto que as celulases removem as
microfibrilas de celulose das roupas.

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No sendo mais necessrio esfregar as manchas, a limpeza se realiza com pouco esforo e sem
desgaste do tecido; como estas molculas trabalham a temperaturas baixas, o consumo de energia
menor. Com mais uma vantagem para o fabricante: as enzimas no representam mais que uma frao
muito pequena do sabo (0,4-0,8%), correspondente a 1% do seu custo. Em 1988, a empresa
Novozymes introduziu no mercado de detergentes a primeira enzima degradadora de lipdios
(Lipolase), obtida por engenharia gentica.
As enzimas so empregadas tambm no acabamento de roupas. Para conseguir o aspecto usado,
os jeans eram lavados com pedras (stone washed), um processo que tinha o inconveniente de causar
a abraso da maquinaria e o desgaste do tecido. Nos ltimos anos, as pedras foram substitudas por
celulases, com resultados satisfatrios.
Os curtumes, em vez de excrementos de cachorro ou de pombo, se valem hoje de enzimas
pancreticas para amaciar e desengordurar as peles.
Na indstria de alimentos e bebidas, as enzimas participam na produo de adoantes, de po,
biscoitos e bolachas e de queijos. Na extrao de sucos de frutas, as pectinases aumentam
substancialmente o rendimento do processo, ao liberar o suco retido na pectina das paredes celulares
vegetais. Tambm facilitam a clarificao de vinhos e cervejas.
---------------FIGURA 4.6. O mecanismo da atividade enzimtica
A. O modelo chave-fechadura

Substrato

Produtos

Enzima

Complexo enzima-substrato

Enzima

B. A enzima diminui a energia de ativao

Reao sem enzima

Reagente

Reao
com enzima

Energia de ativao
(sem a enzima)

Energia de ativao
(com a enzima)

Nvel inicial de energia

Produtos
Nvel final de energia

38

ENZIMAS E ANTICORPOS

As enzimas so utilizadas em desodorantes e artigos para a higiene bucal. Em dermatologia e


cosmtica, algumas das aplicaes mais frequentes esto no combate ao envelhecimento (proteases,
lipases), no tratamento de acne e de caspa, no desbridamento e limpeza de ferimentos infetados e na
destruio de tecidos necrosados.
Como medicamentos, as enzimas so utilizadas em vrios contextos, especialmente em
quimioterapia e nas terapias trombolticas. E muitos entre os mais corriqueiros testes de diagnstico
dependem de reagentes enzimticos. As enzimas permitem a resoluo de misturas de molculas
racmicas, nas que h duas formas isomricas, tipo mo direita e mo esquerda, com diferente
atividade biolgica. Desse modo, podero ser evitados problemas como o da talidomida, um
medicamento que causou o nascimento de numerosos bebs com deformaes congnitas, na dcada
de 1960. A tragdia teria sido consequncia da presena no produto comercial da forma molecular
tipo mo direita, de ao teratognica, junto ao tipo mo esquerda, de ao calmante.
Atualmente, esto sendo estudados mtodos enzimticos para eliminar os prons responsveis pela
denominada doena da vaca louca. Tambm se cogita a utilizao de enzimas para limpar reas
contaminadas com agentes qumicos como o gs sarin.
--------------TABELA 4.2. A classificao internacional das enzimas
CLASSE

TIPO DE REAO CATALISADA

EXEMPLOS

Oxirredutases

Reaes onde se transferem eltrons.

Desidrogenases, oxidases.

Transferases

Reaes onde se transferem grupos qumicos.

Transaminases, fosforilases.

Hidrolases

Reaes de hidrlise, isto , de transferncia de


grupos funcionais para a gua.

Proteases, carboidrases, peptidases,


lipases.

Liases

Adio de grupos a duplas ligaes ou formao de


duplas ligaes por eliminao de grupos.

Decarboxilases (renina, trombina).

Isomerases

Produo de ismeros por transferncia de grupos


dentro de molculas.

Isomerases, mutases.

Ligases

Formao de ligaes C-C, C-S, C-O e C-N por


reaes de condensao.

Sintetases.

TABELA 4.3. As enzimas como agentes biolgicos


AGENTES BIOLGICOS

APLICAES
Indstria de alimentos e bebidas (clarificao de vinhos e sucos de frutas, substituio da
maltagem pelo tratamento do amido na elaborao de cervejas, fabricao de po, biscoitos e
bolachas, produo de adoantes, fabricao de laticnios, suplementao de raes animais).
Produtos de limpeza (detergentes e lava-roupas para a remoo de manchas difceis, produtos
para limpar dentaduras e lentes de contato).
Indstria txtil (desengomado de tecidos, acabamento de jeans).

ENZIMAS

Curtumes (amaciamento de couros).


Indstrias de papel e celulose (branqueamento de polpa de celulose).
Cosmtica (produtos de higiene bucal, depilatrios, tratamento da acne e da caspa,
cosmocuticos em geral).
Indstria farmacutica (reagentes para uso em anlises clnicas, nucleases para a manipulao
gnica, bioconverses).
Tratamentos mdicos (combate de inflamaes, edemas e leses; dissolventes de cogulos
sanguneos; agentes teraputicos em transtornos digestivos).

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OS ANTICORPOS
Assim como os animais vertebrados, os invertebrados e as plantas devem se proteger do ataque de
parasitas (vrus e bactrias) e da proliferao de clulas estranhas ou aberrantes. Tambm devem
reparar rgos e tecidos de modo a conservar sua integridade. Estudos recentes indicariam que todos
os seres vivos apresentam algum tipo de resposta imune inata e adquirida.
Dentro da estratgia de defesa de um vertebrado, os anticorpos so protenas fundamentais no
reconhecimento do eu e na eliminao do no eu (antgeno). Uma parte importante da resposta
imune envolve a produo de anticorpos que reconhecem o antgeno, desencadeando os mecanismos
de destruio adequados.
A REAO ANTGENO- ANTICORPO
Os anticorpos so protenas globulares (PM 150.000 - 200.000) que contm um nmero pequeno de
grupos carboidrato presentes no soro e em outros fluidos dos vertebrados. Sua produo induzida
quando o sistema linfoide do indivduo entra em contato com um antgeno (Ig = imunoglobulinas).
Existem diferentes tipos de imunoglobulinas que cumprem funes diferentes no organismo, mas,
devido a sua importncia como agentes biolgicos de importncia para as biotecnologias, neste texto
nos referiremos aos anticorpos contidos na frao proteica do soro sanguneo caracterizada por
eletroforese como -globulina.
A molcula de IgG formada por duas cadeias polipeptdicas leves e duas pesadas em forma de Y,
ao qual se associa um pequeno nmero de grupos carboidrato. Uma parte da molcula constante;
as regies variveis localizadas nas extremidades dos braos do Y respondem pelo reconhecimento do
antgeno (Figura 4.7).
Em condies experimentais de laboratrio, essa reao antgeno-anticorpo ocorre quando os
reagentes se encontram em meio lquido e nas concentraes adequadas, sendo visualizada como uma
precipitao, se os antgenos estiverem dissolvidos em um meio lquido ou em um gel (poliacrilamida)
ou uma aglutinao, se os antgenos estiverem localizados sobre partculas (hemcias ou bactrias).
A unio antgeno-anticorpo ocorre quando um anticorpo encontra no antgeno uma forma
complementar, geralmente parte de uma molcula livre ou ancorada na membrana celular. Um
antgeno pode ter vrias destas formas (eptopos ou determinantes antignicos) e ser reconhecido por
anticorpos diferentes (Figura 4.8).
---------------FIGURA 4.7. A estrutura da molcula de anticorpo (IgG)

Cadeia leve

Cadeia pesada

Regio constante
Regio varivel

40

Stio de ligao com o antgeno

ENZIMAS E ANTICORPOS

A PRODUO DE ANTICORPOS NO ORGANISMO


As clulas responsveis pela produo de anticorpos so os linfcitos B, que se formam na medula
ssea. Depois de um processo de diferenciao que envolve uma srie de rearranjos genticos, cada
linfcito pode reconhecer um nico eptopo (Figura 4.9).
Ao encontrar o eptopo especfico, o linfcito B prolifera, originando um clone de clulas secretoras
de anticorpos. Uma vez eliminado o antgeno, algumas clulas desse clone permanecero no
organismo como clulas-memria. Em um contato posterior com o mesmo eptopo, as clulasmemria daro incio resposta imune, que ser mais rpida e mais intensa que a primeira.
Apesar de cada linfcito ser capaz de reconhecer um nico eptopo, todos os linfcitos podem
reconhecer aproximadamente 108 eptopos diferentes, o que explica a eficincia da resposta imune.
---------------FIGURA 4.8. Os anticorpos e o reconhecimento do antgeno
Observe-se que, ao compartilhar estruturas (determinantes antignicos ou eptopos), alguns antgenos podem
ser reconhecidos por um mesmo anticorpo, dando origem a uma reao cruzada.

Antgeno 1

Antgeno 2

Anticorpos

Antgeno 3

Anticorpos

Antgeno 4

Anticorpos

Anticorpos

FIGURA 4.9. O encontro do linfcito B e do antgeno, e a seleo clonal

Antgeno
Linfcitos B
de diferente especificidade

Seleo do linfcito especfico

Proliferao celular e secreo do anticorpo correspondente

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A PRODUO DE ANTICORPOS NO LABORATRIO


Os anticorpos ocupam um lugar de destaque nos testes de diagnstico clnico, por reunir duas
propriedades que os transformam em uma ferramenta ideal: especificidade e diversidade.
A injeo de animais (ratos, ovelhas, coelhos) com um antgeno induz em pouco tempo a produo
de anticorpos especficos que podem ser separados do soro sanguneo do animal.
---------------FIGURA 4.10. A produo de anticorpos no laboratrio
. Obteno de anticorpos policlonais

B. Obteno de anticorpos monoclonais

Injeo de uma
mistura de molculas

Linfcitos B

Clulas de mieloma

Hibridomas

A: A produo de anticorpos policlonais.


Recolhe-se o soro de um animal imunizado
contra uma mistura de molculas entre as quais
est a molcula X. No soro se encontraro
misturados
anticorpos
de
diferente
especificidade, um dos quais reconhece X.

B: A produo de anticorpos monoclonais.


Injeta-se em um animal a mesma mistura de
molculas; dias mais tarde, extrai-se o bao do
animal e fusionam-se os linfcitos B (alguns dos
quais reconhecem a molcula X) com clulas de
mieloma. Os hibridomas so separados,
cultivados e testados para identificar os que
produzem anticorpos contra X.

42

Cada hibridoma
origina um clone

Cada clone origina um


nico tipo de anticorpo

ENZIMAS E ANTICORPOS

FIGURA 4.11. Os ensaios imunolgicos


A. Associao dos anticorpos com molculas fluorescentes
O anticorpo marcado pode reconhecer diretamente o antgeno (reao direta) ou reconhecer o anticorpo unido ao
antgeno (reao indireta).

REAO DE IMUNOFLUORESCNCIA DIRETA

Antgeno

Anticorpo especfico do antgeno,


associado a uma molcula fluorescente

REAO DE IMUNOFLUORESCNCIA INDIRETA

Antgeno

Anticorpo
especfico
do antgeno

Anticorpo especfico para a frao


constante dos anticorpos, associado
a uma molcula fluorescente

B. Associao dos anticorpos com enzimas


O antgeno pode ser reconhecido por um anticorpo associado a uma enzima que reage com o seu substrato, formando um
produto colorido (reao direta). Tambm pode ser reconhecido por um anticorpo especfico, e este por um anticorpo que
reconhece a frao constante do anticorpo. O segundo anticorpo est associado a uma enzima que, ao reagir com o seu
substrato especfico, forma um produto colorido (reao indireta).
REAO IMUNOENZIMTICA DIRETA
Substrato especfico
da enzima

Antgeno

Anticorpo especfico
do antgeno, associado enzima

Formao de um produto
colorido

REAO IMUNOENZIMTICA INDIRETA


Substrato especfico
da enzima

Antgeno

Anticorpo
especfico
do antgeno

Anticorpo especfico para a


frao constante dos anticorpos,
associado enzima

Formao de um produto
colorido

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Se o antgeno utilizado possuir vrios eptopos, no soro extrado se encontrar uma mistura de
anticorpos, chamados policlonais, resultantes da ativao de vrios clones de linfcitos B, cada um
dos quais reconhece um dos eptopos do antgeno. Observe-se que, alm dos anticorpos especficos,
o soro tambm ter anticorpos contra eventuais impurezas do antgeno, e anticorpos contra outros
antgenos aos que o animal esteve exposto anteriormente. Em consequncia, a purificao de um soro
ser um processo longo e complexo a ser repetido a cada extrao de sangue do animal. Contudo,
reagentes de laboratrio deste tipo foram utilizados normalmente at a dcada de 1980.
No possvel cultivar separadamente os linfcitos porque sobrevivem pouco tempo in vitro. A
obteno de clones que sintetizem anticorpos especficos contra um nico eptopo (monoclonais) s
se tornou possvel com o desenvolvimento da tecnologia de hibridomas (G. Kohler e C. Milstein, 1975).
Um hibridoma resulta da fuso entre um linfcito B e uma clula cancerosa de mieloma. Reunindo
as propriedades de ambas as clulas, cada hibridoma capaz de sintetizar um nico tipo de anticorpo
(monoclonal) e de se multiplicar indefinidamente no laboratrio, seja em cultivo de tecidos, seja na
cavidade do peritoneu de um animal hospedeiro (Figura 4.10).
A UTILIZAO DOS ANTICORPOS
Os anticorpos monoclonais encontraram imediatamente aplicaes, substituindo praticamente os
anticorpos policlonais, tanto na purificao de biomolculas e clulas como nos testes de diagnstico
clnico ou ambiental ou no controle de qualidade dos alimentos.
Anticorpos especficos fixados nas partculas de uma coluna de afinidade permitem separar
molculas de uma mistura que circule por ela. Outra utilizao extremamente engenhosa est na
separao de populaes celulares em um aparelho denominado cell sorter. As clulas so marcadas
com anticorpos ligados a uma molcula fluorescente; ao passar atravs de raios laser, adquirem cargas
eltricas, sendo separadas mediante uma placa defletora do equipamento.
A visualizao da reao entre o antgeno e o anticorpo se v facilitada quando o anticorpo recebe
alguma marcao direta, fluorescente ou radiativa, ou indireta, por associao com uma enzima que,
em presena do substrato correspondente, forma um produto colorido. No Western blotting, por
exemplo, um anticorpo marcado reconhece a presena de uma protena determinada em uma
amostra, aps eletroforese e transferncia a uma membrana de nitrocelulose.
Associados a uma molcula radiativa, os anticorpos so utilizados na dosagem de substncias
presentes nos fluidos corporais, sendo quantificada a radioatividade por exposio de uma placa
sensvel. Em cortes histolgicos, o antgeno localizado pelos anticorpos acoplados a uma molcula
fluorescente que possa ser identificada microscopicamente (Figura 4.11).
A obteno de anticorpos contra a frao constante da molcula de anticorpos humanos
representa um avano considervel na produo de reagentes para o diagnstico clnico. Nos ensaios
imunoenzimticos como o teste ELISA (do ingls, Enzyme-linked Immunosorbent Assay), que detecta
anticorpos especficos no soro humano e tem numerosas aplicaes em diagnstico, utilizam-se os
anticorpos acoplados a uma enzima que reage com o seu substrato, formando um produto colorido
(Figura 4.11).
A utilizao de anticorpos monoclonais com fins teraputicos demorou muito mais que o esperado.
Sendo produzidos por clulas de camundongo ou de rato, eles so reconhecidos como estranhos
quando injetados no homem, formando-se complexos imunes que lesionam gravemente os rins.
A fim de evitar essas reaes, comearam a ser elaborados anticorpos monoclonais quimricos (33%
de protena animal) e humanizados (10% de protena animal). Estes conservam parte das sequncias
animais, especialmente nas partes que reconhecem o antgeno, sendo o restante da molcula
substitudo por sequncias humanas. A obteno de anticorpos monoclonais humanos mediante
tcnicas de engenharia gentica abre novos caminhos para o diagnstico e o tratamento de doenas
(Tabela 4.4).

44

ENZIMAS E ANTICORPOS

TABELA 4.4. Os anticorpos como agentes biolgicos


AGENTES BIOLGICOS

APLICAES
Purificao de molculas.
Reagentes de laboratrio.

Anticorpos

Reagentes para diagnstico.


Imunoterapias.

45

CAPTULO 5

OS CIDOS NUCLEICOS

OS CIDOS NUCLEICOS

Embora descobertos em 1869, por F. Miescher, no pus das bandagens de ferimentos, o papel dos
cidos nucleicos (DNA e RNA) na hereditariedade e no controle da atividade celular comeou a ser
esclarecido apenas em meados do sculo XX.
O cido desoxirribonucleico (DNA) carrega em sua estrutura as instrues necessrias para a
construo de um organismo, direcionando o desenvolvimento de suas caractersticas bioqumicas,
fisiolgicas, anatmicas e, inclusive, algumas das comportamentais. Nos cromossomos o DNA se
encontra associado a diversas protenas de importante ao regulatria. O cido ribonucleico (RNA)
pode ser encontrado tanto no ncleo como no citoplasma.
As clulas procariticas contm um cromossomo circular de DNA e uma ou duas molculas
adicionais de DNA extracromossmico, denominadas plasmdeos. Nas clulas eucariticas, os
cromossomos esto formados por molculas lineares de DNA. O DNA est localizado principalmente
dentro do ncleo celular, mas h tambm DNA em algumas organelas, como os cloroplastos e as
mitocndrias.
Do ponto de vista qumico, os cidos nucleicos (cido ribonucleico e desoxirribonucleico) so
macromolculas formadas por unidades chamadas nucleotdeos, unidos por ligaes qumicas
covalentes (Figura 5.1). Um nucleotdeo resulta da associao de trs tipos de elementos: uma
molcula de cido fosfrico, um acar de cinco carbonos (ribose ou desoxirribose) e uma base cclica
nitrogenada: adenina, citosina, guanina, timina ou uracila. Da unio dos nucleotdeos entre as
extremidades 5' e 3', formam-se as cadeias de polinucleotdeos.
A DUPLA HLICE
J na dcada de 1940, vrios trabalhos indicavam que o material responsvel pela hereditariedade era
o DNA, mas no se entendia como at 1953, quando J. D. Watson e F. Crick formularam um modelo
da estrutura tridimensional do DNA que, segundo suas prprias palavras, apresentava considervel
interesse biolgico.
BIOTECNOLOGIA: ENSINO E DIVULGAO (http://bteduc.com)

OS CIDOS NUCLEICOS

No modelo de Watson e Crick, duas cadeias de nucleotdeos formam uma figura parecida com uma
escada de corda torcida, a dupla hlice. Nessa escada, o cido fosfrico e o acar so as partes
verticais (corrimos) e as bases nitrogenadas so os degraus (Figura 5.1). As cadeias so antiparalelas,
isto , se uma corre na direo 5' 3' a outra corre na direo 3' 5. Ambas as cadeias esto unidas
entre si por pontes de hidrognio entre as bases, sendo que as ligaes ocorrem sempre entre adenina
e timina (2 pontes) e entre citosina e guanina (3 pontes).
De acordo com o modelo, quando em um filamento a sequncia de bases AGTACG, no outro
filamento ela ser TCATGC. Como as sequncias so complementares, cada filamento pode servir
como molde para a sntese de uma nova molcula. E, no momento da diviso celular, cada clula-filha
poder receber uma molcula semelhante da clula-me (Figura 5.2).
O CDIGO GENTICO
O funcionamento de uma clula depende, fundamentalmente, de dois tipos de molculas: os cidos
nucleicos e as protenas. Ambos esto relacionados, porque segmentos de DNA (genes) codificam a
estrutura primria de peptdeo. O cdigo simples: a cada trinca de bases corresponde um
aminocido.
---------------FIGURA 5.1. Composio qumica dos cidos nucleicos
Observe-se a posio dos grupos 3 e 5 no acar

O FOSFATO

cido fosfrico

on fosfato

Tambm representado como

UM DESOXIRRIBONUCLEOTD
O ACAR
Tambm representado como

na ribose
na desoxirribose
AS BASES
Purinas: adenina (A), guanina (G)

Ao carbono 1 da pentose

Pirimidinas: citosina (C), timina (T) e uracila (U)

Ao carbono 1 da pentose

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FIGURA 5.2. A molcula de DNA


Na molcula de DNA, o pareamento das bases ocorre sempre entre uma purina e uma pirimidina: adenina e
timina ou uracila; guanina e citosina. Na duplicao, a sntese de duas molculas semelhantes permite que cada
clula receba uma cpia do material gentico, com as instrues necessrias para a construo e funcionamento
do indivduo. Observe-se que o processo de duplicao envolve numerosas enzimas, sendo bem mais complexo
do que est representado.
A DUPLA-HLICE DE DNA
Extremidade 3

Nucleotdeo

Nucleotdeo

Extremidade 5

A DUPLICAO DO DNA

TABELA 5.1: O cdigo gentico


Abreviaturas: Asp = cido Asprtico; Glu = cido Glutmico; Ala = Alanina; Arg = Arginina; Asn = Asparagina; Cys = Cistena;
Phe = Fenilalanina; Gly = Glicina; Gln = Glutamina; His = Histidina; Ile = Isoleucina; Leu = Leucina; Lys = Lisina; Met = Metionina;
Pro = Prolina; Ser = Serina; Tyr = Tirosina; Thr = Treonina; Trp = Triptfano; Val = Valina.

PRIMEIRA BASE
URACILA (U)

CITOSINA (C)

ADENINA (A)

GUANINA (G)

48

URACILA (U)
Phe
Phe
Leu
Leu
Leu
Leu
Leu
Leu
Ile
Ile
Ile
Met
Val
Val
Val
Val

SEGUNDA BASE
CITOSINA (C)
ADENINA (A)
Ser
Tyr
Ser
Tyr
Ser
Stop
Ser
Stop
Pro
His
Pro
His
Pro
Gln
Pro
Gln
Thr
Asn
Thr
Asn
Thr
Lys
Thr
Lys
Ala
Asp
Ala
Asp
Ala
Glu
Ala
Glu

GUANINA (G)
Cys
Cys
Stop
Trp
Arg
Arg
Arg
Arg
Ser
Ser
Arg
Arg
Gly
Gly
Gly
Gly

TERCEIRA BASE
(U)
(C)
(A)
(G)
(U)
(C)
(A)
(G)
(U)
(C)
(A)
(G)
(U)
(C)
(A)
(G)

OS CIDOS NUCLEICOS

A tabela 5.1 mostra quais aminocidos correspondem s diferentes trincas de bases ou cdons de
mRNA. Alguns so codificados por uma nica trinca, como o triptfano (UGG) ou a metionina (AUG);
outros admitem vrios cdons que geram sinonmia como, por exemplo, a prolina (CCU, CCC, CCA,
CCG). O incio da sequncia sinalizado por AUG, o cdon correspondente a metionina, sendo este
aminocido removido posteriormente; o fim da sequncia sinalizado por UAA, UAG ou UGA, trs
cdons que significam stop.
Mudanas na sequncia de bases do DNA podem ter como consequncia a substituio de um
aminocido por outro. No exemplo da figura 5.3, se GUG for substitudo por CGU, no peptdeo
correspondente a valina ser substituda por leucina. Mas, em funo da sinonmia do cdigo, se a
trinca GUG for substituda por GUA ou GUC, o aminocido codificado continuar sendo a valina. Perdas
ou adies de uma base modificam o resto da sequncia do peptdeo.
A frequncia com que ocorrem estas pequenas mudanas aumenta em presena de alguns agentes
qumicos e fsicos como a luz ultravioleta e os raios X.
A EXPRESSO GNICA
O FLUXO DA INFORMAO GENTICA
A informao codificada no DNA transcrita em uma molcula mensageira que a leva at os
ribossomos onde, aps a traduo da linguagem dos cidos nucleicos linguagem das protenas, ser
montado o peptdeo correspondente. Deste modo, se estabelece na clula um fluxo da informao
gentica que segue em uma direo nica: do DNA ao RNA, do RNA ao peptdeo (Figura 5.3).
---------------FIGURA 5.3. O fluxo da informao gentica

DNA

Filamento codificador
Filamento molde

TRANSCRIO E PROCESSAMENTO

r RNA

mRNA

tRNA + aminocidos

Ribossomo
TRADUO
Transporta os aminocidos
e os coloca no lugar adequado

Onde ocorre a sntese

Peptdeo

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Uma exceo a esta regra a dos retrovrus, cujo material hereditrio RNA e que contam com uma
enzima (transcriptase reversa) que lhes permite transcrever a informao no sentido RNADNA.
Na sntese de protenas intervm, basicamente, um RNA codificador (RNA mensageiro ou mRNA) e
dois RNAs no codificadores, o RNA ribossmico (rRNA) e o RNA de transferncia (tRNA).
As clulas procariticas e eucariticas apresentam algumas diferenas em relao s etapas da
sntese de protenas e aos mecanismos de regulao correspondentes (Figura 5.3). No entanto, em
ambos os tipos de organismos, a informao gentica codificada no DNA transcrita no mRNA e
traduzida no ribossomo com a participao dos tRNAs. O produto final um peptdeo.
CLULAS PROCARITICAS
Uma bactria pode contar com aproximadamente 2.500 genes; nem todos funcionando
simultaneamente. Se houver lactose no meio (e faltar glicose), as bactrias sintetizaro aquelas
enzimas que possibilitem sua utilizao. E se faltar o aminocido triptfano no meio, produziro os
vrios tipos de enzimas necessrias para sintetiz-lo.
---------------FIGURA 5.4. A organizao e regulao dos genes nas clulas procariticas
O funcionamento do peron depende da funo exercida pelos genes (degradao ou sntese). Por isso, a presena de lactose
induz a transcrio do peron lac, sendo sintetizadas vrias enzimas necessrias para degrad-la; em ausncia de lactose, o
peron deixa de funcionar. J no peron Trp, a presena de triptfano reprime a transcrio das enzimas necessrias para
sintetizar esse aminocido.
peron
Gene
regulador

Gene
promotor

Gene
operador

Genes estruturais

Gene 1

Gene 2

Gene 3

Sequncia transcrita
Fim da transcrio

Em alguns perons, o produto do gene regulador bloqueia a entrada


da RNA-polimerase no operador; em outros a desbloqueia

FIGURA 5.5. A organizao e regulao dos genes nas clulas eucariticas


As sequncias sinalizadoras UTR no so traduzidas.
Gene
Sequncias reguladoras
promotoras da transcrio
UTR

Sequncias reguladoras
finalizadoras da transcrio
UTR

DNA
Unidade de transcrio
Inclui as sequncias iniciais e finais, os xons e os ntrons
Incio da transcrio

50

Fim da transcrio

OS CIDOS NUCLEICOS

Isso se v facilitado pela agrupao dos genes correspondentes em baterias (perons), que so ligadas
ou desligadas em conjunto (Figura 5.4), permitindo que a clula se adapte rapidamente e com
economia de recursos s condies ambientais.
O processo de ligar e desligar envolve trs regies anteriores sequncia codificadora: o
promotor, o operador e o regulador. Para iniciar a sntese do mensageiro, a enzima RNA-polimerase
deve encaixar no promotor, de onde comear a se deslocar ao longo do gene. O deslocamento
depende de protenas sintetizadas pelo gene regulador, que agem no operador de modo a abrir ou
bloquear a passagem. Este sistema regula a induo ou represso da transcrio da sequncia
codificadora.
Uma bactria pode contar com aproximadamente 2.500 genes; nem todos funcionando
simultaneamente. Se houver lactose no meio (e faltar glicose), as bactrias sintetizaro aquelas
enzimas que possibilitem sua utilizao. E se faltar o aminocido triptfano no meio, produziro os
vrios tipos de enzimas necessrias para sintetiz-lo. Isto se v facilitado pela agrupao dos genes
correspondentes em baterias (perons), que so ligadas ou desligadas em conjunto (Figura 5.4),
permitindo que a clula se adapte rapidamente e com economia de recursos s condies ambientais.
Na clula procaritica, alm dos genes funcionarem em bloco, a sntese proteica comea quando o
mRNA est ainda sendo transcrito, de maneira que a transcrio e a traduo so simultneas. Uma
sequncia especfica que no traduzida indica o stio de unio ao ribossomo.
CLULAS EUCARITICAS
As bactrias no so as nicas que ligam e desligam os seus genes, mas, salvo em nematdeos, no
foram achados perons nas clulas eucariticas; os genes responsveis por uma sequncia de reaes
metablicas se encontram dispersos em um ou em vrios cromossomos.
O controle da transcrio comea na compactao do cromossomo em redor das histonas e na
metilao de algumas bases, podendo dificultar o acesso da maquinaria de transcrio ao DNA. Esta
inclui fatores de ativao, fatores de transcrio e protenas reguladoras, algumas das quais dependem
de outras sequncias, estimuladoras e inibidoras, distantes do gene em at vrios milhares de bases
(Figura 5.5). Fatores externos influenciam a expresso gnica nas clulas somticas. No entanto,
estudos recentes indicam que esses efeitos epigenticos podem gerar alteraes nos gametas, sendo
transmitidos s seguintes geraes.
A TRANSCRIO
Ao reconhecer a presena dos fatores e protenas reguladoras na regio anterior ao gene, a RNApolimerase encaixa-se nas sequncias promotoras da transcrio. Associada a outros fatores
adicionais, a enzima se desloca abrindo a dupla hlice e transcrevendo a sequncia codificadora de um
ou outro filamento no RNA. A enzima avana na direo 5- 3, sendo que vrias molculas de RNApolimerase podem estar transcrevendo o mesmo gene simultaneamente em algo parecido com uma
fila indiana. Quando a RNA-polimerase encontra uma sequncia finalizadora, a sntese acaba e a
molcula de RNA-polimerase ser liberada.
Regies denominadas UTR (do ingls untranslated regions), portadoras de sequncias sinalizadoras
que no sero traduzidas, se localizam a montante e a jusante da unidade de transcrio. As sequncias
reguladoras levam, alm do stio de unio ao ribossomo, outras que podem determinar quando, por
quanto tempo e em que clulas o gene ser transcrito.
O PROCESSAMENTO DO RNA TRANSCRITO
Nos organismos eucariticos, a estrutura do gene fragmentada (Figura 5.5). A sequncia gnica
transcrita por inteiro no RNA e, posteriormente, um mecanismo de corte e reunio ir eliminar
algumas das sequncias intercalares. Estas permanecero no ncleo (ntrons) enquanto as restantes

51

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(xons) formaro o RNA mensageiro que sair do ncleo na direo do citoplasma. O nmero e o
tamanho das sequncias intercalares variam em diferentes genes.
As consequncias biolgicas deste mecanismo so importantes. Basta um nmero pequeno de genes
para codificar numerosas protenas que sero sintetizadas utilizando as vias alternativas de corte e
reunio. Tambm permite que um nico gene se expresse de maneira diferente em diversos
tecidos. O corte e reunio dos fragmentos no a nica modificao do RNA transcrito; este recebe
um revestimento inicial ou cap (7-metilguanosina) que o dirigir ao ribossomo, e uma cauda de
poli(A) que lhe dar estabilidade na sua viagem at a maquinaria de traduo.
A TRADUO E O DESTINO DAS PROTENAS
A sntese proteica se inicia depois do mRNA atravessar a membrana nuclear e migrar para o citoplasma.
Assim como a transcrio, a traduo envolve a participao de numerosas enzimas e protenas
reguladoras.
Algumas molculas de mRNA levam sequncias sinalizadoras que as dirigem at os ribossomos
associados ao retculo endoplasmtico, sendo as protenas sintetizadas secretadas fora da clula.
Outras molculas de mRNA sero traduzidas nos ribossomos livres no citosol, sendo as protenas
resultantes utilizadas no mesmo lugar ou nas organelas celulares.
---------------FIGURA 5.6. As etapas da sntese de protenas (Recapitulao)

A. Clula eucaritica

B. Clula procaritica

Citoplasma
DNA
Ncleo
ntrons

xons

mRNA

DNA
Gene

Protenas
TRANSCRIO

hnRNA

PROCESSAMENTO

Na clula eucaritica, o
processamento
envolve
a
adio de um revestimento
inicial e de uma cauda de poli-A,
alm dos mecanismos de corte
e reunio

mRNA

mRNA
TRADUO
Protena

52

OS CIDOS NUCLEICOS

O mRNA reconhece o ribossomo mediante uma sequncia especfica, e a associao entre ambos d
incio sntese peptdica. Cada tRNA carrega o aminocido correspondente at o ribossomo, onde a
complementariedade entre seu anticdon e um dos cdons do mRNA garante que este coloque o
aminocido no lugar adequado na sequncia.
Existem vrios mecanismos de regulao. Um deles envolve a ao de protenas associadas ao
complexo ribossmico, outro determina variaes na vida mdia do mRNA e a traduo do mRNA por
vrios ribossomos ao mesmo tempo.
O peptdeo sintetizado passar por diversas modificaes e associaes, at se constituir no
produto final ativo, uma protena com uma estrutura quaternria determinada. Uma viso geral
comparativa da sntese proteica em clulas eucariticas e procariticas (Figura 5.6).
O COMPLEXO MUNDO DOS RNAs
A DIVERSIDADE EXISTENTE
Na sntese proteica, o mRNA carrega uma parcela de informao gentica do DNA at os ribossomos,
estruturas celulares formadas por rRNA e protenas onde ocorre a sntese proteica. Os aminocidos
so carregados por um dos 61 tipos de tRNA, cada um dos quais capaz de reconhecer
simultaneamente um aminocido e um cdon do mRNA. Tanto o rRNA como os tRNA so transcritos
a partir de genes no codificadores de protenas.
A participao dos RNAs na regulao da expresso gnica bem conhecida. As ribozimas, por
exemplo, so RNAs com capacidade cataltica que desempenham funes na replicao e no
processamento do mRNA, sem necessidade de nenhum componente proteico. A existncia deste tipo
de molculas um argumento a favor da existncia de um mundo de RNA prvio apario do DNA e
das protenas. Outras molculas de RNA, os riboswitches, agem como sensores afetando a expresso
gnica, em resposta a fatores ambientais ou metablicos.
A atividade regulatria do RNA possvel devido sua estrutura molecular, que permite o
pareamento com uma molcula de sequncia complementar. E tambm a suas propriedades de se
associar a protenas e de desenvolver uma atividade cataltica.
Nos ltimos anos comeou a ser desvendada a existncia de pequenas molculas de RNA no
codificadoras (sRNA, do ingls small RNA), que regulam as atividades celulares. Em procariontes, os
sRNAs determinam modificaes metablicas e esto envolvidos na defesa contra os vrus.
Em eucariontes, a variedade muito ampla: os pequenos RNAs nucleares (snRNA) associados a
protenas participam no mecanismo de corte e reunio e na remoo dos ntrons; os pequenos RNAs
nucleolares (snoRNA) processam o RNA ribossmico no nuclolo. Originados a partir de diferentes
molculas precursoras, os microRNAs (miRNA) participam na represso do mecanismo de traduo.
Novos tipos de RNA, de sequncia mais longa (lncRNA, do ingls, long non coding DNA) cumprem
funes regulatrias, como a inativao do cromossomo X. Menos clara por enquanto a funo dos
RNAs transcritos antisense e dos transcritos a partir de pseudogenes, que sempre foram considerados
no funcionais.
INTERFERNCIA E SILENCIAMENTO GNICO
O fenmeno de interferncia foi descoberto quando, com o objetivo de intensificar a produo de
pigmentos em petnias, a insero de um gene extra originou flores brancas em vez das flores O
fenmeno de interferncia foi descoberto quando, com o objetivo de intensificar a produo de
pigmentos em petnias, a insero de um gene extra originou flores brancas em vez das flores

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ultracoloridas esperadas. Posteriormente, observou-se um fenmeno similar no desenvolvimento de


C. elegans, onde pequenas molculas de RNA resultantes da clivagem de RNAs transcritos inibem a
traduo de diversos mRNAs.
Os microRNAs (miRNAs) so pequenas molculas bifilamentares de 21 a 25 pares de nucleotdeos
que agem como silenciadores de mRNA, regulando a traduo. Sua descoberta, mostrando como esses
miRNA controlam a expresso dos genes, valeu a A. Fire e C. Mello o Prmio Nobel de Medicina de
2006. Estima-se que existiriam entre 300 e 500 miRNAs regulando pelo menos a quarta parte dos genes
humanos.
Nos ltimos anos, esse fenmeno de silenciamento gnico tem se transformado em uma
importante ferramenta de pesquisa. Sintetizadas no ncleo, as molculas de miRNA de filamento
duplo so clivadas por enzimas no citoplasma, formando pequenos fragmentos de aproximadamente
20 nucleotdeos. A associao entre um pequeno fragmento de RNA e um complexo proteico (RISC, do
ingls RNA-induced silencing complex) desencadeia a degradao de um dos filamentos. O filamento
restante permanece associado a RISC, podendo parear com qualquer molcula de RNA, parcial ou
totalmente complementar, e causar sua degradao (Figura 5.7). Trata-se de uma forma de controle
da expresso gnica na clula, porque o miRNA afeta a traduo de qualquer RNA homlogo.
Por outro lado, do ponto de vista biolgico, o fenmeno de silenciamento constituiria tambm uma
reao de imunidade inata das bactrias infeco por vrus de RNA. O mecanismo de ao dos RNAs
envolvidos semelhante ao do miRNA, porque utilizam a mesma maquinaria enzimtica da clula.
Contudo, se no caso do miRNA de origem endgeno, descrito anteriormente, a molcula precursora
originava uma nica molcula interferente, no caso da infeco por RNA exgeno formam-se vrios
tipos de molcula interferente.
---------------FIGURA 5.7. O silenciamento gnico
O silenciamento gnico uma forma de controle da expresso gnica na clula, porque o miRNA interfere na
traduo de um mRNA homlogo; tambm uma forma de resistncia infeco viral.

Molcula de miRNA de dois filamentos


(20 nucleotdeos aproximadamente)

Complexo enzimtico RISC

mRNA endgeno ou RNA viral

As duas molculas so
complementares
(6 bases, mnimo)

Pareamento parcial e bloqueio da traduo

54

Pareamento total e destruio do RNA

OS CIDOS NUCLEICOS

O fenmeno existe em bactrias, plantas, drosfilas, camundongos e em seres humanos. Ferramenta


poderosa no laboratrio, a injeo na clula de um RNA artificial de sequncia parcialmente
semelhante do DNA de um gene determinado permite silenciar parcialmente sua expresso, de
maneira transiente e sem danificar a clula.
Espera-se que algumas das primeiras aplicaes do knockdown por silenciamento de mRNA estejam
relacionadas com testes clnicos e com a represso de genes implicados no cncer, na degenerao
macular devida idade e na amiloidose.
O GENOMA HUMANO
O MAPEAMENTO DO GENOMA
O termo genoma designa o conjunto completo de cromossomos haploides que contm toda a
informao gentica de um indivduo. Na espcie humana, o genoma nuclear compreende as 24
molculas de DNA que formam os diferentes cromossomos (22 autossmicos, X e Y). Devido
presena de DNA nas mitocndrias, existe tambm um genoma mitocondrial de herana
exclusivamente materna, que conta com 37 genes, incluindo os genes codificadores de tRNA e rRNA
utilizados na sntese proteica dentro dessa organela.
Em 1990, teve incio o Projeto Genoma Humano (HGP, do ingls Human Genome Project), um dos
projetos cientficos mais ambiciosos j realizados, envolvendo pesquisadores de mais de 18 pases na
tarefa de mapear e sequenciar o DNA humano e tambm o de outros organismos.
O projeto encontrou grandes resistncias, em parte devido a seu custo faranico comparvel aos
dos projetos Manhattan ou Apolo, em parte pelas consequncias que poderia trazer para a sociedade.
A resposta ao pblico foi o lanamento como parte integral do projeto do programa The Ethical, Legal
and Social Implications (ELSI) Research Program de pesquisa bsica e aplicada sobre as implicaes
ticas, legais e sociais dos estudos sobre o genoma para os indivduos, as famlias e as comunidades.
Paralelamente ao mapeamento do genoma humano, milhares de outros organismos (microrganismos,
plantas e animais) foram parcial ou totalmente sequenciados.
Em junho do ano 2000, o International Human Genome Sequencing Consortium e a Celera
Genomics, uma empresa privada norte-americana, anunciaram simultaneamente ter completado o
primeiro rascunho do genoma humano. Os resultados foram publicados em fevereiro de 2001, nas
revistas Nature e Science. Em abril de 2003, cinquenta anos depois da descoberta da dupla hlice, o
Consrcio anunciou ter completado 99% do mapeamento. Os seus resultados esto armazenados em
bancos de dados pblicos que podem ser acessados via Internet. As principais concluses podem ser
resumidas da seguinte forma:
o O nmero de bases no genoma humano chega a 3,2 bilhes, e o nmero de genes a um valor entre
20.000 e 25.000 genes; s 1,5% do genoma codificaria protenas.
o O nmero de genes em organismos como a mosca Drosophila melanogaster ou o verme
Caenorrabditis elegans trs vezes menor. Compartilhamos com estes organismos alguns genes e
contamos com outros que so caractersticos dos vertebrados como, por exemplo, vrios dos genes
referentes ao sistema imune.
o A densidade dos genes em diversos cromossomos e em diferentes partes deles varia. Existem
grandes espaos entre os genes, s vezes chamados de DNA-lixo. Sequncias repetidas, no
codificadoras, cuja funo direta ainda no bem conhecida, ocupam pelo menos 50% do genoma.
o O tamanho dos genes varivel, sendo na mdia de 3.000 bases. Na realidade, o tamanho no
parece ter muita importncia. Como boa parte dos genes poderia ser lida de diversos modos, o
nmero de protenas poderia ser bem maior.

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M.A.MALAJOVICH - BIOTECNOLOGIA (2016)

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o Independentemente de nossa origem tnica, compartilhamos com os outros seres humanos 99,9%
da sequncia gnica.
o As diferenas entre os seres humanos se devem a variaes de uma base em 3.000.000 de pontos
dentro e fora dos genes. Estas variaes so denominadas polimorfismos de um nucleotdeo nico
ou SNPs (do ingls, single nucleotide polymorphisms). Os SNPs podem dar informaes sobre a base
gentica da susceptibilidade a uma srie de doenas ou servir como marcadores das mesmas
(doena cardiovascular, diabetes, artrite e cnceres).
o Em vrios genes foram encontradas sequncias associadas a doenas (cncer de mama, cegueira,
surdez, doenas musculares).
Vrios pases de Amrica Latina (Argentina, Brasil, Chile e Mxico) desenvolveram ou participam em
projetos de genmica. De um modo geral, esses projetos envolvem parcerias entre instituies
pblicas e privadas, sendo beneficiados por acordos internacionais com pases desenvolvidos (Estados
Unidos, Frana, Alemanha) ou por redes de cooperao inter-regionais (Brasil, Argentina, Chile,
Uruguai e Paraguai). Um dos primeiros xitos foi o sequenciamento por pesquisadores brasileiros da
bactria Xylella fastidiosa, causadora da praga do amarelinho das videiras (2000).
OS AVANOS POSTERIORES
Nos ltimos anos, os custos e o tempo necessrios para sequenciar um genoma diminuram
extraordinariamente. Atualmente, muito do trabalho feito por robs e computadores est altamente
automatizado, e a informao est armazenada em grandes bancos de dados, acessveis pela Internet.
O desenvolvimento da Bioinformtica, um conjunto de novas tecnologias que utiliza mtodos
computacionais e matemticos para analisar a informao, tem sido fundamental para o progresso
dos estudos sobre os genomas. Muitos dos estudos atuais no so mais feitos in vivo nem in vitro, mas
in silico.
Ao Projeto Genoma sucederam outros projetos, alguns deles concludos e outros em andamento,
desenvolvidos por redes de cooperao internacional. O projeto HapMap (do ingls, Map of Human
Genetic Variation) publicou um catlogo das variaes genticas que ocorrem nos seres humanos.
O projeto ENCODE confirmou ser pouco mais de 20.000 o nmero de genes codificadores de
protenas e descobriu que 80% do DNA restante cumpre alguma funo reguladora, de modo que no
pode ser considerado lixo.
O Projeto Epigenoma Humano ir identificar, catalogar e interpretar os padres de metilao dos
genes humanos em cada tecido. Como estes padres mudam em resposta a fatores exgenos, o
epigenoma pode ser um elo unindo genes, doena e ambiente.
O Projeto Genoma do Cncer fornece informao sobre a doena e especialmente sobre o cncer
de pulmo e o melanoma maligno.
O Projeto dos 1000 Genomas visa sequenciar o conjunto de um nmero amplo de pessoas. O
Projeto UK10K do Wellcome Trust, lanado em 2010, visa comparar os genomas de 4.000 pessoas
saudveis com os de 6.000 pessoas afetadas por uma doena de presumida origem gentica.
A Genmica surgiu como uma nova disciplina que tenta responder a algumas questes
fundamentais: Onde esto os genes? O que faz cada gene? Como diferem os organismos em relao a
seus genes? Cada uma dessas perguntas criou especialidades como a Genmica estrutural, a Genmica
funcional ou a Genmica comparativa.
No rastro do Genoma, outras perguntas comeam a ser formuladas e surgem outras reas de
investigao:
o A transcriptmica, concernente ao RNA transcrito ou transcriptoma, isto , aos padres de
expresso gnica.

56

OS CIDOS NUCLEICOS

o A protemica, referente ao conjunto de protenas da clula ou proteoma, que varia ao se


diferenciarem as clulas e em resposta a estmulos ambientais.
o A metabolmica, relativa ao conjunto de substratos e subprodutos de reaes enzimticas que
incidem no fentipo celular.
DNA E RNA COMO AGENTES BIOLGICOS
A genmica encontrou aplicaes imediatas no campo mdico e farmacolgico, como os testes
genticos e de medicamentos novos (Tabela 5.2). Em funo da importncia econmica dos produtos
farmacolgicos, a questo das patentes voltou a estar no centro das atenes. Em 2013, a Suprema
Corte dos Estados Unidos determinou que o DNA natural no pode ser patenteado. A discusso est
centrada atualmente em redor dos procedimentos e de sequncias especialmente desenhadas para
testes de diagnstico.
Nas reas de agricultura e sade, a interferncia gnica tem sido utilizada na triagem de genes
funcionais em cultivos celulares e organismos modelos. Sabe-se que cumpre uma funo reguladora
no amadurecimento das clulas sanguneas em mamferos e est envolvido em vrios tipos de cncer,
obesidade e doenas autoimunes. Vrios medicamentos baseados no fenmeno de interferncia
gnica se encontram em fase de testes clnicos, sendo que a principal dificuldade est na administrao
do RNA.
---------------TABELA 5.2. Os cidos nucleicos (DNA e RNA) como agentes biolgicos
AGENTES
BIOLGICOS

APLICAES
Identificao de microrganismos patognicos.
Controle da qualidade dos alimentos.
Medicina molecular (diagnsticos, tratamentos personalizados, terapias
gnicas).

DNA, RNA e
genmica

Testes genticos (diagnsticos, avaliao dos riscos de sade).


Agronomia e pecuria (mtodos seletivos mais eficientes).
Indstria farmacolgica (protenas teraputicas, vacinas recombinantes e
de DNA).
Prtica forense (identificao das pessoas).
Estudos antropolgicos e evolutivos.

57

CAPTULO 6

BIOPROCESSOS

BIOPROCESSOS, PROCESSOS FERMENTATIVOS E INDSTRIA


A produo de vinhos e cervejas o primeiro processo fermentativo desenvolvido em escala industrial.
Ao longo do sculo XX, a expanso da Microbiologia Industrial possibilitou, mediante o
desenvolvimento de processos baseados no metabolismo microbiano, a produo de diversas
substncias (acetona, butanol, etanol, cido ctrico, antibiticos etc.). Atualmente, as fermentaes
encontram aplicaes novas, tanto no tratamento ambiental como na produo de alimentos e
aditivos, de produtos qumicos e de medicamentos.
Tradicionais ou revigorados pelas possibilidades oferecidas pela manipulao gnica, os
bioprocessos ou "fermentaes" visam um dos seguintes objetivos:
o

A multiplicao de microrganismos para a obteno de biomassa (leveduras, rizobios, protena de


clula nica);

A obteno de produtos microbianos (antibiticos, aditivos, lcool, enzimas etc.);

A converso de um substrato em outro, por ao de microrganismos ou de enzimas


(transformao de esteroides, isomerizao de glicose em frutose) ou

A purificao de um solvente (tratamento de efluentes, transformao de algum poluente em


alguma substncia facilmente degradvel etc.).

Por motivos histricos, os biotecnlogos ainda utilizam o termo processos fermentativos para qualquer
processo microbiano operado em grande escala, independentemente de ser ou no uma fermentao.
O recipiente onde ocorre o processo chamado de biorreator ou fermentador (Figura 6.1). Clulas
animais e vegetais tambm podem ser cultivadas em escala, como ser visto no prximo captulo sobre
cultura de tecidos.
OS MICRORGANISMOS INDUSTRIAIS
NOES SOBRE O METABOLISMO PRIMRIO E SECUNDRIO
Denominamos metabolismo o conjunto de reaes qumicas de degradao (catabolismo) e de sntese
(anabolismo) de substncias em um organismo. As primeiras liberam energia, as outras a consomem.
As clulas e a maioria dos microrganismos retiram dos compostos orgnicos a energia que
precisam, para a manuteno de sua estrutura e para suas atividades. Nas vias catablicas, a
degradao de compostos orgnicos em molculas menores libera energia; uma parte desta ser
acumulada sob a forma de ATP (trifosfato de adenosina), e a restante dissipada como calor.

BIOTECNOLOGIA: ENSINO E DIVULGAO (http://bteduc.com)

OS BIOPROCESSOS

Respirao e fermentao so as principais vias catablicas (Figura 6.2). A quantidade de energia


liberada e os produtos finais diferem se a oxidao do composto orgnico for total ou parcial. Na
gliclise, a glicose degradada at uma molcula de trs carbonos, o piruvato. Em presena de
oxignio, a entrada do piruvato no ciclo de Krebs e a fosforilao oxidativa permitem a quebra total da
glicose em CO2 e H2O, liberando uma grande quantidade de energia sob a forma de ATP (respirao
aerbia).
Mediante a reduo do piruvato ou de algum de seus derivados (fermentao), vrios
microrganismos geram outras substncias orgnicas: acetona, butanol, etanol, cido lctico, cido
actico, glicerol etc.
Estas reaes ocorrem geralmente em ambientes onde o substrato abundante, sendo pequena
a quantidade de energia obtida. Dependendo das condies ambientais, isto , da presena ou
ausncia de oxignio, algumas leveduras e bactrias (assim como as clulas musculares) podem
respirar ou fermentar.
A respirao e algumas fermentaes so representadas mediante equaes, como a seguir:
o Respirao aerbia:
C6H12O6 + 6 O2 +38 ADP + 38Pi
Glicose

6 CO2 + 6 H2O + 38 ATP

o Fermentao alcolica (leveduras como S. cerevisiae e algumas bactrias):


C6H12O6 + 2 ADP + 2Pi
Glicose

CH3 CH2OH
Etanol

+ CO2

+ 2 ATP

o Fermentao lctica (bactrias como Streptococcus e Lactobacillus):


C6H12O6 + 2 ADP + 2Pi
Glicose

CH3 CHOH COOH + 2 ATP


cido lctico

No metabolismo, os caminhos de degradao e de sntese se entrecruzam. Em determinados pontos


da via catablica da glicose, outras molculas (aminocidos, cidos graxos) convergem para a produo
de energia e de pequenas molculas simples (CO2, H2O e NH3). Inversamente, alguns dos compostos
intermedirios do catabolismo so os pontos de partida para vias anablicas.
Entretanto, as vias metablicas no so reversveis: o caminho seguido na degradao de uma
substncia parcial ou totalmente diferente do caminho de sntese correspondente, podendo
inclusive ocorrer em compartimentos celulares diferentes. Esta separao facilita a regulao
enzimtica do metabolismo, que ocorre com menor desperdcio de matria e energia.
AS FASES DE CRESCIMENTO DA POPULAO MICROBIANA
De um modo geral, quando os microrganismos se desenvolvem em um meio com uma quantidade
limitada de nutrientes, a populao passa por diversas fases (Figura 6.3A).
o
o
o

Fase lag: perodo de adaptao em que, apesar de no se multiplicar, os microrganismos sintetizam


enzimas e constituintes celulares.
Fase log: a populao cresce de maneira exponencial, sendo sintetizados numerosos metablitos
primrios.
Fase estacionria: devido ao esgotamento dos nutrientes e acumulao de excretas, algumas
clulas morrem, enquanto outras se dividem. No fim da fase log e incio da fase estacionria
comeam a ser sintetizados os metablitos secundrios.
Fase de declnio: sem a renovao dos nutrientes, as clulas morrem em um tempo varivel.

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FIGURA 6.1. O processo fermentativo genrico

FASE DE LABORATRIO
Preparao do inculo

FASE INDUSTRIAL

Preparao do meio
Esterilizao

Ar
Controles (temperatura, pH)
Esterilizao

Tratamento final

Subprodutos

Produtos

Resduos

FIGURA 6.2. Respirao e fermentao


Na respirao, onde o ltimo aceptor de eltrons o oxignio, a oxidao de glicose se completa at chegar a
CO2 e H2O, produzindo 36-38 molculas de ATP. Na fermentao, o ltimo aceptor de eltrons o piruvato ou
algum outro derivado, produzindo 2 ATP.

Glicose
GLICLISE (2 ATP)
Citoplasma
cido pirvico
Sem O2

FERMENTAO

Com O2

RESPIRAO
Ciclo de Krebs e cadeia respiratria

CO2 , H2O e 36-38 ATP

60

Citoplasma (procariontes)
Mitocndria (eucariontes)

Substncia orgnica
(etanol, cido lctico)

OS BIOPROCESSOS

Alm das vias metablicas primrias, que so comuns a todos os microrganismos, existem outras vias
metablicas secundrias especficas. A ativao de umas e/ou de outras depende do microrganismo e
das condies em que ele se desenvolve em seu ambiente natural ou em que ir ser cultivado.
Os metablitos primrios esto relacionados com o crescimento dos microrganismos e a
transformao de nutrientes em biomassa; sendo os principais exemplos o etanol, o cido lctico ou
os aminocidos. Mesmo no sendo essenciais, os metablitos secundrios permitem a sobrevivncia
em ambientes extremamente competitivos e com escassos nutrientes. So metablitos secundrios
os antibiticos, os alcaloides, os pigmentos, algumas enzimas e toxinas.
Com vistas ao desenvolvimento de um bioprocesso, a escolha do microrganismo ter que ser feita
em funo de suas vias metablicas; e as condies de cultivo dependero do objetivo da fermentao,
um metablito primrio ou um metablito secundrio (Figura 6.3B).
--------------FIGURA 6.3. As diversas fases do crescimento de uma populao microbiana e a produo de metablitos
A. As fases de crescimento de uma populao

Log do nmero
de clulas

Tempo
Fase lag

B.

Fase log

Fase estacionria

Fase de declnio

A produo de metablitos primrios e secundrios

Os nutrientes do meio permitem a multiplicao celular e a formao do metablito primrio, que pode ser
utilizado pelas clulas para sintetizar o metablito secundrio (a); este pode tambm ser sintetizado diretamente
a partir de alguma substncia do meio (b).

Meio nutriente

Clulas

Metablito primrio

Metablito secundrio

61

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MEIOS DE CULTURA E MATRIA-PRIMA


A composio do meio de cultura depende das necessidades metablicas do microrganismo escolhido.
Este deve conter todos os nutrientes necessrios nas concentraes adequadas, que variam em funo
do microrganismo e do objetivo do processo. Em geral, os meios de cultura utilizados no laboratrio
incluem:
o gua.
o Uma fonte de energia e de carbono: glicose, amido etc.
o Uma fonte de nitrognio: inorgnica (sulfato de amnia, nitrato de potssio etc.), orgnica (asparagina,
succinato de amnia, glutamato, ureia etc.) ou complexa (farinha de soja, peptona etc.).
o Sais minerais, tais como fosfato de potssio (K2HPO4 ou KH2PO4), sulfato de magnsio (MgSO4 7H2O), cloreto
de clcio (CaCl2) etc.
o Elementos-trao: ferro, zinco, mangans, cobre, cobalto, molibdnio.

Com vistas a uma explorao comercial, os meios definidos so substitudos na indstria por matriasprimas de baixo custo como, por exemplo, soro de leite, melao de cana ou de beterraba, amido de
milho etc. Em alguns casos, a matria-prima passa por um tratamento prvio com mtodos fsicos e/ou
qumicos.
No caso de se tratar de um processo enzimtico, o meio dever levar, alm do substrato adequado,
os elementos necessrios para que a enzima possa desenvolver sua atividade cataltica (precursores,
cofatores etc.).
A OBTENO DAS LINHAGENS
De um modo geral, para que o cultivo em um fermentador resulte economicamente vivel, o
microrganismo deve ser capaz de se multiplicar rapidamente, sintetizando grande quantidade do
produto a partir de uma matria-prima barata. Existem Bancos e Colees de Cultura que vendem esse
tipo de linhagens de microrganismos como culturas puras, geneticamente estveis e aptas para o
cultivo em grande escala.
Apesar de terem sido isoladas do meio ambiente, as linhagens industriais diferem substancialmente
das linhagens originais, em virtude de uma srie de alteraes genticas (mutaes, recombinaes)
obtidas no laboratrio. Atualmente, as grandes empresas selecionam os microrganismos mais
eficientes mediante um processo de evoluo dirigida, miniaturizado em plataformas robticas (Figura
6.4).
A triagem de alta produtividade (HTS, do ingls high throughput screening) permite a seleo em
paralelo de milhares de linhagens e a realizao dos ensaios biolgicos bsicos, em menos tempo e
com menor consumo de reagentes que os mtodos tradicionais. Testes com centenas de milhares de
amostras dirias tornam-se rotineiros e acessveis, graas aos recentes avanos em mtodos
fluorescentes e sistemas robticos que colocam lquidos em quantidades nanomtricas.
Nas linhagens industriais, algumas vias metablicas, especialmente as do metabolismo secundrio,
podem ter sido alteradas, de maneira a aumentar ao mximo a sntese do produto desejado e evitar a
produo de algumas substncias desnecessrias. Em geral, por estar to selecionadas geneticamente,
tendo inclusive algumas vias metablicas anuladas ou desbalanceadas, estas linhagens sobrevivem
pouco tempo no meio ambiente. Porm, como norma geral, as linhagens industriais no devem ser
patognicas nem produzir toxinas. A produo de medicamentos ou de vacinas um caso crucial,
porque exige medidas de segurana estritas.

62

OS BIOPROCESSOS

Os microrganismos constituem um grupo biolgico muito diversificado e, ainda, pouco conhecido, por
isso existem muitas expectativas em relao prospeco de linhagens em ambientes extremos ou
pouco usuais. No se precisa desenvolver um processo novo para cada microrganismo que apresente
alguma caracterstica comercial interessante. A tendncia atual transferir os genes correspondentes,
por engenharia gentica, a algum dos microrganismos conhecidos, adaptados s condies industriais.
--------------FIGURA 6.4. A metodologia HTS para triagem e evoluo dirigida de linhagens bacterianas
106 1010 de variantes
bacterianas

Biblioteca de mutantes
Gene parental

Mutao
Transformao

Prxima rodada seletiva

Mutante mais eficiente

Triagem

Transferncia das colnias


a microplacas

Triagem por mtodos colorimtricos,


fluorescentes ou por luminescncia

OS DIFERENTES TIPOS DE BIOPROCESSOS


OS PROCESSOS TRADICIONAIS
Algumas fermentaes se desenvolvem sobre resduos agroindustriais ou florestais, como gros,
palha, bagao, serragem etc. Este tipo de fermentao em meio slido umedecido utilizada na
produo de alimentos como, por exemplo, o levedo da massa na panificao, a maturao de queijos
por ao de fungos (roquefort, gorgonzola), o cultivo de fungos, a fermentao do cacau, do caf e do
ch etc. Na sia, a preparao do koji, soja fermentada, a base de alimentos tradicionais como o tofu,
o miss, o shoyu e o sak.
Em alguns lugares, estas fermentaes ainda ocorrem artesanalmente, dentro de folhas de
bananeira e cestas de bambu ou mesmo em montes; tambm existem hoje equipamentos
sofisticados com bandejas, colunas, frascos e tambores rotativos, alguns totalmente automatizados
(Figura 6.5 A).
Outra variante interessante do processo fermentativo a produo tradicional de vinagre
(processo francs ou de Orlans) em barris de carvalho. O vinho inoculado com bactrias do gnero
Acetobacter que formam na superfcie a "me do vinagre", uma pelcula que flutua, presa a um
quadriculado de madeira que a impede de afundar. Deste modo, o microrganismo cresce na superfcie
de um meio lquido, em contato simultneo com o ar e com o meio.
O processo fornece excelentes vinagres, mas lento e exige muito espao, sendo a capacidade de
cada barril de 200 litros (Figura 6.5 B). Existem outros processos semelhantes, conduzidos por fungos,
que formam uma pelcula de miclio na superfcie do lquido.

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FIGURA 6.5. Modelos de biorreatores utilizados em processos tradicionais

C.

Biorreator para fermentaes em fase slida

Controles
Injeo de ar
Umidade

Sada de ar

Bandejas com a matria-prima para


o cultivo de microrganismos

D. A produo de vinagre (Mtodo de Orlans)

Tubo para adicionar o vinho


Entrada de ar
Me do vinagre
Mosto
Retirada do vinagre

FIGURA 6.6. Modelo de biorreator utilizado em fermentaes submersas

Motor
Vapor
Bomba

Entrada de cido ou de base


Indicador de presso

Sonda de pH
(controle)
Misturador

Sada
de gases

Sonda de temperatura
(controle)

Vapor

Entrada de ar
Sada do produto

64

OS BIOPROCESSOS

OS PROCESSOS SUBMERSOS
O desenho do biorreator deve se adequar ao objetivo do processo, respondendo eventualmente a
diversos imperativos, tais como a esterilizao do sistema, a aerao e homogeneizao do meio, o
acrscimo de nutrientes e de aditivos antiespumantes, a manuteno do pH etc.
A maioria dos processos industriais se desenvolve em cubas de vidro ou de ao. Os agentes
biolgicos submersos no meio de cultivo ocupam somente 75% da cuba porque, se for necessrio
injetar ar, formar espuma.
--------------FIGURA 6.7. Fermentaes, agentes biolgicos e biorreatores

FERMENTAES SUBMERSAS
Podem ser conduzidas por
CLULAS E ENZIMAS
Livres

Imobilizadas

Em suportes inertes
Reatores com
agitao mecnica

Entre membranas

Reatores com
agitao pneumtica
Reatores de
leito fixo

Reatores
em torre

Reatores STR

Reatores de
fibra oca

ou com
membranas planas

ou de leito
fluidizado
Coluna de bolhas

Reatores air-lift

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Os modelos de fermentadores mais utilizados com microrganismos contam com aerao e agitao
mecnica. Esta facilita a distribuio dos nutrientes, mas o calor gerado deve ser eliminado mediante
a circulao de gua fria (Figura 6.6). Se o processo exigir assepsia, esta ser conseguida mediante:
o

A esterilizao do meio, dentro ou fora do fermentador.

A desinfeco ou esterilizao do equipamento, por injeo de vapor ou mediante o calor gerado


por serpentinas, sendo esta medida extensiva a todos os dutos de entrada e sada e s vlvulas
correspondentes.

A esterilizao do ar, mediante filtros adequados.

Existem fermentadores adaptados s necessidades de cada agente biolgico e de cada tipo de


processos. Nos biorreatores em coluna ou torre, a homogeneizao depende da injeo de ar (Figura
6.7). Os tanques podem chegar a 3.000 m3 de capacidade como, por exemplo, os fermentadores para
a produo de protenas de clula nica, da Imperial Chemical Industries (ICI), no Reino Unido. O
monitoramento do processo acompanha o crescimento da populao microbiana, ou a quantidade do
produto, nas amostras extradas ao longo da fermentao.
Os sistemas submersos so apropriados para o cultivo de microrganismos livres, mas resultam
pouco econmicos quando se trabalha com clulas ou enzimas caras. Neste caso, prefervel a
imobilizao do agente biolgico a um suporte inerte ou sua incluso dentro de um polmero que
permita o contato com o meio de cultura. Alm de facilitar a reutilizao das clulas ou das enzimas
que permanecem dentro do biorreator, os sistemas imobilizados simplificam a purificao do produto
(Figura 6.7).
---------------

FIGURA 6.8. A mudana de escala, do laboratrio indstria


A mudana de escala entre o processo laboratorial e o processo industrial cria vrios problemas de ndole tecnolgica.

Bancada

Fermentador de laboratrio
1 - 10 litros

LABORATRIO

66

Fermentador piloto
50 200 500 litros

PILOTO

Fermentador industrial
5.000 50.000 200.000 litros
5 50 200 m3

INDSTRIA

OS BIOPROCESSOS

DO LABORATRIO INDSTRIA
A MUDANA DE ESCALA
Uma operao simples de laboratrio pode ser impraticvel, ou pouco econmica, quando realizada
em grande escala. No laboratrio, aps a triagem das linhagens mais eficientes ou das primeiras
experincias realizadas na bancada, o processo passa a ser estudado em um biorreator de at 10 litros
de capacidade, onde se analisam o rendimento da linhagem selecionada e as variveis fsico-qumicas
em outra escala.
A capacidade de uma cuba varia entre 1 e 10 L para um fermentador de laboratrio, chegando a
5.000 l em uma planta piloto e 100.000 l em uma planta industrial. Ao aumentar o tamanho do
equipamento, altera-se a relao superfcie/volume, de modo que as condies de operao do
fermentador na planta piloto devero ser ajustadas at se aproximar das correspondentes a um
processo comercial. Se a experincia na planta piloto for bem-sucedida, o processo poder ser
desenvolvido em um fermentador industrial (Figura 6.8).
A automatizao do monitoramento e do controle da fermentao permite que a informao
relativa aos parmetros fsicos e qumicos (pH, temperatura, oxignio, velocidade de agitao, o nvel
do meio etc.) seja recolhida on-line por sondas e sensores. Para que o processo se aproxime das
condies ideais, a informao analisada em relao a um modelo previamente estabelecido. Como
este se elabora a partir da experincia obtida com cubas menores (laboratrio, piloto), os ajustes
mudana de escala so de grande complexidade.
A CONDUO DO PROCESSO
O processo fermentativo pode ser conduzido de maneira contnua ou descontnua (batelada), sendo
que ambas as formas apresentam vantagens e inconvenientes.
Em um sistema descontnuo de produo, uma vez que o fermentador carregado com a
matria-prima e o inculo correspondentes, a fermentao prossegue at o esgotamento dos
nutrientes. Concludo o processo e extrado o produto, o fermentador esvaziado, limpo e esterilizado
antes de receber outra carga.
Apesar do tempo improdutivo entre uma batelada e a seguinte, o sistema relativamente
flexvel, j que o mesmo equipamento pode ser utilizado na fabricao de produtos diferentes. A
produo em bateladas bastante utilizada na indstria farmacutica porque o risco de contaminao
permanece relativamente baixo.
J no sistema contnuo de produo, o acrscimo de nutrientes e a retirada do produto ocorrem
simultaneamente ao longo do processo, eliminando-se quase totalmente o tempo improdutivo. Como
o risco de contaminao aumenta, o sistema se adapta a processos que no exigem assepsia, como a
produo de protena microbiana e de lcool e, obviamente, o tratamento de gua. Entre o sistema
em batelada e o sistema contnuo existe um sistema intermedirio de batelada alimentada em que,
periodicamente, parte do contedo (meio de cultivo + produto) retirada e substituda por meio
fresco.
A RECUPERAO DO PRODUTO
A recuperao do produto representa uma frao considervel do custo de um processo fermentativo.
Se o produto for secretado fora da clula, estar disperso em um volume grande de gua e ser
necessrio separ-lo por decantao ou filtrao. Mas se o produto permanecer dentro das clulas,
estas tero que ser desintegradas antes de proceder a sua extrao.

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O produto se concentra por sedimentao, precipitao, filtrao, centrifugao, extrao por


solventes, destilao, evaporao do solvente e secagem. Se a purificao for necessria, esta
envolver outros procedimentos, como a cristalizao e os mtodos cromatogrficos.
O acondicionamento final depender do tipo de produto. Isto fundamental no caso das enzimas
usadas em cosmticos, onde os problemas tcnicos principais so a manuteno da estabilidade do
produto e sua ativao pela hidratao da pele.
Um problema a considerar o despejo dos resduos de uma fermentao, alguns dos quais podem
representar um perigo para o meio ambiente como, por exemplo, o vinhoto resultante da produo
de etanol ou o soro das indstrias de laticnios. Existem formas de tratamento, como o crescimento de
biomassa sobre resduos industriais, que eliminam o problema e ainda permitem a obteno de mais
um produto.
BIOPROCESSOS NA INDSTRIA
Na produo de bens e servios, os bioprocessos participam em vrios setores produtivos. Os dois
exemplos escolhidos referentes produo de cido ctrico e de fertilizantes ilustram sua importncia
em reas to diversas como a indstria qumica e a agricultura.
O CIDO CTRICO
Descoberto no sculo XVIII no suco de limo, o cido ctrico ainda extrado das frutas ctricas em
alguns pases da frica e no Mxico. No entanto, a maior parte da produo atual depende do fungo
Aspergillus, do qual tem-se obtido mutantes muito produtivos. Os trs procedimentos que garantem
atualmente a produo industrial de cido ctrico so os seguintes:
o O processo Koji.
A fermentao ocorre na superfcie, em meio slido, com Aspergillus niger como agente biolgico.
Depois de 80 a 100 horas de fermentao a 280C, o cido ctrico extrado com gua quente e
purificado. Muito desenvolvido nos pases asiticos, este tipo de bioprocesso garante ao Japo uma
parte importante da produo anual de cido ctrico.
o Fermentao na superfcie do meio lquido.
Em meio estril, incubao a 300C com injeo de ar esterilizado. Inoculao com esporos de
Aspergillus niger que germinam e, em 24 horas, cobrem a superfcie do lquido, diminuindo o pH a
um valor inferior a 2. O processo demora entre 7 e 15 dias e, a seguir, o cido ctrico extrado do
meio de cultivo. Para recuperar uma quantidade maior de cido ctrico, o miclio exprimido e
lavado. Este processo responde por 20% da produo anual de cido ctrico.
o Fermentao submersa em meio lquido.
Em grandes biorreatores de acero inoxidvel com agitao mecnica ou em torres air-lift. o
procedimento preferido porque resulta fcil de automatizar e fornece rendimentos altos (125 g/L).
Responde por 80% da produo anual de cido ctrico. A figura 6.9 mostra o procedimento de
separao downstream do cido ctrico e sua purificao.
A produo de cido ctrico por fermentao um exemplo clssico de sucesso na utilizao de
bioprocessos para a produo de insumos que atendam outras indstrias. O cido ctrico um
composto muito verstil, utilizado nas indstrias farmacutica, de alimentos, de cosmtica e de
detergentes. Devido a facilidade com que forma complexos metlicos, tambm usado como
antioxidante e na limpeza de metais.

68

OS BIOPROCESSOS

FIGURA 6.9. A obteno de cido ctrico por fermentao


Uma vez retirado o miclio por filtrao, acrescenta-se cal no caldo restante para elevar o pH e precipitar o citrato
de clcio. Este ltimo retirado por filtrao e tratado com cido sulfrico concentrado, formando-se sulfato de
clcio. Outra filtrao retira o sulfato de clcio, deixando o cido ctrico dissolvido no lquido. Eliminam-se as
impurezas com carvo ativado, e o clcio residual e outros ctions por intercmbio inico. A evaporao do
solvente facilita a cristalizao do cido ctrico, que recuperado por centrifugao e filtrao. Uma vez seco, o
cido ctrico empacotado e distribudo.

BIORREATOR (200 m3)


20 m3 de cultivo de Aspergillus niger (starter)

Materiais estreis: acar, melao, nutrientes,


algum agente antiespumante
Controles de pH, temperatura, CO2, O2

Injeo de ar esterilizado

Retirada semanal do meio

Filtrao

Soluo de cido ctrico impuro

Miclio

+ Ca (OH)2

Caldeiras

Metano
Fermentador
anaerbico

Descarte
Precipitado de citrato de clcio

Restos do meio nutriente

+ H2SO4 concentrado

cido ctrico + precipitado de sulfato de clcio


Filtrao

Soluo de cido ctrico puro

Gipsita

Evaporao, cristalizao, centrifugao, secagem e empacotamento


cido ctrico CO2H-CH2-C(OH)(COOH)- CO2H-CH2

---------------

OS BIOFERTILIZANTES
O termo biofertilizante se aplica aos produtos que contm agentes biolgicos vivos capazes de
favorecer o desenvolvimento vegetal. Um destes agentes o Rhizobium, uma bactria simbionte das
razes de leguminosas que fixa o nitrognio atmosfrico, reduzindo a necessidade de aplicar
fertilizantes nitrogenados nas lavouras e permitindo assim a substituio de produtos qumicos
derivados do petrleo por agentes biolgicos, menos prejudiciais para o meio ambiente.

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Na Amrica Latina, a produo de biofertilizantes envolve numerosas empresas, pequenas e mdias,


que contam com um slido suporte tecnolgico originado em universidades e instituies pblicas de
pesquisa agronmica. Vrios pases produzem inoculantes agrcolas; entre eles: Argentina, Brasil,
Chile, Colmbia, Cuba, Mxico, Peru e Uruguai.
As linhagens bacterianas so estirpes selecionadas por sua eficincia em uma ampla gama de
cultivares e amplamente adaptadas s condies locais. O crescimento da populao microbiana
ocorre em etapas sucessivas, utilizando recipientes cada vez maiores at chegar a biorreatores de
1.500 litros. Os microrganismos recuperados so veiculados em meio lquido ou em turfa estril e, uma
vez empacotados, vendidos aos agricultores. Segundo a legislao do Mercosul, durante o prazo de
validade do produto, a concentrao dever ser de 108 microrganismos viveis por grama de produto.
At o presente, a indstria baseia a produo dos microrganismos na tecnologia clssica, mas com
mapeamento do genoma de microrganismos como o Rhizobium etli (Mxico) e o Gluconacetobacter
diazotrophicus (Brasil), a biotecnologia moderna comea a se inserir neste campo. Frente as mudanas
climticas e a necessidade de aumentar a produtividade agrcola, os novos mtodos de triagem de
estirpes so uma ferramenta de incalculvel valor para o estudo da relao simbionte entre o
microrganismo e a planta hospedeira.

70

CAPTULO 7

O CULTIVO DE CLULAS E TECIDOS

A MANIPULAO IN VITRO DE CLULAS E TECIDOS VEGETAIS


AS PRIMEIRAS TENTATIVAS
A reproduo assexual das plantas utilizada para obter um grande nmero de mudas a partir de um
nico exemplar. Dependendo do caso, aproveitam-se bulbos (cebola), cormos (gladolo), rizomas
(samambaias), tubrculos (batata-inglesa), caules (banana), razes (batata-doce, ma, amora), folhas
(begnia, espada-de-so-jorge), estacas (videiras) etc. As plantas obtidas por propagao assexuada
ou vegetativa so idnticas planta-me e idnticas entre si. Em outras palavras, so clones.
A capacidade de uma clula regenerar rplicas do organismo do qual ela deriva denominada
totipotncia. Restringida em animais, esta propriedade caracterstica dos vegetais permite a
sobrevivncia das plantas superiores aps o ataque de herbvoros, pragas e patgenos ou em
condies ambientais desfavorveis.
--------------FIGURA 7.1. As diversas partes de uma planta angiosperma

Gema apical
Estpula
Limbo
Pecolo

Folha

Ramo ou broto lateral desenvolvido


a partir de uma gema axilar
Gema axilar
Entren
N
Superfcie do sol
Regio da raiz com pelos absorventes
Raiz central

Razes laterais

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As primeiras tentativas de cultura de tecidos vegetais em laboratrio datam de 1902. Contudo, a


primeira experincia bem-sucedida a germinao in vitro de sementes de orqudea (Knudson, 1922).
Transferidas assepticamente ao meio de cultura e incubadas em condies favorveis, as sementes e,
mais tarde, as plntulas crescem protegidas do ataque de fungos e bactrias.
Com algumas variaes, o mtodo usado ainda hoje por numerosos floricultores porque, devido ao
tamanho minsculo das sementes e ausncia de reservas nutritivas, as possibilidades de
sobrevivncia das plntulas aps a germinao in vivo so muito baixas.
Distintamente do cultivo in vivo, a micropropagao se inicia com a separao dos explantes, isto
, de pequenos fragmentos de tecido extrados de diversas partes da planta, tais como folhas, razes,
segmentos nodais e gemas axilares, gemas florais e apicais (Figura 7.1). O cultivo desses explantes em
meios de composio adequada e condies asspticas possibilitar a regenerao direta da planta.
A cultura in vitro tem a vantagem de ser mais rpida e de ocupar muito menos espao que a
multiplicao in vivo. As principais aplicaes esto no cultivo de plantas ornamentais, de hortalias e
na silvicultura. A capacidade de regenerao maior nas plantas herbceas que nas lenhosas, e em
algumas famlias (solanceas, crucferas, gesnericeas, compostas e liliceas). Tambm depende do
gentipo e das condies ambientais, diminuindo com a idade da planta.
--------------TABELA 7.1. Os componentes do meio de cultura para clulas vegetais

COMPONENTES

CARACTERSTICAS E EXEMPLOS

gua destilada

Representa 95% do meio nutriente.

Fonte de carbono

Geralmente se utiliza sacarose. A fonte de carbono necessria porque os explantes


no so totalmente autotrficos e a fotossntese in vitro no supre as necessidades
das clulas.

Substncias inorgnicas

Macroelementos (N, P, K, Ca, Mg, S) e microelementos (Fe, Co, Zn, Ni, B, Al, Mn, Mo,
Cu, I), em uma proporo que depende da planta escolhida.

Vitaminas

Mioinositol, vitamina B1 (tiamina), cido nicotnico (niacina), vitamina B6 (piridoxina),


pantotenato de clcio, cido flico, vitamina B2 (riboflavina), vitamina C (cido
ascrbico), vitamina H (biotina), cido para-aminobenzoico e vitamina E (tocoferol).

Reguladores de crescimento

Auxinas: Estas promovem o alongamento celular, a formao de calos e de razes


adventcias; inibem a formao de brotos axilares adventcios e, s vezes, a
embriognese em suspenses celulares. Exemplos: IAA (cido indolactico), NAA
(cido naftalenoactico), IBA (cido indolbutrico), 2,4 D (2,4- diclorofenoxiactico).
Citocininas: Estas promovem a diviso celular, regulam o crescimento e o
desenvolvimento dos tecidos vegetais. Exemplos: cinetina, 2iP (2-isopentiladenina),
BAP (benzilaminopurina), zeatina.
Outras substncias. Exemplos: giberelinas, cido abcssico, etileno.

Misturas de substncias
pouco definidas

Exemplos: extrato de levedura, extratos vegetais, hidrolisados de casena, peptona e


triptona. A tendncia atual em pesquisa de substitu-los por meios de composio
definida.

Materiais inertes

Utilizados como suporte. Exemplos: agar, agarose, outros polissacardeos (Gelrite,


Phytagel), l de vidro, papel de filtro, areia, esponjas de poliestireno.

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O CULTIVO DE CLULAS E TECIDOS

OS MEIOS DE CULTURA
Um meio de cultura inclui gua, uma fonte de carbono, substncias inorgnicas (sais minerais),
vitaminas, hormnios e fatores reguladores do crescimento (Tabela 7.1). Alguns desses componentes
podem ser substitudos por misturas pouco definidas, mais econmicas ou simples de manipular (gua
de coco, suco de tomate, suco de laranja). Geralmente, o pH do meio varia entre 5,0 e 6,5.
A composio do meio de cultura muda em funo das necessidades de cada espcie. O crescimento
e a diferenciao celular so controlados mediante as substncias reguladoras de crescimento (Tabela
7.1). De um modo geral, se a proporo entre citocininas e auxinas for maior que 1, desenvolvem-se
brotos, se for menor, razes e, se for igual, calos.
A incubao ocorre a uma temperatura entre 23 e 28C, com 12 a 14 horas dirias de iluminao.
AS ETAPAS DO PROCESSO
Cultivam-se assepticamente os explantes em meios de composio adequada, possibilitando a
regenerao direta da planta. O processo envolve quatro etapas:

A. Estabelecimento de uma cultura assptica.


Uma vez retirados da planta-me, os explantes so desinfetados com um agente qumico,
geralmente hipoclorito de sdio, que mais tarde retirado mediante sucessivas lavagens com gua
estril. A transferncia dos explantes para o meio de cultura realizada em condies asspticas
semelhantes s do cultivo de microrganismos (Figura 7.2). A incubao ocorre a uma temperatura
entre 23 e 28C, com 12 a 14 horas dirias de iluminao
B. Multiplicao.
Dividem-se e transferem-se os propgulos para um meio de multiplicao, de maneira a se obter
numerosas subculturas (Figura 7.3).
C. Preparao das plntulas para a transferncia ao solo.
Transferem-se as plntulas das subculturas para um meio de enraizamento onde, alm de desenvolver
razes, enrijecem e comeam a fotossintetizar.
D. Aclimatao.
Transferncia das plntulas, primeiro para o solo ou para algum outro substrato, mais tarde para uma
casa de vegetao. Protegidas da iluminao solar direta, elas aumentaro sua capacidade
fotossinttica adaptando-se lentamente s condies ambientais.
AS DIFERENTES MODALIDADES
A CULTURA DE MERISTEMAS
A regenerao de uma planta pode ocorrer a partir da gema apical onde se encontra o meristema, um
tecido embrionrio a partir do qual se formam todos os outros tecidos das plantas (Figura 7.4). Os
exemplos citados na bibliografia sobre o cultivo de meristemas so, no mnimo, impressionantes. Se
um tubrculo de inhame de 100 g produz 25 kg de tubrculos em dois anos, por micropropagao
produzir 300.000 kg; a partir de uma nica gema apical podem-se obter 4.000.000 de cravos em um
ano.

