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BIOTECNOLOGIA
Segunda Edio (2016)
ISBN: 978-85-921077-0-3
BIOTECNOLOGIA
2 EDIO
Rio de Janeiro
Maria Antonia Muoz de Malajovich
2016
BIOTECNOLOGIA: ENSINO E DIVULGAO (http://bteduc.com)
BIOTECNOLOGIA
Maria Antonia Malajovich
ISBN: 978-85-921077-0-3
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SUMRIO
C A P T U L O 1. O QUE BIOTECNOLOGIA.......................................................................................................... 1
A biotecnologia tradicional. A biotecnologia moderna. As definies de biotecnologia. O impacto da biotecnologia.
Biotecnologia e desenvolvimento. A histria da biotecnologia.
C A P T U L O 2. CLULAS E CROMOSSOMOS........................................................................................................9
A clula como unidade estrutural e funcional dos seres vivos. Tcnicas laboratoriais. Toda clula deriva de outra preexistente.
Os cromossomos e a teoria cromossmica da hereditariedade. As primeiras manipulaes gnicas. Nature vs nurture. Clulas
e cromossomos como agentes biolgicos.
C A P T U L O 3. OS MICRORGANISMOS.............................................................................................................20
A diversidade microbiana (Eubactrias, algas, arqueas, fungos e vrus). As tcnicas microbiolgicas. Biossegurana e
biosseguridade. Os microrganismos como agentes biolgicos.
C A P T U L O 4. ENZIMAS E ANTICORPOS..........................................................................................................32
As protenas. Estrutura. O proteoma. As bases de algumas tcnicas laboratoriais. As enzimas. A catlise enzimtica. Os
anticorpos. A reao antgeno- anticorpo. A produo de anticorpos no organismo e no laboratrio. A utilizao dos
anticorpos.
C A P T U L O 5. OS CIDOS NUCLEICOS..............................................................................................................46
Os cidos nucleicos. A dupla hlice. O cdigo gentico. A expresso gnica. O fluxo da informao gentica em clulas
procariticas e eucariticas. O complexo mundo dos RNAs. A diversidade existente. Interferncia e silenciamento gnico. O
genoma humano: mapeamento e avanos posteriores. O DNA e o RNA como agentes biolgicos.
C A P T U L O 6. BIOPROCESSOS...........................................................................................................................58
Bioprocessos, processos fermentativos e indstria. Os microrganismos industriais. Noes sobre o metabolismo primrio e
secundrio. As fases de crescimento da populao microbiana. Meios de cultura e matria-prima. A obteno das linhagens.
Os diferentes tipos de bioprocessos (tradicionais e submersos). Do laboratrio indstria (mudana de escala, conduo do
processo e recuperao do produto. Bioprocessos na indstria: o cido ctrico e os biofertilizantes.
C A P T U L O 9. A ENGENHARIA GENTICA.........................................................................................................95
O nascimento da biotecnologia moderna: as primeiras experincias, mitos e realidade. As bibliotecas de genes. A construo
de um microrganismo recombinante: Encontrar o gene, inserir o gene e identificar os microrganismos recombinantes. A
chegada da comunidade DIY. A construo de plantas transgnicas: o transgene, a transferncia dos genes a clulas vegetais,
do laboratrio ao campo. Clulas e animais transgnicos: a transferncia gnica a clulas animais, aplicaes. As novas
tecnologias de edio gnica baseadas no RNA interferente, nas nucleases stio-dirigidas: ZFNS E TALEN, na imunidade
bacteriana: CRISPR-CAS9.Biossegurana e regulao.
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SUMRIO
LISTA DE FIGURAS
FIGURA 1.1. O campo da Biotecnologia
FIGURA 2.1. Representaes esquemticas da estrutura celular
FIGURA 2.2. As clulas-tronco embrionrias
FIGURA 2.3: Os cromossomos
FIGURA 2.4. Mitose e meiose
FIGURA 3.1. Bactrias, clones e intercmbio de material gentico
A. A Formao de clones
B. B Mecanismos de transferncia lateral ou horizontal de material gentico
Estrutura fundamental
Morfologia de diferentes vrus
(Os adenovrus e o HIV parasitam clulas humanas; o bacterifago, bactrias).
A multiplicao de um bacterifago
FIGURA 8.1: As enzimas de restrio (EcoRI corta o DNA na sequncia palindrmica GAATTC)
FIGURA 8.2. A eletroforese do DNA
FIGURA 8.3. Os polimorfismos
FIGURA 8.4. Hibridizao de uma sequncia de DNA com uma sonda complementar marcada
FIGURA 8.5. A tcnica de Southern
FIGURA 8.6. A sntese de oligonucleotdeos
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SUMRIO
FIGURA 18.6. O uso de arrays no diagnstico de mutaes nos genes BRCA1 e BRCA2
FIGURA 19.1. As etapas do desenvolvimento de um medicamento
FIGURA 19.2: A frmula da aspirina
FIGURA 19.3. A frmula da penicilina
FIGURA 19.4. A insulina humana
A. A molcula de insulina
B. A sntese da insulina.
LISTA DE TABELAS
TABELA 1.1. Produtos e servios de origem biotecnolgica, em diferentes setores
TABELA 1.2. A linha do tempo
TABELA 2.1. A funo e a distribuio das estruturas celulares
TABELA 2.2. As clulas como agentes biolgicos
TABELA 3.1. Os microrganismos dentro do marco da uma classificao biolgica atual
TABELA 3.2. As bactrias (Eubactrias e Arqueas) como agentes biolgicos
TABELA 3.3. As algas como agentes biolgicos
TABELA 3.4. Os fungos como agentes biolgicos
TABELA 4.1. As funes das protenas no organismo
TABELA 4.2. A classificao internacional das enzimas
TABELA 4.3. As enzimas como agentes biolgicos
TABELA 4.4. Os anticorpos como agentes biolgicos
TABELA 5.1: O cdigo gentico
TABELA 5.2. Os cidos nucleicos (DNA e RNA) como agentes biolgicos
TABELA 7.1. Os componentes do meio de cultura para clulas vegetais
TABELA 7.2. Os componentes de um meio de cultura bsico para clulas animais
TABELA 7.3. Origem e utilizao de algumas linhagens celulares
TABELA 10.1. Diversidade de produtos derivados de algumas matrias-primas renovveis
TABELA 10.2. Metablitos primrios e secundrios obtidos por fermentao e/ou bioconverso enzimtica
TABELA 10.3. O poder calorfico de vrios combustveis.
TABELA 11.1. Alguns exemplos de utilizao de agentes biolgicos como pesticidas
TABELA 11.2. Os principais contaminantes do meio ambiente
TABELA 12.1. Os principais tipos de vegetais que entram em nossa alimentao
TABELA 12.2. As plantas e a indstria
TABELA 12.3. Os centros de diversificao e os cultivos originrios
TABELA 14.1. O risco de escapamento de um animal transgnico
TABELA 14.2. Significado e alcance dos trs Rs (do ingls replacement, reduction, refinement)
TABELA 16.1. As plantas geneticamente modificadas no mundo (Dados do ISAAA, maro de 2016)
TABELA 17.1. A produo de vacinas no Brasil
TABELA 18.1. As qualidades de um bom teste de diagnstico.
TABELA 18.2. Algumas das mais de 8.000 doenas genticas descritas
TABELA 19.1. A linha do tempo de entrada dos antibiticos e antibacterianos no mercado
TABELA 19.2. Alguns biofrmacos de interesse mdico
TABELA 19.3. Os medicamentos biolgicos mais lucrativos em 2014 (Statista, Phrma)
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CAPTULO 1
O QUE BIOTECNOLOGIA
A BIOTECNOLOGIA TRADICIONAL
Cultivar vegetais, domesticar animais, transformar os alimentos ou aproveitar as propriedades
curativas de algumas plantas so atividades que remontam alvorada da humanidade e se
desenvolveram com base no conhecimento emprico, ignorando a existncia dos microrganismos ou
das leis da hereditariedade.
No incio do sculo XIX, a demanda de mo de obra por uma indstria incipiente estimula a
migrao da populao do campo para a cidade. Em condies sanitrias cada vez mais degradadas,
as doenas e a fome acompanham o homem. Ao mesmo tempo, o progresso exige processos
industriais mais eficientes. A compreenso dos fenmenos naturais torna-se indispensvel para
responder s necessidades da sociedade.
A partir de 1850 surgem novas reas do conhecimento. Nasce a Microbiologia, a Imunologia, a
Bioqumica e a Gentica. A Qumica Industrial desenvolve-se aceleradamente e aumenta, tambm, a
interveno da Engenharia Agrcola e da Pecuria no gerenciamento do campo.
Em 1914, Karl Ereky, um engenheiro agrcola hngaro, desenvolve um gigantesco plano de criao
de sunos visando substituir as prticas tradicionais por uma indstria agrcola capitalista baseada no
conhecimento cientfico. Deve-se a Ereky (1919) a primeira definio de biotecnologia, como a cincia
e os mtodos que permitem a obteno de produtos a partir de matria-prima, mediante a
interveno de organismos vivos. Para ele, a era bioqumica substituiria a era da pedra e do ferro.
O sculo XX assiste a um desenvolvimento extraordinrio da cincia e da tecnologia. Da
convergncia entre ambas resultam logros extraordinrios em vrios setores produtivos, onde os seres
vivos constituem a base de itens to diversos como a produo de variedades vegetais mais produtivas,
a fabricao de novos alimentos, o tratamento do lixo, a produo de enzimas e os antibiticos.
A BIOTECNOLOGIA MODERNA
A proposta de J. D. Watson e F. Crick (1953) de um modelo helicoidal para a molcula de DNA
representa, sem dvida, um marco fundamental na histria da Biologia Molecular. Mas a divisria
entre a Biotecnologia clssica e a Biotecnologia moderna uma srie de experincias realizadas por H.
Boyer e S. Cohen que culmina em 1973 com a transferncia de um gene de sapo a uma bactria. A
partir desse momento possvel mudar o programa gentico de um organismo transferindo-lhe genes
de outra espcie.
A importncia e os riscos inerentes nova tecnologia no passaram despercebidos s pessoas
envolvidas. Fato indito na histria, em 1975, os cientistas reunidos em Asilomar (USA) estabeleceram
uma moratria em seus trabalhos at serem definidas as condies de segurana adequadas, o que
aconteceria pouco tempo mais tarde.
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O QUE BIOTECNOLOGIA?
O IMPACTO DA BIOTECNOLOGIA
Nascida nos laboratrios de Universidades e Centros de Pesquisa, onde ainda permanece, a
Biotecnologia se desenvolve tambm em empresas pblicas e privadas de diferente porte, gerando
um segmento novo de empresas especializadas em plataformas tecnolgicas avanadas que
disponibilizam insumos para as outras empresas.
J no se trata de promessas ou de perspectivas futuras; os produtos e processos biotecnolgicos
fazem parte de nosso dia a dia, trazendo oportunidades de emprego e investimentos. Incluem-se na
bioeconomia plantas resistentes a doenas, plsticos biodegradveis, detergentes mais eficientes,
biocombustveis, e tambm processos industriais menos poluentes, menor necessidade de pesticidas,
biorremediao de poluentes, centenas de testes de diagnstico e de medicamentos novos (Tabela
1.1).
---------------FIGURA 1.1. O campo da Biotecnologia
Conhecimentos
Agentes biolgicos
Cincia e tecnologia
BIOTECNOLOGIA
Fazer produtos teis
Resolver problemas
SETORES
Energia
Indstria
Butanol, acetona, glicerol, cidos, vitaminas etc. Numerosas enzimas para outras indstrias
(txtil, de detergentes etc.).
Meio ambiente
Agricultura
Pecuria
Embries, animais com caractersticas novas (transgnicos), vacinas e medicamentos para uso
veterinrio.
Alimentao
Panificao (pes e biscoitos), laticnios (queijos, iogurtes e outras bebidas lcteas), bebidas
(cervejas, vinhos e bebidas destiladas) e aditivos diversos (shoyu, monoglutamato de sdio,
adoantes etc.); protena de clula nica (PUC) para raes, alimentos de origem transgnica
com propriedades novas.
Sade
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BIOTECNOLOGIA E DESENVOLVIMENTO
Por se tratar de uma coleo de tecnologias diversas, o uso das biotecnologias no se restringe
necessariamente aos pases desenvolvidos. Existe um espao que os pases emergentes podem ocupar,
em funo de suas riquezas naturais, desde que existam prioridades econmicas e polticas definidas
claramente. A condio fundamental contar com instituies competentes que formem uma massa
crtica de pesquisadores e pessoal tcnico treinado.