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Associando a cultura de meristemas com a termoterapia (incubao a 32-340C, por um tempo


determinado), obtm-se estoques de plantas livres de vrus e de outros patgenos. Com este mtodo
so recuperadas algumas plantas que s se reproduzem naturalmente pela via assexuada e se
encontram ameaadas de extino, devido contaminao por vrus.
Esta modalidade de cultivo permite a multiplicao de espcies que se reproduzem lenta e/ou
dificilmente (orqudeas) e o aceleramento da produo de mudas em plantas com ciclo anual ou
bianual. Outra variao a microenxertia, que se aplica s essncias florestais (eucalipto) e s rvores
frutferas (citros). A tcnica gera uma alta produtividade de mudas sadias, que so cultivadas em pouco
espao (mais de 1.000 plantas / m2) sem depender dos fatores climticos e da poca do ano.
Do ponto de vista econmico, o custo destas mudas alto porque a cultura em meio slido
necessita um trabalho minucioso e mo de obra especializada. A multiplicao dos propgulos em
biorreatores, anlogos aos fermentadores microbianos, visa reduzir os custos. Ao modelo tradicional
de ps giratrias que danifica os tecidos e as clulas, preferem-se pequenas cubas de 1 a 5 l onde os
propgulos permanecem em sistemas de imerso permanente ou temporria.
Apesar dos custos, a tecnologia interessante quando se planeja introduzir uma espcie em uma
regio determinada porque elimina qualquer contaminao prvia. Tambm interessante para iniciar
a propagao vegetativa com mudas certificadas, visando a amplificao posterior dos cultivos.
--------------FIGURA 7.2. O procedimento a seguir para se obter uma cultura assptica no laboratrio

Separao
dos explantes

Esterilizao

Lavados

Dissecao
e semeadura

Incubao

gua + detergente
+ hipoclorito de sdio

gua estril

FIGURA 7.3. Obteno de subculturas a partir de explantes nodais

Planta-me

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Condies asspticas, 20-250C, na luz

O CULTIVO DE CLULAS E TECIDOS

A CULTURA DE CALOS
Um calo uma massa de clulas desdiferenciadas que prolifera de maneira irregular em resposta aos
ferimentos em rgos e tecidos, formando in vivo um tecido tumoral. A semeadura in vitro de um
explante em meio adequado gera um calo que pode ser mantido indefinidamente, com a condio de
proceder a uma subdiviso e transferncia peridica a um meio nutriente com a mesma composio.
Se o calo for transferido a outro meio com uma concentrao diferente de hormnios, formar-se-o
rgos ou embries, a partir dos quais podero ser regeneradas numerosas plantas (Figura 7.5).
A cultura de calo a modalidade alternativa para plantas que no podem ser propagadas
diretamente a partir de meristemas e, por isso, menos conveniente para micropropagao. Contudo,
sua utilizao inevitvel no caso de algumas espcies economicamente importantes (cereais,
leguminosas, forrageiras, espcies florestais e palmeiras tropicais).
--------------FIGURA 7.4. A cultura de meristemas

Gema apical

Meristema

Transferncia a um meio
de diferente composio

Planta-me

Cultura de meristema

Formao de rgos

Planta-filha

FIGURA 7.5. As diferentes possibilidades dos cultivos de calos

Planta-me

Explante

Calo

Formao de rgos

Planta-filha

Metablitos
secundrios

Biorreator

Clulas

Embrioides

Sementes artificiais

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Diferentemente das outras modalidades de cultura de tecidos, na cultura de calos a proliferao


celular est acompanhada por um aumento das variaes genticas e da instabilidade cromossmica
(variao somaclonal). Esta permite a seleo de variedades de plantas com propriedades novas, tais
como a resistncia ao estresse, ao ataque de insetos, a patgenos, a herbicidas, a concentraes
salinas elevadas, a molculas qumicas (Al, Mn). A variabilidade pode ser aumentada pela utilizao de
agentes mutagnicos.
A CULTURA DE CLULAS E RGOS VEGETAIS EM BIORREATORES
A desagregao de um calo em meio lquido gera suspenses de clulas, que so cultivadas em
biorreatores industriais para produzir metablitos secundrios ou embrioides. Os primeiros so
compostos naturais considerados produtos de Qumica Fina, de alto valor agregado no mercado. Tratase de alcaloides, de glicosdeos cardacos, de substncias antitumorais e antimicrobianas, de
hormnios esteroides etc. para a indstria farmacutica e, tambm, de corantes, adoantes e aromas
para as indstrias alimentcia e cosmtica.
As sementes artificiais so embrioides, isto , embries formados a partir de clulas somticas,
encapsulados em um gel com nutrientes e envoltos em plstico biodegradvel. Como estas sementes
se desenvolvem normalmente quando semeadas na terra, uma das aplicaes desta tecnologia a sua
disperso por avies, ou por drones, para o reflorestamento de regies de difcil acesso.
No incio da dcada de 1990, gerou-se uma enorme expectativa comercial em relao
possibilidade de substituir os mtodos tradicionais de extrao ou de sntese pela produo mediante
o cultivo de suspenses celulares em biorreatores. Vrios estudos estimaram as condies necessrias
para que a sntese ou a bioconverso de compostos naturais em produtos de alto valor agregado fosse
vantajosa. Os clculos mostraram que, se o mercado fosse suficientemente amplo e o valor do produto
superasse os US$ 500 ou 1.000 por kg, a produtividade do sistema deveria de ser igual ou superior a
um grama por litro de cultura celular. Essa condio difcil de alcanar.
Existem numerosas dificuldades tcnicas. As clulas vegetais so grandes (100 m) e sedimentam
com facilidade. A tendncia a formar agregados as torna muito sensveis ao cisalhamento. Como o
crescimento lento, os riscos de contaminao aumentam. Tambm existem problemas relacionados
com a transferncia de oxignio.
Vrios so os modelos de biorreatores para o cultivo de clulas vegetais, entre os quais o tradicional
de ps giratrias e outros preferveis de tipo air-lift ou de leito fluidizado. A conduo do processo
pode ser descontnua, semicontnua ou contnua; neste ltimo caso, com clulas imobilizadas. A
escolha de uma modalidade ou outra de cultivo depende da substncia estar, ou no, associada ao
crescimento celular e, tambm, de se tratar de um produto intra ou extracelular.
O cultivo de rgos e especialmente de razes transformadas (hair roots) tem dado bons resultados,
apesar de poucas iniciativas terem alcanado um nvel comercial. Entre elas, a produo de shikonina
a partir de razes (Lithospermum erythrorhizon) pela empresa Mitsui Petrochemical Ind. Ltd.; de
gingenosdeo (Panax ginseng) e de purpurina (Rubia akane) por Nitto Denko Corp.; e de paclitaxel
(Taxos cuspidata), comercializado como Taxol por Phyton Inc., uma empresa associada a Bristol-Myers
Squibb.
Espera-se o estabelecimento das bases de uma agricultura molecular combinando o
desenvolvimento de novos processos industriais com a engenharia metablica das clulas. Por
enquanto, as aplicaes se restringem produo de alguns frmacos e de aditivos para a indstria de
alimentos (flavorizantes, corantes e aromas).

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O CULTIVO DE CLULAS E TECIDOS

FIGURA 7.6. As possibilidades do cultivo de clulas vegetais

---------------

MELHORAMENTO E CONSERVAO DA BIODIVERSIDADE VEGETAL


Vrias modalidades de cultura de tecidos contribuem para facilitar a tarefa de melhoramento (Figura
7.6). O mtodo gentico tradicional, isto , a autofecundao das plantas por vrias geraes, demora
oito ou dez anos para obter linhagens puras (homozigotas), em que se manifestem os caracteres
recessivos. Esse tempo pode se reduzir a meses mediante a cultura de anteras, gerando-se plantas
haploides (n cromossomos), que, tratadas com colchicina, originam diretamente plantas diploides (2n)
homozigotas. Como as plantas resultantes destes cruzamentos geram sementes que dificilmente se
desenvolvem, frequentemente necessrio retirar os embries do resto da semente e proceder a sua
recuperao mediante a cultura in vitro.
Os protoplastos se formam por digesto enzimtica da parede celular, que poder ser regenerada
novamente no meio de cultura. Durante o perodo em que a clula est sem a parede celular, pode-se
introduzir DNA exgeno (transformao) ou fusionar protoplastos de diferentes cultivares ou espcies
(hibridizao somtica).
Protoplastos, clulas, calos, gemas apicais e laterais, meristemas, sementes, embries somticos e
zigticos, todos podem ser congelados em nitrognio lquido a 1960C. A criopreservao facilita a
preservao de numerosas plantas ornamentais, frutferas, oleaginosas, leguminosas, medicinais e
aromticas.
Finalmente, deve-se destacar a importncia destas tcnicas de cultura de clulas e tecidos vegetais
para a conservao em bancos de germoplasma, tanto das espcies cultivadas como das espcies
selvagens. A conservao da biodiversidade importante no s do ponto de vista do melhoramento
agronmico como do farmacolgico, j que a maioria dos medicamentos de que dispomos contm
princpios ativos extrados de plantas.
A DIFUSO DA TECNOLOGIA
As tcnicas de cultura in vitro de vegetais facilitam o melhoramento gentico das variedades
comerciais e representam uma etapa indispensvel na obteno de uma planta transgnica, sendo

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rapidamente assimiladas por empresas e instituies de pesquisa e desenvolvimento. Numerosas


empresas as utilizam no mundo todo para garantir a qualidade gentica e fitossanitria das mudas e
sementes comercializadas.
Em Cuba, por exemplo, o IBP (do espanhol, Instituto de Biotecnologia de las Plantas) desenvolveu,
junto com outros centros cientficos, protocolos para batata, cana-de-acar, pltano, banana, goiaba,
abacaxi, maracuj etc. O IBP est associado a uma rede de 15 biofbricas com capacidade de produzir
60 milhes de plntulas in vitro e sementes artificiais.
Esta tecnologia representa, na Amrica Latina, uma corrente comercial da biotecnologia agrcola,
com ampla difuso na olericultura, na hortifruticultura, na floricultura e na propagao de plantas
ornamentais, assim como na produo de plantas de interesse industrial (cana, caf) e de mudas de
essncias florestais para as indstrias de papel.
A MANIPULAO IN VITRO DAS CLULAS ANIMAIS
AS PRIMEIRAS TENTATIVAS
O primeiro experimento de cultivo de clulas animais data de 1885, quando W. Roux manteve uma
seo de placa medular de frango em soluo salina por alguns dias. Em 1907, R. Harrison conseguiu
cultivar clulas de embrio de r no sistema conhecido como gota pendente. Pouco depois, o
cirurgio A. Carrel conseguiu cultivar clulas de corao de galinha e manter os cultivos durante 34
anos, apesar das dificuldades causadas pelas contaminaes bacterianas.
Em 1961, L. Hayflick e PS Moorhead demonstraram que as linhagens normais de clulas tm um
nmero finito de divises e reavaliaram o experimento de A. Carrel. Como o crescimento das clulas
era estimulado mediante a adio de extratos embrionrios de frango, possvel que, ao longo dessas
trs dcadas, numerosas clulas de frango foram acrescentadas ao cultivo original.
Dois avanos fundamentais permitiram o progresso das tcnicas de cultivo de clulas animais: o
uso de enzimas proteolticas para liberar as clulas da matriz tecidual (1916) e o desenho de meios
definidos (dcada de 1950). Em 1955, d-se incio produo da primeira vacina da poliomielite em
cultivo de clulas de rim de macaco, desenvolvida por J. Salk. A partir desse momento, a tecnologia
considerada madura para o lanamento de outros produtos.
AS DIFERENTES MODALIDADES
Uma das modalidades de importncia clnica a cultura de linfcitos para a anlise do caritipo,
visando detectar as alteraes cromossmicas estruturais e numricas que possam ser a causa de
distrbios no funcionamento do organismo.
Os linfcitos extrados do paciente so colocados em um meio lquido que induz a diviso celular.
A adio de colchicina inibe a formao das fibras do fuso mittico, bloqueando as clulas na metfase.
Um choque hipotnico provoca a lise das clulas e libera os cromossomos (Figura 7.7 A).
Nem todas as clulas, contudo, se desenvolvem bem em suspenso. Clulas derivadas de rgos
como o rim ou o fgado devem primeiro ser separadas, mecnica ou enzimaticamente, da matriz
tecidual. Alm de nutrientes, precisam aderir a um suporte inerte (vidro, plstico etc.) para crescer e
o fazem formando uma monocamada de clulas.
Uma vez esgotados o espao e os nutrientes, uma frao dessa cultura primria ser transferida
para outro recipiente com meio nutriente, onde crescer at que seja necessrio repetir o
procedimento. Assim, por repiques sucessivos, uma cultura primria originar vrias culturas
secundrias (Figura 7.7 B).

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O CULTIVO DE CLULAS E TECIDOS

Entretanto, diferena dos microrganismos, que podem ser repicados indefinidamente, as clulas
animais normais sofrem um tipo de morte programada (apoptose) depois de 20 a 80 divises. Devese ento reiniciar o cultivo com uma nova amostra.
Existem algumas excees que escapam dessa limitao, como as clulas extradas de tumores ou
as clulas-tronco; e tambm os linfcitos B, imortalizados por infeco com o vrus de Epstein-Barr ou
por fuso com clulas de mieloma (hibridomas). Estas clulas, que podem crescer em suspenso ou
em camada, no dependem de um suporte onde aderir nem demostram inibio por contato,
dividindo-se a cada 12-24 horas, em vez de 24-96 horas como as clulas normais.
OS MEIOS DE CULTIVO
O cultivo de clulas animais s comeou a se desenvolver com sucesso na dcada de 1950, quando H.
Eagle conseguiu definir quais os nutrientes indispensveis para o crescimento celular (Tabela 7.2).
Basicamente, um meio para o cultivo de clulas animais inclui gua, sais minerais, aminocidos,
vitaminas, glicose, soro humano, bovino ou de cavalo (fatores de crescimento) e antibiticos (para
prevenir as contaminaes microbianas).
--------------FIGURA 7.7. As culturas de clulas de origem animal
B.

Etapas da cultura de leuccitos para a anlise do caritipo

Amostra de
sangue com
anticoagulante

Separao dos
leuccitos por
centrifugao

Cultivo dos
leuccitos

Adio de colchicina
e lise celular

Fixao e colorao
(Bandeamento)

Observao
e comparao
B. Etapas da cultura de clulas a partir de um fragmento de tecido

Meio de cultivo

Suspenso
celular

Desagregao
mecnica ou enzimtica
(tripsina, colagenase)

Cultura
primria

Cultura
secundria
Repique

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O soro bovino fetal um suplemento de baixo custo, geralmente adicionado na proporo de 2-10%.
Alm de melhorar as caractersticas fsico-qumicas do meio, o soro facilita a aderncia ao suporte e
fornece nutrientes, hormnios, fatores de crescimento etc. Em compensao, a qualidade pode variar
de um lote a outro, e a riqueza de nutrientes favorece a contaminao. O soro tambm dificulta os
estudos imunolgicos e a purificao dos produtos proteicos.
Em um meio definido, o soro substitudo por quantidades determinadas de diversas substncias
inorgnicas e orgnicas, algumas destas ltimas produzidas por engenharia gentica em bactrias ou
leveduras.
AS LINHAGENS CELULARES
Nas Colees de Culturas encontram-se linhagens celulares de diversos tipos, conservadas por
criopreservao (Tabela 7.3).
A linhagem de clulas HeLa, uma das mais utilizadas, continua sendo cultivada desde a dcada de
1950, quando foi isolada do carcinoma uterino de Henrietta Lacks, uma mulher negra e pobre de 31
anos, no Hospital Johns Hopkins (Maryland, Estados Unidos).
--------------TABELA 7.2. Os componentes de um meio de cultura bsico para clulas animais
COMPONENTES

CARACTERSTICAS E EXEMPLOS

gua

Desmineralizada, destilada.

Fonte de carbono

Glicose.

Substncias inorgnicas

NaCl, KCl, CaCl2, MgCl2. 6H2O, NaH2PO4.H2O, NaHCO3.

L aminocidos

Arginina, cistina, fenilalanina, glutamina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina,


treonina, triptfano, tirosina, valina.

Vitaminas

Biotina, cido flico, colina, nicotinamida, cido pantotnico, piridoxal, riboflavina,


tiamina.

Misturas de substncias
pouco definidas

Soro animal de diversa origem, inclusive humano.

Outros

Antibiticos (penicilina, estreptomicina) e vermelho de fenol (pH 7,2-7,4).

TABELA 7.3. Origem e utilizao de algumas linhagens celulares


CLULAS

ORIGEM

APLICAES

HeLa(*)

Carcinoma cervical humano

Pesquisa

MDCK

Rim de cachorro

Produo de vacinas veterinrias

3T3

Tecido conjuntivo de camundongo

Tcnicas laboratoriais

Nawalwa

Linfoma humano

-interferon

COS-7

Rim de macaco verde africano

Estudos sobre multiplicao viral e expresso

VERO (**)

Rim de macaco verde africano

Produo de vacinas humanas

CHO

Hamster

Estudos nutricionais e de expresso gnica

(*) Clulas originadas em 1951, provenientes do carcinoma uterino de Henrietta Lacks.


(**) Esta linhagem, oriunda de rim de macaco-verde africano (Cercopithecus aethiops) est aprovada pela OMS para a
produo de vacinas humanas.

80

O CULTIVO DE CLULAS E TECIDOS

A histria de Henrietta Lacks levanta vrias questes de biotica. Sem o seu consentimento ou o de
seus parentes, as clulas foram distribudas a laboratrios do mundo inteiro com o nome fictcio de
Helen Lane e, durante anos, foi negada a sua famlia qualquer forma de compensao que aliviasse sua
situao econmica. Por outro lado, experimentos da dcada de 1960 em que se injetaram clulas
HeLa em presidirios constituem uma das experincias mais antiticas da histria da cincia.
Alm de ser mais difcil detectar uma contaminao por clulas que outra por bactrias ou fungos,
as clulas HeLa so uma fonte de contaminao temvel, devido facilidade e velocidade com que se
multiplicam. Em 1966, o geneticista S. Gartler descobriu que 18 das culturas de clulas mais usadas
continham o marcador glicose-6-fosfato desidrogenase (G6PD-A), caracterstico da populao negra
americana. A partir de esse momento, as linhagens celulares so monitoradas com marcadores
especficos.
CONDIOES DE CULTIVO
As clulas devem ser isoladas, inoculadas, e cultivadas assepticamente em um meio com os nutrientes
essenciais (aminocidos, carboidratos, vitaminas, sais minerais) adicionado de hormnios e fatores de
crescimento, ambiente fsico-qumico regulado (pH, presso osmtica, temperatura entre 350 a 370 C,
umidade, proporo definida de O2 e CO2). A viabilidade das clulas avaliada microscopicamente no
hemocitmetro, aps colorao das clulas mortas com azul tripano.
Uma das limitaes destas tcnicas que o crescimento sempre ocorre em um plano, o que dificulta
a compreenso do que acontece dentro de um organismo, por isso trabalhos recentes desenvolvem
outras formas de cultivo que permitam o desenvolvimento em 3D.
A riqueza do meio de cultivo e a diferena na velocidade de crescimento entre uma bactria e uma
clula favorecem as contaminaes das culturas. O risco de contaminao com algum patgeno se
estende ao operador, especialmente se o trabalho envolve uma cultura primria de clulas humanas
ou de primatas. O risco potencial abrange os vrus HIV e HBV em amostras de sangue, bactrias como
Mycobacterium tuberculosis em amostras de pulmo, vrus SV40 em clulas transformadas e clulas
tumorognicas.
DO LABORATRIO INDSTRIA
A cultura in vitro de clulas animais a rota seguida para a manufatura em grande escala de vrios
produtos, tais como as vacinas e os anticorpos monoclonais. Tambm adequada para a produo de
citocinas (linfocinas, interferones, eritropoietina) e de outras protenas de origem recombinante (fator
ativador de plasminognio, p.ex.) que, por exigir modificaes ps-traducionais complexas, no podem
ser produzidas em bactrias ou leveduras transformadas.
Na hora de passar da escala do laboratrio escala industrial, algumas consideraes devem ser
levadas em conta. A cultura de clulas animais exige um cuidado extremado, meios de cultivo
complexos e caros e condies muito rigorosas. Como as clulas se dividem lentamente (a cada 20
horas aproximadamente), a assepsia deve ser mantida durante perodos prolongados. A demanda de
oxignio alta, e as clulas so muito frgeis e sensveis ao cisalhamento. Finalmente, as
concentraes celulares so baixas, o que diminui a produtividade e a rentabilidade do processo.
Embora algumas clulas possam crescer livremente em suspenso, outras precisam de um suporte
ao qual aderir. No biorreator, este problema pode ser resolvido de diversos modos: mediante o
confinamento das clulas dentro de membranas semipermeveis, imobilizao em gis ou cpsulas ou
fixao sobre suportes, tal como pequenas partculas de 100 a 400 m em vidro, plstico ou dextrina,
em modelos de fermentadores anlogos aos representados no captulo anterior.

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Biorreatores de tamanho pequeno (at 15 l) e processos descontnuos apresentam menos problemas


de contaminao, j os de maior tamanho (at 1.000 l) exigem a substituio da agitao mecnica por
sistemas de tipo air lift ou leito fluidificado. Evita-se a apoptose ou morte celular renovando
periodicamente parte do meio para retirar os produtos excretados.
Nos ltimos anos, as tcnicas de cultura in vitro de clulas animais deram um amplo impulso s
pesquisas bsicas e aplicadas, aos testes de diagnstico, s tcnicas de fertilizao in vitro, produo
de compostos biolgicos (protenas recombinantes), de tecidos para transplante e de vacinas para uso
humano e veterinrio. Nos estudos toxicolgicos, esta tecnologia substitui, ao menos parcialmente, a
experimentao com animais, uma atividade que suscita forte resistncia na sociedade devido aos
questionamentos ticos levantados.

82

CAPTULO 8

A TECNOLOGIA DO DNA

AS FERRAMENTAS DISPONVEIS
A tecnologia do DNA compreende uma srie de procedimentos para extrair, fragmentar, sintetizar,
marcar, identificar, amplificar e sequenciar o DNA. Trata-se de um conjunto de ferramentas de uso
rotineiro em laboratrios, geralmente em sistemas automatizados especialmente desenhados para
efetuar rapidamente um nmero altssimo de operaes.
O primeiro passo a dar no campo da biologia molecular a extrao dos cidos nucleicos. Os
sistemas tradicionais coexistem com mtodos de extrao em fase slida, geralmente oferecidos como
kits por numerosas empresas. Estima-se que o mercado de extrao e purificao de cidos nucleicos
supere os 3.8 milhes de dlares em 2020.
AS NUCLEASES OU ENZIMAS DE RESTRIO
Entre as numerosas enzimas utilizadas diariamente nos laboratrios, as nucleases merecem ateno
especial porque quebram as ligaes entre os nucleotdeos de uma cadeia de DNA. As exonucleases
comeam pelas extremidades enquanto as endonucleases cortam a molcula por dentro. Pertencem
a este ltimo grupo as enzimas de restrio que reconhecem stios especficos no DNA.
As enzimas de restrio so produzidas por bactrias como uma arma de defesa contra o ataque
de vrus (bacterifagos): cortando o DNA viral impedem sua multiplicao. O DNA bacteriano no
atacado por suas prprias enzimas, seja porque faltam as sequncias correspondentes, seja porque
estas esto camufladas pela adio de um grupo metila.
Desde sua descoberta por Werner Arber, na dcada de 1960, j foram isoladas centenas de enzimas
de restrio que agem como tesouras qumicas ao reconhecer, como os seus pontos-alvo,
determinadas sequncias de 4 a 8 bases. Por exemplo, a enzima EcoRI, cujo nome deriva de
"Escherichia coli linhagem RY13 (R), primeira endonuclease a ser descoberta" corta o DNA em dois
pedaos (Figura 8.1). A sequncia um palndromo porque pode ser lida do mesmo modo (GAATTC)
nos dois sentidos (5- 3 ou 3- 5), de forma anloga a frases como Amor a Roma (Figura 8.1).
Assim como h enzimas que cortam o DNA com pontas lascadas, outras fazem um corte reto.
Outras enzimas colam os fragmentos, restabelecendo a ligao entre os nucleotdeos (ligases).

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A ELETROFORESE DO DNA
A eletroforese separa os fragmentos de DNA obtidos com uma enzima de restrio. As amostras so
colocadas em um gel no qual se aplica um campo eltrico. Os fragmentos de DNA carregados
negativamente se movimentam na direo do polo positivo. Ao encontrar uma resistncia menor, os
fragmentos menores migram mais rapidamente (Figura 8.2).
--------------FIGURA 8.1: As enzimas de restrio (EcoRI corta o DNA na sequncia palindrmica GAATTC)

G A A T T C

AATTC

C T T A A G

C T T A A

FIGURA 8.2. A eletroforese do DNA

A. Sistemas de eletroforese
Fonte de eletricidade
Vertical

Horizontal
Ctodo
Amostra

Tampo
Marco de plstico

Fonte de
eletricidade

Gel

Gel

Tampo

Tampo

Eletrodo

nodo
C. Migrao de diferentes amostras no gel

Eletrodo
B. Formao de bandas por migrao
dos fragmentos de restrio no gel

Fragmentos
maiores

Amostra
Fragmentos
de DNA

Migrao
Eletrodo

84

Fragmentos
menores

A TECNOLOGIA DO DNA

O poder de separao varia com o suporte (gel de agarose ou de poliacrilamida) e com o tamanho do
poro, que depende da concentrao do meio. Tambm varia com as caractersticas do campo eltrico
aplicado. Os fragmentos de restrio formam bandas que podem ser observadas na luz ultravioleta,
aps colorao com uma substncia fluorescente. Fragmentos de tamanho conhecido inseridos no gel,
maneira de uma rgua molecular, servem como padro de comparao para estimar o tamanho das
bandas do DNA analisado.
Uma das primeiras aplicaes da eletroforese dos fragmentos de restrio foi o estudo dos
polimorfismos. A modificao do stio de restrio de uma molcula de DNA (como, por exemplo, de
GAATTC para GAACTC) origina fragmentos de tamanhos diferentes, denominados RFLPs ou rifleps
(do ingls, restriction fragment length polymorphism). Os RFLPs so marcadores que podem ser
estudados do mesmo modo que um gene que determina um carter visvel ou uma modificao
bioqumica (Figura 8.3).
--------------FIGURA 8.3. Os polimorfismos

A. Polimorfismo de restrio (RFLPs)


Uma mutao pode gerar dois alelos diferentes, A1 (nenhum stio de restrio) e A2 (um stio de restrio). Na
eletroforese, o DNA dos indivduos A1A1 ser visualizado como uma banda, o de A1A2 como trs bandas e o de A2A2 como
duas bandas.
A seta indica o stio de restrio

Eletroforese

Caso I (Homozigoto)

Caso II (Heterozigoto)

Caso III (Homozigoto)

B. Polimorfismo de VNTRs presentes no mesmo fragmento de restrio, em 3 indivduos diferentes.

Caso I (6,2)

Caso II (3,3)

Caso III (4,5)

VNTR

Stio de restrio

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HIBRIDIZAO E SONDAS GNICAS


Determinadas condies fsicas (temperatura, pH ou concentrao salina) quebram as pontes de
hidrognio entre as bases complementares, causando a dissociao dos dois filamentos de DNA. Em
condies favorveis, essas ligaes se restabelecem e os filamentos se associam novamente.
A reao de associao ou hibridizao tambm ocorre entre filamentos de DNA ou de RNA de
diferentes origens e tamanhos, sempre que houver algumas sequncias complementares. Em funo
desta propriedade se constroem filamentos simples de DNA ou RNA de sequncia conhecida, que so
usados como sondas para reconhecer a presena de uma sequncia complementar em um
cromossomo ou em um fragmento de DNA (Figura 8.4).
-------------FIGURA 8.4. Hibridizao de uma sequncia de DNA com uma sonda complementar marcada

Molculas de DNA

Sonda radioativa ou
fluorescente

Dissociao

Reassociao

--------------

O MTODO DE SOUTHERN
Em 1975, E.M. Southern descreveu um mtodo para analisar fragmentos de restrio com sondas
especficas. As bandas de DNA cromossmico do gel de eletroforese so transferidas a uma membrana
de nilon ou de nitrocelulose e o alvo reconhecido por hibridizao com uma sonda radiativa de DNA,
registrando-se o resultado em um filme apropriado (Figura 8.5).
O mtodo, denominado Southern blotting, aplicado no diagnstico de doenas genticas, algumas
das quais causadas por mutaes que modificam o padro de bandas, ao eliminar ou criar um stio de
restrio. Mtodos anlogos foram desenhados para estudos de RNA (Northern blotting) e de
protenas (Western blotting). No primeiro caso, a sonda pode ser um fragmento de cido nucleico, mas
no segundo a sonda um anticorpo especfico.
O FINGERPRINT
Descrita por A. Jeffreys em 1985, trata-se de uma variante do mtodo de Southern que focaliza as
regies do genoma que no se expressam e se repetem dispersas ao longo do genoma. Denominadas
VNTR ou vinters (do ingls variable-number tandem repeats), o nmero de repeties pode variar de
um cromossomo ao seu homlogo (Figura 8.3). Sendo assim, os fragmentos de restrio
correspondentes tm um tamanho diferente, o que pode ser visualizado por eletroforese.
Ao aumentar o nmero de sondas para o reconhecimento de vrios tipos de VNTRs, obtm-se um
padro de bandas individual, parecido com o cdigo de barras do comrcio. Assim como as impresses

86

A TECNOLOGIA DO DNA

digitais identificam as pessoas, as sondas revelam a identidade gentica de cada um de ns. O


procedimento, no por acaso chamado de Fingerprint, encontrou rpida aplicao tanto na
investigao de paternidade (ou maternidade), como na identificao policial ou forense.
A SNTESE E AMPLIFICAO DE DNA
SNTESE DE OLIGONUCLEOTDEOS
A sntese de oligonucleotdeos de DNA e RNA se realiza hoje em mquinas automatizadas
(sintetizadores) capazes de construir, em poucos minutos, molculas com dezenas de pares de bases
(Figura 8.6). Estes oligonucleotdeos podem ser utilizados como sondas ou como primers para a PCR
(ver um pouco mais adiante).
-------------FIGURA 8.5. A tcnica de Southern
A sonda revela a presena de uma sequncia complementar. A desapario de um stio de restrio por
mutao permite completar o diagnstico de anemia falciforme em I e II.

1. Preparao dos fragmentos de restrio

Trs amostras de DNA de diferente


procedncia + enzima de restrio.

Separao dos fragmentos de restrio


por eletroforese.

2. Eletroforese

Papel absorvente
Membrana
Gel

3. Transferncia

Buffer
Papel de filtro para
garantir a hidratao

O DNA desnaturado, e os fragmentos


unifilamentares so transferidos a uma
membrana de nitrocelulose.
Suporte

Buffer

4. Sonda radioativa

Acrescenta-se uma sonda unifilamentar


ao gene procurado. Esta hibridiza com
o fragmento portador da sequncia
complementar.
5. Autorradiografia

Depois de lavar, para eliminar o excesso


de reagente, coloca-se sobre o filtro um
filme sensvel radioatividade.

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SNTESE DE cDNA
A transcrio da informao gentica no sentido RNA DNA pela transcriptase reversa garante aos
vrus com genoma de RNA (HIV, por exemplo) sua multiplicao no hospedeiro. Como ferramenta de
laboratrio, a transcriptase reversa possibilita a construo de filamentos de DNA complementares
(cDNA) a qualquer molcula de RNA (Figura 8.7). Diferente do gene original, no haver ntrons no
cDNA reconstrudo a partir de RNA.
-------------FIGURA 8.6. A sntese de oligonucleotdeos

Bloqueio

Suporte

O primeiro nucleotdeo
(Base 1) est fixado a um
suporte. Acrescentam-se os
nucleotdeos seguintes (Base
2), bloqueados no stio 5

O segundo nucleotdeo (Base 2) se


une ao nucleotdeo fixo. O bloqueio
em 5 determina a incorporao de
um nico nucleotdeo

Depois de eliminar por meio


de lavagem os nucleotdeos
que no se incorporaram na
cadeia, retira-se o bloqueio.

Reinicia-se o processo
com a incorporao do
nucleotdeo seguinte
(Base 3)

FIGURA 8.7. A sntese de cDNA por transcriptase reversa


DNA (com ntrons)

mRNA

Transcriptase reversa

Degradao do RNA

Sntese do filamento de DNA complementar


Dois filamentos de DNA, sem ntrons
cDNA

88

Peptdeo

A TECNOLOGIA DO DNA

A REAO EM CADEIA DA POLIMERASE


A reao em cadeia da polimerase (Polymerase Chain Reaction ou PCR) permite obter milhes de
cpias de DNA em poucas horas (Figura 8.8). Para isso, os elementos necessrios so: o DNA contendo
a sequncia que se deseja amplificar, desoxinucleotdeos dos quatro tipos (dATP, dTTP, dCTP e dGTP),
uma polimerase de DNA e os primers correspondentes. Estes ltimos so pequenos fragmentos
sintticos de DNA complementares s extremidades da sequncia-alvo, indispensveis para que a
polimerase comece a sintetizar DNA.
A chave do processo a DNA-polimerase, uma enzima estvel a altas temperaturas que permite
bactria Thermus aquaticus sobreviver em guas termais. Atualmente, esta enzima se produz por
engenharia gentica.
-------------FIGURA 8.8. A reao em cadeia da polimerase

A. Os elementos necessrios

Fragmento de DNA

Desoxinucleotdeos

Enzima taq-DNA polimerase

Primers

Os primers so pequenos fragmentos de DNA, complementares s extremidades da sequncia que se quer amplificar
e indispensveis para que a enzima DNA-polimerase inicie a sntese de DNA.
B. A amplificao do DNA
PRIMEIRO CICLO

950C

Molcula
original

680C

Dissociao dos
filamentos
complementares

720C

Associao dos
primers com a
sequncia
complementar

A polimerase inicia
a sntese de DNA a
partir do primer

2 cpias

SEGUNDO CICLO

2 cpias

4 cpias

TERCEIRO CICLO

4 cpias

8 cpias

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Em um ciclo pontuado por mudanas de temperatura, os filamentos de DNA so dissociados e


anelados com os primers, possibilitando a sntese do resto da sequncia pela polimerase. Repetindo
muitas vezes o ciclo, gera-se em pouco tempo um nmero altssimo de cpias que podem ser utilizadas
em qualquer tipo de anlise. Um termociclador pode realizar 25 ciclos em menos de uma hora,
amplificando 105 vezes o fragmento de DNA.
A empresa Cetus comprou de seu inventor, K. Mullis, a patente da PCR por U$S 10.000, vendendoa pouco tempo depois a Hoffmann-La Roche por U$S 300 milhes; hoje se trata de uma tcnica
corriqueira em qualquer laboratrio de Biologia Molecular e provavelmente nenhum dos dois fez um
bom negcio. Mais tarde, em 1993, Mullis recebeu o Prmio Nobel pela inveno da PCR.
Uma das grandes vantagens da PCR que no h necessidade de isolar previamente o fragmento
a ser amplificado, bastando conhecer as extremidades da sequncia e escolher os primers adequados.
Desenvolvendo-se de forma totalmente automatizada, o procedimento admite mais de vinte
variantes.
Como assinalado anteriormente em relao aos sintetizadores de oligonucleotdeos, uma das chaves
do xito da PCR o fato de ser um procedimento automatizado que se desenvolve em mquinas
rpidas e eficientes, resultado da integrao da Biologia Molecular com a Informtica e a Eletrnica.
Sendo uma tecnologia verstil, tem dado origem a mais de 20 variantes do procedimento inicial, todas
com aplicaes especficas e diferentes nveis de sensibilidade.
O sucesso da PCR se deve a sua extraordinria versatilidade, permitindo que seja utilizada, com
objetivos diversos, em campos to diferentes como a agricultura, a medicina veterinria, os estudos
ambientais, os testes de diagnstico e a medicina forense. Aplica-se tambm nos estudos
antropolgicos e evolutivos, tais como a extrao de DNA de mmias egpcias, de animais extintos
como o quagga (um tipo de zebra) ou de insetos presos em mbar 40 milhes de anos atrs.
O SEQUENCIAMENTO DO DNA
O sequenciamento de um fragmento de DNA outro procedimento de tipo iterativo que possibilita a
construo de mquinas capazes de realizar rapidamente a tarefa (Figura 8.9). O sequenciamento com
didesoxinucleotdeos um aprimoramento de Sanger (1977) do mtodo inicial de Maxam & Gilbert
(1973).
O DNA amplificado e incubado com DNA-polimerase, nucleotdeos normais e
didesoxinucleotdeos marcados. A sntese de DNA interrompida a cada vez que um
didesoxinucleotdeo incorporado, gerando fragmentos de diferente tamanho. Um sistema
automatizado permite identificar, na corrida eletrofortica, cada um dos quatro didesoxinucleotdeos
incorporados, fornecendo diretamente a sequncia do fragmento sequenciado.
Uma vez determinada a sequncia de vrias amostras, inicia-se a montagem da informao
armazenada nos bancos de dados. Esta etapa se realiza em supercomputadores, exigindo um
tratamento matemtico para ordenar as sequncias, preencher as lacunas e verificar os dados.
Existem sequenciadores automatizados em que o gel colocado nos capilares por um brao-rob
que acrescenta o DNA e efetua a limpeza depois da eletroforese. No ano 2000, tais braos permitiam
o tratamento de uma centena de amostras em 4 horas, sem exigir mais do que 15 minutos dirios de
ateno humana. No auge do estudo do genoma humano, uma empresa ligada a Celera (Biosystems
Applied) mantinha os computadores funcionando dia e noite, chegando a gastar U$S 1.000.000
mensais com eletricidade.
Apesar de ter possibilitado o estudo de numerosos genomas, a partir de 2006 o mtodo
automatizado de Sanger comeou a ser considerado pouco eficiente, surgindo a necessidade de
desenvolver uma nova gerao de tecnologias, mais rpidas e mais baratas.

90

A TECNOLOGIA DO DNA

FIGURA 8.9. O sequenciamento de um fragmento de DNA

1.

2.

Preparar numerosas cpias do fragmento a sequenciar


(tamanho aproximado: 500 pares de bases)
Incubar a preparao com as substncias necessrias para a sntese de filamentos complementares e
acrescentar alguns nucleotdeos, na forma didesxi, marcados com substncias fluorescentes de diferente cor.

Primer

3.

DNA-polimerase

Desoxinucleotdeos

Didesoxinucleotdeos

Iniciar a sntese dos filamentos complementares que


ser bloqueada quando, em vez de um desoxinucleotdeo,
se incorporar um didesoxinucleotdeo, porque estes no
formam ligaes fosfodister.

Sntese bloqueada devido incorporao de

4.

Depois de vrios ciclos teremos fragmentos de todos os tamanhos:

5.

Os fragmentos so separados por eletroforese. O sequenciador identifica cada um deles pela fluorescncia do
nucleotdeo didesxi incorporado e fornece a sequncia.

Fragmentos maiores

Migrao

Sequncia

Fragmentos menores

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Vrias tecnologias de sequenciamento next generation coexistem atualmente no mercado (454 Life
Sciences, Ion Torrents PGM, Pacific Biosciences RS and the Illumina MiSeq). O fator comum o
sequenciamento em paralelo dos fragmentos de DNA sobre um substrato slido (High throughput
sequencing). A leitura das bases incorporadas simultnea sua incorporao, no sendo necessrio
separar os fragmentos, como no mtodo didesxi.
Em 2006, os mtodos utilizados eram 500 vezes mais rpidos que os da dcada anterior. Hoje, alm
de serem ainda mais velozes, as tecnologias next generation derrubaram os custos do
sequenciamento. Se, em outubro de 2004, o custo do sequenciamento de 1 Megabase (1.000.000 de
pares de bases) era de US$ 1598,91, em abril de 2014 o preo era de US $ 0,05.
Essas tecnologias revolucionaram as pesquisas genticas e genmicas. Em consequncia, temos
uma enorme avalancha de dados possibilitando estudos comparativos e evolutivos de uma dimenso
inimaginvel alguns anos atrs. Tambm abre o caminho para estudos sobre as diferenas genticas
que afetam a sade e a doena.
OS ARRAYS
Como resultado do conhecimento acumulado sobre o genoma do homem e de outros organismos, j
podem ser estudados alguns aspectos relacionados com a expresso e a interao dos genes. Lidar
com um nmero enorme de informaes demanda novos avanos tecnolgicos, entre os quais a
construo de chips de DNA ou microarrays. Estes podem analisar em paralelo grandes quantidades
de material biolgico (HTS).
Em um tipo de microarray, os testes so processados em microplacas de poliestireno com um
nmero varivel de pequenas cavidades, cada uma delas cumprindo a funo de um tubo de ensaio.
Estas placas permitem realizar simultaneamente numerosos testes, utilizando uma quantidade mnima
de reagentes e automatizando a leitura dos resultados.
Um segundo tipo de dispositivo consta de at 100.000 sondas de DNA por centmetro quadrado,
fixadas mediante diferentes tecnologias (robtica, fotolitografia a uma lmina de vidro, nilon ou
slica). A hibridizao dessas sondas com as molculas de cidos nucleicos (cDNA) marcados ser
visualizada por varredura (scanner) como pontos fluorescentes e analisada com um software
apropriado para o tratamento da informao (Figura 8.10).
Escolhem-se as sondas entre os genes codificadores de protenas que se expressam na clula. Desse
modo, se excluem os genes que correspondem ao rRNA, aos tRNAs, s sequncias de controle e ao
DNA extragnico. A escolha de sequncias transcritas, denominadas ESTs (do ingls, expressed
sequence tags), aumenta as chances de detectar os genes que participam de alguma resposta
patolgica.
Os microarrays so utilizados nos estudos de expresso gnica e para o sequenciamento rpido de
oligonucleotdeos. O estudo simultneo de centenas de genes um caminho para desvendar as
interrelaes existentes entre eles e vrios aspectos do funcionamento do genoma.
Numerosas empresas fabricam arrays comercialmente; algumas estimam que em pouco tempo
sero construdos arrays do tamanho de uma moeda, contendo todo o genoma humano.
A CONSTRUO DE GENOMAS MNIMOS
Com o desenvolvimento da genmica e a apario de novas plataformas tecnolgicas e na interface
entre a biologia e a engenharia, nasce a biologia sinttica. Trata-se de uma nova rea de conhecimento
com finalidades prticas, estimulada pela chegada dos mtodos de sequenciamento next generation
e a existncia de plataformas tecnolgicas accessveis para a sntese de oligonucleotdeos.

92

A TECNOLOGIA DO DNA

FIGURA 8.10. Fundamentos da tecnologia de arrays


Se as sondas representarem ESTs, saberamos que os genes representados por B7, C2, D4, E10, G8 e H5 esto ativados. O
tamanho das sondas depende da tecnologia utilizada na construo do array. Observe-se que cada uma das sondas
representadas no desenho corresponde a um conjunto de molculas semelhantes.

Microarray com sondas (Oligonucleotdeos de DNA)


fixadas a um suporte

A partir do mRNA extrado, se prepara o DNA, que


marcado com uma substncia fluorescente

Hibridizao

Eliminao do cDNA marcado que no


emparelhar com nenhuma sonda

Varredura (scanner) para detectar


as sondas que hibridizaram com o cDNA

Resultado: Houve complementao com


as sondas B7, C2, D4, E10, G8 e H5

--------------

Na vanguarda deste movimento esto os pesquisadores do Instituto J. Craig Venter com a bactria
sinttica (Synthia, 2010). Na construo, unidades bsicas de DNA de Mycoplasma mycoides foram
introduzidas em uma bactria receptora de outra espcie, Mycoplasma capricolum, eliminando-se
posteriormente o genoma desta. Synthia se reproduz normalmente e carrega sequncias especficas
que confirmam sua origem artificial.
Bactrias especialmente desenhadas seriam de interesse para a indstria e para projetos de grande
envergadura, mesmo que hoje nos paream um tanto fantasiosos, como a colonizao de Marte.
Contudo, alguns aspectos resultam preocupantes. A sntese do vrus da plio (2002) e a ressurreio
do vrus da gripe espanhola levantaram inquietude em relao disseminao de material que possa
ser utilizado para elaborar armas biolgicas ou toxinas.
Outro aspecto de biossegurana a considerar o desenho de sistemas de conteno que impeam
a liberao de organismos sintticos no ambiente, seja utilizando sistemas bioqumicos no naturais,
como a introduo de benzopurinas ou benzopirimidinas no DNA, seja construindo ribossomos que

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reconheam cdons de 4 bases.


No leque de questes levantadas, destacam-se as seguintes: Quais os sistemas de conteno
necessrios para impedir a liberao no ambiente de novas formas de vida? Como seriam modificadas
as leis de propriedade intelectual? Quais as medidas a tomar em caso de acidente? Como impedir o
uso dual de equipamentos e organismos? Quais as implicaes ticas do desenho de seres vivos
diferentes?
Esperam-se da biologia sinttica avanos substanciais em medicina, indstria, energia e meio
ambiente, porm, ser essencial o monitoramento dos riscos para a biossegurana, a biosseguridade
e a biotica.

94

CAPTULO9

A ENGENHARIA GENTICA

O NASCIMENTO DA BIOTECNOLOGIA MODERNA


Ao trmino da Segunda Guerra Mundial, a Gentica e a Biologia molecular se desenvolveram a uma
velocidade tal que bastaram 25 anos para esclarecer os temas fundamentais: a estrutura dos cidos
nucleicos, o cdigo gentico, a ao dos agentes mutagnicos, a gentica dos microrganismos, a
estrutura e a sntese das protenas, a regulao gnica etc. nesse contexto de avanos muito rpidos
que devemos situar as primeiras experincias de engenharia gentica com a tecnologia do DNArecombinante.
A utilizao da palavra recombinante nos remete recombinao gnica, um fenmeno que
ocorre normalmente durante a meiose, devido permuta de fragmentos cromossmicos homlogos.
Mediante o corte e a unio de pequenos pedaos de DNA, a engenharia gentica cria novas
combinaes de genes, pertencentes ou no a indivduos de uma mesma espcie.
A engenharia gentica um instrumento valioso para o estudo dos genomas, a produo de
protenas em organismos modificados geneticamente e a gerao de organismos transgnicos com
propriedades novas.
AS PRIMEIRAS EXPERINCIAS
Em 1972, na Universidade de Stanford (Califrnia), P. Berg conseguira associar o DNA de dois
microrganismos diferentes e formar uma molcula mista de DNA. Na mesma universidade, Stanley
Cohen especializava-se na biologia dos plasmdeos microbianos, pequenas molculas de DNA circular,
portadoras de alguns genes capazes de se replicar de maneira autnoma. E, na Universidade da
Califrnia (So Francisco), Herbert Boyer isolava a primeira das enzimas de restrio que corta o DNA
em fragmentos com pontas lascadas, uma caracterstica que simplifica a tarefa de associar (colar) os
pedaos.
S. Cohen e H. Boyer se encontraram em uma conferncia cientfica no Hava. A ideia de uma
colaborao entre ambos teria surgido uma noite, diante da praia de Waikiki, ao redor de sanduches
e cervejas. As experincias conjuntas comearam assim que eles regressaram a seus laboratrios em
So Francisco.
Boyer dispunha da enzima de restrio EcoRI, Cohen, de dois plasmdeos, um deles com um gene
de resistncia kanamicina (pSC102) e o outro com um gene de resistncia tetraciclina e um stio de
restrio para EcoRI (pSC101).

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FIGURA 9.1. Cortar, colar, copiar: a experincia que deu origem engenharia gentica
A. Preparao dos plasmdeos recombinantes

Bactrias T R
CORTAR

COLAR

Enzimas de
restrio

Bactrias T S

pSC 101
pSC 102

B. Transferncia dos plasmdeos e seleo das bactrias recombinantes

Bactrias T R K R recombinantes
Plasmdeos
Bactrias T S K S

COPIAR OU CLONAR
Multiplicar
Meio de cultivo com
tetraciclina e kanamicina

Legenda
T: tetraciclina, Ts: sensvel tetraciclina, Tr: resistente tetraciclina, K= kanamicina, Ks: sensvel kanamicina, Kr:
resistente kanamicina, pSC101: plasmdeo de Stanley Cohen n0 101; pSC102: plasmdeo de Stanley Cohen n0 102.

FIGURA 9.2. Sapobacter ou Bactosapo?


Com a entrada de um plasmdeo recombinante, com DNA codificador de rRNA de Xenopus, em uma bactria,
esta passa a sintetizar rRNA de Xenopus.

Xenopus

DNA de Xenopus

Bactria recombinante

Molculas de Xenopus

Fragments of amplified Xenopus laevis DNA, coding for 18S and 28S ribosomal RNA and generated by EcoRI
restriction endonuclease, have been linked in vitro to the bacterial plasmid pSCl01; and the recombinant
molecular species have been introduced into E. coli by transformation. These recombinant plasmids,
containing both eukaryotic and prokaryotic DNA, replicate stably in E. coli. RNA isolated from E. coli minicells
harboring the plasmids hybridizes to amplified X. laevis rDNA.
Extrado de: Replication and Transcription of Eukaryotic DNA in Escherichia coli (MORROW J.F., COHEN S.N.,
CHANG A.C. Y., BOYER H.W., GOODMAN H.M.E R.B. HELLING. Proc. Nat. Acad. Sci. USA 71:5, 1974

96

A ENGENHARIA GENTICA

No primeiro experimento, os pesquisadores abriram o pSC101 e inseriram fragmentos do pSC102,


utilizando a enzima de restrio EcoRI como tesoura e uma ligase como cola. A seguir, eles
introduziram o plasmdeo recombinante na bactria Escherichia coli. A obteno de clones resistentes
a ambos antibiticos (tetraciclina e kanamicina) mostrou o sucesso do experimento (Figura 9.1).
Boyer e Cohen repetiram a experincia, substituindo o DNA bacteriano por um fragmento de DNA
do sapo Xenopus laevis. Com esse objetivo, selecionaram um gene codificador de rRNA no DNA do
sapo e o inseriram no plasmdeo pSC101. Introduzido o plasmdeo recombinante na bactria
Escherichia coli, esta comeou a sintetizar rRNA de Xenopus (Figura 9.2).
A extraordinria novidade do experimento est na transferncia de genes de uma espcie para
outra bem distante na escala evolutiva; um fenmeno limitado na natureza a uma mesma espcie ou
a espcies muito prximas.
MITOS E REALIDADE
As infinitas possibilidades da tecnologia do DNA-recombinante despertaram alguns dos antigos mitos.
Por desobedecer a Zeus, entregando o fogo ao homem, Prometeu sofreu o terrvel castigo de ser
acorrentado a uma montanha e ter o fgado devorado por uma guia. Instrumento da vingana divina,
Pandora abrira a caixa da qual saram todos os males da humanidade. A ambiguidade da nova
biotecnologia, com os seus desafios e promessas, costuma ser representada nas duas faces de Jano,
um rei com o dom de ver simultaneamente o passado e o presente.
Em 1974, P. Berg e mais nove pesquisadores publicaram uma carta nas revistas cientficas Science,
Nature e Proceedings of the National Academy of Science, alertando os colegas sobre os possveis
riscos da nova tecnologia e pedindo uma moratria sobre os experimentos com DNA, at serem
estabelecidos os cuidados e salvaguardas necessrias. Considerando que o uso desta tecnologia
apresenta vrios riscos possveis porque novos tipos de organismos, alguns deles potencialmente
perigosos, podem ser introduzidos no ambiente, se no existirem os devidos controles, o National
Institute of Health (NIH) formou o Recombinant DNA Advisory Committee (RAC).
Em 1975, a conferncia de Asilomar (Monterrey, Califrnia), reunindo 139 pesquisadores de 17
pases, classificou os experimentos em funo do risco (baixo, mdio ou alto), pedindo a suspenso
dos experimentos de alto risco enquanto no se determinassem quais as formas de conteno
adequadas, tanto fsicas como biolgicas. Enfatizava-se tambm a necessidade de trabalhar com
microrganismos enfraquecidos, incapazes de sobreviver fora do laboratrio.
Em 1976, o RAC publicou um conjunto de normas de trabalho que, alm de revisadas
periodicamente, devem ser seguidas por todos os pesquisadores e instituies que recebam dinheiro
do NIH para pesquisas com DNA-recombinante.
Com base nos trabalhos publicados em 1973, a Universidade de Stanford obteve uma patente que
lhe rendeu U$S 300 milhes, divididos com a Universidade da Califrnia. A Universidade de Stanford
licenciou o uso da tecnologia a mais de 400 empresas, entre as quais Amgen, Eli Lilly, Genentech,
Johnson & Johnson e Schering Plough. Qual o invento patenteado? O processo ou ferramenta
biotecnolgica que consiste em inserir um DNA exgeno em um plasmdeo bacteriano e este em uma
bactria, que, dessa forma, se transforma em uma fbrica capaz de reproduzir esse gene em
quantidades ilimitadas.
Nesta breve recapitulao do nascimento da Biotecnologia moderna, vale destacar a preocupao
com a segurana, mostrada oportunamente pelos pesquisadores e as instituies cientficas
envolvidas. No h na histria da cincia ou da tecnologia um episdio de responsabilidade coletiva
comparvel ao da Conferncia de Asilomar.
Paralelamente a sua explorao comercial, a engenharia gentica utilizada atualmente em
centenas de laboratrios de universidades e institutos de pesquisa. E no h registro ou relato de

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nenhum acidente relacionado com essa tecnologia. Talvez valha a pena lembrar que Prometeu foi
liberado depois de 30 anos, e que bem no fundo da caixa de Pandora estava a esperana.
AS BIBLIOTECAS DE GENES
O enorme tamanho de um genoma dificulta a localizao de um gene e seu mapeamento. Uma forma
de facilitar a manipulao extrair o DNA de um organismo determinado, cort-lo com enzimas de
restrio, inserir os fragmentos em plasmdeos e introduzir os plasmdeos recombinantes em
bactrias. Cada bactria formar um clone e cada clone levar um fragmento do genoma do organismo
estudado. O conjunto de clones representa o genoma inteiro de um organismo, constituindo uma
biblioteca genmica (Figura 9.3).
Boa parte do DNA no leva genes codificadores de protenas. Por isso, um procedimento alternativo
a montagem de uma biblioteca gnica, incluindo exclusivamente os genes que se expressam, ou seja,
os genes responsveis pela sntese de protenas. Separa-se o mRNA codificador, e, com a enzima
transcriptase reversa, constroem-se as molculas correspondentes de cDNA. Inserem-se estas em
plasmdeos, e os plasmdeos em bactrias. Com este procedimento, obviamente, o nmero de clones
na biblioteca ser menor (Figura 9.3).
O nmero de clones tambm depende do tamanho do fragmento que o vetor pode carregar. Tanto
os plasmdeos bacterianos como o bacterifago transportam fragmentos pequenos de DNA de 10 a 20
kb, outros vetores genticos foram especialmente desenhados para carregar fragmentos maiores
(cosmdeos, YACs ou yeast artificial cromossomes, BACs ou bacterial artificial chromossomes,
transposons etc.).
A construo de bibliotecas de genes representa o primeiro passo para o mapeamento de um
genoma. Ao sequenciamento dos fragmentos segue a montagem da informao. Trata-se de uma
etapa complexa em que se alinham as sequncias, se preenchem lacunas e se verificam os dados. O
tratamento matemtico das informaes demanda algoritmos sofisticados e computadores
poderosos. Uma vez organizada a sequncia, esta armazenada em bancos de dados. O usurio tem
acesso atravs da Internet, mediante programas especializados que acumulam uma enorme
quantidade de informaes.
A CONSTRUO DE UM MICRORGANISMO RECOMBINANTE
Uma das primeiras protenas de origem recombinante foi a somatotropina ou hormnio de
crescimento. Como a enzima de restrio eliminava do cDNA, alm da sequncia codificadora do
peptdeo-guia, os nucleotdeos correspondentes aos primeiros aminocidos da molcula, estes
tiveram que ser acrescentados quimicamente, em um processo extremamente engenhoso (Figura 9.4).
A transferncia gnica permite obter microrganismos que sintetizem alguma substncia diferente,
geralmente visando o cultivo em grande escala. O gene de interesse costuma ser selecionado e
estudado na bactria de laboratrio Escherichia coli e, posteriormente, transferido espcie na qual
se pretende produzir a protena correspondente.
Alm de Escherichia coli e de Saccharomyces cerevisiae, existem vrios outros microrganismos que
so habitualmente utilizados como hospedeiros: Bacillus subtilis, Picchia pastoris, Pseudomonas,
Streptomyces, Aspergillus nidulans, Neurospora crassa etc. Estes microrganismos so utilizados na
produo de frmacos (insulina, hormnio de crescimento, vacinas) ou de enzimas (quimosina) e,
tambm, na degradao de poluentes.

98

A ENGENHARIA GENTICA

FIGURA 9.3. A construo de bibliotecas de genes


A triagem dos clones pode ser feita reconhecendo a "etiqueta" representada por uma sequncia conhecida no DNA (STS, ou
sequence tagged site; ESTs, ou expressed sequence tagged); no caso do gene se expressar, a triagem tambm pode ser feita
com anticorpos especficos para a protena sintetizada.

BIBLIOTECA GENMICA
Contm todas as sequncias do genoma

BIBLIOTECA GNICA
Contm as sequncias codificadoras
de protenas

Extrao de DNA

Extrao de mRNA

Transcriptase reversa
Fragmentao com
enzimas de restrio

Sntese do cDNA

Insero no vetor

Insero no vetor

Plasmdeos

Plasmdeos

Incorporao do vetor na clula hospedeira


(Transformao)

Incorporao do vetor na clula hospedeira


(Transformao)

Bactrias

Bactrias
Multiplicao e seleo das clulas transformadas

Caracterizao dos clones

Quando o gene no se expressa no hospedeiro

Quando o gene se expressa no hospedeiro

Mediante sondas gnicas

Mediante anticorpos especficos para a


protena recombinante

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FIGURA 9.4. A produo de somatotropina por engenharia gentica

Peptdeo guia
cDNA obtido a partir do mRNA da somatotropina
A remoo do sinal correspondente ao peptdeo-guia, com a enzima de restrio Hae III,
remove tambm 72 bases, codificadoras dos primeiros 24 aminocidos da molcula

Fragmento de DNA sinttico com as 72 bases correspondentes


aos 24 primeiros aminocidos

Unio dos dois fragmentos de DNA


Insero em um plasmdeo
Plasmdeo recombinante

Transformao

Transcrio

Traduo

Somatotropina

FIGURA 9.5. Algumas estratgias possveis de clonagem

Biblioteca genmica

Biblioteca gnica

Identificao do clone com o gene que se procura


Sntese in vitro
Reao em cadeia da polimerase (PCR)
Clonagem e subclonagem em Escherichia coli

Transferncia a outro organismo, visando a expresso do gene

100

A ENGENHARIA GENTICA

ENCONTRAR O GENE
De um modo geral, encontrar um gene equivale a procurar uma agulha num palheiro. O gene pode ser
localizado por triagem dos clones de uma livraria gnica ou genmica (Figura 9.3). Se esta no existir,
pode ser necessrio constru-la, em uma primeira rodada de clonagem, para achar o gene de interesse.
A identificao do clone de interesse envolve a identificao de uma protena com anticorpos
marcados ou o reconhecimento de um gene por hibridizao com uma sonda marcada.
A segunda dificuldade est na obteno de numerosas cpias desse gene. Uma soluo a
multiplicao do clone correspondente e posterior isolamento do gene procurado. Outra a
amplificao do gene mediante a PCR, sempre que se conheam as sequncias iniciais e finais ou,
eventualmente, as sequncias adjacentes regio onde est inserido. Se a sequncia do gene for
conhecida e relativamente curta, podem-se construir cadeias curtas de oligonucleotdeos e associlas, formando um gene sinttico que ser amplificado por PCR. Existem numerosas estratgias, que
dependem do caso e, tambm, das caractersticas e possibilidades do laboratrio (Figura 9.5).
Seja qual for o caminho seguido, uma vez que as cpias do gene de interesse forem obtidas, estas
tero que ser transferidas ao hospedeiro definitivo.

INSERIR O GENE
A transferncia de um fragmento estranho de DNA se v facilitada pela utilizao de vetores. Um vetor
uma molcula de DNA que se duplica de maneira autnoma dentro de uma clula, carregando vrios
genes, entre os quais alguns marcadores que permitam reconhecer sua presena dentro da clula.
no vetor que ser inserido o fragmento de DNA estranho, para multiplicao ou integrao no genoma.
Alm dos plasmdeos (bacterianos e de leveduras) e bacterifagos (, m13), tambm se utilizam
como vetores os transpsons, que so elementos genticos mveis capazes de pular de um lugar a
outro do genoma, espalhando ou no cpias. Construdos em funo das necessidades, existem hoje
vetores bacterianos, vetores de leveduras e vetores bifuncionais que podem ser utilizados tanto em
bactrias como em leveduras.
As primeiras experincias de Engenharia Gentica foram feitas na bactria Escherichia coli, um
microrganismo muito conhecido e fcil de cultivar em laboratrio. Porm, Escherichia coli no o
organismo ideal para a expresso de genes eucariticos. Clulas procariticas e eucariticas diferem
em relao ao processamento do mRNA e s modificaes das protenas depois da traduo. Por este
motivo, quando se procura expressar genes de mamferos, Escherichia coli substituda por outras
clulas eucariticas, como a levedura Saccharomyces cerevisiae, um fungo utilizado h sculos na
produo de alimentos e bebidas.
Para que um gene se expresse em uma clula hospedeira, necessrio que esta reconhea seus
prprios sinais de expresso. Para poder sintetizar uma protena exgena, a clula dever ler a
sequncia codificadora com seus prprios sinais de transcrio (promotor) e de traduo (stio de
ligao com o ribossomo, trmino de leitura).
O ideal construir um vetor que j contenha os genes marcadores para seleo ou reconhecimento,
os stios de restrio, uma sequncia promotora e os sinais adequados de incio e fim da transcrio.
Ao colocar a sequncia codificadora da protena, o vetor funciona como um cassette de expresso
(Figura 9.6).
Outros fatores adicionais intervm na construo de um vetor de expresso. Um promotor forte,
por exemplo, permitir sintetizar uma quantidade grande de protena, o que ser comercialmente
interessante se esta for uma enzima. Entretanto, se a protena em questo for uma toxina que possa
afetar o hospedeiro, ser prefervel escolher um promotor fraco. Uma possibilidade interessante a

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utilizao de um promotor que responda a um fator externo controlvel (substrato, temperatura), de


maneira tal que o gene possa ser ligado ou desligado no momento que se considere conveniente.
Finalmente, tambm deve ser considerado o destino da protena dentro da clula; se esta for
secretada haver que acoplar na construo gnica um gene de sinalizao que a leve at a membrana
celular.
Existem diversos mtodos para inserir o DNA recombinante dentro da clula. Facilita-se a entrada
do DNA com algumas manipulaes, tais como a adio de CaCl2 no meio e/ou a modificao da
temperatura. A aplicao de foras eltricas tambm aumenta as chances do DNA penetrar na clula,
ao abrir os poros da membrana (eletroporao).
Os plasmdeos atravessam a membrana celular em um processo denominado transformao, que
ocorre em determinadas condies fisiolgicas da clula hospedeira. Em se tratando de vetores virais,
a infeco da clula promove a entrada do DNA exgeno dentro da clula. Fala-se neste caso de
transfeco (transformao + infeco).
-------------FIGURA 9.6. A estrutura de um vetor de expresso
Este deve incluir os elementos genticos da clula hospedeira para a transcrio e traduo.
Origem da replicao

mRNA
Promotor

Sinais de trmino de leitura

Sinais de incio de leitura


Gene exgeno

--------------

IDENTIFICAR OS MICRORGANISMOS RECOMBINANTES


A tecnologia do DNA-recombinante est baseada em fenmenos que ocorrem em frequncias muito
baixas. A existncia de mtodos de seleo eficientes possibilita detectar e recuperar aquelas clulas
que incorporaram um gene estranho.
Associa-se o gene estranho a um marcador seletivo como, por exemplo, um gene de resistncia a
algum antibitico. Em presena deste, s podero se multiplicar e formar clones ou colnias as clulas
que incorporaram ambos os genes. Entretanto, o uso de genes de resistncia a antibiticos
considerado polmico, porque existe uma possibilidade remota dos genes serem transferidos das
bactrias transformadas para as bactrias do ambiente.
Tambm podem ser utilizados como marcadores seletivos os genes que codificam a sntese de um
aminocido. Neste caso, a seleo do microrganismo recombinante ocorre em um meio sem esse
aminocido.

102

A ENGENHARIA GENTICA

Alm dos marcadores seletivos, os pesquisadores contam com outro tipo de marcadores que
permitem identificar as bactrias transformadas e, tambm, acompanhar a expresso de um gene no
organismo modificado. Destacam-se entre estes marcadores, ou genes reprteres: GAL e GUS,
respectivamente o gene da -galactosidase e o gene da glucuronidase, que transformam o substrato
correspondente em um composto colorido; GFP, um gene da medusa Aequorea Victoria, que sintetiza
uma protena fluorescente, verde brilhante na luz ultravioleta; LUC, o gene da luciferase, uma enzima
dos vaga-lumes, que emite luz em presena do substrato.
A CHEGADA DA COMUNIDADE DIY
A crise econmica do incio de sculo XXI excluiu dos empregos formais numerosos jovens com boa
formao profissional e, paralelamente, o progresso tecnolgico causou uma queda acentuada nos
preos dos equipamentos bsicos de laboratrio e de sntese/sequenciamento de cidos nucleicos.
Nos pases desenvolvidos, onde a cultura do empreendedorismo muito forte, algumas iniciativas
educativas de vrias organizaes (Biobricks Foundation, SYNBIO etc.) e universidades (Harvard, MIT
etc.) promoveram a criao da comunidade DIYBIO (do ingls, do it yourself).
Tomando como referncia o nascimento da indstria dos computadores pessoais na Califrnia, esta
gerao monta laboratrios de fundo de garagem, absorve o conhecimento disponvel em open source
e aproveita equipamentos de segunda mo, quando no cria os prprios. Trabalha com base na livre
difuso de protocolos e sequncias biolgicas standard que so usadas, com segurana, como blocos
fundamentais (biobricks).
O objetivo de desenhar e construir sistemas biolgicos simplificados que cumpram funes
determinadas os integra Biologia Sinttica. Os elementos fundamentais so molculas de DNA,
associadas entre si como os blocos de Lego. Denominados partes, dispositivos e sistemas em funo
de sua complexidade, os elementos sero colocados em um microrganismo ou chassis (Figura 9.7).
Observe-se que os participantes utilizam exclusivamente microrganismos do Grupo de Risco 1, com
baixo ou nenhum risco individual e coletivo, e biobricks seguros disponibilizados por organizaes
responsveis. Inclusive figura na Internet um kit para bioengenharia (Amino, a US$ 700), equivalente
ao Arduino em eletrnica, com tudo o que preciso para sintetizar microrganismos BS1,
geneticamente modificados, e criar fragrncias, flavorizantes, materiais, medicamentos etc
-------------FIGURA 9.7. Semelhanas entre os Legos e os Biobricks (www.biochem.hku.hk/synbio/?_id=148)
A. Classificao hierrquica
PARTES

Codificam funes bsicas e sua eficincia


Exemplos: sequncia gnica de uma protena ou de um promotor da
RNA polimerase, nmero de vezes / momento em que uma polimerase ou um
ribossomo passam por determinado ponto.

DISPOSITIVOS

Colees de partes que implementam uma funo


Exemplo: produo de uma protena fluorescente como resposta presena
de uma determinada substncia no ambiente.

SISTEMAS

Tarefas complexas
Exemplo: oscilar na emisso de duas cores com uma frequncia determinada.

CHASSIS

Escherichia coli, Saccharomyces cerevisiae etc.

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B. Construes intercambiando as partes

Gene funcional
Promotor

Stio de ligao com


o ribossomo (rbs)

c
Vamos mudar o promotor?

Sequncia
codificadora
da protena

Sequncias
finalizadoras da
transcrio

Enzimas de restrio

Novo promotor
+ ligase

c
Novo gene funcional

--------------

A comunidade DIY compartilha valores e normas de trabalho. O estmulo inovao cientfica e


econmica, assim como ao empreendedorismo, est presente nas competies internacionais iGEM
(International Genetically Engineered Machine), organizadas pelo Massachussets Institute of
Technology (MIT), a partir de 2003. No entanto, algumas organizaes pedem um controle estrito,
temendo a participao de pessoas sem treinamento adequado (biohackers) ou mal-intencionadas
(biocrackers).
Na comunidade DIY, a biologia sinttica se desenvolve em um sistema transparente de cdigo
aberto (Open Source), no sendo possvel restringir o acesso a informao, materiais e equipamentos.
Por outro lado, uma regulao estrita limitaria o acesso ao conhecimento de uma comunidade
promissora, explicitamente comprometida com o desenvolvimento de cdigos de conduta, protocolos
seguros e regulamentaes. Este movimento abre um novo canal para o ensino e divulgao da cincia
que, alm de atingir o pblico geral e complementar a atividade acadmica, contribui para a
democratizao do conhecimento.
A CONSTRUO DE PLANTAS TRANSGNICAS
As primeiras plantas transgnicas datam de 1983 quando, por caminhos independentes e
complementares, M. Van Montagu e J. Schell (Universidade de Gante, Blgica), M. Dell-Chilton
(Universidade de Washington, St Louis) e R. T. Fraley (Monsanto) conseguiram transferir genes
bacterianos para plantas.
As plantas transgnicas se originam via cultura in vitro a partir de clulas vegetais modificadas
geneticamente. Portadoras de um gene exgeno ou transgene, sua obteno visa o melhoramento das
propriedades agronmicas e nutritivas dos vegetais e, tambm, sua utilizao para produzir
substncias novas (biofbricas).

104

A ENGENHARIA GENTICA

O TRANSGENE
Para garantir a transferncia de uma sequncia gnica determinada, deve-se construir em redor uma
estrutura complexa que inclua tambm um gene marcador, um promotor e as sequncias de leitura
adequadas (sequncias iniciais e terminais). Denomina-se transgene o conjunto formado pela
sequncia gnica e a estrutura que o acompanha.
O promotor desencadeia a transcrio da sequncia codificadora de interesse. Um promotor
constitutivo permitir a expresso gnica na maioria dos tecidos e ao longo da vida da planta,
enquanto outro limitar a expresso a um tecido determinado. Tambm existem promotores que
respondem a estmulos ambientais internos ou externos, como a luz.
O gene marcador confere resistncia a substncias normalmente txicas para as clulas vegetais,
tais como os antibiticos ou os herbicidas, de modo que, em um meio seletivo, s sobrevivam clulas
que integraram o transgene.
O uso de marcadores de resistncia a antibiticos na construo de plantas desperta vrios
questionamentos, apesar de se tratar de antibiticos sem uso clnico e que j esto presentes nas
bactrias do intestino do homem. Estes marcadores podem ser substitudos, mas como sua utilidade
se limita ao processo de transformao, o melhor seria elimin-los uma vez cumprida sua funo. J
foram desenvolvidas vrias tcnicas genticas de remoo dos marcadores, esperando-se que nos
prximos anos sua retirada se transforme em uma prtica corriqueira de laboratrio.
A TRANSFERNCIA DOS GENES A CLULAS VEGETAIS
Agrobacterium tumefaciens uma bactria do solo, que leva um plasmdeo denominado Ti (do ingls,
Tumour induced plasmid). Quando infectadas com a bactria portadora desse plasmdeo, as plantas
eudicotiledneas desenvolvem galhas, isto , tumores caractersticos (crown gall).
A eliminao de alguns genes na regio T do plasmdeo Ti conserva sua capacidade de insero no
cromossomo da clula hospedeira, eliminando a propriedade de induzir tumores. Esta caracterstica
transforma o plasmdeo em um vetor adequado para a transferncia de genes de outras espcies s
clulas vegetais. Basta colocar o transgene na regio T do plasmdeo previamente desarmado para se
obter um plasmdeo recombinante que poder ser transferido novamente a Agrobacterium ou a
clulas hospedeiras, onde o transgene ir se inserir em algum lugar do genoma (Figura 9.8).
Com esta tecnologia criou-se a primeira planta transgnica, um tabaco resistente kanamicina.
Continua sendo utilizada at hoje, com as eudicotiledneas. Porm, as plantas monocotiledneas
(arroz, milho, trigo) e algumas leguminosas no so infetadas por Agrobacterium, de modo que, para
conseguir transferir genes, deve-se recorrer a outros mtodos.
Os mtodos fsicos tm a vantagem de poder ser aplicados tanto nas plantas monocotiledneas
como nas eudicotiledneas. A eletroporao e o tratamento com uma substncia desestabilizadora da
membrana plasmtica (polietilenglicol ou PEG) so tcnicas muito utilizadas. Porm, o mtodo
preferido atualmente a biolstica. Um revlver especial (gene gun) dispara microprojteis de ouro ou
tungstnio, recobertos de DNA, em direo s clulas. O dispositivo possibilita a entrada do DNA
exgeno no ncleo, nas mitocndrias ou nos cloroplastos. De um modo geral, a transformao se
realiza em protoplastos, clulas em que a parede celular foi eliminada com enzimas.
DO LABORATRIO AO CAMPO
No laboratrio, transfere-se a construo gentica s clulas receptoras por algum dos mtodos
possveis (geralmente eletroporao, biolstica ou uso de vetores, como o plasmdeo Ti de
Agrobacterium tumefaciens); a seguir, se selecionam e recuperam as clulas transformadas e,

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mediante as tcnicas de cultura in vitro, se regeneram as plantas correspondentes. Note-se que este
trabalho costuma ser realizado em plantas cujo gentipo favorece a transformao e a regenerao
da planta transformada, mas que geralmente resultam pouco vantajosas do ponto de vista
agronmico.
A presena do transgene, assim como o nmero de cpias e o lugar em que estas se integraram no
genoma, conferida mediante tcnicas bioqumicas e/ou marcadores moleculares (polimorfismos na
molcula de DNA, repetio de sequncias), porque so aspectos que podem influir na expresso
gnica. Considera-se alcanado o xito quando o transgene se expressa no lugar correspondente e
com um adequado nvel de atividade, restando por verificar a estabilidade da expresso gnica e o seu
valor agronmico.
-------------FIGURA 9.8. A construo de uma planta transgnica no laboratrio
O plasmdeo Ti "desarmado" portando um gene exgeno transferido a clulas de discos foliares. Formam-se calos que
podero regenerar a planta inteira.

Plasmdeo Ti

Plasmdeo Ti desarmado

DNA exgeno

Plasmdeo recombinante
Planta que ser manipulada geneticamente
Transformao
Discos foliares

Cultura de calos

Regenerao da planta com o gene exgeno


integrado no genoma

106

A ENGENHARIA GENTICA

Acabada a etapa de laboratrio, iniciam-se os testes controlados em casa de vegetao, para


selecionar as plantas-me que daro origem a vrias geraes de retrocruzamentos seletivos com
alguma das linhagens elite. Os testes visam a obteno de uma linhagem transgnica de alto
rendimento adaptada a um contexto especfico. Em outros termos, uma variedade cultivada ou
cultivar, com uma produtividade potencial parecida da linhagem elite e que expresse o trao
codificado pelo novo transgene (Figura 9.9).
Conceitualmente, estes testes so semelhantes aos efetuados no processo de melhoramento
tradicional; no entanto, a utilizao de marcadores moleculares e de tcnicas de cultura in vitro
permite caracterizar a prognie bem mais rapidamente. S ento se d incio liberao planejada no
meio ambiente, que envolve o cultivo de plantas em experimentos protegidos e testes de campo em
diferente escala, at que o novo hbrido transgnico esteja pronto para o seu cultivo comercial. A
liberao do cultivo depender da autorizao da legislao local, geralmente bastante restrita a esse
respeito.
-------------FIGURA 9.9. As etapas da construo de uma planta transgnica

Transformao por engenharia gentica


Regenerao mediante tcnicas de cultura de tecidos
Caracterizao molecular e bioqumica
Avaliao do valor agronmico
Melhoramento mediante cruzamentos com linhagens de elite
Obteno de uma variedade transformada geneticamente
Experimentos e testes de campo, em pequena e grande escala
Autorizao da legislao local
Liberao do cultivo para sua explorao comercial

--------------

CLULAS E ANIMAIS TRANSGNICOS


A TRANSFERNCIA GNICA A CLULAS ANIMAIS
Um dos objetivos da engenharia gentica a produo de protenas recombinantes em culturas
celulares. Em relao aos microrganismos, a grande vantagem das clulas animais possuir os sistemas
de transcrio e de processamento das protenas indispensveis para a expresso dos genes de
organismos superiores.
Observe-se que, em relao s clulas animais, a palavra transformao designa a converso de
uma clula normal em maligna, sendo substituda por transfeco. O transporte de DNA exgeno

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dentro da clula assegurado por mtodos fsicos (eletroporao, microinjeo, ingesto de


micropartculas, fuso de lipossomos com a membrana plasmtica) e por vetores (vrus, plasmdeos e
transpsons).
A transfeco mediante vetores virais dos quais se eliminaram as sequncias patognicas interessa
ao laboratorista porque os vrus animais infectam tecidos especficos e se integram no genoma da
clula hospedeira de maneira estvel. Em mamferos, os vrus utilizados mais frequentemente como
vetores so o SV40, a vacina, os retrovrus e os adenovrus. Clulas de inseto tambm podem ser
manipuladas geneticamente com vetores como os elementos P de transposio de Drosophila, ou
como o baculovrus, uma vez eliminado o gene que permite sua proliferao na natureza.
Assim como visto anteriormente em relao aos microrganismos e s plantas, a sequncia
codificadora colocada em uma construo gnica bem definida que inclui um gene marcador para
selecionar as clulas que receberam o transgene. Utilizam-se como marcadores genes de resistncia a
antibiticos, genes para caractersticas metablicas (Tk ou timidina quinase) etc.
O grande problema sempre a integrao do transgene no lugar desejado, sem interromper a
expresso de outros genes ou causar a ativao de algum oncogene. M. Capecchi, M. Evans e O.
Smithies receberam o Prmio Nobel de Medicina de 2007 por solucionar esse problema em clulastronco de camundongo.
Para integrar a construo gnica em um determinado stio, colocaram, nas extremidades do
transgene, sequncias de DNA homlogas s extremidades do segmento a ser substitudo. Como
distinguir a integrao no lugar desejado (recombinao homloga) da integrao ocorrida em
qualquer outro lugar (recombinao no homloga)? Acrescentando na construo gnica, um pouco
mais longe, um gene de seleo negativa. Se a clula integrar a construo em qualquer outro lugar
do genoma, ela se tornar sensvel a um segundo antibitico. Inversamente, se a clula for resistente
a este antibitico, isto significa que houve integrao no lugar desejado.
APLICAES
A ovelha Dolly nasceu em 1996, depois de numerosas tentativas de transferir o ncleo de uma clula
mamria a um ovcito anucleado (Figura 9.9). Adorada pela mdia, o clone Dolly teve que ser
sacrificado em 2003 com um tumor no pulmo, artrite e sinais de envelhecimento precoce.
Poucos meses depois do nascimento de Dolly, o mesmo grupo do Instituto Roslin e de PPL
Therapeutics anunciou o nascimento de Polly, uma ovelha transgnica para o gene codificador do fator
IX, uma protena que falta nos hemoflicos. Em vez de receber, como Dolly, o ncleo de uma clula
diferenciada mantida em cultivo, Polly recebeu um ncleo proveniente de clulas embrionrias
modificadas geneticamente.
Mesmo sendo difcil de obter, um animal transgnico pode ser bem mais interessante do ponto de
vista econmico que o cultivo de clulas em biorreatores, um processo complexo e de alto custo. Na
construo de animais transgnicos para a produo em grande escala de uma protena recombinante,
escolhe-se habitualmente um promotor que se expresse na glndula mamria, de modo que o produto
gnico aparea no leite do animal. Cabras transgnicas produtoras de fator ativador de plasminognio
(tPA), vacas produtoras de lactoferrina, somatotropina ou insulina j so uma realidade.
Na Argentina, BioSidus mantm uma dinastia de vacas produtoras de hormnio de crescimento. No
Brasil, a Universidade do Cear conserva um rebanho de cabras transgnicas de raa Canind que
secreta no leite o fator de estimulao de colnias de granulcitos humanos (hG-CSF). Chama-se Atryn
o primeiro anticoagulante liberado comercialmente, na Europa (2006) e nos Estados Unidos (2009),
produzido no leite de cabra transgnica (GTC Biotherapeutics).
Outra aplicao interessante da tecnologia de transfeco de clulas-tronco embrionrias
cultivadas in vitro na pesquisa clnica a construo de modelos animais para o estudo de doenas

108

A ENGENHARIA GENTICA

humanas. Desse modo se obtiveram camundongos transgnicos para genes determinantes de algumas
doenas humanas, tais como cncer de mama (BRCA 1), doena de Huntington, anemia falciforme etc.
Estes animais so de grande utilidade para as pesquisas farmacolgicas
-------------FIGURA 9.10. Construo de animais transgnicos

A. Microinjeo.
Aps a transfeco, implantam-se os ovos em fmeas receptivas (pseudogrvidas). Aqueles que incorporaram o transgene
originaro, neste caso, animais de tamanho maior (supermouse).

Cruzamento

Descendncia

Ovos fertilizados

Implantao em fmeas
pseudogrvidas
Injeo de DNA exgeno

B. Transfeco de clulas-tronco embrionrias


A implantao do blastcito com clulas modificadas em uma fmea aguti gera animais quimricos, com clulas que levam o
carter para pelagem marrom e clulas com o carter para pelagem preta. Do cruzamento entre quimeras, nascem alguns
animais com pelagem preta, tendo incorporado o DNA exgeno no genoma.

Camundongos de pelo preto


Animais quimricos

Blastocisto

Descendncia

Transfeco e
seleo das clulas

Blastocisto

Camundongo de pelo
marrom (aguti)

Injeo das clulas


modificadas

Implantao

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Esta estratgia utilizada no s para construir modelos animais com um gene ativo (knock in), mas
tambm para colocar um gene inativo (knock out). Aps a transfeco de clulas-tronco embrionrias
com um gene desativado, realiza-se sua transferncia a blastcitos, que, reimplantados, originaro
animais quimricos, isto , animais com clulas de dois tipos: umas em que o gene est ativado e outras
em que no est ativado porque incorporaram o transgene. Dos cruzamentos entre quimeras com
clulas germinais portadoras do gene desativado nascero animais homozigotos com duas cpias do
gene inativo (Figura 9.10).
AS NOVAS TECNOLOGIAS DE EDIO GNICA
BASEADAS NO RNA INTERFERENTE
A injeo na clula de um RNA artificial (siRNA) de sequncia parcialmente semelhante do DNA de
um gene determinado possibilita silenciar sua expresso. Trata-se de uma ferramenta poderosa para
o estudo da genmica funcional para interferir parcialmente (knockdown) com sua traduo no
citoplasma, de maneira temporria e sem danificar a clula.
Com a integrao no genoma de um DNA codificador de RNA em forma de grampo de cabelo
(shRNA, do ingls, short hairpin RNA) consegue-se uma resposta permanente. Depois de processado
pela maquinaria celular dos miRNA, o shRNA ir interferir na traduo de uma molcula externa que
lhe for complementar. Adicionando construo gnica um promotor induzvel, pode-se regular sua
expresso em diferentes tecidos ou em determinados intervalos de tempo. Um dos frutos desta
tecnologia o feijo resistente ao vrus do mosaico dourado da Embrapa.

BASEADAS NAS NUCLEASES STIO-DIRIGIDAS: ZFNs e TALEN


As tcnicas convencionais de engenharia gentica inserem o DNA exgeno ao acaso, com o risco de
interromper algum gene de interesse. A recombinao homloga um procedimento eficiente em
clulas-tronco embrionrias de camundongo, mas no se aplica a outros tipos celulares nem a outras
espcies.
As primeiras tecnologias de edio gnica agem mediante protenas stio-especficas, unidas a uma
enzima de restrio que corta o DNA. Como o reconhecimento do alvo depende das protenas, devemse construir protenas especficas para cada sequncia-alvo. As duas tecnologias mais utilizadas so as
nucleases dedos de zinco ou ZFNs (do ingls zinc finger nucleases) e TALEN (do ingls Transcription
Activator-Like Effector Nucleases).
Quando o DNA cortado, a clula une novamente os dois extremos, um mecanismo natural de
reparao sujeito a erros que causam o knockout do gene em questo. Mas no esse o nico
interesse destas tcnicas. Uma vez efetuado o corte, tanto se podem induzir mutaes de um par de
bases como gerar inseres ou delees e, inclusive, inserir um gene exgeno em um lugar bem
definido do genoma.
Tanto ZFNs (2003) como TALEN (2010) so complexas, trabalhosas e pouco precisas, mas TALEN
preferida por ser mais fcil de desenhar e, por conseguinte, mais econmica.
BASEADAS NA IMUNIDADE BACTERIANA: CRISPR-Cas9
Como sobrevive uma bactria ao ataque de um fago? Uma possibilidade que o fago seja
metabolicamente inativo; a outra que entrem em ao mecanismos de defesa bacterianos, como a

110

A ENGENHARIA GENTICA

fragmentao do DNA viral pelas enzimas de restrio bacterianas. Estas reconhecem sequncias
especficas que no prprio genoma esto protegidas por modificaes qumicas (metilao).
A bactria sobrevivente poder, mediante a nuclease Cas, incorporar algumas sequncias de DNA do
fago em seu genoma, entre os segmentos repetitivos do sistema CRISPR (do ingls, Clustered regularly
interspaced short palindromic repeats). Se houver um novo ataque, a transcrio e o processamento
desse DNA pode levar degradao Cas-dependente do DNA do bacterifago. Estes mecanismos de
defesa (CRISPRs) so frequentes e tm sido encontrados em 40% das eubactrias e 90% das arqueas
sequenciadas.
Baseadas nesse mecanismo de imunidade bacteriana, E. Charpentier (Universidade de UMEA,
Sucia; Universidade de Viena, ustria) e J. Doudna (Universidade de Califrnia, Estados Unidos)
mostraram que bastava juntar um RNA de fita nica com a enzima Cas9 em um tubo de ensaio para
cortar qualquer sequncia de DNA no lugar desejado. No ano seguinte, F. Zhang e G. Church (Harvard
Medical School) usaram o sistema CRISPR-Cas9 para editar o genoma de clulas animais e humanas.
Assim como as nucleases stio-dirigidas ZNFs ou TALEN, CRISPR pode ser utilizada para gerar
mutaes de ponto, delees ou inseres. Com pequenas alteraes, CRISPR-Cas9 se transforma na
maquinaria ideal para inibir ou ativar genes, desenvolver estudos epigenticos e induzir a expresso
gnica por substncias qumicas ou estmulos luminousos. Entre outras aplicaes, O sucesso de
CRISPR-Cas9 se deve tanto a sua versatilidade como simplicidade, j que as ferramentas bsicas so
a enzima Cas e o RNA-guia, bem mais fcil e econmico de sintetizar que as protenas (Figura 9.11).
Qual o status de um organismo editado? Em primeira aproximao, seria um organismo
geneticamente modificado. Porm, diferentemente dos OGMs que esto no mercado, um organismo
editado no carrega necessariamente genes de outras espcies. A edio pode inativar um gene, gerar
uma verso mais favorvel de um gene existente ou transferir uma variante da mesma espcie, tal
como ocorreria na natureza por mutao espontnea ou por melhoramento. Deste ponto de vista, os
organismos editados no deveriam ser enquadrados na legislao existente.
--------------

FIGURA 9.11. A edio gnica com CRISPR-Cas9


Os mecanismos naturais da clula tendem a reparar o corte stio-dirigido, produzindo-se alguns erros (mutao de ponto,
deleo) e possibilitando a insero de um transgene.

Cas9

RNA-guia

DNA genmico

Corte
Transgene +
Gene reprter

Mutao de ponto

Deleo

Insero de um transgene

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Em mamferos, a enzima e o RNA-guia podem ser introduzidos por injeo em clulas embrionrias;
em plantas por transfeco de protoplastos ou por agroinfiltrao. Posteriormente edio, as
nucleases so degradadas pelas clulas e desaparecem do organismo. No caso de usar uma construo
gnica, esta desaparece por segregao na diviso celular. Legalmente, a edio gnica no entraria
nos padres atuais da regulamentao.
Existem repositrios onde so armazenadas centenas de plasmdeos e milhares de linhagens virais,
expressando Cas e um guia diferente de RNA. Nas bibliotecas de vrus (lentivrus, vrus adenoassociados) esto armazenadas as sequncias de mais de 18.000 genes. Estes bancos pertencem a
instituies como Harvard Plasmid Database, DNASU Plasmid Repository, National Institutes of
Healths PlasmID, Mammalian Gene Collection ou a organizaes independentes como Addgene e Zinc
Finger Consortium. Empresas como Thermofisher oferecem, alm dos vetores, sistemas que por
transfeco mediada por lipdios podem ser introduzidos diretamente na clula, gerando resultados
em 4 dias.
A relevncia das novas tecnologias de edio indiscutvel, como mostram algumas das primeiras
aplicaes. Em bactrias, CRISPR permite remover modificaes genticas para se adequar a critrios
de biossegurana ou de proteo da propriedade intelectual; na indstria de laticnios, utilizada para
proteger os bacilos lcticos das infeces virais. Tambm possibilita a obteno de plantas resistentes
a vrus e rvores com menos lignina e menos taninos (Populus).
Como ferramenta de pesquisa, CRISPR utilizada no estudo de ativadores e inibidores epigenticos
e na edio de clulas-tronco para entender as doenas neurolgicas. Desativando simultaneamente
vrios genes, abre-se a possibilidade de estudar doenas polignicas como autismo, diabetes ou
esquizofrenia. Conseguem-se criar animais knockin ou knockout por injeo de Cas9 e do RNA
especfico no zigoto fertilizado. Basta que um animal ou as clulas de uma cultura in vitro tenham
incorporado por transfeco o gene codificador de Cas, para que s seja necessrio acrescentar o RNAguia especfico para as sequncias-alvo escolhidas.
A patente das tcnicas de edio gnica est sendo disputada por Doudna, Charpentier e Zhang. A
biotecnologia hoje um empreendimento milionrio construdo sobre pesquisadores, universidades,
empreendedores, empresas, interesses econmicos de grandes capitais.
Pesquisadores chineses criaram macacos com dois genes alterados. Na Inglaterra, foram autorizados
experimentos de edio gnica com embries que no sero implantados. A comunidade cientfica de
vrios pases comea a vislumbrar a possibilidade de edio gentica de embries para terapias
gnicas. A alterao da linhagem germinal representa at o momento uma fronteira tcnica e
moralmente intransponvel, mas qual ser o posicionamento da sociedade?
BIOSSEGURANA E REGULAO
No Brasil, a principal norma reguladora sobre as atividades com organismos geneticamente
modificados a Lei de Biossegurana (Lei n0 11.105, de 24 de maro de 2005) que agrega diferentes
reas do direito: ambiental, sanitrio, defesa do consumidor, propriedade intelectual, civil,
administrativo e penal.
A palavra final sobre as questes tcnicas corresponde Comisso Nacional Tcnica de
Biotecnologia (CTNBio), uma instncia colegiada multidisciplinar cuja finalidade prestar apoio
tcnico consultivo e assessoramento ao Governo Federal na formulao, atualizao e implementao
da Poltica Nacional de Biossegurana relativa a OGM, bem como no estabelecimento de normas
tcnicas de segurana e pareceres tcnicos referentes proteo da sade humana, dos organismos
vivos e do meio ambiente, para atividades que envolvam a construo, experimentao, cultivo,

112

A ENGENHARIA GENTICA

manipulao, transporte, comercializao, consumo, armazenamento, liberao e descarte de OGM e


derivados (http://www.ctnbio.gov.br/index.php/content/view/2.html).
As normas da legislao brasileira esto de acordo com o Protocolo de Cartagena sobre Biossegurana
e as diretrizes do Codex Alimentarius e da Organizao para a Cooperao e Desenvolvimento
Econmico (OCDE).
Nem a biologia sinttica nem a edio de genes se enquadram totalmente dentro das previses de
um sistema regulatrio baseado na engenharia gentica. medida que as novas tecnologias se
desenvolvam ser necessrio adequar a legislao, mantendo os princpios de precauo, conteno
e biossegurana.

113

C A P T U L O 10

BIOTECNOLOGA E INDSTRIA

O PROCESSO WEIZMANN
No sculo XIX, os principais produtores de borracha natural eram o Brasil e a Inglaterra (plantaes na
Malsia). O processo de vulcanizao, que confere ao material sua elasticidade e resistncia (C. B.
Goodyear, 1839), e a inveno dos pneus (J. Dunlop, 1888) transformaram a borracha em um insumo
estratgico para o crescimento da indstria automotora.
Quando, em uma tentativa de dumping, os pases produtores diminuram a oferta e provocaram
um aumento significativo do preo, desencadeou-se a corrida borracha sinttica. Enquanto a
Alemanha tentava sintetizar a borracha a partir de um derivado do petrleo (butadieno), a Inglaterra
explorava as possibilidades de sntese de molculas precursoras por fermentao.
Nesse contexto histrico, o qumico de origem russa Chaim Weizmann desenvolveu, na
Universidade de Manchester (1914), um processo fermentativo que utilizava a bactria Clostridium
acetobutilycum para a produo de butanol (um precursor do butadieno) e acetona. Por ser o primeiro
processo fermentativo industrial desenvolvido em condies asspticas, o processo Weizmann
considerado um marco histrico na biotecnologia industrial.
No incio da Primeira Guerra Mundial, a ateno da Inglaterra desviou-se da borracha para a
produo de explosivos e, especialmente, de cordite, uma plvora base de nitrocelulose cuja
preparao demanda acetona. Por ser sintetizada a partir de carbonato de clcio, um insumo
importado da Alemanha, a via qumica de produo de acetona tornou-se invivel, tendo a Inglaterra
que comear a explorar a via biotecnolgica.
Recrutado pelo Comit de Munies e tendo cedido a patente do processo ao governo britnico,
Weizmann comeou a produzir acetona, por fermentao microbiana de amido de milho, na Nicholson
Gin Distillery (Londres), mas, devido guerra e falta de alimentos, o suplemento de carboidratos
acabou se tornando um fator limitante na produo.
Em 1916, os britnicos transferiram a produo para uma destilaria em Toronto (Canad), ao tempo
que era construda outra instalao na ndia. Em 1917 comeou a funcionar uma fbrica produtora de
acetona por fermentao de milho em Indiana (Estados Unidos). Finalizada a guerra, a acetona e o
butanol continuaram a ser utilizados como solventes.
Os caminhos da cincia, da tecnologia e da poltica se cruzaram vrias vezes. Qumico e jornalista,
Weizmann chegou a ser um dos mais importantes lderes comunitrios do movimento sionista
mundial. Sua contribuio ao esforo blico da Primeira Guerra Mundial estaria relacionada com a
declarao Balfour (1918), que prometera ao povo judeu um lar na Palestina. Finalizado o mandato
conferido pela Liga das Naes Gr-Bretanha (1947), criou-se o Estado de Israel (1948), do qual
Weizmann foi o primeiro presidente. Fundado em Rehovot (Israel), o Instituto de Pesquisas Cientficas
e Tecnolgicas leva o seu nome.
BIOTECNOLOGIA: ENSINO E DIVULGAO (http://bteduc.com)

BIOTECNOLOGIA E INDSTRIA

A INDSTRIA QUMICA
A VIA QUMICA
A indstria qumica se caracteriza por produzir substncias que atendem as necessidades de outras
indstrias. Enquanto algumas empresas sintetizam os derivados petroqumicos bsicos (etileno,
propileno, butadieno), outras os transformam nos petroqumicos finais: polietileno (PE), polipropileno
(PP), policloreto de vinil (PVC), polisteres e xido de etileno. Um terceiro grupo converter esses
materiais em objetos de consumo tais como filmes, recipientes, objetos diversos etc.
As empresas devem responder s mudanas do mercado ajustando-se rapidamente a qualquer
variao de preo da matria-prima ou da energia. Para subsistir, uma indstria ter que reagir com
versatilidade, mediante o desenvolvimento de processos tecnolgicos inovadores e rentveis. Os
processos descartados podero ser reutilizados, se a condio do mercado tornar-se favorvel
novamente.
Um exemplo tpico a evoluo do mercado da acetona. Subproduto da corrida borracha sinttica
durante a Primeira Guerra Mundial, a acetona passou a ser um produto indispensvel para a indstria
de armamentos. Uma vez concludo o conflito, reapareceu como solvente essencial na fabricao de
lacas, uma funo da qual seria afastada mais tarde por outras substncias.
A indstria qumica do sculo XX se baseou, principalmente, no petrleo e seus derivados. A crise
dos anos 1970 chamou a ateno da sociedade para os riscos da dependncia de um recurso no
renovvel. A diminuio das reservas conhecidas cria a necessidade de apelar a tecnologias de
extrao novas e caras, geralmente insustentveis. A situao poder mudar quando, respondendo
aos apelos da sociedade para diminuir as emisses de carbono, o petrleo seja substitudo parcial ou
totalmente, por fontes de energia alternativas.
A VIA BIOTECNOLGICA
A via biotecnolgica est baseada na transformao da biomassa, um recurso barato e renovvel. Para
substituir a via qumica, devem-se desenvolver processos que possibilitem a obteno de produtos,
materiais e energia a um custo competitivo e com menor impacto ambiental. Todas estas condies
se encontram satisfeitas na obteno de numerosas molculas de interesse industrial, a partir de
milho, de leos vegetais ou de madeira (Tabela 10.1).
-------------TABELA 10.1. Diversidade de produtos derivados de algumas matrias-primas renovveis

SETOR

MATRIA-PRIMA

COMPONENTES

APLICAES

Acar e
amido

Cana-de-acar, beterraba
aucareira, sorgo sacarino, trigo,
milho, batata, arroz, mandioca
etc.

Acar, amido,
melao.

Solventes, produtos farmacuticos, adesivos,


resinas, polmeros, selantes, limpadores, etanol.

leos
vegetais

Canola, soja, coco, girassol,


dend, gorduras animais.

Triglicerdeos,
cidos graxos,
glicerol.

Surfactantes para sabes e detergentes,


ingredientes inativos de produtos farmacuticos,
tintas, pinturas, resinas, cosmticos, cidos
graxos, lubrificantes, materiais de construo.

Madeira

Pinho, eucalipto.

Celulose, papel e
lignina.

Materiais de construo, fibras, polmeros,


resinas, adesivos, pinturas, revestimentos, tintas,
piche.

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A Biotecnologia Industrial fundamenta-se na microbiologia, nas fermentaes e na biocatlise,


recebendo o impacto da biotecnologia moderna (genmica, engenharia metablica, engenharia
gentica), que abre perspectivas novas no melhoramento das linhagens microbianas e das variedades
vegetais.
A produo da vitamina B2 (BASF) e do antibitico cefalexina (DSM Life Sciences Products) so dois
exemplos bem-sucedidos da substituio da sntese qumica pela ao microbiana. Esta resultar
vantajosa sempre que, entre o substrato inicial e o produto final, existam vrios metablitos
intermedirios, porque um agente biolgico ser capaz de realizar diretamente a sequncia completa
de reaes.
A utilizao de organismos geneticamente modificados, permite melhorar os processos produtivos
e desenhar produtos novos. Em relao segurana, cabe lembrar que as caractersticas metablicas
das linhagens industriais esto alteradas, de modo a elas crescerem em condies artificiais muito
estritas, tornando-as incapazes de sobreviver fora do laboratrio ou, eventualmente, de competir com
os microrganismos do ambiente.
A percepo pblica nutre uma atitude neutra, ou favorvel, em relao biotecnologia industrial.
Em parte, porque os produtos so utilizados como insumos para outras indstrias, o que lhes confere
pouca visibilidade. E tambm porque, ao utilizar matrias-primas renovveis e desenvolver processos
menos poluentes com menor gasto de energia, as biotecnologias ajudam a atenuar a imagem
poluidora da indstria qumica. No por acaso que a biotecnologia industrial denominada
biotecnologia branca.
OS PRODUTOS BIOTECNOLGICOS
Alguns processos biotecnolgicos geram substncias em quantidades pequenas (volume baixo) que
sero vendidas a um preo elevado (alto valor agregado). Trata-se geralmente de metablitos
secundrios cuja produo demanda grandes investimentos, um nvel tecnolgico avanado e uma
mo de obra altamente qualificada. Nesta categoria, denominada qumica fina, inserem-se os produtos
farmacuticos e agrcolas, alguns aditivos alimentares, os aminocidos, as vitaminas e as enzimas.
A via biotecnolgica tambm se aplica a algumas substncias fabricadas em grandes quantidades
(volume alto), em processos que demandam investimentos menores, e operaes mais simples. Entre
estes produtos, de valor agregado intermedirio, encontramos metablitos primrios, tais como
alguns solventes, cidos orgnicos e polmeros.
No caso de substncias produzidas em grandes quantidades e com baixo valor agregado, como os
biocombustveis lquidos (etanol, biodiesel) ou gasosos (biogs), alguns pases contam com sistemas
produtivos em pequena escala, funcionando em instalaes spticas e com mo de obra no
especializada. Esses sistemas no exigem mais que equipamentos simples e pequenos investimentos,
mas sua eficincia baixa, de modo que vo sendo substitudos, gradual e progressivamente, por
outros de nvel tecnolgico avanado, gerenciados por grandes empresas, em empreendimentos
economicamente sustentveis.
Atualmente, a via biotecnolgica resulta economicamente vivel para alguns metablitos, as
enzimas, os bioplsticos e os biocombustveis.
METABLITOS DE INTERESSE COMERCIAL
Estima-se que a biotecnologia branca responder, nos prximos anos, por 20% das vendas do setor
qumico. Entre as molculas de interesse comercial, vrios metablitos primrios e secundrios se
destacam por sua versatilidade (Tabela 10.2).

116

BIOTECNOLOGIA E INDSTRIA

LCOOIS E SOLVENTES
Vimos previamente alguns aspectos histricos relacionados com a produo de acetona e butanol por
fermentao. Estima-se que a imobilizao de microrganismos daria um novo impulso sntese de
solventes, aumentando a produtividade em aproximadamente 60%. Tambm deve-se destacar a
importncia do etanol, 95% do qual produzido por via biotecnolgica.
CIDOS ORGNICOS
A produo de cido ctrico (4.0 x 105 toneladas/ano) depende quase exclusivamente do cultivo do
fungo filamentoso Aspergillus niger, em processos fermentativos de diversos tipos. O cido ctrico
utilizado na indstria de alimentos como aditivo (acidulante e antioxidante), na cosmtica como
regulador do pH e, na indstria farmacutica, como anticoagulante e ingrediente de tabletes
efervescentes.
Em relao ao cido actico, os processos industriais modernos tambm dependem da ao
bacteriana (gneros Acetobacter, Gluconacetobacter e Gluconobacter). Com numerosas aplicaes, o
cido actico um precursor de vrias molculas intermedirias, como o anidrido actico e os acetatos
ster, e de produtos como o acetato de celulose, o celofane, o acetato raiom etc. Tambm participa
como solvente na produo de borracha, plsticos, gomas, resinas e leos volteis. A indstria
farmacutica o utiliza como acidificante.
O cido lctico obtido por fermentao bacteriana (Lactobacillus) ou fngica (Rhizopus oryzae),
sendo um importante insumo para as indstrias de alimentos e de frmacos e a cosmtica. Tambm
toma parte, como monmero, na sntese de um polmero biodegradvel, o cido polilctico (PLA).
O cido succnico encontra aplicaes em vrias indstrias (alimentos, frmacos, cosmtica), assim
como na produo de plsticos e de materiais para a indstria automotora. Trata-se de outro bloco
fundamental para a sntese de polmeros, resinas de ABS (acrilo-nitrilo-butadieno), Nylon 6.6,
solventes etc.
AMINOCIDOS
A produo industrial de aminocidos se destina, principalmente, nutrio humana (66%) e ao
enriquecimento de raes animais (33%) e, em menor grau, s indstrias farmacuticas e cosmticas
(1%). O mtodo produtivo mais antigo a extrao, por hidrlise de protenas (soja, cabelos); os outros
mtodos incluem a sntese, a fermentao e a biocatlise.
A sntese qumica apresenta o inconveniente de gerar misturas das duas formas isomricas (acil-D
e acil-L), representadas habitualmente como tipo mo direita" e tipo "mo esquerda". Como os
organismos vivos s assimilam L-aminocidos, estes devem ser separados das misturas racmicas por
biocatlise. A imobilizao de enzimas estereoespecficas nos biorreatores facilita a produo
industrial, reduzindo os custos de maneira significativa. Observe-se que a separao desnecessria
no caso da glicina, que no apresenta ambas as formas, e da DL-metionina, j que os seres vivos
convertem a forma D em L.
A via fermentativa conveniente para a produo de vrios aminocidos. O agente biolgico
Corynebacterium glutamicum produz cido glutmico (1,1 milho de toneladas/ano), que usado na
cozinha oriental como flavorizante (glutamato monossdico), para realar o sabor dos alimentos.
A L-fenilalanina e o cido L-asprtico so obtidos por imobilizao conjunta de Escherichia coli e
Pseudomonas dacunhae, em uma coluna de fermentao, ou por uma bactria geneticamente
modificada (Escherichia coli). Ambos so os componentes do adoante no calrico Aspartame
(15.000 toneladas/ano).

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TABELA 10.2. Metablitos primrios e secundrios obtidos por fermentao e/ou bioconverso enzimtica
METABLITOS PRIMRIOS

EXEMPLOS

lcoois e solventes

Etanol, butanol, acetona, glicerol, manitol.

cidos orgnicos

cido lctico, cido ctrico, cido actico, cido glucnico, cido itacnico, cido
mlico, cido tartrico, cido pirvico, cido succnico.

Aminocidos

cido L-glutmico (monoglutamato de sdio), L-lisina, L-fenilalanina, cido Lasprtico, L-carnitina.

Polissacardeos

Xantana, dextrana, pululana, gelana, agar, alginatos, carrageninas.

Nucleotdeos e nucleosdeos

cido guanlico (5GMP) e cido inosnico (5IMP).

Vitaminas

Vitamina B2 (riboflavina), vitamina C (cido L-ascrbico), vitamina B12


(cianocobalamina).

Corantes

-caroteno, astaxantina, ficocianina, monascina.

METABLITOS SECUNDRIOS

EXEMPLOS

Molculas para a sade humana


e/ou animal

Antibacterianos, antivirais, antifngicos, anti-helmnticos, antitumorais, soros,


imunoglobulinas, vacinas, imunossupressores, estatinas etc.

Molculas para a agricultura

Inseticidas e pesticidas, fatores de crescimento vegetal.

Molculas para a indstria de


alimentos

Condimentantes e aromatizantes para a indstria alimentcia.

--------------

Outros aminocidos cumprem a funo de aditivo em alimentos (L-cistena, 3.000 toneladas/ano), ou


de complemento nutricional em raes animais (L-treonina, 50.000 toneladas/ano; L-lisina 550.000
toneladas/ano). Por outro lado, a indstria farmacutica absorve 1.000 toneladas/ano de L-arginina e
500 toneladas/ano de L-triptfano, de L-valina e de L-leucina.
NUCLEOTDEOS E NUCLEOSDEOS
No Japo, os cidos guanlico (5-GMP) e inosnico (5-IMP) so obtidos mediante diferentes processos
fermentativos, e vendidos comercialmente como potenciadores de sabor.
POLISSACARDEOS
Os espessantes e gelificantes, extrados das algas marinhas, esto sendo substitudos, parcialmente,
por polissacardeos de origem microbiana. A goma xantana (20.000 toneladas/ano), um produto de
fermentao da bactria Xanthomonas campestris, entra na composio de molhos prontos, pudins,
geleias, sorvetes, dentifrcios etc. Suas propriedades espessantes tambm so utilizadas na
recuperao do petrleo.
As dextranas (200 toneladas/ano) so obtidas por via fermentativa, a partir de diversos
microrganismos. As de alto peso molecular so empregadas como espessantes na indstria de
alimentos, na preparao de filmes protetores de sementes (indstria agrcola) e na composio das
emulses fotogrficas. As de baixo peso molecular so usadas como plasma sanguneo artificial, para
melhorar o fluxo sanguneo em casos de traumatismos e cirurgias.
VITAMINAS
Apesar da maior parte das vitaminas serem obtidas, industrialmente, por via sinttica ou extrativa, a
via fermentativa vantajosa nos casos da riboflavina (vitamina B2) e do cido ascrbico (vitamina C).
Ainda a nica possvel para a cianocobalamina (vitamina B12), uma molcula complexa que no

118

BIOTECNOLOGIA E INDSTRIA

sintetizada nem por animais nem por vegetais.


Um precursor da vitamina A, o -caroteno, sintetizado pela alga Dunaliella bardawil, que cresce
na gua salobra, em grandes tanques ao ar livre, em uma regio desrtica perto da costa do Mar
Vermelho (Israel).
ENZIMAS
Algumas enzimas podem ser extradas facilmente dos tecidos ou dos rgos de seres vivos: as amilases
do malte da cevada; a papana da papaia; a ficina do figo, a bromelina do ltex do abacaxi. Do estmago
de sunos se separa a pepsina e do pncreas dos mesmos se obtm a pancreatina, que uma mistura
de amilases, proteases e lipases. J a renina extrada do quarto estmago de bezerros, e a catalase,
do fgado ou do sangue de bovinos.
A extrao de enzimas de origem vegetal ou animal est sujeita disponibilidade de terra e s
flutuaes das colheitas ou do abate. Por isso, a tendncia substitu-las por outras de origem
microbiana que, obtidas mediante processos fermentativos em grande escala, garantem uma
produo regular de qualidade constante.
Mesmo cumprindo uma funo idntica, duas enzimas produzidas por microrganismos diferentes
podem apresentar propriedades dessemelhantes. Por exemplo, a lactase (-galactosidase), uma
enzima que hidrolisa a lactose, est presente em bactrias, leveduras e fungos. No entanto, as
condies timas de funcionamento diferem uma da outra: 400C, 370C e 55-600C (temperatura); 3-4,
7,2 e 6,6 (pH). A escolha de uma enzima proveniente de um microrganismo ou de outro depender
das condies que o bioprocesso demande.
Considerando que ainda h muito a desvendar sobre a biodiversidade microbiana e a arte de alterar
suas vias metablicas, existem grandes chances de encontrar enzimas com propriedades diferentes,
que possibilitem o desenho de processos industriais inovadores. Por outro lado, a chegada das novas
tcnicas de biologia molecular aliadas aos sistemas robotizados de HTS (do ingls, High Throughput
Selection) dar, certamente, um impulso extraordinrio a esta rea.
A otimizao de um processo industrial contempla o custo da matria-prima, o tipo de fermentao
(submersa ou em meio semisslido) e os controles de pH e temperatura, necessrios para o bom
desenvolvimento do processo. Do ponto de vista econmico, no vale a pena elaborar ou
redimensionar esses parmetros para todo microrganismo produtor de uma enzima interessante.
Muito mais proveitosa a transferncia da sequncia codificadora dessa enzima a um dos
microrganismos industriais j bem conhecidos, tais como as bactrias do gnero Bacillus (Bacillus
subtilis) e os fungos do gnero Aspergillus (Aspergillus oryzae).
Mais de 60% da produo comercial de enzimas procede da biotecnologia moderna, com linhagens
seguras, versteis, altamente produtivas, sem desvios metablicos laterais, e adaptveis aos
bioprocessos industriais.
Um fator que incide no custo de uma enzima a dificuldade tcnica encontrada na separao e
purificao (etapa downstream). Em geral, as enzimas mais baratas so as extracelulares, ou seja, as
que so secretadas para fora da clula como, por exemplo, as hidrolases (amilases, proteases e
celulases). As mais caras so as enzimas intracelulares, que precisam ter um grau de pureza maior para
ser utilizadas como frmacos, ou como reagentes em testes de diagnstico.
As enzimas so insumos para outras indstrias, especialmente as de alimentos e bebidas, raes,
detergentes, analticas e farmacuticas. Atualmente, o maior produtor Novozyme (Dinamarca), que
responde por 48% do mercado. A empresa mantm em funcionamento vrios fermentadores de
80.000 l, contabiliza mais de 6.000 patentes e 700 produtos, dedicando a quase totalidade de seu
oramento de pesquisa e desenvolvimento otimizao de microrganismos, produtos enzimticos e
tecnologia. A demanda de enzimas industriais se mantm relativamente estvel em economias

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maduras (Estados Unidos, Unio Europeia, Japo e Canad) e cresce em economias em


desenvolvimento.
BIOPOLMEROS E BIOPLSTICOS
A denominao de biopolmeros abrange aqueles que so sintetizados pelos seres vivos, como a
celulose, o amido e os leos vegetais; e os que resultam da polimerizao de uma molcula bsica,
como o cido lctico, proveniente de uma fonte renovvel.
Um dos bioplsticos mais versteis o polilactato (PLA), um polister comercializado como Ingeo,
obtido por polimerizao do cido lctico, um produto da fermentao de milho. Utiliza-se como
revestimento de filmes e de papel (BASF), recheio de almofadas e edredons (NatureWorks) e material
de embalagens descartveis por diversas empresas (Coca-Cola, McDonalds). Tambm est sendo
aproveitado na indstria automotora (Hyundai) e eletrnica (Samsung). Uma das novas aplicaes do
Ingeo por NatureWorks, est nas impressoras 3D.
Polmeros sintetizados diretamente por microrganismos, como os poli-hidroxialcanoatos (PHAs) e
o poli-hidroxibutirato (PHB), j entraram no mercado de embalagens das indstrias de alimentos e de
cosmticos. Este ltimo, por ser biocompatvel, encontrou importantes aplicaes nas reas mdica e
veterinria (Biopol). No interior de So Paulo, uma usina piloto (Biocycle), relacionada com empresas
do setor sucroalcooleiro (Biagi, Balbo), j est produzindo PHB por fermentao bacteriana do acar
de cana. Est sendo pesquisada a transferncia dos genes codificadores de PHA (Ralstonia eutropha)
e de PHB (Alcaligenes eutropus), a microrganismos e plantas (canola).
A indstria dispe atualmente de, aproximadamente, trinta molculas essenciais para a construo
de polmeros, tais como os cidos carboxlicos, o etanol, os aminocidos, os triglicerdeos, o furfural, o
sorbitol, o glicerol etc. Essas biomolculas possibilitam tanto a obteno de plsticos inovadores
biodegradveis, como a de plsticos convencionais, no biodegradveis e semelhantes aos de origem
petroqumica. Entre estes: as resinas de poliuretano sintetizadas a partir de leo de soja, o polister
de origem bacteriano Sorona 3GT (DuPont, Genencor) de amplo uso na indstria txtil, do PVC ou
polietileno verde (Braskem, Tetrapak), que um polmero do etileno obtido a partir do etanol de
cana utilizado nas embalagens de leite e sucos de fruta, e na confeco de sacos de lixo.
Como caracterizar um bioplstico? Pela origem? Pela biodegradabilidade? Existe bastante confuso
a esse respeito, porque alguns setores consideram que a provenincia ou a biodegradabilidade
bastariam para aplicar-se o rtulo de bioplstico. Contudo, uma substncia s deveria ser considerada
bioplstico se respondesse, simultaneamente, aos dois critrios: provenincia de uma fonte renovvel
e biodegradabilidade.
OS BIOCOMBUSTVEIS
A combusto a forma mais simples de liberar energia; por isso algumas comunidades rurais queimam
madeira, resduos vegetais ou excrementos secos de ruminantes. Contudo, 75% da energia consumida
no planeta retirada dos combustveis fsseis (carvo, petrleo e gs natural). Considerando que as
reservas so limitadas, e que a queima de combustveis fsseis a causa de vrios problemas
ambientais, parece acertado buscar outras formas de extrair energia.
Uma fonte alternativa a biomassa, um recurso que, por ser renovvel, pode fornecer energia de
modo sustentvel. A grande vantagem da biomassa sobre os combustveis fsseis que libera uma
quantidade de CO2 igual que absorveu durante o seu crescimento em um perodo recente, enquanto
a quantidade de CO2 liberada pelos combustveis fsseis fora removida do ambiente h milhes de
anos.
--------------

120

BIOTECNOLOGIA E INDSTRIA

FIGURA 10.1. As etapas necessrias para a produo de etanol a partir de diferentes matrias-primas

BIOMASSA AMILCEA

BIOMASSA SACARINA

Hidrlise enzimtica

BIOMASSA CELULSICA

Hidrlise cida ou enzimtica

CALDO AUCARADO FERMENTESCVEL


Fermentao
Destilao

ETANOL

--------------

A tecnologia fermentativa nos oferece combustveis eficientes, como o etanol ou o biogs. Existem
outras possibilidades, tais como a obteno de biodiesel por transformao qumica de leos vegetais
e, futuramente, a produo de hidrognio a partir de gua, utilizando a capacidade fotossinttica das
microalgas.
Os biocombustveis contribuem para reduzir alguns dos problemas ambientais que tanto nos afligem,
tais como a acumulao de CO2 e outros gases de efeito estufa (xido nitroso e metano). Nos pases
que os adotam, os biocombustveis substituem a gasolina, parcial ou totalmente, modificando a
realidade do setor de transportes.
Curiosamente, os primeiros automveis de Henry Ford, com motores de ignio por centelha,
funcionavam com etanol de milho, e os primeiros motores de Rudolf Diesel, de ignio por
compresso, o faziam com leo de amendoim. Com o petrleo barato, passou-se a utilizar gasolina e
leo diesel para os automotores, mas o aumento dos preos, ocorrido na dcada de 1970, mostrou a
convenincia de substituir os derivados do petrleo por etanol e biodiesel.
Atualmente, o etanol o principal biocombustvel lquido para transporte. A maior parte da
produo (90%) est concentrada no Brasil e nos Estados Unidos, como produto da fermentao da
cana-de-acar e do milho, respectivamente. Os outros pases produtores so o Canad, a China, a
Unio Europeia (Frana e Alemanha) e a ndia.
Embora um litro de etanol fornea bem menos energia que um litro de gasolina (66%), sua maior
octanagem melhora o desempenho das misturas etanol-gasolina. At que ponto o etanol ser capaz
de substituir a gasolina? A resposta depender da tecnologia disponvel, do processo produtivo e do
preo do petrleo. Estima-se que, no Brasil, o bioetanol de cana-de-acar seria competitivo com o
barril de petrleo a US$ 30-35; nos Estados Unidos, onde o etanol se produz a partir de milho, isso
ocorreria com o barril de petrleo a US$ 55-80.
No entanto, a produo de etanol a partir de biomassa levanta alguns problemas. Como os cultivos
do milho e da cana demandam muita gua, procura-se encontrar outras fontes menos exigentes:
pinho-manso, sorgo sacarino, capim (Panicum virgatum) e outras gramneas perenes (Miscanthus).

121

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Uma fonte de controvrsia o desvio de matrias-primas alimentcias, como o milho ou a soja, para a
produo de biocombustveis, porque redunda no aumento do preo dos alimentos e penaliza os
setores mais pobres da populao. Tambm preocupa a expanso dos cultivos agroindustriais,
favorecendo o desmatamento e afetando a biodiversidade. A soluo parece estar na obteno de
etanol a partir de resduos lignocelulsicos, uma tecnologia complexa, ainda em desenvolvimento
(Figura 10.1).
O ETANOL
A PRODUO POR VIA FERMENTATIVA
A produo de etanol pela via biotecnolgica envolve a ao fermentativa de leveduras sobre um
substrato adequado: cana-de-acar, beterraba aucareira, sorgo sacarino, milho. No Brasil, a matriaprima a cana-de-acar (Figura 10.2).
Aps a colheita, a cana transportada at a usina onde triturada, separando o caldo do bagao, que
utilizado como combustvel, gerando calor e eletricidade para o prprio estabelecimento. Reservase o caldo produo de acar ou de etanol. Um subproduto da produo de acar, o melao,
reincorporado ao processo produtivo de sacarose ou misturado ao caldo de cana para a obteno de
etanol.
Antes de dar incio fermentao, so acrescentados no caldo os nutrientes e antisspticos
necessrios, ajustando-se tambm outros parmetros, como a temperatura e o pH. O processo
fermentativo ocorre nas dornas (biorreatores) por obra das leveduras, naturais ou selecionadas. A
conduo do procedimento, contnua ou descontnua, depende do estabelecimento assim como da
complexidade e automao dos equipamentos disponveis. Concluda a fermentao, recuperam-se as
leveduras por centrifugao, com vistas a uma posterior reutilizao e/ou produo de rao animal.
Da destilao do vinho se obtm a flegma, um lquido com lcool em maior concentrao, e um
resduo denominado vinhaa ou vinhoto, que deve ser tratado antes de despejado no ambiente. A
retificao, isto , a eliminao das impurezas da flegma, gera o lcool hidratado, que convertido em
lcool anidro por desidratao.
A SUBSTITUIO DA GASOLINA O CASO DO BRASIL
No Brasil, 63% da energia provm de fontes renovveis: grandes hidroeltricas (42%), madeira (10%),
cana-de-acar (9%), outras (2%). A contribuio da cana-de-acar est diretamente relacionada com
o uso do etanol como combustvel.
Calcula-se que 60% da cana-de-acar plantada no Brasil destina-se produo de etanol por
fermentao. Em outros pases utilizam-se matrias-primas diferentes, tais como a beterraba
aucareira (Unio Europeia) ou o milho (Estados Unidos). A desvantagem das matrias-primas
amilceas que demandam um tratamento enzimtico (sacarificao), antes da fermentao (Figura
10.1).
A crise do petrleo, na dcada de 1970, provocou um aumento significativo do preo, mostrando a
necessidade de substituir a gasolina por outras fontes de energia. Em 1975, o Brasil instituiu o
Programa Nacional do lcool (Pr-lcool), visando a produo de etanol como combustvel alternativo
para os carros de passeio. Pouco tempo depois, na dcada de 1980, 5.000.000 de carros funcionavam
com etanol (94% de etanol, 6% de gua), e outros 9.000.000 com uma mistura de lcool e gasolina
(78% de gasolina, 22% de lcool).
Em 1989, a queda do preo do petrleo e os problemas inerentes ao prprio Pr-lcool (subsdios,
baixa produtividade) provocaram uma crise de desabastecimento, abalando seriamente o programa.

122

BIOTECNOLOGIA E INDSTRIA

Reativado na dcada de 1990, desta vez obedecendo a critrios de produtividade, tanto na lavoura
como na indstria, o programa deixou de receber subsdios.
Hoje, mais de trs milhes de carros so movidos com lcool hidratado, enquanto o lcool anidro
aditivado gasolina, em uma proporo que varia entre 20 e 24%, dependendo da relao
oferta/procura. A introduo, em 2003, da tecnologia flexfuel, que permite abastecer os carros tanto
com gasolina como com lcool hidratado, deixa ao consumidor a possibilidade de escolher o
combustvel, em funo de consideraes econmicas e ambientais.
A produo de etanol no Brasil, estimada em 29,2 bilhes de litros, passa por uma fase de pouco
crescimento, devido s polticas energticas. O setor sucroalcooleiro de hoje um enorme complexo
-------------FIGURA 10.2. A produo de etanol a partir da cana-de-acar

LAVOURA
Transporte
CANA-DE-ACAR
Triturao e extrao

CALDO, GARAPA
OU MOSTO

BAGAO Combustvel

LEVEDURAS
Reaproveitamento
Fermentao

MELAO
ACAR

CO2

VINHO

LEVEDURAS Rao animal

Destilao

FLEGMA

VINHAA Fertilizante

Retificao

ETANOL HIDRATADO
Desidratao

ETANOL ANIDRO

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industrial de mais de 400 indstrias, com participao de vrias multinacionais em um mercado


consolidado atravs de ciclos de aquisies e fuses. As pequenas usinas foram suplantadas por outras,
tecnologicamente aprimoradas, que desenvolvem sistemas de produo integrados (biorrefinerias).
Lentamente, a mecanizao da colheita elimina a necessidade das queimadas e modifica as
condies de trabalho nos canaviais. Alm de etanol, as instalaes industriais fabricam aglomerado,
rao animal, adubo, celulose etc. O aproveitamento do bagao fundamental, porque permite gerar
a energia necessria para o funcionamento das usinas e at export-la, aumentando a matriz
energtica renovvel do pas.
A obteno de variedades de cana-de-acar com diferentes perodos de desenvolvimento (rpido,
mdio e tardio), assim como o plantio sequencial, diminuem as flutuaes na oferta de matria-prima.
O projeto Genoma-cana, uma parceria entre a Fapesp (Fundao de Amparo Pesquisa do Estado de
So Paulo), vrias universidades e o setor sucroalcooleiro, facilitar o melhoramento da planta (teor
de acar, resistncia a pragas, resistncia seca). Encontra-se em andamento o melhoramento das
leveduras, procurando desenvolver microrganismos mais produtivos e tolerantes ao etanol, ou com
caractersticas (floculao) que facilitem sua recuperao uma vez concluda a fermentao.
O BIOGS
A BIODIGESTO ANAERBIA
A digesto microbiana da matria orgnica, em condies aerbias produz gua (H 2O) e dixido de
carbono (CO2), e em condies anaerbias, metano (CH4), dixido de carbono (CO2) e gua (Figura
10.3). Nos ambientes confinados de pntanos e sepulcros, o metano liberado gera alguns fenmenos
assustadores de combusto espontnea (luzes dos cemitrios). Nas condies mais controladas de
um aterro sanitrio ou de um biorreator (= biodigestor), o gs acumulado poder ser utilizado como
combustvel (biogs).
O processo fermentativo de biodigesto anaerbia se desenvolve sobre resduos rurais (esterco),
agroindustriais (vinhaa, efluentes das indstrias de laticnios e dos matadouros), domsticos ou
comunitrios (lama de esgotos) e, tambm, sobre plantas (aguap). Coloca-se a matria-prima no
biodigestor, em condies anaerbias e pH neutro (6,7-7,7), evitando a presena de substncias
solventes ou de inseticidas, que prejudicariam o desenvolvimento do processo.
Dependendo da temperatura do biodigestor, haver uma multiplicao de bactrias mesfilas
0
(35 C) que processaro a matria-prima em 15-30 dias, ou termfilas (550C) que o faro em 12-14 dias.
A segunda opo libera mais biogs, mas requer maior consumo de energia e um monitoramento
cuidadoso, porque as bactrias termfilas no suportam bem as variaes de temperatura.
A decomposio anaerbia envolve a sucesso biolgica de vrias populaes naturais de
microrganismos, de modo que as melhoras tecnolgicas visam, exclusivamente, a engenharia do
processo. Este pode ser conduzido tanto de maneira descontnua como contnua, em biodigestores
especialmente construdos para permitir o abastecimento dirio de matria-prima e a retirada de
biogs. Existe um nmero grande de modelos de fermentadores, desde os muito simples (modelo
tailands, chins, indiano) at os automatizados, que processam um volume grande de matria-prima.
Um dos resduos da biodigesto um material slido fibroso que, uma vez compostado e prensado,
vende-se como solo artificial, para o cultivo de plantas ou para melhorar a qualidade do solo. O outro
um efluente lquido, que se aproveita como adubo (Figura 10.4).
A UTILIZAO DO BIOGS
O biogs est formado por 50-65% de metano e 35-50% de dixido de carbono, com traos de gs
sulfdrico (corrosivo), nitrognio, oxignio e hidrognio; pode ser usado diretamente ou armazenado.

124

BIOTECNOLOGIA E INDSTRIA

Entre as aplicaes possveis est o abastecimento do consumo domstico (foges, lampies ou


aquecedores), a gerao de energia eltrica e o acionamento de motores de veculos. Seu poder
calorfico menor que o do gs natural, um combustvel fssil cuja composio inclui metano, etano,
propano e butano (Tabela 10.3).
A primeira fbrica de biogs comeou a funcionar em 1859 em Bumbai (ndia). A iniciativa
alcanou bastante sucesso e, em 1980, a ndia contava com 150.000 biodigestores. Talvez seja esta
uma das razes pelas quais a digesto anaerbia seja considerada um processo biotecnolgico
apropriado para pequenas cidades e comunidades rurais. No entanto, a produo de biogs pode
alcanar outra dimenso, se for encarada como uma tecnologia moderna que visa a produo de calor
e de eletricidade (Figura 10.5).
A Dinamarca o lder mundial na produo de biogs, estando a tecnologia bem desenvolvida em
outros pases como os Estados Unidos, a Alemanha, a Frana, o Japo e a Sucia. Em 1995, quando
contabilizava mais de cinco milhes de pequenos biodigestores rurais, a China teve o empenho de
construir reatores tecnologicamente avanados para o tratamento de rejeitos urbanos e a gerao
de eletricidade.
Na Amrica Latina, algumas pequenas comunidades contam com geradores de biogs que as
abastecem com energia suficiente para cozer os alimentos ou alimentar um motor. Contudo, nos
ltimos anos surgiram vrios projetos ambiciosos de explorao do potencial existente nos aterros
sanitrios urbanos (Olavarra, Argentina; Bandeirantes, Nova Iguau e Petrpolis, Brasil; Santiago,
Chile; Monterrey, Mxico; Maldonado, Uruguai). O tratamento dos rejeitos agroindustriais,
especialmente da indstria aucareira e da suinocultura, tambm uma fonte considervel de biogs.
Cuba conta com mais de 100 fbricas produtoras de biogs.
A produo de bioplsticos a partir do biogs gerado em estabelecimentos agrcolas representa
uma tecnologia recente, patenteada pela empresa norteamericana Newlight. A empresa sueca IKEA,
especializada em mobilirio domstico, planeja substituir 40% do plstico utilizado pelo bioplstico
da Newlight.
-------------FIGURA 10.3. A biodigesto em condies aerbias e anaerbias.

RESDUOS ORGNICOS VEGETAIS E ANIMAIS


O2

MOLCULAS ORGNICAS SIMPLES

ACETATO

Aerobiose

H2O

Anaerobiose

CO2

H2 O

CH4

CO2

BIOGS

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FIGURA 10.4. As complexas etapas da produo de biogs dentro do biodigestor

MATRIA-PRIMA

MOLCULAS COMPLEXAS
Microrganismos fermentativos
MOLCULAS SIMPLES
Bactrias acidognicas

BIODIGESTOR
CIDOS E LCOOIS

Bactrias acetognicas
ACETATO
Bactrias metanognicas

MATERIAL SLIDO FIBROSO


+ EFLUENTE LQUIDO

BIOGS

TABELA 10.3. O poder calorfico de vrios combustveis.

GS
Butano
Propano
Metano

PODER CALORFICO (Kcal/m3)


28.000
22.000
8.500

GS
Gs natural
Biogs
Gs de cidade

PODER CALORFICO (Kcal/m3)


7.600
5.500
4.000

FIGURA 10.5. As utilizaes do biogs

BIOGS

PLANTAS PURIFICADORAS
E DE ARMAZENAMENTO
ENERGIA TRMICA

ENERGIA ELTRICA
COMBUSTVEL
TRANSPORTE AUTOMOTOR

126

BIOTECNOLOGIA E INDSTRIA

O BIODIESEL
A TRANSESTERIFICAO
O biodiesel um combustvel composto por steres (etlicos ou metlicos) produzidos na reao
qumica de transesterificao entre leos vegetais e lcool (etanol ou metanol), em presena de um
catalisador inorgnico ou enzimtico (lpases) (Figura 10.6).
Um dos subprodutos da reao o glicerol (5 a 10% do produto bruto), geralmente aproveitado
pelas indstrias de alimentos, de cosmtica e de medicamentos. Diferentemente do bagao de cana,
o glicerol gera uma substncia txica (acrolena) quando queimado, de modo que aumentar a
produo de biodiesel significa aumentar o leque de aplicaes do glicerol.
O biodiesel fornece entre 88 e 95% da energia do diesel, mas pode ser misturado com o diesel
convencional, em proporo variando de 1% (B1) a 20% (B20), aumentando a qualidade do
combustvel e diminuindo a emisso de partculas poluentes e de gases txicos na atmosfera.
-------------FIGURA 10.6. A reao de transesterificao

H2C O CO R
HC O CO R

CH2OH
+

3R OH

H2C O CO R
Triglicerdeos

HCOH

3R O CO R

CH2OH
lcool

Glicerol

steres

--------------

A PRODUO DE BIODIESEL
A produo de biodiesel est localizada principalmente na Unio Europeia (60%) e, em menor parte,
nos Estados Unidos, na China, na Indonsia e na Malsia. A matria-prima variada: soja nos Estados
Unidos, canola na Unio Europeia e no Canad, soja e girassol na Argentina, dend na sia. No Brasil,
tem-se experimentado soja, mamona, babau, dend, girassol, milho, amendoim, pinho-manso etc.
A implementao do Programa Nacional de Produo e Uso de Biodiesel (PNPB) estimula a
produo sustentvel, enfatizando a incluso social e o desenvolvimento regional. Desde 2010,
adiciona-se no Brasil 5% de biodiesel ao diesel convencional, estimando-se que a proporo chegue a
20% at 2020.
Restam alguns pontos a considerar, especialmente em relao utilizao de matrias-primas
como a mamona, com o intuito de estimular o pequeno agricultor. Em princpio, o biodiesel carbononeutro. No entanto, diferente do etanol de cana, o sistema produtivo seria carbono-negativo, quando
se leva em conta a energia necessria para adubao e irrigao da terra, a movimentao da
maquinaria agrcola, o armazenamento e transporte da matria-prima e dos produtos etc.

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Do ponto de vista energtico, os sistemas produtivos tradicionais mais eficientes seriam os associados
aos complexos agroindustriais (soja, milho, girassol), embora apresentem o grave defeito de desviar
para a produo de energia as matrias-primas de alimentos e raes.
O PANORAMA ATUAL
A primeira gerao de biocombustveis abrange o etanol (acar de cana-de-acar, sorgo sacarino ou
beterraba, amido de milho) e o biodiesel (leos vegetais). A segunda gerao de bioetanol utilizaria
biomassa lignocelulsica proveniente dos resduos agroindustriais, tais como bagao e folhas de cana,
palha e sabugo de milho, serraduras e aparas de madeira etc.
A maior dificuldade reside na prpria estrutura da matria-prima lignocelulsica. A celulose
(polmero de hexoses) e a hemicelulose (polmero de hexoses e de pentoses) se encontram
circundadas por lignina, uma substncia de suporte das plantas, sendo necessrio um pr-tratamento
que as separe, possibilitando a hidrlise enzimtica e a liberao de acares fermentescveis (hexoses
e pentoses).
Equipamentos com o design apropriado e enzimas celulolticas (celulases e hemicelulases) para uso
indstrial j esto a caminho. Algumas indstrias funcionam experimentalmente na Sucia, na
Espanha, na Dinamarca, no Canad e nos Estados Unidos. O Brasil conta, desde 2013, com uma
instalao piloto em Alagoas (GranBio).

BIORREFINARIAS E NOVAS BIOINDSTRIAS


O milho d origem a numerosos produtos: glicose, cido ctrico, bioplstico, biocorantes, bioetanol,
xantano, lisina, vitaminas etc. Por analogia com as refinarias de petrleo, uma biorrefinaria um
complexo industrial com instalaes para o processamento biotecnolgico, qumico, fsico e trmico
da matria-prima renovvel, que ser transformada em numerosos intermedirios qumicos e
bioqumicos, alimentando um conjunto de linhas de produo muito diversificado.
Localizadas perto das fontes de matria-prima, e visando a autossustentabilidade energtica, o
objetivo final das biorrefinarias gerar numerosos produtos intermedirios e funcionar sem
desperdcio algum.
Distante do consumidor, a Biotecnologia Industrial encontra poucas resistncias. O
desenvolvimento da biologia molecular e a chegada da biologia sinttica abrem novas perspectivas,
que vo desde a produo de biocombustveis (volume alto, baixo valor agregado) para o transporte
at a obteno de metablitos intermedirios (volume baixo, alto valor agregado) para as indstrias
de cosmtica e de alimentao.
Dentre as numerosas empresas existentes, que utilizam a biologia sinttica para novas aplicaes,
Amyris do Brasil e Solazyme Bunge mantm instalaes no Brasil, perto do setor sucroalcooleiro ao
qual esto ligadas. Os pareceres da CTNBio (Comisso Tcnica Nacional de Biossegurana) sobre as
construes microbianas respectivas podem ser consultados em www.ctnbio.gov.br.
O CASO AMYRIS
A artemisina (quinghaosu) um medicamento antimalrico, obtido a partir de um extrato da planta
Artemisia annua. Sua descoberta, em plena Revoluo Cultural, valeu o Prmio Nobel de Medicina de
2015 pesquisadora chinesa Tu YouYou.
Em 2000, a equipe de J. Keasling em Berkeley (Califrnia, Estados Unidos) obteve, via engenharia
gentica, uma levedura produtora de artemisina. Em 2003, Keasling fundou a empresa Amyris

128

BIOTECNOLOGIA E INDSTRIA

Biotechnology e, com o apoio da Fundao Bill e Melinda Gates e de Sanofi-Aventis, conseguiu


aumentar significativamente (100.000 X) a produo de artemisina, diminuindo o custo do tratamento
a menos de 1 dlar (Figura 10.7 A).
Bloqueando uma via metablica celular da levedura, Amyris obteve uma linhagem que, em vez de
artemisina, produz farneseno (Biofene, C15H24). Alm de ser o precursor qumico de numerosos
produtos, a hidrogenao o transforma em farnesano ou bioquerosene. Um trunfo, considerando que
os custos tornam invivel a produo de farneseno pelas vias convencionais.
O caminho metablico da artemisina consta de nove genes, cada um com aproximadamente 1.500
bases. Modificaes nas vias metablicas abrem o caminho para a produo de combustveis, ou de
qualquer outra substncia (Figura 10.7 B). Procurando as combinaes mais interessantes e eficientes,
infinitas variantes gnicas da levedura foram sintetizadas e testadas, utilizando microarrays de DNA e
sistemas robotizados de rastreio de alto rendimento (HTS).
-------------FIGURA 10.7. O caso Amyris
A. Do quinghaosu artemisina.
Artemisia annua
QINGHAOSU

Escherichia coli

ARTEMISINA

Saccharomyces cerevisiae

B.

Produtos gerados na plataforma tecnolgica baseada na engenharia metablica da levedura (via dos
isoprenoides ou terpenos)

MATRIA-PRIMA (Acar)
ARTEMISINA (antimalrico)

BIOFENO
Farneseno (C15)

Farnesano

NEOSSANCE
Esqualeno e
Hemiesqualeno

COSMTICOS

BIODIESEL E OUTROS PRODUTOS QUMICOS

Isopreno (C5)

COMBUSTVEL DE AVIAO
Isoprenoides (C10)
POLMEROS

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A empresa conta hoje com leveduras capazes de transformar a cana de acar (Amyris do Brasil) ou o
sorgo sacarino (Amyris Fuels, Estados Unidos) em biodiesel ou combustvel de avio, este ltimo
testado em parceria com a empresa TOTAL. Atualmente, a plataforma tecnolgica do farneseno
renovvel pode sintetizar mais de 1.000 produtos, entre combustveis, cosmticos, emolientes,
fragrncias, polmeros, lubrificantes e biofrmacos.
De particular interesse so o esqualeno e hemiesqualeno, derivados do farneseno, que compem
a linha Biossance, um emoliente com numerosas aplicaes em cosmtica, inclusive na remoo de
maquillage.
O CASO SOLAZYME (TerraVia)
Assim como as plantas, as microalgas sintetizam e acumulam lipdios. Existem dois mtodos clssicos
para o cultivo de microalgas autotrficas, ambos com algumas vantagens e desvantagens. Os grandes
tanques ao ar livre aproveitam terras no cultivveis, gua salobra e luz solar, mas contaminam com
facilidade. Os fotobiorreatores fechados contaminam muito menos, mas so mais caros, porque
demandam iluminao artificial e certa complexidade tecnolgica.
A empresa Solazyme modificou geneticamente a alga heterotrfica Prototheca moriformis, de
modo a produzir grande quantidade de leos vegetais (triglicerdeos) e bioprodutos a partir de uma
matria-prima que pode ser sacarose de cana, dextrose de milho e, inclusive, materiais de origem
celulsicos (Figura 10.8).
Em relao ao biodiesel, o uso de algas para a produo de hidrocarbonetos e triacilglicerdeos
permitiria dedicar terras frteis e gua doce produo de alimentos. Por outro lado, a adio de
bioquerosene ao querosene diminuiria os custos do combustvel de avio. A plataforma tecnolgica
permite a produo de biodiesel, surfactantes, lubricantes, polmeros, leos comestveis, suplementos
nutricionais etc.
Recentemente, a empresa Solazyme mudou seu nome para TerraVia anunciando que no futuro sua
plataforma estaria dedicada produo de produtos alimentcios (protena, lipdios, leos de cozinha)
e cosmticos. Um dos produtos de sucesso o Algenist um emoliente para a pele, de interesse
cosmtico, que pode ser encontrado em grandes redes de distribuio dos Estados Unidos, da Europa
e do Japo (Sephora).
-------------FIGURA 10.8. O caso Solazyme

Luz solar + CO2


BIOCOMBUSTVEIS (Biodiesel)
Biomassa
QUMICA VERDE (Surfactantes, lubricantes e polmeros)
Algas

Triglicerdeos
ALIMENTOS E RAES
(Suplementos nutricionais, leos comestveis)
COSMTICA (emolientes, Algenist para o cuidado da pele)

130

C A P T U L O 11

BIOTECNOLOGIA E MEIO AMBIENTE

O DESENVOLVIMENTO SUSTENTVEL
Qual o impacto das atividades humanas sobre o meio ambiente? Que legado deixaremos para as
prximas geraes? Da resposta emerge o conceito de desenvolvimento sustentvel, definido como
a capacidade de atender s necessidades do presente, sem comprometer a capacidade das geraes
futuras em atender suas prprias necessidades (Informe Brtland, 1987).
O desenvolvimento sustentvel depende das aes realizadas nas reas econmica, social e
ambiental. Esse o consenso alcanado ao longo de mais de duas dcadas, de vrias conferncias
internacionais (Rio de Janeiro, 1992 e Agenda 21; Kyoto, 1997; Johanesburgo, 2002; Copenhague,
2009; Cancn, 2010; Durban, 2011; Rio de Janeiro, 2012) e dos acordos alcanados, na Agenda 21 e
nas Conferncias das Partes sobre Biodiversidade e Clima. Os relatrios publicados, em 2007, pelo
Painel Intergovernamental sobre Mudanas Climticas (IPCC) apontaram a responsabilidade do
homem no futuro do planeta, indicando que no podem ser proteladas as aes concretas de proteo
do meio ambiente.
Qual a contribuio das biotecnologias para o desenvolvimento sustentvel? Em relao
economia, diminuir os custos no s da matria-prima como da produo industrial, com processos e
produtos novos e/ou de maior valor agregado. Na rea social, possibilitar a conservao ou a criao
de empregos atravs do desenvolvimento de novas plataformas tecnolgicas. E, na rea ambiental,
cumprir um importante papel na preveno, no monitoramento e na remediao da contaminao.
Pensar globalmente, agir localmente. Os problemas ambientais so muito pontuais, cada um deles
demanda um tratamento particular, e o procedimento deve ter uma relao custo/benefcio
interessante. Nem sempre existe um produto a patentear; havendo um servio a prestar, a tecnologia
fica a cargo de organizaes governamentais ou de firmas que agem localmente. A fim de responder
s diversas demandas do mercado, algumas contam com uma plataforma de produo de
microrganismos, isolados da natureza, em escala industrial.
AS TECNOLOGIAS LIMPAS
Pouco a pouco, a sociedade est aceitando que prefervel deixar de contaminar, a desenvolver
mtodos para limpar o ambiente. No contexto das chamadas "biotecnologias brancas", vrias
tecnologias limpas podem substituir outras mais poluentes, ajudando tambm a reduzir o volume de
resduos domsticos, agrcolas e industriais.

BIOTECNOLOGIA: ENSINO E DIVULGAO (http://bteduc.com)

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A SUBSTITUIO DE PROCESSOS INDUSTRIAIS


A TECNOLOGIA ENZIMTICA
Diferentemente dos catalisadores no biolgicos, as enzimas so especficas, no txicas e
biodegradveis. Essas propriedades permitem, tecnologia enzimtica, a substituio de alguns
processos e produtos industriais por outros menos agressivos ao meio ambiente em setores
reconhecidamente poluentes, tais como as indstrias de alimentos, raes, detergentes, txteis, papel
e celulose, couros etc.
Nos curtumes, o uso de enzimas reduz em 40% o consumo de derivados do enxofre, ao tempo que
produz couro de melhor qualidade. A introduo de at oito enzimas nos detergentes evita a fervura
das roupas, diminuindo o consumo de energia e facilitando a retirada das manchas.
Os plsticos representam uma frao significativa (20% v/v) do lixo dos pases industrializados,
sendo a maior parte proveniente das embalagens convencionais da indstria de alimentos. Alm de
permanecerem por longo tempo na natureza, sua fabricao envolve uma matria-prima no
renovvel (petrleo) e um processo de sntese muito poluente, que gasta uma quantidade grande de
energia.
Em curto ou mdio prazo, esses plsticos convencionais podero ser substitudos por polmeros de
origem bacteriana ou vegetal, compostveis em poucos meses. Uma das vantagens das embalagens
bioplsticas de alimentos que degradam junto com os restos de comida, dispensando as etapas de
triagem e limpeza.
Na maioria dos casos, as linhagens utilizadas na tecnologia enzimtica e na produo de bioplsticos
so OGMs (Organismos Geneticamente Modificados) que no geram maior oposio na sociedade,
talvez devido ao seu uso para a produo de insumos, dentro de fermentadores industriais, em
sistemas de conteno.
Como agentes biolgicos, as enzimas tornam os processos produtivos mais limpos e seguros,
diminuindo o consumo de energia e a quantidade de resduos. O desenvolvimento de enzimas ativas
a altas temperaturas, em solventes no aquosos e em meios slidos, poder futuramente expandir
suas aplicaes.
A INDSTRIA DE PAPEL E CELULOSE
A indstria de papel e celulose uma atividade em expanso que gera, no Brasil, 128.000 empregos
diretos (77.000 na indstria e 51.000 nas florestas) e 640.000 indiretos, em 540 municpios.
Atualmente, as principais empresas so Klabin, Suzano e Fibria, uma fuso entre a Votorantim e a
Aracruz.
A atividade industrial exige a expanso das florestas, porque a matria-prima para a produo de
papel e celulose a madeira. Estima-se que, em 2017, o Brasil contar com 2,5 milhes de hectares de
florestas plantadas de eucaliptos (60%) e pinhos (30%).
A maior dificuldade reside na prpria estrutura da matria-prima lignocelulsica. Na madeira, a
celulose (polmero de hexoses) e a hemicelulose (polmero de hexoses e de pentoses) esto
circundadas por lignina, uma substncia de suporte das plantas, que deve ser descartada, mediante
um tratamento qumico, em meio alcalino e a altas temperaturas. A eliminao da maior parte da
lignina (90%) libera as fibras de celulose e hemicelulose, possibilitando a hidrlise enzimtica da
madeira e a formao de acares fermentescveis (hexoses e pentoses).
No tratamento qumico da lignina, resta uma pequena quantidade (10%) que confere uma cor
caracterstica pasta Kraft, base da fabricao de carto e papel pardo. O branqueamento do papel
requer outro tratamento especfico, com oxignio e cloro, no qual se formam derivados clorados

132

BIOTECNOLOGIA E MEIO AMBIENTE

txicos. Um procedimento alternativo o biopulping, em que a enzima xilanase degrada o xilano da


hemicelulose, facilitando a eliminao da lignina que lhe est associada (Figura 11.1).
A insero da biotecnologia moderna ocorre atravs de duas linhas de ao: o desenvolvimento da
tecnologia enzimtica e o melhoramento vegetal. O sequenciamento do genoma do fungo
Phanerochaete chrysosporium ("podrido branca") revelou a existncia de mais de 240 genes
codificadores de enzimas extracelulares, envolvidas na degradao de carboidratos, que poderiam ser
utilizadas na degradao da madeira e no branqueamento da polpa de papel e de txteis. O
sequenciamento do genoma do eucalipto trouxe novas perspectivas para o melhoramento da
qualidade da madeira, especialmente visando aumentar a proporo celulose/lignina.
Em 2015, a CTNBio (Comisso Tcnica Nacional de Biossegurana) aprovou a liberao no meio
ambiente, para uso comercial, do eucalipto geneticamente modificado da FuturaGene, uma empresa
controlada pela Suzano Papel e Celulose. A produtividade do eucalipto transgnico de crescimento
rpido 20% maior que a do eucalipto convencional. A invaso da empresa por mulheres do MST
(Movimento Sem Terra) e a destruio dos laboratrios e das mudas que demandaram dez anos de
trabalho mostram as dificuldades em separar tecnologia de ideologia, em alguns setores da sociedade.
Um fenmeno anlogo ocorreu na Europa, em 2010, depois da aprovao pela Comisso Europeia
da batata Amflora (Basf Plant Science), geneticamente modificada, para uso na fabricao do papel.
Essa batata produz amido de alta qualidade com 99% de amilopectina, uma substncia que confere
rigidez massa e melhora o acabamento. Destinado exclusivamente ao uso industrial, o tubrculo
estaria fisicamente separado da batata destinada ao consumo humano ou animal. Porm, em funo
da oposio encontrada, em 2012, BASF Plant Science decidiu suspender a comercializao da batata
Amflora. Em 2013, um tribunal anulou a deciso de aprovao da Comisso Europeia.
-------------FIGURA 11.1. A indstria de papel e de celulose.
O branqueamento da pasta Kraft admite tratamentos qumicos (cloro) e biolgicos (xilanase); estes ltimos diminuem a carga
poluidora do efluente

MADEIRA
Lignina + celulose + hemicelulose
Extrao alcalina a alta temperatura

Lignina (90%)

PASTA KRAFT
Lignina (10%) + celulose + hemicelulose

Branqueamento com cloro

Branqueamento com xilanase


Eliminao da lignina

Derivados clorados da lignina

EFLUENTE

POLPA BRANCA

EFLUENTE

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A SUBSTITUIO DE INSUMOS AGRCOLAS


Um segundo conjunto de tecnologias limpas visa a substituio parcial de alguns insumos utilizados na
agricultura, tais como os fertilizantes e praguicidas.
A intensa aplicao de fertilizantes agrcolas, derivados do petrleo, tem consequncias negativas
no ambiente, porque uma parte do nitrognio (N) e do fsforo (P) no absorvida pelas plantas e
acaba sendo arrastada pelas chuvas at os rios e as reservas de gua. O excesso de nutrientes estimula
a proliferao de algas, consumindo o oxignio dos cursos de gua e produzindo toxinas que afetam
os peixes e o gado.
MICRORGANISMOS VS FERTILIZANTES QUMICOS
O nitrognio um nutriente indispensvel para os cultivos vegetais porque faz parte da composio
das protenas e dos cidos nucleicos. Encontra-se na atmosfera como N2 e no solo como nitrato,
resultante da decomposio da matria orgnica, ou proveniente dos fertilizantes agrcolas. Alguns
microrganismos livres (Azotobacter, Azospirillum) e outros simbiontes (Rhizobium ou Bradirhizobium),
que vivem nos ndulos das razes das leguminosas (soja, feijo), podem fixar diretamente o nitrognio
atmosfrico em uma forma utilizvel pelas plantas.
Aplica-se o termo biofertilizante aos produtos que contm agentes biolgicos vivos, capazes de
favorecer o desenvolvimento vegetal. Um destes agentes o Rhizobium, uma bactria simbionte das
razes de leguminosas que fixa o nitrognio atmosfrico, reduzindo a necessidade de aplicar
fertilizantes nitrogenados nas lavouras. Para proceder inoculao, mistura-se o produto com as
sementes umedecidas, antes do plantio, em tambores ou betoneiras.
A produo industrial de rizbios selecionados para aplicao antes do plantio permite substituir
produtos qumicos, derivados do petrleo, por agentes biolgicos, menos prejudiciais para o meio
ambiente. Na Amrica Latina, a produo de biofertilizantes envolve numerosas empresas, pequenas
e mdias, que contam com um slido suporte tecnolgico originado em universidades e instituies
pblicas de pesquisa agronmica.
Vrios pases produzem inoculantes agrcolas, entre eles: Argentina, Brasil, Chile, Colmbia, Cuba,
Mxico, Peru e Uruguai. No Brasil, vrias empresas nacionais e estrangeiras produzem inoculantes para
leguminosas; a maioria est localizada no Paran e Rio Grande do Sul.
As linhagens bacterianas so estirpes selecionadas por sua eficincia, em uma ampla gama de
cultivares, e amplamente adaptadas s condies locais. At o presente, a indstria baseia a produo
dos microrganismos na tecnologia clssica, mas com o mapeamento do genoma de microrganismos
como o Rhizobium etli (Mxico) e o Gluconacetobacter diazotrophicus (Brasil), a biotecnologia
moderna comea a se inserir neste campo. Frente s mudanas climticas e a necessidade de
aumentar a produtividade agrcola, os novos mtodos de triagem de estirpes so uma ferramenta de
incalculvel valor para o estudo da relao simbionte entre o microrganismo e a planta hospedeira.
As pesquisas sobre a fixao de nitrognio nas gramneas forrageiras, iniciadas por Johanna
Dbereiner (Embrapa), na segunda metade do sculo XX, permitem dispensar parcialmente a aplicao
de nutrientes qumicos nos cereais e na cana-de-acar, com a correspondente economia de recursos.
O fsforo se origina a partir das rochas do solo e da decomposio dos seres vivos. Nos solos cidos,
caractersticos das regies tropicais, a maior parte dos fosfatos (95-99%) forma compostos minerais
ou orgnicos insolveis, que no so acessveis diretamente s plantas. Por isso, o fsforo se torna um
nutriente limitante para o crescimento das plantas.
Os micorrizos so associaes simbiticas entre razes vegetais e fungos, que absorvem os
nutrientes minerais e a gua do solo, transferindo-os para a planta hospedeira. Muitas espcies de

134

BIOTECNOLOGIA E MEIO AMBIENTE

fungos micorrzicos so comestveis, e vrios gneros so comercializados a nvel mundial: Tuber,


Tricholoma, Boletu, Cantharellus, Morchella, Lactarius e Suillus.
A inoculao dos solos ou micorrizao uma tecnologia agrcola, associada ao reflorestamento de
pinhos e eucaliptos, que elimina ou diminui a necessidade de se acrescentar fsforo.
Alm dos fertilizantes agrcolas, outra das causas de liberao excessiva de fsforo no ambiente
a criao intensiva de animais. Os porcos e as aves no metabolizam o fitato, um derivado do fsforo
presente nas raes. Complementando-as com fitase, uma enzima produzida industrialmente por um
microrganismo geneticamente modificado, o fsforo excretado diminui em mais de 30%, reduzindo a
contaminao dos lenis de gua.
MANEJO INTEGRADO DE PRAGAS VS AGROTXICOS
A utilizao de variedades selecionadas e a rotao dos cultivos so prticas agrcolas que reduzem,
substancialmente, a necessidade de aplicar pesticidas sintticos. Um passo alm dado pelo controle
biolgico, que preconiza a substituio dos praguicidas qumicos por alternativas biolgicas, tais como
bactrias, fungos e vrus entomopatognicos. Observe-se que, em seu clssico livro A primavera
silenciosa (1972), a pesquisadora Rachel Carson j alertava para os danos causados pelo uso do DDT,
recomendando a procura de solues de cunho biolgico para o controle das populaes de insetos.
Anos mais tarde, contamos com numerosos exemplos em que os pesticidas so substitudos por
agentes biolgicos especficos (Tabela 11.1). Um deles a aplicao, nas lavouras de soja, de partculas
de baculovrus, um organismo que, normalmente, infecta e mata as lagartas de Anticarsia gemmatalis,
parasitas das plantas. Gemstar, um produto que contm o baculovrus Ihara usado no combate
Helicoverpa armigera, uma praga que afeta os cultivos de soja. A pulverizao de esporos do fungo
Metarhizium anisopliae, uma arma na luta contra a cigarrinha-da-folha-da-cana-de-acar ou a
broca-dos-citros. A broca-da-cana controlada pela ao sinrgica de duas microvespas (Cotesia e
Trichogramma) que agem em diferentes momentos do ciclo de vida da praga.
Contudo, o exemplo mais conhecido dessa tecnologia verde envolve a bactria do solo Bacillus
thuringiensis ou Bt. Citada como promissora por R. Carson, essa bactria utilizada como pesticida
agrcola h mais de cinquenta anos, sem que suas toxinas tenham causado danos s pessoas, vida
silvestre ou maioria dos insetos benficos.
-------------TABELA 11.1. Alguns exemplos de utilizao de agentes biolgicos como pesticidas
AGENTE BIOLGICO

PRAGA COMBATIDA

Fungo Metarhizium anisopliae

Cigarrinha-da-folha-da-cana-de-acar (Mahanarva posticata), cigarrinha-da-raiz-dacana-de-acar (Mahanarva fimbriolata), cigarrinha-das-pastagens (Deois flavopicta).

Fungo Beauveria bassiana

Diversas, florestais.

Bactria Bacillus thuringiensis


var kurstaki

Lagartas desfolhadoras de grandes culturas e reflorestamentos.

Bactria Bacillus thuringiensis


var israelensis

Larvas do mosquito da dengue (Aedes aegypti, transmissor da dengue e da febre


amarela) e dos borrachudos (Simulium spp.).

Bactria Bacillus sphaericus

Larvas do mosquito prego (Anopheles spp., transmissor da malria) e do mosquito


urbano ou pernilongo (Culex spp., transmissor da encefalite e da filarase).

Vrus Baculovrus anticarsia

Lagarta-da-soja (Anticarsia gemmatalis).

Vrus Baculovrus spodoptera

Lagarta-do-cartucho-do-milho (Spodoptera frugiperda).

Vespa Cotesia flavipes

Broca-da-cana-de-acar (Diatraea saccharalis).

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No Brasil, existem atualmente numerosos produtos a base de Bacillus thuringiensis para o combate s
pragas que afetam a agricultura, comercializados com diferentes nomes (Bac-control, Bactur, Dipel,
Ecotech, Thuricide etc.) por vrias empresas nacionais e estrangeiras (Vectorcontrol, Milenia,
Sumitomo, Bayer, Iharabras etc.).
Com o desenvolvimento da engenharia gentica, os genes correspondentes foram transferidos a
vrias plantas (milho, algodo etc.) que agora produzem diretamente a toxina inseticida. Baseado no
conhecimento da ecologia dos agroecossistemas, o controle biolgico permite o Manejo Integrado de
Pragas (MIP). No Brasil, deve-se destacar o trabalho da Embrapa e de vrias universidades visando a
preservao das plantaes e a salvaguarda da produo de alimentos.
A formao de nuvens de gafanhotos, uma das pragas mais temidas da humanidade, atualmente
monitorada e companhada por via satlite. A aplicao do feromnio PAN (fenilacetonitrilo) induz a
disperso dos insetos e sua volta a um comportamento solitrio. No combate aos gafanhotos tambm
so utilizados reguladores de crescimento e, como biopesticida, o fungo Metarrizhium anisopliae
varacridum.
O controle biolgico envolve, alm do uso de feromnios, armadilhas e atrativos alimentares.
Alguns procedimentos so econmicos e muito engenhosos, como o desenvolvido em Cuba para
combater o tetun del camote, um gorgulho (Cylas formicarius) que ataca a batata-doce. Pendura-se
na plantao uma lata com uma pequena quantidade de feromnio, pulverizando em redor esporos
do fungo Beauveria bassian. Atrados pelo feromnio, os machos se aproximam da lata e so
contaminados mortalmente pelo fungo, que incuo para os seres humanos, os animais e as plantas.
Para Cuba, a experincia de vrias dcadas de trabalho com controle biolgico resultou crucial
quando, devido ao embargo propiciado por Estados Unidos, o pas teve que substituir o uso de
agrotxicos nas lavouras. Atualmente, o programa cubano de controle biolgico de pragas envolve
laboratrios regionais, estaes de defesa vegetal, postos equipados com laboratrios de diagnsticos
e mais de 200 centros de reproduo de entomfagos e entomopatgenos.
BIOINSETICIDAS VS. INSETICIDAS QUMICOS
Em 2016, o Brasil vive uma situao sanitria dramtica, devido proliferao do mosquito Aedes
aegypti, cuja fmea transmissora de vrias doenas de origem viral: dengue, chikungunya, zika. Em
fins do sculo XIX e incio do sculo XX, o Aedes causou epidemias terrveis de febre amarela, sendo
erradicado das zonas urbanas graas ao pioneira de Oswaldo Cruz. Por falta de saneamento bsico
e de medidas de combate eficientes, hoje, o mosquito est novamente disseminado no Brasil e no
restante das Amricas.
A primeira medida para diminuir o nmero de focos do mosquito a eliminao das guas paradas,
onde ele deposita os ovos e as larvas proliferam. Se isso no for feito, dever se apelar para os
inseticidas qumicos, como o Pyriproxyfen, um produto para uso em campanhas de sade pblica.
Inseticidas qumicos podem ser substitudos por bioinseticidas. Desenvolvido a partir de estudos da
Embrapa Recursos Genticos e Biotecnologia, a empresa Bthek Biotecnologia comercializa um
bioinseticida que tem como ingrediente ativo a bactria Bacillus thuringiensis israelensis e permite o
controle das larvas do mosquito (Aedes aegypti) e do borrachudo (Simulium spp.).
Outra das armas para evitar a transmisso de doenas por Aedes aegypti contempla a infeco da
populao natural do mosquito pela bactria Wolbacchia pipientes, um parasita intracelular frequente
em vrias espcies de insetos, sem risco algum para os vertebrados.
Os mosquitos infetados com Wolbacchia no transmitem dengue e passam a bactria a sua
descendncia. Como o acasalamento de uma fmea no infetada com um macho infetado estril,
basta liberar mosquitos infetados com Wolbacchia para que a infeco com Wolbacchia se espalhe,
diminuindo o nmero dos transmissores de dengue.

136

BIOTECNOLOGIA E MEIO AMBIENTE

FIGURA 11.2. Controle biolgico do Aedes aegypti

B. Ciclo de vida do mosquito Aedes aegypti

Aedes aegypti (fmea)

Pupa

Ovos (100-200)

4 a 5 dias

2 a 3 dias

Larva

Durao total do ciclo: 10 a 14 dias

E. Controle por Wolbacchia

Ovos infetados

Cruzamentos possveis

Linhagem infetada com Wolbacchia

F. Controle por irradiao

Criao de mosquitos

Pupas

Irradiao

Seleo

adultos estreis

G. Controle por engenharia gentica

Criao de mosquitos transgnicos


Larvas
transgnicas

Mosquitos
transgnicos

Mosquitos
da natureza
Sem tetraciclina,
as larvas morrem

Seleo
(com tetraciclina)

Acasalamento

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Os primeiros experimentos, em algumas cidades no nordeste da Austrlia, no Vietn e na Indonsia,


foram bem-sucedidos. A Fundao Oswaldo Cruz iniciou os primeiros testes em alguns bairros do Rio
de Janeiro.
Uma estratgia de controle biolgico tradicional consiste na liberao, no ambiente, de mosquitos
machos esterilizados por radiao. Embora o comportamento de cpula dos machos estreis e dos
frteis seja o mesmo, o acasalamento das fmeas com os machos estreis no deixa descendncia.
Recentemente aplicada na ilha de Fernando de Noronha (PE), esta metodologia levou reduo do
tamanho da populao e do nmero de casos de dengue.
Mais elaborada, e na linha da biotecnologia moderna, a construo de uma linhagem transgnica
de mosquito que depende de tetraciclina para seu desenvolvimento, uma condio que s existe no
laboratrio. Liberados no ambiente, os machos transgnicos copulam com as fmeas normais, gerando
larvas que morrem por falta de tetraciclina.
Em 2013, a CTNBio aprovou a liberao comercial da linhagem OX513A de Aedes aegypti. Os testes
realizados oportunamente em bairros de Juazeiro (PE) e de Piracicaba (SP) reduziram
significativamente a populao de mosquitos. Participam no empreendimento do chamado mosquito
do bem a USP (Universidade de So Paulo) e as empresas Oxitec (Reinio Unido) e Moscamed (Brasil).
Como em ocasies anteriores, alguns setores se posicionaram contra o mosquito transgnico,
invocando o princpio de precauo.
Das mais simples s mais sofisticadas, no faltam armas para lutar contra o Aedes aegypti; todas
podem contribuir para melhorar o saneamento bsico e a sade da populao (Figura 11.2).
A REDUO DOS RESDUOS
A degradao do lixo (resduos slidos) e o tratamento de esgoto (resduos lquidos) so dois exemplos
tradicionais de prestao de servios da biotecnologia tradicional nem sempre valorizados, apesar do
imenso volume de matria que transformam e de sua relevncia para o meio ambiente.
A DEGRADAO DO LIXO
Em condies adequadas, todos os compostos naturais podem ser biodegradados. As populaes
microbianas do ambiente degradam as substncias orgnicas atravs de numerosas reaes, sem que
sejam necessrios os cuidados asspticos ou a utilizao de culturas puras. Em condies aerbias, os
produtos finais da mineralizao da matria orgnica so dixido de carbono (CO2) e gua; em
condies anaerbias, forma-se biogs.
Na compostagem, uma etapa intermediria da mineralizao, os prprios microrganismos do lixo
degradam a matria orgnica, previamente fragmentada e misturada (Figura 11.3). No incio da
biodigesto, a liberao de energia provoca um aumento de temperatura que elimina a maioria dos
microrganismos indesejveis (sanitizao). medida que a atividade microbiana decresce, o sistema
se estabiliza e amadurece, at perder todo o seu potencial de biodegradao.
O processo pode ser conduzido em sistemas simples (pilhas ao ar livre), ou complexos (silos,
biorreatores), sendo necessrio, em ambos os casos, remover o material periodicamente, de maneira
manual ou mecnica, para assegurar a aerao. A otimizao do processo depende do controle de
alguns parmetros, tais como a relao carbono/nitrognio, o oxignio, a umidade e a temperatura.
O tratamento dos resduos slidos urbanos (RSU) em usinas de compostagem um procedimento
alternativo incinerao e ao depsito em lixes e aterros sanitrios. Nesses estabelecimentos, a
separao prvia dos componentes permite a reciclagem de alguns materiais (metais, vidro etc.).

138

BIOTECNOLOGIA E MEIO AMBIENTE

A biodegradao aerbia dos restos orgnicos os transforma em um "composto", utilizado no


melhoramento de solos, em atividades de reflorestamento, para colmatar terrenos e combater a
eroso. A decomposio in natura do lixo, nos aterros sanitrios, cria uma zona de anaerobiose onde
se produz biogs, que liberado na atmosfera, contribuindo para o efeito estufa e as alteraes
climticas.
-------------FIGURA 11.3. A compostagem
LIXO ORGNICO

AR

GUA

FONTE DE NITROGNIO

Fragmentao e mistura das partculas


Aumento da temperatura (sanitizao)
BIODIGESTO AERBIA
Diminuio e estabilizao da temperatura
Maturao

CALOR

CO2

GUA

OUTRAS SUBSTNCIAS

COMPOSTO

O TRATAMENTO DAS GUAS RESIDUAIS


O esgoto arrasta excrementos (fezes e urina), guas de uso domstico (banho, lavagem de roupas etc.)
e, eventualmente, alguns dejetos de origem industrial. Liberadas diretamente nos cursos de gua, as
guas servidas causam a desestabilizao das populaes microbianas, que se multiplicam
rapidamente, consumindo o oxignio dissolvido e ocasionando a morte de peixes e crustceos.
Vrias populaes naturais participam na biodegradao das guas do esgoto. Os microrganismos
aerbios (bactrias e protozorios ciliados) mineralizam parte da matria orgnica do efluente. As
bactrias anaerbicas procedem biodigesto dos lodos, permitindo a obteno de biogs e a
remoo de alguns nutrientes (N e P principalmente), que poderiam criar desequilbrios ecolgicos.
O tratamento das guas residuais envolve mtodos fsicos, qumicos e biolgicos (Figura 11.4),
aplicados em pelo menos trs etapas:
o Tratamento primrio.
O esgoto passa por um processo de filtrao, que remove objetos grandes, lixo e areia. No tanque
de sedimentao, a gordura sobrenadante separada do lodo sedimentado, que pode ser
transferido a um biodigestor.
o Tratamento secundrio.
-

O lquido efluente do tanque de sedimentao pode ser tratado de vrios modos:

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Em lagoas de baixa profundidade.

Em filtros de gotejamento (1), colonizados pelos prprios microrganismos do esgoto que se


desenvolvem digerindo a matria orgnica do meio.

Em tanques de lodo ativado (2), onde o meio agitado e oxigenado, mediante a injeo de ar
comprimido.

Em um segundo tanque de sedimentao para separar o efluente do lodo.

o Tratamento tercirio.
Este realizado para eliminar substncias inorgnicas e orgnicas, envolvendo procedimentos
como a filtrao, a volatilizao da amnia, a precipitao de fosfato etc.
o Tratamento avanado.
A degradao microbiana dos resduos orgnicos diminui consideravelmente a carga de
microrganismos patognicos liberada no ambiente, mas no a elimina totalmente. Os
microrganismos patognicos recalcitrantes s podem ser eliminados mediante alguns mtodos
adicionais, como a clorao, a irradiao UV e o tratamento com oznio.
-------------FIGURA 11.4. O tratamento das guas residuais

ESGOTO

Fossas spticas

Gradeamento

Lagoas de oxidao

Tanque de areia

Filtros de gotejamento (1)

EFLUENTE

Tanque de
sedimentao
Tanque de
sedimentao

Lodo ativado (2 )

EFLUENTE

Lodo
EFLUENTE

Lodo
Biodigestor
anaerbico

RESDUO
SLIDO

O TRATAMENTO DOS EFLUENTES INDUSTRIAIS


O tratamento dos efluentes industriais fundamental para a populao e o ambiente; tambm
estratgico para o melhoramento da imagem das indstrias mais poluentes, entre as quais figuram as
qumicas, as papeleiras, as txteis, as de couro, as de alimentos, as de extrao de metais e minerais e
as de produo de energia.
A produo de etanol gera um efluente (vinhaa) que, anos atrs, era liberado diretamente nos rios
e cursos de gua, provocando a eutrofizao e a mortandade de peixes e de outros seres vivos. Para
avaliar a dimenso do problema, basta lembrar que, para cada litro de lcool, a indstria produz at
12 litros de vinhaa. Hoje, as indstrias mais responsveis tratam o efluente por biodigesto anaerbia,
gerando fertilizante e biogs.