A China e a ndia contam hoje com uma indstria biotecnolgica avanada e diversificada. Assim
como a Amrica Latina, concentrada principalmente na Argentina, no Brasil, no Chile, na Colmbia, em
Cuba e no Mxico. Pases como Uruguai e Venezuela tambm tm atividade em algumas reas, assim
como, em menor escala, Equador, Costa Rica, Paraguai, Peru e Bolvia. Na regio, numerosas empresas
incidem em vrios setores: meio ambiente e indstria, agroalimentos e pecuria, sade animal e
humana.
No entanto, a Biotecnologia suscita ainda opinies e sentimentos controversos. Enquanto alguns
setores a percebem como uma tecnologia baseada em um slido conhecimento cientfico, para outros
se trata de uma atividade antinatural e perigosa. O enfrentamento de partidrios e opositores ocorre
com menos frequncia no terreno das razes que no das paixes, sejam elas polticas, religiosas ou
ideolgicas. Ao discutir se a biotecnologia progressista ou reacionria, boa ou ruim, se esquece que
o que caracteriza uma tecnologia o uso que fazemos dela.
Produtos e processos inimaginveis cinquenta anos atrs entram em nosso cotidiano antes que os
alicerces cientficos e tecnolgicos correspondentes se insiram em nossa cultura, atravs de uma
divulgao ampla que atinja tambm o sistema educativo em todos os seus nveis. No existe
possibilidade alguma de construir uma sociedade moderna se os seus integrantes ignorarem os
aspectos mais gerais de cincia e tecnologia. O desconhecimento aumenta o risco de rejeitar
tecnologias promissoras, capazes de abrir perspectivas novas, com vistas a um desenvolvimento
sustentvel em reas to crticas como a sade, a produo de alimentos, a energia e o meio ambiente.
A proposta deste livro revisar os fundamentos das biotecnologias e mostrar como se aplicam em
diversos setores produtivos da sociedade, destacando como exemplos alguns empreendimentos
latino-americanos bem-sucedidos. Esperamos que ele seja de ajuda para todos os que nos
preocupamos com os alcances desta fascinante (r)evoluo tecnolgica.
A HISTRIA DA BIOTECNOLOGIA
A Tabela 1.2 rene alguns dos mais importantes acontecimentos relacionados com a Biotecnologia.
---------------TABELA 1.2. A linha do tempo
DATA
ACONTECIMENTOS FUNDAMENTAIS
ANTIGUIDADE
Preparao e conservao de alimentos e bebidas por fermentao (po, queijo, cerveja, vinho
e vinagre); cultivo de plantas (batata, milho, cevada, trigo etc.); domesticao de animais;
tratamento de infeces (com produtos de origem vegetal tais como p de crisntemo e
derivados de soja com fungos).
IDADE MDIA
Sculo XII
Destilao do lcool.
O QUE BIOTECNOLOGIA?
IDADE MODERNA
Sculo XVI
Cronistas registram a colheita de algas para alimentao, nos lagos do Mxico, pelos astecas.
Sculo XVII
Sculo XVIII
Invento da mquina a vapor (1752). A partir de 1750, cresce o cultivo de leguminosas na Europa
e se difunde a prtica de rotao de cultivos, aumentando a produtividade e melhorando o uso
da terra.
IDADE CONTEMPORNEA
1797
Jenner inocula uma criana com um vrus que o protege contra a varola.
1809
Appert utiliza o calor para esterilizar e conservar comida, processo que ser utilizado nas
campanhas napolenicas.
1835 a 1855
1863 a 1886
Pasteur inventa um processo para conservar alimentos sem alterar suas propriedades
organolpticas (Pasteurizao, 1863), derruba a teoria da abiognese (1864), investiga as
doenas do bicho-da-seda (1865), identifica a levedura como o agente responsvel pela
fermentao alcolica (1876), usa microrganismos atenuados para obter vacinas contra o antraz
e a clera (1881), faz os primeiros testes de uma vacina contra a raiva (1881). Paralelamente,
Koch inicia o desenvolvimento de tcnicas fundamentais para o estudo dos microrganismos
(1876) e enuncia quatro postulados sobre os agentes infecciosos como causa de doenas. Em
1865 Mendel apresenta o seu trabalho Experincias de hibridizao em plantas.
1887
1892
1897
Bchner mostra que enzimas extradas da levedura podem transformar acar em lcool.
1899
1900
1905
O primeiro transplante de crnea se realiza com sucesso; isto porque a crnea no tem
antgenos.
1906
Ehrlich descobre o primeiro agente quimioterpico, chamado Salvarsan, que ser utilizado
contra sfilis.
1910
1912 a 1914
Rhm obtm a patente de uma preparao enzimtica para a lavagem de roupas; Weizmann
consegue a produo de acetona e butanol por microrganismos.
1915
1916
Imobilizam-se as enzimas, uma tcnica que facilita sua utilizao em processos industriais.
1918
Morrem de gripe espanhola mais de vinte milhes de pessoas, um nmero de vtimas superior
ao da Primeira Guerra Mundial. Constroem-se biodigestores para a produo de metano (China
e ndia).
1919
O engenheiro agrcola hngaro Ereky utiliza pela primeira vez a palavra biotecnologia.
1927
1928
1933
1936
1938
1940 a 1950
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1944
Produo em grande escala da penicilina (descoberta por Fleming em 1928, desenvolvida por
Florey e Chain).
1951
1953
1958
1959
1960
Aumento da produo de cido lctico, cido ctrico, acetona e butanol por via fermentativa.
1961
Descoberta do cdigo gentico. Desenvolvimento de uma protease alcalina para uso em sabes
para a lavagem de roupas pela empresa dinamarquesa Novo. Inicia-se o cultivo in vitro de
clulas-tronco embrionrias pluripotentes.
1962
Plantio de novas variedades de trigo mais produtivas, no Mxico, dando incio ao que ser
chamado de Revoluo Verde.
1965
Hayflick observa que as clulas cultivadas se dividem um nmero finito de vezes antes de
morrer.
1967
1968
1973
Havendo desenvolvido tcnicas de corte e reunio do DNA, Cohen e Boyer transferem um gene
a um organismo de outra espcie. Lanado no Brasil o programa de produo de lcool a partir
de biomassa (Prolcool).
1975
1975
A Conferncia de Asilomar pede ao National Institute of Health (NIH) que sejam estabelecidas
normas para a regulao dos experimentos com DNA-recombinante, o que acontecer meses
mais tarde.
1976
1977
1978
Genentech, Inc., a primeira empresa biotecnolgica, fundada um ano antes por Boyer e
Swanson, obtm a protena somatotropina (hormnio de crescimento) mediante a tecnologia
do DNA-recombinante. Nasce na Inglaterra Louise Brown, o primeiro beb de proveta.
1979
1980
A Suprema Corte de Justia dos Estados Unidos aprova o princpio de patentes para as formas
de vida de origem recombinante. As primeiras patentes so de A. N. Chakrabarty, para um
microrganismo para biorremediao de petrleo, e de H. Cohen e S.Boyer, pelo processo de
1973. Erradicao da varola.
1982
1983
O QUE BIOTECNOLOGIA?
1984
A. Jeffreys introduz a tcnica do Fingerprint (impresses digitais), que, um ano depois, ser
utilizada pelos tribunais para a identificao de suspeitos. Clonagem e sequenciamento do
genoma do HIV pela empresa Chiron Corp.
1986
A Environmental Protection Agency (EPA) dos Estados Unidos aprova a liberao de plantas de
tabaco transgnicas. Um grupo de especialistas em segurana em Biotecnologia da Organizao
para a Cooperao Econmica e o Desenvolvimento (OECD) declara que a previsibilidade das
mudanas genticas obtidas por Engenharia Gentica frequentemente maior que a
correspondente s tcnicas tradicionais, e que os riscos associados com organismos transgnicos
podem ser avaliados do mesmo modo que os riscos associados aos outros organismos. Aprovada
a primeira vacina biotecnolgica para uso humano, trata-se de Recombivax-HB, contra a
hepatite B. alfa interferon para tratamento de cncer (Biogen)
1987
1988
1989
Com a criao do National Center for Human Genome Research se inicia o mapeamento do
genoma humano. Amgem libera o Epogen para tratamento de anemia.
1990
Primeira experincia de terapia gnica para uma doena rara (ADA) em uma menina de 4 anos.
Pfizer comercializa Chy-Max TM, uma enzima de origem recombinante para a preparao de
queijos. GenPharm International, Inc. consegue uma vaca transgnica que produz no leite
protenas humanas para alimentao infantil. A Universidade da Califrnia (UCSF) e a
Universidade de Stanford contabilizam 100 patentes relativas ao DNA-recombinante. Aplicao
da cultura de clulas na produo de agentes bioteraputicos.
1991
1992
Uma tcnica, elaborada por cientistas americanos e britnicos, permite testar anormalidades
como a fibrose cstica e a hemofilia em embries in vitro. A FDA declara que os alimentos de
origem transgnica no demandam uma regulao especial. Conveno Internacional sobre
Diversidade Biolgica (CDB).
1993
1994
1995
1996
1997
No Reino Unido, nascem Dolly, uma ovelha clonada, e, meses mais tarde, uma segunda ovelha,
Polly, clonada e geneticamente modificada. Os cultivos transgnicos so introduzidos em vrios
pases.
1998
Contabilizam-se mais de 1.500 empresas de Biotecnologia nos Estados Unidos e mais de 3.000
no mundo. Clulas-tronco embrionrias so utilizadas para regenerar tecidos. Sequenciamento
do primeiro genoma animal, o verme Caenorrabditis elegans. Isolada a primeira linhagem de
clulas-tronco embrionrias humanas. A.Z. Fire e C. Mello descobrem o silenciamento gnico, a
resposta antiviral a um RNA de filamento duplo.
1999
Sequenciamento do primeiro cromossomo humano. Pesquisadores descobrem que as clulastronco podem ser induzidas a se diferenciar em diversos tipos celulares.
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2000
2001
2002
2003
2004
2005
Publicao dos resultados do projeto HApMap com o mapa das variaes do Genoma Humano.
2006
2007
2008
2009
2010
Autorizada na Unio Europeia a comercializao da batata transgnica Amflora (Basf) para uso
industrial. Pesquisadores do Instituto Craig Venter constroem a primeira clula sinttica.
Desvendado o genoma do Neanderthal. Primeiro teste clnico com clulas-tronco.
2012
2013
2014
CAPTULO 2
CLULAS E CROMOSSOMOS
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10
CLULAS E CROMOSSOMOS
Estrutura
FUNO
CLULA BACTERIANA
CLULA
ANIMAL
CLULA
VEGETAL
Parede celular
Manuteno da forma e
proteo da clula.
Presente ou ausente
Ausente
Presente
Membrana plasmtica
Manuteno da
estabilidade do meio
intracelular; controle das
trocas entre a clula e o
meio extracelular.
Carioteca ou
membrana nuclear
Controle do fluxo de
substncias entre o
ncleo e o citoplasma.
Cromossomo(s)
Presente
Ausente
Presente
Controle da estrutura e
do funcionamento celular.
nico e circular;
apenas DNA.
Nuclolo(s)
Formao de ribossomos.
Ausente(s)
Presente(s)
Centrolos
Formao de clios e
flagelos; participao na
diviso celular.
Ausentes
Ribossomos
Sntese de protenas.
Sntese de protenas.
Sntese de lipdios;
armazenamento e
inativao de substncias.
Presentes
Ausentes
Presentes
Ausentes
Complexo de Golgi
Secreo celular.
Mitocndrias
Respirao celular
aerbia.
Vacolo central
Equilbrio osmtico e
armazenamento.
Lisossomos
Digesto intracelular.
Cloroplastos
Fotossntese.
Ausentes
Citoesqueleto
Manuteno da forma
celular; contrao e
ancoragem de organelas.
Ausente
Presentes
Ausente
Presente
Presentes
Ausentes
Ausentes
Presentes
Presente
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UNIDADE FUNCIONAL
As reaes metablicas so facilitadas por protenas com atividade cataltica, denominadas enzimas.
Assim como as protenas estruturais, as enzimas se sintetizam nos ribossomos, que so pequenos
componentes citoplasmticos, no membranosos. A estrutura das protenas depende da informao
gentica codificada no cido desoxirribonucleico (DNA), transcrita no cido ribonucleico (RNA) e
traduzida nos ribossomos.
As semelhanas de estrutura e funcionamento celulares decorrem de uma origem evolutiva
comum, aproximadamente 3,8 bilhes de anos atrs. Os dois tipos celulares que reconhecemos hoje,
as clulas procariticas e as eucariticas, apareceram entre um e um bilho e meio de anos mais tarde.