140

BIOTECNOLOGIA E MEIO AMBIENTE

Outro caso interessante o dos efluentes das indstrias de laticnios, utilizados como matria-prima
para o crescimento de microrganismos que, posteriormente, sero adicionados s raes animais. De
forma anloga, o licor sulftico dos efluentes da indstria de papel e celulose pode ser eliminado
produzindo biomassa, com o fungo Paecilomyces.
Em 2014, a enxurrada de lama provocada pela ruptura de uma barragem, com o refugo de extrao
de minrio da empresa Samarco, causou 17 mortes, alm da destruio do vilarejo de Bento Rodrigues
e a contaminao do Rio Doce. A tragdia de Mariana, considerada o pior acidente da histria da
minerao, reflete o descaso de algumas empresas com o meio ambiente.
diferena dos resduos agrcolas e urbanos, que so biodegradados, os metais procedentes das
atividades extrativas e industriais (cdmio, zinco, chumbo, selnio) permanecem no ambiente, em
concentraes txicas. Sua absoro e concentrao (bioacumulao) por plantas tolerantes aos
metais reduz a toxicidade do solo e facilita sua remoo em faixas de terreno pouco profundas.
Existem j plantas geneticamente modificadas para transformar os compostos organomercuriais
formados em diversas atividades (extrao de carvo e de ouro etc.) em uma forma voltil muito
menos txica.
Em relao aos resduos gasosos de processos industriais, o tratamento de compostos orgnicos
volteis (VOCs, da sigla em ingls) feito mediante filtros biolgicos de diferentes tipos e
complexidade tecnolgica.
AS EMISSES DE GASES E O EFEITO ESTUFA
Existem fontes naturais de gases, como os vulces e os cupins. Estes, devido atividade da flora
intestinal simbionte que lhes permite digerir celulose, liberam 40 milhes de toneladas de metano por
ano. No entanto, o homem o principal responsvel pela emisso dos gases que causam o efeito
estufa, atravs de atividades como o depsito do lixo em aterros sanitrios, o cultivo do arroz, a criao
de gado, a liberao de efluentes agroindustriais sem tratamento e a queima de combustveis fsseis
(petrleo, gs natural e carvo).
Os nveis de metano atmosfrico so hoje duas vezes maiores que na era pr-industrial, um dado
preocupante, sabendo que a contribuio do metano para o efeito estufa 20 vezes superior do
dixido de carbono. Embora sua utilizao como combustvel elimine uma fonte de contaminao
atmosfrica, a rentabilidade do processo nem sempre justifica o seu aproveitamento.
Vrias iniciativas tendem a recuperar o metano dos aterros sanitrios e utiliz-lo como combustvel
alternativo. A Amrica Latina, que emite 6% dos gases contaminantes, j est entrando neste mercado
com vrios projetos de reaproveitamento do metano (aterros sanitrios, resduos agroindustriais) na
Argentina, no Brasil, no Chile, em Cuba, no Mxico, no Uruguai. As iniciativas dependem de empresas
privadas e/ou de organismos governamentais; alguns estudos preliminares contaram com
financiamento do Banco Mundial.
Em relao gasolina, a combusto dos biocombustveis (mistura gasolina-etanol ou etanol puro)
emite quantidades menores de monxido de carbono (CO), xidos de enxofre (SOx), hidrocarbonetos
e outros compostos poluentes. Em compensao, liberam-se aldedos cancergenos e, dependendo do
motor, xidos de nitrognio (NOx). Apesar disso, estima-se que, entre 2004 e 2008, o uso de
biocombustveis na frota flexfuel brasileira teria deixado de liberar na atmosfera 35 milhes de
toneladas de CO2. Calcula-se tambm que, para que essa economia fosse de 530 milhes de toneladas
de CO2, bastaria misturar com lcool apenas 10% da gasolina disponvel no planeta.
O Protocolo de Kyoto (1997) previa a reduo da emisso de gases contaminantes (dixido de
carbono, metano, xidos nitrosos e clorofluorocarbonetos). Ratificado por numerosos pases, mas no
por Estados Unidos nem Rssia, responsveis respectivamente por 36% e 17% das emisses, o
protocolo de Kyoto no teve ainda os resultados esperados.

141

M.A.MALAJOVICH - BIOTECNOLOGIA (2016)

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Contudo, criou-se um mercado paralelo da descontaminao atravs da compra e venda do Certificado


de Reduo de Emisses (CER, do ingls Certificate of Emissions Reduction), que nada mais que um
bnus sobre a quantidade de contaminao deixada de emitir. Deste modo, o Protocolo de Kyoto
permite que, tendo superado a cota de gases a emitir, um pas continue contaminando a atmosfera,
se comprar bnus de um pas que no a contamina, ou que reduz sua prpria contaminao.
A RECUPERAO DE RECURSOS NATURAIS
O PETRLEO
Na extrao de petrleo, tcnicas especiais (EOR, do ingls enhanced oil recovery) envolvem o uso de
polmeros de origem microbiana (xantana) para aumentar a viscosidade e facilitar o seu
bombeamento. A introduo direta dos microrganismos no poo (MEOR, do ingls microrganism
enhanced oil recovery) parece menos interessante do ponto de vista econmico, mas isso poderia
mudar, se o petrleo comear a se esgotar.
A MINERAO
A extrao dos metais solubilizados nas guas escuras e cidas do Rio Tinto (Andaluzia, Espanha) data
do domnio romano; abandonadas durante sculos, as minas foram exploradas a partir do sculo XIX
por uma empresa inglesa, hoje australiana. Em 1947, o isolamento de bactrias quimiotrficas do
gnero Thiobacillus mostrou que a acidificao das guas e a consequente solubilizao dos metais
eram o resultado de uma ao combinada entre agentes qumicos e biolgicos.
As bactrias transformam os sulfetos metlicos insolveis em sulfatos solveis, mediante uma
reao de oxidao que libera a energia necessria para sua reproduo e crescimento. A fixao de
dixido de carbono fornece o carbono necessrio para a sntese dos componentes celulares, de modo
que os requerimentos bacterianos se limitam ao oxignio e a pequenas quantidades de nitrognio e
fsforo.
A biolixiviao se aplica especialmente extrao de cobre, urnio, ouro, zinco, chumbo, nquel e
cobalto. A tecnologia relativamente simples e requer pouca inverso, sendo adaptada aos pases em
desenvolvimento. Na Amrica Latina, usa-se a biolixiviao para a extrao de cobre (Chile, Mxico e
Peru) e de ouro (Brasil, Chile e Peru).
A BIOMINERAO NO CHILE
Os Andes chilenos guardam as maiores reservas de cobre do planeta. Na poca pr-colombiana, foi
utilizado, pelas culturas Tiahuanaco e Inca, na produo de bronze, uma liga de cobre e estanho.
Durante o perodo colonial, a produo de cobre se manteve baixa, mas entre 1820 e 1900 extraramse dois milhes de toneladas. Ao finalizar o sculo XIX, as jazidas com alta concentrao de cobre
comearam a dar indcios de esgotamento.
No sculo XX, os consrcios internacionais, que dominavam a tecnologia necessria para a extrao
do cobre chileno de baixa concentrao, assumiram o controle da indstria (Braden Copper Co.,
Kenecott Corporation, Chile Exploration Company). Aps uma dcada de chilenizao, em 1971 as
principais minas de cobre foram nacionalizadas. Atualmente, 31% da produo de cobre do Chile est
em mos da Codelco (do espanhol, Corporacin Nacional del Cobre), uma empresa estatal criada em
1976, que emprega 47.000 pessoas; o resto produzido pelo setor privado. Em 2014, Codelco foi o
maior produtor de cobre de mina do mundo e o segundo de molibdeno de mina.
As primeiras experincias de biolixiviao foram realizadas, entre 1950 e 1980, em Rio Tinto
(Espanha), Cananea (Mxico) e Toromocho (Peru). A explorao da mina de Pudahuel (Codelco, Chile),
com tecnologia nacional de biolixiviao, comeou na metade da dcada de 1980. A bio-

142

BIOTECNOLOGIA E MEIO AMBIENTE

hidrometalurgia se estendeu rapidamente, havendo estabelecimentos que extraem o cobre


exclusivamente por biolixiviao.
As operaes so especialmente apropriadas para as minas de baixa qualidade ou semiesgotadas,
assim como para a recuperao do cobre, nos refugos existentes. A tecnologia envolve a produo de
biomassa, em biorreatores que geram diferentes solues de microrganismos especficos, com as
quais se regam as pilhas de minrio. Os microrganismos dissolvem o ferro e o enxofre, liberando o
cobre e deixando-o em forma solvel. Uma vez recolhido em piscinas, esse lquido rico em cobre passa
para as plantas de extrao, onde se obtm os ctodos de cobre de alta pureza.
A oxidao biolgica dos amontoados ou pilhas permite recuperar 75 a 90% do cobre, a um custo
muito baixo, em perodos de 6 a 12 meses. No desenvolvimento tecnolgico da biominerao,
participaram universidades e institutos de pesquisa, alm do setor produtivo, com apoio do governo e
do Pnud (Programa das Naes Unidas para o Desenvolvimento). As pesquisas atuais contemplam o
uso de microrganismos termoflicos (Sulfobolus) e a otimizao do processo de bio-oxidao
(Thiobacillus ferroxidans).
Fundada em 2002, por Codelco e Nippon Mining & Metals Co. Ltd., a empresa BioSigma desenvolve
estudos microbiolgicos e genmicos, assim como as tecnologias de produo de biomassa, que
permitem a inoculao das pilhas, acelerando a recuperao de minrio. A partir de uma primeira
patente, descrevendo um mtodo para modificar geneticamente as bactrias extremfilas, do gnero
Acidithiobacillus, encontradas no minrio de cobre, Biosigma conta com mais de 80 patentes
concedidas no Chile e no exterior, alm de muitas outras em andamento. Hoje, 5% da produo
cuprfera do Chile obtida por biolixiviao.
O DIAGNSTICO DE CONTAMINAO AMBIENTAL
O diagnstico de contaminao ambiental exige o monitoramento da gua, do ar e do solo. As
biotecnologias desenvolvidas abrangem o uso de indicadores biolgicos, de tcnicas imunolgicas e
genticas e de biossensores.
INDICADORES BIOLGICOS
Plantas e animais, capazes de acumular metais pesados, e poluentes orgnicos persistentes podem ser
utilizados como indicadores biolgicos. A contaminao ambiental avaliada, diretamente, pela
concentrao do contaminante em um organismo especfico. Na avaliao indireta, so analisadas
outras variveis, tais como o nmero de plantas e de espcies microbianas, o nmero de indivduos
nessas espcies etc.
TCNICAS GENTICAS
As tcnicas genticas so aplicadas para identificar as populaes microbianas presentes no ambiente.
Como ainda no sabemos como cultivar no laboratrio a maior parte dos microrganismos ambientais,
uma boa parte dessa biodiversidade permanece desconhecida.
A tecnologia do DNA facilita a identificao dessas espcies, em funo das sequncias gnicas
correspondentes ao RNA ribossmico (rRNA de 16S), e ajuda a monitorar as mudanas nas
comunidades microbianas utilizadas na remoo de poluentes, de maneira a detectar qualquer
variao ambiental e restaurar rapidamente as condies timas do sistema.
Microarrays adequados avaliam a expresso dos genes em uma linhagem ou uma comunidade
microbiana em relao a um agente ambiental (genossensores).

143

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TCNICAS IMUNOLGICAS
As tcnicas imunolgicas utilizam anticorpos especficos, marcados ou associados a enzimas. As
tcnicas imunoenzimticas, cujos resultados podem ser apreciados, simplesmente, por uma mudana
de cor, resultam especialmente apropriadas para os testes de campo. Substituem testes tradicionais e
lentos, que exigem um equipamento complexo, como os de presena de coliformes na gua.
Imunoensaios de diversos tipos permitem o monitoramento contnuo, automatizado e barato de
pesticidas como o dieldrin, o parathion e os PCBs.
BIOSSENSORES
Os biossensores combinam diferentes componentes biolgicos e eletrnicos, geralmente sob a forma
de um chip; alguns so muito seletivos, outros so sensveis a um amplo espectro de substncias.
O componente biolgico pode ser uma enzima, um anticorpo ou um microrganismo. Respondendo
a um estmulo ambiental se verifica uma mudana em suas propriedades, mudana que detectada
ptica ou eletronicamente, fornecendo uma medida quantitativa do contaminante (Figura 11.5).
Bactrias ou leveduras imobilizadas revelam a presena de uma determinada substncia, seja
porque a metabolizam, seja porque esta inibe o prprio metabolismo microbiano. Especialmente
interessante a utilizao de organismos geneticamente modificados, associando o promotor do gene
de uma enzima, que reage com a substncia procurada (arsnico, por exemplo), com genes indicadores
(luminescncia, fluorescncia ou produo de uma substncia colorida).
-------------FIGURA 11.5. O funcionamento de um biossensor
O sinal aumenta ou diminui em funo da concentrao do substrato contaminante, que estimula ou inibe a ao do agente
biolgico.

Substrato
Membrana
Biodetector imobilizado

O substrato reage com o biodetector,


originando um produto especfico

Ao detectar um produto especfico,


o transdutor gera um sinal eltrico
Amplificador
Circuito

Sinal de sada (Output)

144

BIOTECNOLOGIA E MEIO AMBIENTE

A BIORREMEDIAO
Como resultado das atividades humanas, aproximadamente 2,5 milhes de toneladas de substncias
qumicas perigosas so liberadas anualmente no meio ambiente (Tabela 11.2). Em alguns casos, tratase de emisses deliberadas e regulamentadas (resduos industriais), em outros, de escapamentos
acidentais (manchas de leo ou de petrleo).
Muitas das substncias qumicas presentes no ambiente foram geradas pelo homem. Algumas
podem ser degradadas, em poucos meses, por algum organismo; outras persistem na natureza
durante um longo tempo. Consideradas recalcitrantes, essas molculas so alheias ao mundo dos seres
vivos (xenobiticas). No so biodegradadas ou, quando o so, o processo lentssimo, podendo
demorar centenas de anos.
Existem vrias estratgias para retirar substncias recalcitrantes do meio ambiente (Figura 11.6).
As opes contemplam a construo de barreiras fsicas, a lavagem ou ventilao do solo contaminado
e sua destruio, por incinerao ou por biorremediao. Para que esta ltima possa ser aplicada,
necessrio que o poluente seja transformado metabolicamente por algum agente biolgico, que os
produtos finais sejam seguros e que as condies ambientais favoream a atividade microbiana.
-------------TABELA 11.2. Os principais contaminantes do meio ambiente
CATEGORIA

EXEMPLO

Inorgnicos

Metais (cdmio, mercrio, prata, cobalto, chumbo, cobre, cromo, ferro), istopos radiativos,
nitratos, nitritos, fosfatos, cianetos, asbestos.

Orgnicos

Resduos petroqumicos: petrleo, gasleo, compostos aromticos (benzeno, tolueno, etilbenzeno,


xileno).
Produtos sintticos: pesticidas organo-halogenados como os bifeniles policlorados (PCBs) ou os
hidrocarbonetos poliaromticos.

Gasosos

Gases: dixido de enxofre (SO2), dixido de carbono (CO2), xidos nitrosos (NOx), metano (CH4).
Compostos volteis: clorofluorocarbonetos (CFCs), compostos orgnicos volteis (VOCs).

FIGURA 11.6. As estratgias de biorremediao

Microrganismos
do ambiente

Microrganismos
selecionados

Microrganismos geneticamente
modificados (em sistema fechado)

MEIO CONTAMINADO
Otimizao dos fatores que estimulam
a ao bacteriana (estrutura do solo,
pH, aceptores de eltrons).

Suplemento de nutrientes

MEIO DESCONTAMINADO

145

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Uma forma de biorremediao o tratamento in situ, que envolve a produo de biomassa especfica
no local contaminado. Bactrias e/ou fungos do ambiente digerem o material txico, transformandoo em produtos inofensivos, voltando posteriormente a seu nvel populacional normal no ambiente ou
morrendo. O crescimento da populao microbiana pode ser estimulado pelo acrscimo de nutrientes.
Outra forma de biorremediao dos solos contaminados o tratamento ex situ, em que o solo
escavado transferido a um biodigestor. Como a liberao de microrganismos geneticamente
modificados no ambiente vista com extrema desconfiana, sua utilizao costuma estar restringida
a esses sistemas fechados.
Uma das razes dessa desconfiana pode ser atribuda Conferncia de Asilomar. Em 1975, a
preocupao principal dos pesquisadores era a conteno dos microrganismos geneticamente
modificados, recomendando o uso de microrganismos fracos que, eventualmente, no sobrevivessem
no ambiente. Essas condies eram fundamentais para a continuidade das pesquisas, apesar de ter
estimulado o medo e a hostilidade da sociedade, em relao liberao de microrganismos
geneticamente modificados engenherados no ambiente.
Na dcada de 1980, com o objetivo de evitar o congelamento dos cultivos de morango da Califrnia,
a empresa AGS (Advanced Genetic Sciences) desenvolveu a bactria Pseudomonas syringae,
geneticamente modificada para eliminar uma protena que facilitava a formao de gelo.
Boa parte da opinio pblica se mostrou totalmente contrria utilizao da P.syringae, variedade
ice minus, temendo que alterasse a composio das nuvens e o regime de chuvas. Em 1987, um
processo judicial culminou com a autorizao para realizar os testes de campo correspondentes. Os
experimentos foram bem-sucedidos, mas, em funo da resistncia encontrada, a empresa
abandonou o projeto.
Em compensao, AGS comercializou Snowmax, um produto criado para aumentar a eficincia da
maquinaria produtora de neve artificial. Um dos principais ingredientes era a variedade convencional
de P. syringae, produtora da protena facilitadora da formao de gelo. Snowmax garantiu a neve
dos Jogos Olmpicos de Inverno de 1988, em Calgary (Canada).
OS VAZAMENTOS DE PETRLEO
A formao de carvo e de petrleo nas profundezas da terra possvel porque, em condies
anaerbias, tanto a lignina como os hidrocarbonetos so compostos qumicos estveis. Porm, em
condies aerbias, ambos so degradados pelos microrganismos presentes no ambiente.
Um dos mais srios problemas de contaminao ambiental o derramamento de petrleo nos
mares, devido a acidentes notrios (Prestige, Exxon Valdez, Torrey Canyon, Amoco Cadiz, Braer and
Sea Empress, British Petroleum) e a situaes blicas (Guerra do Golfo). As manchas de leo
despejadas no mar contm compostos txicos, que representam uma ameaa para a ecologia marinha
e costeira, afetando todas as formas de vida aqutica e constituindo um risco para a sade da
populao.
O petrleo derramado no mar flutua na superfcie, onde os componentes volteis evaporam
rapidamente. O que no for recuperado pelo homem ser dispersado pelo movimento das ondas,
permanecendo em alto-mar, ou sendo levado at a costa. Sua degradao depender dos
microrganismos naturalmente presentes no ambiente marinho.
Em 1971, A. Chakrabarty desenvolveu, a partir de vrias linhagens de Pseudomonas spp., uma
superbactria que reunia, em um nico plasmdio, os genes necessrios para degradar quatro
componentes do petrleo: cnfora, xileno, octano e naftaleno. Depois de um longo processo judicial
que culminou em 1980, Chakrabarty recebeu a primeira patente de um ser vivo: uma bactria
geneticamente modificada, projetada para degradar componentes do petrleo. Embora tenha

146

BIOTECNOLOGIA E MEIO AMBIENTE

passado com xito nos testes laboratoriais, a bactria de Chakrabarty no chegou a ser utilizada no
acidente do Exxon Valdez no Alaska (1989) nem em outros vazamentos posteriores.
Hoje, admite-se que um microrganismo geneticamente modificado teria poucas possibilidades de
sobrevivncia na natureza, onde enfrentaria populaes de microrganismos extremamente
competitivas. Por isso, a tendncia atual de estudar consrcios microbianos naturais, selecionados
de modo a que cada tipo de microrganismo sintetize alguma das enzimas necessrias para a
degradao da substncia contaminante.
Obviamente, existem tambm pesquisas sobre microrganismos ambientais, como Alcanivorax
borkumensis, que capaz de metabolizar 70% dos componentes do petrleo; sendo de especial
interesse toda informao nova sobre suas rotas metablicas e seus requerimentos de fsforo e de
nitrognio. Tambm h pesquisas visando a produo de biosurfactantes por algas, para substituir os
surfactantes usados atualmente, que so muito txicos.
A principal estratgia aplicada, atualmente, para remediar os vazamentos de petrleo a
bioestimulao. Como o ambiente marinho geralmente pobre em nitratos e fosfatos, acrescentamse nutrientes aos dispersantes qumicos (detergentes), ou s espumas de limpeza das rocas da costa,
de maneira a estimular a ao dos microrganismos presentes no stio contaminado. Estima-se que, at
o momento, o solo de mais de 30.000 stios contaminados com petrleo, proveniente de vazamentos
de tanques de armazenamento, tenha sido tratado por bioaumentao.
A RADIAO
Aps o acidente da planta nuclear de Chernobyl (1986), tentou-se remover a contaminao mediante
o plantio de girassis, que absorvem e concentram o csio radiativo. As plantas devem ser cortadas e
tratadas como material contaminado, aps a florao e antes da frutificao, porque as sementes
poderiam ser dispersadas pelos pssaros. Devido estrutura diferente do solo, esta estratgia no
funcionou em Fukushima (Japo), onde uma mistura de algas e fungos parece ser mais eficiente.
ARMAS E CONFLITOS BLICOS
Alm de causar enorme sofrimento humano, a indstria blica cria tambm problemas ambientais de
grandes propores, como ocorrido na Carolina do Sul (Estados Unidos), na dcada de 1990, quando
o tricloroetileno (TCE) utilizado, como desengordurante, na fabricao de armas, fora despejado no
solo, contaminando as guas subterrneas e o rio Savannah.
Na descontaminao, utilizaram-se microrganismos que sobrevivem no ambiente contaminado,
por ter sistemas enzimticos capazes de digerir os poluentes-alvo, ligeiramente diferentes de seus
substratos normais. Escolheu-se uma bactria que metaboliza metano, mas capaz de degradar o TCE.
Ao bombear metano no solo, a bactria se multiplica; ao suspender o bombeamento, ela passa a
degradar o TCE por um tempo, at o bombeamento de metano se tornar novamente necessrio.
A repetio cclica do processo reduziu a contaminao a um nvel aceitvel. A utilizao do
metabolismo gratuito bacteriano considerada vivel do ponto de vista comercial.
Outro composto que causou danos incalculveis foi o Agente Laranja, lanado como desfolhante
nas florestas vietnamitas, pelos Estados Unidos, durante a guerra do Vietnam. Em fins da dcada de
1960, Chakrabarty conseguira uma mistura de linhagens bacterianas capaz de degradar um de seus
principais componentes, o herbicida 2,4,5-T. No temos encontrado registros de uso dessa bactria.
Porm, recentemente, foram aplicadas com sucesso tcnicas de biorremediao no entorno da base
de Danang para eliminar a dioxina, outro dos componentes do Agente Laranja.
Um problema de difcil soluo a deteco e eliminao das 60 a 70 milhes de minas
antipessoais, espalhadas no mundo. Uma possvel sada parece ser a utilizao de plantas de

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Arabidopsis transgnicas (Aresa, Dinamarca). Estas plantas, portadoras de genes microbianos,


degradam a trinitroglicerina (TNT) liberando NO2, que absorvido pela planta, modificando, trs
semanas mais tarde, a cor das folhas.
Os conflitos blicos atuais no Oriente Mdio no se limitam unicamente a uma tragdia humana
sem precedentes. Deixaro uma herana ambiental terrvel.
ORGANISMOS NOVOS NA NATUREZA E BIOSSEGURANA
A construo de Synthia (Instituto J. Craig Venter, 2010) e a disponibilidade das novas plataformas
tecnolgicas sugerem que os organismos novos na natureza (NTN, do ingls, New to Nature),
originados por Biologia Sinttica, podem estar mais prximos do que imaginamos.
Poderia ser inseguro um NTN construdo com partes seguras? A preocupao com biossegurana
inerente ao desenvolvimento da biotecnologia e, assim como em Asilomar, a questo fundamental
continua sendo a conteno. Vrios so os questionamentos para os quais ainda no temos respostas:
qual seria o comportamento na natureza de um organismo construdo juntando partes, dispositivos e
sistemas biolgicos, dentro de determinado chassis? Qual seria o impacto ambiental desse organismo
sinttico, se a conteno for insuficiente? O que aconteceria com um NTN liberado em um ambiente
sem predadores especficos? Poderia haver intercmbio gentico entre um organismo NTN e um
organismo biolgico convencional, contaminando o pool gentico natural?
Poder-se-ia falar de certeza de conteno (CoC, do ingls Certainty of Contention) de um NTN se a
probabilidade de escapamento, sua disseminao e a interao no intencionada com o ambiente
fossem praticamente zero. Nesse caso, em vez de Organismos Geneticamente Modificados, teramos
Organismos Geneticamente Seguros.
Algumas das primeiras hipteses contempladas, para garantir a conteno de um NTN, esbarraram
no fenmeno de transferncia horizontal, frequente entre os microrganismos ambientais. Por esse
motivo, foram descartados tanto o uso de marcadores de resistncia a antibiticos, como a incluso
de genes suicidas, desenhados para provocar a morte do organismo, uma vez cumprida sua funo.
As discusses atuais esto centradas na utilizao de alguns sistemas bioqumicos modificados que
garantiriam a certeza de conteno. Entre as possibilidades consideradas, teramos a expanso do
alfabeto gentico com outras bases de DNA, a construo de ribossomos que reconheam um cdigo
de 4 bases, a substituio de cdons para permitir a incluso de aminocidos no naturais etc.
Contudo, resta avaliar qual seria a eficincia desses sistemas e, ainda, responder seguinte
pergunta: Solucionariam o problema ou criariam outros?

148

C A P T U L O 12

BIOTECNOLOGIA E BIODIVERSIDADE

O conceito de biodiversidade abrange toda a variao existente nos seres vivos. H 1,75 milho de
espcies identificadas at o momento, o que representa uma pequena frao dos 13 milhes que
existiriam no planeta. Pouco sabemos da biodiversidade existente em regies remotas, como as
calotas glaciares ou as profundezas submarinas.
Em outra acepo do termo, a biodiversidade compreende a variabilidade gentica intraespecfica.
Considerando que apenas estamos comeando a entender a estrutura dos genomas correspondentes
s diferentes espcies, muito resta a estudar.
As mudanas climticas tero graves consequncias para a biodiversidade. A desestabilizao dos
ecossistemas afetar a extenso de terra cultivvel, deixando sequelas na produo de alimentos e
favorecendo a apario de doenas emergentes e reemergentes. O Plano Estratgico para a
Conservao da Biodiversidade (Naes Unidas) fixa, para a dcada de 2011 a 2020, os seguintes
objetivos: conservar a biodiversidade e fomentar sua utilizao sustentvel; distribuir de maneira justa
os benefcios do uso dos recursos genticos.
A DESAPARIO DOS ECOSSISTEMAS NATURAIS
O cultivo de plantas e a domesticao de animais acompanharam o homem na passagem de uma vida
nmade para uma vida sedentria; uma mudana que ocorreu repetidas vezes, em diversas
populaes e em lugares diferentes. As primeiras plantas cultivadas foram a cevada e o trigo (vales do
Eufrates e do Nilo, entre 13.000 a.C. e 10.000 a.C.), o arroz (regies fluviais da China e da ndia, 10.000
a.C.), e o milho e a abbora (Amrica Central, entre 9.000 e 7000 a.C.).
No continente europeu, durante a Antiguidade, os cultivos estiveram restringidos a umas poucas
espcies locais. As plantas provenientes de outros lugares chegaram lentamente, atravs do incipiente
intercmbio comercial, ou como trofus de guerra, de romanos e cruzados. As tcnicas agrcolas
primitivas limitavam-se trao animal do arado e ao armazenamento de alimentos. Na Idade Mdia,
a introduo da rotao trienal de culturas possibilitou a conservao do solo e o aumento da
produo.
As grandes navegaes e a descoberta do Novo Mundo mudaram o perfil das plantas cultivadas em
cada continente. O milho, a batata, o tomate, o feijo, o girassol e o tabaco foram introduzidos na
Europa. Procedentes de diferentes lugares, o trigo, o gro-de-bico, o arroz, os ctricos, a banana, o caf
e a cana-de-acar se aclimataram na Amrica (Figura 12.1).
No Novo Mundo e ligado ao trfico de escravos, o ciclo da agricultura das plantaes providenciou
o cultivo de plantas produtoras de fibras (algodo, juta) e de borracha (caucho), de acar (cana-deacar), de leo (amendoim, palma), de frutos (banana), de substncias estimulantes (ch, caf, cacau)
etc.
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FIGURA 12.1. O transporte de plantas de um continente a outro

1: Trigo, aveia, videira, gro-de-bico.


2: Abbora, feijo, milho, pimenta,
tabaco, batata, tomate.
3: Caf, inhame.
4: Abacaxi, amendoim, cacau, caucho,
mandioca, milho, tomate, pimenta,
cinchona.
5: Ctricos, banana, soja, cana-deacar, arroz.
6: Abacaxi, amendoim, cacau, caucho,
mandioca, milho, tomate, algodo,
abacate.

FIGURA 12.2. Distribuio da produo agrcola (gros e cereais, pradarias e pastagens, cultivos diversos) na rea
habitvel do planeta

Cultivos diversos (1%)


Gros e cereais (10%)

Florestas (31%)
Pradarias e pastagens (24%)

Outros usos (34%)

--------------

Nesse marco econmico, ficaram definidas algumas das caractersticas da agricultura moderna, que
visa satisfazer as necessidades dos consumidores, relativas produo de alimentos e de insumos
industriais.
A histria da domesticao dos animais segue um curso parecido, comeando com o cachorro, na sia,
no final do Paleoltico. Entre 8.000 e 7.000 a.C., foram domesticadas a cabra e a ovelha (Mesopotmia),
o boi e o zebu (Mesopotmia, Egito), o porco (China, Europa) e o gato (Mediterrneo). A domesticao
do cavalo ocorreria bem mais tarde (Ucrnia, 4.000 a.C.).
Antes da chegada dos europeus ao continente americano, os povos originrios sustentavam
criaes de lhamas, alpacas, vicunhas, perus e pres. Os europeus importaram seus animais
domsticos uma vez conquistado o Novo Mundo. Cavalos, vacas, porcos e cachorros se multiplicaram
rapidamente, causando grande devastao na flora local e tornando as grandes plancies um lugar
ideal para a criao de gado.
A expanso dos ecossistemas agrcolas acompanhou a ocupao, pelo homem, da superfcie
habitvel do planeta, que exclui os oceanos, os mares, os desertos, as montanhas e as regies polares
(Figura 12.2). O aumento significativo da produtividade agrcola no sculo XX esteve diretamente

150

BIOTECNOLOGIA E BIODIVERSIDADE

ligado s novas prticas agronmicas, mecanizao do trabalho no campo e ao melhoramento


gentico. Contudo, esse progresso teve um impacto negativo na biodiversidade, ao limitar o nmero
de espcies cultivadas.
Para evitar o desaparecimento dos ecossistemas naturais, precisa-se de uma agricultura e pecuria
sustentveis, que possibilitem a conservao e a manuteno dos solos, da gua, dos processos
ecolgicos e dos recursos genticos.
O HOMEM E AS PLANTAS
AS PLANTAS ALIMENTCIAS
Os vegetais ocupam um lugar preponderante na dieta humana. Embora nossa alimentao inclua
tambm produtos animais (carne, leite, ovos, peixes, mariscos), a maioria das protenas que ingerimos
de origem vegetal. Os carboidratos presentes nos cereais fornecem 75% de nossas necessidades
calricas, sendo as restantes complementadas pela ingesto de tubrculos, razes, plantas oleaginosas
e sacarinas. Embora provendo uma pequena quantidade de calorias, as hortalias e as frutas so
importantes devido a outros valores nutritivos (Tabela 12.1).
Apesar de existir uma enorme diversidade de plantas comestveis, 90% dos alimentos consumidos
pelo homem restringem-se a um pequeno grupo de 20 a 25 espcies, sendo os principais a banana, a
mandioca, o milho, o amendoim, algumas leguminosas, o milheto, a batata, o arroz, o sorgo, a batatadoce, a soja e o trigo (Figura 12.3).
A populao humana passar, em meio sculo, de 6 bilhes de pessoas (2000) a 9 bilhes (2050).
Ser suficiente a produo de alimentos para satisfazer as necessidades dessa populao? Ao longo
dos ltimos sessenta anos, duplicou-se a colheita de cereais e reduziram-se significativamente os
preos. O aumento da produo de alimentos deve-se seleo de variedades mais produtivas e ao
cultivo em condies otimizadas. O progresso tecnolgico da Revoluo Verde (dcada de 1960) gerou
suficientes alimentos para suprir a humanidade, at hoje.
Contudo, ainda hoje, 4,5 bilhes de pessoas vivem na pobreza, 24.000 pessoas morrem diariamente
de fome e outras 800.000, principalmente crianas e mulheres, sofrem de desnutrio. A carncia de
vitamina A afeta 14 milhes de crianas, e a falta de ferro, um bilho de pessoas. Mesmo havendo
suficientes alimentos para todos, eles no chegam aos dois bilhes de pessoas que vivem com menos
de dois dlares por dia.
-------------TABELA 12.1. Os principais tipos de vegetais que entram em nossa alimentao
TIPOS DE VEGETAIS

EXEMPLOS

Cereais

Trigo, arroz, milho, centeio, aveia, cevada, sorgo etc.

Plantas proteaginosas

Diversos tipos de feijo, lentilha, gro-de-bico, amendoim, ervilha etc.

Razes e tubrculos

Batata, car, batata-doce, mandioca, cenoura, beterraba etc.

Plantas oleaginosas

Soja, algodo, colza, canola, amendoim, girassol etc.

Plantas produtoras de
acar

Cana-de-acar, beterraba sacarina.

Frutas e hortalias

Banana, tmara, coco, azeitona, abacate, manga, uva, fruta-po, couve, couve-flor, tomate,
pimenta, quiabo, berinjela, pepino, abbora etc.

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FIGURA 12.3. Os vegetais na alimentao humana


Espcies comestveis
(10.000 80.000)
Espcies outrora consumidas como alimento (5.000)
Espcies cultivadas atualmente (2.300)
Espcies cultivadas comercialmente (150)
Espcies essenciais na dieta humana (20-25)

--------------

Segundo a Food and Agriculture Organization (FAO), para responder s necessidades da populao, a
produo de alimentos dever aumentar em 60%, nos prximos 30 anos. Considerando que 90% das
pessoas vivero na faixa intertropical do planeta, onde est situada a maioria dos pases em
desenvolvimento, a falta de alimentos poder se agravar. Em parte, porque, salvo algumas excees
significativas (ch, caf, cacau, banana etc.), os alimentos so consumidos no mesmo lugar onde so
produzidos. E tambm porque, em funo das mudanas climticas e da tendncia migratria para as
grandes cidades, aumentar o nmero de pessoas que, em vez de produzir alimentos, dever comprlos.
Embora em vrios lugares tenham aparecido sinais de eroso e de esgotamento do solo, a expanso
da fronteira agrcola parece improvvel. Boa parte da terra no utilizada se encontra em regies pouco
frteis, distantes, carentes de infraestrutura ou cobertas por florestas. Sua ocupao aceleraria a
degradao de ecossistemas, com perda de biodiversidade e risco de apario de doenas.
Os grandes desafios atuais da humanidade so o aumento da produtividade dos sistemas agrcolas
e a reduo da desigualdade de acesso aos alimentos. Se, para o primeiro, o desenvolvimento
tecnolgico indispensvel, a histria mostra que, sem mudanas sociais e polticas, no haver
soluo para o problema da fome.
AS PLANTAS COMERCIAIS
A PRODUO DE INSUMOS
Vrias plantas so cultivadas e comercializadas, s vezes internacionalmente, como matria-prima
para diversas indstrias (Tabela 12.2). Assim como o ouro, a carne, o petrleo e o gs natural, os gros
so considerados produtos equivalentes (commodities), independentemente do produtor. Os preos
so fixados em mercados futuros, que estabelecem a quantidade e a qualidade da commodity a ser
comercializada.
De todas as plantas industriais, a soja uma das mais importantes, devido extraordinria
versatilidade de seus produtos.
O gro e os brotos podem ser consumidos diretamente ou como farinha na composio de pes,
doces, bebidas, massas, biscoitos etc. Os gros fermentados so utilizados na culinria oriental (mis,
tempeh).
A frao proteica do gro substitui a protena de origem animal como carne de soja. Tambm
usada na elaborao de produtos dietticos, pastas e cremes, massas, sucrilhos, comida de bebs,
bebidas etc. A torta de soja includa nas raes animais. Por outro lado, essa frao proteica entra
na composio de adesivos, reagentes analticos, colas de madeira, emulso asfltica, produtos de
limpeza, cosmticos, substitutos de couro e plsticos.
O leo extrado do gro usado para cozinhar e como condimento para saladas e, na indstria de
alimentos, entra na composio de molhos, maioneses, coberturas de bolo, bebidas, pats e

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BIOTECNOLOGIA E BIODIVERSIDADE

margarinas. Outras indstrias o utilizam como anticorrosivo e antiesttico, entrando na composio


de agentes dispersantes e antiespumantes, selantes, cosmticos, madeirite, corantes e tintas.
Atualmente, 80-90% do leo de soja produzido provm de culturas transgnicas.
Assim como a soja, o milho apresenta um espectro de aplicaes de amplido equivalente na
alimentao e na indstria. No de surpreender que os primeiros cultivos transgnicos
comercializados correspondessem a quatro das plantas industriais: a soja, o milho, o algodo e a
canola.
-------------TABELA 12.2. As plantas e a indstria
PRODUTO

PLANTAS INDUSTRIAIS

Biocombustveis

Cana-de-acar, beterraba sacarina, cereais, soja, mamona etc.

Fibras txteis

Algodo, sisal, linho, cnhamo, juta, coco, rami, piaava.

leos e gorduras

Soja, algodo, colza, canola, amendoim, girassol, dendezeiro, babau, mamona, ssamo,
oliveira, linhaa.

Essncias e fragrncias

Sassafrs, menta, citronela, geraniol, eugenol, capim-limo.

Ltex

Borracha, chicle (sapoti).

Ceras

Carnaba, jojoba.

Resinas

Blsamos e gomas.

Especiarias

Pimenta-do-reino, noz moscada, canela, gengibre, cravo-da-ndia.

Taninos

Accia, quebracho, eucaliptos.

Tinturas

Pau-brasil, pau-campeche, urucum.

--------------

A EXPLORAO DAS FLORESTAS


As florestas naturais tm um valor intrnseco fundamental na preservao da biodiversidade. No
entanto, a lenha ainda utilizada como combustvel, e as madeiras nobres continuam a ser exploradas.
As florestas tambm so uma fonte de matria-prima para a indstria de papel e celulose. As
biotecnologias facilitam o reflorestamento, atravs da micropropagao e do plantio clonal de rvores
mais produtivas, obtidas por melhoramento gentico convencional ou por engenharia gentica.
Tcnicas de engenharia gentica visam reduzir a lignina em 45-50%, de modo a diminuir a necessidade
de tratamentos poluentes, no processamento da polpa.
A maioria dos estudos sobre essncias se limita aos gneros Pinus, Eucalyptus, Picea, Populus,
Quercus e Accia. O mapeamento de genomas (Pinus, Eucalyptus) e a utilizao de marcadores
genticos permitem selecionar alelos em genes que controlam a variao fenotpica. Aplicam-se
tambm as duas tecnologias para a obteno de rvores que possam crescer em solos cidos ou com
salinidade acentuada.
A comercializao do eucalipto transgnico de crescimento rpido da FuturaGene (Suzano),
aprovado pela CTNBio, redundaria na limitao da expanso das plantaes, diminuindo a energia
gasta em transporte.
Alm do Brasil, outros pases j realizaram experincias de transformao gentica em rvores. Na
China, a tecnologia considerada fundamental para o reflorestamento; plantaes de Populus
resistente a insetos (portador de um transgene codificador da toxina do Bacillus thuringiensis) esto

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sendo monitoradas, desde o ano 2000. Outros estudos visam a resistncia salinidade, ao estresse,
seca etc.
A FLORICULTURA
A floricultura o cultivo de plantas ornamentais e de flores. Trata-se de um mercado em expanso, de
importncia comercial para a Amrica do Sul, o Oriente Mdio, a Asia e a frica. A produo de material
de propagao (mudas, sementes e bulbos) para a floricultura tende a se concentrar em grandes
empresas internacionais. Cultivam-se poucas espcies nativas para exportao. A maioria das plantas
comercializadas o resultado de cruzamentos tradicionais, tcnicas de cultivo de tecidos
(micropropagao e embriognese somtica), haploidizao e fuso de protoplastos.
A produo comercial de orqudeas, por exemplo, depende hoje totalmente das tcnicas de cultura
in vitro; boa parte do desenvolvimento das plantas ocorre em condies de laboratrio bem
controladas, que permitem a obteno de mudas sadias e de variedades novas.
O Brasil exporta flores e plantas tradicionais (crisntemos, rosas, gladolos, cravos, grberas etc.) e
plantas tropicais (helicnias, bromlias, orqudeas, antrios etc.) em diferentes modalidades (flores de
corte, flores em vaso, plantas verdes e plantas para paisagismo).
A Argentina exporta rosas, cravos e palmas para cidades como Miami e Milo, de onde so
distribudas internacionalmente. Tambm exporta bulbos de tulipa e uma variedade de rosa preta sem
espinhos. O Instituto Nacional de Tecnologia (INTA) e a Japan International Cooperation Agency (JICA)
participam de um programa de cooperao para o desenvolvimento da floricultura, assim como da
produo hortifrutcola.
Aproximadamente 75% do mercado mundial de flores corresponde a cravos, rosas, crisntemos e
grberas, espcies nas quais faltam os pigmentos responsveis pela colorao azul (antocianinas). Com
a transferncia de um gene de petnia ao cravo, as empresas Florigene (australiana) e Suntori
(japonesa) conseguiram colocar no mercado flores inovadoras, tais como os cravos (Dianthus
caryophyllus L.) de cor malva (Moondust) ou violeta (Moonshadow).
Na Colmbia, os cravos azuis so cultivados, desde 2000, por Flores Colombianas S.A., uma filial da
empresa holandesa Floriyin, e comercializados em diversos pases, inclusive dentro da Unio Europeia,
onde levam a seguinte ressalva: Este produto um cravo geneticamente modificado e inapropriado
para o consumo por seres humanos e animais.
Em 2009, a Colmbia iniciou o cultivo de rosas e crisntemos azuis transgnicos, que no so
vendidos na Unio Europeia; os melhores clientes esto no Japo que, no sculo VIII, adotara o
crisntemo como emblema do selo imperial.
Em relao engenharia gentica, no h muito interesse em desenvolver novas variedades,
porque os custos dos testes necessrios para obter a aprovao de um transgnico so muito altos.
No entanto, existem vrias linhas de pesquisa visando o desenvolvimento de fragrncias e a resistncia
a doenas e ao estresse. Tambm se estuda a transferncia, a vrias espcies ornamentais, de genes
que prolonguem a conservao das flores nos vasos.
A COSMTICA
As indstrias cosmticas utilizam, em seus produtos, numerosos ativos vegetais extrados de plantas e
de algas. Em conjunto com pequenas comunidades rurais, vrias empresas desenvolveram uma forma
de produo sustentvel de substncias intermedirias, como leos (coco, castanha) e outros extratos
vegetais (maracuj, aa, andiroba etc.).
A onda verde que se alastra na sociedade levou vrias empresas nacionais (Natura, O Boticrio,
Granado etc.) e estrangeiras (LOral-Body Shop, Zhiels, Yves Rocher etc.) a aderir, com sucesso, a este
modelo.

154

BIOTECNOLOGIA E BIODIVERSIDADE

AS PLANTAS MEDICINAIS
At o momento, foram identificadas aproximadamente 20.000 espcies de plantas medicinais. Sem
acesso aos medicamentos comercializados, 80% da populao rural depende delas.
A metade das drogas medicamentosas consumidas atualmente extrada de 250 espcies de
plantas silvestres, que representam 0,1% das 250.000 plantas vasculares. Em alguns casos, o princpio
ativo das plantas foi identificado e sintetizado quimicamente. O cido acetilsaliclico da frmula da
aspirina, por exemplo, tem um efeito comparvel ao do cido saliclico, extrado da casca do salgueiro
e administrado como analgsico e antitrmico, em chs e poes, desde a Antiguidade.
A procura por novos medicamentos comea pela coleta das plantas, seguida da extrao de
substncias qumicas que so submetidas a testes de atividade biolgica. Encontrar um princpio ativo
pode gerar lucros muito altos, embora s um, em cada 10.000 produtos testados, chegue ao mercado.
Entre os fitoqumicos bem-sucedidos esto: a diosinina (produo de anticoncepcionais), a vincristina
e a vinblastina (medicamentos anticancerosos), a morfina (anestsico) e o curare (relaxante em
cirurgias).
A BIODIVERSIDADE AMEAADA
A EROSO GENTICA
A perda de biodiversidade acarreta a perda de variao gentica (eroso gentica). Os dados so
estarrecedores: 11 milhes de Ha/ano de florestas destrudas; avano da desertificao em 27 milhes
de Ha/ano; desapario de 30 a 300 espcies por dia. A destruio dos ecossistemas, a diminuio do
nmero de espcies existentes e a perda de variabilidade gentica so danos irreparveis, porque
preciso recorrer aos genes das variedades silvestres para melhorar geneticamente as plantas
cultivadas e os rebanhos existentes.
A eroso gentica inquietante em relao s plantas alimentcias, cultivadas em nmero restrito
e uniformizadas em funo das prticas agrcolas modernas. Se, no incio do sculo XX, existiam na
ndia mais de 30.000 variedades nativas de arroz, hoje provavelmente no restam mais de 50. Por
outro lado, o risco de extino ameaa, aproximadamente, 30% das variedades ou raas dos animais
de criao.
Tambm preocupa o futuro das plantas medicinais, muitas delas silvestres, porque as melhores
plantas so as primeiras a ser colhidas, enquanto as restantes ficam no terreno, produzindo as
sementes que daro origem s prximas geraes. Este tipo de seleo negativa contribui para a
eroso gentica das espcies.
A EXPANSO DO AGRONEGCIO
Embora as novas tecnologias de edio gentica possam modificar rapidamente o panorama, as
plantas geneticamente modificadas se limitam, por enquanto, a um nmero reduzido de espcies e a
poucos traos, principalmente tolerncia a herbicidas e resistncia a insetos. A globalizao dos
cultivos de plantas geneticamente modificadas traz alguns questionamentos relativos ao seu impacto
sobre a biodiversidade.
Vrios cenrios so possveis, com diferentes consequncias para os ecossistemas e sua
biodiversidade. No primeiro, a expanso do agronegcio afetaria os espaos dedicados a outras
culturas, pastagens e florestas. No segundo, ao aumentar a produo agrcola, as variedades
transgnicas diminuiriam a presso sobre as reas no cultivadas, especialmente as florestas.

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A materializao de um ou outro, assim como a de qualquer outro cenrio intermedirio, depender


das presses socioeconmicas e das polticas pblicas relativas produo de alimentos, exportaes
e proteo do meio ambiente. Mas no da transgnese em si, porque os cenrios seriam os mesmos
se em vez de plantas geneticamente modificadas dispusssemos de plantas melhoradas por mtodos
tradicionais.
A expanso da monocultura de um pequeno nmero de espcies representa, sem dvida, uma
perda da biodiversidade existente no ambiente natural. No entanto, o mercado de sementes difere de
outros mercados globalizados, como o de bebidas gasosas, o de eletrnica ou o de informtica, que
geram produtos standard, de modo que a comercializao de um nico tipo de semente no significa
necessariamente a total uniformizao do material gentico.
Nenhuma semente est presente ou comercializada em todo o globo, criando-se variedades
adaptadas a contextos especficos. Essas variedades ou cultivares distinguem-se entre si por suas
caractersticas morfolgicas, fisiolgicas, bioqumicas ou moleculares, herdadas geneticamente. A
estratgia a mesma em relao s plantas transgnicas. Por exemplo, das 668 cultivares de soja
(Glycine max (L.) Merrill), registradas no Registro Nacional de Cultivares (RNC/ MAPA), mais de 200 so
transgnicas.
A TRANSGNESE
Muitas das plantas consideradas naturais so um invento recente do homem. Um exemplo o
morango, resultante de um cruzamento acidental entre duas variedades que no coexistem na
natureza: a norte-americana Fragaria virginiana e a sul-americana Fragaria chiloense, ocorrido no
sculo XIX em um Jardim Botnico da Frana.
Outro exemplo o tritical, um hbrido de trigo e centeio, obtido em laboratrio em fins do mesmo
sculo. Tratado inicialmente como uma curiosidade cientfica, este cereal teve suas propriedades
agronmicas desenvolvidas recentemente, sendo utilizado hoje na composio de pes e biscoitos e
de raes animais; tambm vendido em algumas lojas de produtos naturais.
A valorizao do que natural varia de uma pessoa a outra. Se a natureza for vista como boa e
protetora, toda interveno humana ser observada com desconfiana. Ao contrrio, frente a uma
natureza perigosa e ameaadora, cabe ao homem se resguardar. Dessas duas vises do mundo natural
nascem a tecnofobia e a tecnofilia, duas correntes que se enfrentam frequentemente.
A transgnese especialmente perturbadora para alguns setores de opinio, contrrios ao uso
dessa tecnologia. Em alguns casos, existiria desconfiana na ligao atual entre a cincia, a tecnologia
e o mundo empresarial. Ao associar o progresso cientfico s vantagens econmicas, a cincia perderia
sua histrica imagem de pureza, honestidade e desinteresse.
Em outros, o temor consistiria na modificao do padro das espcies, por transferncia de genes,
quebrando a ordem estabelecida na Criao e gerando o caos gentico. Na mitologia, esse medo se
encontra representado na quimera, um misto de leo, cabra e drago que vomitava fogo e que, na
Idade Mdia, simbolizava o mal. Figuras mistas de homem, animal e planta se encontram
magistralmente representadas pelo pintor flamengo Hieronymus Bosch (El jardn de las delicias, 1510).
Por ser de cunho religioso e essencialmente subjetiva, esta ltima viso no corresponde ao nosso
conhecimento atual sobre as espcies, que so unidades morfolgicas e reprodutivas essencialmente
dinmicas. Sem fundamentao cientfica, o criacionismo e o fixismo ignoram os inmeros estudos
sobre a evoluo dos seres vivos, assim como descobertas recentes sobre os genomas, mostrando o
compartilhamento de um nmero grande de genes entre as diferentes espcies.

156

BIOTECNOLOGIA E BIODIVERSIDADE

A PROTEO DA BIODIVERSIDADE
OS CENTROS DE DIVERSIFICAO
No incio do sculo XX, o gegrafo e geneticista russo Nikolai I. Vavilov organizou mais de 100
expedies que percorreram 64 pases, coletando sementes, gros, tubrculos etc. Nessas viagens, ele
observou que a diversidade das variedades cultivadas era muito maior em algumas reas que em
outras. Essas reas geogrficas seriam os centros de origem dessas variedades.
Na Cordilheira dos Andes, existem mais de 1.000 variedades de batata, cada uma delas identificada
com um nome pela populao local. Para Vavilov, isso revelaria que a regio andina seria seu centro
de origem e de diversificao. A partir de observaes anlogas, ele localizou seis a oito centros
geogrficos onde, presumivelmente, teria-se originado a agricultura (Tabela 12.3).
Vavilov no chegou a completar sua obra. Encarcerado por defender o conceito mendeliano da
herana, faleceu na priso de Saratov, em 1943. Como comentado anteriormente, a gentica foi
considerada uma teoria reacionria e burguesa, na antiga Unio de Repblicas Socialistas Soviticas
(URSS), entre 1929 e 1964.
A teoria de Vavilov foi extremamente fecunda para os estudos evolutivos das plantas cultivadas e,
consequentemente, para a conservao da biodiversidade. Admite-se hoje que a diversidade das
plantas cultivadas e silvestres, bem maior em alguns pontos geogrficos, indica que alguns biomas
foram mais propcios que outros para o nascimento de prticas agrcolas.
Atualmente, sabe-se que os centros origem nem sempre coincidem com os centros de diversidade,
porque as migraes humanas geraram centros de diversidade secundria em que, respondendo s
prticas agrcolas e presso do ambiente, as espcies se diversificaram, tornando-se tolerantes s
condies ambientais e resistentes s doenas locais.
A CONSERVAO DA BIODIVERSIDADE
Uma das consequncias do processo evolutivo a extino de espcies: o nmero de espcies vivas
no chega a 1% das que, alguma vez, povoaram a Terra. Mais que a apario e desapario das
espcies, o que preocupa a velocidade com que isso est acontecendo, porque configura uma
extino em massa, causada pelo homem.
-------------TABELA 12.3. Os centros de diversificao e os cultivos originrios
REGIO

CULTIVOS

Amrica Central e do Norte

Milho, amaranto, feijo, batata-doce, mandioca, algodo, sisal, papaia, abacate, goiaba,
pimenta, abbora, tomate, baunilha, cacau, girassol, morango, noz pec, tabaco etc.

Amrica do Sul

Amaranto, amendoim, feijo, lupino, batata, mandioca, amendoim, algodo, caju, frutade-conde, abacaxi, papaia, abacate, morango, pimento, abbora, coca, mate, borracha
etc.

ndia e Sudeste asitico

Limo, pepino, arroz, melo, manga, cana-de-acar, algodo, cnhamo, coco, arroz, frutapo, laranja, tangerina, banana, pltano, noz-moscada, berinjela etc.

China

Soja, colza, lichia, pera, pssego, repolho, ch, gengibre, ginseng, cnfora etc.

frica (Etipia)

Caf, melo, melancia, inhame, sorgo etc.

sia menor

Alfafa, trigo, aveia, centeio, cevada, rabanete, cenoura, ervilha, gro-de-bico, lentilha,
azeitona, figo, amndoa, vinha, ma, beterraba, alho, cebola, aafro, papoula, alcauz
etc.

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Consideremos, por exemplo, o caso da Mata Atlntica brasileira, cuja biodiversidade maior que a da
Amaznia. A devastao tal que s restam pedaos da floresta original, e sua conservao depende
da manuteno de corredores entre os diversos fragmentos.
Preservar a biodiversidade e os recursos genticos muito mais que salv-los da extino, significa
conservar suficiente diversidade dentro de cada espcie, de forma a garantir que seu potencial
gentico possa ser usado no futuro.
Todas as variedades cultivadas atualmente tm incorporados genes de variedades selvagens, ou
dos estoques genticos, conservados pelos povos que praticam uma agricultura tradicional. A
produo comercial do tomate, por exemplo, seria impossvel sem a contribuio de genes silvestres
de Amrica Latina. Graas aos trigos selvagens, dispomos de variedades resistentes aos fungos, seca,
ao calor ou ao frio. A resistncia a quatro doenas do arroz cultivado atualmente deve-se a uma nica
variedade, encontrada na ndia central.
A CONSERVAO IN SITU
A biodiversidade pode ser conservada in situ, mediante a proteo ambiental de uma determinada
regio. Alm de manter a dinmica evolutiva das espcies, nas Unidades de Conservao Ambiental
devem-se contemplar as necessidades da populao local, criando reservas de desenvolvimento
sustentvel (Mamirau, Brasil; Slan Kan, Mxico). Na Costa Rica, uma lei de 1996 compensa aqueles
que conservem, ou aumentem, a rea de floresta dentro de suas propriedades.
Algumas iniciativas interessantes para a proteo da biodiversidade envolvem o rastreamento por
satlite (baleias, lontras) e o uso de aplicativos para telefones celulares, que facilitam o monitoramento
da fauna silvestre (SISSGEO, Centro de informao em Sade Silvestre, Fiocruz).
Uma nova tendncia o retorno da vida selvagem, mediante a reintroduo de animais como o
urso, nos Pirineus, ou o lobo, nas florestas europeias. Projetos mais arrojados contemplam a criao
de comunidades de grandes mamferos. Em Oostvaarderplassen (Pases Baixos), o objetivo
reconstituir, sem interveno humana, a paisagem original da regio. Os animais extintos foram
substitudos por outros que lhes so aparentados. Em vez do auroque, que desapareceu em 1627,
introduziu-se o auroque de Heck, criado em 1920 por cruzamento entre as mais antigas raas de
bovinos europeus. O pnei Konik da Polnia ocupa o lugar do tarpan, um cavalo selvagem extinto.
A ideia controvertida porque, inevitavelmente, o ecossistema reconstitudo ser diferente do
padro antigo e, tambm, porque os defensores dos direitos dos animais consideram uma crueldade
o abandono dos animais a seu destino. Um projeto anlogo procura recriar as estepes da tundra,
anteriores ltima era glacial (Parque Pleistocnico, Rssia).
Outra tendncia o uso da biotecnologia moderna para salvar espcies ameaadas, como os
rinocerontes, mortos por caadores inescrupulosos para extrair e vender os chifres, como trofu ou
como medicamento. Uma empresa norte-americana transferiu a uma levedura um gene capaz de
sintetizar queratina de rinoceronte que, misturada ao DNA do animal, seria utilizada para fabricar
chifres artificiais. Outra empresa, envolvida na conservao dos rinocerontes, injeta no chifre do
animal anestesiado um corante azul que pode causar vmitos e diarreias, de modo a impedir seu uso
como ornamento ou medicamento.
A CONSERVAO EX SITU
Os anfbios enfrentam srios riscos de extino em massa, devido perda de habitats e a uma doena
causada pelo fungo Batrachochytrium dendrobatidis, nativo de frica do Sul, onde vive em forma
simbitica com a r de unhas africana (Xenopus laevis). Na dcada de 1930, essa r fora distribuda no
mundo inteiro, para a realizao de testes de gravidez. Embora a doena possa ser tratada facilmente

158

BIOTECNOLOGIA E BIODIVERSIDADE

em cativeiro, o mesmo no ocorre na natureza. At o momento, a conservao dos anuros depende


da manuteno e cuidado das espcies em jardins zoolgicos.
Diferentemente dos tradicionais, os jardins zoolgicos modernos recriam os habitats naturais dos
animais, sem jaulas (San Diego Zoo, California). Esses jardins cumprem um rol importante na
preservao das espcies ameaadas, mantendo instalaes de criopreservao (Frozen Zoo) e
colees de DNA, esperma, ovos, embries e tecidos vivos.
O progresso tecnolgico permite o sequenciamento de animais extintos, como os dois mamutes
(Mammuthus primigenius) congelados no permafrost da Sibria, 60 mil e 20 mil anos atrs. Uma vez
descartadas as sequncias de microrganismos que contaminaram os fsseis, a comparao com o
genoma do elefante africano atual permitir entender as principais mudanas evolutivas e, talvez, a
causa de sua extino.
Contudo, a expectativa de clonar um mamute resulta um tanto fantasiosa, lembrando-nos do livro
de M. Crichton, Parque dos dinossauros. Para recriar o mamute, seria necessrio complementar as
partes do genoma faltantes com sequncias de elefante africano; substituir, em um zigoto, o genoma
do elefante africano pelo do mamute; inseminar artificialmente uma fmea de elefante africano e
aguardar dois anos at a cria nascer. Esta seria, provavelmente, muito parecida ao mamute, mas qual
seria o destino desses animais?
A conservao ex situ de plantas envolve a coleta de amostras representativas de uma populao
e sua manuteno em bancos de germoplasma e/ou jardins botnicos, na forma de sementes, estacas,
plantas inteiras etc.
A criopreservao aplicada, especialmente, s plantas cultivadas que se reproduzem por
sementes. Estas podem ser conservadas, no frio, durante longos perodos de tempo (20 a 30 anos a
50C; um sculo a -180C-200C). Periodicamente, algumas sementes sero germinadas para retirar, das
plantas que frutifiquem, a gerao seguinte de sementes frescas e substituir as antigas nas cmaras
frias.
A criopreservao tem a vantagem de manter o material em um espao reduzido e com cuidados
extremos. Porm, devido s limitaes no tamanho das amostras e aos custos de manuteno, nem
sempre o sistema consegue conservar os recursos fitogenticos. Um exemplo a coleo da Estao
Experimental Vavilov (So Petersburgo, Rssia), que sobreviveu Segunda Guerra Mundial e
atualmente enfrenta grandes dificuldades econmicas.
As tcnicas de cultura de tecidos permitem conservar muitas das plantas que no resistem
dessecao (coco, cacau, ctricos, caf, dend, borracha e 70% das rvores das florestas tropicais) e,
tambm, as plantas de multiplicao vegetativa (razes, como a mandioca, tubrculos como a batata,
banana, cana-de-acar).
A incorporao da tecnologia do DNA e dos estudos genmicos facilita os estudos de diversidade
gentica; a disponibilidade dos dados no domnio pblico abre perspectivas novas de conservao.
Existem hoje mais de 1.400 bancos de genes e de germoplasma, com mais de 6.000.000 de amostras.
Os principais se encontram nos Estados Unidos, na China, na Alemanha e no Brasil (Embrapa). Na
Noruega, a 1.000 km do Polo Norte, um lugar considerado a salvo de mudanas climticas, desastres
naturais e guerras, criou-se recentemente o banco de sementes de Svalbard, com capacidade para
armazenar 4,5 milhes de amostras, cada uma com 500 sementes.
Devido localizao geogrfica dos centros de origem e de diversificao, preocupante a
multiplicao recente dos conflitos blicos (Afeganisto, Iraque, Sria), que afetam a populao local e
comprometem seu futuro, ao devastar a sia Menor, uma regio de grande biodiversidade e riqueza
gentica.
Os bancos de germoplasma podem, tambm, ajudar a restaurar uma agricultura devastada por
conflitos blicos. Em Ruanda, um pas em que 90% das pessoas dependiam da agricultura e onde eram
conhecidas 600 variedades de feijo, o conflito blico entre etnias rivais causou, em 1994, a morte de

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M.A.MALAJOVICH - BIOTECNOLOGIA (2016)

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800.000 pessoas e a migrao forada de dois milhes de pessoas. Durante esse perodo, organizaes
internacionais conservaram, em bancos de germoplasma, as sementes essenciais para a reconstruo
do pas.
A LEGISLAO VIGENTE
Aprovada por 175 pases, a Conveno sobre Diversidade Biolgica (1992) reconhece a soberania
nacional sobre a biodiversidade, estabelece a repartio de bebefcios decorrentes do uso dos recursos
genticos e reconhece os direitos das comunidades locais e indgenas sobre seus conhecimentos.
No Brasil, a proteo da biodiversidade est regida pela Lei n 13.123/2015 que determina as regras
para acesso ao patrimnio gentico e ao conhecimento tradicional associado, assim como a repartio
de benefcios.
O CGIAR E O CENTRO INTERNACIONAL DA BATATA
Uma das organizaes dedicadas conservao da biodiversidade e ao desenvolvimento agrcola dos
pases em desenvolvimento a Future Harvest, uma iniciativa com 16 centros localizados em diversos
lugares, porm mantendo uma estrutura descentralizada que favorece a difuso das informaes. Os
centros so mantidos pelos governos de 165 pases, fundaes privadas e organizaes internacionais
e regionais que integram o Consultative Group on International Agricultural Research (CGIAR), apoiado
pela Food and Agriculture Organization (FAO). Os centros do CGIAR na Amrica Latina so: o Centro
Internacional para el Mejoramiento del Maz y el Trigo (CIMMYT) no Mxico, o Centro Internacional de
la Papa (CIP) no Peru e o Centro Internacional de Agricultura Tropical (CIAT) na Colmbia.
A batata originria da regio andina. No sculo XVI chegou Europa onde, depois de vencer a
resistncia da populao, transformou-se em um dos poucos alimentos consumidos pela populao
mais pobre. Quando, em meados do sculo XIX, o fungo Phytophtora infestans infectou as batatas,
desencadeou-se na Irlanda um terrvel perodo de fome, que causou a morte de um milho de pessoas
e a emigrao de boa parte da populao.
Hoje, a batata o quarto cultivo mais importante do mundo, com uma produo anual de 300
milhes de toneladas. Em muitos pases, a populao depende de batata e de outros tubrculos
(batata-doce) para sua alimentao, por serem relativamente ricos em energia e nutrientes.
O Centro Internacional da Papa (CIP) preserva a batata (Solanum tuberosum), a batata-doce
(Ipomoea batatas) e nove tubrculos ou razes andinas (Oca, Ulluco, Mashua, Arracacha, Yacon, Achira,
Ahipa, Maca, Mauka). O banco de germoplasma de batata inclui amostras de uma centena de espcies
selvagens, coletadas em 8 pases de Amrica Latina, alm das variedades cultivadas tradicionalmente
pela populao andina.
Entre os objetivos do CIP se encontra o melhoramento da qualidade nutricional, da resistncia a
doenas e a condies climticas adversas, como a seca e a geada. O centro utiliza a biotecnologia para
criar formas adaptadas s condies locais e distribui as variedades tradicionais e melhoradas sob a
forma de sementes, tubrculos ou vitroplantas. Atualmente tambm estimula as utilizaes comerciais
das variedades autctones: distribuio em pacotes (tikapapa), elaborao de chips ou hojuelas a
partir de rodelas com um visual variado.
O PROTOCOLO DE CARTAGENA DE BIOSSEGURANA
Vigorando desde setembro de 2003, o Protocolo de Cartagena de Biossegurana suplementa a
Conveno sobre a Diversidade Biolgica. O acordo contempla o risco potencial decorrente do
transporte e do manuseio de todos os organismos vivos modificados (OVMs) que possam ter um efeito

160

BIOTECNOLOGIA E BIODIVERSIDADE

adverso na conservao e no uso sustentvel da diversidade, levando em considerao os riscos para


a sade humana.
Frente apreenso suscitada pelo trnsito e movimento dos organismos transgnicos atravs de
fronteiras, os pases membros determinaram que a expresso pode conter OGMs identifique toda
carga proveniente de lavouras transgnicas destinada alimentao, rao ou processamento.
O Protocolo no cobre os produtos derivados dos transgnicos (como, por exemplo, papel
produzido a partir de rvores transgnicas) nem os transgnicos produtores de frmacos, que so
regulados por outras organizaes.
Mediante o Protocolo de Cartagena se estabelece a cooperao internacional, a fim de ajudar os pases
em desenvolvimento a utilizar a biotecnologia com segurana e a regul-la eficientemente. Os
governos membros se propem a promover o fluxo de informaes e a transferncia de tecnologia,
conhecimentos e recursos, mediante o treinamento cientfico e tcnico correspondente.

161

C A P T U L O 13

BIOTECNOLOGIA E AGRICULTURA

A EVOLUO DAS PRTICAS AGRCOLAS


Embora as prticas agrcolas e as plantas cultivadas tenham-se desenvolvido em um curto perodo da
histria evolutiva dos vegetais, as plantas cultivadas atualmente so o resultado de milhares de anos
de seleo artificial pela mo do homem e guardam muito pouca semelhana com suas ancestrais
selvagens (Figura 13.1).
Na Europa, o uso de ferramentas rudimentares prevaleceu at a Idade Mdia, quando, em funo
de vrias inovaes, as prticas agrcolas se tornaram mais eficientes. Datam desse perodo o
aproveitamento da fora de trao animal, a inveno dos moinhos, a prtica de descanso dos solos e
a construo de sistemas de irrigao.
No sculo XVIII, a integrao das atividades agrcolas e a criao de animais originou uma nova
agricultura que, alm de envolver a utilizao de esterco como fertilizante, promoveu a rotao entre
os cultivos de gramneas, leguminosas e plantas forrageiras.
A incidncia do progresso cientfico e tecnolgico caracteriza a agricultura do sculo XIX,
destacando-se a preocupao com as necessidades nutricionais das plantas e com as doenas que
afetavam os cultivos e as criaes (antraz das ovelhas, clera das aves, doenas do bicho-da-seda etc.).
Originadas por cruzamentos seletivos, novas variedades e hbridos de trigo foram comercializadas
internacionalmente, a partir de 1850. Com a inveno da mquina a vapor e as primeiras utilizaes
da eletricidade, iniciou-se a mecanizao do campo.
No incio do sculo XX, o uso do trator se espalhou rapidamente. A substituio da trao animal
pela maquinaria agrcola diminuiu a necessidade de produzir raes, liberando para outros cultivos a
superfcie anteriormente dedicada produo de feno e aveia. Com o redescobrimento das leis de
Mendel e a teoria cromossmica da herana, iniciou-se uma nova era no melhoramento de vegetais e
animais.
O cruzamento entre duas linhagens puras de milho origina um hbrido semelhante s linhagens
parentais, mas com qualidades superiores. Esta propriedade, denominada heterose ou vigor hbrido,
permite a gerao de plantas mais produtivas, suficientemente homogneas para facilitar a colheita
mecnica (Figura 13.2). As primeiras empresas comerciais a explorar a heterose do milho surgiram, a
partir de 1920, nos Estados Unidos e no Canad (Hi-Bred Corn Company, mais tarde Pioneer Hi-Bred).
Essas empresas selecionavam as linhagens parentais de milho, procediam aos cruzamentos
correspondentes e vendiam as sementes hbridas ao agricultor. A perda do efeito da heterose diminui
a produtividade da descendncia das plantas hbridas, de modo que o agricultor passou a comprar as
sementes

BIOTECNOLOGIA: ENSINO E DIVULGAO (http://bteduc.com)

BIOTECNOLOGIA E AGRICULTURA

Em 1960, o milho hbrido era cultivado, com raras excees, em todas as plantaes dos Estados
Unidos e do Canad. O melhoramento das plantas j no dependia daqueles que estavam diretamente
envolvidos em seu cultivo, mas daqueles que produziam as sementes.
Na dcada de 1960, o desenvolvimento de uma variedade de trigo de alto rendimento e resistente
a doenas permitiu aumentar a quantidade de alimentos disponveis, salvando da fome mais de 1
bilho de pessoas. Por ser o artfice da revoluo verde, uma contribuio fundamental para a paz
mundial, o engenheiro agrnomo Norman Borlaug recebeu o Prmio Nobel da Paz (1970).
A revoluo verde duplicou a produtividade dos cereais mediante o desenvolvimento e cultivo de
variedades melhoradas geneticamente, complementados por prticas agrcolas complexas (irrigao,
mecanizao, aplicao de fertilizantes e pesticidas). Porm, trouxe problemas ambientais, sociais e
de sade, devido necessidade de grandes investimentos de capital para a mecanizao e aplicao
de produtos qumicos, que foram usados em quantidades excessivas.
-------------FIGURA 13.1. O milho
O milho de 5.000 a 7.000 anos atrs era bem menor do que o que
conhecemos atualmente. O cruzamento acidental com o teosinto, uma
erva que ainda existe na natureza, teria dado origem ao milho moderno,
que passou por vrias modificaes at se estender pela Amrica prcolombiana. Diversas variedades de milho persistem at hoje no
continente.

www.learner.org/courses/essential/life/session5/closer1.html
FIGURA 13.2. A produo de milho hbrido
A hibridizao permite obter hbridos simples, a partir de duas linhagens, e hbridos duplos, a partir de quatro linhagens.
Existem hbridos mltiplos construdos a partir de pelo menos cinco linhagens.

Linhagem A

Linhagem B

Linhagem (AxB)

Linhagem (AxB)x(CXD)
(Planta de milho hbrido)

Colheita

Linhagem C

Linhagem D

Linhagem (CxD)

163

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Em alguns pases, os pequenos agricultores no chegaram a usufruir a revoluo verde. Se, desde
1960, a produo de cereais aumentou em mais de 40% na sia e na Amrica do Sul, na frica diminuiu
13%.
Com a crise do petrleo da dcada de 1980, o setor de sementes agrcolas foi invadido por grandes
empresas transnacionais, produtoras de agrotxicos e fertilizantes que, mediante um investimento
extraordinrio de recursos em pesquisa e desenvolvimento, conseguiram introduzir as tcnicas de
engenharia gentica no melhoramento das sementes. Traspassando as barreiras interespecficas,
obtiveram plantas mais produtivas ou com propriedades novas.
Comercializadas a partir de 1996, as principais plantas geneticamente modificadas (PGMs)
cultivadas atualmente so a soja, o milho, o algodo e uma variedade de colza denominada canola. Os
traos mais frequentes so a tolerncia a herbicidas e/ou a resistncia a pragas. Em relao aos
mtodos tradicionais, as biotecnologias modernas inserem a tecnologia na semente.
Em 2015, dos 28 pases que semearam cultivos biotecnolgicos, 20 deles foram pases em
desenvolvimento. Produtores de Amrica Latina, sia e frica cultivaram 54% da rea global plantada
com PGM.
A OBTENO DE NOVAS VARIEDADES
MUTAO GNICA E SELEO
O melhoramento clssico est baseado na reproduo seletiva entre indivduos de uma mesma
espcie. A variao intraespecfica limitada, mas alguns agentes fsicos e qumicos podem induzir
mutaes aleatrias. No caso de aparecer algum mutante interessante, ser cruzado por vrias
geraes com um dos tipos parentais, at que este incorpore, por introgresso gnica, as
caractersticas desejadas.
Esse processo de mutao e seleo demora de cinco a quinze anos e, quando finalizado, o gene
selecionado pode estar acompanhado por outros no desejveis. Duas variedades comerciais de
batata (Lenape, 1960; Magnum bonum, 1990), obtidas por este mtodo, tiveram que ser retiradas do
mercado devido ao alto contedo de alcaloides, caracterstico das plantas selvagens.
O progresso alcanado na induo de mutaes (TILLING, do ingls Targeting induced local lesions
in genomes) e na seleo assistida por marcadores moleculares facilita a obteno de novas variedades
(batata Amflora, BASF). A genmica tambm trouxe avanos notveis, como a identificao de 40
genes de resistncia a patgenos no tomate, que foram reunidos em um gentipo nico. Contudo, em
ambos os casos, a variao se deve a genes pertencentes mesma espcie.
ALTERAO DO NMERO DE CROMOSSOMOS
A multiplicao do nmero de cromossomos (poliploidia) um fenmeno que acontece
espontaneamente nos vegetais, seja por no disjuno dos cromossomos ou por uma falha da
citocinese durante a diviso celular. Ao longo do processo evolutivo, duplicaes dos lotes
cromossmicos originais (autopoliploidia) ocorreram em vrias das espcies cultivadas atualmente,
tais como a batata ou a cana-de-acar.
A multiplicao dos lotes cromossmicos pode ocorrer em hbridos interespecficos, pouco frteis
ou estreis, restaurando a fertilidade e gerando uma nova espcie, diferente de ambas as linhagens
parentais. Este mecanismo (alopoliploidia) deu origem a plantas como o trigo, a colza, a aveia, o
tabaco, o algodo, o caf etc.
A descoberta da colchicina (1935), uma substncia que interfere com a formao dos fusos
mitticos, permitiu a criao de novas espcies poliploides. A hibridizao do trigo e do centeio,

164

BIOTECNOLOGIA E AGRICULTURA

seguida de uma duplicao cromossmica, originou o triticale, uma planta que rene a qualidade do
gro do primeiro e a rusticidade do segundo.
Outra forma de alterao do nmero de cromossomos a cultura de anteras, para a obteno de
plantas haploides. Essa tecnologia permite identificar mutantes recessivos e obter rapidamente
variedades diferentes por hibridizao ou duplicao cromossmica.
ENGENHARIA GENTICA
medida que a distncia entre as espcies aumenta, os cruzamentos se tornam cada vez mais difceis
e a transferncia dos genes pode exigir o uso de tcnicas complexas, como a fuso de protoplastos e
o cultivo de embries. Quando os recursos genticos provm de outros organismos distantes na escala
evolutiva (plantas, microrganismos ou animais), sua transferncia s possvel por engenharia
gentica.
Qual a diferena entre uma planta obtida por cruzamento seletivo e outra por engenharia gentica?
Na primeira, genes da mesma espcie ou de uma espcie muito prxima so introduzidos
aleatoriamente. Na segunda, incorpora-se diretamente uma construo gnica, proveniente da
mesma espcie (construo cisgnica) ou de uma espcie distante (construo transgnica). Trata-se
de uma tecnologia poderosa demais para ser negligenciada.
NO LABORATRIO
A construo de uma planta geneticamente modificada (PGM) comea com o isolamento e
caracterizao do gene de interesse (transgene) e a construo de uma estrutura gentica complexa,
que inclui um gene promotor e um gene marcador. O primeiro possibilita a transcrio do transgene,
determinando se este ir se expressar em todas as clulas ou somente em alguns tecidos. O segundo
permite selecionar as clulas transformadas.
A construo gentica transferida s clulas receptoras por algum dos mtodos disponveis
(eletroporao, biolstica ou uso de vetores, como o plasmdeo Ti de Agrobacterium tumefaciens). As
clulas transformadas so recuperadas, procedendo-se regenerao das plantas mediante tcnicas
de cultura in vitro. Mediante tcnicas bioqumicas e/ou acompanhamento de marcadores moleculares
(polimorfismos na molcula de DNA, repetio de sequncias), constata-se a transferncia gnica e
outros aspectos que podem influir na expresso gnica, como o nmero de cpias e o lugar em que
estas se integraram ao genoma.
O trabalho laboratorial realizado com plantas cujo gentipo favorea a transformao e a
regenerao da planta transformada, geralmente pouco vantajosas do ponto de vista agronmico.
Considera-se alcanado o sucesso quando o transgene se expressa no lugar correspondente e com um
adequado nvel de atividade, restando por verificar a estabilidade da expresso gnica e o seu valor
agronmico.
AS ETAPAS POSTERIORES
Acabada a etapa de laboratrio, iniciam-se os testes controlados em casa de vegetao, para
selecionar as plantas-me das quais procedero vrias geraes de retrocruzamentos seletivos com
alguma das linhagens elite, visando a obteno de uma linhagem transgnica de alto rendimento,
adaptada a um contexto especfico. O resultado uma variedade ou cultivar que expressa o trao
codificado pelo transgene e apresenta um potencial de produtividade parecido ao da linhagem elite.
Conceitualmente, a metodologia seguida depois da transformao mantm semelhana com do
melhoramento tradicional, mas o processo acelerado pela utilizao de tcnicas de cultura in vitro e
de marcadores moleculares na caracterizao da prognie.

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Uma vez obtida a nova variedade de PGM, d-se incio liberao planejada no meio ambiente, que
abrange o cultivo em experimentos protegidos e testes de campo realizados em diferente escala, at
a nova variedade estar pronta para o seu cultivo comercial. A liberao do cultivo depender da
autorizao da legislao local, geralmente bastante restrita a esse respeito (Figura 13.3).
No Brasil, esta autorizao dada pela Comisso Tcnica Nacional de Biossegurana (CTNBio),
definida pela Lei de Biossegurana como o rgo multidisciplinar responsvel pelo controle dessa
tecnologia no pas (Lei 11.105/2005, Poltica de desenvolvimento da Biotecnologia; Decreto
6.041/2007).

A BIOSSEGURANA E O PRINCPIO DE PRECAUO


Poucas tecnologias suscitaram tanta polmica como a introduo das PGMs na agricultura, uma
questo que no pode ser tratada levianamente. Alm de conhecimentos e tempo, a construo de
uma planta transgnica exige o consenso das numerosas pessoas que participam no processo e a
aprovao da autoridade correspondente.
-------------FIGURA 13.3. As etapas da construo de uma planta transgnica
Durao do processo: 10 a 15 anos.

Transformao

Regenerao das plantas transformadas

Caracterizao molecular e bioqumica

Avaliao do valor agronmico

(Casa de vegetao, campo)

Introgresso em uma linhagem comercial de elite


Linhagem-me
Linhagem comercial de elite
Retrocruzamentos

Obteno da variedade geneticamente modificada

Experimentos protegidos e testes de campo, em pequena e grande escala


Autorizao das autoridades locais, de acordo com a legislao vigente

Liberao do cultivo para sua explorao comercial

166

BIOTECNOLOGIA E AGRICULTURA

Ainda hoje, parte da opinio pblica considera que as PGMs no deveriam ter sido introduzidas no
ambiente, nem utilizadas para o consumo humano, at no ser demonstrada a ausncia de qualquer
risco. A exigncia apoia-se no princpio de precauo, um princpio que pode ser entendido de diversas
maneiras.
Podemos dizer, de maneira simplista, que havendo a possibilidade de algo ruim me acontecer na
rua, melhor ficar em casa, ou que havendo a possibilidade de algo ruim me acontecer na rua, ao sair
de casa bom ter cuidado e prestar ateno no sinal, nos carros, nas bicicletas que circulam na
contramo e, tambm, no bandido. Note-se que a deciso de no sair de casa tambm envolve
riscos, tais como escorregar e levar um tombo no banheiro, queimar-se ao acender o fogo ou receber
um vrus via Internet. No existe risco zero, toda ao apresenta riscos que devem ser analisados para
ser posteriormente gerenciados.
No Brasil, o cultivo de plantas transgnicas regido pela Lei de Biossegurana, que estabelece a
observncia do princpio da precauo para a proteo do meio ambiente. O Princpio 15 da Declarao
do Rio de Janeiro sobre Meio Ambiente e Desenvolvimento Sustentvel (1992) diz o seguinte: De
modo a proteger o meio ambiente, o princpio da precauo deve ser amplamente observado pelos
Estados, de acordo com as suas capacidades. Quando houver ameaa de danos srios ou irreversveis,
a ausncia de absoluta certeza cientfica no deve ser utilizada como razo para postergar medidas
eficazes e economicamente viveis para prevenir a degradao ambiental.
Diferente da preveno, que trata de riscos conhecidos, a precauo contempla riscos potenciais
que demandam uma avaliao detalhada. Mesmo havendo incertezas ou falta de unanimidade entre
os expertos, o princpio de precauo no justifica a falta de aes concretas para a proteo do meio
ambiente.
Por outro lado, o Princpio 10 da mesma declarao nos diz que: A melhor maneira de tratar
questes ambientais assegurar a participao, no nvel apropriado, de todos os cidados
interessados. No nvel nacional, cada indivduo deve ter acesso adequado a informaes relativas ao
meio ambiente de que disponham autoridades pblicas, inclusive informaes sobre materiais e
atividades perigosas em suas comunidades, bem como a oportunidade de participar em processos de
tomada de decises. Os Estados devem facilitar e estimular a conscientizao e a participao pblica,
colocando a informao disposio de todos. Deve ser propiciado acesso efetivo a mecanismos
judiciais e administrativos, inclusive no que diz respeito compensao e reparao de danos.
Vrios pontos merecem ser destacados: admite-se a incerteza e a falta de unanimidade entre os
expertos, afirma-se o direito de todos informao e pede-se a participao, no nvel apropriado, de
todos os cidados interessados. A responsabilidade pela tomada de decises no ser exclusivamente
de um grupo de indivduos, sejam estes cientistas, administradores, empresrios, polticos ou
comunicadores. Ter que ser democraticamente assumida por um grupo heterogneo que represente
os interesses da sociedade, mesmo tendo que abrir as portas ao marketing, aos lobbies e presso
dos grupos polticos, ambientalistas ou no.
Considerado por alguns grupos de opinio como um dos alicerces do desenvolvimento sustentvel
e uma proteo contra o controle da tecnologia pelas grandes empresas, o princpio de precauo
tambm visto por outros como um obstculo ao progresso e uma tentativa de protecionismo.
A formalizao do princpio mediante uma estrutura jurdica, como a Lei de Biossegurana, assim
como o estabelecimento de normas, regras e procedimentos claros, a melhor maneira de gerenciar
o desenvolvimento tecnolgico, minimizando os riscos correspondentes.