TCNICAS LABORATORIAIS
O estudo das clulas se v facilitado por um conjunto de tcnicas laboratoriais, tais como:
o Tcnicas microscpicas que permitem uma visualizao detalhada da clula.
-
Microscopia ptica, que se utiliza para observar os cortes de tecidos. Geralmente, estes so fixados
(lcool, cido actico, formaldedo) e tingidos com corantes que reagem com as protenas ou com os
cidos nucleicos, aumentando o contraste da imagem.
Microscopia fluorescente, que associa anticorpos especficos a um reagente como o PVF (protena verde
fluorescente de medusa), de forma a marcar as molculas e visualizar sua distribuio nas clulas.
Microscopia confocal, que combina a microscopia fluorescente com a anlise eletrnica da imagem,
fornecendo uma imagem tridimensional.
Microscopia eletrnica, que permite a observao em um plano de cortes tingidos com sais de metais
pesados (microscopia de transmisso) e a observao tridimensional de clulas (microscopia de
varredura).
Microscopia de tunelamento, com os diversos tipos de microscpios de varredura por sonda (SPM, do
ingls scanning probe microscope) que, alm de fornecer uma imagem de molculas e tomos,
permitem medies e a manipulao de molculas e tomos.
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CLULAS E CROMOSSOMOS
aceito at dez anos mais tarde, quando L. Pasteur mostrou experimentalmente que a proliferao de
microrganismos em um meio orgnico estril se deve contaminao deste com os microrganismos
presentes no ar, que, ao encontrar um meio propcio, se multiplicam rapidamente.
Todo organismo multicelular resulta da multiplicao de uma nica clula-ovo ou zigoto. As clulas
embrionrias diferenciam-se, formando centenas de tipos celulares com funes especficas, cuja
integrao assegura a unidade do organismo. Nos vegetais, a persistncia de tecidos embrionrios
totipotentes (meristemas) na planta adulta permite o crescimento e a regenerao durante a vida toda
do organismo. Em condies apropriadas, clulas especializadas podem reverter a um estado no
diferenciado com a capacidade de regenerar um organismo completo. Nessa propriedade se
fundamenta a propagao de plantas in vitro.
Nos animais superiores, a totipotncia se restringe s clulas do embrio com menos de quatro
dias, que so as nicas capazes de regenerar um organismo inteiro. Contudo, uma vez passado esse
perodo, algumas clulas internas pluripotentes do blastcito (clulas-tronco embrionrias) conservam
a capacidade de originar todos os tecidos do organismo (Figura 2.2).
Algumas clulas-tronco permanecem nos tecidos adultos, onde se multiplicam durante longos
perodos de tempo sem que ocorra a diferenciao. Estas clulas tm sido encontradas em rgos
como a medula ssea e o cordo umbilical, o sangue, a crnea e a retina, a polpa dentria, o fgado, a
pele, o trato digestivo e o pncreas.
Em determinadas condies fisiolgicas, as clulas-tronco adultas originam clulas especializadas
de vrios tipos que asseguram a manuteno e o reparo do tecido onde se encontram. Um nico tipo
de clula-tronco multipotente da medula ssea, por exemplo, gera todas as clulas sanguneas
(hemcias, leuccitos e plaquetas). Na pele, clulas-tronco unipotentes se diferenciam unicamente na
linhagem celular dos queratincitos.
As clulas-tronco adultas encontraram rapidamente aplicaes teraputicas promissoras, como o
transplante de clulas-tronco hematopoticas em casos de leucemia aguda ou de linfoma. No
aconteceu o mesmo com as clulas-tronco embrionrias, cuja utilizao est limitada a pesquisas e
estudos laboratoriais.
As clulas-tronco embrionrias podem ser extradas de um embrio obtido por transferncia de um
ncleo a um ovcito anucleado, ou dos embries supranumerrios congelados nas clnicas de
fertilizao assistida. Os dois mtodos suscitaram grandes debates ticos em torno de quem forneceria
os ovcitos e do status do embrio.
---------------FIGURA 2.2. As clulas-tronco embrionrias
As clulas-tronco embrionrias extradas do blastcito (5 a 7 dias) e cultivadas in vitro diferenciam-se, em
condies experimentais adequadas, nos diferentes tipos celulares.
Espermatozides
Massa interna de clulas
Clulas de pncreas
vulo
Clulas de
medula ssea
Zigoto
Blastocisto (corte)
5 a 7 dias
Cultura de
clulas-tronco
embrionrias
Clulas de
msculo cardaco
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B- Estrutura da cromatina
DNA
Genes
Centrmero
Cromtides
irms
Sem duplicar
Duplicado
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CLULAS E CROMOSSOMOS
OS CROMOSSOMOS
A observao microscpica dos cromossomos durante a diviso celular permite diferenci-los pelo
tamanho e a posio do centrmero, uma constrio que os divide em dois braos. Cada cromossomo
est composto por um filamento de DNA enrolado a espaos regulares sobre vrias protenas
(histonas), formando pequenas estruturas denominadas nucleossomos. No resto do ciclo celular, os
cromossomos distendidos formam uma rede de filamentos finos, denominada cromatina, (Figura 2.3).
O nmero de cromossomos (n) constante em todos os indivduos de uma mesma espcie: n = 4
em Drosophila melanogaster e n = 23 no homem, por exemplo. Como nas clulas somticas, os
cromossomos se encontram sempre em pares; na espcie humana, o nmero de cromossomos (2n)
de 46, sendo que um par determina o sexo. Os cromossomos sexuais so idnticos na mulher (46, XX)
e diferentes no homem (46, XY). Em outras espcies, a determinao do sexo segue mecanismos
diversos.
Um pouco antes da diviso de uma clula, os cromossomos se duplicam, de modo que cada uma
das clulas filhas receba (2n) cromossomos. A mitose mantm constante o nmero de cromossomos
nas clulas somticas dos indivduos de uma mesma espcie.
J nas clulas reprodutivas, a meiose reduz a (n) o nmero de cromossomos. Durante o processo,
o entrecruzamento dos cromossomos permite a permuta de material e a recombinao dos genes
(Figura 2.4). Na fecundao, a fuso dos gametas restaura o nmero (2n) caracterstico da espcie.
Durante a formao dos gametas podem ocorrer erros na disjuno dos cromossomos, dando
origem a indivduos com frmulas cromossmicas alteradas. Na sndrome de Down, por exemplo, a
pessoa apresenta geralmente um cromossomo 21 supranumerrio (mulheres 47, XX + 21; homens 47,
XY + 21).
Estima-se que a percentagem de recm-nascidos com alguma anomalia cromossmica estaria em
torno de 0,85%, dos quais s alguns apresentariam algum sintoma. Alteraes cromossmicas tambm
podem ser relacionadas com alguns tipos de cncer. Na leucemia mieloide crnica, por exemplo,
observa-se a translocao recproca de dois pedaos dos cromossomos 9 e 22. De um modo geral,
frequente encontrar alteraes no nmero de cromossomos das clulas cancerosas.
A TEORIA CROMOSSMICA DA HEREDITARIEDADE
Em 1865, Gregor Mendel apresentou seu trabalho Experincias de hibridizao em plantas; este
reunia os resultados experimentais realizados com ervilhas (Pisum sativum), durante sete anos, no
jardim do monastrio Agostino de Brno (Morvia).
Apesar de passar quase despercebido, o trabalho acabou sendo distribudo por vrias bibliotecas
da Europa e Amrica, graas a sua publicao, um ano mais tarde, nos Anais da Sociedade de Histria
Natural.
No texto figuram algumas generalizaes. Conhecida como Primeira Lei de Mendel, Lei de
Segregao ou Monoibridismo, a primeira delas se refere segregao dos fatores (alelos) de um par
(um gene) na formao de gametas. A segunda, que conhecida como Segunda Lei de Mendel, Lei de
Segregao Independente ou Diibridismo, se refere segregao dos fatores (alelos) de dois ou mais
pares (dois ou mais genes) independentes na formao de gametas.
Em 1900, depois de chegar de maneira independente a concluses semelhantes, os pesquisadores
K. Correns, E. Von Tschermak e H.de Vries redescobriram nas bibliotecas o trabalho de Mendel. Nesse
intervalo de 35 anos tinha sido descrita a diviso celular (mitose, 1875; meiose, 1890); o prximo passo
correspondeu a Sutton e Boveri (1902), sugerindo que os fatores hereditrios de Mendel estariam nos
cromossomos.
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A confirmao desta hiptese decorreu dos trabalhos de T.H.Morgan e sua brilhante equipe na
Universidade de Columbia (Nova York), com a mosca da fruta, Drosophila melanogaster. Em 1910,
depois de uma srie de cruzamentos e de anlises estatsticas, Morgan mostrou que a herana da cor
branca do olho do mutante white est associada transmisso do cromossomo X, que determina o
sexo.
Morgan e seus colaboradores identificaram numerosos outros mutantes de Drosophila
melanogaster com um padro mendeliano de hereditariedade. Alm de moscas com olhos brancos em
vez de vermelhos, encontraram outras com asas curtas em vez de longas, com corpo de cor marrom
ou preta em vez de amarela etc. Os genes correspondentes foram classificados em quatro grupos de
ligao, sendo que cada um deles est associado a um dos quatro pares de cromossomos da
Drosophila.
Como durante a meiose se produzem permutas entre segmentos cromossmicos, nos cruzamentos
aparecem indivduos recombinantes, isto , com outras combinaes gnicas diferentes das previstas
pelas leis mendelianas (Figura 2.4). A partir dos dados obtidos em milhares de cruzamentos sobre a
recombinao dos genes de um mesmo grupo de ligao chega-se a estabelecer a distncia gentica
entre eles.
---------------FIGURA 2.4. Mitose e meiose
MEIOSE
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MITOSE
EIOSE
CLULAS E CROMOSSOMOS
Com a descoberta de clulas com cromossomos gigantes (politnicos) nas glndulas salivares das
larvas de drosfila, comearam os primeiros trabalhos de mapeamento. A observao microscpica
das bandas nos cromossomos mostrou, com enorme riqueza de detalhes, uma sucesso consistente
de bandas largas e estreitas. Da associao entre os mtodos genticos e os mtodos citolgicos
surgiram os primeiros mapas fsicos, associando uma regio cromossmica a cada gene.
Das descobertas de Morgan e sua equipe, nasce a Teoria Cromossmica da Hereditariedade ou
Teoria do Gene, segundo a qual:
o Os caracteres de um indivduo correspondem a elementos pares, os genes.
o Os genes esto ligados uns aos outros nos cromossomos, formando um determinado nmero de
grupos de ligao.
o Os genes de cada par se separam durante a gametognese, de acordo com a Primeira Lei de Mendel
e, em consequncia, cada gameta fica contendo apenas um conjunto de genes.
o Os genes pertencentes a grupos de ligao diferentes segregam independentemente, de acordo
com a Segunda Lei de Mendel.
o Entre os elementos pertencentes a cada grupo de ligao, ocorre uma troca ordenada chamada
permuta ou crossing-over, que leva recombinao dos genes (Figura 2.4). A frequncia da
permuta fornece a prova da linearidade dos genes em cada grupo de ligao e permite determinar
sua posio relativa.
AS PRIMEIRAS MANIPULAES GNICAS
Na gentica clssica, um carter pode ser considerado hereditrio quando duas variaes fenotpicas
podem ser atribudas a dois alelos de um mesmo gene. Os primeiros mutantes de Drosophila
apareceram por acaso e em uma frequncia to baixa que limitava os estudos de anlise gentica. Era
necessrio encontrar um mtodo que acelerasse a obteno de mutantes para poder avanar. J na
dcada de 1920, H. Muller, um dos integrantes do grupo das moscas liderado por Morgan, iniciou os
experimentos de exposio das drosfilas a diferentes tipos de radiao.
O tratamento gerou em poucas semanas mais de 100 mutantes, um nmero equivalente metade
dos mutantes espontneos encontrados nos 15 anos anteriores. A radiao podia causar pequenas
mutaes de ponto, afetando um nico gene e originando uma pequena variao fenotpica. Contudo,
os efeitos da radiao tambm podiam ser letais para a descendncia e/ou produzir vrios tipos de
alteraes cromossmicas: translocaes, inverses, delees, duplicaes.
Muller viu claramente a importncia do tratamento com radiao para a obteno de novas
variveis vegetais e no melhoramento agrcola; datam dessa poca as primeiras mutaes em plantas
de milho. A radiao utilizada como agente mutagnico at os dias de hoje, sendo uma prtica
considerada aceitvel pelos agricultores orgnicos.
Percebendo o risco que a manipulao indiscriminada da radiao representava para o ser humano,
Muller teve um rol preponderante na conscientizao dos trabalhadores da indstria e da sade sobre
medidas de proteo e participou ativamente nas campanhas antinucleares das dcadas de 19401950.
NATURE vs NURTURE
Assim como muitos outros posteriores, os estudos da equipe de Morgan mostraram a complexidade
dos padres de hereditariedade, que incluem casos de:
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CLULAS E CROMOSSOMOS
Vegetais
CLULAS
Animais
e/ou
humanas
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CAPTULO 3
OS MICRORGANISMOS
A DIVERSIDADE MICROBIANA
O termo microrganismos se aplica a um grupo heterogneo de seres que vivem como clulas
independentes ou como agregados celulares: bactrias, arqueas, protozorios, algas e fungos e,
tambm, vrus (Tabela 3.1). Salvo estes ltimos, que esto na fronteira entre o vivo e o no vivo, os
encontramos dentro dos trs domnios em que se classificam os seres vivos: Bacteria, Archaea e
Eukarya.
Os microrganismos mostram uma diversidade surpreendente de estrutura e modos de vida. Alguns
so procariontes, como as bactrias; outros eucariontes, como os protozorios, as algas e os fungos.
Os aerbios crescem se houver oxignio, os anaerbios, se no o houver. Formas livres colonizam
todos os ambientes terrestres, desde o cume das montanhas at as profundidades dos oceanos. Mas
h tambm parasitas que crescem custa de outros seres vivos, onde encontram abrigo e alimento, e
os que mostram diversos graus de dependncia de outros seres vivos.
---------------TABELA 3.1. Os microrganismos dentro do marco da uma classificao biolgica atual
DOMNIO
BACTERIA
ARCHAEA
REINO
EUBACTERIA
ARCHAEBACTERIA
PROTOCTISTA
FUNGI
PLANTAE
ANIMALIA
TIPO DE
CLULA
Procaritica
Procaritica
Eucaritica
Eucaritica
Eucaritica
Eucaritica
ESTRUTURA
CELULAR
Parede celular
com
peptidoglicano.
Parede celular de
celulose, em
alguns.
Presena de
cloroplastos, em
alguns.
Parede celular
de quitina.
Ausncia de
cloroplastos.
Parede celular de
celulose.
Sem parede
celular nem
cloroplastos.
Unicelular
Uni ou
pluricelular
Uni ou
pluricelular
Pluricelular
Pluricelular
ORGANIZAO Unicelular
EUKARYA
Presena de
cloroplastos.
NUTRIO (*)
Autotrfica ou
Heterotrfica
Autotrfica ou
Heterotrfica
Autotrfica ou
Heterotrfica
Heterotrfica
(absoro)
Autotrfica
Heterotrfica
(ingesto)
EXEMPLOS
Eubactrias
Arqueas
Protozorios e
Algas
Leveduras,
Mofos, Bolores
e Cogumelos.
Brifitas (musgos),
Pteridfitos
(samambaias),
Gimnospermas e
Angiospermas.
Invertebrados e
Cordados
* Nutrio
Autotrfica: o organismo produz seu prprio alimento a partir de substncias inorgnicas e de uma fonte de energia. Os seres
autotrficos podem realizar fotossntese (para a qual a fonte de energia a luz solar) ou quimiossntese (para a qual a fonte
de energia uma reao qumica exotrmica).
Heterotrfica: o organismo se alimenta de molculas orgnicas elaboradas por outros seres vivos por absoro (captao de
nutrientes dissolvidos na gua), ou ingesto (entrada de partculas de alimentos no dissolvidas).
BIOTECNOLOGIA: ENSINO E DIVULGAO (http://bteduc.com)
OS MICRORGANISMOS
AS EUBACTRIAS
As eubactrias ou bactrias so organismos unicelulares procariticos em que uma parede celular
pode cumprir uma funo protetora. Alm do DNA cromossmico, podem apresentar molculas
circulares extras de DNA denominadas plasmdeos.
As eubactrias formam um grupo com mais de 5 mil espcies conhecidas. Pequenas (0,0005-0,005
mm) e de formas diversas (esfricas, bastonetes, helicoidais), elas podem ser encontradas isoladas ou
em pares, cadeias ou agregados. Algumas se locomovem livremente, mediante um ou mais flagelos
distribudos na superfcie celular, outras aderem, mediante pelos ou fmbrias, a um organismo
hospedeiro. O grupo inclui as cianobactrias, que sero comentadas mais adiante, junto com as algas.
Em condies desfavorveis, algumas bactrias formam esporos que resistem em forma latente at
que a situao mude, germinando e retomando sua atividade fisiolgica. Um exemplo interessante, na
Europa do sculo XIX, o da existncia de campos malditos, onde as ovelhas no deviam transitar,
devido ao alto risco de contrair o carbnculo ou antraz. De fato, os bacilos presentes nos animais
vitimados pela doena e enterrados nesses campos formavam esporos que, trazidos superfcie pelas
minhocas, contaminavam as pastagens.
Uma tcnica laboratorial (colorao de Gram) permite diferenciar as bactrias pela estrutura da
parede celular. Entre as Gram-positivas, cuja parede celular mais simples, encontramos gneros
como Clostridium, Bacillus, Mycobacterium (com algumas espcies que causam a tuberculose e a lepra)
e os Actinomicetes, como Streptomyces, produtora de antibiticos como a estreptomicina.
Entre as Gram-negativas, encontramos os micoplasmas, Escherichia coli, uma colonizadora do trato
digestivo de muitos organismos; Salmonella, um agente de muitas intoxicaes alimentares; as
cianobactrias fotossintticas; as espiroquetas (Treponema pallidum e Borrelia burgdorferi, causantes
da sfilis e da doena de Lyme, respectivamente); e as clamdias (responsveis por tracoma e uretrites).
Estima-se que as bactrias sejam responsveis por aproximadamente metade das doenas
humanas, porm nem todas so patognicas. As Gram-negativas so mais difceis de tratar que as
Gram-positivas, devido a uma camada adicional na parede celular que as protege e dificulta a entrada
de antibiticos. Assim como o homem, os animais e as plantas tambm so afetados por patgenos
bacterianos. O dano decorre da invaso dos tecidos do hospedeiro ou da liberao de substncias
txicas (exo e endotoxinas).
Pessoas diferentes, em lugares diferentes ou em um mesmo lugar, sejam sadias ou doentes, no
apresentam os mesmos microrganismos. Algumas comunidades microbianas desenvolvem-se na
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Bactria
Clones
Conjugao
Bactria doadora
Bactria receptora
Transduo
Bactria infectada
Bacterifago
com um fragmento
de DNA bacteriano
Infeco
Lise celular
Bactria competente
Incorporao do DNA
exgeno (Lisogenia)
Transformao natural
22
Bactria transformada
OS MICRORGANISMOS
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(preparao de meios de cultivo para cultivo de bactrias e fungos) e em vrias indstrias, tais como a
alimentcia (sorvetes, cremes, geleias etc.), a farmacutica (laxantes, cpsulas de remdios) e a
cosmtica (cremes, sabonetes, xampus, dentifrcios etc.).
---------------TABELA 3.2. As bactrias (Eubactrias e Arqueas) como agentes biolgicos
AGENTES BIOLGICOS
APLICAES
Tratamento de resduos e de guas servidas.
Produo de energia (metano).
Biorremediao, extrao de minrio.
Indstria qumica (acetona, butanol, cido lctico, cido actico).
Bactrias
Enzimas industriais.
Agricultura (rizbios, biopesticidas).
Alimentos (laticnios, vinagres, picles, azeitonas, silagem).
Indstria de alimentos (vitaminas B12 e -caroteno, aminocidos lisina e cido glutmico;
polissacardeos xantana e dextrana*).
Indstria farmacutica (enzimas de uso mdico, antibiticos, vacinas e toxinas).
(*) A dextrana tambm tem usos mdicos.
APLICAES
Tratamento de efluentes, biomonitoramento de poluio, obteno de energia.
Biomassa
Agricultura (adubo).
Produo de alimentos (alimentao humana, rao para avicultura e aquicultura).
Algas
Indstria de cosmticos (cidos graxos e outras substncias tais como ficocoloides, pigmentos,
glicerol, abrasivos finos etc.).
Indstria farmacutica (compostos biologicamente ativos, tais como toxinas, antibiticos,
antivirais e antitumorais).
APLICAES
Agricultura (controle biolgico de insetos e nematoides, micorrizos).
Produtos de fermentao (etanol, glicerol, cido ctrico).
Fungos
Enzimas industriais.
Biomassa (fermento de padaria, micoprotena).
Indstria de alimentos (panificao, queijaria).
Indstria de bebidas (cervejas e vinhos, destilados).
Produtos metablicos (extrato de levedura, hormnios de crescimento vegetal).
Indstria farmacutica (antibiticos, vitaminas, vacinas, esteroides).
24
OS MICRORGANISMOS
As microalgas representam um grupo extremamente diversificado de umas 25.000 espcies das quais
s um pequeno grupo est bem estudado. Este compreende aproximadamente cinquenta espcies de
microrganismos fotossintticos, tanto eucariontes (diatomceas, dinoflagelados, euglenoides e outras
algas verdes) como procariontes (cianobactrias, antigamente algas azul-esverdeadas).
A proliferao de microalgas como floraes na natureza (mars vermelhas) ou em reservatrios,
geralmente devido eutrofizao das guas, causa a morte de outros organismos, sendo muito
perigosa se estiver acompanhada pela liberao de toxinas. Porm, em alguns sistemas de tratamento
de efluentes, as microalgas so incorporadas nos tanques para remover nutrientes inorgnicos e
adicionar oxignio. Tambm so usadas como indicadores de poluio.
O metano um gs combustvel que resulta da degradao de biomassa de algas por
microrganismos anaerbios. Por outro lado, a produo de hidrognio por algas representa uma
alternativa energtica promissora.
As microalgas so aproveitadas na alimentao animal como rao para a avicultura e a aquicultura.
Algumas das substncias que elas sintetizam so includas na alimentao humana como
complementos nutricionais e substitutos proteicos; trata-se de aminocidos, cidos graxos e vitaminas
(B12, -caroteno ou provitamina A). Tambm so utilizadas na formulao de cosmticos e na indstria
farmacutica (Tabela 3.3).
OS FUNGOS
O Reino Fungi comporta mais de 100.000 espcies. Os fungos so organismos eucariticos, uni ou
pluricelulares, com uma parede celular formada por quitina. Todos eles so hetertrofos e podem se
reproduzir sexuada ou assexuadamente.
As leveduras so fungos unicelulares que se desenvolvem em lugares midos e se reproduzem por
brotamento. Pertence a esse grupo um dos microrganismos de maior importncia econmica:
Saccharomyces cerevisiae, o popular levedo de cerveja (ou, simplesmente, levedura) utilizado
tradicionalmente na preparao de alimentos e de bebidas, assim como na produo de etanol,
vitaminas e outros metablitos.
Transformada mediante tcnicas de engenharia gentica, esta levedura produz uma vacina contra
a hepatite B (Tabela 3.4). Entretanto, nem todas as leveduras so benficas; Candida albicans, um
microrganismo oportunista da flora normal humana pode, em certas condies, proliferar de maneira
anormal, tornando-se patognica.
Nos bolores e mofos, as clulas formam um emaranhado de filamentos ou hifas, denominado
miclio. Os mofos crescem rapidamente por fragmentao do miclio e se disseminam mediante
esporos; como Aspergillus niger, um produtor de cido ctrico; ou como Rhizopus, o fungo preto do
po, que se expande sobre a superfcie deste apesar dos conservantes acrescentados; ou ainda como
Aspergillus flavus, um bolor que ataca as sementes de leguminosas (amendoim, feijo, soja) e produz
uma toxina poderosa, a aflatoxina, causando graves intoxicaes.
Neste grupo tambm se encontra o Penicillium, um gnero que conta com diversas espcies, uma
das quais utilizada na indstria farmacutica, para a produo de penicilina, e outras na indstria de
alimentos, para a maturao de queijos como o Roquefort, o Gorgonzola e o Camembert.
Os cogumelos so os corpos reprodutivos de muitos fungos. Alguns so venenosos (Ammanita),
outros produzem substncia alucingena, tais como a psilobicina, utilizada por grupos nativos
mexicanos em rituais religiosos, ou a ergotamina, sintetizada quimicamente no sculo XX com o nome
de LSD (cido lisrgico). Mas tambm os h comestveis como o Agaricus ou champignon, o Shiitake e
o Pleurotus, que so cultivados e comercializados pelo homem.
Em termos ambientais, um quarto da colheita de frutas e vegetais destrudo pelos fungos; pragas
como a ferrugem do caf, o esporo do centeio e a vassoura-de-bruxa afetam gravemente a
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agricultura. Na Irlanda no sculo XIX, o Phytophtora infestans atacou a batata, destruindo a fonte
bsica de alimentao; a praga causou um milho de mortes e a emigrao forada de boa parte da
populao.