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AS PGMs DE INTERESSE AGRONMICO


As PGMs atuais apresentam traos, inseridos como transgenes, que visam modificar suas propriedades
agronmicas e/ou melhorar suas qualidades nutricionais, industriais ou ambientais.
Poderiam escapar dos limites do plantio e suplantar as plantas silvestres, tornando-se invasoras?
Existe o precedente de plantas ornamentais se transformarem em pragas quando introduzidas,
inadvertidamente, em um ambiente novo: a lantana prolifera descontroladamente na Austrlia; o
kudzu, procedente do Japo, se espalha no sul dos Estados Unidos; e o rododendro, originrio da
Pennsula Ibrica, se multiplica na Inglaterra.
Alm da degradao ambiental devida ao desmatamento, jardinagem ou agricultura, para que
o cenrio se repetisse seriam necessrias vrias caractersticas hereditrias, que so sistematicamente
eliminadas como fatores indesejveis nas plantas cultivadas: dormncia da semente, plasticidade
fenotpica, crescimento indeterminado, florescimento e produo contnua de sementes etc.
Com o objetivo de reduzir o risco futuro de introduzir um gene que transforme uma planta normal
em praga, a FAO (Food and Agriculture Organization) estabeleceu uma srie de diretrizes, cumpridas
em 130 pases, que se aplicam tambm a insetos, bactrias e fungos. Nenhum dos cultivos
biotecnolgicos disponveis no mercado mostrou-se persistente ou invasor nos testes prvios a sua
comercializao ou no monitoramento posterior.
Diante da necessidade de mitigar os efeitos das mudanas climticas, espera-se que em um futuro
prximo sejam desenvolvidas plantas mais eficientes no uso do nitrognio e tolerantes salinidade. A
maior produtividade dos cultivos tambm necessria para conseguir mais alimentos sem aumentar
a rea plantada e, tambm, porque plantas de uso industrial podem ser exportadas, gerando divisas.
Os principais cultivos comercializados atualmente, conforme j dito, so a soja, o milho, o algodo
e uma variedade de colza denominada canola. As propriedades agronmicas modificadas so a
tolerncia a herbicidas, a resistncia a insetos, a resistncia a vrus, o contedo e a qualidade do leo,
a tolerncia seca etc.
A TOLERNCIA A HERBICIDAS
A LUTA CONTRA AS ERVAS DANINHAS
O crescimento das ervas daninhas no campo prejudicial por dois motivos: competem pelos mesmos
nutrientes e contaminam a colheita. Para elimin-las, o agricultor pode aplicar herbicida antes do
plantio, uma prtica que demanda o revolvimento prvio do solo, acelerando a eroso. Contudo, se
uma planta for tolerante a um herbicida de amplo espectro, bastar seme-la diretamente e aplicar o
herbicida depois da germinao, para eliminar as ervas daninhas.
Os cultivos tolerantes a herbicidas facilitam o plantio direto, um sistema no qual as sementes e os
fertilizantes so depositados em sulcos, reduzindo a eroso e a demanda de combustvel. Em vrios
pases, comercializam-se sementes transgnicas de soja, de milho, de algodo e de canola tolerantes
a herbicidas.
O herbicida no seletivo mais utilizado o glifosato, presente em vrios produtos comerciais, tais
como Roundup, Buccaneer, Rodeo, Accord etc. Sua ao inibitria se aplica a sistemas
enzimticos dos vegetais, ausentes em animais e seres humanos. Considerado pouco txico em caso
de exposio oral ou de inalao, o glifosato degradado rapidamente no ambiente.
As sementes de plantas tolerantes ao glifosato so comercializadas com o nome de
RoundupReady (RR, Monsanto). As vendas geminadas de sementes e herbicida encerraram-se no ano
2000, com o vencimento da patente do Roundup e o aparecimento no mercado de outras variaes
do produto, mais econmicas para o agricultor.

168

BIOTECNOLOGIA E AGRICULTURA

Outro herbicida utilizado o glufosinato, presente em outro grupo de produtos (Basta, Liberty,
Ignite etc.). As sementes tolerantes ao glufosinato so comercializadas com o nome LibertyLink por
BayerCropScience.
Glifosato e glufosinato no so os nicos herbicidas no mercado. Existem outras substncias, do
grupo das imidazolinonas, cuja tolerncia tem sido transferida soja Cultivance, um
empreendimento conjunto da Embrapa e da Basf.
O GLIFOSATO
No Brasil, o glifosato no est limitado exclusivamente agricultura, sendo utilizado, desde 1978, em
reas urbanas e na manuteno de estradas e ferrovias, sem evidncias de impactos no meio
ambiente.
Em 2015, o IARC (do ingls, International Agency on Research on Cancer), uma extenso
semiautnoma da Organizao Mundial da Sade, reclassificou o glifosato como provvel agente
carcinognico, no grupo 2 A. Esta categoria inclui, alm do malation e da acrilamida, o chimarro
quente, a malria, a carne vermelha, a disrupo dos ritmos circadianos e as emisses de frituras em
alta temperatura.
Das quatro agncias encarregadas de avaliar o glifosato, o IARC foi a nica a encontrar essa
associao. Outras agncias manifestaram seu desacordo e questionaram a reclassificao. Nos
Estados Unidos, a EPA (do ingls, Environmental Protection Agency) continua classificando o glifosato
na categoria E, que rene substncias que apresentam evidncias de ausncia de carcinogenicidade
em seres humanos. Na Unio Europeia, a EFSA (do ingls, European Food Safety Agency) considera
improvvel que o glifosato represente um risco para os seres humanos e no justifica sua classificao
como agente carcinognico potencial.

A APARIO DE PLANTAS SILVESTRES RESISTENTES AO GLIFOSATO


Ao diminuir a aplicao dos agroqumicos tradicionais, os cultivos biotecnolgicos favorecem a
conservao dos recursos ambientais. Sua vantagem sobre as plantas silvestres depende da presena
de um agente seletivo como, por exemplo, um herbicida ao qual elas sejam tolerantes. Sem o
herbicida, ou fora de seu alcance, as PGMs no tm nenhuma vantagem sobre as plantas silvestres
nem conseguem competir com elas em ambientes naturais.
Contudo, o fluxo gnico em sentido contrrio preocupante, porque, tornando-se tolerantes a
herbicidas, as plantas silvestres podem competir no terreno com as plantas cultivadas e comportar-se
como ervas daninhas. Admite-se que a apario de resistncia em pelo menos 34 espcies poderia ter
sido causada pela transferncia do gene correspondente, das plantas cultivadas s plantas silvestres.
No Brasil, h relatos sobre resistncia ao glifosato no azevm (Lolium multiflorum) e na buva (Conyza
bonariensis e C. canadiensis). Por outro lado, algumas plantas so naturalmente resistentes ao
glifosato como, por exemplo, a trapoeraba (Commelina benghalensis).
A apario de plantas resistentes ao glifosato, que o herbicida mais utilizado no mundo, est
sendo acompanhada com ateno. Estima-se que, depois de 10 a 20 anos de uso intenso, seja
inevitvel o aparecimento de plantas silvestres tolerantes. Contudo, o agricultor pode retardar a
apario dessa tolerncia, mediante algumas aes preventivas: rotar as culturas, evitar o uso repetido
do mesmo herbicida, aplicar as doses adequadas em condies meteorolgicas propcias, acrescentar
outras modalidades de controle etc.

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A RESISTNCIA A INSETOS
A TRANSFERNCIA DA TOXINA Bt S PLANTAS
Os insetos causam quebras de safra, estimadas em 20 a 40% da produo agrcola. Contudo, o combate
mediante o uso de agrotxicos tem causado problemas no ambiente e na sade humana, sendo,
portanto, necessrio encontrar mtodos alternativos de luta.
H mais de 50 anos que os agricultores convencionais e orgnicos utilizam um inseticida biolgico
para proteger suas colheitas. Trata-se da toxina produzida por um microrganismo do solo, o Bacillus
thuringiensis, incua para o ser humano e fatal para os insetos. Uma vez ingerida pelas lagartas, a
toxina age no sistema digestrio, matando-as em poucos dias. O produto comercial vendido com os
nomes de Dipel, Thuricida ou Vectobac.
Uma vez transferido o gene codificador da toxina do Bacillus thuringiensis s plantas, estas passam
a produzi-la diretamente. Existem diversas verses do gene Cry que codificam toxinas muito
especficas, efetivas em diferentes ordens de insetos. Algumas variedades (YieldGard, Agrisure)
diferem pela posio do transgene, o que caracteriza eventos diferentes e permite a comercializao
com nomes diferentes, como algodo Bollgard e milho Yieldgard, da Monsanto, ou milho Agrisure,
da Syngenta.
As plantas Bt demandam menos pesticidas e reduzem as emisses de carbono, ao diminuir o uso
de combustvel. Outra das vantagens das variedades Bt sobre as variedades convencionais est na
menor quantidade de micotoxinas (aflatoxina e fumonisina) perigosas para a sade humana, em
funo da menor contaminao por fungos dos ferimentos causados pelos insetos.
AS PRTICAS AGRONMICAS
Todo inseticida age como agente seletivo, sendo inevitvel a apario de insetos resistentes. A fim de
evitar ou retardar a apario de larvas resistentes toxina do Bacillus thuringiensis, uma possibilidade
utilizar variedades Bt que produzam uma quantidade de toxina maior que a dose aplicada
habitualmente como inseticida.
Outra possibilidade mais sutil o plantio de variedades convencionais (no Bt) em espaos
predeterminados onde os insetos no entram em contato com a toxina. Em vez de tentar eliminar o
inseto, diminui-se a infestao mediante uma presso seletiva mais frouxa, que mantm a
sensibilidade ao inseticida em uma proporo considervel da populao. Hoje, a manuteno de
refgios nas lavouras de plantas Bt (algodo, milho) uma prtica bem estabelecida para o controle
de insetos.
O gerenciamento dos riscos envolve algumas medidas complementares que visam amortecer o
impacto eventual do fluxo gnico a outros cultivos. Um gene que confere tolerncia a um herbicida
no ser vantajoso em ausncia do mesmo. Mas o que ocorreria se esse gene conferisse algum valor
adaptativo, tal como a produo de um inseticida?
O risco de polinizao cruzada depende da espcie, sendo mais fcil de acontecer no milho, em que
o plen se dispersa levado pelo vento, do que na soja ou no trigo, plantas com autofecundao. A
presena de espaos ou corredores de isolamento evita a disseminao de plen transgnico para as
variedades silvestres e, tambm, para as convencionais semeadas nos campos vizinhos, evitando
prejuzos significativos para o agricultor que as comercializa.
O tamanho dos espaos ou corredores de isolamento depende das caractersticas reprodutivas da
espcie em questo e de fatores ambientais, como o vento. No caso do milho, por exemplo, estima-se
que o risco de polinizao cruzada entre os cultivos diminui, de 1% a zero, quando a distncia entre
ambos aumenta de 100 a 1.000 ps.

170

BIOTECNOLOGIA E AGRICULTURA

A VIDA SILVESTRE
A probabilidade de ocorrer fluxo gnico aumenta se houver, na proximidade, espcies silvestres
compatveis. Por isso, devem-se extremar os cuidados em relao ao cultivo de plantas geneticamente
modificadas nos lugares onde existam variedades silvestres aparentadas, tais como a batata no Peru,
o milho no Mxico, o arroz na ndia, a soja na Coreia e na China. No Brasil, onde existem variedades
silvestres do algodo, a CTNBio delimitou preventivamente zonas de excluso para o cultivo de algodo
biotecnolgico.
Em relao vida silvestre, apesar do estardalhao causado oportunamente pela notcia de que as
borboletas monarcas seriam afetadas pelo contato com plen de plantas de milho Bt, os prprios
autores do estudo declararam que era uma experincia laboratorial, desenvolvida em condies
diferentes das de um ambiente natural.
A RESISTNCIA A VRUS
Assim como a vacinao, a resistncia a vrus est baseada na transferncia ao hospedeiro de uma
parte do genoma viral. A produo em excesso da protena de revestimento viral, por exemplo, inibe
a sntese de seu material gentico. Esta tecnologia foi utilizada para erradicar viroses da batata, da
beterraba, do pepino, do tomate, da couve-flor e do melo.
Os produtos hortcolas tm recebido menos ateno que os cereais e as leguminosas, em parte
devido resistncia do consumidor e, tambm, porque o custo da construo de uma planta
transgnica para cultivos com pequena produo no interessante economicamente. Contudo, as
variedades de papaia resistente a vrus (UH Rainbow, UH SunUp), comercializadas nos Estados Unidos,
salvaram o estado do Hava de um desastre econmico.
No Brasil, a CTNBio autorizou em 2011 o cultivo do feijo tolerante ao vrus do mosaico dourado,
desenvolvido pela Embrapa, por tecnologia do iRNA. O vrus transmitido pela mosca branca Bemisia
tabaci e causa a perda de 40 a 85% da safra, uma quantidade de feijo que poderia alimentar entre 9
milhes a 18 milhes de pessoas adultas. Esse feijo deve ser comercializado a partir de 2016.
A COEXISTNCIA ENTRE PLANTAS CONVENCIONAIS E PGMs
Todos os sistemas agrcolas exercem algum impacto sobre o meio ambiente. No entanto, uma
agricultura sustentvel pode minimizar os efeitos negativos da produo agrcola, restaurando a
fertilidade e limitando a eroso da terra.
Algumas prticas agrcolas j so compartilhadas pelas diversas modalidades agrcolas (orgnica,
industrial ou de preciso), incluindo a rotao de culturas, a adubao verde, o manejo de pragas e de
nutrientes, o plantio direto com uma cobertura na superfcie do solo etc. Outras so especficas, como,
por exemplo, a proibio para os produtores orgnicos de utilizar sementes geneticamente
modificadas ou de cultivar terrenos onde previamente tenham sido plantadas PGMs.
Cultivos convencionais e biotecnolgicos ocupam diferentes faixas de mercado e crescem em
funo das oportunidades econmicas. A proporo de variedades convencionais e biotecnolgicas
varia nos principais cultivos industriais, que so a soja, o algodo, o milho e a canola. No Brasil a CTNBio
exige um isolamento mnimo de 400 metros, ou de 40 dias, entre os plantios de milho GM e milho
convencional.
A contaminao de um cultivo convencional por um cultivo biotecnolgico acarreta perdas
considerveis para o produtor rural. Nos Estados Unidos, a contaminao de cultivos convencionais de
arroz e milho por cultivos geneticamente modificados custou 1 bilho de dlares s empresas
produtoras de sementes.

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Medidas de proteo so tomadas, envolvendo o distanciamento dos cultivos e a manuteno de


faixas de excluso de diferente tamanho, segundo as caractersticas da fecundao, autopolinizao
ou polinizao cruzada. Testes genticos e imunolgicos permitem identificar a presena de
organismos geneticamente modificados em uma carga de cultivos convencionais. O objetivo dessas
medidas reduzir a presena de sementes adventcias a um limite comercialmente aceitvel (0,9%).
Os modelos de regulao dos cultivos tradicionais, orgnicos e biotecnolgicos so considerados
de ndole econmica, porque do ao agricultor a possibilidade de escolher a modalidade que melhor
lhe convier. No envolvem biossegurana, porque esta analisada no momento da aprovao da
variedade biotecnolgica, uma vez satisfeitas as normas legais.
Nos pases onde o cultivo de OGMs est permitido, os agricultores tm a opo de semear cultivos
orgnicos, convencionais e biotecnolgicos sempre que sejam respeitadas as medidas de coexistncia.
Um modelo de regulao, baseado em normas de coexistncia, vem sendo desenvolvido na
Espanha desde 2005.
O CULTIVO DE OUTROS TIPOS DE PGMs
PGMs DE INTERESSE NUTRICIONAL
Uma segunda leva de plantas transgnicas contempla a modificao das qualidades das plantas, isto
, das propriedades que interessam ao consumidor como, por exemplo, o melhoramento da qualidade
nutricional, a reduo de alrgenos, modificaes do tempo de conservao e das caractersticas
organolpticas, a adequao ao processamento industrial dos leos e amidos etc.
Em 1974, a variedade Tower de Brassica napus recebeu o nome de canola (do ingls canadian oil,
low acid). Trata-se da colza, uma planta oleaginosa que a modificao gentica tornou comestvel, ao
diminuir o teor de cidos graxos saturados e a quantidade de glucosinolato. Modificaes posteriores
originaram numerosas variedades que diferem na composio dos cidos graxos, sendo algumas delas
tambm tolerantes a herbicidas.
Entretanto, o principal marco no desenvolvimento deste tipo de transgnicos o arroz com
vitamina A (Golden Rice). A carncia de vitamina A decorrente de uma dieta baseada exclusivamente
no arroz causa a cegueira irreversvel e a morte de milhes de crianas na sia.
A insero de dois genes de narciso e um gene bacteriano em uma variedade de arroz indica deu
origem a um gro amarelado contendo -caroteno, que um dos precursores da vitamina A.
Considerado um empreendimento humanitrio, vrias empresas cederam, nos pases em
desenvolvimento, os seus direitos sobre suas patentes relacionadas com a construo do arroz
dourado.
Espera-se que sejam produzidas plantas com outras alteraes no teor de nutrientes: arroz
contendo ferro, milho enriquecido com os aminocidos lisina e triptfano e batata com alto teor de
protenas com metionina e lisina. A soja Vistive apresenta baixo teor de cido linolnico, o que torna
o leo mais estvel e dispensa a hidrogenao, uma fonte de gordura trans. Este leo de soja utilizado
como ingrediente de biscoitos (Cargill e Kelloggs).
A China desenvolveu e liberou recentemente o milho com fitase para integrar as raes animais.
Este milho permitir a assimilao de fosfatos pelos sunos, melhorando a produtividade do rebanho
e diminuindo a poluio ambiental.
PGMs PRODUTORAS DE MEDICAMENTOS
Existe uma terceira leva de plantas biotecnolgicas desenvolvidas especialmente para desempenhar o
papel de fbricas biolgicas, produzindo frmacos, vacinas e plsticos. Esto em andamento os testes

172

BIOTECNOLOGIA E AGRICULTURA

de campo com alfafa, milho, arroz, tabaco, banana e batata.


Para evitar a contaminao acidental dos alimentos, essas plantas tero que ser cultivadas em
confinamento e processadas separadamente das plantas comuns. Formas alternativas de evitar a
disseminao do transgene no plen esto sendo desenvolvidas, tais como sua insero no DNA dos
cloroplastos. As protenas extradas e purificadas sero utilizadas pela indstria farmacutica. Uma
regulao estrita dever controlar o cultivo, o transporte e a distribuio destas plantas.
Os sistemas que poderiam tornar estreis as plantas de interesse agronmico ou nutricional
despertaram uma forte reao contrria na opinio pblica (sistemas de proteo tecnolgicos ou
TPSs, do ingls technology protection systems; tecnologias de uso gentico restrito ou GURTs, do
ingls, genetic use restriction technologies). No entanto, bem possvel que voltem a ser considerados
em relao s plantas produtoras de medicamentos.
O AGRONEGCIO
AS PRIMEIRAS EMPRESAS PRODUTORAS DE SEMENTES
Nos pases do continente africano e de parte da sia, em que a agricultura a principal fonte de
alimentos, os pequenos agricultores dependem das sementes. Na poca da colheita, eles separam uma
parte e a conservam para o plantio do prximo ano.
Devido mecanizao do campo, nos pases desenvolvidos, a proporo da populao dedicada s
tarefas agrcolas bem menor. A agricultura de subsistncia cede lugar a um enorme complexo
agroindustrial, que integra outras atividades, como a venda de insumos (maquinarias, produtos
qumicos, sementes etc.) e a transformao e distribuio de produtos.
A produo de sementes como atividade lucrativa remonta ao ano 1774 e pequena loja da famlia
Vilmorin, na Frana. Em 1874, Henry de Vilmorin obtm o primeiro trigo hbrido (Dattel),
comercializado em 1883 e cultivado at hoje. Nos Estados Unidos e no Canad, as primeiras empresas
a comercializarem os milhos hbridos surgem a partir de 1920.
As construes genticas conferem vigor (heterose) s plantas hbridas, mas foram o agricultor a
comprar novas sementes, ano aps ano. A transgnese no inviabiliza a utilizao de sementes para o
ano seguinte. No entanto, as novas tecnologias inseridas no gro devem ser pagas mediante
complexos sistemas de royalties s empresas detentoras das patentes correspondentes.
OS GIGANTES GNICOS
Logo depois da crise do petrleo da dcada de 1980, as grandes empresas transnacionais produtoras
de agrotxicos e fertilizantes qumicos entraram na rea agrcola. Uma das razes que o mercado de
sementes tem uma margem de lucro maior; a outra que leva menos tempo desenvolver uma planta
geneticamente modificada que um produto qumico novo.
Vrios ciclos de fuses caracterizaram um processo de concentrao e consolidao em que
centenas de pequenas empresas foram absorvidas por enormes conglomerados, produtores de
agroqumicos e de sementes, com ramificaes na indstria farmacutica. Na linha de frente das novas
tecnologias, estas empresas concentram um enorme poder que malvisto pelo pblico.
Denominadas Gigantes Gnicos (do ingls, Gene Giants), as principais empresas produtoras de
sementes so Monsanto, Dupont (Pioneer), Dow AgroSciences nos Estados Unidos, Syngenta na Suia,
Limagrain (Vilmorin) na Frana, Bayer CropScience na Alemanha e Sakata no Japo. Estima-se que, em
2020, o mercado de sementes biotecnolgicas ser de 42 bilhes de dlares comerciais, em um
mercado global de sementes comerciais de 73 bilhes de dlares.

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A CADEIA PRODUTIVA DA SEMENTE


Cada pas desenvolve variedades adaptadas a seus solos e condies climticas. Uma vez aprovadas e
registradas, esses cultivares podero ser disponibilizados para os agricultores. O processo de
amplificao do nmero de sementes, estritamente regulamentado, contempla vrias etapas de que
participam diferentes entidades do setor pblico ou privado (Figura 13.4).
No caso da caracterstica transgnica, esta precisa da aprovao das instncias legais competentes,
antes de ser transferida para os cultivares locais e passar por todo o processo de multiplicao,
certificao e registro, at chegar ao agricultor e este dar incio ao plantio.
A cadeia produtiva da semente envolve inventores e obtentores, multiplicadores, produtores e
comerciantes de sementes e agricultores. A qualidade das sementes estabelecida pela legislao e
pelas agncias de certificao de sementes, que garantem ao comprador sementes dentro dos
padres.
PATENTES E INOVAO TECNOLGICA
No Brasil, a produo de mudas e sementes oriundas do melhoramento clssico est regulada pela Lei
de Proteo de Cultivares (n. 9.456/97); o produtor rural que compra uma semente paga pelo
germoplasma desse cultivar.
A insero de um transgene considerada um evento e demanda a aprovao das autoridades
correspondentes. Em 2010, estimava-se que o processo de insero de um evento demorava 13 anos,
a um custo de 136 milhes de dlares.
A patente uma forma de proteo da inovao tecnolgica, regulada pela Lei da Propriedade
Industrial (n. 9.279/96) que, alm de lucro, permite empresa o ressarcimento do investimento e o
financiamento de novas pesquisas. O produtor rural que compra uma semente geneticamente
modificada paga pelo germoplasma e pela propriedade intelectual do produto. Organismos vivos no
podem ser patenteados.
----------------FIGURA 13.4. Os elos que integram a cadeia produtiva da semente

Estado (Institutos de pesquisa, universidades)


Inventores / Obtentores

Empresas nacionais (sociedades, cooperativas e empresas


familiares)
Empresas internacionais

Multiplicadores

Diversa estrutura empresarial

Produtores e comerciantes

Diversa estrutura empresarial

Agricultores

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BIOTECNOLOGIA E AGRICULTURA

O produtor rural pode pagar os royalties ou taxa tecnolgica (TT) na compra da semente. Quando as
sementes biotecnolgicas no tm as limitaes dos hbridos, ele pode optar por guardar legalmente
parte do produto da safra para o prximo plantio, pagando um percentual antes da entrega na moega.
Se ele no salvar as sementes de acordo com a lei, ser cobrado na entrega do gro.
As patentes tm uma durao limitada; entre as que j expiraram esto a do herbicida Roundup
(2000) e a da primeira variedade RR1 de soja RoundupReady (2015). Algumas organizaes se
manifestaram a favor de uma verso pblica sem royalties, algo assim como um genrico (Open Source
Seed Iniciative), mas a inovao est nas mos das empresas produtoras de sementes, que logo lanam
no mercado produtos cada vez mais eficientes, para substituir os que perderam a proteo.
A novidade no mercado so as plantas piramidadas, que combinam vrios eventos, tais como a
tolerncia a dois herbicidas, a tolerncia herbicida e a resistncia a insetos, ou a resistncia a dois
tipos de insetos, um que ataca a raiz e outro a parte superior da planta.
Seu nmero aumenta a cada dia. A soja RR2 Bt, que rene a tolerncia herbicida e a resistncia a
insetos, substituiu a soja RR1. O milho Genuity SmartStaxTM (Monsanto, DowAgroSciences), por
exemplo, rene oito genes para o controle de pragas acima e abaixo do solo, e a tolerncia a herbicidas
para o controle de plantas daninhas. Na frica, o projeto WEMA (do ingls, Water Efficiency for Africa)
espera dispor, em 2017, de um milho Bt com eventos piramidados de resistncia a insetos e tolerncia
sequia.
A ADOO DOS CULTIVOS BIOTECNOLGICOS NO MUNDO
Em 1996, Estados Unidos, China, Argentina, Canad e Austrlia iniciaram o cultivo de PGMs em 1,7
milho de hectares.
O International Service for the Aquisition of Agri-Biotech Applications (ISAAA) uma organizao
internacional que divulga anualmente os dados correspondentes adoo dos cultivos biotecnolgicos
no mundo. Segundo o ISAAA, em 2015, 28 pases semearam com PGMs uma superfcie de 179,7
milhes de hectares, liderados por Estados Unidos, Brasil, Argentina, ndia e Canad.
Dos 28 pases que semearam PGMs, 8 so industrializados e 20 em vias de desenvolvimento. Dentre
os pases que no permitem o cultivo de PGMs, 39 os importam (Tabela 16.1). O trao dominante foi
a tolerncia herbicida e os principais cultivos soja, milho, algodo e canola, seguidos por beterraba
sacarina, alfafa e papaia.
Mais de 90% dos 18 milhes de agricultores que plantaram sementes biotecnolgicas so pequenos
produtores rurais, especialmente na China, na ndia, nas Filipinas e na frica do Sul. Os cultivos
biotecnolgicos possibilitaram o aumento da produo agrcola e melhoraram as condies
econmicas desses agricultores.
Nos pases onde a mo de obra agrcola est constituda principalmente por mulheres, os cultivos
biotecnolgicos melhoraram suas condies de vida, ao permitir que elas dedicassem mais tempo ao
cuidado das crianas ou a outras atividades. Os problemas de sade causados pela contaminao
ambiental com agrotxicos diminuram em funo de uma reduo de 14% na aplicao de inseticidas,
sendo que em alguns casos essa diminuio teria chegado a 50% (China, Argentina).
Com a liberao da comercializao do arroz Bt na China e do feijo resistente a vrus no Brasil,
inicia-se uma nova etapa que contempla as principais fontes de alimento locais. Encontram-se em
andamento vrios estudos, sobre o gro de bico na frica, a berinjela na ndia, o milho resistente
seca nos Estados Unidos e na frica subsaariana.
OS ESTADOS UNIDOS E A UNIO EUROPEIA
Nos Estados Unidos, trs agncias controlam e regulamentam o uso das novas tecnologias genticas:
USDA (United States Department of Agriculture), EPA (Environmental Protection Agency) e FDA (Food

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M.A.MALAJOVICH - BIOTECNOLOGIA (2016)

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and Drug Administration). Embora a resistncia aos cultivos transgnicos seja muito baixa, sendo
plenamente adotados desde 1996, cresce em alguns estados um movimento de oposio que pede a
rotulagem.
Na Unio Europeia, a resistncia s PGMs muito alta. Em 1999, uma moratria suspendeu o
cultivo de novas variedades transgnicas, assim como a comercializao de seus produtos. No atingiu
algumas variedades autorizadas anteriormente para cultivo, importao ou utilizao na produo de
alimentos ou de raes.
Em 2003 foram estabelecidas normas de rotulagem e de rastreamento de traos transgnicos e
com a implantao de diretrizes para o cultivo de plantas transgnicas, de maneira a minimizar a
contaminao dos campos de cultivos orgnicos e convencionais.
Recentemente o Conselho da Unio Europeia estabeleceu que cada Estado poder interditar um
cultivo geneticamente modificado com base em consideraes ticas ou socioeconmicas, sem
invocar argumentos cientficos. Apesar da hostilidade das autoridades do Conselho Europeu, h um
bom nmero de organizaes favorveis ao cultivo de plantas geneticamente modificadas: 33 no Reino
Unido, 23 na Itlia, 16 na Espanha e 11 na Alemanha.
ISRAEL
Israel no assinou o Protocolo de Cartagena e no restringe a importao de PGMs nem de seus
derivados. Desenvolve pesquisas biotecnolgicas sobre tomate, batata, eucalipto, soja, algodo,
milho, morango, banana e flores. Os testes de campo devem ser autorizados pelo PPIS (do ingls, Plant
Protection and Inspection Services of Israel).
Encontra-se em preparao uma regulamentao que exige a rotulagem dos produtos com mais de
0,9% de ingredientes derivados de PGMs. Os produtos sem DNA ou protena derivada de uma OGNM
no sero rotulados.
OS PASES DE AMRICA LATINA
Na Amrica Latina (Brasil, Argentina, Paraguai, Uruguai, Bolvia, Colmbia, Chile, Costa Rica, Cuba e
Honduras), os principais cultivos biotecnolgicos so a soja, o milho e o algodo (Tabela 16.1). Embora
o desenvolvimento das sementes dependa geralmente do setor privado, em vrios pases (Argentina,
Brasil, Mxico, Colmbia) o setor pblico comeou a gerar suas prprias variedades, respondendo
demanda local.
Na Argentina, os primeiros exemplos so a soja tolerante sequia da empresa Indear e a batata
resistente vrus, desenvolvida pela Tecnoplant, uma empresa do grupo Sidus. No Brasil, o feijo
resistente a vrus desenvolvido pela Embrapa, e a soja tolerante ao glufosinato, fruto de uma
colaborao entre a Embrapa e a Basf.
Os pases da Amrica Latina contam com uma comunidade acadmica de alto nvel cientfico e
tecnolgico, ativa nas universidades e nos centros de pesquisa, com empresas de tradio histrica na
difuso da tecnologia agropecuria e, em vrios casos, com condies econmicas limitadas pelas
sucessivas crises polticas. Em ambos os pases, numerosas empresas privadas ocupam lugares de
destaque em diferentes setores do mercado biotecnolgico. A existncia de convnios e programas
de intercmbio cientfico tende a elevar o nvel das atividades cientficas e tecnolgicas.
Ao longo dos primeiros quinze anos de implantao das novas tecnologias agrcolas, cada pas seguiu
sua prpria trajetria at estabelecer as normas legais que garantem o progresso em condies
seguras.
FRICA SUBSAARIANA
O desenvolvimento da agricultura africana permitiria reduzir a pobreza e aumentar a segurana dos
alimentos. At o momento, frica do Sul, Burkina Faso e Sudo comercializam o algodo resistente a
insetos e a soja e o milho tolerantes ao glifosato. Em Burkina Faso, Qunia, Moambique, Nigria,

176

BIOTECNOLOGIA E AGRICULTURA

frica do Sul, Tanznia e Uganda a comunidade cientfica conta com o apoio de organizaes
internacionais para desenvolver cultivos de interesse local: milho, batata-doce, mandioca, arroz, sorgo
e banana. Os traos principais so a resistncia a pragas, a tolerncia sequia e salinidade e outras
condies, como a biofortificao em vitamina A, zinco e ferro.
Contudo, existem dificuldades devido presso cultural da Unio Europeia e, tambm, falta de
regulamentaes locais que possibilitem avanar nos testes de campo.
CHINA
Com uma populao de mais de 1,3 bilho de habitantes e graves problemas ambientais, a China estar
investindo 4 bilhes de dlares em biotecnologia, at 2020.
A China o maior importador de alimentos do mundo, de modo que parte das pesquisas est
relacionada com o arroz, o milho, o trigo e a soja. Em relao ao meio ambiente, a adoo do algodo
BT por 70% dos agricultores permitiu em 5 a 8 anos a reduo do uso de pesticidas em 50 a 60 %.
AS NOVAS TECNOLOGIAS
Nos ltimos 20 anos, diferentes pases tiveram uma atitude que variou entre a rejeio absoluta e a
aceitao dos cultivos geneticamente modificados. Atualmente, 271 organizaes e instituies
cientficas reconhecem a segurana dos cultivos geneticamente modificados e seus benefcios
potenciais.
Tanto o setor pblico como o setor privado de vrios pases tm capacidade para utilizar a
tecnologia em benefcio da sociedade, colocando no mercado cultivos adaptados s condies locais,
uma vez satisfeitos os requerimentos e as regulamentaes determinados pelas autoridades
competentes.
As novas tecnologias de edio gnica j esto sendo usadas: na China, para obter um trigo
resistente a fungo e um arroz mais produtivo; no Reino Unido, para produzir uma variedade de cevada
resistente seca. O primeiro produto comercializado a SU Canola, resistente ao herbicida
sulfoniltiouria. Contudo, ainda cedo para prever qual ser o destino das novas variedades, porque
sua implantao depende do processo regulatrio a ser adotado.
-------------TABELA 16.1. As plantas geneticamente modificadas no mundo (Dados do ISAAA, maro de 2016)
A. Os cultivos de plantas geneticamente modificadas
Abbora (Cucurbita pepo), Alfafa (Medicago sativa), Algodo (Gossypium hirsutum L.), Ameixa (Prunus domestica), Arroz
(Oryza sativa L.), Batata (Solanum tuberosum L.), Berinjela (Solanum melongena), Beterraba sacarina (Beta vulgaris), Canade-acar (Saccharum sp), Canola argentina (Brassica napus), Canola polonesa (Brassica rapa), Chicria (Cichorium intybus),
Choupo (Populus sp.), Cravo (Dianthus caryophyllus), Eucalipto (Eucalyptus sp.), Feijo (Phaseolus vulgaris), Grama Creeping
Bentgrass (Agrostis stolonifera), Linho (Linum usitatissumum L.), Ma (Malus x Domestica), Melo (Cucumis melo), Milho
(Zea mays L.), Papaia (Carica papaya), Petnia (Petunia hybrida), Pimento doce (Capsicum annuum), Rosa (Rosa hybrida),
Soja (Glycine max L.), Tabaco (Nicotiana tabacum L.), Tomate (Lycopersicon esculentum), Trigo (Triticum aestivum).
B. Pases que pararam de plantar cultivos geneticamente modificados
Pases
(N0 de eventos aprovados)
Egito (1)
Indonsia (15)
Ir (1)
Unio Europeia*** (86)

Cultivos geneticamente modificados


Milho.
Cana de acar, milho, soja.
Arroz.
Algodo, batata, beterraba sacarina, canola argentina, cravo, milho, soja.

(***) Bulgria, Frana, Alemanha, Polnia, Sucia

177

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C. Pases que plantam cultivos geneticamente modificados.


Pases
(N0 de eventos aprovados)
frica do Sul (67)
Argentina (40)
Austrlia (107)
Bangladesh (1)
Bolvia (1)
Brasil (50)
Burkina Faso (1)
Canad (165)
Chile (3)
China (60)
Colmbia (73)
Costa Rica (15)
Cuba (1)
Estados Unidos de Amrica
(190)
Filipinas (88)
Honduras (8)
ndia (11)
Mxico (158)
Myanmar (1)
Paquisto (2)
Paraguai (20)
Sudo (1)
Unio Europeia*(86)
Uruguai (17)
Vietn (6)

Cultivos geneticamente modificados


Algodo, arroz, canola argentina, milho, soja.
Algodo, milho, soja.
Alfafa, algodo, arroz, batata, beterraba sacarina, canola argentina, cravo, milho, rosa, soja, trigo.
Berinjela.
Soja.
Algodo, eucalipto, feijo, milho, soja.
Algodo.
Abbora, alfafa, algodo, arroz, batata, beterraba sacarina, canola argentina, canola polonesa, linho,
ma, milho, papaia, soja, tomate.
Canola argentina, milho, soja.
Algodo, arroz, beterraba sacarina, canola argentina, choupo, milho, papaia, petnia, pimento doce,
soja, tomate.
Algodo, arroz, beterraba sacarina, cravo, linho, milho, rosa, soja, trigo.
Algodo, soja.
Milho.
Abbora, alfafa, algodo, ameixa, arroz, batata, beterraba sacarina, canola argentina, chicria, grama,
linho, ma, melo, milho, papaia, rosa, soja, tabaco, tomate, trigo.
Alfafa, algodo, arroz, batata, beterraba sacarina, canola argentina, milho, soja.
Arroz, milho.
Algodo, soja.
Alfafa, algodo, arroz, batata, beterraba sacarina, canola argentina, milho, soja, trigo.
Algodo.
Algodo.
Algodo, milho, soja.
Algodo.
Algodo, batata, beterraba sacarina, canola argentina, cravo, milho, soja.
Milho, soja.
Milho.

(*) Espanha, Portugal, Repblica Tcheca, Romnia, Eslovquia

D. Pases que importam cultivos geneticamente modificados


Pases
(N0 de eventos aprovados)
Coreia do Sul (138)
Federao Russa (23)
Japo (214)
Malsia (22)
Noruega (11)
Nova Zelndia (92)
Panam (1)
Singapura (24)
Suia (4)
Tailndia (15)
Taiwan (117)
Turquia (32)
Unio Europeia**(86)

Cultivos geneticamente modificados


Alfafa, algodo, batata, beterraba sacarina, canola argentina, milho, soja.
Arroz, batata, beterraba sacarina, milho, soja.
Alfafa, algodo, arroz, batata, beterraba sacarina, canola argentina, cravo, milho, papaia, rosa, soja.
Cravo, milho, soja.
Cravo.
Alfafa, algodo, arroz, batata, beterraba sacarina, canola argentina, milho, soja, trigo.
Milho.
Alfafa, algodo, beterraba sacarina, canola argentina, milho, soja.
Milho, soja.
Milho, soja.
Algodo, beterraba sacarina, canola argentina, milho, soja.
Milho, soja.
Algodo, batata, beterraba sacarina, canola argentina, cravo, milho, soja.

(**) ustria, Blgica, Crocia, Chipre, Dinamarca, Estnia, Finlndia, Grcia, Hungria, Irlanda, Itlia, Letnia, Litunia, Luxemburgo, Malta,
Pases Baixos, Eslovnia, Reino Unido

178

C A P T U L O 14

BIOTECNOLOGIA
E CRIAO DE ANIMAIS

Das 148 espcies conhecidas de mamferos terrestres, onvoros ou herbvoros, que alcanam um peso
de 45 kg, somente 14 foram domesticadas. Em relao s restantes, o fracasso costuma ser atribudo
a seis razes: uma dieta que o homem no pode ministrar; crescimento lento e espaado (elefantes e
gorilas); tendncias agressivas (ursos e rinocerontes); relutncia a se reproduzir em cativeiro (pandas,
guepardos); falta de estruturas de liderana (antlope); tendncia ao pnico em lugares fechados ou
em presena de um predador (gazelas).
Seja como for, a criao de animais para a alimentao est limitada a um pequeno nmero de
espcies de mamferos, ruminantes (bovinos, ovinos, caprinos) e monogstricos (sunos, coelhos e
aves), de peixes, de crustceos e de mariscos. Tambm se criam animais para a prtica de esportes
(cavalos) e como companhia (gatos, cachorros, pssaros, peixes).
Os grandes estabelecimentos agrcolas praticam a cultura extensiva de gado (bovino, ovino,
caprino) em pradarias e pastagens, enquanto os menores tendem a investir em culturas intensivas de
altos rendimentos (gado leiteiro, aves, sunos e peixes), que degradam o ambiente.
A produo agrcola depende tambm de fatores econmicos e sociais. medida que melhora o
nvel de vida da populao, mudam os padres de consumo e, consequentemente, a atividade
agropecuria. Estima-se que, entre 1993 e 2020, os pases em desenvolvimento duplicaro o consumo
de carne. Pequenas empresas familiares sero substitudas por outras de produo intensiva,
orientadas a satisfazer o mercado urbano; a criao de aves e sunos aumentar em detrimento da
criao de ruminantes. Essas mudanas exigiro maior eficincia na seleo, no gerenciamento das
empresas e nos cuidados com a alimentao e a sade dos animais.
Nos pases desenvolvidos, o objetivo primordial aumentar, ou manter, a quantidade de produtos
(leite, ovos, carne e l) e, simultaneamente, diminuir os custos. Em relao aos mtodos produtivos,
isso significa reduzir o nmero de animais, o trabalho humano e o impacto causado pelas doenas.
As biotecnologias inserem-se tanto na alimentao, como na conservao da sade dos animais,
possibilitando tambm o controle da reproduo e a acelerao da seleo gentica. Perspectivas
novas surgem com a utilizao dos animais como biorreatores, para a produo de frmacos.

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A NUTRIO DOS ANIMAIS


A NECESSIDADE DE RAES
A criao e engorda de gado de corte nas pastagens possvel em pases com grandes extenses
territoriais, tais como a Argentina, a Austrlia, o Brasil e a Nova Zelndia. O alimento bsico do gado
o capim, que cresce de maneira desigual ao longo das quatro estaes do ano. Nos perodos em que
falta capim deve-se suplementar a dieta do rebanho com feno (forragem dessecada), silagem
(forragem e gros fermentados), gros, concentrados e/ou resduos agroindustriais.
medida que a agricultura invade as reas de pastagem, a pecuria adota os regimes de
semiconfinamento ou confinamento, estabelecendo como objetivo primordial o aumento da
produtividade (gado leiteiro, aves e sunos). Parte dos cultivos de cereais (milho) e de leguminosas
(tortas de soja, algodo, colza e girassol) utilizada como rao, para suprir as necessidades proteicas
e energticas dos animais, sendo necessrios de 3 a 10 kg de gros para obter 1 kg de carne.
Como o valor nutricional dos gros varivel, acrescentam-se s raes alguns complementos
nutritivos. Vrios produtos industrializados fornecem um contedo de nutrientes equilibrado para as
necessidades dos animais, em funo de sua espcie, sua idade etc.
DE LIEBIG VACA LOUCA
Os suplementos nutritivos proteicos foram introduzidos em fins do sculo XIX. Em 1865, Liebig
inventou um procedimento industrial para transformar os restos dos animais em extrato e farinha de
carne. O primeiro era vendido como complemento para a alimentao humana; a segunda era utilizada
para fortificar as raes animais. Bem antes da Segunda Guerra Mundial, as raes dos ruminantes dos
pases desenvolvidos incluam farinha de carne, em uma proporo de 2 a 5%.
At 1973, a Europa importava gros para as raes animais. Quando condies climticas adversas
causaram uma grande quebra da safra de soja, os Estados Unidos embargaram o gro disponvel, para
garantir suas necessidades internas. Sem gros como fonte proteica das raes, a nica opo que
restou aos europeus foi a farinha de carne. Na tentativa de baratear ao mximo os custos das raes,
deixou-se de extrair a gordura com solvente e modificaram-se as condies de esterilizao.
A incluso de restos de animais doentes, inicialmente ovelhas com scrapie, uma doena espordica,
conhecida no Reino Unido desde 1732, pode ter contaminado as vacas e provocado o surto da doena
da vaca louca, uma variante da doena de Creutzfeldt-Jakob que afeta o homem, causando-lhe danos
neurolgicos graves. Esta variante ataca as pessoas jovens e se manifesta mais rapidamente.
Em 1988, a farinha de carne foi proibida na alimentao do gado bovino e ovino. A epidemia exigiu
o sacrifcio de boa parte dos rebanhos, no Reino Unido e outros pases da Europa, colocando em
discusso a composio das raes animais e mostrando a necessidade de aumentar a quantidade e a
qualidade dos suprimentos de gros e de plantas forrageiras.
VARIAES SOBRE A COMPOSIO DAS RAES
Alm da farinha de carne, outros produtos j foram utilizados como suplemento proteico, entre eles o
leite desnatado em p e a farinha de pescado, que hoje est sendo abandonada devido ao aumento
do preo, resultante da pesca excessiva e da diminuio dos cardumes.
Como fonte alternativa de protenas, a biomassa microbiana seca tem dado bons resultados.
Denominada SCP (do ingls, single cell protein), a protena unicelular pode ser obtida de diversas
fontes. As leveduras, como Saccharomyces cerevisiae, so um subproduto nas destilarias de lcool;
outras, como Candida utilis ou Torula, se multiplicam sobre os efluentes das indstrias de papel ou de

180

BIOTECNOLOGIA E CRIAO DE ANIMAIS

laticnios. A bactria Methylophilus methylotropus cresce sobre metanol, obtido a partir do gs do Mar
do Norte, originando uma SCP que comercializada, no Reino Unido, sob o nome de Pruteen.
O acrscimo de enzimas (proteases, celulases, amilases etc.) tende a aumentar a digestibilidade das
raes. Uma dieta baseada em gros tem o inconveniente de introduzir fsforo e outros nutrientes,
complexados ao cido ftico. No caso dos ruminantes, a flora microbiana do sistema digestrio
consegue disponibilizar parte do fsforo, mas isso no ocorre nos animais monogstricos como os
sunos, as aves e, inclusive, o homem. Os fitatos impedem a assimilao do fsforo, porm, a adio
da enzima fitase na rao melhora a assimilao dos nutrientes e diminui a quantidade de fsforo
excretado no ambiente, que uma das causas da eutrofizao dos cursos de gua.
A adio de antibiticos visa proteger as raes da ao bacteriana. J a adio de probiticos
procura modificar o ambiente gastrintestinal, estimulando a multiplicao de certos tipos bacterianos
em detrimento de outros.
A fitase produzida por fermentao microbiana e, na Europa, obrigatrio adicion-la s raes.
O mercado global de fitase de, aproximadamente, 500 milhes de dlares, 40% do qual situado na
China.
AS RAES TRANSGNICAS
A Unio Europeia exige o etiquetado de toda rao contendo mais de 0,9% de um Organismo
Geneticamente Modificado aprovado previamente, mas no considera necessrio rotular os alimentos
provenientes de animais alimentados com raes geneticamente modificadas (carne, ovos, leite).
O escndalo da vaca louca, seguido pelo caso dos frangos contaminados com dioxina, mostrou o
descaso dos produtores europeus em relao s raes animais. Isso explica a repercusso de alguns
trabalhos (A. Pusztai, 1998; G-E. Sralini, 2012), declarando ter encontrado alteraes do sistema
imune ou formao de tumores em ratos alimentados com batatas ou milho transgnico. Esses
trabalhos foram totalmente desqualificados pela comunidade cientfica, mas ainda so citados como
prova do perigo das raes e dos alimentos transgnicos.
As raes representam at 70% dos custos da criao de animais. Por ser um dos gargalos da
produo agrcola, toda tentativa de baratear as raes costuma ser assimilada rapidamente. Contudo,
devido aos escndalos precedentes e desconfiana da populao, a introduo de plantas
geneticamente modificadas teve que ser analisada cuidadosamente, em diversos tipos de animais. No
foram encontrados sinais de toxicidade da soja, da ervilha, do lupino, do algodo e da batata em ratos
nem da colza em coelhos. As caractersticas das carcaas, dos tecidos e das carnes no mudaram em
animais que receberam alimentos transgnicos.
Numerosos estudos, desenvolvidos em instituies de pesquisa e universidades, mostraram que,
tanto em relao composio qumica, como digestibilidade e ao valor nutritivo, as plantas
biotecnolgicas disponveis so substancialmente equivalentes s convencionais (no transgnicas).
Organizaes internacionais como FAO/WHO (Food and Agriculture Organization e World Health
Organization) consideram, desde 1991, que a ingesto de DNA segura, independentemente de ser
sua fonte transgnica ou no. As organizaes norte-americanas FDA (Food and Drug Agency), em
1992, e EPA (Environmental Protection Agency), em 2000, manifestaram-se no mesmo sentido.
Segundo a FASS (Federation of Animal Science Societies), as raes so digeridas normalmente
pelos animais estudados, sem que sejam detectados cidos nucleicos ou protenas de origem
transgnica na carne, no leite ou nos ovos. Este era um resultado esperado, porque, em funo dos
conhecimentos sobre digesto e absoro, tanto as protenas como o DNA so degradados durante o
processo digestivo.
Em alguns casos, em que as plantas tm as propriedades agronmicas modificadas, como, por
exemplo, o milho resistente a insetos (milho-bt), verifica-se uma reduo substancial de micotoxinas.

181

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Estas so muito perigosas, para os animais que ingerem os gros contaminados, porque causam
hemorragias, danos no fgado e nos rins, diarreias e cncer. Ao diminuir os ataques de insetos, h
menos leses que possibilitem a infeco e o crescimento dos fungos. Em consequncia, o milho
transgnico melhora a qualidade do alimento e a sade animal, especialmente dos monogstricos,
mais sensveis as micotoxinas que os ruminantes.
A aprovao do milho com fitase (Academia de Cincias Agrcolas da China, Origin Agritech Ltda.)
representa um marco importantssimo para a China.
Esto sendo estudadas plantas com maior digestibilidade, como uma alfafa transgnica com menos
lignina. Por outro lado, o melhoramento das plantas forrageiras tambm abre perspectivas
interessantes. Observou-se, por exemplo, aumento de peso e bom crescimento da l em ovelhas
alimentadas com lupino transformado geneticamente, para sintetizar uma protena de girassol com
alto contedo de metionina.
O MELHORAMENTO GENTICO DO GADO
Existem hoje mais de 5.000 raas de gado, resultantes de muitos anos de adaptao a diferentes
condies ambientais. O melhoramento gentico visa trs objetivos fundamentais: aumentar a
eficincia da converso do alimento para incrementar a taxa de crescimento corporal; acrescer a
produtividade (leite, ovos); modificar a composio da carcaa, aumentando a quantidade de protena
(carne e leite), em detrimento da gordura.
Diferentemente da rea de melhoramento vegetal em que, atravs da venda anual de sementes,
as grandes empresas conseguem recuperar rapidamente seus investimentos; a rea de melhoramento
animal tem um retorno mais lento porque existem perodos maiores entre uma gerao e outra.
Muitas das caractersticas selecionadas em animais mostram uma variao contnua, que, em vez
de responder a um gene nico, resulta da contribuio de vrios genes (herana polignica ou
quantitativa). Se estiverem situados em cromossomos diferentes, a seleo dos genes de interesse
acarretar genes vizinhos, que podem ser desfavorveis.
Os frangos do tipo broiler, por exemplo, tm-se transformado em um alimento comum e barato,
em contraste com anos atrs. Selecionados por 50 geraes, esses frangos crescem quatro ou cinco
vezes mais rpido que seus antepassados. Mas, no caminho, apareceram alguns efeitos deletrios, tais
como o aumento do teor de gorduras, a fertilidade baixa e a presena de anormalidades esquelticas.
Por outro lado, galinhas selecionadas como poedeiras desenvolveram osteoporose, ao desviar o
clcio do esqueleto para a construo da casca dos ovos. E os perus desenvolveram um tamanho tal
que no conseguem acasalar sem riscos, sendo necessrio proceder inseminao artificial. A seleo
assistida por marcadores moleculares obteve um grande sucesso na rea, justamente por amenizar a
dificuldade de se lidar com traos multignicos.
Ciclos de vida mais longos tornam mais lenta a recuperao dos investimentos de modo que, a
exceo da produo de frangos, o setor resulta menos atrativo para as grandes empresas privadas. A
distribuio do material gentico se encontra nas mos dos pecuaristas e de pequenos
empreendimentos privados, responsveis por mais de 80% da pesquisa e desenvolvimento na rea
agropecuria dos pases desenvolvidos.
O CONTROLE DA REPRODUO
O controle da reproduo dos animais permite a expanso rpida dos estoques, reduzindo os custos
de transporte de animais. O processo comea com a seleo dos pais (reprodutores e matrizes),
escolhidos pelas suas caractersticas genticas, relativas produtividade e sade (Figura 15.1).

182

BIOTECNOLOGIA E CRIAO DE ANIMAIS

Desde meados do sculo XX, pratica-se a inseminao artificial no gado bovino, ovino, caprino, porcino
e em aves (perus, frangos). A tcnica mais utilizada com o gado de leite que com o de corte, porque
o preo por cabea mais alto. Complementa-se a inseminao artificial com a sexagem prvia do
smen, a fim de escolher os espermatozoides que podero dar origem a fmeas.
O smen colhido de um reprodutor introduzido no tero das matrizes. Considerando que uma
nica ejaculao de um touro produz aproximadamente 100 doses de smen, que um animal chega a
produzir 4.000 doses por ano e que a eficincia da inseminao chega a 50%, o mtodo permite obter
aproximadamente 2.000 crias por reprodutor ao ano.
O desenvolvimento das tcnicas de criopreservao permite utilizar tanto o smen fresco como o
congelado, possibilitando, tambm, a conservao da biodiversidade de raas em perigo de extino.
Uma dose de smen custa a partir de 15 reais e, se for de qualidade comprovada, 20 reais. O touro
Bandido, que teve uma exitosa participao em uma novela de televiso e morreu prematuramente,
deixou smen congelado. Dele descendem os touros Zango, Matador e Carrancudo, que participam
em festas de rodeio por todo o Brasil.
Normalmente, uma vaca produz uma cria por ano. Tratada com hormnios para induzir uma
superovulao e inseminada artificialmente, essa vaca poder gerar simultaneamente cinco embries,
que sero colhidos mediante a lavagem do tero e transferidos a uma vaca receptora. A
criopreservao garante que 25 a 50% dos embries congelados possam originar animais vivos. Como
o processo todo (superovulao + inseminao + transferncia dos embries) pode ser repetido quatro
vezes por ano, apesar de algumas limitaes tcnicas, uma vaca parir 10 crias por ano.
-------------FIGURA 14.1. O Controle da reproduo em bovinos
O controle da reproduo dos animais domsticos depende de diversas tcnicas (superovulao, inseminao artificial, coleta
de ovcitos ou de embries, criopreservao, transplante de embries).
Vaca doadora

Touro reprodutor

Vaca doadora
Ovrios obtidos
nos matadouros

Superovulao

Smen

Congelamento

Inseminao artificial

Superovulao

Coleta dos
ovcitos

Coleta dos
ovcitos

Fecundao in vitro

Coleta dos embries

Desenvolvimento in vitro dos embries


Testes genticos
Congelamento

Transplante

Vacas receptoras

Transplante

Vacas receptoras

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Outra variante consiste em extrair os ovcitos das vacas superovuladas, ou dos ovrios de animais
sacrificados, procedendo a uma fecundao artificial, antes de reimplantar os embries nas vacas
receptoras. O nmero de embries tambm pode ser aumentado por bipartio, por
micromanipulao do blastcito com 64 a 128 clulas. A aplicao de testes genticos nos pais e nos
embries, antes de ser reimplantados, permite uma seleo apurada da descendncia.
Sendo a produo de alimentos um dos objetivos fundamentais da atividade agropecuria, os
modificadores metablicos so utilizados tanto para incrementar a produo, como para modificar a
relao entre carne e gordura, e, assim, diminuir o desperdcio.
AS NOVAS TECNOLOGIAS
MARCADORES MOLECULARES E SELEO GENMICA
O estudo do genoma dos animais domsticos fornece informaes para a seleo de alguns caracteres.
Em relao aos monognicos, o processo seletivo oferece poucas dificuldades, especialmente se o
gene responsvel por uma caracterstica de interesse estiver estreitamente associado a um
determinado marcador, que possa ser detectado facilmente por tcnicas moleculares. O processo se
complica com os caracteres polignicos, porque devem correlacionar-se os principais genes que
participam na variao do trao escolhido, e as sequncias no funcionais que, distribudas ao longo
do genoma, iro cumprir o rol de marcadores moleculares.
Centenas de marcadores foram identificados em diferentes espcies. Trata-se de SNPs e de
sequncias curtas de DNA repetidas um nmero varivel de vezes (mini ou microssatlites), que so
transmitidas de uma gerao a outra e podem ser identificadas por eletroforese. Alm de facilitar a
seleo, os marcadores permitem a determinao do parentesco (pedigree) e a identificao dos
animais, tanto no campo como nos produtos derivados.
J foram sequenciados vrios genomas de animais domsticos: frango (Gallus gallus), porco (Sus
scrofa), cachorro (Canus familiaris), vaca (Bos taurus), cavalo (Equus caballus), gato (Felis catus), coelho
(Oryctolagus cuniculus), peru-selvagem (Meleagris gallopavo), dromedrio (Camelus dromedarius),
abelha (Apis melfera), ovelha (Ovis aries), peixe-zebra (Danius raris) etc.
medida que um genoma completado, as tcnicas eletroforticas so substitudas por chips de
DNA (microarrays). O sequenciamento do genoma cria uma quantidade extraordinria de dados,
correlacionando marcadores e caractersticas fenotpicas. Com essa informao, estabelecem-se
equaes preditivas para os cruzamentos seletivos, substituindo a seleo por marcadores pela
seleo genmica.
A CLONAGEM
Em 1975, J. Gurdon (Prmio Nobel de Medicina 2012) mostrou que, transferindo um ncleo de girino
a um ovcito anucleado de r, gerava-se um girino normal e, aps a metamorfose, uma r adulta. O
sucesso do experimento diminua notavelmente quando o ncleo era extrado de clulas
diferenciadas.
No Instituto Roslin (Esccia), Ian Wilmut tentou transferir o ncleo de uma clula de glndula
mamria de ovelha Finn Dorset a um ovcito receptor anucleado de uma ovelha Scottish Blackface. O
embrio resultante seria implantado em uma ovelha Scottish Blackface. Depois de 277 tentativas
frustradas, nasceu uma ovelha Finn Dorset, Dolly (1977-2003), o primeiro animal obtido por
transferncia nuclear (Figura 14.2). Fenmeno miditico, Dolly desenvolveu um tumor no pulmo,
sendo sacrificada depois de desenvolver artrite em uma pata e de mostrar sinais de envelhecimento
precoce.

184

BIOTECNOLOGIA E CRIAO DE ANIMAIS

As dificuldades tcnicas esto, principalmente, na estimulao do citoplasma receptor e na


coordenao entre a atividade citoplasmtica e a nuclear. Quando a reprogramao celular
incompleta, observam-se fenmenos epigenticos que abrangem o DNA, a cromatina e a inativao
do cromossomo X. Como resultante de efeitos aleatrios e de influncias ambientais, os animais
clonados no so totalmente idnticos.
Por outro lado, os problemas de sade so mais frequentes em clones, porque a gestao mais
demorada e o tamanho do recm-nascido maior. As taxas de mortandade perinatal aumentam, assim
como o nmero de malformaes congnitas.
A clonagem utilizada com os animais fundadores, principalmente bovinos e sunos, porque so os
nicos em que os benefcios justificam o custo do procedimento. Alguns exemplos so ilustrativos: Bull
86 Squared, um clone de um animal resistente brucelose, salmonelose e tuberculose; Annabell Zeta,
uma vaca da raa Holstein recordista da produo de manteiga, clonada com sucesso por apresentar
problemas de fertilidade; Second Chance, nascido depois de 189 tentativas de clonagem de Chance,
um touro que participou de rodeios e filmes.
A tecnologia est sendo desenvolvida tambm na Argentina e no Brasil. Ciruelito um clone de
Ciruelo, grande campeo da raa Brangus. Lenda e Glria da Embrapa descendem de Vitria, uma vaca
da raa Simental, nascida por transferncia nuclear; Por e Potira descendem, via bipartio
embrionria, de uma vaca da raa bovina Junqueira, em alto risco de extino; tambm zebunos foram
clonados. Em ambos os pases existem empresas privadas especializadas na clonagem comercial de
bovinos (BioSidus, ARG Natural Beef; Vitrogen, Geneal) em empreendimentos ligados a universidades
ou institutos de pesquisa agronmica.
De um modo geral, a clonagem utilizada para animais de elite, doentes ou acidentados,
estimando-se o preo de um bezerro clonado, nos Estados Unidos, em redor de 20.000 dlares. Ainda
pode demorar vrios anos at que o preo se torne interessante para o melhoramento direto na
pecuria.
-------------FIGURA 14.2. Dolly, um clone obtido por transferncia nuclear
Ovelha Finn Dorset

Ovelha Scottish Blackface

Cultivo de clulas
de glndula mamria

Extrao do glbulo polar e dos


cromossomos do ovcito
Transferncia nuclear

Ativao eltrica e fuso

Implantao do embrio em uma


ovelha Scottish Blackface

Nasce Dolly (Finn Dorset)

185

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Diferente dos bovinos, os equinos nasceriam mais saudveis. Em 2003, a mula Joy of Idaho foi o
primeiro clone de um hbrido de uma gua e um jumento. No mesmo ano e depois de 847 tentativas,
nasceu na Itlia a gua Prometea, gerada a partir de uma clula somtica materna, o que a torna ao
mesmo tempo filha e irm gmea de sua me. Em 2005 obtiveram-se os primeiros clones de um cavalo
de corrida (Pieraz Cryozootech) e de um cavalo de salto (Paris-Texas). Recentemente, nasceu na
Argentina BS andubay, clone de andubay, um cavalo crioulo (Halitus, BioSidus). No Brasil, as potras
Branca e Neve foram obtidas por bipartio embrionria. Observe-se que a inseminao artificial e os
tratamentos de fertilidade esto proibidos em cavalos de corrida, puros-sangues.
Contudo, as possibilidades da clonagem vo alm do aumento da taxa de fertilidade de animais
elite e da conservao de animais com caractersticas interessantes. A clonagem pode ser utilizada
para a conservao de espcies raras e em risco de extino, para a criao de rebanhos homogneos
que facilitem trabalhos de pesquisa e para a propagao rpida de alguns organismos transgnicos.
A TRANSGNESE
Na dcada de 1980, a transferncia de um gene codificador de hormnio de crescimento humano
originou ratos duas vezes maiores. Quando repetida a experincia com porcos, obteve-se o Beltsville
pig, um animal que apresentou problemas variados: dificuldades respiratrias, artrite, letargia etc. O
experimento suscitou vrios questionamentos ticos em relao ao tratamento infligido aos animais.
De um modo geral, salvo em peixes, a transgnese do hormnio de crescimento (GH, do ingls growth
hormone e GHFR, do ingls growth hormone factor releasing) nos animais domsticos revelou-se
problemtica.
Um caso interessante pelos benefcios que poderia trazer para o meio ambiente o do Enviropig
(Universidade de Guelph, Canada), um porco portador de um gene bacteriano codificador de fitase.
Secretada na saliva, a enzima reduz em 40% a concentrao de fsforo no esterco. Por falta de apoio
financeiro e sem a aprovao das autoridades pertinentes, em 2012, o projeto teve que ser
descontinuado, e os porcos, sacrificados.
A partir de 1988 comearam a ser produzidos vacas, cabras, coelhos, ovelhas, frangos, porcos e
peixes transgnicos. As novas tecnologias de edio gnica podero modificar a velocidade do
processo. No entanto, a comercializao de animais transgnicos ou seus produtos seguir avanando
lentamente, no s pelos altos custos, como pelo tempo demandado para responder ao processo
regulatrio e pela resistncia eventual dos consumidores.
Experincias de transgnese visam melhorar a qualidade do leite de vaca, modificando as protenas
(leite humanizado para lactantes) ou reduzindo a lactose (para as pessoas com intolerncia). Na Nova
Zelndia e nos Estados Unidos vm sendo obtidas vacas que produzem mais casena no leite, uma
propriedade interessante para a indstria de queijos.
Algumas tentativas tambm foram feitas em relao produo de fibras animais: ovelhas
transgnicas que no precisassem de determinados suplementos de aminocidos na dieta;
modificao da estrutura das fibras de l e de caxemira para facilitar o tingimento e diminuir o
encolhimento; alterao das propriedades da seda. A partir de uma protena de aranha, sintetizada
por uma cabra transgnica, se desenvolveu e patenteou o BiosteelTM, um produto muito resistente
que pode ter diversos usos, inclusive militares.
Uma das maiores preocupaes existentes o risco de escapamento de um animal transgnico, e
a consequente possibilidade de difundir o transgene nas populaes naturais. O risco depende de
algumas caractersticas do animal, especialmente a mobilidade, a capacidade de escapar do cativeiro
e a de voltar ao estado selvagem (Tabela 14.1). Outros fatores adicionais que devem ser considerados
em uma simulao de risco so a viabilidade juvenil, a idade de amadurecimento sexual, a fertilidade
do macho, a fecundidade da fmea, a viabilidade do adulto etc.

186

BIOTECNOLOGIA E CRIAO DE ANIMAIS

TABELA 14.1. O risco de escapamento de um animal transgnico


ESPCIE

MOBILIDADE

CAPACIDADE DE VOLTAR
AO ESTADO SELVAGEM

CAPACIDADE DE ESCAPAR
DO CONFINAMENTO

Camundongos

Alta

Alta

Alta

Peixes

Alta

Alta

Alta

Insetos

Alta

Alta

Alta

Porcos

Baixa

Alta

Moderada

Aves

Baixa

Baixa

Baixa

Vacas

Baixa

Baixa

Baixa

--------------

AS NOVAS TECNOLOGIAS DE EDIO GNICA


A ablao dos chifres de animais criados em confinamento um procedimento cruento que visa evitar
ferimentos do prpio animal e do pessoal que os cuida. Algumas raas de gado esto desprovistas de
chifres, mas as etapas necessrias para introduzir esse carcter por cruzamento e seleo reduz a
qualidade da cria. Uma das primeiras aplicaes da tecnologia CRISPR (do ingls, Clustered Regularly
Interspaced Short Palindromic Repeats) visa a obteno de touros sem chifres.
Outras aplicaes previstas abrangem o melhoramento gentico de mascotes (peixes, cachorros) e
a marcao de ovos de galinha, possibilitando a sexagem dos embries e sua incluso na cadeia
alimentcia ou na produo de vacinas.
A AQUICULTURA
Os principais pases produtores de peixes, mariscos e crustceos por aquicultura so a Noruega, o
Chile, o Canad, os Estados Unidos, o Reino Unido, a Nova Zelndia e os pases asiticos.
O desenvolvimento da aquicultura parece uma alternativa razovel para a produo de alimentos
porque, em funo da pesca desmedida, os estoques de peixes nos mares e oceanos tm diminudo
assustadoramente. No entanto, do ponto de vista ecolgico, ainda subsistem dvidas em relao
aquicultura. Alguns peixes no exigem nenhuma complementao da rao, como as carpas e tilpias.
J o camaro e o salmo so criados com raes que incluem farinha de peixe. Quais seriam as
vantagens da aquicultura se for necessrio extrair peixe para a preparao das raes?
A criao de peixes e mariscos uma atividade empresarial que cria empregos, demanda poucos
insumos e gera um produto de alto valor agregado. Contudo, alguns problemas subsistem, como a
distncia dos mercados de destino e a contaminao das guas costeiras, que dificulta a criao de
mariscos filtradores de plncton, favorecendo o florescimento das algas. O gerenciamento destas
variveis, nas fazendas de salmo, d um retorno econmico importante para a Noruega, o Chile o
Canad e os Estados Unidos.
No entanto, como as guas e os invernos canadenses so muito mais frios que os chilenos, onde o
salmo pode ser criado o ano inteiro, os produtores canadenses e norte-americanos se interessaram
por um salmo resistente ao frio e de crescimento rpido. Dentro desse contexto, a empresa
AquaBounty transferiu para o salmo do Atlntico um cassete de expresso, denominado
AquAdvantageTM, com dois genes codificadores de uma protena anticongelamento e um hormnio de
crescimento do salmo do Pacfico (Figura 14.3). O peixe cresce rapidamente em condies comerciais,

187

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alcanando o tamanho equivalente ao de um salmo convencional em menos tempo (18 meses em


vez de 24 ou 30).
Para alguns especialistas, existiria o risco de invaso e substituio dos salmes naturais pelos
transgnicos, ou a introduo de genes de valor adaptativo, inicialmente maior que os das populaes
selvagens, mas cujo valor diminuiria a mdio prazo, levando a espcie extino (genes troianos). A
empresa AquaBounty considera esses riscos sob controle, em funo da condio triploide dos
salmes GM AquAdvantage, que garante a esterilidade de 98,9% dos peixes e das condies
ambientais desfavorveis em Prince Edwards Island (Canad), onde sero produzidos os ovos.
Segundo o Protocolo de Cartagena, os peixes transgnicos devem ser criados exclusivamente em
conteno. Por isso, a explorao comercial de salmes transgnicos no poder ser feita como at
agora, em jaulas marinhas; eles tero que crescer confinados em fazendas dentro do territrio, de
maneira a diminuir os riscos de escapamento. AquaBounty planeja desenvolver o processo no Panam,
em regies de altitude, com temperatura adequada e rios desfavorveis para a sobrevivncia do
salmo. A aprovao, em 2015, do FDA (Food and Drug Administration), da liberao comercial do
salmo AquAdvantage o torna o primeiro animal transgnico a entrar no mercado.
Estima-se que atualmente existam umas 30 variedades de peixes transgnicos em laboratrios de
diferentes lugares. Tilpias e carpas transgnicas se encontram em vias de aprovao em Cuba e na
China, respectivamente. Tambm esto sendo desenvolvidos camares e mariscos desprovidos da
protena responsvel por 80% das alergias e uma truta com mais cidos graxos mega 3.
--------------

FIGURA 14.3. O salmo transgnico AquAdvantage (Aquabounty Technologies)

Salmo do Pacfico (Chinook)


Oncorhynchus tshawytscha

Gene codificador
de hormnio de crescimento

Enguia do nordeste do Atlntico


Zoarces americanos

Gene codificador de
protenas anticongelamento

Salmo do Atlntico (Salmo salar)

Alcana o tamanho definitivo em


18 meses, em vez de 24 a 30.
Criado em conteno
(Protocolo de Cartagena).
Triploidia (esterilidade de 98,9%)

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Salmo AquAdvantage
(AquaBounty Technologies)

BIOTECNOLOGIA E CRIAO DE ANIMAIS

A SADE DOS ANIMAIS


OS MODIFICADORES METABLICOS
Os hormnios so modificadores metablicos que estimulam o crescimento, em bezerros e porcos, e
a produo de leite, em vacas. Os mais usados so os hormnios bST (somatropina bovina) e pST
(somatropina porcina), produzidos a partir de microrganismos transformados por engenharia gentica.
Sua utilizao gerou polmicas, sendo proibidos em alguns pases da Europa, mas permitidos em 19
pases, entre os quais a Argentina, o Mxico e o Brasil.
RESISTNCIA A DOENAS
A seleo gentica de animais resistentes s doenas uma forma de reduzir o prejuzo que elas
causam, estimado em 10 a 20% da produo. No Reino Unido, a resistncia ao scrapie, por exemplo,
se tornou uma condio indispensvel para a entrada de qualquer ovino em um programa de
melhoramento. Outra possibilidade interessante a obteno de bovinos resistentes vaca louca,
mastite e brucelose.
O mapeamento do genoma dos animais domsticos facilita a tarefa de selecionar animais
resistentes a doenas, tais como frangos resistentes doena de Marek e salmonelose. Vrias
pesquisas esto direcionadas introduo de genes que confiram resistncia a doenas que afetam o
gado, como a tripanossomase ou a aftosa.
O porco africano resistente ao vrus da febre suna, enquanto o porco europeu sensvel ao vrus.
Como eles no cruzam, os mtodos clssicos de melhoramento tiveram que ser descartados. O
Instituto Roslin (Reino Unido) obteve porcos europeus resistentes ao vrus da febre suna africana,
alterando uma nica base do genoma, mediante as novas ferramentas de edio gnica (ZFNs,
TALENs). A modificao esteve baseada na comparao entre os genomas de ambos os porcos.
PREVENO E TRATAMENTO
Na rea agropecuria, a defesa sanitria envolve o controle de vacinas e o diagnstico de doenas,
vricas (febre aftosa, peste suna) e bacterianas (tuberculose, brucelose, botulismo). Devido a sua
importncia econmica, essas atividades exigem condies de trabalho estritas em laboratrios com
elevado nvel de biossegurana (NB3, NB4).
Os principais produtos desenvolvidos para a sade animal so vacinas, kits de diagnstico,
tratamentos (antibiticos, antiparasitrios) e suplementos (hormnios). Estes produtos so
necessrios porque as prticas intensivas ou semi-intensivas favorecem a transmisso de doenas
entre os animais.
Existem numerosas vacinas contra as doenas dos animais; muitas pesquisas se direcionam
atualmente para a elaborao de vacinas de subunidades de antgeno em plantas modificadas
geneticamente, que possam ser administradas na rao. Tambm est sendo desenvolvida uma vacina
para imunizar os animais contra um hormnio reprodutivo (GnRH ou gonadotrophin-release
hormone), sendo esta uma alternativa para a castrao de touros e porcos.
As anlises de DNA possibilitam a tipificao dos agentes patognicos e os estudos epidemiolgicos.
Os ensaios imunoenzimticos so utilizados para o diagnstico de vrias patologias e tambm para o
reconhecimento de diversos tipos de contaminao nos produtos (Salmonella, Escherichia coli,
Listeria).
A produo de medicamentos visa umas 200 doenas animais diferentes. As indstrias de sade
investem aproximadamente US$ 400 milhes por ano em pesquisa e desenvolvimento, mas, de um

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modo geral, a sade animal movimenta muito menos dinheiro que a sade humana. Salvo em relao
aos animais de estimao, o mercado de sade animal cresce lentamente. Algumas experincias em
andamento so a produo de anticorpos monoclonais para a artrite reumatoide no leite de
ruminantes, ou a sntese de um antibitico de amplo espectro por vacas leiteiras, a fim de diminuir a
incidncia de mastite por Staphylococus aureus.
Na Amrica Latina, numerosas empresas do setor privado elaboram medicamentos, vacinas e
testes diagnsticos dirigidos sade animal. Entre as principais: Biognesis e Bag (Argentina), Valle
(Brasil), BiosChile (Chile), Laverlam (Colmbia), IASA (Mxico), Laboratrios Santa Elena (Uruguai).
Cuba se destaca pela vacina contra o carrapato, que vendida em vrios pases da Amrica Latina.
A aquicultura abre um espao para as empresas que desenvolvem testes de diagnstico e vacinas
para os patgenos que afetam as fazendas, como a argentina Tecnovax S.A. e as chilenas Recalcine e
AquaGestin, que desenvolveram uma vacina contra o vrus da anemia infecciosa do salmo.
Em relao febre aftosa, uma endemia que afeta a produo de carne e de leite, novas vacinas
mais eficientes e fceis de aplicar so indispensveis nas regies em que a doena no foi totalmente
erradicada e em que aparecem surtos eventuais: Argentina, Brasil, Colmbia, Mxico, Paraguai e
Uruguai.
Do ponto de vista comercial, as vacinas DIVA (do ingls, differentiating infected from vaccinated
animals) so especialmente interessantes porque permitem distinguir animais infectados de animais
vacinados. Estuda-se tambm a substituio da vacina atual de vrus inativado, por alfafa transgnica
que expresse algumas protenas do vrus da aftosa (plant-pharming).
Tecnologias avanadas so habitualmente aplicadas na produo de vacinas veterinrias. At o
incio de 2016, 20 vacinas geneticamente modificadas foram liberadas no Brasil pela CTNBio (Comisso
Tcnica Nacional de Biossegurana).
NOVAS UTILIZAES DOS ANIMAIS DOMSTICOS
MODELOS DE ESTUDO PARA DOENAS HUMANAS
A transgnese utilizada em vrios animais (ratos, camundongos, coelhos e macacos), para transferir
caractersticas que permitem sua utilizao como modelo de doenas humanas.
O primeiro modelo foi obtido em 1988, ao se transplantar tecidos do sistema imune extrados de
um feto humano a camundongos geneticamente imunodeficientes; os animais adquiriram um sistema
imune humano. No mesmo ano, obtivera-se o oncomouse, um camundongo com um gene para cncer
de mama que permite testar tanto o efeito carcinognico de algumas substncias como a ao
teraputica de outras. Com este camundongo, a Universidade de Harvard recebeu a primeira patente
para um animal transgnico.
A partir desse momento vrios animais foram redesenhados para servir como modelo; coelhos com
diferentes genes para lipoprotenas humanas constituem linhagens sensveis ou resistentes a regimes
ricos em colesterol; camundongos modificados geneticamente possibilitam os estudos sobre epilepsia,
obesidade; mapeamento gentico de doenas neuropsiquitricas em cachorros etc.
Mediante as novas tcnicas de edio gnica (TALENs), o Instituto Roslin obteve, recentemente,
um modelo animal (porco) para o estudo da arterioesclerose. Foram alterados os genes codificadores
dos receptores da lipoprotena de baixa densidade (LDL), sem os quais essa frao do colesterol se
acumula no sangue, causando a doena.
Alguns animais domsticos constituem um reservatrio de doenas e as transmitem ao homem.
Preservar a sade dos animais diminui o risco de contgio. Deste modo, uma vacina contra a
leishmaniose canina desenvolvida recentemente no Brasil visa a cortar a corrente de transmisso da
doena do cachorro ao homem.

190

BIOTECNOLOGIA E CRIAO DE ANIMAIS

XENOTRANSPLANTES
O porco considerado o fornecedor ideal de rgos para transplante, porque o tamanho e a funo
destes so equivalentes aos dos humanos. Vlvulas de porco substituem j as vlvulas cardacas
humanas, depois de eliminar todas as clulas de porco. A rejeio a um rgo transplantado poderia
ser evitada por knock out ou pelas novas tcnicas de edio gnica, do gene da 1,3galactosiltransferase (1,3 GalT). Contudo, restaria um dos maiores riscos dos xenotransplantes, que
a transmisso de vrus de uma espcie a outra.
OS ANIMAIS COMO BIORREATORES
As protenas teraputicas incluem hormnios, anticorpos, fatores de crescimento e fatores de
coagulao. Os genes codificadores de vrias delas j foram transferidos a microrganismos. Porm,
devido necessidade de modificaes ps-traducionais, algumas protenas s podem ser sintetizadas
em clulas animais, cultivadas em biorreatores. Contudo, a quantidade de protena produzida muito
pequena e os custos operacionais muito altos.
Uma alternativa a transformao gentica de um animal para convert-lo em um biorreator que
expresse a protena de interesse no leite, no sangue, na urina ou nos ovos. De fato, precisa-se de 2 a 3
vezes menos capital inicial, e o custo da protena recombinante cai entre cinco e dez vezes.
Obviamente, a eleio de uma ou outra tecnologia depender da demanda do mercado e da dosagem
requerida. A aprovao de um produto demanda os testes clnicos correspondentes e normas
regulatrias so estritas e demoradas.
Poucos meses depois do nascimento de Dolly, o mesmo grupo do Instituto Roslin e PPL Therapeutics
anunciou o nascimento de Polly, uma ovelha transgnica para o gene codificador do fator IX, uma
protena fundamental para a coagulao sangunea e que falta nos hemoflicos. Muitos produtos esto
sendo desenvolvidos atualmente no leite (vacas, cabras, ovelhas, porcos) e nos ovos (aves). Em relao
ao fator IX humano, por exemplo, porcos transgnicos excretam a protena no leite em quantidade
250 a 1.000 vezes maior do que se consegue em biorreatores microbianos. Bastariam algumas
centenas de animais para suprir as necessidades de toda a populao.
Testes clnicos de vrios medicamentos encontram-se em andamento. Na Esccia, PPL Therapeutics
Ltd. cria 200 ovelhas produtoras de AAT (-1-antitripsina), uma substncia que se encontra em testes
clnicos para o tratamento de enfisema hereditrio e fibrose cstica. Nos Paises Baixos, Pharming BV
obteve vacas produtoras de lactoferrina humana, uma protena com propriedades antimicrobianas.
Na Argentina, BioSidus mantm um tambo farmacutico com duas dinastias de vacas: Pampa,
produtora de hormnio de crescimento, e Patagonia, produtora de insulina. No Brasil, a Universidade
do Cear mantm um rebanho de cabras transgnicas de raa Canind que secreta no leite o fator de
estimulao de colnias de granulcitos humanos (hG-CSF).
Hematech Inc. mantm um rebanho em que os genes bovinos foram removidos (knock out) e
substitudos (knock in) por genes humanos. Uma vez imunizados, os animais produzem anticorpos
policlonais humanos que podem ser utilizados para combater infeces, assistir a pessoas com o
sistema imune comprometido ou tratar doenas autoimunes (artrite reumatoide). Anticorpos
humanos (Origen Therapeutics) e interferon (AviGenics) tambm so produzidos em ovos de aves
transgnicas.
A empresa GTC Biotherapeutics produz mais de 60 protenas teraputicas diferentes no leite de
cabras e vacas.Com a liberao de ATryn, uma antitrombina com propriedades anti-inflamatrias e
anticoagulantes, na Europa (2006) e nos Estados Unidos (2009), esperava-se uma modificao no
mercado de fatores de coagulao recombinantes. Porm, as promessas no se confirmaram. S em
dezembro de 2015, o FDA aprovou a liberao comercial do medicamento Kanuma (sebepilase alfa),

191

M.A.MALAJOVICH - BIOTECNOLOGIA (2016)

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de Alexion Pharmaceuticals, para o tratamento de uma doena lisossmica. A enzima produzida nos
ovos de galinhas geneticamente modificadas.
Outros produtos esto sendo preparados para fazer frente a um eventual surto de bioterrorismo
como, por exemplo, anticorpos humanos contra antraz, varola e botulismo em vacas transgnicas
(TransOva), ou antdotos contra as armas qumicas como o gs Sarin em cabras (Nexia).
Todas estas aplicaes exigem o respeito a normas de segurana estritas. Parece fundamental
extremar os cuidados com a eliminao das carcaas e evitar o escapamento de animais transgnicos
para produtos medicinais, assim como a entrada acidental de seus produtos na cadeia dos alimentos.
O MARCO CONCEITUAL DOS TRS Rs
O uso de animais em experimentos tem suscitado numerosos debates, em funo do sofrimento que
se lhes infringe e da dificuldade em se transpor ao ser humano a informao obtida nessas pesquisas.
Estima-se em 115 milhes o nmero de animais utilizados por ano em pesquisas cientficas entre
roedores (83,5%), primatas (0,15%), gatos (0,06%) e ces (0,24%).
Em 1959, Russell e Burch estabeleceram um marco conceitual conhecido hoje como os trs Rs
(do ingls replacement, reduction and refinement). No momento atual, a cincia no tem como
prescindir dos testes em animais em algum momento do desenvolvimento de novos medicamentos e
de outras pesquisas. Contudo, os Rs deram incio a uma reflexo tica em relao aos animais (Tabela
14.2).
Admite-se hoje que nem tudo o que tecnicamente possvel deve ser permitido, cabendo aos
Comits de tica das instituies de pesquisa discutir este aspecto em relao aos projetos que
envolvem seres vivos, a fim de evitar o conflito entre o bem dos seres humanos e o dos animais.
Nos ltimos anos tem-se desenvolvido numerosas iniciativas para substituir ou reduzir o nmero
de animais no ensino, especialmente na formao de pesquisadores e tcnicos. Em bancos de dados
como NORINA (A Norwegian Inventory of Alternatives) encontram-se numerosas alternativas para
substituir as disseces e outras prticas que envolvam procedimentos com animais.
Contudo, nem sempre os maus-tratos decorrem dos procedimentos experimentais, tambm
podem ser genticos. Um exemplo significativo o da raa bovina Belgian Blue, que apresenta um
crescimento muscular extraordinrio devido a uma mutao no gene codificador da miosina. A carne
macia e com muito pouca gordura, mas devido largura reduzida do canal plvico e ao grande
tamanho dos bezerros, o nascimento s possvel por cesrea. Alguns pases, como a Dinamarca,
pedem a extino desta raa.
-------------TABELA 14.2. Significado e alcance dos trs Rs (do ingls replacement, reduction, refinement)
R

SIGNIFICADO

EXEMPLOS

Substituir

Substituio de animais vertebrados conscientes por seres inscientes ou por mtodos in vitro.