Os liquens resultam da simbiose entre um fungo e uma alga. Alguns so comestveis, supondo-se
que a Lecanora esculenta seja o man referido na Bblia. O grupo no tem sido muito explorado
economicamente, apesar de ter encontrado aplicaes como corantes (tintura de tornassol, um
indicador de pH), no tingimento de tecidos e como fixadores na indstria de perfumes. Tambm so
indicadores de poluio (biomonitoramento).
Em contrapartida, outra associao, desta vez entre um fungo filamentoso e as razes das plantas
vasculares, os micorrizos, ocupam um lugar de destaque na agricultura em solos tropicais por
facilitarem a solubilizao dos fosfatos.
OS VRUS, NA FRONTEIRA DO VIVO E DO NO VIVO
Os vrus so partculas sem nenhuma atividade metablica; atravessam os filtros de porcelana e
cristalizam. O seu tamanho varia entre 20 e 300 nanmetros (1 nm = 10-4 mm). Sendo parasitas
obrigatrios de bactrias, plantas ou animais, ao infetar uma clula viva os vrus passam a utiliz-la
para sua prpria reproduo.
Apesar de variar muito em complexidade, uma partcula viral tpica compreende um cido nucleico
(DNA ou RNA, como filamento simples ou duplo) dentro de uma capa proteica ou capsdeo e algumas
enzimas que sero liberadas dentro da clula hospedeira: DNA polimerase no caso dos poxvirus de
DNA duplo que se multiplicam no citoplasma: transcriptase reversa nos retrovrus; RNA replicase nos
vrus que se replicam sem passar por DNA. Alguns vrus que se integram no genoma da clula infectada
(bacterifagos, retrovrus) tm sido utilizados na engenharia gentica como vetores para introduzir
genes em uma clula hospedeira (Figura 3.2).
A entrada do vrus na clula depende do reconhecimento de um receptor na membrana celular do
hospedeiro, que seja especfico para o vrus e essencial para a clula. A seguir, vrios cenrios so
possveis: morte da clula infectada pelo sistema imune do hospedeiro; lise celular e disperso de
partculas virais (vrus da influenza, poliovrus); brotao e sada envelopada; permanncia latente
(herpesvrus); integrao no hospedeiro e eventual transformao das clulas em cancerosas (tumores
devidos aos vrus da hepatite B e de Epstein-Barr).
Vrias doenas humanas so causadas por vrus (poliovrus, HIV, coronavrus [responsvel pela
sndrome aguda respiratria ou SAR] etc.). A destruio de habitats naturais pelo homem e as
mudanas climticas alteram a dinmica das populaes naturais, em que a relao entre parasita e
hospedeiros est bem estabelecida. O contato dos vrus com outros hospedeiros possibilita a apario
de algumas doenas emergentes como o Ebola, que assolou recentemente vrios pases da frica
ocidental, e o Zika, introduzido recentemente no Brasil. A disperso dos vrus se v acelerada por
fatores culturais e sociais e pelo incremento do comrcio e das viagens internacionais.
Na agricultura, o combate lagarta da soja com o baculovrus evita a aplicao de 1,2 milho de
litros de inseticidas por ano nas lavouras brasileiras. Em relao ao meio ambiente, pouco se sabe do
rol dos vrus, e dos microrganismos, nos oceanos. Uma questo relevante, considerando que 1 litro de
gua de mar contm pelo menos 10 bilhes de micrbios e 100 bilhes de vrus, e que a maioria no
est caracterizada nem identificada. Estudos recentes destacam sua importncia nos ciclos
biogeoqumicos e, particularmente, na reciclagem do carbono; a morte microbiana por infeco viral
libera, na cadeia alimentar, de 370 milhes a 630 milhes de toneladas de carbono por ano.
Os prons so pequenas protenas que podem agir como agentes transmissveis de algumas doenas
raras do sistema nervoso central. Possivelmente ativam mecanismos do hospedeiro para produzir
protenas semelhantes que polimerizam, causando danos locais (Kuru, doena de Creutzfeldt-Jakob).
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OS MICRORGANISMOS
Estrutura fundamental
Envelope (s nos vrus que se reproduzem por brotao)
Capsdeo (protena)
cido nucleico (DNA ou RNA)
Enzimas virais (polimerases, transcriptase reversa)
B.
Adenovrus
Bacterifago
C.
A multiplicao de um bacterifago
A infeco da bactria pelo bacterifago destri a clula (ciclo ltico). Em alguns casos, o DNA viral se integra no cromossomo,
sendo transmitido s clulas filhas; em determinadas condies, o vrus retoma sua atividade, reiniciando o ciclo ltico.
Bacterifago
Bactria
Infeco
DNA viral
Infeco
Adeso do bacterifago
parede celular e injeo
e injeo do DNA viral
CICLO LISOGNICO
DNA viral
CICLO LTICO
Formao de
novos vrus
Podendo voltar
a se ativar
Multiplicao do DNA viral
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AS TCNICAS MICROBIOLGICAS
Diversos tipos de tcnicas facilitam o trabalho laboratorial. A identificao de um microrganismo
demanda a observao microscpica e a utilizao de alguns mtodos especficos de colorao,
complementados por testes bioqumicos e eventualmente genticos e imunolgicos. Encontrar e
manter um microrganismo no laboratrio demanda a aplicao de tcnicas bacteriolgicas aplicveis
tambm, com algumas variaes, a fungos e algas.
Cultivar microrganismos exige, alm do desenho de um meio nutriente que satisfaa suas
necessidades metablicas, um cuidado especial com as condies de temperatura e iluminao em
que este ser incubado. Os meios nutrientes se empregam lquidos ou solidificados com gar, uma
substncia que lhes confere uma consistncia gelatinosa. Os recipientes mais comuns so tubos de
ensaio e placas circulares de vidro com tampa (placas de Petri); e, para inocular os meios, se utilizam
alas de platina e pipetas de diferentes tipos.
A grande dificuldade do laboratrio microbiolgico est em conseguir a multiplicao do
microrganismo desejado evitando as contaminaes, isto a multiplicao de outros microrganismos.
Trabalha-se em condies asspticas, o que demanda a esterilizao prvia do material de vidro,
dos meios nutrientes e dos instrumentos (alas, pipetas) que sero utilizados. E, na transferncia do
material biolgico, evita-se cuidadosamente toda contaminao com os microrganismos do ar.
Equipamentos especialmente desenhados para trabalhar sob um fluxo de ar esterilizado ajudam o
profissional. Tambm se evitam as contaminaes na hora de eliminar o material utilizado, a fim de
no liberar microrganismos prejudiciais no ambiente.
Os microrganismos so isolados a partir de amostras de solo, gua, ar ou fluidos corporais. As
linhagens obtidas se conservam como culturas puras. Microrganismos com caractersticas diferentes
so obtidos induzindo mutaes e selecionando as linhagens mutantes. Cada laboratrio mantm os
estoques microbianos necessrios, que tambm podem ser solicitados a centros especializados
(Colees de Cultura).
O nmero de microrganismos em uma amostra pode ser estimado por diversos mtodos: contagem
microscpica, contagem eletrnica, contagem em placa, turvao do meio, massa seca, contedo de
nitrognio ou medidas indiretas da atividade microbiolgica.
Em geral, as tcnicas clssicas so trabalhosas e muito demoradas para o diagnstico clnico, por
isso esto sendo substitudas por tcnicas miniaturizadas mais rpidas que identificam os
microrganismos com base em algumas reaes bioqumicas em kits padronizados. A tendncia geral
de automatizao do laboratrio microbiolgico e de utilizao de tcnicas moleculares.
A identificao de bactrias e arqueas pode ser realizada hoje por comparao do RNA ribossmico.
A centrifugao dos ribossomos em gradiente de cloreto de csio separa os componentes, RNA 5S e
RNA 23S na unidade maior e RNA 16S na menor. Modificaes na estrutura primria desta ltima
frao no afetam sua funo, de modo que, se uma pequena parte est altamente conservada, o
restante do rRNA de 16S varia entre as espcies, tendo se transformado em um elemento chave para
a classificao.
A Microbiologia Ambiental nos traz uma nova viso das populaes microbianas presentes na
natureza. Nossa ignorncia ainda enorme: o nmero de espcies que conseguimos cultivar no
laboratrio no representa mais do que 1 a 5 % da totalidade existente. Dependemos dos avanos na
rea da genmica para ampliar nosso conhecimento das comunidades microbianas do ambiente e para
identificar genes de interesse para a indstria (metagenmica).
28
OS MICRORGANISMOS
BIOSSEGURANA E BIOSSEGURIDADE
De acordo com a Organizao Mundial da Sade, o termo biossegurana abrange os princpios,
tcnicas e prticas necessrias para evitar a exposio acidental a patgenos e toxinas assim como sua
liberao acidental (Figura 3.3).
Os microrganismos so classificados segundo o risco de causarem danos aos profissionais que
trabalham com eles e coletividade. Os critrios so: a patogenicidade para o homem, a virulncia, o
modo de transmisso, a endemicidade e a existncia ou no de uma teraputica eficaz. Segundo a
Organizao Mundial da Sade, definem-se assim quatro grupos de risco:
o
Grupo de Risco 2 (risco individual moderado, risco coletivo baixo). Um agente patognico que pode
causar uma doena no homem ou no animal, mas que improvvel que constitua um perigo grave
para o pessoal dos laboratrios, a comunidade, o gado ou o ambiente. A exposio a agentes
infecciosos no laboratrio pode causar uma infeco grave, mas existe um tratamento eficaz, alm
de medidas de preveno, com risco de propagao de infeco limitado. Exemplos: Salmonella,
Toxoplasma, Schistosoma mansoni, Streptococcus sp, vrus da rubola, vrus do sarampo e vrus da
hepatite B.
Grupo de Risco 3 (alto risco individual, baixo risco coletivo). Um agente patognico que causa
geralmente uma doena grave no homem ou no animal, mas que no se propaga habitualmente
de uma pessoa a outra. Existe um tratamento eficaz, bem como medidas de preveno. Exemplos:
Mycobacterium tuberculosis, Bacillus anthracis e vrus da imunodeficincia humana (HIV).
Grupo de Risco 4 (alto risco individual e coletivo). Um agente patognico que causa geralmente
uma doena grave no homem ou no animal e que se pode transmitir facilmente de uma pessoa
para outra, direta ou indiretamente. Nem sempre esto disponveis um tratamento eficaz ou
medidas de preveno. Exemplos: vrus Ebola, vrus Lassa e vrus Marburg.
Biossegurana
Biosseguridade
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UTILIZAO
Thermus aquaticus
Isolada em uma poa do parque nacional de Yellowstone (Estados Unidos), esta bactria
produz uma enzima que copia o DNA a uma temperatura alta. Esta enzima permite
obter milhes de cpias de um fragmento de DNA em um processo automatizado que
revolucionou a Biotecnologia, chamado PCR (Polymerase Chain Reaction ou Reao em
cadeia da polimerase).
Bactrias metanognicas
ALGAS
UTILIZAO
Spirulina
O seu alto teor proteico, que corresponde a 60% do peso seco, lhe confere um elevado
valor nutritivo; as protenas representam aproximadamente 2% do peso seco da batata
e 6-10% do trigo. Quando da chegada dos espanhis, os astecas j preparavam umas
bolachas (tecuitlatl) com a Spirulina coletada no lago Texcoco. Na frica, no lago Tchad,
ainda hoje ela coletada e consumida como alimento. Spirulina, assim como Chlorella,
so vendidas em tabletes como complemento nutritivo.
Dunaliella
FUNGOS
UTILIZAO
Saccharomy c es cerevisiae
Aspergillus
Algumas espcies alcanam grande importncia industrial, como A.niger, utilizada para
a produo de cido ctrico ou de enzimas (em linhagens modificadas geneticamente).
Penicillium
30
OS MICRORGANISMOS
EUBACTRIAS
UTILIZAO
Bactrias lcticas
Bacillus thuringiensis
Streptomyces
Pseudomonas
Agrobacterium tumefaciens
Bactrias butricas
Escherichia coli
31
CAPTULO 4
ENZIMAS E ANTICORPOS
AS PROTENAS
Todos os organismos esto formados por gua e molculas de diversos tipos, inorgnicas e orgnicas
(Figura 4.1). Entre estas ltimas, h um grupo de macromolculas, as protenas, que participam em
numerosas atividades, cumprindo um papel fundamental para os seres vivos (Tabela 4.1). Pertencem
a este grupo as enzimas, molculas de ao cataltica, e os anticorpos, molculas que participam na
defesa do organismo.
---------------FIGURA 4.1. A composio qumica de uma bactria
RNA (6%)
MACROMOLCULAS
Protenas (15%)
gua (70%)
Polissacardeos(2%)
EXEMPLOS
Componentes estruturais
Substncias de reserva
Ao cataltica
Outras
ENZIMAS E ANTICORPOS
AMINOCIDO 2
Grupo carboxila
Grupo carboxila
Grupo amino
Grupo amino
Cadeia lateral
Cadeia lateral
Aminocido 1
Aminocido 2
Unio peptdica
Aminocidos
Folha pregueada
(Conformao )
Hlice
(Conformao )
hlice
Folha pregueada
ESTRUTURA PRIMRIA
ESTRUTURA SECUNDRIA
ESTRUTURA TERCIRIA
ESTRUTURA QUATERNRIA
----------------
ESTRUTURA
As protenas so macromolculas formadas por 20 aminocidos diferentes, que se distinguem por ter,
unidos ao tomo de carbono, um grupo amino (bsico), um grupo carboxila (cido) e um radical
varivel (Figura 4.2 A). A presena de um carbono assimtrico resulta em duas formas moleculares (L)
e (D) que diferem por suas propriedades pticas.
Os aminocidos que compem as protenas correspondem forma (L). A reao de condensao
entre o grupo carboxila de um aminocido e o grupo amina de outro cria uma ligao peptdica (Figura
4.2 B). A unio de vrios aminocidos forma uma cadeia peptdica que se caracteriza no s pelo
nmero e tipo de aminocidos que a compem, como pela sequncia em que estes se encontram,
denominada estrutura primria.
Ao se estabelecerem ligaes entre os grupos que formam os enlaces peptdicos, a cadeia adota
uma estrutura regular ou estrutura secundria, geralmente em forma de hlice ou de folha. As
interaes entre as cadeias laterais dos aminocidos causam o dobramento da protena, resultando
uma configurao espacial que chamada de estrutura terciria. A forma final de uma protena
depender ainda da associao entre vrios polipeptdios, no que se denomina de estrutura
quaternria (Figura 4.2 C).
Quando sintetizada dentro da clula, uma protena adotar espontaneamente a configurao
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espacial que decorre de sua estrutura primria. Fatores ambientais como o pH, a concentrao salina
ou a temperatura podem causar alteraes momentneas ou definitivas na forma da molcula.
O PROTEOMA
Uma das grandes surpresas reveladas pelos estudos do genoma humano foi encontrar um nmero
baixo de genes codificadores de protenas, inferior ao esperado quando considerada a diversidade de
protenas necessrias para o funcionamento celular. Diferentes tipos de processamento no ncleo e
modificaes das protenas no citoplasma explicam como, a partir do pequeno nmero de genes
conhecido, se formam todas as protenas necessrias.
Essas observaes chamaram a ateno sobre o proteoma, definido como o conjunto de protenas
que uma clula, um tecido ou um organismo expressam em um momento dado, sob determinadas
condies. Tambm deram origem a uma nova disciplina, a protemica.
Diferente do genoma que permanece essencialmente constante no tempo e em todas as clulas do
organismo, o proteoma abrange uma infinidade de variantes proteicas, diferentes em cada clula e a
cada momento. Publicado em 2014, o primeiro rascunho do proteoma humano identificou os produtos
correspondentes a 84% dos genes codificadores de protenas, que representam 1,5% do genoma.
As aplicaes da protemica abrangem desde os estudos estruturais para elaborar modelos
tridimensionais at a identificao das protenas associadas a uma organela, descobrindo sua funo
e sua relao com outras protenas. Tambm compreendem estudos da expresso quali e quantitativa
das protenas em duas condies, uma normal e a outra alterada por stress ou doena.
Na rea de sade, as modificaes do proteoma em clulas normais e cancerosas possibilitam a
identificao de biomarcadores para diagnstico e monitoramento dos tratamentos. Em agronomia, a
protemica pode esclarecer a inter-relao patgeno-hospedeiro nas infeces microbianas ou na
resposta das plantas aos animais herbvoros. Na rea de microbiologia possibilita o controle de
qualidade nas diferentes etapas de produo de alimentos, com nfase em aspectos de biossegurana.
AS BASES DE ALGUMAS TCNICAS LABORATORIAIS
O estudo das protenas depende do objetivo a alcanar. Se este for simplesmente a obteno de uma
protena para pesquisa ou uso comercial, as etapas a seguir envolvero sua separao, purificao e
medida da concentrao e/ou quantidade obtida. As tcnicas bioqumicas utilizadas so clssicas e
dependem dos recursos disponveis. Mas se o objetivo for a determinao das estruturas primria,
secundria e terciaria dessa protena, as tcnicas so bem mais complexas.
CROMATOGRAFIA
A cromatografia permite separar as substncias de uma mistura com fins analticos e preparativos.
Est baseada na migrao diferencial das molculas de uma mistura, colocada em uma fase mvel,
sobre um suporte estacionrio ou matriz (Figura 4.3). A separao obedece a trs tipos de mecanismos:
o Troca inica. A matriz est formada por pequenas partculas carregadas que retm as molculas de
carga contrria. Como a associao depende de fatores como o pH e a fora inica da soluo, a
modificao destes fatores permite controlar a separao.
o Filtrao em gel. A matriz consiste em partculas porosas que separam as protenas em funo de
seu tamanho, como uma peneira molecular.
o Afinidade. As partculas da matriz esto unidas por ligaes covalentes a molculas (enzimas,
anticorpos) que interagem com a protena de interesse. Para liberar a protena retida na coluna,
muda-se o pH ou a concentrao salina. Desse modo, consegue-se a protena purificada.
34
ENZIMAS E ANTICORPOS
Amostra
Solvente
Matriz
Sada do solvente
Tempo
Fraes coletadas
Mistura de peptdeos
Ctodo
nodo
Cristais
Raios X
Difrao dos
Raios X
Filme
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ENZIMAS E ANTICORPOS
AS ENZIMAS
A CATLISE ENZIMTICA
As reaes qumicas que ocorrem nos seres vivos dependem da atividade cataltica de um tipo de
protenas, as enzimas. Estas molculas agem diminuindo a energia de ativao necessria de uma
reao qumica, sendo capazes de promov-las e aceler-las, sem ser alteradas ou destrudas.
A molcula de enzima reconhece um substrato especfico (S), formando com ele um complexo
molecular ou estado de transio (SE). O encaixe no stio ativo da molcula facilita a transformao do
substrato no(s) produto(s) da reao (P). A enzima recuperada no fim da reao, podendo atuar
inmeras vezes (Figura 4.6). A reao pode ser representada como a seguir:
S+E
SE
P+E
A primeira caracterstica das enzimas a especificidade; uma enzima como a lactase, que opera sobre
a lactose, no agir sobre a sacarose; duas enzimas que hidrolisem o amido podero faz-lo cortando
a molcula de maneira diferente, como a -amilase e a -amilase. A segunda que, em funo de sua
origem biolgica, as enzimas so biodegradveis e agem em condies brandas de temperatura e pH.
A ao enzimtica depende do pH, da temperatura, da presena de cofatores inorgnicos (zinco,
ferro, cobre) e/ou orgnicos (coenzimas, muitas das quais so vitaminas). Os metais pesados alteram
a estrutura molecular da enzima de maneira irreversvel, impedindo sua ao cataltica (desnaturao).
Uma inibio da atividade enzimtica ocorre quando molculas muito parecidas com o substrato
competem com este para ocupar o stio ativo da enzima (inibio competitiva), ou quando outras
molculas se ligam a determinadas partes da enzima, alterando a estrutura espacial e dificultando o
encaixe com o substrato (inibio no competitiva).
OS DIVERSOS TIPOS DE ENZIMAS
Uma forma de classificar as enzimas pelo tipo de reao que catalisam, acrescentando o sufixo ase
ao nome do substrato que transformado: protease, lactase, amilase, lipase, celulase. Tambm se
pode adicionar ase ao nome da reao catalisada: hidrolase, oxirredutase. Quando combinadas as
duas regras anteriores, mencionam-se o nome do substrato e da reao catalisada adicionando ase
como, por exemplo, em DNA-polimerase. Porm, algumas enzimas, como a renina ou a trombina,
conservam seus nomes tradicionais (Tabela 4.2).
IMPORTNCIA ECONMICA DAS ENZIMAS
As enzimas apresentam numerosas vantagens quando utilizadas como agentes biolgicos em
processos tecnolgicos: especificidade, operao em condies facilmente controlveis e
biodegradabilidade. De um modo geral, os tratamentos enzimticos diminuem a carga poluidora dos
efluentes industriais.
O mercado se distribui fundamentalmente entre as proteases (59%), as carboidrases (28%) e as
lipases (3%), trs grandes conjuntos de enzimas que so utilizadas por diversas indstrias; os 10%
restantes do mercado correspondem s enzimas analticas e farmacuticas (Tabela 4.3).
Nos sabes lava-roupas, as enzimas prometem ao consumidor roupas limpas e com aparncia de
novas. Um exrcito constitudo por proteases, amilases e lipases digere as manchas difceis (sangue,
leite, molho de tomate, capim, chocolate, batom etc.), enquanto que as celulases removem as
microfibrilas de celulose das roupas.
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No sendo mais necessrio esfregar as manchas, a limpeza se realiza com pouco esforo e sem
desgaste do tecido; como estas molculas trabalham a temperaturas baixas, o consumo de energia
menor. Com mais uma vantagem para o fabricante: as enzimas no representam mais que uma frao
muito pequena do sabo (0,4-0,8%), correspondente a 1% do seu custo. Em 1988, a empresa
Novozymes introduziu no mercado de detergentes a primeira enzima degradadora de lipdios
(Lipolase), obtida por engenharia gentica.
As enzimas so empregadas tambm no acabamento de roupas. Para conseguir o aspecto usado,
os jeans eram lavados com pedras (stone washed), um processo que tinha o inconveniente de causar
a abraso da maquinaria e o desgaste do tecido. Nos ltimos anos, as pedras foram substitudas por
celulases, com resultados satisfatrios.
Os curtumes, em vez de excrementos de cachorro ou de pombo, se valem hoje de enzimas
pancreticas para amaciar e desengordurar as peles.
Na indstria de alimentos e bebidas, as enzimas participam na produo de adoantes, de po,
biscoitos e bolachas e de queijos. Na extrao de sucos de frutas, as pectinases aumentam
substancialmente o rendimento do processo, ao liberar o suco retido na pectina das paredes celulares
vegetais. Tambm facilitam a clarificao de vinhos e cervejas.
---------------FIGURA 4.6. O mecanismo da atividade enzimtica
A. O modelo chave-fechadura
Substrato
Produtos
Enzima
Complexo enzima-substrato
Enzima
Reagente
Reao
com enzima
Energia de ativao
(sem a enzima)
Energia de ativao
(com a enzima)
Produtos
Nvel final de energia
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ENZIMAS E ANTICORPOS
EXEMPLOS
Oxirredutases
Desidrogenases, oxidases.
Transferases
Transaminases, fosforilases.
Hidrolases
Liases
Isomerases
Isomerases, mutases.
Ligases
Sintetases.
APLICAES
Indstria de alimentos e bebidas (clarificao de vinhos e sucos de frutas, substituio da
maltagem pelo tratamento do amido na elaborao de cervejas, fabricao de po, biscoitos e
bolachas, produo de adoantes, fabricao de laticnios, suplementao de raes animais).
Produtos de limpeza (detergentes e lava-roupas para a remoo de manchas difceis, produtos
para limpar dentaduras e lentes de contato).
Indstria txtil (desengomado de tecidos, acabamento de jeans).
ENZIMAS
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OS ANTICORPOS
Assim como os animais vertebrados, os invertebrados e as plantas devem se proteger do ataque de
parasitas (vrus e bactrias) e da proliferao de clulas estranhas ou aberrantes. Tambm devem
reparar rgos e tecidos de modo a conservar sua integridade. Estudos recentes indicariam que todos
os seres vivos apresentam algum tipo de resposta imune inata e adquirida.
Dentro da estratgia de defesa de um vertebrado, os anticorpos so protenas fundamentais no
reconhecimento do eu e na eliminao do no eu (antgeno). Uma parte importante da resposta
imune envolve a produo de anticorpos que reconhecem o antgeno, desencadeando os mecanismos
de destruio adequados.
A REAO ANTGENO- ANTICORPO
Os anticorpos so protenas globulares (PM 150.000 - 200.000) que contm um nmero pequeno de
grupos carboidrato presentes no soro e em outros fluidos dos vertebrados. Sua produo induzida
quando o sistema linfoide do indivduo entra em contato com um antgeno (Ig = imunoglobulinas).