Reduzir

Reduo do nmero de animais necessrio para a pesquisa mediante desenhos experimentais


mais apurados estatisticamente.

Refinar

Minimizar ao mximo o desconforto ou o sofrimento dos animais.

192

BIOTECNOLOGIA E CRIAO DE ANIMAIS

OS ANIMAIS DE ESTIMAO
O bem-estar dos animais domsticos uma responsabilidade do homem, que deve lhes dar qualidade
de vida e minimizar o sofrimento e a dor. Entre estes, os bichinhos de estimao constituem um grupo
parte. Submetidos a processos seletivos diversos, eles experimentam algumas consequncias
negativas como a surdez, que atinge quase 10% dos dlmatas. Os cachorros, alis, carregam 300
condies genticas recessivas das quais 250 foram descritas tambm no homem.
Em 2015, estimaram-se em mais de 14 bilhes de dlares os gastos em produtos de sade para os
pets norte-americanos. Trata-se de vacinas (raiva, hepatite, leucemia felina etc.) e medicamentos
(artrite, parasitas, alergias, problemas dentrios, doenas cardacas, falncia renal, ansiedade de
separao, sndrome de disfuno cognitiva etc.).
O mercado tambm propcio para a clonagem dos animais de estimao. Algumas empresas j
esto envolvidas com a tecnologia, que at agora parece ser mais fcil em relao aos gatos que aos
cachorros.
O desenvolvimento de Night Pearls, um peixe transgnico que brilha no escuro, custou US$ 2,9
milhes. Inicialmente desenhado para monitorar a qualidade da gua, este peixe se transformou em
mascote. Existem variedades com fluorescncia verde, vermelha e com uma combinao das duas
cores, a um preo de US$ 17,40, no lanamento em Taiwan (2003).

193

C A P T U L O 15

BIOTECNOLOGIA E ALIMENTOS

OS ALIMENTOS FERMENTADOS
As fermentaes foram descobertas empiricamente por diversos povos, em diferentes momentos
histricos. Assimiladas rapidamente pelo homem, suas duas vantages fundamentais eram a
preservao dos alimentos e a eliminao das substncias txicas de alguns gros.
Os processos fermentativos desenvolveram-se de modo artesanal at a segunda metade do sculo
XIX, quando as descobertas cientficas sobre os microrganismos e as enzimas possibilitaram o
desenvolvimento da indstria de alimentos, que soube se apropriar de todas as cincias afins
(microbiologia, bioqumica, engenharia qumica, automao etc.).
Os alimentos fermentados constituem hoje a terceira parte da dieta humana. Seja por facilitar a
assimilao dos nutrientes, seja por apresentar menos substncias txicas, esses alimentos entram na
categoria dos denominados alimentos funcionais, isto , alimentos que provm benefcios extras, alm
dos que seriam esperados em funo de sua composio.
Afora os produtos de panificao, as bebidas alcolicas e os laticnios, existem muitos outros tipos
de alimentos fermentados. Alguns so de origem animal (pescado, embutidos e presuntos), mas a
maioria de origem vegetal, tanto no Ocidente (chucrute, picles, azeitonas, caf, cacau, ch) como no
Oriente (shoyu, mis, tempeh, kimchi etc.) e na frica (gari, kokonte ou lafun, agbelima, togwa, kenkey
etc.).
O PO
A arte da panificao surgiu em diferentes lugares, entre 7000 e 5000 a.C. Os primeiros pes eram
umas bolachas planas, de cereais modos e gua, cozidas sobre pedras quentes. Logo deve ter sido
observado que, deixando a massa em repouso por um tempo, melhorava-se a textura e a
digestibilidade dos pes. O passo seguinte ocorreu, provavelmente, ao observar o crescimento do po
quando se juntava, massa recm-preparada, uma pequena parte da massa crua da preparao
anterior (massa cida ou p de massa). Este procedimento j era conhecido por egpcios e hebreus,
5 mil anos atrs.
Os estudos microbiolgicos atuais indicam a coexistncia, no p de massa, de bactrias lcticas e
leveduras. As enzimas presentes no gro catalisam a transformao do amido em acares, que so
transformados em cido lctico, pelas bactrias, e em etanol pelas leveduras. Devido liberao de
CO2, formam-se bolhas que conferem porosidade e leveza massa. Alm de acelerar o crescimento, a
preparao de um p de massa permite a seleo e o enriquecimento dos microrganismos dos
cereais.

BIOTECNOLOGIA: ENSINO E DIVULGAO (http://bteduc.com)

BIOTECNOLOGIA E ALIMENTOS

FIGURA 15.1. A panificao


A massa tambm pode levar outros ingredientes, tais como gordura, acar, leite em p, ovos, mel, xaropes, frutas,
especiarias etc.

Farinhas

gua

Leveduras

Enzimas

Outros Aditivos

Mistura dos ingredientes

Fermentao principal
Diviso da massa

Boleamento

Fermentao secundria
Moldagem

Fermentao final
Cozimento

Resfriamento

Corte em fatias
Embalagem e distribuio

--------------

Durante muitos sculos, a preparao do po envolvia, necessariamente, o processo natural de


fermentao, de modo que cada padeiro tinha que preparar seu p de massa. A passagem do
procedimento artesanal panificao industrial ocorreu em 1876, nos Estados Unidos, com a produo
e venda de cubos de levedura prensada, mediante um processo patenteado pelos imigrantes austrohngaros Charles e Max Fleischmann.
Atualmente, comercializam-se trs tipos de fermento biolgico (levedura Saccharomyces
cerevisiae) para a panificao: o fermento prensado ativo, com 68-72% de umidade, que requer
refrigerao durante o armazenamento e dura entre trs e cinco semanas; o fermento seco no ativo,
que se conserva mais tempo e no exige refrigerao, mas deve ser hidratado antes de usar; e o
fermento ativo instantneo, que no requer hidratao e pode ser adicionado diretamente aos
ingredientes secos.
Neste campo, as inovaes no so bem aceitas. Na dcada de 1990, comercializaram-se no Reino
Unido linhagens obtidas por engenharia gentica. Apesar de fermentar o po rapidamente, facilitando
a vida e o sono dos padeiros, o seu uso foi logo descontinuado, principalmente devido pouca
aceitao dos consumidores.
Apesar de alguns padeiros conservarem a prtica da fermentao natural, os processos artesanais
esto desaparecendo, substitudos pela tecnologia da panificao industrial. Prepara-se a massa
misturando farinhas de um ou mais tipos, gua, leveduras e diversos aditivos: emulsificadores, agentes
oxidantes e redutores, enzimas (e -amilases, hemicelulases, lipases etc.) e aceleradores da
fermentao.

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O processo fermentativo envolve vrias etapas, durante as quais o CO2 liberado forma bolhas que,
retidas na massa, aumentam seu volume. Entre uma e outra etapa, a massa dividida e boleada,
facilitando a redistribuio dos ingredientes e o desenvolvimento das caractersticas organolpticas. A
moldagem visa o alinhamento das fibras proteicas do glten. Durante a coco, a mistura etanol-gua
se transforma em vapor, e a crosta adquire uma cor dourada. A seguir, os pes so cortados e
embalados (Figura 15.1).
O VINHO
A VINIFICAO
O vinho uma bebida proveniente da fermentao alcolica da uva, originada no norte da frica e na
Europa, por volta de 3000 a.C. Durante o amadurecimento da uva, vrias espcies microbianas se
sucedem, primeiro transformando os acares em etanol e, posteriormente, o etanol em cido
actico. Considerando que o destino natural da uva o vinagre, a arte da vinificao representa um
ganho tecnolgico indiscutvel.
A uva composta por gua (86%), acares fermentescveis (12%) e molculas diversas (2%). Retirase o sumo espremendo ou prensando a polpa, sendo frequente o agregado de enzimas de macerao
(pectinases, celulases e hemicelulases) para melhorar o rendimento.
O agente biolgico da fermentao alcolica a levedura Saccharomyces ellipsoidea, que se
encontra na pele da uva. Salvo na produo artesanal, a fermentao no depende das leveduras
naturais da uva; a indstria vitivincola conta com um leque amplo de linhagens, selecionadas para
favorecer o processo fermentativo.
Na vinificao, monitora-se cuidadosamente a fermentao alcolica, at a concluso do processo.
Procede-se ento a duas trafegas, entre as quais ocorre uma segunda fermentao, denominada
fermentao maloltica. Esta etapa, que uma das mais complexas na elaborao dos tintos, se deve
ao de bactrias lcticas, como Oenococcus oeni, que transformam o cido mlico (dicido) em
cido lctico (monocido). Em consequncia da fermentao maloltica, a acidez do vinho diminui e
aparecem as primeiras modificaes aromticas. Posteriormente, o vinho clarificado e colocado para
envelhecer em tonis ou garrafas, at o total desenvolvimento do buqu.
A obteno de um vinho tinto ou branco depende basicamente do tipo de uva e do procedimento
seguido (Figura 15.2). Se quisermos obter vinho branco, utilizaremos uvas brancas ou tintas sem a pele
ou casca que as recobre. As uvas tintas com pele originam vinhos tintos, porque esta libera compostos
fenlicos (antocianinas, flavonas, taninos).
O CULTIVO DA VIDEIRA
Existem diferentes espcies de videiras. A Vitis vinifera fornece os vinhos mais finos, enquanto a Vitis
labrusca, a Vitis ripari e outras variedades mais rsticas da prpria Vitis vinifera so utilizadas para a
elaborao de vinhos comuns. Para cada cultivo, existe uma combinao de solo e clima ideais,
denominada terroir, sem a qual dificilmente se obtero os melhores resultados.
Alguns vinhos resultam da mistura de uvas diferentes, sendo chamados vinhos genricos ou de
corte. Os que so elaborados a partir de uma nica variedade denominam-se varietais. Esta categoria
inclui nomes como Pinot Noir, Chardonnay e Pinot Blanc (vinhos de Borgonha), Cabernet-Sauvignon
(vinhos de Bordeaux), Alvarinho (vinhos de Portugal e Galcia), Tempranillo (vinho da ribeira do Douro),
Sangiovese (vinhos de Chianti) e Zinfendel (vinhos da Califrnia). Observe-se que, dependendo do
processo utilizado para a elaborao do vinho, a partir de uma variedade de uva como a Pinot Noir
podero ser obtidos vinhos to diferentes como um Borgonha ou um Champanhe.
Em 2007, um grupo franco-italiano completou o mapa do genoma da Vitis vinifera, variedade Pinot

196

BIOTECNOLOGIA E ALIMENTOS

Noir. A informao abrange mais de 30.000 genes, muitos dos quais respondem pelos aromas e
sabores dos vinhos, e outros regulam a quantidade de resveratrol, uma molcula que diminui os nveis
de colesterol. Os estudos genmicos abrem numerosas perspectivas para os viticultores. Uma
aplicao importante o monitoramento da madurao da fruta, mediante arrays de marcadores
moleculares, possibilitando a escolha do momento adequado para a vindima.
-------------FIGURA 15.2. A vinificao
Vinificao em tinto
O mosto obtido por esmagamento da uva tinta passa para a cuba de fermentao, uma vez corrigidas a acidez e a quantidade
de acar. Depois da primeira fermentao (fermentao alcolica), separa-se, por trasfega, o mosto da borra. Inicia-se a
segunda fermentao (fermentao maloltica). Depois de clarificado, o vinho deve aguardar dois anos at estabilizar e ser
engarrafado. Os vinhos rosados ou ross so obtidos seguindo um procedimento semelhante, mas deixando macerar durante
menos tempo o mosto com as cascas de uva. Tambm possvel consegui-los misturando vinhos brancos e tintos.
Vinificao em branco
O mosto obtido por esmagamento de uva branca ou de uva tinta sem casca, sem permitir a macerao. Salvo em alguns
vinhos brancos de Borgonha, evita-se a fermentao maloltica. Os vinhos espumantes (Champagne, Cava, Prosecco) passam
por uma segunda fermentao alcolica na garrafa.

Uva tinta

Desengaamento e esmagamento

Uva branca

Desengaamento e esmagamento

Macerao

Inoculao

Fermentao alcolica

Inoculao

Fermentao alcolica

Fermentao maloltica

Clarificao

Clarificao

Envelhecimento

Engarrafamento

Engarrafamento

Vinho tinto

Vinho branco

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O cultivo da videira uma tarefa complexa que exige tratamentos, enxertos e podas. Os viticultores
praticam a multiplicao vegetativa das videiras, o que garante uma qualidade constante, porm
aumenta a susceptibilidade da plantao aos patgenos. Espera-se que os estudos genmicos
permitam identificar e selecionar genes de resistncia a algumas das enfermidades que afetam as
videiras.
A transferncia de genes de resistncia de uma variedade a outra vista com muita desconfiana
pelos produtores, porque o rtulo de varietal parte da estratgia de vendas dos vinhos de qualidade.
Contudo, alguns produtores consideram aceitvel a transferncia de genes de videiras rsticas para
plantas de elite, com o objetivo de melhorar a produo.
Com a entrada no mercado internacional de pases menos apegados s tradies (Estados Unidos,
Chile, Argentina, Brasil, frica do Sul, Austrlia etc.), pode ser que as novas tecnologias genmicas se
apliquem na produo de plantas resistentes a doenas e pragas.
O ROL DA LEVEDURA NA VINIFICAO
Embora as propriedades organolpticas dos vinhos dependam basicamente do cultivar escolhido, as
enzimas da uva e as atividades metablicas microbianas cumprem, tambm, um papel importante.
A transformao do mosto em vinho envolve inmeras reaes qumicas, desenvolvidas por
leveduras e bactrias lcticas. Com o mapeamento do genoma de ambos os microrganismos, e a
construo de microarrays adequados, estas reaes podero vir a ser bem conhecidas e controladas.
Existe a tendncia, na indstria moderna, de substituir as leveduras selvagens por leveduras
enolgicas selecionadas. Contudo, alguns produtores consideram que estas ltimas massificam a
qualidade do vinho, preferindo utilizar as leveduras nativas e obter assim um produto original
qualitativamente diferente dos outros. Bancos de leveduras nativas facilitam a preservao da
biodiversidade.
Recentemente, duas linhagens de leveduras geneticamente modificadas fizeram sua entrada na
indstria de vinhos dos Estados Unidos e Canad. Trata-se da levedura ML01, que realiza ambas as
fermentaes (alcolica e maloltica), evitando a produo de histaminas e da levedura ECMo01 que
degrada a ureia, impedindo a formao de uma substncia carcinognica.
A CERVEJA
As bebidas fermentadas representam uma opo saudvel, na falta de gua ou no caso de ela estar
contaminada. Todos os povos elaboraram alguma bebida fermentada a partir dos elementos de seu
entorno, fossem gros, frutas, razes, caules ou folhas.
Em 4000 a.C, os habitantes das margens dos rios Tigre e Eufrates (Mesopotmia) preparavam 20
variedades de cerveja a partir de um procedimento bem simples. Esmigalhava-se o po de cevada em
um recipiente com gua aucarada e, uma vez concluda a fermentao, a bebida era filtrada e
transvasada a outro recipiente.
Os procedimentos melhoraram a partir do sculo VII, quando os frades introduziram algumas
inovaes, como incluir diferentes tipos de ervas, uma prtica que culminou com a adio de lpulo,
no sculo XI. A descoberta da tcnica de fermentao baixa, no sculo XIV, deu maior estabilidade
bebida. Os trabalhos de Pasteur e o progresso da Microbiologia permitiram, no sculo XIX, o
desenvolvimento de uma poderosa indstria, cuja produo mundial supera os 1.000 milhes de
hectolitros por ano.
A fabricao da cerveja comea com a maltagem, um processo em que os gros de cevada
germinados so secados e modos. O malte assim obtido contm as enzimas desenvolvidas durante a
germinao, capazes de catalisar a transformao do amido em acares fermentescveis (Figura 15.3).
Este processo indispensvel porque, no tendo amilases, as leveduras no fermentam o amido.

198

BIOTECNOLOGIA E ALIMENTOS

Na brasagem o malte misturado com gua, possibilitando a digesto do amido por ao enzimtica.
Mais tarde o mosto filtrado e fervido, sendo ento acrescentadas as flores de lpulo (Humulus
lupulus, da famlia das Canabinceas) que, alm de ter uma ao antissptica, conferem bebida seu
sabor amargo caracterstico.
A maltagem e a brasagem so atividades prvias fermentao alcolica, que ser conduzida por
leveduras (Saccharomyces cerevisiae e Sacharomyces carlbergiensis). Os processos mais tradicionais
utilizam leveduras que se acumulam no topo da cuba, originando as cervejas do tipo ale, com menos
de 4% de lcool. Contudo, existem outras leveduras que sedimentam no fundo, gerando as cervejas
de tipo lager, com mais de 6% de lcool. Uma vez concluda a fermentao do mosto, este recebe os
tratamentos finais que consistem em maturao, clarificao, carbonatao, pasteurizao e
engarrafamento.
No momento, a tecnologia do DNA-recombinante se limita a transformaes com genes do mesmo
gnero (Saccharomyces), visando conseguir linhagens mais eficientes em relao ao processo
fermentativo, adequadas cevada e ao lpulo de diferentes regies do mundo. At o momento, essas
linhagens no so utilizadas comercialmente.
-------------FIGURA 15.3. As etapas da produo de cerveja.

Cevada
Maltagem
(Macerao, germinao secagem e moagem do malte)
Malte
Brasagem
(Mistura, filtrao e fervura do mosto)
Mosto
Fermentao alcolica
Cerveja
Acabamento
(Amadurecimento, pasteurizao e engarrafamento)
Comercializao

--------------

OS QUEIJOS E IOGURTES
A PRODUO DE LATICNIOS
As razes da produo de laticnios remontam ao ano 3000 a.C. (Oriente Mdio), quando o homem
comprovara que o leite mudava de consistncia e de sabor ao azedar. O soro podia ser consumido
fresco, e a adio de sal ao cogulo o conservava por mais tempo. Em torno de 2.000 a.C., a utilizao
de estmagos de cabras e de ovelhas, como recipientes para o leite, permitiu obter queijos mais

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slidos e robustos. Mais tarde, os romanos introduziram extratos de plantas, como o figo, para
coagular o leite.
A explicao destes fenmenos simples. As bactrias que normalmente se encontram no bere
dos animais contaminam o leite, proliferando e formando cido lctico. Nesse meio cido, as protenas
precipitam, separando-se do soro. A coagulao tambm ocorre em presena das enzimas renina e
pepsina, da mucosa estomacal, e da ficina, do figo. Hoje, a produo mundial de leite fermentado
(iogurte, coalhada, quefir etc.) de trs milhes de toneladas por ano, enquanto a de queijos chega a
15 milhes de toneladas por ano (Figura 15.4 A).
Vrias espcies bacterianas podem fermentar o leite: Streptococcus thermofilus, Lactobacillus
bulgaricus, Lactobacillus acidophilus, Streptococcus lactis, Bifidobacterium bifidum etc. A maioria dos
produtos vendidos como leite fermentado contm um nmero alto de microrganismos vivos; sendo
consumidos como probiticos, para prevenir o desenvolvimento de outros microrganismos
indesejveis ou patognicos no tubo digestivo.
Todos os queijos passam por trs etapas: a coagulao, o dessoramento e a maturao (Figura 15.4
B). No entanto, a tecnologia de produo de queijos permite uma srie de variaes, que se traduz em
mais de 400 tipos diferentes. Algumas dessas variaes so a origem do leite (vaca, cabra, ovelha,
bfalo), o agente da coagulao (calor, enzimas, bactrias lcticas ou ambas), a umidade e consistncia
(mole, semiduro, duro e muito duro) e a maturao. Muitos pases aceitam 35 variedades, definidas
por regras internacionais.
O ROL DE MICRORGANISMOS E ENZIMAS
A produo de queijos envolve a acidificao do meio pelas bactrias lcticas, geralmente Lactococcus
lactis e Streptococcus thermophilus. O coalho, uma substncia extrada do estmago de bezerros, foi
utilizado, durante sculos, como agente da coagulao enzimtica, mas sua obteno ficou cada vez
mais cara e difcil.
Para estabilizar a produo, e satisfazer a maior demanda pelos produtos lcteos, transferiu-se o
gene da renina a uma bactria (Escherichia coli) e, mais tarde, a uma levedura (Kluyveromyces) e um
mofo (Aspergillus). Alm da enzima produzida (quimosina) ser mais pura que a renina, os suplementos
so constantes, aumentando a eficincia da produo de laticnios e diminuindo os custos.
O desenvolvimento de bactrias e fungos durante a maturao confere suas caractersticas tpicas
a alguns queijos como, por exemplo, a presena de olhaduras produzidas por Propionabacterium no
Gruyre, ou de um manto branco de Penicillium no Camembert e no Brie ou, ainda, as estrias azuis de
Penicillium no Gorgonzola ou no Roquefort.
O melhoramento de bactrias lcticas visa a obteno de linhagens mais estveis, resistentes aos
vrus bacterifagos, e produtoras de bacteriocinas, que so substncias com atividade antimicrobiana.
Linhagens capazes de liberar mais rapidamente suas enzimas poderiam acelerar o processo de
formao de aromas. Com o mapeamento do genoma, espera-se uma intensificao das pesquisas
nessa direo.
O sequenciamento de vrias linhagens de Streptococcus thermophilus, na dcada de 2000, revelou
a presena de sequncias CRISPR, relacionadas com a infeco por bacterifagos, sugerindo a
existncia de um mecanismo de defesa bacteriano. Exposta a um vrus, a bactria integra algumas de
suas sequncias gnicas; em um contato posterior essas sequncias serviro como guia para a
destruio de qualquer DNA semelhante. O trabalho fora iniciado na empresa Danisco, posteriormente
adquirida por DuPont, que acumula vrias patentes. A edio gnica a tcnica mais recente
disponvel para conseguir a resistncia das bactrias da indstria de laticnios aos bacterifagos, uma
ameaa que causa grandes perdas.

200

BIOTECNOLOGIA E ALIMENTOS

FIGURA 15.4. A produo de laticnios

A. Iogurte tradicional e iogurte batido. As variaes dependem de acrscimos (acar, frutas etc.) e de modificaes de
consistncia (cremoso, firme, batido).
Leite + leite em p (+ acar)

Pasteurizao

Inoculao com lactobacilos

Preenchimento das embalagens

Fermentao lctica

Fermentao lctica

Resfriamento

Agitao (+ adio de frutas)

Preenchimento das embalagens

Iogurte tradicional

Iogurte batido

Comercializao

Comercializao

B. Queijo. Os agentes biolgicos intervm nas etapas de coagulao e na maturao de alguns produtos.

Leite
Pasteurizao
Inoculao com lactobacilos, coalho ou enzimas e adio de CaCl 2

Fermentao lctica

Coagulao
Dessoramento
Enformagem, prensagem, viragem e salga

Inoculao com fungos e/ou bactrias


Maturao
Embalagem e comercializao

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A PROTENA DE CLULA NICA


Em um sentido amplo, o termo SCP (do ingls single cell protein) se refere protena bruta ou refinada,
originada pelo crescimento de bactrias, algas, fungos ou mofos. De fato, os microrganismos so muito
mais produtivos que os animais de criao. Enquanto uma vaca produz 200 g de protena por dia, os
microrganismos, teoricamente, podem produzir 25 toneladas, no mesmo tempo e em condies
ideais.
Nas dcadas de 1960 e 1970, especulava-se com a utilizao de derivados do petrleo como
matria-prima para o crescimento microbiano, mas, com a crise dos anos 1980, a ideia de um bife de
petrleo foi abandonada. Atualmente utilizam-se como substrato os excedentes e os restos agrcolas
ou industriais, e a maioria dos processos visa o enriquecimento de raes animais.
A introduo de protena microbiana na alimentao humana demanda um processo extra de
purificao, por ter um contedo de cido rico muito alto. Contudo, a empresa Ranks Hovis
McDougall (RHM) conseguiu um produto, denominado Quorn, adaptado para a nutrio humana,
utilizando o fungo Fusarium graminearum. Comercializado no Reino Unido, o alimento apresenta um
alto teor proteico (45%), uma composio em aminocidos parecida com a da carne de vaca, um alto
contedo de fibras e uma quantidade aceitvel de cidos nucleicos (1%). Por no ter cheiro ou sabor,
o produto pode ser utilizado como substituto de peixe, frango ou carne. A semelhana dependeria do
comprimento das fibras.
OS ADITIVOS
OS DIVERSOS TIPOS
A adio de algumas substncias nos alimentos tem diversos objetivos como, por exemplo, conservlos por mais tempo (antibiticos, cido actico, cido lctico, etanol), complementar seu valor nutritivo
(vitaminas, aminocidos) ou mudar a consistncia (gomas e enzimas). Os aditivos tambm so usados
para melhorar a cor e o flavor, um termo que abarca o aroma, o sabor e a textura. Apesar da m fama
que os acompanha, s uma em 6.000 pessoas apresenta alergia e intolerncia aos aditivos, um nmero
baixo, considerando que uma pessoa em 50 alrgica ou intolerante a algum alimento.
Os principais aditivos utilizados pela indstria de alimentos so os cidos ctrico e lctico, alguns
corantes naturais (-caroteno, riboflavina), flavorizantes (monoglutamato de sdio, extrato de
levedura, aromas), gomas espessantes (xantana, gelana, dextrana), antioxidantes (-caroteno),
vitaminas (B2, B12, Biotina), enzimas e antibiticos. Alguns desses aditivos so obtidos em culturas de
clulas vegetais. Outros tm uma origem microbiana, sendo utilizadas linhagens de microrganismos
geneticamente modificados para sua produo industrial.
Vimos, anteriormente, o importante rol desempenhado por algumas enzimas na produo de
alimentos e bebidas por fermentao. Falta destacar o uso da lactase na elaborao do leite
deslactosado, um produto dirigido s pessoas com intolerncia lactose. E da pectinase, que, junto
com celulases e amilases, facilita a extrao do suco de frutas retido na pectina, sendo tambm
utilizada na clarificao do suco.
Finalmente, entre os antibiticos usados para conservar alimentos, citaremos a Nisina (INS234),
que inibe o crescimento de bactrias Gram-positivas em queijos, salsichas e produtos cozidos de
origem avcola, e tambm a Natamicina ou Pimaricina (INS235), utilizada como conservante na
superfcie de produtos crneos embutidos.

202

BIOTECNOLOGIA E ALIMENTOS

FIGURA 15.5. A produo de xarope de frutose


A hidrlise e a sacarificao do amido produzem glicose; esta transformada em frutose pela enzima glicose-isomerase,
imobilizada em um biorreator.

Amido de milho, batata ou trigo

Amilases e glicoamilases

Hidrlise e sacarificao

Glicose

Isomerizao
(Invertase imobilizada)

Frutose

--------------

OS ADOANTES
Outro caso interessante o dos adoantes. O aspartame (cido asprtico e fenilalanina) consumido
para limitar a ingesto de calorias, e o xilitol, para diminuir a incidncia de cries dentrias. Outros,
como o xarope de glicose ou de frutose, substituem o acar na indstria de alimentos.
A hidrlise cida ou enzimtica (-amilase e glicoamilase) do amido do milho produz xaropes de
maltose e de glicose. J a ao enzimtica da lactase sobre o soro das indstrias de laticnios origina
um xarope de dextrose (glicose, galactose). Uma vez refinados e concentrados, esses xaropes podem
ser usados como ingredientes na elaborao de produtos alimentcios (biscoitos, sorvetes etc.).
O poder adoante da glicose menor que o da frutose, mas a transformao enzimtica (invertase
ou glicose isomerase) transforma uma em outra (Figura 15.5). O resultado um xarope (42% de
frutose, 52% de glicose), que pode ser concentrado por mtodos cromatogrficos, at alcanar um
teor de 90% de frutose. A indstria de refrigerantes substitui a sacarose pelo xarope de frutose, com
uma concentrao de 55%, obtido mediante a mistura dos dois tipos.
O processo comeou a ser estudado na dcada de 1960, sendo o custo da glicose-isomerase o
principal fator limitante da tecnologia. Com o desenvolvimento das tcnicas de imobilizao
enzimtica, o processo tornou-se econmico, possibilitando o uso do amido proveniente de cereais
excedentes, mas, por outro lado, prejudicou os pases produtores de acar, que viram diminuir a
demanda por este produto.
O descobrimento de um gene microbiano capaz de transformar a sacarose em cadeias curtas de
frutose (fructanos), com o mesmo gosto e desprovidas de calorias, indica que novos produtos podero
entrar em breve no mercado de adoantes.
OS ALIMENTOS BIOFORTIFICADOS
Combate-se a fome de uma populao dando-lhe acesso aos alimentos. Contudo, a falta total de
alimentos , hoje, um fenmeno menos frequente que a desnutrio, por carncia de determinados
nutrientes na dieta. Descrita magistralmente por Josu de Castro, na dcada de 1950, essa fome

203

M.A.MALAJOVICH - BIOTECNOLOGIA (2016)

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parcial, ou fome oculta, ainda afeta mais da metade da populao mundial, fundamentalmente
mulheres e crianas, sendo a causa de diversas doenas.
Segundo a Organizao Mundial da Sade, o ferro, o zinco e a vitamina A so as principais
deficincias nutricionais dos pases em desenvolvimento. A estratgia tradicional consiste em
suplementar os alimentos industrializados com os nutrientes correspondentes. Existem outras
possibilidades, tais como a fertilizao dos solos e, consequentemente, o enriquecimento das culturas
de base.
Contudo, o melhoramento gentico parece ser a estratgia mais promissora para aumentar as
concentraes de nutrientes nas culturas de base (arroz, milho, trigo, feijo, mandioca e batata-doce).
A engenharia gentica pareceria, a priori, a via mais rpida para fortificar os alimentos. Porm, os
empecilhos legais encontrados pelo arroz com provitamina A (Golden Rice), que conta com mais de 10
anos pronto sem ter sido comercializado, desestimulam a escolha dessa tecnologia.
Na biofortificao dos cultivos so utilizadas outras tecnologias com base biolgica. Nos Bancos de
Germoplasma do CGIAR j foram encontradas variedades de feijo com maior contedo de ferro, de
arroz e trigo com altos nveis de zinco, de mandioca, milho e batata-doce ricos em vitamina A etc. As
novas tcnicas de anlise gentica de traos quantitativos e, especialmente, a seleo assistida por
marcadores moleculares facilitam o melhoramento gentico das culturas de base.
As novas variedades devero ser altamente produtivas e contar com os nutrientes desejados.
Espera-se que contem com a aceitao das populaes necessitadas e, tambm, que os nutrientes
sejam assimilados de maneira a melhorar sua condio nutricional.
A biofortificao de alimentos um programa internacional desenvolvido por HarvestPlus (CGIAR),
um consrcio de instituies de pesquisa e agncias de desenvolvimento que age especialmente na
Amrica Latina e na frica. No Brasil, a Embrapa Agroindstria de Alimentos participa com o projeto
BioFORT, tendo j desenvolvido variedades biofortificadas de feijo e milho. Os primeiros testes esto
sendo realizados em Sergipe.
SEGURANA ALIMENTAR
A noo de segurana alimentar est baseada na tradio, de modo que inevitvel que, com o
desenvolvimento de uma moderna indstria de alimentos, surjam alguns questionamentos.
Atualmente, utilizam-se linhagens microbianas selecionadas (starters) para iniciar as fermentaes;
ao acabar o processo fermentativo, essas linhagens permanecem no meio, como os lactobacilos dos
iogurtes, ou so eliminadas por calor ou filtrao, como as leveduras do po e da cerveja.
Apesar de ter passado por uma srie de processos seletivos, que as torna muito diferentes
geneticamente das linhagens selvagens, as linhagens starters so bem conhecidas e no representam
risco algum para a sade. Classificadas pelas agncias internacionais como GRAS (do ingls, generally
recognized as safe), essas linhagens so as nicas permitidas na produo de alimentos.
No existem normas explcitas sobre o que seria um OGM food-grade, isto , um microrganismo
transgnico que possa ser utilizado na indstria de alimentos. Alguns aspetos de biossegurana teriam
que ser considerados. Um deles seria evitar ou eliminar qualquer gene de resistncia a antibiticos
que tivesse sido introduzido como marcador seletivo na transferncia gnica. O outro diz respeito aos
organismos doadores de genes, esboando-se diferentes critrios.
Segundo um critrio estrito, para poder ser considerado food grade, um OGM deveria conter
exclusivamente DNA da mesma espcie (cisgnico), aceitando-se a presena de pequenos fragmentos
sintticos de DNA, sempre que no codifiquem DNA ou RNA, na construo gnica. Em outros termos,
a tecnologia do DNA-recombinante utilizaria microrganismos de diferentes linhagens da mesma
espcie.

204

BIOTECNOLOGIA E ALIMENTOS

Atualmente, tem obtido aceitao um critrio mais amplo, permitindo a incluso de DNA de outros
microrganismos alimentares, sob a condio de estes pertencerem ao mesmo grupo de
microrganismos que participam no processo como, por exemplo, a transferncia de genes das
bactrias malolticas para as leveduras da vinificao.
A aceitao de OGMs nos alimentos depende das regulamentaes de cada pas, bem menos
flexveis na Europa que nos Estados Unidos e no Canad, onde recentemente fora colocada no
mercado uma linhagem de Lactococcus, geneticamente modificada e considerada GRAS.
As enzimas cumprem um importante papel em vrias das indstrias de alimentos (produo de
pes, biscoitos, laticnios, sucos de frutas, bebidas alcolicas, derivados do amido e de protenas).
Atualmente, mais de 30 enzimas diferentes so utilizadas no processamento de alimentos.
A primeira enzima sintetizada por um microrganismo transgnico foi a quimosina, utilizada h anos
na produo de queijos, como substituto da renina de origem animal. Hoje, aproximadamente 80%
dos queijos so elaborados com quimosina, sendo aceitos pelos consumidores lactovegetarianos.
Os microrganismos utilizados para a sntese de enzimas food-grade so organismos pertencentes
categoria GRAS, bem conhecidos e altamente produtivos, aos quais foram transferidos os genes de
interesse, mediante engenharia gentica. Esses OGMs no esto presentes na preparao final que,
depois de purificada, contm exclusivamente a enzima. Essa modalidade produtiva garante indstria
de alimentos vrias enzimas seguras e de baixo custo, entre proteases, amilases, lipases, lactases,
pectinases, glicose-oxidase, invertases etc.
A esse respeito, pareceria haver um consenso amplo, incluindo a Comisso Europeia, que considera
que os aditivos (corantes, aromas e flavorizantes), s devem ser rotulados como sendo de origem
transgnica se o produto final tiver DNA ou protena de origem recombinante.
A mais alta autoridade internacional sobre os alimentos o Codex Alimentarius, uma comisso de
FAO/WHO, reconhecida por 169 pases. Esta Comisso se encarrega de estabelecer uma metodologia
que permite analisar a segurana alimentar em relao aos produtos derivados de microrganismos
geneticamente modificados

205

C A P T U L O 16

BIOTECNOLOGIA E NOVOS ALIMENTOS

Ser transgnico? Quantas vezes temos escutado essa pergunta, imbuda de desconfiana? A resposta
nem sempre fcil porque o termo transgnico aplicado, no dia a dia, com distinto sentido e em
contextos diferentes, aos alimentos geneticamente modificados (AGMs).
Mesmo aprovados pelas autoridades correspondentes, poucos AGMs so consumidos
diretamente: o milho, a batata inglesa e a berinjela resistentes a insetos, o feijo e a papaia resistentes
a vrus e o salmo de crescimento rpido. Os cultivos transgnicos biofortificados, como o arroz com
vitamina A (arroz dourado), ainda no foram aprovados.
-------------FIGURA 16.1. O que um transgnico?
(1) Feijo resistente a vrus, milho resistente a insetos, salmo de crescimento rpido; (2) Frango; (3) Queijos, Aspartame;
(4) Arroz dourado; (5) leo de soja; (6) Biscoitos e mistura para bolos.
1. Plantas e/ou animais
transgnicos, consumidos como
alimento

2. Animais alimentados com raes


preparadas com cultivos
transgnicos

3. Aditivos (conservantes, adoantes,


modificadores de consistncia,
complementos, enzimas etc.)
produzidos por microrganismos
transgnicos.

5. Produtos industrializados,
derivados de um cultivo
transgnico

6. Produtos industrializados, contendo


ingredientes provenientes de cultivos
transgnicos

4. Cultivos biofortificados
(transgnicos)

BIOTECNOLOGIA: ENSINO E DIVULGAO (http://bteduc.com)

BIOTECNOLOGIA E NOVOS ALIMENTOS

A maioria das raes dos animais de criao contm soja e milho transgnicos, isto , tolerantes a
herbicidas e/ou resistentes a insetos. Sua aceitao cada vez mais ampla, simplesmente porque a
quantidade de milho e soja convencional no suficiente para alimentar os animais de criao.
O leo de soja, utilizado na culinria, extrado do gro de soja geneticamente modificado, sendo
considerado transgnico apesar de no conter DNA. Os alimentos industrializados podem conter
alguns componentes de origem transgnica (soja, milho), assim como substncias produzidas por
microrganismos geneticamente modificados (enzimas, aditivos etc.).
Contudo, para a maioria das pessoas, as diferenas entre esses alimentos permanecem confusas e
o termo transgnico muitas vezes utilizado em forma pejorativa (Figura 16.1).
A ENTRADA DOS TRANSGNICOS NA CADEIA ALIMENTAR
Basta olhar com ateno as naturezas-mortas dos quadros de pintores de sculos passados para
comprovar que os produtos expostos nas prateleiras dos supermercados pouco tm a ver com os
vegetais e animais de outrora.
Sem conhecimento nenhum das leis da hereditariedade, o homem selecionou as variedades que
lhe pareceram mais interessantes, por serem plantas mais produtivas, ter frutos mais saborosos etc.
Em princpios do sculo XX, a Gentica deu embasamento cientfico ao melhoramento vegetal e animal
e, a partir da dcada de 1940, utilizaram-se a radiao e as substncias mutagnicas para obter novas
variedades vegetais, com mais apelo para produtores e consumidores.
A seguinte revoluo gentica ocorreu na dcada de 1990, com a primeira onda de plantas
geneticamente modificadas: milho, soja, algodo e canola. Com traos de tolerncia a herbicidas e/ou
de resistncia a insetos e infeces virais, essas plantas mais produtivas geram mais lucros, sendo
aceitas rapidamente pelos produtores agrcolas de vrios pases.
Embora em alguns casos, como o milho, as novas tecnologias diminuram as contaminaes por
fungos e melhoraram a qualidade da matria-prima, a percepo dos consumidores no identificou
vantagens diretas. Isso poderia explicar, em parte, a adoo de uma atitude negativa em relao aos
organismos geneticamente modificados.
MELHORANDO A CONSERVAO
Para despertar o interesse do consumidor seria necessrio fornecer-lhe produto com qualidades que
o beneficiem diretamente, tais como uma melhor conservao dos frutos. Uma dessas tentativas foi a
produo de um tomate com maior durabilidade na prateleira.
O tomate amolece com o tempo, tendo que ser colhido ainda verde e transportado rapidamente
at o lugar de comercializao, onde a maturao induzida com etileno. Inativando a enzima
responsvel pelo amolecimento do fruto, o fruto permanece mais tempo na planta, ganhando cor e
sabor.
Gerado por tecnologia anti-sense, o primeiro AGM foi o tomate FlavSavr (Calgene Inc.), liberado
nos Estados Unidos em 1994 e descontinuado pouco tempo depois, devido a seu custo. Mais tarde,
outro tomate de maturao lenta ocupou esse nicho de mercado. Diferentemente do FlavSavr, este
tomate, que no transgnico, teve uma expanso muito rpida, sendo comercializado em vrios
pases com diferentes nomes.
Dos AGMs que so consumidos diretamente, poucos foram comercializados: o milho resistente a
insetos (em numerosos pases), a batata e a berinjela resistentes a insetos (esta ltima em Bangladesh)
e a papaia resistente a vrus, que, na dcada de 1980, salvara da falncia os produtores do Hava. Nos
Estados Unidos, j entraram no mercado as mas Arctic Granny e Arctic Golden (Okanagan Specialty
Fruits Inc.). Nas duas variedades foi silenciado o gene codificador da enzima polifenol oxidase, que

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M.A.MALAJOVICH - BIOTECNOLOGIA (2016)

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causa o escurecimento das mas. Outro produto aprovado a batata Innate (J.R.Simplot), uma marca
que se aplica a cinco variedades, geneticamente modificadas, para resistir ao mldio e formar menos
acrilamida na fritura.
MELHORANDO AS PROPRIEDADES INDUSTRIAIS
Outra forma de interessar o consumidor melhorando algumas das propriedades dos alimentos
industriais: leo de canola de composio adequada s frituras; trigo com caractersticas especiais para
a panificao; ou batata com mais amido para absorver menos gordura ao fritar.
Contudo, nem sempre a tentativa esteve acompanhada de sucesso. Um tomate com mais pectina,
desenvolvido por Zeneca Plant Science, a partir de variaes genticas detectadas em cultura de
tecidos, chegou a ser comercializado no Reino Unido, na dcada de 1990. Esse tomate era utilizado na
preparao de massa ou pur de tomate, com menos consumo de energia e menor necessidade de
aditivos (espessantes) que o fruto tradicional. O produto resultava mais econmico, para a indstria e
o consumidor, sendo vendido pela rede Sainsbury com bastante aceitao. No auge da campanha
contra os ALMs (Frankenfoods), o produto teve que ser retirado do mercado.
Recentemente aprovado nos Estados Unidos, o salmo AquAdvantage de crescimento rpido
poderia encontrar menos aceitao entre os consumidores que entre os aquicultores de outros pases,
potenciais compradores de alevinos.
MELHORANDO AS CARACTERSTICAS NUTRICIONAIS
Uma terceira forma de chegar ao consumidor seria mediante produtos com melhores caractersticas
nutricionais: carne e leite com menos gordura, soja e batata com mais protena, canola com vitamina
A, milho com metionina, mandioca e batata sem toxinas, camaro e amendoim sem substncias
alergnicas etc.
Tambm seriam bem-vindos alimentos com melhores propriedades organolpticas, tais como
pimentes e meles com mais aroma, ou cebolas que no faam chorar. O consumidor tambm
poderia ser atrado por alimentos com componentes biologicamente ativos, como os antioxidantes do
ch verde ou as substncias capazes de diminuir o colesterol do alho e da cebola.
Contudo, os casos analisados a seguir indicam que o problema pode ser muito mais complexo.
O arroz uma planta que no produz vitamina A. Na sia, onde este constitui a base da
alimentao, a deficincia vitamnica mata 1 milho de pessoas por ano e causa cegueira irreversvel
em outras 500.000. Um grupo de pesquisadores, liderado por I. Potrykus, obteve, na Sua, mediante
a transferncia de genes do narciso, um arroz (Golden Rice) com a capacidade de sintetizar o caroteno, que um precursor da vitamina A.
O projeto, que interessa mais os pobres que os ricos, contou com subvenes privadas, e vrias das
grandes corporaes cederam as suas patentes. Apesar de estar pronto desde 1999, o Golden Rice
ainda no chegou ao mercado, tais os empecilhos legais encontrados pelos grupos contrrios aos
transgnicos, que adiam sua distribuio. Se o arroz dourado tivesse sido obtido por vias
convencionais, estaria no mercado desde 2003.
Bem diferente o caso da soja Vistive (Monsanto), que rene um trao transferido por tcnicas
de melhoramento convencionais (baixo teor de cido linolnico) e um trao de origem transgnica
(tolerncia ao herbicida Roundup). Com 60% menos de gordura saturada, o produto representa um
passo adiante na preveno de doenas cardiovasculares e de altos nveis de colesterol. Lanado no
mercado norte-americano em 2005, empresas como Kellog e Cargill o utilizaram logo na preparao
de alimentos com melhor qualidade nutricional. Por se tratar de um nicho promissor, outras
variedades com alteraes no tipo de cidos graxos esto a caminho (Soymega, com mais mega 3).

208

BIOTECNOLOGIA E NOVOS ALIMENTOS

A FAVOR OU CONTRA?
O homem no se alimenta exclusivamente por motivos fisiolgicos. Escolhem-se os alimentos em
funo da satisfao sensorial, emocional e afetiva que se espera obter, sendo determinante o peso
das consideraes econmicas. A seleo dos alimentos ocorre dentro de uma tradio sociocultural,
que inclui a noo do que saudvel, um conceito mal definido e cambiante.
Por essas razes, a pergunta do ttulo banaliza uma questo complexa e reflete a falta de consenso
sobre o tema. Seja qual for a resposta, ela estar atrelada ao momento histrico que vivemos e s
nossas concepes polticas, econmicas e sociais. Nossa atitude depende da confiana depositada no
conhecimento cientfico e no progresso tecnolgico, em funo da qual os novos alimentos sero
vistos como produtos interessantes ou como uma ameaa.
Apesar da subjetividade que rodeia a questo, alguns dados precisos ajudam a compreender
melhor a origem e os alcances da polmica. Em 1996, culmina na Europa a crise da vaca louca. Em
1997, a Unio Europeia aprova o milho resistente broca de Novartis, portador de um gene marcador
de resistncia a ampicilina. Em 1999, estoura na Blgica o escndalo dos frangos contaminados por
dioxinas. No mesmo ano, A. Pusztai faz uma comunicao meditica sobre a toxicidade de batatas
transgnicas (no comerciais) em ratos, que nunca foram confirmadas. Seja como for, a percepo
pblica de insegurana alimentar, possibilitando a formao de uma oposio feroz.
De um lado, estavam as empresas de biotecnologia, ligadas a poderosos conglomerados
multinacionais e com interesses econmicos muito bem definidos. Do outro, as redes de distribuio
de alimentos (Carrefour, Mark & Spencer), associadas aos ambientalistas (Greenpeace, Friends of
Earth) e aos produtores agrcolas (Confdration Paysanne). Com uma bem-sucedida campanha de
marketing (no queremos frankenfood), essas redes aproveitaram a oportunidade para impulsionar
seus prprios produtos e lanar suas prprias marcas.
Sem argumentaes baseadas em princpios cientficos, a discusso acirrou o enfrentamento entre
partidrios e oponentes dos AGMs. Os termos progressista e reacionrio foram usados
indiscriminadamente por ambos os grupos, esquecendo que o dissenso e a discusso fazem parte das
sociedades democrticas. Infelizmente, nessa campanha, queimaram-se comrcios, laboratrios de
pesquisa e campos com cultivos experimentais.
Os fatos continuam sendo preocupantes porque, se nos pases ricos da Unio Europeia no faltam
alimentos, e a escolha de uma tecnologia pode depender de consideraes econmicas ou ideolgicas,
nos pases mais pobres, a adoo ou rejeio de uma tecnologia uma deciso que pode ter
gravssimas consequncias para sua populao, condenando-a inclusive fome. Na Zmbia (2002) e
em Angola (2004), os governos rejeitaram o milho, enviado como ajuda humanitria para alimentar a
populao, argumentando que era transgnico. Outros pases africanos tambm chegaram a proibir a
importao de AGM (Malaui, Moambique e Zimbbue).
O QUE O CONSUMIDOR PRECISA SABER
A NOO DE SEGURANA
A noo de segurana alimentar costuma ser bastante flexvel. Quando introduzida na Europa, a batata
foi vista como um alimento perigoso. A pasteurizao do leite teve opositores ferrenhos,
argumentando que alteraria a qualidade de um alimento saudvel. O amendoim considerado seguro,
mas pode no s-lo se estiver contaminado com fungos. Muitas pessoas so alrgicas ao kiwi,
introduzido recentemente no Ocidente. Algumas pessoas continuam ingerindo gorduras em
quantidade, mesmo sabendo que so perigosas.

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Todos os AGMs comercializados atualmente foram devidamente analisados, e aprovados, no pas de


origem. Milhes de consumidores os consomem h duas dcadas, entre norte-americanos,
canadenses, sul-africanos, brasileiros, argentinos e chineses. E vrios Comits Cientficos, Prmios
Nobel, Academias de Cincias e organizaes internacionais concluram que os AGMs disponveis so
to seguros quanto os alimentos tradicionais.
Porm, frente a uma intensa propaganda e recebendo opinies contraditrias, o consumidor
consciente acaba sentindo-se inseguro sobre vrias questes.
A INGESTO DE DNA
A ingesto de DNA, per se, no perigosa. Este um componente de nossos alimentos: um tomate
tem 7mg de DNA, uma banana, 50 mg, e um sanduche, 60 mg. Esse DNA digerido normalmente,
junto com os outros componentes dos alimentos.
Em relao ao AGM, calcula-se que uma vaca de 600 kg consumindo uma rao composta por milho
geneticamente modificado, ingeriria 600 mg de DNA por dia, dos quais 1,5 mg seria DNA
recombinante, o que corresponde a 0,00024% do DNA ingerido diariamente na rao, uma proporo
muito baixa.
At o momento, no h evidncia alguma de transferncia do DNA ingerido ao homem. Alguns
fragmentos muito pequenos e degradados de DNA podem ser encontrados no plasma sanguneo e no
espao intercelular. Denominado cfDNA (do ingls, cell-free DNA), sua origem so as clulas dos
alimentos digeridos no intestino e as clulas mortas dos tecidos em redor. Esses pequenos fragmentos
do cfDNA no entram nas clulas; se isso acontecesse, ter-se-iam encontrado sequncias de nossos
alimentos integradas no genoma.
OS MARCADORES DE RESISTNCIA A ANTIBITICOS
Tampouco temos evidncias de transferncia in vivo do DNA ingerido aos microrganismos do intestino.
Porm, os estudos in vitro indicam que, mesmo em uma frequncia extremamente baixa, essa
transferncia poderia ocorrer.
Apesar de sabermos que, se uma bactria tivesse se tornado resistente, sua implantao no trato
digestrio s poderia ocorrer na presena do antibitico como agente seletivo, a utilizao de
marcadores de resistncia a antibiticos no transgene uma crtica razovel (Figura 16.2).
-------------FIGURA 16.2. A estrutura de um transgene
Para garantir a seleo e a expresso da sequncia codificadora que ser transferida, deve-se construir em redor uma
estrutura complexa que, alm de um promotor e uma sequncia terminal, inclui um gene marcador.

Gene marcador

210

Promotor

Transgene

Sequncia terminal

BIOTECNOLOGIA E NOVOS ALIMENTOS

Geralmente, os marcadores utilizados so antibiticos sem uso clnico, e para os quais j se encontrou
resistncia nas bactrias intestinais, de maneira que a transferncia do marcador no mudaria a
situao. Considerando que j existe a tecnologia apropriada, a recomendao das agncias
internacionais de substituir ou eliminar esse tipo de marcadores. Alguns produtos, como o milho
MON810 (YieldGard, Monsanto) e o milho LY038 (Renessen LLC), j no levam marcadores seletivos.
A COMPOSIO QUMICA
Em relao aos produtos comercializados, o AGM tem a mesma composio qumica e o mesmo valor
nutritivo que o alimento convencional equivalente. No caso de um AGM que sintetize uma vitamina
extra, por exemplo, a situao diferente e no pode ser considerado igual ao alimento convencional,
sendo necessrios estudos adicionais.
A PRODUO DE TOXINAS
Outra preocupao diz respeito produo eventual de toxinas. Sabe-se que, para sua defesa, as
plantas sintetizam substncias qumicas que podem ser txicas para o homem ou os animais. Uma
delas a toxina do Bacillus thuringiensis que, por ser prejudicial para os insetos e incua para o
homem, utilizada sem problemas nas lavouras orgnicas, h mais de 50 anos.
Normalmente, a presena de uma toxina investigada mediante ensaios biolgicos em diversas
espcies de animais, alimentados durante um tempo com o produto transgnico. Os ensaios so
complementados com estudos de anatomia patolgica. A avaliao toxicolgica dos AGMs
comercializados no detectou efeitos adversos.
A PRODUO DE ALRGENOS
As alergias alimentares caracterizam-se pela hipersensibilidade a uma ou mais protenas, que
desencadeiam reaes diversas, tais como urticria, vmito ou diarreia. Sua incidncia de 1-2% em
adultos e 5% em crianas, sendo provocadas principalmente por trigo, leite de vaca, ovos, peixe,
amendoim e soja.
A transgnese ou a edio de genes podero vir a melhorar a qualidade dos alimentos, se forem
utilizadas como ferramentas para eliminar substncias sabidamente alergnicas dos alimentos. Mas
no essa a preocupao do consumidor; seu o temor que o transgene sintetize alguma protena
capaz de desencadear alergias.
Uma mesma protena pode ser incua para uma pessoa e alergnica para outra, sendo impossvel
prever o efeito que ela ter em uma terceira. Entretanto, sabendo que alguns alimentos so mais
alergnicos que outros, deve-se ter cuidado em relao origem do transgene. Um projeto citado
frequentemente o da transferncia soja de um gene da castanha-do-par, com o objetivo de
melhorar suas qualidades nutritivas. Porm, frente possibilidade de induzir reaes alrgicas, em
pessoas sensveis castanha-do-par, o projeto foi descontinuado sem que essa soja sasse do
laboratrio.
sabido que o risco de uma protena ser alergnica aumenta se esta apresentar determinadas
sequncias de aminocidos, se ela se degradar lentamente no tubo digestivo ou se permanecer estvel
durante o processamento industrial. Estas caractersticas so passveis de estudos, havendo diretrizes
internacionalmente aceitas para a avaliao de alergenicidade. Complementa-se a informao
mediante anlises laboratoriais com os anticorpos de pessoas sensibilizadas e, tambm, mediante
testes em animais, capazes de desenvolver alergias aos mesmos tipos de alimentos que os seres
humanos.

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M.A.MALAJOVICH - BIOTECNOLOGIA (2016)

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Em 2000, o milho Star Link (2000), liberado nos Estados Unidos para compor raes animais,
contaminou tortillas e tacos destinados ao consumo humano. Nenhuma das denncias de alergia
protena correspondente fora confirmada, mas restou uma lio bem clara em relao
biossegurana: no se pode liberar um cultivo para rao se este for inadequado para seres humanos.
O risco de alergenicidade dos AGMs comercializados at agora no maior que o dos alimentos
convencionais. Observe-se que esses alimentos passaram por testes que nunca foram aplicados no
arroz, no milho, na batata ou no kiwi, uma fruta introduzida recentemente no Ocidente e que provou
ser altamente alergnica.
O RISCO DE CNCER
Recentemente, o pesquisador francs G-E. Sralini (2012) noticiou ter detectado tumores em ratos
alimentados com milho geneticamente modificado. Devido a erros no desenho experimental e ao uso
de uma linhagem de ratos, especialmente selecionada para o desenvolvimento de tumores, o artigo
de Sralini teve que ser retirado, em 2013, da revista Food and Chemical Toxicology. Em 2014, o
trabalho de Sralini foi publicado novamente em outra revista (Environmental Sciences Europe).
O posicionamento prvio de Sralini em relao aos transgnicos, assim como sua relao com
organizaes interessadas economicamente no banimento dos ALMs, so pblicos. lamentvel que,
mesmo totalmente desqualificados pela comunidade cientfica, esses trabalhos sejam citados como
prova do perigo das raes e dos alimentos transgnicos.
A UTILIZAO DE UM PROMOTOR VIRAL (CaMV)
Na construo de um transgene, colocam-se sequncias promotoras para determinar quando, onde e
como ir se expressar a protena codificada. Alguns pesquisadores manifestaram sua preocupao com
a utilizao do promotor do vrus do mosaico da couve-flor (CaMV), considerando que sua
transferncia horizontal de uma planta transgnica s clulas do aparelho digestrio poderia ativar
outros genes no virais (oncogenes).
Essa preocupao no tem maiores fundamentos, dado que o promotor CaMV detectado em 14
a 25% da produo de canola, de couve-flor e de repolho convencionais, sendo ingerido pelo homem
em quantidades considerveis, faz dcadas, e sem nenhum efeito reconhecido.
OUTROS EFEITOS
A insero de vrias cpias gnicas em diferentes lugares do genoma poderia gerar a ativao ou
desativao de outros genes, gerando no organismo geneticamente modificado algum tipo de
alterao que no fora previsto. At agora, no fora registrado nenhum efeito deste tipo nos produtos
comercializados, e os avanos tecnolgicos (sequenciamento, microarrays) permitem excluir essa
possibilidade.
PERSPECTIVA HISTRICA
Nem os alimentos convencionais, includos os orgnicos, nem os que foram obtidos por por radiao
ou tcnicas genticas clssicas passam por uma avaliao de risco antes de ser oferecidos ao
consumidor. S os AGMs que chegaram a nossa mesa foram devidamente analisados pelas
autoridades correspondentes e trilhes de refeies consumidas por milhes de pessoas em diferentes
pases, durante duas dcadas, incluram algum componente transgnico, sem que fosse registrado um
nico incidente.

212

BIOTECNOLOGIA E NOVOS ALIMENTOS

COMO GARANTIR A SEGURANA ALIMENTAR?


O PRINCPIO DE EQUIVALNCIA SUBSTANCIAL
Antes de comercializar um alimento transgnico, avaliam-se os riscos que este apresenta para os seres
humanos, os animais e o ambiente.
Assim como no h cidade segura, h cidades mais seguras que outras. O conceito de segurana se
estabelece sempre em relao a algum marco de referncia. Quando se trata de segurana alimentar,
o referencial o alimento j conhecido e consumido habitualmente. Por isso, antes de chegar ao
mercado, os aditivos, os conservantes e os corantes convencionais novos esto sujeitos aprovao.
Assim como qualquer novo ingrediente de origem biotecnolgica.
Um alimento originado por biotecnologia moderna to seguro para o consumo quanto um
alimento que tenha a mesma composio, as mesmas caractersticas nutritivas e um histrico de uso
seguro. Esse o denominado princpio de equivalncia substancial, admitido por numerosas
organizaes internacionais como FAO (Food and Agriculture Organization), WHO (World Health
Organization), OECD (Organization for Economic Cooperation and Development), ILSI (International
Life Science Institute). O princpio d toda a importncia ao produto final e no tecnologia aplicada
para sua obteno.
A AVALIAO DE RISCOS
No possvel dizer que todos os alimentos transgnicos so seguros, nem se este alimento
transgnico seguro. S podemos afirmar que os alimentos transgnicos podem ser seguros ou
no, e que determinado alimento transgnico to seguro quanto o seu equivalente. A anlise ter
que ser feita caso a caso.
Por exemplo, o amido de uma batata resistente a vrus idntico ao amido de uma batata qualquer.
Porque o amido um carboidrato purificado, sem DNA nem protena da planta da qual foi extrado. O
mesmo raciocnio pode ser feito em relao ao leo de canola ou de soja. J no caso da torta de soja
ou da espiga de milho, os genes inseridos sintetizam protenas, e ambos se encontram no produto
final, por conseguinte, deve-se analisar se estes podem ter algum efeito no organismo que os ingere.
Todos os parmetros anteriormente citados tero que ser avaliados: a construo do transgene, os
efeitos devidos presena do transgene (eventualmente, substncias txicas ou alergnicas), o valor
nutritivo e, tambm, os efeitos no previstos devidos presena do transgene. E como em dois
organismos, o mesmo gene pode ser inserido em diferentes lugares e de diferentes modos, cada
evento dever ser analisado separadamente.
Essa metodologia, denominada anlise de risco de alimentos geneticamente modificados para a
sade humana, garante que o alimento, e quaisquer substncias que resultem da modificao
gentica, seja to seguro quanto seu anlogo convencional.
A ROTULAGEM DOS ALIMENTOS
No h no momento um consenso em relao aos rtulos: em alguns pases no h nenhuma
regulamentao, em outros se adota o rotulado voluntrio ou se estabelecem normas rgidas.
Nos Estados Unidos, o sistema est baseado na responsabilidade da indstria e na avaliao de
vrias agncias federais, cabendo FDA (US Food and Drug Administration) a avaliao da segurana
alimentar das novas variedades (vegetais, laticnios, peixes, frutos de mar e aditivos) e USDA (US
Department of Agriculture) a regulao dos produtos crneos e avcolas, alm dos testes de campo de
todas as plantas geneticamente modificadas. Tendo a responsabilidade pelo uso de pesticidas

213

M.A.MALAJOVICH - BIOTECNOLOGIA (2016)

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qumicos, corresponde EPA (Environmental Protection Agency) a aprovao das plantas


geneticamente resistentes a pragas.
Aproximadamente 20 das variedades transgnicas cultivadas esto autorizadas para o consumo
humano, nos Estados Unidos. No so rotuladas, a menos que o valor nutricional do alimento tenha
sido alterado, como no caso do leo Vistive, ou se tiver sido incorporada alguma substncia capaz de
produzir alergias. A experincia de mais de uma dcada de consumo de alimentos transgnicos
confirma que estes so equivalentes aos alimentos convencionais. Apesar de alguns grupos ativistas
terem manifestado sua oposio aos alimentos transgnicos, isto no tem afetado a estabilidade do
sistema de avaliao.
Assim como nos Estados Unidos, na Argentina e no Canad a rotulagem no obrigatria.
Na Unio Europeia, rege o princpio de precauo. Como o que importa o processo seguido na
produo do alimento, a legislao de 2004 manda rotular todos os produtos de origem transgnica,
destinados alimentao humana ou animal. A regulamentao extensiva a cantinas e restaurantes.
Tambm obrigatrio o rtulo nos alimentos que contenham mais de 0,9% de material geneticamente
modificado, incluindo raes, leos vegetais, sementes etc.
Por outro lado, a legislao europeia considera que, sendo auxiliares de transformao, no h
necessidade de rotular alimentos e bebidas preparados com substncias produzidas por OGM, se estes
ou seus resduos no estiverem presentes no produto final. Tampouco so rotulados os produtos
provenientes de animais alimentados com raes transgnicas (carne, leite, ovos) nem o mel de
abelhas alimentadas com nctar de flores de plantas transgnicas.
Japo, Coreia do Sul e Rssia rotulam os alimentos a partir de um limite percentual de 5%.
O objetivo destas medidas garantir a escolha do consumidor e a rastreabilidade dos transgenes
ao longo da cadeia alimentar. O rtulo indica "este alimento contm organismos geneticamente
modificados" ou "produzido a partir de (nome do organismo) geneticamente modificado".
No Brasil, o Decreto 4.680 (24/4/2003) determina que, a partir de abril 2004, todos os produtos
com mais de 1% de ingredientes transgnicos sejam rotulados, com um smbolo especfico de tamanho
maior a 1 cm2, um tringulo com uma letra T inserida dentro (Figura 16.3).
RTULO E INFORMAO
Quando se trata de escolher entre dois alimentos, basta recorrer nossa percepo sensorial ou,
ainda, nossa experincia pessoal. Nenhuma das duas permite reconhecer a presena de ingredientes
transgnicos, ou de origem transgnica, nos alimentos. Em funo da resistncia de alguns grupos de
consumidores, a rotulagem pareceria a sada mais lgica para informar de maneira honesta, exata e
completa sobre os produtos das prateleiras.
-------------FIGURA 16.3. O smbolo de transgnico adotado no Brasil.

214

BIOTECNOLOGIA E NOVOS ALIMENTOS

Vimos no Captulo 13 que os produtores de sementes comerciais admitem como aceitvel uma
contaminao de 1% entre as variedades convencionais. Essa contaminao tambm inevitvel,
quando coexistem plantaes transgnicas e convencionais. Por conseguinte, o limite de 1% redefine
o nvel de pureza de um ingrediente de origem vegetal, admitindo-se que todo valor inferior a esse
limite pode ser o resultado de uma contaminao acidental.
Sendo assim, o consumidor pode comprar um produto com mais de 1% de ingredientes
transgnicos ou um produto convencional cuja composio conta mais de 99% de ingredientes no
transgnicos. Em outras palavras, o rtulo no garante ao consumidor a ausncia de transgnicos.
Finalmente, cabe refletir sobre o significado de um rtulo para a maioria dos consumidores, e se a
escolha entre um produto e outro no depender essencialmente do preo e do marketing. Somente
o processo educativo pode dar populao os elementos bsicos para formar uma opinio informada
e responsvel e fazer suas escolhas.
O RASTREAMENTO DE UM TRANSGENE
Em um mundo globalizado, a variedade de regulamentos e de modalidades de rotulagem um fator
de complicao das transaes comerciais, em que a qualidade de um produto pode ter que ser
definida em relao presena ou ausncia de um transgene.
A aceitao dos transgnicos varia de um pas para outro e, tambm, entre diversos grupos de
consumidores. Por isso importante contar com formas de rastreamento como a tcnica da PCR
(reao em cadeia da polimerase), que pode ser aplicada em diferentes modalidades:
o Testes qualitativos, para reconhecer a presena ou ausncia do transgene.
o Testes semiquantitativos, em que a presena ou ausncia do transgene determinada em funo
de um limite como 1%, por exemplo.
o Testes quantitativos, que fornecem informao sobre a quantidade do transgene por comparao
com amostras de referncia com concentraes conhecidas. A tcnica permite identificar DNA
exgeno em uma quantidade de 0,1% (1 grama em 1 quilograma), mas algumas variantes
extremamente sensveis reconhecem a presena de 0,001% do transgene.
Observe-se que, para aplicar estes testes, se precisa de informao sobre as sequncias do transgene.
Uma forma de simplific-los seria a incluso, em todas as construes genticas, de uma sequncia
conhecida. Esta funcionaria como uma etiqueta molecular, facilitando a identificao de qualquer
transgene.
Por outro lado, nem sempre a PCR informativa. Em amostras de gros ou alimentos processados,
o DNA pode estar quase totalmente degradado. Nesse caso, necessrio saber quais as
transformaes que o produto sofreu e estabelecer protocolos adequados. Existem mtodos
imunolgicos (Western Blot, ELISA) que permitem detectar a protena sintetizada pelo transgene e,
eventualmente, estimar a quantidade presente. Contudo, o custo de todos esses testes ser pago pelo
consumidor.

215

C A P T U L O 17

BIOTECNOLOGIA E SADE / VACINAS

AS DOENAS INFECCIOSAS
O desenvolvimento da agricultura aumentou a disponibilidade de alimentos, sustentando populaes
mais densas e sedentrias. O contato com os animais domesticados, por favorecer a evoluo e a
passagem dos germes ao homem, estaria na origem de doenas como a varola, o sarampo, a
coqueluche, a tuberculose e a gripe.
Uma vacina um produto destinado a estimular o sistema imune, de maneira a prevenir ou
controlar uma infeco. No sculo XIX, mais de 80% das crianas morriam de doena antes dos 10 anos
de idade. Hoje, programas de vacinao sistemtica as imunizam contra tuberculose, hepatite B,
poliomielite, difteria, ttano, coqueluche, meningite, sarampo, rubola, caxumba e infeces por
rotavrus e pneumococos.
Nos dois sculos que nos separam de Jenner, o descobridor da primeira vacina antivarilica, temos
alcanado o sucesso na preveno de um bom nmero de doenas infecciosas. A vacinao chega s
crianas e aos grupos de pessoas sujeitos a maiores riscos, como as mulheres (sarampo e rubola), os
maiores de 60 anos (gripe, pneumonias) e os profissionais de sade (hepatite B, antraz). Tambm
resguarda os residentes em determinadas reas e os viajantes (febre amarela). A vacinao dos
animais os protege das doenas e quebra o elo de transmisso ao homem.
A melhora das condies econmicas de uma populao repercute na sade da mesma e,
inversamente, a diminuio da incidncia de doenas com suas sequelas de invalidez ou morte
prematura d s pessoas a possibilidade de melhorar suas condies de vida. O custo de implantao
de um sistema de vacinaes baixo, porque a proteo atinge no s a pessoa que as recebe como
as que entram em contato com ela.
Em uma variante do velho ditado prevenir melhor que curar, a WHO (Organizao Mundial da
Sade; do ingls, World Health Organization) ressalta que o maior impacto na rea de sade
conseguido com gua limpa e vacinas. Lamentavelmente, ainda morrem anualmente dois milhes de
crianas de doenas porque as vacinas existentes no chegam at elas, devido aos conflitos armados
e dificuldade de acesso aos centros de sade. E ainda no temos vacinas para doenas como a
tuberculose, a malria ou o HIV/AIDS.
A AQUISIO DE IMUNIDADE
Um antgeno uma substncia que estimula a produo de protenas especficas (anticorpos) capazes
de se ligar a ele. Microrganismos infecciosos, suas molculas e substncias qumicas so antgenos,
assim como as clulas de um organismo transplantadas a outro, o plen, pelos de animais e certos
alimentos nas pessoas sensibilizadas.
BIOTECNOLOGIA: ENSINO E DIVULGAO (http://bteduc.com)

BIOTECNOLOGIA E SADE / VACINAS

No primeiro contato com um antgeno, o organismo reage com uma resposta imunolgica primria de
intensidade baixa e curta durao, acompanhada de alguns sintomas como febre, dor de cabea,
erupo cutnea. Essa primeira resposta facilita a eliminao do antgeno estranho e a produo de
clulas de memria. Em um segundo contato, a resposta imunolgica envolver numerosas clulas e
molculas e ser rpida, intensa e duradoura (Figura 17.1).
Todo patgeno um antgeno estranho e, como tal, ser detectado pelo sistema imune quando
penetrar no organismo. A resposta envolver uma ao humoral e uma ao mediada por clulas,
coordenadas por diversos componentes do sistema imunolgico. As duas formas de ao dependem
das caractersticas do ataque do patgeno: o pneumococo se multiplica nos pulmes, o bacilo do
ttano produz uma toxina letal, o bacilo de Koch e todos os vrus parasitam as clulas.
No caso de uma bactria ou de uma toxina, os anticorpos especficos produzidos pelos linfcitos B
reconhecem os microrganismos ou as toxinas circulantes, dando incio a sua destruio. Os vrus e
algumas bactrias demandam outro tipo de combate, porque, ao invadir as clulas, ficam protegidos
dos anticorpos. A clula infectada ser destruda pelos linfcitos T matadores (tambm chamados Tc,
do ingls T citotoxic), que reconhecem uma combinao das protenas celulares com algumas
protenas do invasor, expostas na superfcie celular.
Tanto a ao humoral como a ao mediada por clulas dependem da participao dos linfcitos
auxiliadores Ta, tambm chamados Th (do ingls, T helpers), que reconhecem o antgeno e produzem
molculas que estimulam a proliferao das clulas B e T. Finalizada a resposta primria, algumas
clulas de memria (B, T) permanecero no sistema, possibilitando a acelerao dos mecanismos de
defesa em ocasio de um segundo contato com o antgeno (Figura 17.2).
-------------FIGURA 17.1. As respostas primria e secundria do organismo

Intensidade da
resposta imune

Semanas

Primeiro contato com o


patgeno (antgeno)

Segundo contato com o


patgeno (antgeno)

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Uma vacina um produto destinado a ensinar o sistema imune a reconhecer determinado patgeno
e impedi-lo de desencadear uma infeco ou uma doena. A vacina prepara os mecanismos de defesa,
em previso de um segundo contato, desta vez com o patgeno original.
A vacinao estabelece o primeiro contato do organismo com um patgeno que, estando
incapacitado para causar a doena, conserva sua identidade molecular e a capacidade de induzir uma
resposta imune. As vacinas estimulam a imunidade humoral, a imunidade mediada por clulas ou,
preferentemente, ambas ao mesmo tempo.
-------------FIGURA 17.2. A memria imunolgica

Antgeno

Detectado por clulas que ativam


os diferentes tipos de linfcitos

Linfcitos T citotxicos

Linfcitos T auxiliadores

Linfcitos B

Sntese de
anticorpos

Clulas de memria
Eliminam as clulas infectadas

Neutralizam ou marcam o antgeno


dando incio a sua eliminao

--------------

OS DIFERENTES TIPOS DE VACINAS


AS VACINAS TRADICIONAIS OU DE PRIMEIRA GERAO
AS VACINAS DE PATGENOS VIVOS ATENUADOS
Nestas vacinas, os patgenos vivos so cultivados em diferentes meios e/ou passam por vrios
tratamentos fsicos (temperatura, presso e pH), de modo a selecionar mutantes que, apesar de ter
perdido a patogenicidade, conservem a capacidade de induzir uma resposta imune intensa e
duradoura, que envolva ambas as vias, a humoral e a celular.
Estas vacinas so muito eficientes j que, salvo em caso de imunizao por via oral, basta uma nica
dose para obter a imunidade desejada. Contudo, elas apresentam alguns inconvenientes. Alm de
serem inadequadas para as pessoas imunodeprimidas, existe o risco de uma forma atenuada reverter
para uma forma ativa. Outra desvantagem a necessidade de conserv-las refrigeradas, mantendo
uma cadeia de frio.
Utilizam-se na preveno de doenas de origem viral, como a febre amarela, o sarampo, a rubola,
a caxumba e a poliomielite (Sabin ou OPV, do ingls oral polio vaccine). A vacina contra a tuberculose
a nica preparada com uma bactria viva, o bacilo de Calmette-Gurin ou BCG.

218

BIOTECNOLOGIA E SADE / VACINAS

AS VACINAS DE PATGENOS MORTOS E DE TOXOIDES


Estas vacinas incluem microrganismos mortos ou toxinas inativadas (toxoides) por procedimentos
fsicos ou qumicos. Conferem uma resposta imune de tipo humoral pouco intensa ou duradoura, pelo
que se devem administrar vrias doses e, mais tarde, manter a imunidade com doses de reforo.
Requerem, tambm, a introduo de substncias coadjuvantes para estimular a resposta imune.
Apesar de ser estveis e no depender da cadeia do frio, estas vacinas devem ser modificadas
frequentemente para se adaptar aos sorotipos bacterianos patognicos, que so muito variveis. Alm
de vacinas de toxoides contra a difteria e o ttano, existem vacinas de microrganismos mortos contra
a clera, a gripe, a hepatite A, a peste, a poliomielite (vacina Salk) e a raiva.
AS NOVAS VACINAS OU DE SEGUNDA GERAO
A chegada da engenharia gentica revolucionou o campo das vacinas ao permitir a produo de
antgenos de tipo proteico em microrganismos transformados, que podem ser cultivados sem riscos
em um fermentador (Escherichia coli, Saccharomyces cerevisiae, Picchia pastoris).
Devem-se tecnologia do DNA recombinante (Figura 17.3), as vacinas contra a hepatite B (HBV) e
contra o papiloma humano (HPV). Outro benefcio o desenvolvimento de vacinas veterinrias DIVA
(do ingls, Differentiate Infected from Vaccinates Animals), que permitem distinguir um animal
vacinado de outro doente.
AS VACINAS DE SUBUNIDADES DE ANTGENOS
Nestas vacinas se colocam, em vez do microrganismo todo, s um a 20 antgenos da superfcie celular,
capazes de induzir a resposta imune. Demandam um longo trabalho de pesquisa prvia para
determinar quais os melhores antgenos (subunidades) que devero ser includos na vacina e precisam
de substncias coadjuvantes para estimular a imunidade.
Por no levar mais que fragmentos do microrganismo, estas vacinas no apresentam os riscos das
vacinas de microrganismos vivos e independem da cadeia do frio. Existem vacinas de subunidades
contra a influenza ou gripe, a doena de Lyme, a hepatite B, a coqueluche e a pneumonia.
-------------FIGURA 17.3. A utilizao da tecnologia do DNA-recombinante na vacina contra a hepatite B

Vrus HBV

Gene codificador do
antgeno de
superfcie HBsAg
Sntese do
antgeno
Vacina

Levedura

Levedura transformada

219

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AS VACINAS CONJUGADAS
Alguns microrganismos (pneumococos, meningococos) protegem-se com uma cpsula de
polissacardeos, que dificulta sua identificao pelo sistema imune, ainda imaturo, de uma criana. As
novas tecnologias possibilitam a associao de um toxoide s subunidades de polissacardeo, de
maneira a estimular a resposta imune e o reconhecimento dos antgenos capsulares.
Estas vacinas de antgenos conjugados so utilizadas na imunizao contra o Haemophilus
influenzae B (meningite) e o Streptococcus pneumoniae ou pneumococo. As vacinas contra este ltimo
devem ser modificadas frequentemente, adicionando outros antgenos capsulares das mais de 80
linhagens que causam pneumonia em seres humanos.
AS VACINAS VETORIZADAS
Outro tipo interessante de vacinas so as vetorizadas, em que o gene codificador do antgeno
transferido a um microrganismo incuo (bactria ou vrus) que age como vetor. Ao infetar o
hospedeiro, ele se multiplica e comea a produzir o antgeno, induzindo uma resposta imune contra o
patgeno. Com uma vacina deste tipo imunizam-se as raposas, atualmente um dos principais elos na
transmisso de raiva na Europa.
Em um segundo tipo de vacinas vetorizadas, o vetor no se multiplica no hospedeiro. Agindo como
uma seringa molecular, ele introduz, na clula, o gene codificador do antgeno. Um vetor deste tipo, o
canarypox, que se multiplica em aves, exclusivamente, utilizado na vacinao contra as doenas de
Marek e Gumboro. Existem 12 vacinas vetorizadas para uso veterinrio, mas nenhuma aprovada para
uso humano.
A LTIMA GERAO
A tecnologia mais promissora parece ser a das vacinas genticas, tambm denominadas vacinas de
DNA nu. Estas consistem de um plasmdeo com uma construo gnica que inclui o gene codificador
do antgeno. Injetado diretamente no msculo, o DNA ir penetrar nas clulas dendrticas,
apresentadoras de antgeno. Estas migraro at os rgos linfoides, onde sintetizaro o antgeno,
estimulando uma resposta imune de tipo celular que permitir imunizar o hospedeiro.
Esta tecnologia teria uma vantagem fundamental, por ser um mtodo genrico que facilita o
desenvolvimento e produo de novas vacinas (Figura 17.4). Estas podero ser elaboradas
substituindo um gene por outro no cassete de expresso gnica, o que diminuiria os custos e o tempo
necessrio para responder a uma emergncia sanitria. Tambm se poderia conseguir uma
supervacina com vrios genes codificadores de antgenos, capaz de imunizar o organismo contra vrias
doenas simultaneamente. Por outro lado, as vacinas de DNA estimulam ambas as respostas, humoral
e mediada por clulas.
Na rea veterinria, j foram aprovadas nos Estados Unidos vacinas de DNA contra o vrus IHNV,
causante da necrose hematopoitica em trutas e salmes; contra o vrus da doena do oeste do Nilo,
que ataca os equinos; contra o melanoma canino e para terapia gnica relacionada liberao
hormonal do fator de crescimento em sunos.
Na rea humana, ainda em fase experimental ou em testes clnicos, se encontram em andamento
vrias vacinas deste tipo contra HIV/AIDS, malria, herpes, tuberculose, hepatite B, influenza, rotavrus
etc.

220

BIOTECNOLOGIA E SADE / VACINAS

FIGURA 17.4. Os diferentes tipos de vacinas

Tipos de vacinas

V. patognico

V. relacionado

V. atenuado

V. morto

Subunidades

Recombinante

Transfeco

Linfcitos
BeT

Doena e recuperao
Imunidade adquirida
(espontnea)

Imunidade adquirida
(artificial)

--------------

A PRODUO DE VACINAS
PESQUISA E DESENVOLVIMENTO
Para chegar a ser comercializada, uma vacina deve cumprir etapas sucessivas de pesquisa,
desenvolvimento e operaes industriais, que podem demandar em mdia 12 anos de trabalho e
investimento.
A etapa exploratria tem uma durao de 2 a 4 anos e se inicia nas bancadas de um laboratrio de
pesquisa, onde sero identificados os antgenos naturais ou sintticos que podem prevenir ou tratar
uma doena.
Segue uma etapa pr-clnica de 1 a 2 anos de durao, que pode envolver pesquisadores de uma
indstria privada. Os experimentos so realizados em cultivos de clulas ou de tecidos e, a seguir, com
animais de laboratrio (camundongos, cobaias e/ou macacos). Depois de comprovar sua capacidade
de imunizar um ser vivo, seleciona-se o melhor candidato vacinal. Os estudos tambm permitem obter
uma estimativa sobre a dose a ser aplicada em etapas posteriores e a forma de administrar a vacina.
A primeira fase dos estudos clnicos em seres humanos inicia-se em um grupo de 20 a 80 voluntrios
adultos e deve ser realizada no pais de produo da vacina, mesmo quando o produto no se destine
a essa populao. Os participantes so monitorados bem de perto, a fim de verificar a segurana

221

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(toxicidade e farmacocintica) do candidato vacinal. Se a vacina for desenhada para crianas, os testes
devem ser iniciados com adultos e jovens.
A segunda fase envolve 80 a 300 pessoas e inclui alguns indivduos da populao alvo, isto ,
pertencentes aos grupos de risco de contrair a doena. Nesta fase os testes incluem um grupo placebo
e visam estudar a imunogenicidade e o efeito protetor da vacina (fase 2 a), isto , sua eficcia por
exposio com inculos padronizados do agente infeccioso. Tambm se avalia a relao dose-resposta
e sua eficcia por exposio natural infeco em reas de transmisso (fase 2b), assim como o melhor
calendrio de vacinaes e a forma de aplicao.
A terceira fase, que envolve milhares de pessoas, testa a eficcia do candidato vacinal em proteger
os indivduos vacinados contra a doena e a ausncia de fatores adversos que possam ter sido
inadvertidos em ensaios com uma amostra menor de pessoas. Testes randomizados, aplicados em
duplo-cego, permitem comparar o efeito da vacina experimental e o de um placebo, seja este uma
soluo salina, outra vacina ou qualquer outra substncia.
A durao total das trs fases correspondentes aos estudos clnicos de 6 a 8 anos para as vacinas
humanas. Se os resultados dos estudos clnicos no forem satisfatrios, ser necessria a realizao
de estudos adicionais, chegando, eventualmente, a interromper os estudos clnicos e proceder
escolha de outro candidato vacinal. Contudo, uma vez comprovado que a vacina segura e eficiente,
a indstria farmacutica poder solicitar aos rgos competentes a licena para comercializar o
produto. Esta etapa dura de 12 a 18 meses.
A liberao da vacina marca o incio do processo de manufatura e da fase de vigilncia
farmacolgica, um monitoramento amplo e rigoroso que coleta toda informao sobre algum efeito
adverso que possa ocorrer. Em 1999, por exemplo, uma primeira vacina contra o rotavrus teve que
ser retirada do mercado em consequncia de alguns casos de intussuscepo relacionados com sua
aplicao.
As vacinas veterinrias passam pelas mesmas etapas, mas as exigncias so menores. possvel
simplificar os testes com animais de laboratrio e testar o candidato vacinal no animal para o qual
destinado o produto. O nmero de indivduos necessrios para os testes clnicos tambm menor.

O MARCO TICO
As pesquisas com seres humanos e, por conseguinte, todos os testes clnicos, devem ser desenvolvidos
dentro do marco tico elaborado pelo tribunal de Nuremberg, por ocasio do julgamento de 20
mdicos condenados como criminosos de guerra, devido aos brutais experimentos realizados com
prisioneiros durante a Segunda Guerra Mundial.
Segundo o Cdigo de Nuremberg (1949), os experimentos em seres humanos devem visar o bem
da sociedade e ser levados a cabo por pessoas cientificamente qualificadas. Os participantes recebero
todas as explicaes necessrias, antes de dar livremente o seu consentimento. As experincias sero
a continuao de outras que, realizadas em modelos animais, permitam prever um resultado tal que
justifique a incluso de testes em seres humanos. O sofrimento mental e fsico ser evitado, e as
pessoas recebero proteo em caso de ocorrer algum efeito adverso.
Nos testes clnicos de avaliao de uma nova vacina, as pessoas participam voluntariamente e so
informadas sobre os riscos e benefcios de sua participao. Contudo, discute-se a validao do
consentimento informado quando os testes so realizados em populaes de escassos recursos, com
baixos nveis de instruo.