Existem diferentes tipos de imunoglobulinas que cumprem funes diferentes no organismo, mas,
devido a sua importncia como agentes biolgicos de importncia para as biotecnologias, neste texto
nos referiremos aos anticorpos contidos na frao proteica do soro sanguneo caracterizada por
eletroforese como -globulina.
A molcula de IgG formada por duas cadeias polipeptdicas leves e duas pesadas em forma de Y,
ao qual se associa um pequeno nmero de grupos carboidrato. Uma parte da molcula constante;
as regies variveis localizadas nas extremidades dos braos do Y respondem pelo reconhecimento do
antgeno (Figura 4.7).
Em condies experimentais de laboratrio, essa reao antgeno-anticorpo ocorre quando os
reagentes se encontram em meio lquido e nas concentraes adequadas, sendo visualizada como uma
precipitao, se os antgenos estiverem dissolvidos em um meio lquido ou em um gel (poliacrilamida)
ou uma aglutinao, se os antgenos estiverem localizados sobre partculas (hemcias ou bactrias).
A unio antgeno-anticorpo ocorre quando um anticorpo encontra no antgeno uma forma
complementar, geralmente parte de uma molcula livre ou ancorada na membrana celular. Um
antgeno pode ter vrias destas formas (eptopos ou determinantes antignicos) e ser reconhecido por
anticorpos diferentes (Figura 4.8).
---------------FIGURA 4.7. A estrutura da molcula de anticorpo (IgG)
Cadeia leve
Cadeia pesada
Regio constante
Regio varivel
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ENZIMAS E ANTICORPOS
Antgeno 1
Antgeno 2
Anticorpos
Antgeno 3
Anticorpos
Antgeno 4
Anticorpos
Anticorpos
Antgeno
Linfcitos B
de diferente especificidade
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Injeo de uma
mistura de molculas
Linfcitos B
Clulas de mieloma
Hibridomas
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Cada hibridoma
origina um clone
ENZIMAS E ANTICORPOS
Antgeno
Antgeno
Anticorpo
especfico
do antgeno
Antgeno
Anticorpo especfico
do antgeno, associado enzima
Formao de um produto
colorido
Antgeno
Anticorpo
especfico
do antgeno
Formao de um produto
colorido
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Se o antgeno utilizado possuir vrios eptopos, no soro extrado se encontrar uma mistura de
anticorpos, chamados policlonais, resultantes da ativao de vrios clones de linfcitos B, cada um
dos quais reconhece um dos eptopos do antgeno. Observe-se que, alm dos anticorpos especficos,
o soro tambm ter anticorpos contra eventuais impurezas do antgeno, e anticorpos contra outros
antgenos aos que o animal esteve exposto anteriormente. Em consequncia, a purificao de um soro
ser um processo longo e complexo a ser repetido a cada extrao de sangue do animal. Contudo,
reagentes de laboratrio deste tipo foram utilizados normalmente at a dcada de 1980.
No possvel cultivar separadamente os linfcitos porque sobrevivem pouco tempo in vitro. A
obteno de clones que sintetizem anticorpos especficos contra um nico eptopo (monoclonais) s
se tornou possvel com o desenvolvimento da tecnologia de hibridomas (G. Kohler e C. Milstein, 1975).
Um hibridoma resulta da fuso entre um linfcito B e uma clula cancerosa de mieloma. Reunindo
as propriedades de ambas as clulas, cada hibridoma capaz de sintetizar um nico tipo de anticorpo
(monoclonal) e de se multiplicar indefinidamente no laboratrio, seja em cultivo de tecidos, seja na
cavidade do peritoneu de um animal hospedeiro (Figura 4.10).
A UTILIZAO DOS ANTICORPOS
Os anticorpos monoclonais encontraram imediatamente aplicaes, substituindo praticamente os
anticorpos policlonais, tanto na purificao de biomolculas e clulas como nos testes de diagnstico
clnico ou ambiental ou no controle de qualidade dos alimentos.
Anticorpos especficos fixados nas partculas de uma coluna de afinidade permitem separar
molculas de uma mistura que circule por ela. Outra utilizao extremamente engenhosa est na
separao de populaes celulares em um aparelho denominado cell sorter. As clulas so marcadas
com anticorpos ligados a uma molcula fluorescente; ao passar atravs de raios laser, adquirem cargas
eltricas, sendo separadas mediante uma placa defletora do equipamento.
A visualizao da reao entre o antgeno e o anticorpo se v facilitada quando o anticorpo recebe
alguma marcao direta, fluorescente ou radiativa, ou indireta, por associao com uma enzima que,
em presena do substrato correspondente, forma um produto colorido. No Western blotting, por
exemplo, um anticorpo marcado reconhece a presena de uma protena determinada em uma
amostra, aps eletroforese e transferncia a uma membrana de nitrocelulose.
Associados a uma molcula radiativa, os anticorpos so utilizados na dosagem de substncias
presentes nos fluidos corporais, sendo quantificada a radioatividade por exposio de uma placa
sensvel. Em cortes histolgicos, o antgeno localizado pelos anticorpos acoplados a uma molcula
fluorescente que possa ser identificada microscopicamente (Figura 4.11).
A obteno de anticorpos contra a frao constante da molcula de anticorpos humanos
representa um avano considervel na produo de reagentes para o diagnstico clnico. Nos ensaios
imunoenzimticos como o teste ELISA (do ingls, Enzyme-linked Immunosorbent Assay), que detecta
anticorpos especficos no soro humano e tem numerosas aplicaes em diagnstico, utilizam-se os
anticorpos acoplados a uma enzima que reage com o seu substrato, formando um produto colorido
(Figura 4.11).
A utilizao de anticorpos monoclonais com fins teraputicos demorou muito mais que o esperado.
Sendo produzidos por clulas de camundongo ou de rato, eles so reconhecidos como estranhos
quando injetados no homem, formando-se complexos imunes que lesionam gravemente os rins.
A fim de evitar essas reaes, comearam a ser elaborados anticorpos monoclonais quimricos (33%
de protena animal) e humanizados (10% de protena animal). Estes conservam parte das sequncias
animais, especialmente nas partes que reconhecem o antgeno, sendo o restante da molcula
substitudo por sequncias humanas. A obteno de anticorpos monoclonais humanos mediante
tcnicas de engenharia gentica abre novos caminhos para o diagnstico e o tratamento de doenas
(Tabela 4.4).
44
ENZIMAS E ANTICORPOS
APLICAES
Purificao de molculas.
Reagentes de laboratrio.
Anticorpos
45
CAPTULO 5
OS CIDOS NUCLEICOS
OS CIDOS NUCLEICOS
Embora descobertos em 1869, por F. Miescher, no pus das bandagens de ferimentos, o papel dos
cidos nucleicos (DNA e RNA) na hereditariedade e no controle da atividade celular comeou a ser
esclarecido apenas em meados do sculo XX.
O cido desoxirribonucleico (DNA) carrega em sua estrutura as instrues necessrias para a
construo de um organismo, direcionando o desenvolvimento de suas caractersticas bioqumicas,
fisiolgicas, anatmicas e, inclusive, algumas das comportamentais. Nos cromossomos o DNA se
encontra associado a diversas protenas de importante ao regulatria. O cido ribonucleico (RNA)
pode ser encontrado tanto no ncleo como no citoplasma.
As clulas procariticas contm um cromossomo circular de DNA e uma ou duas molculas
adicionais de DNA extracromossmico, denominadas plasmdeos. Nas clulas eucariticas, os
cromossomos esto formados por molculas lineares de DNA. O DNA est localizado principalmente
dentro do ncleo celular, mas h tambm DNA em algumas organelas, como os cloroplastos e as
mitocndrias.
Do ponto de vista qumico, os cidos nucleicos (cido ribonucleico e desoxirribonucleico) so
macromolculas formadas por unidades chamadas nucleotdeos, unidos por ligaes qumicas
covalentes (Figura 5.1). Um nucleotdeo resulta da associao de trs tipos de elementos: uma
molcula de cido fosfrico, um acar de cinco carbonos (ribose ou desoxirribose) e uma base cclica
nitrogenada: adenina, citosina, guanina, timina ou uracila. Da unio dos nucleotdeos entre as
extremidades 5' e 3', formam-se as cadeias de polinucleotdeos.
A DUPLA HLICE
J na dcada de 1940, vrios trabalhos indicavam que o material responsvel pela hereditariedade era
o DNA, mas no se entendia como at 1953, quando J. D. Watson e F. Crick formularam um modelo
da estrutura tridimensional do DNA que, segundo suas prprias palavras, apresentava considervel
interesse biolgico.
BIOTECNOLOGIA: ENSINO E DIVULGAO (http://bteduc.com)
OS CIDOS NUCLEICOS
No modelo de Watson e Crick, duas cadeias de nucleotdeos formam uma figura parecida com uma
escada de corda torcida, a dupla hlice. Nessa escada, o cido fosfrico e o acar so as partes
verticais (corrimos) e as bases nitrogenadas so os degraus (Figura 5.1). As cadeias so antiparalelas,
isto , se uma corre na direo 5' 3' a outra corre na direo 3' 5. Ambas as cadeias esto unidas
entre si por pontes de hidrognio entre as bases, sendo que as ligaes ocorrem sempre entre adenina
e timina (2 pontes) e entre citosina e guanina (3 pontes).
De acordo com o modelo, quando em um filamento a sequncia de bases AGTACG, no outro
filamento ela ser TCATGC. Como as sequncias so complementares, cada filamento pode servir
como molde para a sntese de uma nova molcula. E, no momento da diviso celular, cada clula-filha
poder receber uma molcula semelhante da clula-me (Figura 5.2).
O CDIGO GENTICO
O funcionamento de uma clula depende, fundamentalmente, de dois tipos de molculas: os cidos
nucleicos e as protenas. Ambos esto relacionados, porque segmentos de DNA (genes) codificam a
estrutura primria de peptdeo. O cdigo simples: a cada trinca de bases corresponde um
aminocido.
---------------FIGURA 5.1. Composio qumica dos cidos nucleicos
Observe-se a posio dos grupos 3 e 5 no acar
O FOSFATO
cido fosfrico
on fosfato
UM DESOXIRRIBONUCLEOTD
O ACAR
Tambm representado como
na ribose
na desoxirribose
AS BASES
Purinas: adenina (A), guanina (G)
Ao carbono 1 da pentose
Ao carbono 1 da pentose
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Nucleotdeo
Nucleotdeo
Extremidade 5
A DUPLICAO DO DNA
PRIMEIRA BASE
URACILA (U)
CITOSINA (C)
ADENINA (A)
GUANINA (G)
48
URACILA (U)
Phe
Phe
Leu
Leu
Leu
Leu
Leu
Leu
Ile
Ile
Ile
Met
Val
Val
Val
Val
SEGUNDA BASE
CITOSINA (C)
ADENINA (A)
Ser
Tyr
Ser
Tyr
Ser
Stop
Ser
Stop
Pro
His
Pro
His
Pro
Gln
Pro
Gln
Thr
Asn
Thr
Asn
Thr
Lys
Thr
Lys
Ala
Asp
Ala
Asp
Ala
Glu
Ala
Glu
GUANINA (G)
Cys
Cys
Stop
Trp
Arg
Arg
Arg
Arg
Ser
Ser
Arg
Arg
Gly
Gly
Gly
Gly
TERCEIRA BASE
(U)
(C)
(A)
(G)
(U)
(C)
(A)
(G)
(U)
(C)
(A)
(G)
(U)
(C)
(A)
(G)
OS CIDOS NUCLEICOS
A tabela 5.1 mostra quais aminocidos correspondem s diferentes trincas de bases ou cdons de
mRNA. Alguns so codificados por uma nica trinca, como o triptfano (UGG) ou a metionina (AUG);
outros admitem vrios cdons que geram sinonmia como, por exemplo, a prolina (CCU, CCC, CCA,
CCG). O incio da sequncia sinalizado por AUG, o cdon correspondente a metionina, sendo este
aminocido removido posteriormente; o fim da sequncia sinalizado por UAA, UAG ou UGA, trs
cdons que significam stop.
Mudanas na sequncia de bases do DNA podem ter como consequncia a substituio de um
aminocido por outro. No exemplo da figura 5.3, se GUG for substitudo por CGU, no peptdeo
correspondente a valina ser substituda por leucina. Mas, em funo da sinonmia do cdigo, se a
trinca GUG for substituda por GUA ou GUC, o aminocido codificado continuar sendo a valina. Perdas
ou adies de uma base modificam o resto da sequncia do peptdeo.
A frequncia com que ocorrem estas pequenas mudanas aumenta em presena de alguns agentes
qumicos e fsicos como a luz ultravioleta e os raios X.