222

BIOTECNOLOGIA E SADE / VACINAS

OPERAES INDUSTRIAIS
Na produo de vacinas, cada lote da vacina deve passar por controles estritos, a fim de garantir a
qualidade e manter a credibilidade no s da indstria, mas da prpria vacinao. Aplicada
correntemente em vrios pases, a vacina Salk de vrus inativados considerada hoje uma das vacinas
mais seguras. Porm, um problema na fabricao da vacina no Laboratrio Cutter (Estados Unidos)
causou a inativao incompleta de algumas partculas virais e, duas semanas depois de liberada, em
1954, induziu 260 casos de plio e 10 mortes.
Uma vacina deve reunir vrias qualidades, principalmente eficincia, pureza, segurana e baixo
custo. O processo industrial varia em funo do microrganismo utilizado e responde a critrios estritos
de qualidade (BPL ou Boas Prticas de Laboratrio; BPF ou Boas Prticas de Fabricao). Atualmente,
o controle de qualidade ocupa 70% do tempo dedicado produo de uma vacina.
As bactrias multiplicam-se em biorreatores, em condies que dependem da produtividade do
prprio processo fermentativo e do tratamento posterior, para a extrao de antgenos ou de toxoides.
Vacinas antibacterianas podem ser preparadas em grandes quantidades, com equipamento
relativamente simples.
As protenas recombinantes de vrus ou bactrias so produzidas em biorreatores, por leveduras,
ou em cultivos celulares. Ao processo de extrao seguem-se vrias operaes de purificao por
tcnicas complexas (ultrafiltrao, cromatografia em coluna etc.).
Os vrus, parasitas obrigatrios, precisam de clulas para se multiplicar. Tradicionalmente, utilizamse pele de bezerro e ovos de galinha, mas a tendncia atual substitu-los por culturas celulares que
possibilitem o desenvolvimento de vacinas virais para uso humano (poliomielite, sarampo, rubola,
influenza, caxumba, raiva) e veterinrio (febre aftosa, raiva, encefalite equina, doena de Mareck e de
Newcastle etc.).
Alm do antgeno, na formulao de uma vacina incluem-se outras substncias: os adjuvantes, que
permitem dosagens menores por serem capazes de estimular a resposta imune; os estabilizantes, que
impedem as alteraes devidas ao calor, luz ou umidade; os conservantes, nos frascos com doses
mltiplas.
Uma das tendncias atuais na administrao de vacinas a reduo do nmero de doses por
imunizao simultnea, em uma mesma injeo, para vrias doenas (trplice viral ou trplice
bacteriana). Tambm se d preferncia a sistemas que diminuam a necessidade de refrigerao, que
representa 15% dos custos dos programas de vacinao.
Outras novidades viro da procura de novas formas de aplicao para substituir o uso de seringas,
tais como pistolas, gis, adesivos cutneos, cpsulas, tabletes, inaladores e sprays nasais. Estes ltimos
comearam a ser utilizados na aplicao de vacinas contra a gripe (FluMist, nos Estados Unidos;
NasVax, em Israel). As vacinas orais tm importantes aplicaes na rea veterinria.
Plantas e animais transgnicos produtores de antgenos podero revolucionar alguns aspectos da
produo de vacinas. A ideia de ter vacinas comestveis e de poder vacinar as crianas com uma
banana em vez de uma injeo muito sedutora. Contudo, alguns problemas de segurana exigem
ateno, como, por exemplo, o risco de se misturar bananas-vacina e bananas-alimento,
contaminando os alimentos ou dificultando o reconhecimento de um medicamento como tal.
Provavelmente, os antgenos sero extrados e administrados em tabletes ou cpsulas.
Em 2005, Dow AgroSciences registrou nos Estados Unidos uma vacina para a doena de Newcastle em
aves, produzida na planta aqutica Lemna. Encontra-se em andamento uma nova vacina contra a febre
amarela em plantas de tabaco, em um centro a ser implantado no Cear, pela Fundao Oswaldo Cruz
(Fiocruz) em parceria com instituies dos Estados Unidos.

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O MERCADO DAS VACINAS


A produo de vacinas uma atividade menos rentvel que a produo de medicamentos. Contudo, a
chegada das novas tecnologias com base biolgica despertou novamente o interesse do setor
farmacutico. Atualmente, cinco grandes empresas (Merck, Pfizer, Sanofi-Pasteur, GlaxoSmithKline e
Novartis) concentram de 80% a 90% do mercado global de vacinas humanas, estimado em US$ 61
bilhes em 2020. O resto est ocupado por 200 a 250 empresas que desenvolvem mais de 600
produtos.
O processo de desenvolvimento de uma nova vacina leva em mdia 12 anos, a um custo que pode
variar entre US$ 300 milhes e US$ 1 bilho. Alguns produtos, como a vacina antimeningococo Prevnar
(Pfizer), atingiram nveis de vendas que superam o bilho de dlares anuais.
Estima-se que o mercado aumentar significativamente nos prximos anos, em funo do
crescimento do setor adulto e, fundamentalmente, das vacinas teraputicas, que sero analisadas no
Captulo 20. Tambm aquecero o mercado produtos novos, tais como as vacinas para a gripe
(influenza) e as vacinas que protejam o turista (febre amarela, dengue) ou diminuam o abuso de drogas
(nicotina).
Em meio a numerosas crises econmicas, vrios pases latino-americanos descuidaram de suas
estruturas cientficas e tecnolgicas e passaram a importar as vacinas necessrias para a populao.
No entanto, e por diferentes motivos, depois de vrias dcadas de retrao na rea de produo de
vacinas, esta comea a ser considerada novamente uma rea estratgica.
Para os pases em desenvolvimento, o estmulo produo nacional de vacinas parte das
obrigaes frente a sua populao. Em termos de sade pblica, trata-se de um setor que no pode
ser negligenciado e no qual preciso manter independncia.
Alguns pases, como Brasil, China e ndia, contam com instituies de pesquisa e desenvolvimento
para a produo de imunobiolgicos, sendo frequentes as parcerias com as grandes empresas
farmacuticas. Fundaes privadas, como a Bill & Melinda Gates Foundation, fornecem fundos em prol
de melhores e novas vacinas, que protejam as crianas das doenas. Para organizaes internacionais
como a WHO, a vacina a mais simples das medidas preventivas possveis na rea de sade.
Nos prximos anos, haver progressos na preparao das vacinas preventivas e no
desenvolvimento de produtos novos, como as vacinas teraputicas. Entretanto, esperam-se vacinas
novas ou melhores contra as doenas que afetam um nmero altssimo de pessoas, tais como
HIV/AIDS, malria, dengue e tuberculose.
UM SETOR ESTRATGICO PARA A SOCIEDADE
No Brasil, onde existe uma tradio de mais de um sculo na produo de imunobiolgicos (vacinas,
soros, hemoderivados e reativos para diagnstico), as vendas chegam a US$ 600 milhes por ano, o
que representa 3% do mercado da indstria farmacutica.
At a dcada de 1960, muitas vacinas humanas e veterinrias eram fabricadas no pas. A perda da
autossuficincia criou uma situao crtica quando, em incios da dcada de 1980, uma multinacional
retirou-se do mercado, deixando a populao em risco de ficar sem vacina trplice, soros antitxicos e
antiofdicos. Evidenciou-se nessa ocasio que a sociedade deve ter o acesso garantido s vacinas.
O Programa de Autossuficincia Nacional de Imunobiolgicos (PASNI) de 1985 reverteu essa situao,
mediante uma estratgia de substituio das importaes que estimulou a modernizao das
instalaes e a incorporao de novas tecnologias em cinco dos laboratrios oficiais: Instituto Butantan
(SP), Instituto de Tecnologia em Imunobiolgicos (Biomanguinhos, Fiocruz, RJ), Instituto Vital Brazil
(IVB,RJ), Instituto de Tecnologia do Paran (Tecpar, PR), Fundao Ezequiel Dias (Funed, MG).

224

BIOTECNOLOGIA E SADE / VACINAS

Atualmente, o Brasil produz 75% das vacinas que so distribudas pelo servio pblico, a metade delas
produzida pelo Butantan (Tabela 17.1). Vrias vacinas esto sendo desenvolvidas em parcerias entre
as instituies citadas ou com laboratrios estrangeiros (Sanofi-Pasteur, GlaxoSmithKline, Instituto
Finlay etc.). Algumas das vacinas resultantes desses convnios protegem a populao de sarampo,
caxumba e rubola (trplice viral), influenza, rotavrus, raiva (cultivo do vrus em clulas Vero) etc.
Os diferentes acordos de cooperao internacional entre os pases latino-americanos tambm
tero uma importncia fundamental para o desenvolvimento de polticas de sade pblica que
garantam populao o acesso s vacinas.
-------------TABELA 17.1. A produo de vacinas no Brasil
INSTITUIO

VACINAS

Instituto Butantan

Dupla, Infantil DT (difteria e ttano)


Dupla, Adulto dT (difteria e ttano)
Trplice DTP (difteria, ttano e coqueluche ou pertussis)
Hepatite B recombinante
Influenza sazonal trivalente
Raiva (VR/VERO)
HPV, em parceria com a MSD (Merck)
Hepatite A, em parceria com a MSD (Merck)
dTpa (difteria, ttano e coqueluche ou pertussis), para gestantes, em parceria
com GSK (GlaxoSmithKline)

Laboratrio BioManguinhos

Poliomielite inativada (VIP) e oral (VOP)


Trplice viral (sarampo, caxumba e rubola)
Tetravalente viral (catapora, sarampo, caxumba e rubola)
HIB (meningite e pneumonia)
Tetravalente viral HIB, DTP (Difteria, ttano, coqueluche ou pertussis e HIB)
Pneumoccica -10 valente
Febre amarela
Rotavrus humano, em parceria com GSK (GlaxoSmithKline)

Tecpar

Antirrbica de uso veterinrio e humano (PV-BHK)

Fundao Ataulfo de Paiva

Antituberculose (BCG)

Fundao Ezequiel Dias

Vacina meningoccica C

AS VACINAS E A ERRADICAO DA DOENA


Dispomos hoje de vacinas para numerosas doenas que afetaram a humanidade durante sculos. De
um modo geral, elas protegem 80% a 95% das pessoas imunizadas, com baixssimas frequncias de
efeitos adversos. O calendrio de imunizaes depende das autoridades nacionais e, em vrios pases,
a vacinao no obrigatria.

225

M.A.MALAJOVICH - BIOTECNOLOGIA (2016)

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O impacto das vacinas na morbidade infantil relega ao passado algumas das temveis doenas que
assolaram o sculo XX: difteria, coqueluche, ttano, poliomielite, meningite, caxumba, sarampo,
rubola, varicela). Lamentavelmente, alguns setores da sociedade se recusam a aceitar o bvio.
Um dos ataques mais desonesto s vacinas foi a publicao em uma revista cientfica de um artigo
relacionando-as com o autismo. A revista teve que se retratar e o trabalho foi declarado fraudulento
pelo Conselho Geral de Medicina do Reino Unido (2011). Organizaes como o CDC (do ingls, Centers
for Disease Control and Prevention), o Instituto de Medicina da Academia Nacional de Cincias (Estados
Unidos) e o Servio Nacional de Sade (Reino Unido) no encontraram relao entre as vacinas e o
autismo.
Em algumas comunidades, a resistncia s vacinas subsiste por motivos culturais, religiosos ou
polticos. Algumas das razes invocadas so: intromisso na liberdade individual, desafio vontade
divina, degradao dos costumes ou interferncia no desenvolvimento nacional. Algumas
comunidades descuidam da preveno quando a doena passa um tempo sem se manifestar,
favorecendo, assim, a reapario epidmica da doena.
O impacto das vacinas pode relegar ao passado algumas das temveis doenas que assolaram a
humanidade, porm, isso no significa que tenham sido totalmente erradicadas. As vacinas
mostraram-se eficazes para erradicar mundialmente a varola e reduzir enormemente o nmero de
casos de poliomielite, na maioria dos pases. Em relao gripe, ainda no h uma vacina capaz de
estimular a imunidade a todas as linhagens do patgeno.
A VAROLA
A varola uma doena eruptiva contagiosa, transmitida por um poxvrus. A incubao dura de 7 a 17
dias; os sintomas principais so febre alta, fadiga e uma erupo de vesculas em todo o corpo. A
mortandade de 30%, e os sobreviventes conservam leses caractersticas.
A varola teria sido levada at a ndia por mercadores do Egito, onde vitimara o fara Ramss V. A
doena se alastrou at a China (sculo I) e o Japo (sculo VI), retornando mais tarde ao Oriente Mdio
e alcanando a Europa com os Cruzados (sculo XI-XII). A varola no fazia distino entre camponeses,
burgueses ou nobres, cobrando vidas de humildes e poderosos, como o rei da Frana Lus XV.
Quem adoece uma vez e se recupera, no adoece uma segunda vez; essa observao deu lugar
primeira estratgia de combate varola. No Oriente (ndia e China, sculo XI), inoculavam-se as
pessoas sadias com o pus das vesculas de doentes com uma forma benigna da varola. A maioria das
pessoas inoculadas manifestava uma doena leve e ficava protegida pelo resto de sua vida. A varola
regrediu entre os povos que praticavam a variolizao, embora 1% a 2% das pessoas inoculadas
morresse ao desenvolver a doena em sua forma mais grave.
Em 1520, com a chegada ao Mxico de um escravo contaminado, a varola entrou no continente
americano. O convvio de vrios sculos com a doena desenvolveu nos europeus alguma forma de
resistncia, mas, para as populaes amerndias, o contato com um germe novo significou o extermnio
de 95% de seus integrantes, em menos de 200 anos.
No sculo XVIII, a prtica da variolizao foi introduzida na Inglaterra. Um inoculador, o mdico
Edward Jenner, observou que as ordenhadeiras nunca desenvolviam a varola. Segundo uma crena
popular, essa resistncia era consequncia da contaminao com a varola das vacas (variola vacum
ou vacina), uma doena inofensiva que se manifesta por pstulas no bere das vacas. Em 1796, Jenner
inoculou a variola vacum em uma criana e, poucos dias mais tarde, a varola humana; a criana no
adoeceu. A partir dessa experincia, a vacinao se estendeu rapidamente por toda Europa.
No Brasil, a vacinao foi introduzida em 1840 pelo Baro de Barbacena. Porm, quando, em 1904,
sendo Oswaldo Cruz o Diretor Geral de Sade Pblica, o governo decretou a vacinao obrigatria, a
resistncia se manifestou no Rio de Janeiro sob a forma de motins, estourando uma revolta que

226

BIOTECNOLOGIA E SADE / VACINAS

obrigou o governo a rever a medida. Contudo, a populao terminou aceitando a vacinao depois da
violenta epidemia de varola de 1908, que teve 10 mil casos diagnosticados.
Apesar dos surtos terem-se espaado, 300 milhes de pessoas morreram de varola no sculo XX.
Na dcada de 1970, a WHO substituiu a vacinao em massa por uma campanha de erradicao em
anel. A estratgia consiste em isolar os pacientes cada vez que um caso novo detectado, e vacinar
rapidamente todas as pessoas que tiveram algum contato com o doente. Como a vacina tem um efeito
muito rpido, os resultados foram extraordinrios. Contudo, por ocasio de um surto havido na
Iugoslvia (1972), foi necessrio complementar as medidas com uma vacinao em massa. O ltimo
caso de varola registrado ocorreu na Somlia em 1977.
Uma vez confirmada a erradicao da varola em 1979, o vrus da varola comeou a ser eliminado
dos laboratrios para evitar acidentes como o ocorrido um ano antes, quando o escapamento do vrus
de um laboratrio da Universidade de Birmingham (Reino Unido) causou a morte de duas pessoas.
Preventivamente, dois estoques virais foram conservados, um deles no CDC (Center for Disease Control
and Prevention, Atlanta, Estados Unidos), o outro no VECTRO (Instituto para Preparaes Virais,
Moscou, Rssia). Apesar de estar prevista sua destruio no ano 2000, esta no ocorreu.
Ningum pode afirmar que no existe algum estoque de vrus em algum lugar, e a mera
possibilidade de um ato de terrorismo assustadora. Em caso de um surto de varola, os mdicos
teriam dificuldades em diagnosticar uma doena que hoje est restrita aos livros. A populao deixou
de ser vacinada em fins da dcada de 1970, de modo que boa parte da populao nunca foi imunizada;
sem doses de reforo, o restante pode ter perdido a imunidade. Por outro lado, a validade de um
pequeno estoque de vacinas que sobrou de dcadas atrs est comprometida, e a aplicao da vacina
contraindicada em pessoas com eczemas ou imunodeprimidas, muito mais frequentes que no incio
do sculo XX.
Mesmo tendo erradicado a varola, precisaramos de vacinas antivarilicas eficientes e seguras,
formuladas com tecnologia recente. Algumas j se encontrariam na etapa dos estudos clnicos.
A POLIOMIELITE
A poliomielite ou paralisia infantil uma doena causada por um picornavrus (poliovrus), transmitido
pela gua. O perodo de incubao de 4 a 35 dias, e 10% das pessoas infectadas desenvolvem os
seguintes sintomas: febre, fadiga, dor de cabea, vmitos, constipao ou diarreia, rigidez na nuca e
dor nas extremidades.
Em 1% dos casos, o vrus da poliomielite passa do intestino para a corrente sangunea e invade o
sistema nervoso central, onde se multiplica, destruindo os neurnios motores. As pessoas afetadas
desenvolvem a forma paraltica da doena, e, se o vrus se alojar no bulbo, os pacientes precisaro de
ajuda mecnica para respirar. A doena pode deixar sequelas motoras permanentes (SPP ou sndrome
post-plio).
Apesar de haver evidncias da doena no Antigo Egito, os primeiros surtos epidmicos ocorreram
em fins do sculo XIX. Em 1908, confirmou-se que a poliomielite uma doena infecciosa. Na primeira
metade do sculo XX, as epidemias deixaram numerosas vtimas, principalmente entre as crianas,
mas tambm entre os adultos como, por exemplo, Franklin Delano Roosevelt, presidente dos Estados
Unidos.
As melhores condies higinicas do sculo XX diminuram o contato prematuro da populao com o
vrus, suspeitando-se que a exposio de um grupo vulnervel ao vrus, em idade escolar, foi um dos
fatores desencadeante dos surtos. Na dcada de 1950, a doena era aterradora. Quando aparecia a
plio, as escolas fechavam e as crianas eram privadas do contato entre elas, permanecendo isoladas
e trancadas em casa, at o perigo passar.

227

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A descoberta de uma vacina teve uma repercusso extraordinria. Em 1954, comeou a ser aplicada a
vacina de vrus inativados de Jonas Salk (IPV, do ingls, injetable polio vaccine), elaborada com trs
tipos de poliovrus, cultivados em rim de macaco, e inativada com formalina. Em 1963, houve uma
segunda opo, a vacina de vrus atenuados de Albert Sabin (OPV, do ingls oral polio vaccine).
Modificaes nos processos produtivos aumentaram significativamente a eficincia de ambas as
vacinas.
Ambas tm vantagens e desvantagens. Para ser aplicada, a IPV demanda agulhas e seringas
estreis, um procedimento mais caro e complicado que a ingesto das gotas da OPV. Em contrapartida,
por ser uma vacina de vrus atenuados, a OPV exige a manuteno da rede de frio, o que a IPV dispensa.
Do ponto de vista da eficincia, a OPV confere uma imunidade mais ampla porque abrange a
mucosa digestiva, impedindo a entrada do vrus selvagem no organismo e a infeco das clulas
nervosas. Contudo, como o vrus atenuado da vacina, eliminado nas fezes, permanece no ambiente, a
OPV acaba por atingir outras pessoas, afetando os no vacinados e os imunodeprimidos presentes no
entorno. Por isso, alguns pases preferem a IPV e outros a OPV.
Novas vacinas esto sendo pesquisadas como, por exemplo, uma que leva o gene codificador de
uma protena do capsdeo viral, inserido em Escherichia coli. A sntese dessa protena por uma bactria,
que coloniza normalmente o intestino, possibilitaria a imunizao do hospedeiro.
Quando em 1992-1993, nos Pases Baixos, um surto da doena atingiu um grupo que se ope
vacinao por motivos religiosos, verificou-se que o vrus selvagem continua presente no ambiente.
Em 2000, a plio reapareceu no Haiti e na Repblica Dominicana. Na ocasio, revelou-se que o vrus
atenuado pode reverter a sua forma patognica, de modo que, mesmo tendo desaparecido a doena,
a vacinao ter que ser mantida. Em 2004, com a apario de um novo surto de plio em pases do
oeste africano, confirmou-se que o objetivo ainda se encontra distante.
Apesar do sucesso alcanado pela vacinao, a erradicao da doena parece ser bem mais difcil
do que o esperado. Em 2015, a plio ainda era endmica no Paquisto e no Afeganisto, e alguns surtos
ocorreram em Madagascar, Guin e Ucrnia. Alguns pases so vulnerveis, por estar situados em
regies onde as campanhas de vacinao so complexas e muitas vezes interrompidas por conflitos
blicos, corrupo e/ou superstio (Camares, Guin Equatorial, Etipia, Iraque, Nigria, Somlia,
Sudo do Sul e a Repblica rabe Sria).
A INFLUENZA
A influenza ou gripe uma doena transmitida por um ortomixovrus (influenzavrus) e apresenta os
seguintes sintomas: febre, dores musculares, garganta inflamada, fadiga e dor de cabea. O material
gentico RNA que est rodeado por um capsdeo proteico e um envelope, derivado da membrana
celular do hospedeiro. O RNA confere a seu portador uma enorme variabilidade porque, diferente do
DNA, os erros de replicao no so reparados por nenhum mecanismo celular.
Em funo das protenas do capsdeo, classificam-se os influenzavrus em trs grupos: A, B, e C. Os
vrus dos grupos B e C infetam exclusivamente seres humanos e no causam epidemias. Os vrus da
influenza da categoria A so os mais perigosos, porque se multiplicam tanto no homem como em
outras espcies (aves, sunos, cachorros, cavalos, focas, baleias). As variantes de duas protenas do
envelope, a hemaglutinina (H) e a neuraminidase (NA), so utilizadas para identificar os diferentes
subtipos da categoria A: H1N1, H5N1 etc.
Ao pular de uma espcie a outra, a recombinao do material gentico de diferente origem origina
vrus com caractersticas novas. Basta que esse vrus infecte o homem e sofra uma mutao que
possibilite a transmisso pessoa a pessoa para desencadear uma pandemia.
Ao longo do sculo XX, vrias pandemias de gripe assolaram a terra. Em 1918, um surto de gripe
sobreveio na Espanha, espalhando-se pelo mundo e causando a morte de 40 a 70 milhes de pessoas.

228

BIOTECNOLOGIA E SADE / VACINAS

O vrus H1N1 da gripe espanhola circulou durante vrias dcadas, embora tenha perdido parte de sua
patogenicidade a partir de 1920.
Em 1957, uma segunda pandemia originou-se na China. A gripe asitica (H2N2) causou a morte de
2 milhes de pessoas. Poucos anos mais tarde, em 1968, o subtipo H3N2 apareceu em Hong Kong e
alastrou-se pelo mundo, deixando 47 mil mortos.
A gripe aviria (H5N1) surgiu na sia, em 1997. Embora a transmisso tenha sempre ocorrido no
sentido ave-ave e ave-homem, milhares de aves foram sacrificadas durante os surtos de 2003 e 2004,
devido ao temor de uma mutao que possibilitasse a transmisso do homem ao homem. A apario
do subtipo H5N1 demandou a modificao dos mtodos tradicionais de produo de vacinas em
embries de galinha. Transferindo a informao gentica relevante do vrus para um vrus de
laboratrio, obteve-se um prottipo viral, codificador dos antgenos correspondentes ao H5N1 que
pode crescer em embries de galinha.
A gripe A (H1N1) ou gripe suna apareceu no Mxico em 2009. Diferentemente das variantes
anteriores, esta causou mais vtimas entre os jovens e as mulheres grvidas. A resistncia dos mais
velhos poderia ser explicada por um contato prvio com vrus de tipo H1N1, que circularam por um
tempo na populao.
A existncia de medicamentos antivirais contribuiu para o controle da pandemia. A rpida
mobilizao das autoridades nacionais e internacionais, assim como das empresas farmacuticas, foi
decisiva para a obteno de uma vacina adequada. Contudo, algumas fraquezas foram expostas. Uma
delas a dificuldade de produzir rapidamente uma vacina, dado que, para obter 300 milhes de doses
de vacina, so necessrios 900 milhes de ovos embrionados. Em caso de urgncia, a produo em
cultivos celulares resultaria mais rpida.
Mutao do RNA e recombinao de RNAs de diferente origem so as duas estratgias que explicam
a enorme variabilidade do vrus da influenza e justificam a necessidade de mudar continuamente os
antgenos da vacina. O candidato vacinal de hoje pode ser incuo amanh, sendo difcil prever contra
quais antgenos do vrus dirigir a vacina. Por isso, as vacinas contra a gripe so preparadas anualmente,
escolhendo as linhagens que se supe que causaro a prxima epidemia.
TUBERCULOSE, MALRIA E HIV/AIDS
Ainda no temos vacinas para a tuberculose, a malria ou o HIV/AIDS, trs doenas que causam um
elevado nmero de mortes.
A malria uma doena causada por um protozorio (Gnero Plasmodium), transmitido atravs da
picada de um mosquito (Gnero Anopheles). O decrscimo da incidncia global da doena em 37%, e
da mortalidade em 60%, observado a partir do ano 2000, deve ser atribudo preveno e ao
tratamento dos doentes. No entanto, em 2015 registraram-se no mundo inteiro 214 milhes de casos.
A maior dificuldade no desenho de uma vacina contra a malria reside no complexo ciclo do
parasita, que se reproduz na glndula salivar do mosquito, se desloca na corrente sangunea do
hospedeiro, se replica no fgado e infecta as hemcias para multiplicar-se novamente. As vacinas em
andamento, dirigidas a uma nica etapa da vida do parasita, s conseguem imunizar parte das crianas
vacinadas. Para ser eficiente, a vacina teria que combater o parasita em cada etapa do ciclo.
Uma possibilidade engenhosa, em fase laboratorial, prope induzir, no homem, anticorpos contra a
forma do parasita que reside nas glndulas salivares do mosquito. Na picada, o Anopheles ingeriria os
anticorpos, e estes bloqueariam a reproduo do parasita.
A tuberculose uma doena causada pelo bacilo de Koch (Mycobacterium tuberculosis),
transmitido pelo ar. O declnio de 47% de casos, observado entre 1990 e 2015, deve ser atribudo aos
melhores mtodos de diagnstico e tratamento. No entanto, em 2014, registraram-se 9,6 milhes de
casos.

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Nos alvolos pulmonares, as bactrias so fagocitadas pelos macrfagos, dentro dos quais elas se
multiplicam lentamente, sem ser destrudas. Em algumas pessoas, a infeco permanece latente, em
outras se manifesta com diferentes graus de gravidade.
A vacina existente utiliza o bacilo atenuado BCG (Bacilo de Calmette-Gurin) para induzir imunidade
ao bacilo de Koch. A vacina eficiente em crianas pequenas, mas no imuniza crianas mais velhas
ou adultos. Por outro lado, a eficcia da vacina diminui nas regies perto do Equador, onde h
numerosas infeces por micobactrias aparentadas. As pesquisas atuais visam entender melhor a
imunidade no adulto e as caractersticas hereditrias que tornam as pessoas mais susceptveis.
Por enquanto, a mais insidiosa das trs doenas a HIV/AIDS, porque destri a capacidade do
sistema imune de responder a infeces oportunistas. Os primeiros casos apareceram em 1981 e se
estenderam rapidamente pela populao. Em 2013, 35 milhes de pessoas viviam com HIV/AIDS e 1,5
milho de pessoas morreram de doenas ligadas a AIDS.
A maior parte das novas contaminaes ocorre nos pases em desenvolvimento, especialmente o
sul da frica e a sia. No rasto da HIV/AIDS (e da adio a drogas injetveis), a tuberculose reaparece
com germes resistentes aos medicamentos.
Apesar das medidas preventivas e dos grandes progressos alcanados no tratamento da HIV/AIDS,
o ideal seria encontrar uma vacina. As dificuldades so enormes porque, para ativar a resposta imune,
devem-se ativar as clulas T auxiliadoras que a coordenam, e so justamente estas as que o vrus
destri. Como geralmente o vrus penetra no organismo por via anal ou vaginal, permanecendo um
tempo na corrente sangunea antes de invadir as clulas, a vacina deveria estimular ambas as vias, a
humoral e a celular, e se estender s mucosas.
Na luta contra o HIV/AIDS, diversas estratgias so possveis; uma delas seria impedir a invaso do
organismo pelo vrus, a outra, ajudar o organismo a impedir a progresso e/ou a transmisso da
doena. A falta de um modelo animal adequado e as frequentes mutaes do vrus complicam a tarefa.
Embora os resultados obtidos at agora tenham sido decepcionantes, esto sendo realizados os
estudos clnicos correspondentes a vacinas de subunidades, de vetores virais recombinantes e de DNA.
A AMEAA DAS DOENAS EMERGENTES
medida que eliminamos ou controlamos doenas, outras novas emergem e algumas das antigas
reaparecem. Os microrganismos adquirem resistncia aos medicamentos, e a destruio de habitats
naturais deixa o homem a merc de agentes infecciosos com os quais no teve contato prvio. O
crescimento da populao e sua concentrao em zonas urbanas, as mudanas climticas, o
incremento das viagens internacionais e do comrcio, assim como as mudanas comportamentais, so
outros fatores determinantes para a disperso de agentes infecciosos.
Alguns exemplos de doenas emergentes so a gripe espanhola, a hepatite B, as febres
hemorrgicas (Junn, Lassa, Marburg, Ebola etc.), a doena de Lyme, a BSE (encefalopatia
espongiforme bovina), a doena dos Legionrios, o HIV/AIDS, a Escherichia coli 0157:H7, a doena do
vrus do Nilo ocidental, o SARS (do ingls, severe acute respiratory), o MERS (do ingls, middle east
respiratory sindrome) e a dengue. Vrias dessas doenas contam com testes diagnsticos, e, para
algumas, j temos vacinas (hepatite B, doena de Lyme). Testes clnicos em seres humanos esto sendo
realizados com vacinas contra HIV/AIDS, malria, dengue, clera etc.
Entre 2013 e 2016, uma epidemia de Ebola devastou a frica ocidental, afetando Guin, Libria e
Serra Leoa, e alastrando-se at o Senegal, a Nigria e o Mali. O vrus de Ebola comum na regio, e
embora sua forma de transmisso ao homem ainda no tenha sido totalmente esclarecida, sabe-se
que envolve vrios animais da regio (chimpanzs, gorilas e morcegos).
As mudanas evolutivas do vrus parecem ter infludo menos na gravidade da epidemia que as
condies sociais e culturais existentes: infraestrutura destruda por dcadas de guerras civis;

230

BIOTECNOLOGIA E SADE / VACINAS

dificuldade das equipes mdicas em distinguir entre diversas infeces com sintomas parecidos;
prticas religiosas de sepultamento dos doentes facilitando o contgio.
Mais de 28 mil casos e 11 mil mortes abalaram a j comprometida estrutura social e econmica dos
pases afetados. Os surtos que ocorreram nos Estados Unidos e na Europa, originados por pessoal das
equipes mdicas transferido para tratamento em seus pases de origem, foram rapidamente
controlados. Tambm a Nigria conseguiu controlar um surto incipiente, utilizando a estrutura
sanitria criada, com o apoio de organizaes internacionais, para a erradicao da plio.
Nenhum pas est preparado para a emergncia de uma doena desconhecida. No entanto, a
epidemia de Ebola deixa duas lies: a necessidade de contar com testes de diagnstico rpidos e a
obrigao moral de manter em alerta uma infraestrutura sanitria slida; as vacinas sero de utilidade
mais adiante, em ocasio do prximo surto.
Atualmente, vrios pases de Amrica Latina (Brasil, Colmbia) enfrentam uma epidemia de
dengue, chikungunya e zika, trs doenas de origem viral transmitidas por mosquitos do gnero Aedes
(A. aegypti e A. albopictus), transmissores, tambm, da febre amarela. Existe uma vacina para a febre
amarela e encontram-se adiantadas duas vacinas contra a dengue (Sanofi-Pasteur e Butantan).
Os fatores determinantes da emergncia dessas doenas so as mudanas climticas, a abertura
de rotas comerciais, as viagens internacionais e, fundamentalmente, a falta de saneamento bsico,
porque facilitam a disperso e a proliferao do mosquito nas reas urbanas. Sistemas de atendimento
mdico precrios e falta de testes de diagnstico agravam a situao da regio.
A apario de numerosos casos de microcefalia, atribudos ao vrus zika, exige uma resposta rpida,
mas qual? Uma vacina demora em chegar, e por muito que se queira apressar, no h como diminuir
o tempo necessrio para fazer os testes clnicos pertinentes e produzir o nmero de doses necessrias.
O caminho parece ser impedir a multiplicao do mosquito, e vrias formas foram descritas no Captulo
11.
BIOTERRORISMO E BIOSSEGURIDADE
Esporos disseminados pelos correios causaram um surto de antraz, logo depois do atentado s torres
do World Trade Center (Estados Unidos, setembro de 2001), alertando o mundo sobre a ameaa de
bioterrorismo.
No foi a primeira vez que foram utilizadas armas biolgicas. Os romanos usavam animais mortos
para infectar os poos de seus inimigos. Antes de levantar o stio cidadela de Kaffa (Crimeia, 1346),
o exrcito trtaro de Janibeg catapultou para dentro das muralhas os mortos de peste, iniciando uma
terrvel epidemia que se difundiu na Europa e dizimou a populao. Na Amrica (do Sul e do Norte),
os colonizadores exterminaram tribos indgenas com cobertores contaminados com varola, deixados
como presente. Em 1941, durante o conflito sino-japons, o exrcito do Japo disseminou a peste
bubnica no norte da China, em cinco ocasies.
Estima-se que uma dzia de pases teria armas biolgicas de destruio em massa, envolvendo
aproximadamente 70 agentes infecciosos. Atualmente, ou em curto prazo, existem vacinas para alguns
deles (Bacillus anthracis, Clostridium botulinicum, Yersinia pestis, Francisella tulariensis, varola e
hantavrus). Entretanto, de um ponto de vista cientfico, sanitrio ou financeiro, a vacinao poderia
no ser o mtodo de combate mais eficiente. Por isso, boa parte do esforo antiterrorista est sendo
orientado atualmente para o melhoramento de diagnsticos e a procura de novos medicamentos
antivirais e antibacterianos.
Outro motivo de preocupao est na quantidade de informao referente ao genoma de
patgenos disponvel nos bancos de dados pblicos, porque existe o temor que esse conhecimento
possa ser utilizado para elaborar armas biolgicas.

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Em 2002, um grupo de pesquisadores americanos mostrou que partculas infecciosas sintticas de


poliovrus podem ser obtidas a partir da sequncia genmica disponvel na Internet. Esses
pesquisadores sintetizaram alguns fragmentos de DNA e encomendaram outros a empresas
especializadas. Juntando os pedaos, eles construram uma molcula de DNA de 7.500 pares de bases.
Depois de transcrever a informao e colocar o RNA em um meio com componentes celulares, eles
obtiveram partculas virais. Recentemente, outro grupo de pesquisadores utilizou o mesmo mtodo
para sintetizar o vrus da gripe espanhola.
No fim do ano 2011, pesquisadores holandeses e norte-americanos noticiaram ter conseguido
manipular o vrus H5N1 em laboratrio, tornando-o facilmente transmissvel em seres humanos. O
trabalho, que poderia servir tanto para elaborar uma vacina como para criar uma arma letal, levanta
o problema da liberao dos dados da pesquisa que, normalmente, so compartilhados por
pesquisadores de todos os pases.
O perigo do bioterrorismo no deve ser subestimado. Biosseguridade uma nova disciplina que
lida com a utilizao inadequada do conhecimento biolgico e, particularmente, com as pesquisas
consideradas de uso duplo, que podem ser utilizadas para o bem ou para o mal.

232

C A P T U L O 18

BIOTECNOLOGIA E SADE
OS TESTES DIAGNSTICOS

O conhecimento e a experincia do mdico so determinantes no reconhecimento dos sintomas de


uma doena. O diagnstico ser estabelecido a partir de vrios elementos, tais como a histria clnica
do paciente, a anamnese, os exames fsicos e uma bateria de anlises e/ou testes laboratoriais.
Solicitados pelo mdico, para monitorar o estado de sade do paciente, os testes de rastreio
identificam fatores qumicos, microbianos ou genticos que possam causar uma doena ou estar
associados a ela. Constituem uma rotina que varia dependendo do sexo e da idade do paciente. Os
resultados sero avaliados em relao a um conjunto de valores considerados normais e remetidos ao
mdico como uma fonte objetiva de informao.
Geralmente realizados em amostras de sangue e de urina, o objetivo desses testes detectar
qualquer disfuno, seja para induzir mudanas no estilo de vida do paciente e/ou para iniciar um
tratamento. Como exemplos, o hemograma, a anlise de urina, o lipidograma, a identificao do
antgeno prosttico para diagnstico de cncer etc.
Qualquer negligncia relativa adoo dos testes adequados pode ter consequncias graves para
a sade pblica. Em 1985, embora a empresa Abbott j tivesse no mercado um teste de rastreio do
vrus HIV nas doaes de sangue, a Frana preferiu aguardar o lanamento de um teste francs. Em
poucos meses, 297 dos pacientes transfundidos foram contaminados e trs ministros de Estado
tiveram que comparecer na Justia e responder pelo incidente.
Inserida nas reas veterinrias e mdicas, a indstria de diagnsticos in vitro cresce rapidamente
no setor de diagnsticos moleculares (doenas infecciosas e cardiovasculares, oncologia e
farmacogentica), acompanhando as demandas dos mercados da Amrica Latina, do Leste Europeu,
do Oriente Mdio e do Leste Asitico.
AS TENDNCIAS ATUAIS
A maior parte dos testes diagnsticos realizada hoje com alta tecnologia, reunindo em ambientes
automatizados diversos reagentes, instrumentos analticos e produtos acessrios de controle de
qualidade. Em consequncia, as anlises clnicas esto se concentrando em umas poucas empresas,
com suficiente poder econmico para tratar um volume grande de amostras que justifique a utilizao
de sistemas robotizados.

BIOTECNOLOGIA: ENSINO E DIVULGAO (http://bteduc.com)

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Em outra vertente mercadolgica, kits relativamente simples permitem o diagnstico de gravidez e o


monitoramento de algumas condies crnicas, como a diabete, sendo vendidos nas farmcias ou via
Internet. Comercializado recentemente, outro tipo de kit informa os clientes interessados sobre sua
ancestralidade e predisposio a vrias doenas.
DISPOSITIVOS MINIATURIZADOS
A construo de biochips, dispositivos miniaturizados de arrays moleculares de protenas, anticorpos
ou cidos nucleicos, estimulou o desenvolvimento de vrias plataformas comerciais que
revolucionaram o setor de testes de diagnstico. Essa tendncia se v acentuada com a chegada de
materiais e dispositivos em escala nanomtrica.
O desenvolvimento da tecnologia microfludica permitiu miniaturizar os ensaios em dispositivos
que realizam automaticamente todas as etapas do protocolo. Um biochip microfludico tpico pode
reunir, em um nico dispositivo, um procedimento complexo: extrao da amostra, separao
eletrofortica, colorao/descolorao e identificao.
Os biochips microfludicos ou lab-on-a-chip (LOC) permitem obter resultados rapidamente, no
consultrio mdico, no hospital (emergncia, unidade de terapia intensiva), em algum lugar isolado ou
em uma emergncia de biosseguridade, sem precisar recorrer ao laboratrio (Figura 18.1). O lab-ona-chip demanda uma interveno humana mnima, dando um resultado preciso que pode ser
arquivado facilmente.
-------------FIGURA 18.1. Imagens comerciais de alguns dispositivos miniaturizados utilizados em testes diagnsticos

A. Lab-on-a-chip de Agilent (lab-on-a-chip-loc-243049.jpg (http://www.directindustry.com).


B. Chip de DNA para diagnstico de Toshiba (http://www.toshiba.co.jp/rdc/rd/fields/06_t29_e.htm).
C. Gene chip de Affymetrix (http://www.pgbeautygroomingscience.com).

234

BIOTECNOLOGIA E SADE/ TESTES DIAGNSTICOS

O QUE UM BOM TESTE


As tcnicas bioqumicas, imunolgicas e genticas ocupam um lugar preponderante no setor de
diagnsticos, porque renem vrias qualidades que so indispensveis: sensibilidade, especificidade,
exatido e reprodutibilidade (Tabela 18.1).
Apesar ser aplicadas tambm na rea ambiental (anlise de solos, qualidade da gua) e na indstria
de alimentos (deteco de contaminantes nos alimentos ou nas matrias-primas), neste captulo nos
limitaremos a analisar sua utilizao na rea de sade.
-------------TABELA 18.1. As qualidades de um bom teste de diagnstico.
QUALIDADE

DEFINIO

Sensibilidade

Probabilidade de dar um resultado positivo quando a condio est presente.

Especificidade

Probabilidade de dar um resultado negativo quando a condio no est presente.

Exatido

Dar o mesmo valor que o obtido com outro mtodo.

Reprodutibilidade

Em se tratando de um teste quantitativo, dar sempre o mesmo valor na mesma amostra.

--------------

AS TCNICAS COM BASE BIOQUMICA


As tcnicas clssicas de identificao microbiana esto sendo substitudas, desde a dcada de 1970,
por sistemas miniaturizados. Nos sistemas API da empresa Biomrieux, por exemplo, uma suspenso
de microrganismos adicionada a uma galeria de minitubos contendo os reagentes necessrios para
desenvolver diferentes reaes qumicas. Aps a incubao, a anlise dos resultados possibilita a
identificao do microrganismo (Figura 18.2).
Diversos tipos de galerias conseguem identificar quase todas as bactrias e leveduras de interesse
clnico. Alm de ser mais seguros, o sucesso desses dispositivos se deve reduo da quantidade de
reagentes e do trabalho laboratorial, dois fatores que incidem nos custos.
Na clnica mdica, o combate infeco depende da seleo de um antibitico adequado. Os
mtodos tradicionais de elaborao de um antibiograma, para identificar os antibiticos aos quais o
patgeno sensvel, demandam um lapso de 24 a 48 horas que pode ser fatal para o paciente. Os
primeiros ensaios, com biochips microfludicos portveis, permitiriam obter o antibiograma de um
patgeno com menor gasto de reagentes e em menos tempo (2 a 4 horas). Espera-se que esses
dispositivos estejam disponveis em curto prazo.
-------------FIGURA 18.2. Imagem comercial dos sistemas API de Biomrieux
(http://www.tgw1916.net/Tests/api.html).

235

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AS TCNICAS COM BASE IMUNOLGICA


Baseadas nas reaes de aglutinao e precipitao entre um antgeno e o anticorpo especfico, as
tcnicas imunolgicas receberam grande impulso com a descoberta e o desenvolvimento da
tecnologia de hibridomas.
Apesar de ser complexa, demorada e cara, a tecnologia de hibridomas abastece os laboratrios
com reagentes standard, especficos e sensveis. Associados a molculas radiativas ou fluorescentes,
os anticorpos monoclonais detectam os antgenos especficos em clulas, tecidos, soros e corridas
eletroforticas (imunofluorescncia, radioimunoensaio, Western Blot etc.). Utilizam-se tambm para
separar diferentes populaes celulares (CellSorter) e localizar tumores.
Em outro tipo de testes, os anticorpos esto acoplados a enzimas que formam um produto colorido
em presena do substrato (ELISA, do ingls Enzyme Linked Immunosorbent Assay). Esses testes
detectam e quantificam tanto a concentrao de anticorpos em infeces ou doenas autoimunes,
como a de antgenos, sejam hormnios, marcadores cancerosos, alrgenos em alimentos e na poeira
caseira, toxinas alimentares, esteroides usados ilicitamente por atletas, drogas como a cocana e os
opiceos etc. (Figura 18.3).
-------------FIGURA 18.3. O mtodo direto e indireto de um teste positivo de ELISA.
MTODO DIRETO

MTODO INDIRETO

O anticorpo fixado na placa de microtitulao.

O antgeno fixado na placa de microtitulao.

Coloca-se uma amostra de sangue como fonte de antgeno.


Este se fixa nos anticorpos. Retira-se o excesso por lavado.

Coloca-se uma amostra de soro como fonte de anticorpos.


Estes se fixam no antgeno. Retira-se o excesso por lavado.

Acrescentam-se anticorpos ligados a uma enzima E, que se


fixam no antgeno. Retira-se o excesso por lavado.

Acrescentam-se
anticorpos
especficos
para
a
imunoglobulina humana, ligados a uma enzima E, que se
fixam nos anticorpos do soro, fixados previamente no
antgeno. Retira-se o excesso por lavado.

Adiciona-se o substrato da enzima, formando-se um


produto colorido P.

Adiciona-se o substrato da enzima, formando-se um


produto colorido P.

A cor proporcional quantidade de antgeno no sangue.

A cor proporcional quantidade de anticorpos no soro.

236

BIOTECNOLOGIA E SADE/ TESTES DIAGNSTICOS

AS TCNICAS COM BASE GENTICA


O acmulo de conhecimento sobre o genoma humano favorece a utilizao das tecnologias genticas
para o diagnstico clnico. Os estudos cromossmicos evoluram notavelmente com a utilizao de
sondas de DNA acopladas a molculas fluorescentes (SKY, do ingls spectral karyotyping). O
computador transforma a imagem microscpica em outra de cores brilhantes bem definidas,
facilitando a identificao dos pares cromossmicos e de pequenas translocaes (Figura 18.4 A).
Sondas especficas tambm possibilitam a localizao de sequncias gnicas nas clulas (FISH, do
ingls fluorescence in situ hibridization, ASO, do ingls Allele-specific oligonucleotide) e nos fragmentos
de cidos nucleicos, previamente separados por eletroforese em gel (Southern Blot, Fingerprint).
Contudo, a grande estrela continua sendo a reao em cadeia da polimerase ou PCR (do ingls,
polymerase chain reaction), uma tecnologia que amplifica quantidades nfimas de DNA, facilitando as
anlises posteriores (Figura 18.4 B). Na rea clnica, a PCR aplicada na identificao de patgenos e
na pesquisa de variaes genticas nos pacientes.
A versatilidade da tcnica tem dado origem a procedimentos bem diversificados, alguns dos quais
integrados em microdispositivos do tipo Lab-on-a-chip. Pode-se monitorar a reao de amplificao
com anticorpos fluorescentes, eliminando os estudos complementares de eletroforese posteriores e
obtendo os resultados em tempo real.
Os biochips de DNA encontraram aplicaes em reas to diversas como meio ambiente,
epidemiologia, controle de qualidade de alimentos etc. Na rea de sade, a tecnologia utilizada com
diferentes objetivos: identificar um patgeno, descobrir quais os genes ativados em um tecido;
comparar as sequncias de dois alelos; encontrar o medicamento adequado para um paciente; prever
o risco de uma pessoa se for exposta a uma substncia X. Os dispositivos miniaturizados facilitam,
tambm, a escolha de tratamentos farmacolgicos adequados ao perfil do paciente, o diagnstico do
cncer e das doenas cardacas e neuropsiquitricas.
Por ser portveis, robustos e relativamente baratos, os dispositivos miniaturizados com diferentes
painis de genes tm um espao garantido no setor de testes diagnsticos. No entanto, a chegada das
novas tecnologias de sequenciamento de DNA, que permitem analisar o genoma todo, abre um novo
espao para o diagnstico gentico.
-------------FIGURA 18.4: As tcnicas com base gentica

A. Imagem mostrando a identificao dos 46 pares de cromossomos


humanos mediante a tcnica de SKY, segundo o National Human Genome
Research Institute (http://www.genome.gov).

B.

Imagem comercial de um termociclador para a reao em cadeia da


polimerase, de Applied Biosystems (http://appliedbiosystems.com).

237

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O DIAGNSTICO DAS DOENAS INFECCIOSAS


A evoluo de uma doena detida com o diagnstico, seguido de tratamento. Nos pases
desenvolvidos, e em alguns setores dos pases em desenvolvimento, os novos testes de diagnstico se
encontram disponveis para a populao. Contudo, essa no a realidade dos pases mais pobres, sem
acesso a uma tecnologia que exige conhecimentos, material e equipamentos especializados. Nesses
pases, uma das principais causas de mortalidade continuam sendo as doenas infecciosas, como
HIV/AIDS, tuberculose e malria.
O diagnstico de HIV est baseado no reconhecimento da protena p24 do vrus e na presena de
anticorpos detectados mediante os testes ELISA ou Western Blot, que atualmente podem ser
combinados em um s. Uma vez diagnosticada a infeco por HIV, acompanha-se a evoluo mediante
a medio da carga viral, por PCR quantitativa, e a contagem de clulas CD4. Dependendo dos
resultados, d-se incio ao tratamento.
Em alguns pases, encontram-se venda kits para diagnstico de HIV/AIDS, mas sua utilizao
individual est muito limitada pela dificuldade de enfrentar o diagnstico sem um apoio psicolgico
adequado. Tambm difcil, para o leigo, lidar com os conceitos de falso positivo ou falso negativo.
No entanto, os testes de diagnstico rpido so uma ferramenta preciosa em mos de pessoal
treinado.
O diagnstico da tuberculose envolve vrias etapas, lentas e trabalhosas. Descoberta a infeco
latente pela reao tuberculina, os estudos posteriores exigem radiografias, observaes
microscpicas e cultivos microbianos. Testes mais recentes identificam rapidamente os anticorpos no
sangue, pelo teste ELISA, e o Mycobacterium tuberculosis na amostra de esputo, com sondas genticas,
mas sua difuso limitada pelo custo.
O diagnstico de malria depende de observaes clnicas confirmadas por microscopia, uma
tcnica relativamente econmica, mas que exige pessoal treinado. Apesar da existncia de testes
genticos, os testes imunolgicos rpidos resultam mais convenientes nas regies remotas, sem
laboratrios ou equipamentos apropriados. Alm de mais econmicos, facilitam a escolha do
tratamento, porque diferenciam o Plasmodium falciparum, resistente cloroquina, de outras espcies
que podem causar a doena e so sensveis ao medicamento.
Os pases emergentes precisam de testes de diagnstico rpidos e baratos, adaptados s tantas
outras doenas que os afligem (leischmaniose, leptospirose, dengue, chikungunya, zika, infeces por
rotavrus, doena de Chagas etc.). Para acompanhar a evoluo das doenas emergentes, a grande
inovao seria complementar os testes de diagnstico laboratoriais com outros, mais simples e
rpidos, realizados com microdispositivos portveis.
A TIPIFICAO DE TECIDOS
SANGUE
A tipificao das hemcias classifica as pessoas em quatro grupos para os marcadores ABO (A, B, AB e
O) e dois para o sistema Rh (Rh+ e Rh-). A caracterizao rotineira deste ltimo durante a gravidez
permite tomar medidas em caso de incompatibilidade sangunea me-feto. Tambm se tipificam os
sistemas ABO e Rh antes de uma transfuso sangunea, uma interveno salva-vidas em pacientes que
sofreram uma hemorragia (acidente, cirurgia, doenas digestivas etc.), ou que apresentam um quadro
de anemia sria (quimioterapia, cncer, doenas hematolgicas).
A tipificao dos antgenos ABO e Rh da superfcie das hemcias nem sempre suficiente, porque
existem vrios outros sistemas de grupos sanguneos capazes de desencadear uma reao de

238

BIOTECNOLOGIA E SADE/ TESTES DIAGNSTICOS

incompatibilidade. Em pacientes com um passado de gravidez ou de transfuso prvia, os anticorpos


a esses sistemas so pesquisados no soro com kits de hemcias especficas.
-------------FIGURA 18.5. O sistema HLA
C. A herana dos hapltipos.

O CROMOSSOMO 6

D.

CRUZAMENTO

Reao mista ou cross-matching. Colocam-se em contato as clulas do doador com o soro do receptor, em presena
de complemento. Se as clulas do doador ficam intactas, h compatibilidade.

TRANSPLANTE INCOMPATVEL

Clulas
do doador

Soro
do receptor

Complemento

Lise

TRANSPLANTE COMPATVEL

Clulas
do doador

Soro
do receptor

Complemento

Clulas intactas

239

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A palavra final corresponde aos testes de compatibilidade, em que se coloca o soro do receptor em
presena das hemcias do doador. Indispensveis na rotina de um banco de sangue, esses testes
personalizados so realizados por pessoal mdico ou tcnico.
Nos centros hospitalares que processam um nmero alto de amostras de sangue, os testes
sorolgicos clssicos em tubos de vidro esto sendo substitudos por novas tecnologias, em estaes
de trabalho automatizadas. Os Gel Tests para tipificao de hemcias esto baseados na centrifugao
controlada das hemcias em um gel de dextrana-acrilamida.
Entre suas vantagens est a possibilidade de trabalhar com numerosas amostras de pequeno
volume, a eliminao da etapa de lavados e a obteno de resultados estveis. Se for necessrio, os
dados podero ser analisados posteriormente e reavaliados por um supervisor.
Tambm se utilizam tcnicas cromatogrficas como a ACT (do ingls affinity column technology),
para identificar subclasses de imunoglobulinas em hemcias sensibilizadas, e placas de microtitulao,
para pesquisa de anticorpos.

OUTROS TECIDOS E RGOS


A rejeio de um rgo transplantado deve-se incompatibilidade entre os tecidos do doador e do
receptor. Alm dos antgenos do grupo sanguneo (ABO), existem outros marcadores de identidade
que tambm se expressam nas clulas de um organismo, como os antgenos leucocitrios do sistema
HLA (do ingls, human leucocyte antigen). O sistema imune os utiliza para diferenciar as clulas que
fazem parte do organismo (eu) das que no pertencem a ele (no eu).
Os antgenos do sistema HLA so codificados por um conjunto de genes estreitamente ligados,
localizados no cromossomo 6. Os genes A, B e C determinam os antgenos de classe I, presentes em
todas as clulas, salvo as hemcias. J o locus D determina outros trs antgenos (DR, DQ e DP),
denominados de Classe II, que so encontrados em algumas clulas (macrfagos, moncitos, clulas
dendrticas e clulas endoteliais). Os de maior importncia clnica so os antgenos de classe I,
codificados pelos alelos de A e B, e os de classe II, relativos a DR.
A herana do sistema HLA segue um padro de codominncia, ou seja, ambos os alelos se
expressam nas clulas. Quando uma pessoa caracterizada como HLA - A1 A3 B8 B14 DR2 DR10, isto
significa que, em um cromossomo, leva os alelos A1 B8 DR2 herdados de um dos genitores, e, no outro,
A3 B14 DR10, herdados do outro. Por estarem estreitamente ligados, esses genes so transmitidos em
blocos, denominados hapltipos (Figura 18.5 A).
Como esses genes contam com mais de 450 alelos, seria possvel ter milhes de combinaes que
dariam a cada indivduo uma identidade nica. Contudo, alguns hapltipos so mais frequentes que
outros, especialmente em diferentes grupos raciais.
Os testes de histocompatibilidade so prvios a um transplante de rim ou de clulas-tronco
hematopoiticas. Para selecionar os pares doador-receptor histocompatveis, identificam-se os
antgenos celulares de ambos mediante painis de anticorpos e instrumentao laboratorial. Utilizase tambm a PCR para caracterizar os genes HLA-DP do doador e do receptor.
Como gravidezes, transplantes anteriores ou transfuses podem originar, no receptor, anticorpos
contra o rgo a transplantar, a verificao da compatibilidade fundamental. O teste para prevenir
a rejeio a reao mista ou cross-matching, em que se coloca o soro do receptor em contato com
as clulas do doador, em presena de complemento. Se houver compatibilidade, as clulas do doador
ficaro intactas; em caso de incompatibilidade, haver lise celular (Figura 18.5 B).
Os testes de histocompatibilidade tambm so utilizados no diagnstico de doenas autoimunes.

240

BIOTECNOLOGIA E SADE/ TESTES DIAGNSTICOS

O DIAGNSTICO DE DOENAS GENTICAS


AS LIMITAES DOS TESTES
As doenas de origem gentica representam um grupo heterogneo de patologias que obedecem a
causas diversas: alteraes no nmero e na estrutura dos cromossomos, ao de um gene
determinando a sntese de uma protena ou sua ausncia, ao de vrios genes interagindo com
fatores ambientais, tais como o fumo, a dieta, o estresse etc. (Tabela 18.2).
O diagnstico das doenas monognicas est baseado em observaes clnicas e testes
laboratoriais (metabolismo, cromossomos, DNA). A localizao e o sequenciamento dos genes
responsveis pelas principais doenas monognicas possibilitaram o desenvolvimento de testes
genticos. Contudo, esses testes apresentam algumas limitaes, devidas prpria heterogeneidade
do determinismo gentico:
o Algumas mutaes so incuas para a sade do portador (polimorfismos).
o Mutaes em genes diferentes podem causar a mesma doena.
o Mutaes diferentes dentro de um mesmo gene podem causar a mesma doena.
o Mutaes diferentes dentro do mesmo gene podem causar doenas parecidas, com prognstico
diferente (benigno ou grave).
Um teste gentico pode no detectar todas as mutaes capazes de causar uma doena. Por outro
lado, sua sensibilidade depende da incluso da informao mais recente, resultante da pesquisa
gentica.
Tambm existem doenas genticas que aparecem em uma famlia devido a mutaes em algum
gene ainda desconhecido, de modo que no possvel sua identificao. O caso no ser resolvido, a
menos que se encontre uma ligao com outro gene prximo e bem conhecido, que funcionar como
um marcador. A transmisso do gene marcador permitir inferir o modo de transmisso do gene
desconhecido.
Nessa linha de investigao, um estudo desenvolvido por 50 grupos de pesquisa (Wellcome Trust
Case Control Consortium) identificou recentemente 24 regies do genoma humano fortemente
relacionadas com 7 doenas diferentes (Doena de Crohn, diabete tipo 1 e 2, doena cardiovascular,
hipertenso, artrite reumatoide e doena bipolar).
Outro problema de difcil soluo a anlise do determinismo gentico de doenas que apresentam
um padro de herana complexo, em que diversos fatores ambientais interagem com vrios genes. A
no ser que se encontre um gene que tenha um efeito muito maior dos restantes, os testes genticos
sero de difcil elaborao.
A presena de determinados alelos, como BRCA1 e BRCA2, est associada a uma predisposio
familiar ao cncer de mama (Figura 18.6). Porm, esses alelos no so detectados na maioria dos
outros casos da mesma doena. Em outros termos, nem todas as doenas de origem gentica so
familiares, podendo aparecer devido a mutaes ou alteraes cromossmicas ocorridas ao longo da
vida.
AS ESTRATGIAS SEGUIDAS
Apesar de suas limitaes, os testes genticos representam um avano significativo do ponto de vista
mdico e individual. Aplicados em qualquer momento da vida de uma pessoa, respondem a diferentes
objetivos.

241

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OS TESTES GENTICOS NO ADULTO


No adulto, os testes genticos so feitos a partir de alguma evidncia clnica, para confirmar ou
descartar um diagnstico. Realizam-se tambm para prever se uma pessoa que no apresenta
sintomas ir desenvolver uma doena da qual j existem casos na famlia (doena de Huntington,
doena de Alzheimer), ou para detectar a presena de algumas mutaes gnicas associadas
predisposio a alguma doena.
O RASTREIO DE PORTADORES
O rastreio de portadores realizado quando um casal planeja ter filhos e deseja saber se tem ou no
um determinado alelo. Geralmente, solicitado quando h casos de doena na famlia ou quando o
casal pertence a uma populao em que a frequncia da doena alta. Nas famlias afetadas, os testes
genticos identificam os indivduos portadores de um gene ou de uma alterao cromossmica que
possa trazer problemas para eles ou para sua descendncia.
Rastreio de portadores e aconselhamento gentico so duas medidas que conseguiram diminuir a
incidncia de vrias doenas em algumas comunidades norte-americanas: a anemia falciforme entre
os afro-americanos, a doena de Tay-Sachs entre os judeus askenazim, a fibrose cstica entre os
irlandeses.
O DIAGNSTICO PR-NATAL
O diagnstico pr-natal realizado quando h algum risco ou indcio de doena gentica no feto. Por
exemplo, uma concentrao elevada de -fetoprotena no sangue materno, entre a 15a e a 20a semana
de gravidez, indica a possibilidade de o feto apresentar anomalias, como a sndrome de Down. Nesse
caso, a me poder ser aconselhada a fazer uma amniocentese, extraindo-se uma pequena quantidade
de lquido amnitico e estudando as clulas do feto para confirmar ou excluir vrios diagnsticos.
Tambm poder optar por uma bipsia de vilosidades corinicas, em que se retiram algumas clulas
da placenta (crion) para anlise.
Em uma fecundao in vitro, o diagnstico pr-natal pode preceder a implantao do embrio. Aps
trs divises celulares, quando o embrio se encontra num estado de oito clulas, uma delas
removida para a determinao do sexo e das caractersticas genticas. O procedimento no causa dano
ao embrio.
O RASTREIO NO RECM-NASCIDO
O rastreio de erros inatos do metabolismo no recm-nascido possibilita o tratamento de algumas
condies hereditrias, evitando danos e leses irreparveis. Aproximadamente 5% das crianas
nascem com problemas congnitos ou hereditrios, alguns dos quais podem ser previstos mediante
testes genticos de rastreio.
A partir da dcada de 1960, diminuram as deficincias mentais causadas pela fenilcetonria, graas
implantao do Teste de Guthrie ou do pezinho, que mede a quantidade de fenilalanina no sangue.
Uma tcnica nova, derivada da espectrometria de massa, capaz de detectar 20 transtornos
metablicos em um nico teste.

242

BIOTECNOLOGIA E SADE/ TESTES DIAGNSTICOS

TABELA 18.2. Algumas das mais de 8.000 doenas genticas descritas


Nas doenas monognicas, a transmisso mostra um padro claro de herana nem sempre fcil de evidenciar nas doenas
espordicas ou multifatoriais. Nestas, a gentica tem um rol importante, mas nem sempre suficiente para, por exemplo,
determinar a manifestao dos sintomas.

TIPO DE DOENAS

HERANA

EXEMPLO

Cromossmicas

Espordica

Sndrome de Down, sndrome de Turner, sndrome de


Klinefelter.

Mitocondriais

Materna

Sndrome MERRF, sndrome MELAS, doena de Leigh


(NARP), doena de Leber.

Autossmica recessiva

Fibrose cstica, fenilcetonria, anemia falciforme, doena


de Tay-Sachs, talassemias.

Autossmica dominante

Hipercolesterolemia familiar, doena de Huntington, rim


policstico, neurofibromatose, acondroplasia.

Recessiva ligada ao X

Hemofilias, distrofia muscular de Duchenne, sndrome de


Lesch-Nyan, sndrome do X frgil.

Dominante ligada ao X

Sndrome de Rett.

Contribuio gentica varivel;


influncia de fatores ambientais

Malformaes congnitas (palato fendido, defeitos do


tubo neural).

Monognicas

Multifatoriais

Cncer (intestino, mama, ovrio, prstata e melanoma).


Doenas cardiovasculares (hipertenso arterial, presso
alta,
alguns
casos
de
doena
cardaca,
hipercolesterolemia).
Doenas metablicas (Diabetes, gota).
Doenas neurolgicas e/ou psiquitricas (Alzheimer em
idade avanada, esquizofrenia, doena bipolar).
Doenas musculoesquelticas
reumticos, osteoporose).

(artrite,

transtornos

Doenas dermatolgicas (psorase, eczema).


Doenas respiratrias (asma, alergias, enfisema).

--------------

DIAGNSTICO PREVENTIVO E PREDITIVO


Ao associar um gene a uma doena, os testes genticos permitem iniciar um tratamento que trate os
sintomas ou retarde sua apario (hemofilia, distrofia muscular de Becker-Duchenne, fibrose cstica
etc.). Contudo, quando se trata de uma doena para a qual no existe nem cura nem alvio, a existncia
de um teste de diagnstico pode exigir escolhas muito complexas.
Consideremos, por exemplo, a Coreia de Huntington, uma doena autossmica dominante de difcil
tratamento e que se manifesta tardiamente. A deciso de fazer o teste depende da pessoa interessada,
mas atinge seus familiares, porque o diagnstico pode ser informativo sobre a constituio gentica
dos outros integrantes da famlia. Outro exemplo o da transmisso familiar da doena de Alzheimer,
em que algumas pessoas querem saber se vo a desenvolver os sintomas e outras preferem no saber.
Os avanos tecnolgicos recentes abrem caminho para o estudo das doenas que resultam da
interao de fatores genticos e ambientais. J no se trata de prever uma doena, mas de calcular
qual a probabilidade de vir a desenvolv-la. A funo de um diagnstico preditivo de dar ao paciente

243

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a possibilidade de fazer escolhas saudveis, modificando seu modo de vida e aumentando a vigilncia
frente a determinados sintomas. Hoje existem testes de predisposio a doenas cardiovasculares e a
vrios tipos de cncer. E esto sendo desenvolvidos testes preditivos de resposta a medicamentos.
A predio tem suas limitaes. Por exemplo, as mulheres com o gene BRCA1 tm 80% de chances
de desenvolver cncer de mama aos 65 anos de idade; um risco considerado alto, mas sem certeza
absoluta (Figura 18.6). Graas ao diagnstico preditivo, elas podero aumentar as medidas
preventivas, isto , mamografias, controles mdicos etc.; outras, como a atriz Angelina Jolie, optaro
por uma mastectomia e a extirpao de ovrios. Contudo, do ponto de vista preventivo, a
predisposio familiar responde s por 5 a 10% dos casos de cncer, os 90 a 95% restantes devem-se
a mutaes adquiridas ao longo da vida.
-------------FIGURA 18.6. O uso de arrays no diagnstico de mutaes nos genes BRCA1 e BRCA2
Compara-se o padro obtido na hibridizao dos fragmentos de DNA marcados de uma paciente e os de um controle normal.
A hibridizao de ambos DNAs, do DNA da paciente ou do DNA do controle com as sondas, detectada por varredura (scanner),
sinalizada com cores diferentes em uma imagem computadorizada.

Tecido da paciente

Tecido controle

Extrao de mRNA

Extrao de mRNA

Preparao de cDNA
(transcriptase reversa)

Preparao de cDNA
(transcriptase reversa)

Amplificao do DNA e marcao com uma


substncia fluorescente

Amplificao do DNA e marcao com


outra substncia fluorescente

Mistura de ambos os cDNAs marcados

Hibridizao com as sondas fixadas na placa do microarray e rinsagem

Varredura e leitura

Diagnstico

Os pontos verdes e vermelhos identificam, respectivamente, os stios de hibridizao de cada um dos DNAs testados.
Os pontos amarelos identificam os stios de hibridizao de ambas as amostras, os pontos pretos, os de nenhuma das duas
amostras.

244

BIOTECNOLOGIA E SADE/ TESTES DIAGNSTICOS

Um caso muito controverso o da empresa 23andMe, com sedes nos Estados Unidos e no Reino Unido.
Mediante 199 dlares e uma amostra de saliva, acondicionada em um kit especialmente preparado e
enviado pelo correio, a empresa informa o cliente sobre sua ancestralidade e algumas caractersticas
gnicas que poderiam passar a sua descendncia. Apesar de ser uma informao pouco relevante e
sem utilidade para a maioria das pessoas, a empresa tem sucesso comercial.
Calcula-se que, em 20 anos, nos pases desenvolvidos, a expanso do mercado dos testes genticos
possibilitar tratamentos de sade pr-sintomticos. Quantos desses testes sero necessrios?
Quantas pessoas estaro dispostas a mudar seu estilo de vida em funo de uma estimativa de risco?
Quantas pessoas se sentiro erroneamente seguras em relao ao estilo de vida que adotarem?
A implementao da medicina preditiva deve ser analisada criteriosamente por todos os setores da
sociedade. Quem controlar a aplicao dos testes genticos? Como garantir que a deciso de se
submeter a um teste obedea exclusivamente a uma escolha pessoal? Como seria armazenada essa
informao e com quem seria compartilhada? Seria possvel formar uma subclasse de indivduos sem
seguros de sade nem empregos, discriminados em funo de seus genes?
AS PATENTES
Nos Estados Unidos, at 2013, uma patente outorgava direitos sobre uma sequncia de DNA ou um
gene a quem os identificara pela primeira vez. O indivduo ou a empresa que obteve a patente podia
determinar, durante 20 anos, como essa sequncia ou esse gene seriam usados em atividades de
pesquisa ou em testes clnicos.
Nessa data, e em ocasio do julgamento dos direitos da empresa Myriad sobre os genes BRCA1 e
BRCA2, a Corte Suprema de Justia revogou todas as patentes anteriores, disponibilizando mais de 4
mil genes. Os juzes argumentaram que, por ser um produto da natureza, um gene no poderia ser
patenteado; em contraposio, o cDNA poderia ser patenteado, porque um produto elaborado pelo
homem e no se encontra na natureza.
No Brasil, no so patenteveis as sequencias de nucleotdeos isolados de organismos vivos
naturais. Contudo, o cDNA pode ser patenteado sempre que seja diferente do DNA codificador, com
base nos requisitos de novidade, atividade inventiva e aplicao industrial.
O ESPORTE
Na Olimpada de Roma (1960), o atleta etope Abebe Bikila ganhou a maratona correndo descalo. Um
fato dessa magnitude desafia a estrutura do esporte. Treinamento? Sem dvida. Predisposio
gentica? Hoje sabe-se que a aptido para atividades de fora ou de resistncia est relacionada com
a estrutura das fibras musculares e da protena codificada pelo gene ACTN3.
Teria a ancestralidade alguma relao com a subida ao pdio? Os atletas do leste africano brilham
nas maratonas, os do norte e oeste africano nas corridas de velocidade, os asiticos nas provas de
levantamento de peso, os chineses na ginstica etc. Baseado nos dados coletados em numerosos
atletas de destaque em diferentes modalidades, o prximo passo poderia ser a utilizao de
marcadores genticos para selecionar atletas e direcion-los para a modalidade esportiva considerada
mais adequada.
O determinismo gentico pode, eventualmente, mostrar uma predisposio a certo tipo de
esporte, mas no define quem levar as medalhas: a vontade de ganhar, os fatores culturais e um
treinamento intenso parecem ser decisivos.

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A PRTICA FORENSE
Com exceo dos gmeos idnticos, nenhuma pessoa geneticamente idntica outra. Durante quase
um sculo, a identificao das pessoas dependeu das impresses digitais e, apesar das enormes
dificuldades em encontrar uma quantidade suficiente de material em estado de conservao
adequado, muitos crimes foram resolvidos graas a estudos bioqumicos e imunolgicos.
A anlise do DNA para a identificao das pessoas utilizada desde a dcada de 1980, quando A.
Jeffreys idealizou a tcnica do Fingerprint, estabelecendo uma relao nica entre um indivduo e sua
sequncia gnica. A identificao recorre a pequenas sequncias no codificadoras dispersas no DNA,
denominadas VNTRs ou vinters (do ingls, variable-number tandem repeats). Essas sequncias
polimrficas repetem-se um nmero de vezes que pode variar de um cromossomo ao seu homlogo,
de modo que os fragmentos de restrio tero tamanhos diferentes.
Sondas genticas especficas identificam at 20 tipos diferentes de sequncias VNTRs. No gel de
eletroforese aparecer um padro de bandas individual, parecido com os cdigos de barras usados no
comrcio. Como a probabilidade de duas pessoas escolhidas ao acaso terem o mesmo perfil de DNA
menor a um em um trilho, o resultado praticamente nico para cada indivduo.
Na determinao da paternidade, os estudos de grupos sanguneos e de protenas do soro tm sido
complementados ou substitudos pelos testes de DNA, que se transformaram no eixo de vrias
investigaes muito comentadas na mdia. No Brasil, o jogador de futebol Pel teve que reconhecer a
paternidade de Sandra Regina, e o menino Pedrinho, sequestrado na maternidade logo aps seu
nascimento pde, anos mais tarde, reencontrar sua verdadeira famlia.
Apesar das crticas levantadas em relao s possibilidades de erros laboratoriais devidos
contaminao de amostras, ao risco da participao de pessoal treinado inadequadamente e s
dificuldades de interpretar estatisticamente os dados, em poucos anos a anlise de DNA se
transformou em uma ferramenta indispensvel na prtica forense.
Nos Estados Unidos, uma mancha de smem no vestido azul de uma estagiria se transformou em
uma pea essencial para solicitar o impeachment do presidente Clinton.
Depois de anos de mistrios e rumores, os cadveres enterrados em uma fossa comum perto de
Jekaterinburg foram reconhecidos, em 1994, como sendo os do tzar Nicolau II, sua famlia e servidores,
assassinados durante a Revoluo Russa (1918). Em 2012, a descoberta dos ossos do rei Ricardo III sob
um estacionamento e a anlise do cromossomo Y, transmitido de pai a filho, levantou dvidas sobre a
legitimidade da linha dos Plantagenetas ao trono da Inglaterra.
Em 1992, os ossos encontrados, anos antes, em uma tumba no Brasil, foram identificados como
pertencentes ao comandante do campo de extermnio de Auschwitz, Joseph Mengele, um dos homens
mais procurados aps a Segunda Guerra Mundial. Determinadas variantes gnicas foram decisivas
para a sobrevivncia, com 200 calorias dirias, dos defensores do stio de Leningrado.
A anlise de DNA a nica forma de reconhecer as vtimas de catstrofes, conflitos blicos e
atentados como o do World Trade Center (Nova York, 2001) ou da estao de Madri (2004). E, anos
mais tarde, de seu instigador, Osama Bin Laden.
Quando as amostras esto muito degradadas, analisa-se o DNA mitocondrial. Transmitido por via
materna, esse DNA conta com uma regio muito varivel, apta para identificar pessoas e esclarecer
laos de parentesco. Entre 1976 e 1985, o regime militar que governou a Argentina exterminou 9 mil
a 30 mil pessoas (desaparecidas). Muitas crianas pequenas, separadas de suas famlias, foram
entregues para adoo. A comparao entre o seu DNA e o de suas avs maternas possibilitou a muitos
filhos de desaparecidos recuperar sua identidade verdadeira.

246

C A P T U L O 19

BIOTECNOLOGIA E SADE
A INDSTRIA DE MEDICAMENTOS

A origem da farmcia atribuda a Galeno (sculo II), um mdico romano que utilizava preparaes
medicinais para tentar reestabelecer o equilbrio destrudo pela doena. Durante a Idade Mdia,
conservou-se seu legado, a denominada farmcia galnica, em conventos e monastrios. No sculo
XVI, o mdico e alquimista suo Paracelso formulou dois conceitos fundamentais: existe um remdio
especfico para cada doena e qualquer remdio pode ser txico, dependendo da dose.
No sculo XVIII, o desenvolvimento da qumica na Europa resgatou do medievo algumas tcnicas,
como a destilao e a extrao com solventes. A qumica orgnica nasceu na primeira metade do
sculo XIX e, na mesma poca, fundaram-se os primeiros laboratrios farmacuticos. Rapidamente, os
mtodos artesanais foram substitudos por sistemas de produo industrial.
Ao longo do sculo XX, gerou-se um setor que compreende os fabricantes de diversas categorias
de medicamentos (de marca, genricos e de venda liberada), alm de empresas que elaboram
produtos novos e outras que desenvolvem pesquisas, geralmente terceirizadas.
O mercado mundial de medicamentos movimenta mais de um trilho de dlares por ano. Os
medicamentos mais vendidos so os oncolgicos, os agentes respiratrios, os reguladores de lipdios,
os antidiabticos e os antipsicticos.
Apesar das empresas farmacuticas dedicarem algumas pesquisas s doenas tropicais dos pases
em desenvolvimento, ainda faltam medicamentos adequados para a malria, a doena de Chagas,
a doena do sono, a leishmaniose, a filariose, o dengue e a esquistossomose. S 3% dos medicamentos
desenvolvidos entre 1975 e 1999 foram dedicados ao tratamento das doenas negligenciadas, e a
metade fora incentivada pela Organizao Mundial da Sade.
O controle da produo de medicamentos depende das grandes corporaes multinacionais, que
evoluem em contnuos ciclos de fuso, consolidao e expanso. Por ser extremamente competitivo e
dinmico, o setor capaz de absorver rapidamente os avanos cientficos e tecnolgicos. Na disputa
por um mercado em crescimento, destacam-se como empresas lderes: Pfizer (Estados Unidos),
Novartis (Sua), SanofiAventisPasteur (Frana), Roche Holding (Suia), Merck & Co (Estados Unidos),
GlaxoSmithKline (Reino Unido), Amgen (Estados Unidos), AstraZeneca (Reino Unido), Eli Lilly & Co
(Estados Unidos) e Abbott Laboratories (Estados Unidos).
Apesar do nmero de medicamentos novos colocados no mercado ter diminudo nos ltimos anos,
o nmero de compostos em testes pr-clnicos ou clnicos aumentou. A estrutura do setor poder ser
reorganizada nos prximos anos, em funo da chegada de novas tecnologias robticas, informticas
e biolgicas.
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O DESENVOLVIMENTO DE UM MEDICAMENTO NOVO


A procura por um medicamento novo comea com estudos laboratoriais e testes em animais,
destinados a selecionar algumas molculas seguras e com a atividade biolgica procurada. Na indstria
cosmtica, os testes em animais tendem a ser substitudos por testes em cultivos celulares e, na
indstria farmacutica, comeam a ser realizados testes em micro-rgos de 3 a 4 milmetros, criados
a partir de clulas-tronco.
No final da fase pr-clnica, elabora-se o pedido de patente das molculas consideradas
promissoras e solicita-se a aprovao das autoridades correspondentes para dar incio aos testes
clnicos em seres humanos.
Uma vez aprovado o pedido, a primeira fase de testes visa o acompanhamento farmacocintico da
molcula em questo em 20 a 100 voluntrios sadios, nos quais so realizados os primeiros estudos
de segurana e dosagem. A segunda fase analisa a eficincia do produto e detecta efeitos colaterais
em 100 a 500 pacientes voluntrios. Na terceira fase monitoram-se as reaes adversas ao uso
prolongado do medicamento em mil a 5 mil pacientes voluntrios.
As 3 fases de testes clnicos podem levar de 4 a 8 anos. O medicamento s poder ser
comercializado aps a aprovao das autoridades, sendo necessria uma fase posterior de vigilncia
farmacolgica, porque alguns efeitos secundrios de baixa frequncia s podem ser evidenciados em
amostras numerosas. Muitos medicamentos no conseguem superar essa quarta fase, e houve casos
em que um produto teve que ser retirado do mercado. o caso do Vioxx (Merck), um medicamento
comercializado para o tratamento da artrite e das dores articulares, descontinuado por aumentar o
risco de ataques cardacos e derrames.
A indstria sustenta numerosas atividades de pesquisa e desenvolvimento de produtos novos. Das
5 mil a 10 mil substncias que passam o crivo de uma primeira triagem, s uma chegar ao mercado,
em um processo que leva de 10 a 15 anos, a um custo mnimo estimado em 1 bilho de dlares. O
retorno do investimento garantido pelos lucros e por um sistema de patentes vlido por 20 anos
(Figura 19.1).

PATENTES, GENRICOS E BIOSSIMILARES


A patente sobre um medicamento confere empresa que o desenvolveu o direito de exclusividade
sobre sua comercializao durante 20 anos. Alm de sustentar os custos de pesquisa e
desenvolvimento de um medicamento, boa parte do oramento das empresas farmacuticas est
dedicado a propaganda e marketing de seus produtos. Ao vencer a patente de um medicamento, este
se torna de domnio pblico, sendo copiado e comercializado como medicamento genrico por um
preo 30 a 50% menor.
Esse medicamento que entra no mercado uma molcula sinttica com seu nome genrico
(paracetamol, por exemplo) e sem o nome comercial (Tylenol). Com o mesmo princpio ativo e a
mesma dose que o medicamento de referncia, os produtos genricos causam efeitos teraputicos
semelhantes. No Brasil, para ser comercializados, precisam da aprovao da Anvisa nos testes de
qualidade.
Em relao aos biofrmacos, o medicamento produzido aps o vencimento da patente
denominado biossimilar, porque sintetizado por um agente biolgico e porque o processo de
obteno pode no ser o mesmo. Sua atividade deve ser avaliada em ensaios bioqumicos,
imunolgicos e biolgicos in vivo e s pode ser considerado biossimilar se apresentar a mesma
qualidade, eficcia e segurana do produto original de referncia. No Brasil, para ser comercializados,
os medicamentos biossimilares tambm precisam da aprovao da Anvisa nos testes de qualidade. Em

248

BIOTECNOLOGIA E SADE / INDSTRIA DE MEDICAMENTOS

2015, o Remsima (infliximabe) foi o primeiro anticorpo monoclonal aprovado para uso no pas, depois
de demonstrada sua similaridade com o produto biolgico inovador Remicade (infliximabe).
A distribuio de genricos e biossimilares na rede pblica de sade representa, em qualquer pas,
uma economia considervel. A produo de sete antivirais genricos para o tratamento de HIV/Aids
por Farmanguinhos, e a preferncia destes sobre os medicamentos de marca, para sua compra e
distribuio na rede pblica de sade, representaram para o Brasil uma economia de mais de US$ 400
milhes por ano.
Admite-se que, em alguns casos, como situaes de emergncias nacionais, circunstncias de
extrema urgncia e prticas anticompetitivas, o uso de uma patente sem a autorizao do detentor do
direito seja justificado. Esta salvaguarda se encontra no Acordo sobre Aspectos dos Direitos de
Propriedade Intelectual Relacionados ao Comrcio (TRIPS Agreement), da Organizao Mundial do
Comrcio, vigente desde 1995. O artigo 31 assinala que o uso da patente sem autorizao estaria
justificado se tivessem sido feitos os esforos para sua utilizao em condies comerciais razoveis.
Quando da ameaa terrorista de antraz, os Estados Unidos cogitaram quebrar a patente do
antibitico Cipro. Nos pases em desenvolvimento, o acesso aos medicamentos considerado um
direito fundamental dos pacientes de HIV/Aids, porm, apesar das longas discusses no marco da
Organizao Mundial de Comrcio, milhes de pessoas morrem anualmente por falta desses
medicamentos.
--------------

FIGURA 19.1. As etapas do desenvolvimento de um medicamento

Descoberta
Fase pr-clnica

5.000
compostos

5 compostos

0
2
4
6
8

Testes clnicos

10
12

1 composto

14
16

Incio das pesquisas. Estudos laboratoriais e testes em animais para


avaliar a atividade biolgica e a segurana.
Pedido de patente (3 a 4 anos).
Pedido de aprovao para dar incio aos testes em seres humanos.
Fase I. Acompanhamento farmacocintico e primeiros estudos sobre
segurana e dosagem em 20 a 100 voluntrios sadios (1 a 2 anos).
Fase II. Eficincia e efeitos colaterais em 100 a 500 pacientes
voluntrios (2 anos).
Fase III. Monitoramento das reaes ao uso prolongado do
medicamento em 1.000 a 5.000 pacientes voluntrios (3 a 4 anos).
Processo de aprovao do novo medicamento (1 a 2 anos)
Fase IV. Vigilncia farmacolgica

18

Procedimentos
administrativos

20

Vencimento da patente

22
24

Genricos

Anos

249

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OS PRINCPIOS ATIVOS DAS PLANTAS


O CASO DA ASPIRINA
Devido a seu poder de curar febres e acalmar dores, a casca do salgueiro (Salix Alba) era utilizada, j
no sculo XVIII, na preparao de poes medicamentosas. O princpio ativo a salicilina, da qual foi
extrado o cido saliclico. Em 1874, fundou-se a primeira empresa para sintetizar quimicamente o
cido saliclico, uma substncia que capaz de aliviar eficazmente a dor, mas tem um gosto amargo
muito desagradvel e causa problemas estomacais.
Por acetilao do cido saliclico, o qumico Felix Hoffman obteve o cido acetilsaliclico, um
produto com menos efeitos colaterais que comeou a ser comercializado em 1900 pela Bayer, sob o
nome de aspirina (Figura 19.2). Vendem-se hoje, aproximadamente, 10 bilhes de comprimidos por
ano.
Embora a aspirina alcanasse uma popularizao extraordinria, o seu modo de ao permaneceu
desconhecido por muito tempo. Isso no impediu que fosse utilizada pelos astronautas durante o
primeiro voo lua da nave Apolo, em 1969.
Dois anos mais tarde, descobriu-se que a ligao entre o cido acetilsaliclico e algumas enzimas
dificulta a sntese de prostaglandinas, um grupo de substncias que tornam os nervos mais sensveis
dor e so produzidas naturalmente durante as infeces ou na ocasio de ferimentos. Por impedir a
agregao das plaquetas, a aspirina tambm ajuda a prevenir problemas de coagulao sangunea e
ataques cardacos.
-------------FIGURA 19.2: A frmula da aspirina

COOH

cido saliclico

COOH

cido acetilsaliclico
OH

O-CO-CH3

--------------

OS FITOTERPICOS
At o momento, os estudos etnobotnicos identificaram mais de 50 mil espcies de plantas medicinais.
Muitas delas representam a nica fonte de tratamento acessvel para a populao mais pobre.
Tambm so utilizadas por outra parcela da populao, adepta das medicinas alternativas e do
consumo de medicamentos fitoterpicos tradicionais, considerados mais suaves e com menos efeitos
colaterais. Nessa corrente de pensamento, o natural percebido como bom, admitindo-se que o
extrato vegetal seria mais eficiente que alguma de suas partes, entre as quais se encontra o princpio
biologicamente ativo.
Os fitoterpicos so produtos relativamente baratos, de venda livre e com poucas oportunidades
de patentes. Contudo, sua eficcia depende das condies de cultivo das plantas, porque a sntese das
substncias ativas depende do solo, da estao e at do momento do dia. Outras limitaes

250

BIOTECNOLOGIA E SADE / INDSTRIA DE MEDICAMENTOS

importantes so a falta de conhecimento sobre os efeitos secundrios, a ausncia de estudos clnicos


em grande escala e a carncia de controles de qualidade estritos.
A promoo da medicina tradicional pela WHO (do ingls, World Health Organization), enunciada
na declarao de Alma-Ata (1978) sobre a ateno primria a sade, marca uma mudana de atitude
em relao aos fitoterpicos. A partir de 1990, o uso dos fitoterpicos aumentou significativamente,
estimando-se que o mercado global seja de US$ 62 bilhes por ano.
Com a publicao de um manual relativo ao controle de qualidade dos materiais extrados das
plantas medicinais (WHO, 1998) e o estabelecimento de diretrizes gerais sobre metodologias de
pesquisa e avaliao das medicinas tradicionais (WHO, 2000), o mercado dos fitoterpicos entrou em
uma nova etapa.
AS TENDNCIAS RECENTES
Em uma linha totalmente diferente perfilam-se as grandes empresas de produtos farmacuticos. A
descoberta recente de algumas substncias antitumorais (taxol, vinblastina, vincristina etc.) de origem
vegetal estimulou a procura por princpios ativos em plantas, animais e microrganismos,
especialmente em regies de grande biodiversidade.
Contudo, as opinies no so unnimes em relao a possveis e eventuais descobertas de
molculas com aplicaes teraputicas. Algumas empresas farmacuticas consideram que, em quase
duzentos anos de prospeco, j teriam sido descobertos praticamente todos os princpios ativos de
interesse e preferem passar ao desenho de medicamentos por qumica combinatria e modelos
computacionais. Outras ponderam que na diversidade dos microrganismos e das plantas que devem
ser procuradas novas molculas, porque ainda existiriam numerosas fontes de princpios ativos
desconhecidos na flora to diversa como mal estudada de muitas regies.
Recentemente, verificaram-se mudanas enormes no campo da pesquisa de produtos naturais,
graas disponibilidade de tecnologias baseadas na robtica e na automao dos ensaios biolgicos.
Em plena revoluo cultural, a medicina chinesa obteve um antimalrico, a artemisina ou quinghaosu,
a partir de um extrato vegetal. Contudo, em 2000, sua produo por biologia sinttica reduziu o custo
do tratamento a menos de 1 dlar.
A anlise das substncias qumicas (alcaloides, terpenos, esteroides, glicosdeos etc.) presentes em
uma planta ou em seu extrato depende de tcnicas analticas automatizadas e de bancos de dados nos
quais armazenar as informaes (Chemical Fingerprint). Os estudos quimioinformticos estabelecem
correlaes entre estrutura e atividade atravs de mtodos estatsticos.
Uma vez identificado um princpio ativo, suas caractersticas farmacolgicas podero ser
melhoradas mediante transformaes qumicas, chegando-se a substituir uma molcula natural por
outra sinttica equivalente ou ligeiramente modificada. A robotizao permite realizar ensaios de
atividade biolgica de at 200 mil produtos por dia em sistemas de alto rendimento (HTS, do ingls,
high throughput screening).
A IMPORTNCIA DE UM MARCO LEGAL
Nos pases que contam com uma biodiversidade importante, discute-se como desenvolver os estudos
de bioprospeco e qual o papel que deveria ser desempenhado pelas instituies, nacionais e
estrangeiras, e pelas empresas farmacuticas. O risco de biopirataria real. No sculo XIX, plantas de
seringueira foram levadas de modo sub-reptcio da Amaznia Malsia. O captopril, um medicamento
derivado do veneno da cobra Bothrops, hoje importado pelo Brasil em uma verso sinttica.
Na Costa Rica, o InBio (Instituto Nacional de Biodiversidade) negociou, a partir de 1991, acordos de
bioprospeco no valor de US$ 1 milho com a Merck e, mais tarde, com outras empresas

251

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farmacuticas. Esses acordos contriburam para aumentar a capacitao do pas desde vrios pontos
de vista: cientfico, tecnolgico e institucional. No entanto, apesar de ter encontrado vrias molculas
promissoras, at o momento nenhuma delas originou um medicamento novo.
Aproximadamente na mesma poca teve incio um programa de prospeco de agentes bioativos
em terras ridas da Amrica Latina. As numerosas crticas levantadas por estas e outras iniciativas,
como o convnio Novartis-Fundao Bio-Amaznia (2000), mostram as dificuldades em estabelecer
normas de trabalho dentro do marco legal para a proteo da biodiversidade, respeitando a
Conveno da Diversidade Biolgica (1992) e os acordos posteriores.
Um exemplo recente refere-se s possveis aplicaes da sabara (Guiera senegalensis), uma planta
do Sahel, tradicionalmente utilizada pelo povo Dogon (Mali). Pesquisadores franceses isolaram um
princpio ativo (Guieranon B) que mostrara atividade anticancerosa nos testes pr-clnicos, registraram
a patente e planejam desenvolver um medicamento. At o momento no foi contemplada nenhuma
compensao para o povo Dogon.
AS SUBSTNCIAS ANTIBITICAS
O CASO DA PENICILINA
At a Segunda Guerra Mundial, as nicas armas disponveis no combate s infeces eram umas
poucas vacinas e antitoxinas. No incio do sculo XX fora descoberto, no laboratrio de Paul Ehrlich,
um derivado do arsnico para o tratamento da sfilis. Comercializado em 1910 pela empresa Hoechst,
o Salvarsan resultou em um terrvel fracasso por duas razes: era txico e devia ser injetado, em uma
poca em que no existiam seringas. Os primeiros inibidores do crescimento microbiano bemsucedidos foram as sulfas, derivados da sulfonamida, no final da dcada de 1930.
Em 1928, o bacteriologista Alexander Fleming observou a ausncia de crescimento bacteriano em
um cultivo de estafilococos contaminado por um fungo. Depois de isolar, cultivar e identificar o fungo
como Penicillium notatum, Fleming conseguiu extrair a penicilina, uma substncia antimicrobiana
eficaz quando testada em animais. Esse resultado no teve repercusso alguma na comunidade
cientfica, e, durante quase 10 anos, Fleming tentou infrutiferamente obter penicilina em estado puro.
Em 1940, nos laboratrios da Universidade de Oxford, H. Florey e E. Chain obtiveram um sal sdico
de penicilina que teve um efeito extraordinrio nos primeiros ensaios clnicos (Figura 19.3). Contudo,
a quantidade disponvel era pequena para uso teraputico e, em plena Segunda Guerra Mundial
(1941), Florey e Chain transferiram-se para Peoria (Illinois, Estados Unidos), com o objetivo de iniciar
uma produo em grande escala.
-------------FIGURA 19.3. A frmula da penicilina
Na frmula da penicilina pode-se observar um anel -lactmico e uma cadeia
lateral (R). Algumas bactrias sintetizam -lactamases, enzimas que, ao destruir
o anel correspondente, desativam as penicilinas naturais. Modificando a cadeia
lateral, obtiveram-se as penicilinas semissintticas, resistentes a essas enzimas.

252

BIOTECNOLOGIA E SADE / INDSTRIA DE MEDICAMENTOS

Dois fatores possibilitaram a produo industrial de penicilina. O primeiro, a descoberta em um melo


podre de uma linhagem de Penicillium chrysogenum capaz de produzir 200 vezes mais penicilina que
a linhagem original. O segundo, a substituio do cultivo em garrafas pelo cultivo submerso em
biorreatores, com capacidade entre 40 mil e 200 mil litros, possibilitando um aumento na
produtividade que passou de 50 a 100 mg/l.
A participao da indstria farmacutica (Pfizer, Merck) foi decisiva para o sucesso do
empreendimento. Em 1944, as foras aliadas dispuseram de suficiente penicilina para o tratamento
dos soldados feridos na invaso da Europa.
OS LIMITES AO USO DE ANTIBITICOS
O sucesso da penicilina estimulou a procura de microrganismos produtores de antibiticos no solo, um
ambiente muito competitivo, onde um antimicrobiano confere uma vantagem seletiva. Assim,
descobriram-se a actinomicina, a neomicina e a estreptomicina, o primeiro antibitico eficiente para
o tratamento da tuberculose. Um pouco mais tarde entraram no mercado alguns antibiticos de amplo
espectro, como o cloranfenicol, a aureomicina e a terramicina.
Paralelamente, a indstria aperfeioou os mtodos de extrao e de purificao e as pesquisas
sobre formas moleculares alternativas mais eficientes. Alguns antibiticos de origem natural, como a
penicilina e o cloranfenicol, podem ser sintetizados e/ou modificados quimicamente.
A descoberta de outros antibiticos (eritromicina, vancomicina, ampicilina, meticilina,
cefalosporina) possibilitou a cura de doentes e feridos para os quais, meio sculo atrs, a medicina no
tinha tratamento. Contudo, o tempo mostrou o outro lado da moeda. O uso indiscriminado de
antibiticos, na clnica mdica e nas criaes de animais, favoreceu a apario de linhagens resistentes,
que se espalharam rapidamente.
Os antibiticos agem de diversos modos, mas sempre tendo como alvos algumas poucas funes
vitais da clula bacteriana, tais como a sntese da parede celular, dos cidos nucleicos, das protenas
ou do cido flico. Para cada alvo atingido, aparece uma forma especfica de resistncia. O anel lactmico das penicilinas e cefalosporinas, por exemplo, desativado pelas bactrias produtoras de lactamases. Uma modificao do stio-alvo no ribossomo acaba com a inibio da sntese proteica pela
estreptomicina. Basta uma alterao da permeabilidade celular para que a tetraciclina seja bombeada
para fora das clulas. E a transferncia horizontal de plasmdeos entre microrganismos pode
disseminar a resistncia mltipla s drogas.
De fato, se quisermos manter alguma vantagem sobre as bactrias, nessa corrida sem fim entre a
utilizao de antibiticos e a apario de microrganismos resistentes, novos medicamentos tero que
ser descobertos.
A NECESSIDADE DE INOVAO
Existem muitas substncias com propriedades antibiticas, mas poucas so interessantes do ponto de
vista clnico. As principais classes de antibiticos foram descobertas entre 1940 e 1962. Depois de
vrias dcadas sem grandes inovaes nesse campo, foram descobertas as oxazolidinonas, molculas
bloqueadoras da sntese de protenas bacterianas (Tabela 19.1).
Em mais de 40 anos, nenhum antibitico novo contra bactrias Gram negativas chegou ao mercado.
Estima-se que, em 2050, os microrganismos multirresistentes a antibiticos poderiam causar a morte
de 10 milhes de pessoas por ano e perdas econmicas de 100 trilhes de dlares.

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TABELA 19.1. A linha do tempo de entrada dos antibiticos e antibacterianos no mercado


ANTIBITICOS E ANTIBACTERIANOS

Introduo

Sulfonamidas (Sulfas)

1936

-lactmicos

1940

Cloranfenicol, Tetraciclinas

1949

Aminoglicosdeos

1950

Macroldeos

1952

Quinolonas, estreptograminas

1962

Oxazolidinonas

2000

Lipopeptdeos

2003

Glicilciclinas

2005

Mutilinas

2007

--------------

Devido s dificuldades encontradas em descobrir molculas novas, e para contornar a apario de


resistncia, a indstria investiu nas chamadas me-too-Drugs, isto , substncias iguais com pequenas
modificaes qumicas. Por outro lado, o vencimento de muitas das patentes possibilitou o
aparecimento das formas genricas de alguns dos antibiticos mais difundidos, como o Augmentin
(amoxacilina/clavulanato) ou o Cipro (ciproflaxin). Os antibiticos representam 65% do mercado de
medicamentos anti-infecciosos, que inclui tambm os antivirais e os antifngicos.
Nos ltimos anos, muitas empresas abandonaram o mercado para atender o setor, bem mais
lucrativo, das doenas crnicas. No obstante, cinco das maiores ainda continuam produzindo
antibiticos: Abbott, Novartis, AstraZeneca, Merck, Pfizer e Johnson & Johnson. Outras firmas novas
ocuparam o espao vacante, como Basilea Pharmaceutica, que lanou o Ceftobiprole, uma
cefalosporina de quinta gerao, eficaz contra os MRSA (do ingls, meticillin-resistent Staphylococcus
aureus) e outros supermicrbios.
Atualmente, existem vrias estratgias para o desenvolvimento de novos antibiticos. Sistemas
robotizados para triagem de alto desempenho (HTS, high-throughput screening) podem testar a
atividade inibitria do crescimento de microrganismos em centenas de compostos ou extratos
naturais. Ou pesquisar os peptdeos naturais, produzidos por seres vivos terrestres e marinhos, e
incrementar sua ao antibitica mediante alteraes na estrutura molecular. E, tambm, investigar a
atividade antimicrobiana de peptdeos sintticos, construdos por qumica combinatria.
Procura-se algum alvo, no metabolismo bacteriano, que impea a infeco. Os novos mtodos in
silico possibilitam a triagem de estruturas moleculares relacionadas com uma atividade biolgica
determinada, assim como a utilizao dos dados genmicos para identificar um alvo medicamentoso.
O desenho de produtos novos estaria ligado genmica comparativa e funcional dos
microrganismos, uma rea capaz de esclarecer a funo dos genes e de mostrar quais os alvos que
poderiam ser atacados. Centenas de genomas bacterianos j tm sido sequenciados. Estima-se que os
antibiticos baseados na genmica estejam disponveis na prxima dcada.
O caminho est sendo trilhado por algumas pequenas empresas biotecnolgicas, apesar da
dificuldade em enfrentar a etapa dos testes clnicos, que demandam inverses estimadas em 150 a
200 milhes de dlares, valores altssimos que s podem ser cobertos pelas grandes empresas
farmacuticas.

254

BIOTECNOLOGIA E SADE / INDSTRIA DE MEDICAMENTOS

AS PRIMEIRAS MOLCULAS TERAPUTICAS


O CASO DA INSULINA
A insulina um mensageiro qumico (hormnio), produzido no pncreas, que regula o metabolismo
do acar (glicose) no corpo. (Figura 19.4). A destruio das clulas do pncreas pelo sistema imune
causa uma deficincia na produo de insulina, um aumento no nvel de glicose no sangue e sua
excreo na urina.
As complicaes resultantes incluem nefropatias, retinopatias, neuropatias e doenas
cardiovasculares. O quadro descreve o diabetes mellitus tipo 1, ou diabetes juvenil, uma doena que
ataca crianas e adolescentes, conhecida h sculos e que hoje pode ser tratada.
Existe outra forma da doena, diabete tipo 2, devida reduo do nmero de receptores de insulina
nas clulas musculares e adiposas. O paciente no responde adequadamente insulina ou no a
produz em quantidade suficiente.
Esta forma costuma se manifestar em pessoas mais velhas, com sobrepeso, inativas e com uma
histria familiar. O tratamento envolve dieta e exerccios moderados, alm de medicamentos, entre
os quais, eventualmente, a insulina.
Em 1920, F. Banting comprovou o efeito hipoglicemiante de extratos de pncreas de cachorro e,
logo depois, deu-se incio comercializao de insulina extrada de pncreas bovinos e porcinos. Essas
insulinas animais salvaram numerosas vidas, mas, por diferir da insulina humana em alguns
aminocidos, acabavam provocando reaes alrgicas.
Do ponto de vista da estrutura qumica, as diferenas so pequenas. A molcula de insulina humana
consta de 51 aminocidos, distribudos em duas cadeias unidas entre si por pontes bissulfeto. A
insulina bovina difere da humana nas posies 8 e 10 da cadeia A e na posio 30 da cadeia B, mas a
insulina porcina s difere na posio 30 da cadeia B (Figura 19.4 A).
O tamanho da molcula de insulina torna a sntese qumica economicamente invivel (Figura 19.4
A). Contudo, basta substituir um aminocido (alanina) por outro (treonina) na extremidade de uma
das cadeias da insulina suna para que a sequncia molecular seja igual da insulina humana. Esta
insulina semissinttica representou um enorme progresso em relao s insulinas animais.
A tecnologia do DNA recombinante revolucionou a produo de insulina humana, possibilitando a
sntese em microrganismos geneticamente modificados: primeiro em Escherichia coli (Eli Lilly, 1982),
mais tarde em leveduras (Novo, 1987). Por ser um produto mais estvel e de melhor qualidade que os
anteriores existentes no mercado, a insulina recombinante representa um dos primeiros e indiscutveis
sucessos da biotecnologia (Figura 19.4 B).

A SUBSTITUIO DO PRODUTO NATURAL


Seja por influncia de fatores genticos, ambientais ou culturais, ou tambm pela existncia de
melhores mtodos de diagnstico, milhes de pessoas no mundo inteiro dependem hoje de injees
regulares de insulina. A incidncia da diabete de tipo 2 est aumentando em crianas e adolescentes,
em alguns grupos tnicos que adotaram modos de vida e de alimentao diferente e, tambm, nas
populaes urbanas de migrantes. Em 2025, o nmero de diabticos poderia chegar a 300 milhes.
Nos prximos anos, o mercado passar por reformulaes, ao expirar algumas patentes e serem
disponibilizadas insulinas no injetveis, administradas oralmente ou por inalao. Algumas inovaes,
como o grau de pureza e o tempo de reao, so de grande importncia para a eficcia do tratamento.

255

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FIGURA 19.4. A insulina humana


C. A molcula de insulina

Cadeia B

Cadeia A

D. A sntese da insulina
a) A sntese in vivo da insulina nas clulas pancreticas
Peptdeo-sinal

Traduo

mRNA de insulina

Remoo do sinal e
unio das cadeias A e B

Molcula precursora

Remoo
da cadeia C

Pr-insulina

Insulina

b) A sntese em Escherichia coli (1982)


Um organismo procarionte incapaz de realizar modificaes ps-traducionais. possvel sintetizar pr-insulina para
transform-la enzimaticamente em insulina, ou sintetizar cada uma das cadeias em separado e associ-las mais tarde, como
ilustrado no esquema.

Sntese da cadeia A

Insero no plasmdeo
e clonagem em E.coli
Sntese da cadeia B

Extrao da cadeia proteica A


Unio qumica das
cadeias A e B
Insulina

Insero no plasmdeo
e clonagem em E.coli

256

Extrao da cadeia proteica B

BIOTECNOLOGIA E SADE / INDSTRIA DE MEDICAMENTOS

Em 2001, a Novo Nordisk absorveu a rea de produo da Biobrs, uma empresa brasileira que durante
mais de 20 anos abasteceu de insulina grande parte do mercado latino-americano. Uma parceria entre
a Fundao Oswaldo Cruz e a empresa Biomm, que conservou a patente para a insulina humana
desenvolvida anteriormente pela Biobrs, poder colocar a insulina no mercado e distribu-la no SUS
(Sistema nico de Sade), a partir de 2017.
Atualmente, a produo de insulina humana recombinante se concentra em trs grandes
conglomerados farmacuticos: Eli Lilly, Novo Nordisk e Sanofi.
AS PROTENAS RECOMBINANTES
AS BASES TECNOLGICAS
As protenas de uso teraputico tm um tamanho 100 vezes maior que o das molculas presentes nos
medicamentos convencionais. Sua produo seria invivel sem a tecnologia do DNA-recombinante,
porque os mtodos extrativos fornecem quantidades mnimas que nunca chegariam a satisfazer a
demanda do mercado.
A rpida incorporao das novas tecnologias nos mtodos de produo facilitou, j na dcada de
1980, a obteno de insulina e de interferon mediante bactrias e leveduras modificadas
geneticamente, cultivadas em biorreatores. Mais tarde, os microrganismos foram substitudos em
alguns processos por clulas animais que, apesar de mais difceis de cultivar, so capazes de levar a
cabo as modificaes ps-traducionais indispensveis.
Com o objetivo de aumentar a produtividade e diminuir os custos, foram construdos plantas e
animais transgnicos (vacas, cabras, ovelhas etc.) para uma centena de protenas de tipo
recombinante, muitas das quais se encontram j na fase de testes clnicos. O primeiro anticoagulante
extrado do leite de uma cabra transgnica entrou no mercado em 2009 (Atryn, GTC Biotherapeutics).
O medicamento ZMapp (Mapp Biopharmaceuticals), para tratamento de Ebola, rene 3 anticorpos
monoclonais humanizados, produzidos em folhas de tabaco. Ainda em fase experimental, teve sucesso
quando utilizado emergencialmente para tratar pessoal de sade contaminado por ocasio da
epidemia que assolou vrios pases africanos.
A hostilidade da sociedade, em relao s plantas e animais transgnicos, no existe quando se
trata de produzir medicamentos. O princpio de equivalncia, contencioso no setor de agroalimentos,
totalmente aceito em relao aos novos medicamentos. Uma atitude contraditria que incita
reflexo.
OS PRODUTOS E SUAS UTILIZAES
Alm da insulina recombinante, um dos primeiros produtos obtidos por engenharia gentica foi o
interferon (IFN), uma protena que interfere na replicao de vrus, bactrias e clulas tumorais.
Existem vrios tipos e so utilizados no tratamento de cncer, esclerose mltipla, hepatite B e C.
As protenas teraputicas de origem recombinante cumprem diversas funes (Tabela 19.2).
Algumas substituem ou complementam molculas naturais, tais como hormnios, interferones,
interleucinas, fatores estimuladores do crescimento celular, fatores de coagulao sangunea,
enzimas. Outras so produtos especialmente desenhados para cumprir uma funo medicamentosa:
trombolticos (tPA ou fator ativador de plasminognio, estreptoquinase, uroquinase), anticorpos
monoclonais e antgenos bacterianos para vacinas.
Utilizam-se fundamentalmente nas reas de hematologia, oncologia, diabetes e endocrinologia,
artrite, inflamao, doenas imunes e doenas genticas lisossmicas (Gaucher, Hurler, Fabry, Pompe).

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Proximamente estaro vencendo as patentes de vrias molculas: -interferon, insulina humana,


hormnio de crescimento, vacina contra a hepatite B etc. Dado o custo que os novos medicamentos
representam para os sistemas de sade, cogita-se a produo de genricos de vrias protenas
teraputicas.
OS MEDICAMENTOS PERSONALIZADOS
A FARMACOGENMICA
O mapeamento do genoma foi o primeiro passo para o desenvolvimento de novos produtos e aes
teraputicas, um terreno onde se firma a farmacogenmica, uma disciplina nova que visa identificar
as diferenas genticas associadas a diversas doenas.
Os seres humanos compartilham 99,9% do genoma, de modo que as variaes entre eles devem
ser procuradas no 0,1% restante, isto , entre os 30 milhes de polimorfismos de um nico nucleotdeo
ou SNPs (do ingls, single nucleotide polymorphisms). Trata-se de variaes de uma base a cada 1.000
nucleotdeos, distribudas ao longo do genoma. As mais interessantes so as que ocorrem dentro de
um gene ou em uma regio reguladora.
Sabendo que dois pontos que se encontram muito prximos no cromossomo tendero a ser
transmitidos juntos, pode-se dividir o cromossomo em blocos de aproximadamente 10 mil bases
(hapltipos) e caracteriz-los por alguns dos SNPs de cada bloco. Esse era o objetivo do International
HapMap, recentemente concludo e baseado no genoma de pessoas de origem europeia, asitica e
africana.
A importncia do mapeamento do genoma foi claramente percebida pelas empresas
farmacuticas. Antes de se completar, algumas das grandes empresas farmacuticas (Glaxo Wellcome,
Novartis) comearam a compilar informaes sobre genes associados a doenas e a localizar SNPs em
alguns genes previamente selecionados. Essas informaes sero complementadas com os dados
obtidos mediante os novos mtodos de sequenciamento.
Em 1999, a empresa americana deCode obteve, por 200 milhes de dlares, a exclusividade para
elaborar um gigantesco banco de dados com os registros de sade, as genealogias e os perfis de DNA
dos habitantes da Islndia. O objetivo principal era o estudo das doenas no contexto histricoevolutivo de uma populao homognea dos 270 mil habitantes da ilha, povoada mil anos atrs pelos
viquingues e com poucos contatos externos posteriores.
O projeto suscitou controvrsia. Um acordo da deCode com a Hoffmann-La Roche visava identificar
os genes responsveis por vrias doenas. No caso de serem obtidos resultados positivos, os
habitantes de Islndia teriam direito, por cinco anos, gratuidade nos medicamentos desenvolvidos.
Em funo dos problemas ticos e legais, levantados oportunamente, a empresa enfrentou algumas
dificuldades na construo de seu banco de dados de 140.000 islandeses.
Apesar de ter descoberto uma dezena de alvos medicamentosos, entre os quais protenas
envolvidas em doena cardaca, osteoporose e esquizofrenia, a empresa no obteve resultados
suficientemente rpidos para satisfazer os seus investidores. Em bancarrota, a empresa acabou sendo
vendida, sendo atualmente propriedade da Amgen Decode Genetics. Devido a impedimentos legais,
os dados e as amostras biolgicas no puderam ser vendidos e permanecem na Islndia.
A empresa conta hoje com dados parciais de 150 mil pessoas voluntrias e com o sequenciamento
de 10 mil genomas que, associados aos registros de sade, permitiram inferir quais os riscos de
determinadas variantes gnicas. Contudo, em funo de uma condio de sigilo contratual, a empresa
no pode transmitir aos voluntrios a informao sobre quais os seus riscos de doena.
Existem outros projetos na mesma linha de investigao, tais como Estonian Genome (Estonia),
Galileo Genomics (Canad), Oxagen (Inglaterra), Rockefeller University (Micronsia), UK.Bank

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BIOTECNOLOGIA E SADE / INDSTRIA DE MEDICAMENTOS

(Inglaterra). Wellcome Trust Case Control Consortium encontrou 24 associaes a 7 doenas (Crohn,
diabetes 1 e 2, doena cardiovascular, hipertenso, artrite reumatoide e transtorno bipolar).
A FARMACOGENTICA
Outra disciplina nova a farmacogentica, que investiga as diferenas genticas em uma populao
que permitem prever diferentes respostas a um medicamento. Receadas por mdicos e pacientes, as
reaes adversas so temidas pela indstria farmacutica, que se protege mediante bulas
cuidadosamente redigidas. Nos Estados Unidos, as reaes adversas causam 100 mil mortes e 2
milhes de hospitalizaes por ano.
Os medicamentos passam por vrias fases de estudos clnicos antes de chegar ao mercado.
Contudo, as pessoas no reagem do mesmo modo a um medicamento, que pode ser eficiente para
uns e txico para outros.
Aproximadamente 60% dos medicamentos so metabolizados por uma famlia de enzimas
(citocromo P450). Algumas pessoas os degradam rapidamente, outras no, dependendo de suas
caractersticas enzimticas individuais. Sabendo a qual dos dois grupos pertence um paciente, podese determinar qual a dose do anticoagulante que lhe dever ser administrada, minimizando os efeitos
adversos.
Associando marcadores genticos a respostas diferenciais a medicamentos, pode-se dividir a
populao em subgrupos e oferecer um tratamento personalizado. Atualmente, antes de iniciar um
tratamento de cncer de mama com a herceptina, deve-se realizar um teste gentico na paciente para
saber se o medicamento se ajusta, ou no, ao seu caso. Em pacientes HIV positivos, procura-se
determinar a presena do alelo HLA-B*5701 antes de iniciar o tratamento com abacavir, porque os
portadores desse alelo podem ser hipersensveis ao medicamento. Aprovado pela FDA, o Bidil um
medicamento para doena cardiovascular, destinado exclusivamente aos pacientes afroamericanos.
O desenvolvimento da farmacogentica dar aos pacientes mais chances de receber a medicao
adequada e na dose certa. Por outro lado, as empresas farmacuticas podero escolher seus
voluntrios para os testes clnicos no subgrupo apropriado, evitando que um produto novo seja
descartado por falta de resposta adequada. No futuro, em vez de um nico produto campeo de
vendas, as empresas farmacuticas podero oferecer medicamentos diferentes, cada um dos quais
respondendo s expectativas de um tipo de consumidor.
AS DOENAS RFS
Uma doena considerara rara, ou rf, quando atinge um nmero pequeno de pessoas. Existem
aproximadamente 7 mil tipos de doenas raras, 80% de origem gentica, que afetam 350 milhes de
pessoas. Para a indstria, a menos que receba algumas compensaes, qualquer doena que afete
menos de 200 mil pessoas desinteressante, em termos de pesquisa e desenvolvimento de
medicamentos.
Nos Estados Unidos, o Orphan Drug Act (1983) garante incentivos financeiros s empresas
farmacuticas que desenvolvam produtos para essas doenas. Tambm garante que, durante sete
anos, nenhum medicamento equivalente ser aprovado, a no ser que se trate de outro que lhe seja
superior. Legislaes equivalentes foram promulgadas em outros pases (Japo, 1993; Austrlia, 1998;
Cingapura, 1999; Unio Europeia, 2000).
Abre-se assim um campo no qual as empresas de biotecnologia se inserem com sucesso, j que
seus produtos visam doenas de origem gentica, envolvendo alteraes de receptores celulares,
enzimas e protenas estruturais. Em 2015, a metade dos medicamentos aprovados correspondia a
doenas rfs e, atualmente, mais de 560 encontram-se em desenvolvimento.

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TABELA 19.2. Alguns biofrmacos de interesse mdico


Fonte: Nature Biotechnology, 2003, vol. 21, n8, em Porque Biotecnologia, Cuaderno n049
PRODUTO

INDICACO TERAPUTICA

FATORES DE COAGULAO
Fator VIII

Hemofilia A

Fator IX

Hemofilia B

Fator VIIa

Certas formas de hemofilia

ANTICOAGULANTES
Fator ativador de plasminognio

Infarto de miocrdio

Fator ativador de plasminognio

Infarto de miocrdio

Hirudina

Trombocitopenia e preveno de trombose

HORMNIOS
Insulina

Diabete

Hormnio de crescimento

Deficincia do hormnio em crianas, acromegalia, sndrome de Turner

Hormnio folculo-estimulante

Infertilidade, anovulao e superovulao

Hormnio paratirideo

Osteoporose

Gonadotrofina corinica

Reproduo assistida

Tirotrofina

Deteco /tratamento de cncer de tireoide

Hormnio luteinizante

Algumas formas de infertilidade

Calcitonina

Doena de Paget

Glucagon

Hipoglicemia

FATORES HEMATOPOITICOS
Eritropoietina (EPO)

Anemia

Fator estimulante de colnias de


granulcitos/macrfagos (GM-CSF)

Neutropenia, transplante autlogo de medula

INTERFERON E INTERLEUCINAS
Interferon alfa (IFN alfa)

Hepatite B e C, diferentes tipos de cncer

Interferon beta (IFN beta)

Esclerose mltipla

Interferon gamma (IFN gamma 1b)

Granulomatose crnica

Interleucina 2 (IL-2)

Cncer de rim

VACINAS
Hepatite B

Imunizao contra a hepatite B

Hepatite A

Imunizao contra a hepatite A

Doena de Lyme

Imunizao contra a doena de Lyme

ANTICORPOS MONOCLONAIS RECOMBINANTES


Anti-IgE (recombinante)

Asma

Anti-TNF (recombinante)

Artrite reumatoide

Anti-IL2

Preveno da rejeio aguda do transplante de rim

OUTROS PRODUTOS RECOMBINANTES


Protena morfognica do osso-2

Fratura de tbia

Galactosidase

Doena de Fabry (deficincia de -galactosidase)

Iaronidase

Mucopolissacaridose

Protena C

Sepse severa

-glucocerebrosidase

Doena de Gaucher

DNAse

Fibrose cstica

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BIOTECNOLOGIA E SADE / INDSTRIA DE MEDICAMENTOS

Dada a demora e as dificuldades inerentes ao lanamento de um medicamento novo, as doenas rfs


representam um filo economicamente interessante, tanto para as pequenas como para as grandes
empresas. Alm de receber mais rapidamente a aprovao das autoridades, o grupo-alvo integrado
com pacientes diagnosticados e no tratados, dispostos a aceitar o uso de um medicamento. Se a
resposta dos pacientes for favorvel, as possibilidades de lucro aumentam consideravelmente.
E do ponto de vista dos pacientes? Consideremos o caso de Kalideco, de Vertex Pharmaceuticals,
que rende aproximadamente 300 mil dlares por ano. Trata-se de uma medicao para fibrose cstica
muito eficiente para os pacientes com uma mutao em G551D, presente em 4% dos 70 mil casos de
fibrose cstica, mas ineficiente em pacientes com a mutao em F508, que afeta 50% dos casos
existentes.
O MERCADO DOS BIOMEDICAMENTOS
A TENDNCIA GERAL
Estima-se que o mercado global de produtos biotecnolgicos represente pouco mais da dcima parte
do mercado farmacutico mundial. Mais de 300 protenas recombinantes aprovadas e muitas outras
em testes clnicos indicam um mercado em crescimento, do qual o setor mais dinmico o dos
anticorpos monoclonais. Vrios desses biofrmacos, lderes de vendas, destinam-se aos tratamentos
oncolgicos, de artrite e de outras doenas imunes e inflamatrias. (Tabela 19.3). Contudo, existe pelo
menos um que permite a obteno de imagens, e outro em que a molcula se encontra acoplada a
uma toxina que destri a clula cancerosa.
Em funo dos avanos nos estudos genmicos, muitos outros biofrmacos, visando uma centena
de doenas, sero descobertos e patenteados nos prximos anos. Os imensos bancos de dados e as
tcnicas de triagem assistidas por computador permitiro diminuir o tempo necessrio para os estudos
experimentais. Os principais alvos de uma centena de doenas dos mais de 900 medicamentos que se
encontram em desenvolvimento so o cncer (37%), as doenas infecciosas (vacinas, 15%), doenas
autoimunes (8%) e doenas cardiovasculares (6%).
Do consumo mundial de medicamentos, 88% correspondem a um bloco de regies formado por
Amrica do Norte (49%), Europa (28%) e Japo (11%). Como a populao destes pases est
envelhecendo, os principais alvos para o desenvolvimento de medicamentos novos so as doenas
cardiovasculares, o cncer, as alteraes respiratrias e as que afetam a qualidade de vida
(osteoporose, artrite, doenas de Parkinson e de Alzheimer).
A maioria das grandes corporaes est instalada nos Estados Unidos, onde, alm de seu principal
mercado, encontram uma legislao favorvel. Na Amrica Latina, o setor est dominado pelas
empresas internacionais e, salvo algumas excees (Bio Sidus, ProBioMed, Heber Biotec), h poucos
investimentos na pesquisa e no desenvolvimento de novos produtos.
O custo dos medicamentos depende em grande parte dos investimentos da indstria farmacutica
em pesquisa e desenvolvimento de novos produtos. O tempo e o custo de desenvolvimento de um
medicamento dependem da durao dos testes clnicos e do uso da tecnologia (robtica,
bioinformtica, qumica combinatria, triagem de compostos biolgicos em alta velocidade, biochips
e microarrays).
Em 2014, as principais empresas produtoras de protenas teraputicas foram Roche Holding (Suia),
Gilead Sciences (Estados Unidos), Amgen (Estados Unidos), Biogen (Estados Unidos), Celgene (Estados
Unidos), Shire (Reino Unido), CSL (Estados Unidos), Crifols (Espanha), UCB (Blgica) e Novo Nordisk
(Dinamarca). Estima-se que, em 2020, a metade dos 100 medicamentos mais vendidos seja
biotecnolgica.

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TABELA 19.3. Os medicamentos biolgicos mais lucrativos em 2014 (Statista, Phrma)


TRATAMENTO

NOME COMERCIAL
(Nome genrico)

Artrite reumatoide e doenas


relacionadas

HUMIRA (Adalimumab)

Abbott / 12.543

REMICADE (Infliximab)

Johnson & Johnson / 9.240

RITUXAN (Rituximab)

Biogen Idec / 8.678

ENBREL (Etarnecept)

Amgen / 8.538

Diabete

LANTUS (Insulina Humana)

Sanofi / 7.279

Diversos tipos de cncer

AVASTIN (Bevazizumab)

Roche / 6.957

HERCEPTIN (Trastuzumab)

Roche / 6.793

NEULASTA (Pegfilgastrin)

Amgen / 5.857

REVLIMID (lenalidomide)

Celgene / 4.980

GLEEVEC (Imatinib)

Novartis / 4.695

VELCADE (Bortezomibe)

Takeda/J&J / 1766

Pneumonia meningocccica

PREVNAR (Vacina)

Pfizer/ 4.464

Esclerose mltipla

AVONEX ( e Interferon)

Biogen Idec / 3.013

REBIF ( interferon)

Merck / 2.414

SOLIRIS (Eculizumab)

Alexion Pharmaceuticals / 2.225

ADVATE (Fator VIII)

Baxter / 2.083

Doenas hematolgicas

EMPRESAS / VENDAS (MILHES DE DLARES)

--------------

Para as grandes empresas farmacuticas, uma medida do sucesso significa conseguir um medicamento
que alcance um valor de vendas de 1 bilho de dlares (blockbusters). Em 2014, os maiores lucros
corresponderam aos medicamentos destinados ao tratamento de artrite e doenas relacionadas,
diversos tipos de cncer, diabete, esclerose mltipla e uma vacina antimeningocccica (Tabela 19.3).
No mesmo ano, dos dez medicamentos melhor colocados, 6 eram anticorpos monoclonais.
AMRICA LATINA
Na Amrica Latina existe uma indstria farmacutica que fabrica medicamentos para consumo interno
e para exportao, destacando-se Argentina, Brasil, Cuba e Mxico. Os principais produtos
biotecnolgicos so os anticoagulantes (eritropoietina), os hormnios, os interferones ( e ) e os
fatores estimuladores do crescimento celular.
A Argentina conta com um setor farmacutico slido e competitivo. Vrias protenas
recombinantes so produzidas localmente, por trs empresas biotecnolgicas nacionais (Bio Sidus, PCgen, Zelltek) que vendem seus produtos atravs de suas empresas farmacuticas correspondentes
(Sidus, Pablo Cassar) e os exportam para diversos pases de sia, Oriente e Amrica Latina. Uma
empresa estrangeira, Sanofi, produz vacinas contra a hepatite B.

262

BIOTECNOLOGIA E SADE / INDSTRIA DE MEDICAMENTOS

Bio Sidus obteve sucesso com seu tambo farmacutico, pequenos rebanhos de vacas transgnicas
produtoras de hormnio de crescimento, de insulina ou de leite maternizado, um empreendimento
que ir sem dvida lhe garantir uma posio de destaque no setor produtivo. O Laboratrio Pablo
Cassar outra empresa tradicional que proximamente ir colocar no mercado uma nova vacina em
duas doses contra a hepatite B e, recentemente, obteve uma enzima recombinante capaz de reparar
as leses causadas pela exposio aos raios X. Ambas as empresas distribuem seus produtos no Brasil.
Diferente da Argentina, no Brasil as empresas pblicas como Farmanguinhos e Instituto Butant
tem um papel determinante na produo de medicamentos, destacando-se respectivamente na
produo de retrovirais e eritropoietina. Contudo, depende-se ainda da importao de biofrmacos,
alguns dos quais so distribudos pelo Sistema nico de Sade (eritropoietina, imunoglucerase,
infliximab, interferon, somatotropina recombinante humana). Acordos de transferncia de tecnologia,
envolvendo laboratrios nacionais (pblicos e privados) e estrangeiros, visam reverter essa
dependncia.
Mxico produtor de medicamentos de alta tecnologia (antibiticos, antiinflamatrios,
tratamentos contra o cncer). A empresa ProBioMed tem desenvolvido com o setor universitrio uma
dezena de protenas recombinantes (anticoagulantes, interferones, fatores estimuladores do
crescimento celular) para uso interno e exportao para outros pases de Amrica Central e Amrica
do Sul. Outros laboratrios (Instituto Biocln, grupo Silanes) tm se destacado na produo de
antitoxinas.
Cuba tem registrados numerosos produtos biotecnolgicos, desenvolvidos por Centros de Pesquisa
(Centro de Inmunologa Molecular, Centro de Ingeniera Gentica y Biotecnologa, Centro Nacional de
Biopreparados e Instituto Finlay) e comercializados por empresas farmacuticas associadas (Heber
Biotec, CIMAB etc.). Hoje Cuba produz vacinas, molculas teraputicas e vrios sistemas de
imunodiagnstico. Esses produtos renderam aproximadamente 900 patentes no exterior e so
exportados para 40 pases. Assim como o nquel, o tabaco e o acar, a biotecnologia um dos
principais produtos de exportao da ilha.

263

C A P T U L O 20

BIOTECNOLOGIA E SADE
OS NOVOS TRATAMENTOS

A APROVAO DE UM TRATAMENTO EXPERIMENTAL


Assim como qualquer medicamento novo, um tratamento passa por vrias etapas antes de se instituir
como prtica mdica. Os estudos pr-clnicos iniciais incluem as pesquisas relativas a leses ou doena,
em testes laboratoriais e experimentao em animais, desenvolvidas em universidades ou empresas e
financiadas com dinheiro pblico e/ou privado.
Os resultados so revisados, publicados e repetidos numerosas vezes pela comunidade cientfica,
at que, em funo da quantidade de informao reunida, parea razovel estender o procedimento
ao ser humano.
O novo tratamento ser considerado experimental quando utilize medicamentos, vacinas, testes
diagnsticos, aparelhos ou tcnicas que sejam, ainda, objeto de investigaes em seres humanos.
Solicita-se ento, por meio de um processo formal, uma autorizao para dar incio aos testes clnicos,
que fornecero informaes sobre a segurana, a eficcia e os efeitos colaterais desse tratamento.
Os ensaios ou testes clnicos seguem desenhos experimentais rigorosos e controles severos para
garantir a confiabilidade dos estudos. Abrangem um nmero pequeno de participantes, que devero
assinar previamente um termo de consentimento informado, reconhecendo estarem cientes das
opes de tratamento e dos riscos, assim como de seus direitos e responsabilidades.
Durante os testes clnicos, o tratamento experimental pode se revelar melhor ou pior que os j
existentes. Se os resultados forem satisfatrios, ser solicitada a aprovao da agncia reguladora
correspondente (FDA, US Food and Drug Administration, nos Estados Unidos; EMA, European Medical
Agency, na Unio Europeia; Anvisa, Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria, no Brasil; Anmat,
Administracin Nacional de Medicamentos, Alimentos y Tecnologa Mdica, na Argentina).
Uma vez autorizado, o tratamento experimental passa a ser uma prtica mdica de uso geral, mas
continuar a ser objeto de vigilncia para monitorar efeitos negativos que s possam ser detectados
em uma populao maior.

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BIOTECNOLOGIA E SADE / NOVOS TRATAMENTOS

OS TRANSPLANTES
OS TRANSPLANTES DE RGOS
Em 1899, a primeira tentativa de transplante de rim de um cachorro a outro causou a morte do
receptor, mostrando que o fenmeno de rejeio seria o principal obstculo aos transplantes de
rgos. Uma exceo a crnea, cujo primeiro transplante bem-sucedido realizara-se em 1905.
O primeiro transplante de corao, realizado pelo cirurgio Christian Barnard (frica do Sul, 1967),
teve uma repercusso enorme nos meios de comunicao. O mundo inteiro acompanhou os
comunicados mdicos emitidos na Cidade do Cabo, at a morte do paciente, 18 dias mais tarde.
Durante vrios anos, os problemas de rejeio pareceram intransponveis.
Na dcada de 1980, a melhoria das tcnicas cirrgicas, a caracterizao dos antgenos dos tecidos
e a descoberta dos primeiros medicamentos imunossupressores (ciclosporinas) revolucionaram os
transplantes, que se tornaram uma interveno rotineira. Hoje, em centros mdicos de todos os pases
so substitudos, com sucesso, diversos rgos e tecidos: corao, rim, fgado, pulmo, intestino, timo,
crneas, medula ssea, pele, pncreas, vlvulas cardacas, veias etc.
A relao entre o doador e o receptor simplifica, ou dificulta, o procedimento. No h rejeio no
isotransplante, em que a transferncia de um ovrio ou de um rim feita de um indivduo a seu gmeo
idntico; nem no autotransplante, em que se substitui uma artria coronria por uma safena do
mesmo indivduo, ou um fragmento de pele danificado por outro. Contudo, o alotransplante, em que
um rgo transferido a outro indivduo, requer a supresso do sistema imune, para que o organismo
possa aceitar uma parte non-self. Caso contrrio, o rgo ser rejeitado e, tambm, o rgo poder
rejeitar o hospedeiro.
OS XENOTRANSPLANTES
dificuldade em achar um doador compatvel se soma a de encontrar doadores, j que o nmero de
doaes insuficiente em relao demanda. Uma alternativa seria o xenotransplante, isto , a
transferncia de um rgo de um animal ao homem.
Devido ao tamanho e a estrutura de seus rgos, o porco parece o animal mais indicado. J em
1902, ligara-se o rim de uma paciente a um porco, em uma experincia que resultou fatal. Hoje
sabido que, devido presena nas clulas sunas de um tipo de molcula (-1-3-galactose), ausente
em primatas, a no ser que sejam aplicadas doses macias de medicamentos imunossupressores,
ocorrer um fenmeno de rejeio violento.
Em 2002, duas empresas (PPL Therapeutics e Immerge Bio Therapeutics) anunciaram a clonagem
de porcos com o gene da -1-3-galactose desativado, por knockout duplo. Esses porcos poderiam vir
a ser uma fonte de rgos, para transplantes temporrios em seres humanos, eliminando o perigo da
rejeio aguda. Porm, no se evitaria o processo lento de rejeio que seria desencadeado pelas
protenas sunas. Existe outra objeo aos xenotransplantes, que o risco de introduzir retrovrus de
outras espcies em seres humanos, com resultados imprevisveis.
O encapsulado das clulas animais em uma matriz inerte que as isole e, ao mesmo tempo, deixe
passar os nutrientes e produtos celulares, poderia evitar a rejeio. Este procedimento foi utilizado
recentemente em pacientes diabticos, que receberam clulas sunas encapsuladas e passaram a
secretar insulina. E em uma centena de pacientes de cncer, para a secreo de molculas que
aliviassem a dor.

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A ENGENHARIA DE TECIDOS
A engenharia de tecidos, uma rea que visa a substituio de rgos e tecidos, ocupa uma interface
existente entre a biologia celular, a medicina, a bioqumica e a bioengenharia.
O cultivo de pele in vitro utilizado rotineiramente para reparar as leses causadas por
queimaduras. Um pequeno fragmento de pele, isolado do prprio paciente, o bastante para, em trs
semanas, formar uma superfcie 50 vezes maior. Amolda-se a nova pele a uma superfcie
biodegradvel para evitar que rasgue quando aplicada no paciente. O procedimento se adapta ao
tratamento de queimaduras e de leses de difcil cicatrizao.
A biomimtica consegue reparar in vivo o tecido sseo, utilizando como molde um polmero, para
onde migram e se expandem as clulas regenerativas internas. A tecnologia se aplica na reparao de
fraturas e de leses causadas por doena periodontal, assim como a reconstruo da cartilagem das
articulaes.
Recentemente, transplantou-se com sucesso uma traqueia, construda com clulas-tronco do
prprio paciente cultivadas sobre um molde poroso. Talvez seja esse o primeiro passo na construo
in vitro de estruturas tridimensionais anlogas aos rgos.
As estruturas mecnicas com poucos tipos celulares diferentes parecem mais fceis de construir
que rgos complexos, como um rim ou um pulmo. Uma tcnica promissora contempla a eliminao
das clulas animais at deixar uma estrutura inerte que seria repovoada com clulas-tronco. Essa
estrutura tambm poderia ser obtida por impresso em 3D.
Do ponto de vista experimental, um dos avanos mais importantes o crescimento in vitro de
organoides a partir de clulas-tronco. Pode-se, por exemplo, transformar uma clula da pele em iPSC
(do ingls, induced pluripotent stem cells), diferenci-la em neurnio e cultivar uma estrutura anloga
a um crebro, comparvel ao de um feto com um trimestre de desenvolvimento.
AS TERAPIAS CELULARES
As clulas-tronco multipotentes so as responsveis pelo crescimento e a reparao dos tecidos.
Presentes em tecidos adultos, conservam a capacidade de se diferenciar em vrios tipos celulares, em
resposta a estmulos adequados.
As clulas-tronco hematopoiticas encontram-se em frequncias baixssimas na medula ssea
(1:10.000 a 1:15.000) e no sangue perifrico (1:100.000). Embora no apresentem caractersticas
morfolgicas que as distingam das outras clulas, a presena de marcadores moleculares especficos
na membrana permite separ-las e introduzi-las mais tarde na mesma pessoa ou em outra que seja
compatvel. O procedimento possibilita a regenerao dos elementos sanguneos no tratamento de
leucemias e de linfomas, de doenas hereditrias hematolgicas e na recuperao dos pacientes que
receberam quimioterapia.
Numerosos bancos de sangue, pblicos e privados, oferecem um servio de armazenamento de
sangue de cordo umbilical que asseguraria a recuperao de clulas-tronco hematopoiticas, em caso
de necessidade. Como a probabilidade de uma pessoa vir a precisar de suas prprias clulas
baixssima (1/100.000), a existncia de grandes bancos pblicos representa a garantia de encontrar
doadores compatveis. At o momento, o nico produto teraputico aprovado para o tratamento de
doenas do sistema hematopoitico o Hemacord, do New York Blood Center.
A presena de clulas multipotentes em tecidos e rgos explica o sucesso alcanado em outros
tratamentos. A capacidade regenerativa das clulas-tronco adultas permite a cicatrizao de
queimaduras, a substituio de clulas da crnea, a regenerao de osso e cartilagem, o tratamento
da artrite e a reparao de fraturas.

266

BIOTECNOLOGIA E SADE / NOVOS TRATAMENTOS

Terapias experimentais para a regenerao do miocrdio de doentes cardacos tiveram resultados


promissores. Encontram-se em andamento numerosos ensaios clnicos de terapias com clulas-tronco
para diabetes, derrame, esclerose amiotrfica lateral e regenerao da medula espinal.
FRAUDES E DESATINOS
No incio da dcada de 2000, a perspectiva de utilizar clulas-tronco embrionrias nas pesquisas
parecia uma via promissora. Em 2004, um grupo sul-coreano anunciou avanos na direo da clonagem
teraputica com a obteno de linhagens de clulas-tronco embrionrias a partir de um embrio
humano clonado. Essas linhagens poderiam ser utilizadas na regenerao de rgos lesionados, sem
problemas de rejeio e, eventualmente, depois de ter passado por uma terapia gnica (Figura 20.1).
Quando se descobriu que os resultados eram fraudulentos, e o trabalho realizado em condies
ticas inadmissveis, a comunidade cientfica ficou abalada. Afortunadamente, a obteno das clulas
iPSC abriu perspectivas menos conflitivas, e as pesquisas foram orientadas em outra direo.
Por outro lado, no fim de 2002, a seita dos raelianos anunciou na mdia o nascimento de vrios
bebs humanos clonados. Eles teriam usado a tcnica de transferncia nuclear para gerar indivduos
geneticamente idnticos ao doador. Considerando as dificuldades tcnicas a falta de provas
apresentadas, concluiu-se que o anncio no passaria de um golpe publicitrio. A clonagem
reprodutiva considerada um crime contra a humanidade e, por enquanto, restringida ao domnio da
fantasia e da fico cientfica.
Outro efeito perverso do entusiasmo com as terapias celulares a proliferao do turismo mdico
atrs das promessas de curas milagrosas. Recentemente, um garoto israelense com ataxiatelangiectasia desenvolveu um tumor cerebral depois de um tratamento com clulas-tronco fetais
realizado na Rssia. Os estudos com marcadores celulares mostraram que, na origem do tumor,
estavam as clulas implantadas.
-------------FIGURA 20.1. O princpio da clonagem teraputica, uma forma de gerar clulas-tronco embrionrias com a
informao gentica do doador do ncleo
Paciente

Clula
saudvel

Transferncia nuclear

Ovcito

Fuso
celular
Embrio
Ovcito
anucleado

Infuso

Clulas-tronco
diferenciadas

Clulas-tronco
recuperadas

267

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O desenvolvimento de um tratamento novo um processo lento que se desenvolve em etapas bem


definidas, com histrias de fracasso e de sucesso. No existem milagres; do laboratrio at a prtica
mdica, muitos pequenos passos so necessrios.
AS IMUNOTERAPIAS
O PROGRESSO
Na segunda metade do sculo XIX, E. Von Behring e S. Kitasato estabeleceram as bases da
imunoterapia. O soro de um animal infectado com uma toxina diftrica inativada (antitoxina),
administrado em outro animal que fora inoculado previamente com toxina diftrica, provocava uma
reao imune, imediata, passiva e de curta durao. Estabelecidos os princpios da soroterapia, ela
constitui ainda hoje a principal arma de defesa disponvel, contra os venenos de cobras e outros
animais peonhentos.
O progresso da engenharia gentica facilitou a produo de protenas e, consequentemente, de
outras terapias biolgicas baseadas na utilizao do sistema imune no combate s doenas. No
paciente de cncer, por exemplo, a atividade imunolgica reforada com molculas proteicas,
moduladoras da comunicao celular (citoquinas), tais como o -interferon e a interleuquina IL-2. A
produo de elementos sanguneos, afetada pelos tratamentos quimioterpicos e/ou radioterpicos,
incrementada por fatores proteicos, como a eritropoietina ou o fator estimulador de colnias.
OS ANTICORPOS MONOCLONAIS
A chegada da tecnologia de hibridomas despertou grandes esperanas, imaginando que os anticorpos
monoclonais cumpririam a funo da mtica bala mgica, no reconhecimento do alvo. Contudo,
depois do muromonab CD3 (Orthoclone OK3), um anticorpo monoclonal que reduz a resposta imune
para evitar a rejeio aos transplantes, passaram-se vrios anos antes que algum outro produto
recebesse a aprovao das agncias reguladoras. Frustrando as expectativas, o sucesso chegou antes
no campo das anlises clnicas que no mbito teraputico.
A razo para o impasse era tcnica. Produzidos com clulas de roedores, os anticorpos monoclonais
eram reconhecidos como non-self pelos seres humanos, o que desencadeava uma resposta imune. A
modificao e, eventualmente, a substituio de partes da molcula murina gerou molculas
quimricas, humanizadas e, mais tarde, humanas, em linhagens microbianas ou em animais
transgnicos. Uma vez solucionado esse problema, os anticorpos monoclonais conseguiram entrar no
mercado teraputico.
Diversos produtos esto disponveis para a preveno de infeces virais, bloqueio de IgE (asma
alrgico), inibio de inflamaes (artrite reumatoide, doena de Crohn, psorase), tratamento de
esclerose mltipla e outras doenas autoimunes (lpus), diversos tipos de cncer etc. Alguns esto
associados a uma substncia citotxica (gemtuzumab ozogamicin Mylotarg, de Wyeth), ou a um
radioistopo (Y-ibritumomab tiuxetan Zevalin, de Spectrum Pharmaceuticals).
Aprovado pelo FDA em 2014, o Blyncito (Amgem), primeiro medicamento para o tratamento de
leucemia linfoblstica, est baseado em um produto de especificidade dupla. Trata-se de uma protena
formada por dois anticorpos monoclonais, um deles reconhece a clula T-killer e o outro a clula-alvo.
Essa estrutura direciona as clulas T-citotxicas para as clulas tumorales, nem sempre reconhecidas
como alvo pelas clulas de defesa.
Vrios anticorpos monoclonais de uso teraputico so blockbusters. Estima-se que o mercado global
chegue a 125 bilhes de dlares em 2020, com 70 produtos disponveis. No momento, o principal
entrave popularizao das terapias biolgicas o preo dos produtos. Consideremos o caso do

268

BIOTECNOLOGIA E SADE / NOVOS TRATAMENTOS

Herceptin (trastuzumab), que reconhece e inativa o receptor de um fator de crescimento, presente


em algumas clulas tumorais. At o momento, o nico anticorpo monoclonal eficiente no combate
aos tumores slidos, mas o custo anual de um tratamento com Herceptin varia entre 70 mil e 100 mil
dlares.
O DESAFIO DA BARREIRA HEMATOENCEFLICA
Nos capilares sanguneos do crebro, a densidade das clulas endoteliais to alta que impede a
passagem de 95% das substncias presentes na circulao. Forma-se uma barreira permevel para os
nutrientes celulares bsicos, porm intransponvel para molculas grandes, como as protenas
medicamentosas.
Contudo, algumas estratgias podem dar resultado. Por exemplo, no caso da esclerose mltipla, a
inflamao crnica permite a passagem dos macrfagos e das clulas T, que destroem a bainha de
mielina. Essa falha, prpria da doena, facilita a entrada do Tysabri (natalizumab), um anticorpo para
o tratamento da doena.
O desafio da barreira hematoenceflica tambm uma limitao para o tratamento da doena de
Alzheimer. A empresa Genentech pesquisa uma protena formada por dois anticorpos; um deles
reconhece o receptor de transferrina, que permitir transpor a barreira; o outro inibe a enzima
secretase, indispensvel para sintetizar a protena -amiloide caracterstica da doena. Em diferentes
etapas de desenvolvimento, outras estratgias parecem promissoras no combate doena de
Parkinson e aos tumores cerebrais.
O CNCER
UMA DOENA DE ORIGEM GENTICA
A palavra cncer designa mais de 100 doenas que afetam uma a cada oito pessoas e se desenvolvem
em qualquer rgo do corpo. As clulas cancerosas evadem os sinais de controle da diviso celular,
dividindo-se indefinidamente sem chegar a se diferenciar. Com a perda de alguns receptores da
membrana celular, essas clulas se separam das clulas vizinhas espalhando-se pelo corpo.
A transformao de uma clula normal em cancerosa depende de dois tipos de genes. Um deles,
rene genes que codificam protenas estimuladoras da diviso celular, inibindo a diferenciao e
detendo a apoptose ou suicdio celular. Uma mutao que os transforme em oncogenes aumentar
a sntese dessas protenas, induzindo as clulas a se multiplicar indefinidamente. O outro o grupo
dos genes supressores de tumor que, normalmente, estimulam a autodestruio das clulas que
sofreram mutao. Esses genes encontram-se alterados ou ausentes nas clulas cancerosas.
Nas clulas, as mutaes geram antgenos especficos do tumor como, por exemplo, as protenas
anormais dos genes ras e p53, a elevao significativa da quantidade da enzima tirosinase ou a
reapario das protenas oncofetais (alfafetoprotena e antgeno carcinoembriognico). Embora
alguns desses antgenos especficos do tumor se expressem exclusivamente no tumor de um nico
indivduo, outros aparecem nas clulas tumorais da maioria dos indivduos afetados por determinado
tipo de tumor. Em genes que no esto envolvidos diretamente com a formao tumoral, as mutaes
podem originar antgenos associados ao tumor, que so utilizados como biomarcadores.
As mutaes so ocasionadas por fatores ambientais (agentes qumicos, radiao, vrus) ou
genticos (hereditrios ou adquiridos ao longo da vida). Quase sempre ocorrem nas clulas somticas,
mas tambm acontecem nas clulas germinais; algumas so pontuais, outras envolvem rearranjos
cromossmicos; e vrias so necessrias para que a clula adquira as caractersticas cancerosas.

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Embora o processo possa levar mais de 50 anos, as mutaes herdadas (predisposio) possibilitaro
um desenvolvimento prematuro do cncer (Figura 20.2).
AS TERAPIAS BIOLGICAS
As terapias biolgicas so complementares aos tratamentos clssicos do cncer, que continuam sendo
a cirurgia, a quimioterapia e a radioterapia. Algumas reforam a atividade imunolgica, atravs de
mensageiros qumicos que estabelecem a comunicao entre as clulas do sistema imune (interferon, interleuquina IL-2). Outras so administradas a pacientes que passaram por quimioterapias
ou sofrem de imunodeficincia, para estimular a proliferao das clulas sanguneas (eritropoietina).
A construo de nanodispositivos, como lipossomos e nanopartculas magnticas, permitiria dirigir
os medicamentos at as clulas-alvo. Tambm em fase experimental, outra possibilidade o bloqueio
mediante um inibidor da glutaminase (CB-839, de Calithera Biosciences) da sntese de cido glutmico,
que a clula cancerosa consome em um ritmo muito maior.
OS VIRUS ONCOLTICOS
Outra via complementar para o tratamento do cncer seria o uso de vrus oncolticos, geneticamente
modificados de modo a infectar e destruir as clulas cancerosas. Na construo desses vrus, eliminamse os genes que os tornam patognicos e alteram-se as protenas de superfcie para que reconheam,
exclusivamente, os receptores de membrana da clula cancerosa.
Aprovado pela FDA em 2015, encontra-se prestes a entrar no mercado o T-Vec (Talimogene
laherparepvec, de Amgen), um vrus herpes simplex 1 modificado para o tratamento de melanoma
que expressa o gene produtor de GMCSF (do ingls, granulocyte-macrophage colony-stimulating fator)
para ativar o sistema imune do paciente.
-------------FIGURA 20.2. A transformao de uma clula normal em cancerosa por mutao (cncer de clon).

Clula normal

1a mutao (gene APC)

2a mutao (gene ras)

3a mutao (gene DCC)

4a mutao (gene p53)

Clula cancerosa

270

BIOTECNOLOGIA E SADE / NOVOS TRATAMENTOS

AS VACINAS TERAPUTICAS
As vacinas profilticas so aplicadas em indivduos saudveis, para a preveno de doenas. Dentro
dessa linha, existem vacinas contra alguns dos agentes virais que, sabidamente, esto relacionados
com o desenvolvimento do cncer. Trata-se das vacinas contra o vrus da hepatite B (VHB), associado
ao cncer de fgado, e contra o papilomavrus (VPH), responsvel por 70% dos cnceres de tero
(Gardasil, de Merck; Cevarix, de GlaxoSmithKline). Essas vacinas cumprem uma ao profiltica.
Uma das primeiras terapias complementares do cncer, ainda usada atualmente, a inoculao
com a vacina BCG (bacilo de Calmette e Gurin), para estimular no paciente uma reao imunolgica
de tipo celular, que se estende s clulas cancerosas.
Diferente das vacinas profilticas, as vacinas teraputicas visam o tratamento dos indivduos que j
esto doentes. O seu objetivo estimular diretamente a resposta imune do organismo, para que este
possa eliminar as clulas cancerosas. Um dos principais problemas reside na escolha dos antgenos que
deveriam entrar na composio da vacina, pois se alguns so comuns a vrios tipos de clulas
cancerosas, outros s aparecem em cnceres especficos. A vacina ideal teria que ser eficaz em
qualquer paciente com um determinado tipo de cncer.
-------------FIGURA 20.3. O tratamento com sipuleucel-T (Provenge).
A. Extrao das clulas dendrticas

Leucoferese (3 horas)
Clulas dendrticas

B. Incubao das clulas com Provenge

2 a 3 dias
Clulas dendrticas que incorporaram
o antgeno tumoral PAP-GM-CSF

Clulas dendrticas
+ Provenge (PAP-GM-CSF)

C. Reinfuso das clulas modificadas no paciente (3 vezes com 2 semanas de intervalo)

Estmulo da resposta das clulas-T contra o antgeno tumoral


PAP-GM-CSF e, consequentemente, contra as clulas cancerosas

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Uma possibilidade seria a elaborao de vacinas de tumores, com clulas cancerosas enfraquecidas ou
mortas. Provenientes do mesmo paciente ou de algum outro, essas clulas expressariam antgenos
associados a um tumor, estimulando a resposta imune.
Outra estratgia seria a aplicao direta de antgenos sintticos, especficos ou associados ao tumor.
Contudo, as vacinas de antgenos conseguem uma resposta imunolgica mais fraca que as vacinas de
vetores (vrus, DNA nu). Um vetor viral modificado poderia infectar exclusivamente as clulas
cancerosas, levando molculas moduladoras da resposta imune, ou enzimas capazes de transformar
uma droga inativa em ativa.
Uma variante de vacina teraputica envolve o estmulo ex vivo das clulas imunes de modo a que
estas reconheam o antgeno tumoral (Figura 20.3). Essa estratgia deu origem primeira vacina
teraputica (sipuleucel-T ou Provenge, de Dendreon) contra o cncer de prstata hormonorefratrio,
autorizada pelo FDA, nos Estados Unidos, em 2010.
O sipuleucel-T uma protena de fuso entre uma enzima especfica das clulas prostticas cancerosas
(PAP, do ingls prostatic alcaline phosphatase) e um modulador da resposta imune (GM-CSF, do ingls
granulocytes and macrophages colony stimulating factor). O tratamento, que deve ser adaptado a
cada paciente, comea com a extrao das clulas apresentadoras do antgeno do doente, segue com
a incorporao in vitro dos antgenos tumorais e encerra-se com a reinfuso das clulas modificadas
no paciente.
O empreendimento, no qual a empresa Dendreon investiu 1 bilho de dlares, no teve os
resultados esperados devido tanto complexidade tecnolgica, como aos custos de um tratamento
personalizado, estimado em 93 mil dlares. Em bancarrota, Dendreon foi comprada por outra
empresa, Valeant. Embora o sipuleuncel no tenha dados os resultados esperados, abriu um caminho
para o tratamento potencial de outras variedades de cncer mediante outras vacinas teraputicas.

AS TERAPIAS GNICAS
TERAPIA SOMTICA E GERMINAL
Um dos objetivos das terapias gnicas a inativao de um gene, inibindo sua expresso ou
interferindo com o produto gnico. Outro, mais complexo, a substituio de um gene inativo por
uma cpia funcional, que se expresse e sintetize uma protena ausente.
As terapias gnicas pretendem modificar, exclusivamente, as clulas somticas de um indivduo,
sem que essa modificao seja transmitida gerao seguinte. Assim como em um transplante
transfere-se um rgo ou um tecido, na terapia somtica se transfere um gene, e o efeito se limita ao
indivduo que o recebe (Figura 20.4).
Do mesmo modo que em relao a qualquer tipo de terapia experimental, as objees giram em
torno da utilizao de uma tecnologia ainda imperfeita, envolvendo riscos e da qual se desconhecem
os efeitos a longo prazo. Contudo, o que suscita mais controvrsia uma eventual transferncia de
genes s clulas germinais, porque as modificaes seriam transmitidas descendncia.
Qualquer tentativa de modificao da linhagem germinal permitiria a eugenia, isto , a seleo
gentica procura de um gentipo ideal. Dentro desta tica, quais os caracteres que seriam
considerados saudveis? E por quem? A histria do sculo XX, com sua sequela de horrores
(esterilizao de deficientes e doentes mentais nos Estados Unidos, persecues na Alemanha nazista
etc.) mostra que devem ser tomados todos os cuidados para impedir a discriminao gentica e a
implantao de uma sociedade arbitrria.

272

BIOTECNOLOGIA E SADE / NOVOS TRATAMENTOS

OS ALTOS E BAIXOS DE UMA TECNOLOGIA


As primeiras experincias de terapia gnica foram realizadas em 1980, por Martin Cline, nos Estados
Unidos. Alm de fracassar, essas tentativas despertaram uma reao contrria unnime: os estudos
experimentais prvios eram insuficientes, e a realizao do procedimento no estava autorizada pelo
comit de tica correspondente. O episdio motivou o estabelecimento de regras estritas para este
tipo de tratamento.
A primeira terapia gnica foi autorizada, em 1990, nos Estados Unidos, para o tratamento de
Imunodeficincia Severa Combinada (SCID, do ingls severe combined immunodeficiency), uma doena
em que a falta da enzima ADA (desaminase de adenosina) bloqueia um caminho metablico, causando
o acmulo de uma substncia que destri os linfcitos e, consequentemente, a imunidade do paciente.
As crianas com SCID, ou crianas-bolha, sofrem continuamente de infeces e tm uma
expectativa de vida curta. O tratamento habitual contempla a administrao de enzimas, mas os
pacientes acabam desenvolvendo alergias aos componentes do produto injetado. Para essas crianas,
a nica perspectiva restante um transplante de medula ssea, com a condio de encontrar um
doador compatvel.
A terapia gnica aprovada consistia na extrao de linfcitos do sangue, sua modificao gentica
in vitro por transferncia de um gene normal de ADA e a reinfuso dos linfcitos modificados na
circulao sangunea do paciente. Aplicou-se o procedimento em uma menina, Ashanti da Silva, e ela
melhorou significativamente.
Porm, como os linfcitos tm um perodo de vida curto, o procedimento teve que ser repetido
periodicamente, durante dois anos. Algumas clulas modificadas sobreviviam e produziam ADA, mas
a quantidade era insuficiente e Ashanti nunca pde prescindir totalmente do tratamento enzimtico
complementar. O problema persistiu em estudos posteriores, e nenhum dos pacientes tratados pde
abandonar o tratamento alternativo com a enzima.
-------------FIGURA 20.4: O princpio da terapia gnica.

Cpias de um gene normal,


previamente clonado em bactrias
Insero em um vetor

Lipossomo

Vrus

Introduo do gene normal nas clulas de uma


pessoa portadora de uma doena gentica

Pulmo

Msculo

Fgado

Cultivo de clulas
(medula ssea)
Reimplantao

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Uma tragdia esfriou o interesse pelas pesquisas nesta rea. Em 1999, Jesse Gelsinger, um jovem de
18 anos afetado por uma deficincia de OTC (ornitina transcarbamilase), que se apresentara como
voluntrio para um tratamento de terapia gnica na Universidade da Pensilvnia, morreu de uma
reao imunolgica adversa ao vetor utilizado, um adenovrus.
Em 2000, na Frana, a terapia gnica de uma variante de imunodeficincia (SCID-X1) pareceu
alcanar sucesso em nove de dez crianas tratadas. Contudo, outra tragdia aconteceu quando o vetor
viral se inseriu em um lugar no esperado, inativando um gene supressor de tumor. Quatro das
crianas desenvolveram leucemia e uma delas morreu.
Dois anos mais tarde, renovaram-se as esperanas dos pacientes de SCID e seus familiares com o
descobrimento de uma nova tcnica de remoo parcial da medula ssea, que permite o
desenvolvimento de clulas-tronco e sua modificao gentica. Em 2002, Salsabil, uma menina
palestina de dois anos de idade recebeu o tratamento em Israel. A terapia restaurou a atividade da
desaminase de adenosina e Salsabil cresce saudvel.
Uma terapia que envolve a modificao gentica ex vivo de clulas-tronco um tratamento
personalizado complexo. Os empreendimentos para doenas de baixa frequncia entram na categoria
de tratamentos/medicamentos rfos, garantindo incentivos financeiros s empresas farmacuticas.
OS RESULTADOS ALCANADOS
Do mesmo modo que em relao a qualquer tipo de terapia experimental, as objees se centram na
utilizao de uma tecnologia ainda imperfeita, que envolve riscos e da qual se desconhecem os efeitos
a longo prazo. As dificuldades so grandes, porque alm de transferir um gene a uma determinada
clula de certo tecido, o gene deve funcionar adequadamente e de forma duradoura.
Os dois grandes gargalos ainda so a necessidade de vetores seguros e de procedimentos eficientes.
No entanto, algumas tentativas foram exitosas, como na terapia gnica da amaurose congnita de
Leber, uma doena degenerativa da retina que cega as crianas afetadas. A origem uma mutao no
gene RPE65, que metaboliza uma forma de vitamina A e condiciona o bom funcionamento de cones e
bastonetes.
O vetor escolhido o vrus AAV (do ingls, adeno-associated virus), que no estimula uma reao
imune. A terapia comea injetando diretamente na retina o vrus modificado; o gene exgeno penetra
em 15 a 20% das clulas do epitlio pigmentado da retina, na camada nutritiva situada embaixo das
clulas visuais. As crianas que receberam o tratamento recuperaram, em diferentes graus, a
sensibilidade luz.
O olho um rgo mais fcil de atingir e os oculistas esto familiarizados com os procedimentos,
por isso no de estranhar que os primeiros tratamentos disponveis visem doenas ligadas viso,
como o LentiVector para a degenerao macular, e outros para a doena de Stargardt, a sndrome de
Usher e a rejeio ao transplante de crnea.
Em outras reas, muitos dos numerosos estudos em vias de realizao fracassam nas fases I e II dos
testes clnicos. No entanto, aguardam-se resultados positivos em relao a sndromes genticas
(hemofilia, talassemia, Huntington, Duchenne, fibrose cstica, SCID) e infeces virais (HIV/AIDS), alm
de avanos nos estudos sobre doenas cardiovasculares, neurolgicas e oncolgicas.
O progresso das terapias gnicas levanta tambm algumas inquietudes em relao ao esporte. Em
1998, uma equipe inteira de ciclistas foi eliminada do Tour de France devido ao uso indevido da
eritropoietina, que aumenta o nmero de hemcias. O incidente determinou a criao da World AntiDoping Agency.
No momento, existe um produto comercial disponvel no mercado, desenvolvido e autorizado na
China, em 2004. A Gendicina (Shenzhen SiBiono GeneTech). Trata-se de um adenovrus com o gene

274

BIOTECNOLOGIA E SADE / NOVOS TRATAMENTOS

supressor de tumores p53, utilizado no tratamento do carcinoma de clulas escamosas de cabea e


pescoo.
A FIV TRIPARENTAL
As mitocndrias so as organelas citoplasmticas responsveis pela respirao celular e a obteno de
energia. A transmisso de uma gerao a outra ocorre por via materna, de modo que todos os filhos/as
recebem as mitocndrias de sua me. Mutaes nesse genoma mitocondrial de 37 genes determinam
vrias doenas musculoesquelticas, metablicas e neurodegenerativas.
Em 2015, o Reino Unido aprovou uma lei autorizando as clnicas de fertilidade a realizar o
procedimento denominado TP IVF (do ingls, Three Parent In Vitro Fertilization), para substituir as
mitocndrias com genes associados a doenas.
Durante o procedimento, o ncleo celular de um ovcito da me afetada ser removido e
transferido ao ovcito anucleado de outra mulher. Com o ncleo materno e o citoplasma e as
mitocndrias saudveis de uma doadora, o ovcito reconstrudo ser fertilizado com o esperma
paterno e reimplantado na me. A criana nascer com o DNA de trs pessoas, duas mulheres e um
homem.
AS PROMESSAS DO RNA
Ao longo dos ltimos trinta anos descobriram-se vrios mecanismos de silenciamento gnico,
baseados nos diversos tipos de RNA e suas propriedades (Figura 20.5). As principais vantagens das
terapias de RNA seriam sua especificidade e o custo relativamente baixo, mas ainda enfrentam
algumas dificuldades para aplicar o tratamento no lugar certo, em uma concentrao eficaz que
garanta, tambm, a durabilidade do efeito.
AS RIBOZIMAS
As ribozimas so molculas de RNA, com propriedades catalticas, que cortam outras molculas de
RNA que apresentem em sua sequncia alguns nucleotdeos complementares. Sua descoberta teve
uma importncia extraordinria porque deu origem a uma teoria sobre os primrdios da vida, em um
mundo de RNA. Numerosas pesquisas foram desenvolvidas com ribozimas, seja para inativar um gene
ou para tentar inibir a replicao do HIV em clulas infectadas. Apesar de laboratorialmente bemsucedidos, nenhum produto entrou at agora no mercado.
A TECNOLOGIA ANTI-SENSE
Tambm trouxe grande expectativa a tecnologia anti-sense, que utiliza o mecanismo de transcrio
para inativar um gene. Normalmente, o RNA transcrito complementar a um dos filamentos de DNA.
Colocando um promotor no outro filamento, a transcrio ocorrer em sentido contrrio e se formar
um asRNA (anti-sense RNA). A associao dos dois RNAs complementares (sense e anti-sense) forma
uma molcula de dois filamentos que no conseguir se unir ao ribossomo.
A tecnologia anti-sense tornou possvel o desenvolvimento de um medicamento para o tratamento
de infeces oculares por citomegalovrus em pacientes com HIV/AIDS. O formivirsen (Vitravene, de
Isis Pharmaceuticals) foi autorizado em 1998 pelo FDA, nos Estados Unidos. Outro medicamento antisense que est no mercado, desde 2013, para tratamento de hipercolesterolemia familiar o Kynamro
(Mipomersen, de Isis Pharmaceuticals) que visa a apoliprotena B, um componente-chave do LDL
colesterol.
A maior dificuldade para desenvolver este tipo de medicamentos reside na dificuldade de chegar
com o medicamento at o alvo correspondente, que os torna pouco eficazes.

275

M.A.MALAJOVICH - BIOTECNOLOGIA (2016)

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FIGURA 20.5: As tecnologias de silenciamento gnico.

A. As ribozimas

Ribozima
RNA
RNA clivado

B. O RNA anti-sense

Sntese de protenas

Inibio da sntese proteica por RNA anti-sense


Transcrio

DNA
Transcrio

Transcrio

mRNA

mRNA
mRNA

Traduo

mRNA

RNA anti-sense

No h traduo

C. O RNA interferente

Pequeno RNA interferente (siRNA)

mRNA

dsRNA
(RNA de dois filamentos)
Complexo enzimtico

Clivagem do mRNA
Fragmentos de RNA
Exterior

276

Membrana
celular

Citoplasma

BIOTECNOLOGIA E SADE / NOVOS TRATAMENTOS

O RNA INTERFERENTE
O fundamento da tecnologia do RNA interferente (iRNA) a introduo, na clula, de uma sequncia
de RNA complementar a aquela que se deseja silenciar; a molcula de RNA formada, com dois
filamentos, ser destruda pela maquinaria celular.
Essa tecnologia constitui uma ferramenta de laboratrio poderosa para entender a funo dos
genes e a regulao da expresso gnica. As pesquisas laboratoriais tm dado informaes
valiosssimas sobre genmica funcional. Elas abriram novas perspectivas no tratamento de infeces
virais e esclareceram diversos aspectos de vrias doenas genticas e neurolgicas. Em relao ao
cncer, elas permitiram a inativao in vitro de molculas associadas patologia e progresso da
doena humana.
Antes de superar a fase experimental e chegar clnica mdica, alguns problemas tero que ser
resolvidos, como a maneira de introduzir o cido nucleico na clula e controlar seu raio de ao, para
que a interferncia seja restringida molcula-alvo. Apesar do sucesso alcanado nos estudos in vitro,
a tecnologia do iRNA ainda precisa melhorar suas qualidades de eficincia, segurana e confiabilidade.
Considera-se que os tecidos que poderiam ser mais facilmente tratados seriam o olho, a pele, as
membranas mucosas e os tumores locais. Ainda em fase clnica, os testes mais avanados
correspondem ao tratamento da degenerao macular e da infeco pelo vrus respiratrio sincicial.
OS miRNAs
Diferente dos RNA antisense e do iRNA, que so sintetizados no laboratrio e aplicados no paciente
para diminuir ou impedir a formao de uma protena associada doena, os microRNAs so um tipo
de RNA de duplo filamento, sintetizado pela prpria clula para regular a expresso gnica. Em muitas
doenas, o paciente sintetiza muito ou pouco miRNA. Alguns produtos encontram-se nas fases iniciais
dos testes clnicos.
A EDIO GNICA
Baseada no fenmeno natural de quebra e reparao do DNA, a tecnologia de edio gnica utiliza o
sistema CRISPR (do ingls, clustered regularly interspaced short palindromic repeats), associado ao
complexo enzimtico Cas, para cortar qualquer sequncia de DNA no lugar desejado e gerar mutaes
de ponto, delees ou inseres.
As primeiras tentativas planejam a modificao in vitro de clulas de sangue perifrico ou medula
e sua reimplantao no paciente (Intellia Therapeutics, CRISPR Therapeutics). Outras aplicaes
contemplam o combate hepatite C e s contaminaes por fungos. Ainda em fase experimental, a
transferncia de CRISPR/CAS 9 com um vrus AAV, para impedir a expresso de 3 genes no crebro de
camundongos (Editas Medicine).
Em 2015, pesquisadores chineses anunciaram ter aplicado a tecnologia CRISPR/Cas9 para modificar
geneticamente embries no viveis. No Reino Unido, um grupo de pesquisadores aguarda a
autorizao das autoridades para tentar a transferncia de genes a embries supranumerrios das
clnicas de fertilizao assistida. Esses embries seriam posteriormente descartados. O tema
controverso, porque possibilita o design de bebs e abre a porta para a eugenia, afetando a evoluo
das futuras geraes de maneira imprevisvel.

277

C A P T U L O 21

CONSIDERAES FINAIS

A biotecnologia uma rea baseada no conhecimento, com uma plataforma tecnolgica que gera
mltiplas aplicaes em campos muito diversos. Nos captulos anteriores revisamos seus fundamentos
e seu impacto na sociedade, destacando alguns exemplos de empreendimentos latino-americanos
bem-sucedidos: o desenvolvimento do setor agropecurio e da indstria de medicamentos da
Argentina, a plataforma genmica e a produo de vacinas no Brasil, o alcance da biominerao no
Chile, o sucesso da experincia de Cuba etc.
Apesar das dificuldades econmicas e polticas, essas experincias foram possveis porque se
cumpriu a condio fundamental de contar com instituies competentes, uma massa crtica de
pesquisadores e pessoal tcnico treinado. Em alguns casos, estas existiam previamente, em outros,
elas foram criadas.
O avano tecnolgico irreversvel. Em todos os seus nveis, a educao tem um papel fundamental
na formao dos quadros profissionais e na difuso dos conhecimentos bsicos indispensveis, que
permitiro avaliar adequadamente os benefcios dessa tecnologia e estabelecer as normas para sua
utilizao.
As previses futuras dependem das regulamentaes existentes e do projeto poltico e social de
cada pas. No entanto, no se pode descartar a influncia das circunstncias que nos rodeiam:
mudanas climticas, necessidade de aumentar a produo de alimentos, conflitos blicos, migraes,
doenas emergentes etc. Tambm so determinantes os aspectos culturais e a influncia da percepo
pblica.
Vrias so as incgnitas que nos cercam:
o Como estimular o interesse das novas geraes pelo conhecimento cientfico e tecnolgico?
o Como impedir o aumento do distanciamento cientfico e tecnolgico entre os pases desenvolvidos
e os pases em desenvolvimento?
o Como a privatizao da pesquisa cientfica e tecnolgica ir alterar a transparncia do processo de
aquisio e divulgao do conhecimento?
o Como passar da pesquisa cientfica ao desenvolvimento tecnolgico de um produto ou de um
servio?
o Como incubar e agrupar as empresas que esto dando os seus primeiros passos?

BIOTECNOLOGIA: ENSINO E DIVULGAO (http://bteduc.com)

CONSIDERAES FINAIS

o Como manter a comunicao e a transferncia de conhecimentos entre os pases em


desenvolvimento?
o Como evitar a manipulao da opinio pblica?
o Como assegurar que os benefcios das biotecnologias cheguem aos povos mais desfavorecidos?
o Como conciliar a cultura de segurana e o desenvolvimento de novas tecnologias?
o Como lidar com as pesquisas de uso duplo, que podem ser usadas tanto para o bem como para o
mal?
o Como inserir as novas tecnologias em um contexto que garanta o respeito aos princpios ticos
fundamentais de nossa sociedade?

Para estas perguntas no h uma nica resposta. Discusso e consenso so fundamentais.

Rio de Janeiro, maio de 2016.

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CAPTULO 1
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