A EXPRESSO GNICA
O FLUXO DA INFORMAO GENTICA
A informao codificada no DNA transcrita em uma molcula mensageira que a leva at os
ribossomos onde, aps a traduo da linguagem dos cidos nucleicos linguagem das protenas, ser
montado o peptdeo correspondente. Deste modo, se estabelece na clula um fluxo da informao
gentica que segue em uma direo nica: do DNA ao RNA, do RNA ao peptdeo (Figura 5.3).
---------------FIGURA 5.3. O fluxo da informao gentica
DNA
Filamento codificador
Filamento molde
TRANSCRIO E PROCESSAMENTO
r RNA
mRNA
tRNA + aminocidos
Ribossomo
TRADUO
Transporta os aminocidos
e os coloca no lugar adequado
Peptdeo
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Uma exceo a esta regra a dos retrovrus, cujo material hereditrio RNA e que contam com uma
enzima (transcriptase reversa) que lhes permite transcrever a informao no sentido RNADNA.
Na sntese de protenas intervm, basicamente, um RNA codificador (RNA mensageiro ou mRNA) e
dois RNAs no codificadores, o RNA ribossmico (rRNA) e o RNA de transferncia (tRNA).
As clulas procariticas e eucariticas apresentam algumas diferenas em relao s etapas da
sntese de protenas e aos mecanismos de regulao correspondentes (Figura 5.3). No entanto, em
ambos os tipos de organismos, a informao gentica codificada no DNA transcrita no mRNA e
traduzida no ribossomo com a participao dos tRNAs. O produto final um peptdeo.
CLULAS PROCARITICAS
Uma bactria pode contar com aproximadamente 2.500 genes; nem todos funcionando
simultaneamente. Se houver lactose no meio (e faltar glicose), as bactrias sintetizaro aquelas
enzimas que possibilitem sua utilizao. E se faltar o aminocido triptfano no meio, produziro os
vrios tipos de enzimas necessrias para sintetiz-lo.
---------------FIGURA 5.4. A organizao e regulao dos genes nas clulas procariticas
O funcionamento do peron depende da funo exercida pelos genes (degradao ou sntese). Por isso, a presena de lactose
induz a transcrio do peron lac, sendo sintetizadas vrias enzimas necessrias para degrad-la; em ausncia de lactose, o
peron deixa de funcionar. J no peron Trp, a presena de triptfano reprime a transcrio das enzimas necessrias para
sintetizar esse aminocido.
peron
Gene
regulador
Gene
promotor
Gene
operador
Genes estruturais
Gene 1
Gene 2
Gene 3
Sequncia transcrita
Fim da transcrio
Sequncias reguladoras
finalizadoras da transcrio
UTR
DNA
Unidade de transcrio
Inclui as sequncias iniciais e finais, os xons e os ntrons
Incio da transcrio
50
Fim da transcrio
OS CIDOS NUCLEICOS
Isso se v facilitado pela agrupao dos genes correspondentes em baterias (perons), que so ligadas
ou desligadas em conjunto (Figura 5.4), permitindo que a clula se adapte rapidamente e com
economia de recursos s condies ambientais.
O processo de ligar e desligar envolve trs regies anteriores sequncia codificadora: o
promotor, o operador e o regulador. Para iniciar a sntese do mensageiro, a enzima RNA-polimerase
deve encaixar no promotor, de onde comear a se deslocar ao longo do gene. O deslocamento
depende de protenas sintetizadas pelo gene regulador, que agem no operador de modo a abrir ou
bloquear a passagem. Este sistema regula a induo ou represso da transcrio da sequncia
codificadora.
Uma bactria pode contar com aproximadamente 2.500 genes; nem todos funcionando
simultaneamente. Se houver lactose no meio (e faltar glicose), as bactrias sintetizaro aquelas
enzimas que possibilitem sua utilizao. E se faltar o aminocido triptfano no meio, produziro os
vrios tipos de enzimas necessrias para sintetiz-lo. Isto se v facilitado pela agrupao dos genes
correspondentes em baterias (perons), que so ligadas ou desligadas em conjunto (Figura 5.4),
permitindo que a clula se adapte rapidamente e com economia de recursos s condies ambientais.
Na clula procaritica, alm dos genes funcionarem em bloco, a sntese proteica comea quando o
mRNA est ainda sendo transcrito, de maneira que a transcrio e a traduo so simultneas. Uma
sequncia especfica que no traduzida indica o stio de unio ao ribossomo.
CLULAS EUCARITICAS
As bactrias no so as nicas que ligam e desligam os seus genes, mas, salvo em nematdeos, no
foram achados perons nas clulas eucariticas; os genes responsveis por uma sequncia de reaes
metablicas se encontram dispersos em um ou em vrios cromossomos.
O controle da transcrio comea na compactao do cromossomo em redor das histonas e na
metilao de algumas bases, podendo dificultar o acesso da maquinaria de transcrio ao DNA. Esta
inclui fatores de ativao, fatores de transcrio e protenas reguladoras, algumas das quais dependem
de outras sequncias, estimuladoras e inibidoras, distantes do gene em at vrios milhares de bases
(Figura 5.5). Fatores externos influenciam a expresso gnica nas clulas somticas. No entanto,
estudos recentes indicam que esses efeitos epigenticos podem gerar alteraes nos gametas, sendo
transmitidos s seguintes geraes.
A TRANSCRIO
Ao reconhecer a presena dos fatores e protenas reguladoras na regio anterior ao gene, a RNApolimerase encaixa-se nas sequncias promotoras da transcrio. Associada a outros fatores
adicionais, a enzima se desloca abrindo a dupla hlice e transcrevendo a sequncia codificadora de um
ou outro filamento no RNA. A enzima avana na direo 5- 3, sendo que vrias molculas de RNApolimerase podem estar transcrevendo o mesmo gene simultaneamente em algo parecido com uma
fila indiana. Quando a RNA-polimerase encontra uma sequncia finalizadora, a sntese acaba e a
molcula de RNA-polimerase ser liberada.
Regies denominadas UTR (do ingls untranslated regions), portadoras de sequncias sinalizadoras
que no sero traduzidas, se localizam a montante e a jusante da unidade de transcrio. As sequncias
reguladoras levam, alm do stio de unio ao ribossomo, outras que podem determinar quando, por
quanto tempo e em que clulas o gene ser transcrito.
O PROCESSAMENTO DO RNA TRANSCRITO
Nos organismos eucariticos, a estrutura do gene fragmentada (Figura 5.5). A sequncia gnica
transcrita por inteiro no RNA e, posteriormente, um mecanismo de corte e reunio ir eliminar
algumas das sequncias intercalares. Estas permanecero no ncleo (ntrons) enquanto as restantes
51
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(xons) formaro o RNA mensageiro que sair do ncleo na direo do citoplasma. O nmero e o
tamanho das sequncias intercalares variam em diferentes genes.
As consequncias biolgicas deste mecanismo so importantes. Basta um nmero pequeno de genes
para codificar numerosas protenas que sero sintetizadas utilizando as vias alternativas de corte e
reunio. Tambm permite que um nico gene se expresse de maneira diferente em diversos
tecidos. O corte e reunio dos fragmentos no a nica modificao do RNA transcrito; este recebe
um revestimento inicial ou cap (7-metilguanosina) que o dirigir ao ribossomo, e uma cauda de
poli(A) que lhe dar estabilidade na sua viagem at a maquinaria de traduo.
A TRADUO E O DESTINO DAS PROTENAS
A sntese proteica se inicia depois do mRNA atravessar a membrana nuclear e migrar para o citoplasma.
Assim como a transcrio, a traduo envolve a participao de numerosas enzimas e protenas
reguladoras.
Algumas molculas de mRNA levam sequncias sinalizadoras que as dirigem at os ribossomos
associados ao retculo endoplasmtico, sendo as protenas sintetizadas secretadas fora da clula.
Outras molculas de mRNA sero traduzidas nos ribossomos livres no citosol, sendo as protenas
resultantes utilizadas no mesmo lugar ou nas organelas celulares.
---------------FIGURA 5.6. As etapas da sntese de protenas (Recapitulao)
A. Clula eucaritica
B. Clula procaritica
Citoplasma
DNA
Ncleo
ntrons
xons
mRNA
DNA
Gene
Protenas
TRANSCRIO
hnRNA
PROCESSAMENTO
Na clula eucaritica, o
processamento
envolve
a
adio de um revestimento
inicial e de uma cauda de poli-A,
alm dos mecanismos de corte
e reunio
mRNA
mRNA
TRADUO
Protena
52
OS CIDOS NUCLEICOS
O mRNA reconhece o ribossomo mediante uma sequncia especfica, e a associao entre ambos d
incio sntese peptdica. Cada tRNA carrega o aminocido correspondente at o ribossomo, onde a
complementariedade entre seu anticdon e um dos cdons do mRNA garante que este coloque o
aminocido no lugar adequado na sequncia.
Existem vrios mecanismos de regulao. Um deles envolve a ao de protenas associadas ao
complexo ribossmico, outro determina variaes na vida mdia do mRNA e a traduo do mRNA por
vrios ribossomos ao mesmo tempo.
O peptdeo sintetizado passar por diversas modificaes e associaes, at se constituir no
produto final ativo, uma protena com uma estrutura quaternria determinada. Uma viso geral
comparativa da sntese proteica em clulas eucariticas e procariticas (Figura 5.6).
O COMPLEXO MUNDO DOS RNAs
A DIVERSIDADE EXISTENTE
Na sntese proteica, o mRNA carrega uma parcela de informao gentica do DNA at os ribossomos,
estruturas celulares formadas por rRNA e protenas onde ocorre a sntese proteica. Os aminocidos
so carregados por um dos 61 tipos de tRNA, cada um dos quais capaz de reconhecer
simultaneamente um aminocido e um cdon do mRNA. Tanto o rRNA como os tRNA so transcritos
a partir de genes no codificadores de protenas.
A participao dos RNAs na regulao da expresso gnica bem conhecida. As ribozimas, por
exemplo, so RNAs com capacidade cataltica que desempenham funes na replicao e no
processamento do mRNA, sem necessidade de nenhum componente proteico. A existncia deste tipo
de molculas um argumento a favor da existncia de um mundo de RNA prvio apario do DNA e
das protenas. Outras molculas de RNA, os riboswitches, agem como sensores afetando a expresso
gnica, em resposta a fatores ambientais ou metablicos.
A atividade regulatria do RNA possvel devido sua estrutura molecular, que permite o
pareamento com uma molcula de sequncia complementar. E tambm a suas propriedades de se
associar a protenas e de desenvolver uma atividade cataltica.
Nos ltimos anos comeou a ser desvendada a existncia de pequenas molculas de RNA no
codificadoras (sRNA, do ingls small RNA), que regulam as atividades celulares. Em procariontes, os
sRNAs determinam modificaes metablicas e esto envolvidos na defesa contra os vrus.
Em eucariontes, a variedade muito ampla: os pequenos RNAs nucleares (snRNA) associados a
protenas participam no mecanismo de corte e reunio e na remoo dos ntrons; os pequenos RNAs
nucleolares (snoRNA) processam o RNA ribossmico no nuclolo. Originados a partir de diferentes
molculas precursoras, os microRNAs (miRNA) participam na represso do mecanismo de traduo.
Novos tipos de RNA, de sequncia mais longa (lncRNA, do ingls, long non coding DNA) cumprem
funes regulatrias, como a inativao do cromossomo X. Menos clara por enquanto a funo dos
RNAs transcritos antisense e dos transcritos a partir de pseudogenes, que sempre foram considerados
no funcionais.
INTERFERNCIA E SILENCIAMENTO GNICO
O fenmeno de interferncia foi descoberto quando, com o objetivo de intensificar a produo de
pigmentos em petnias, a insero de um gene extra originou flores brancas em vez das flores O
fenmeno de interferncia foi descoberto quando, com o objetivo de intensificar a produo de
pigmentos em petnias, a insero de um gene extra originou flores brancas em vez das flores
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As duas molculas so
complementares
(6 bases, mnimo)
54
OS CIDOS NUCLEICOS
55
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o Independentemente de nossa origem tnica, compartilhamos com os outros seres humanos 99,9%
da sequncia gnica.
o As diferenas entre os seres humanos se devem a variaes de uma base em 3.000.000 de pontos
dentro e fora dos genes. Estas variaes so denominadas polimorfismos de um nucleotdeo nico
ou SNPs (do ingls, single nucleotide polymorphisms). Os SNPs podem dar informaes sobre a base
gentica da susceptibilidade a uma srie de doenas ou servir como marcadores das mesmas
(doena cardiovascular, diabetes, artrite e cnceres).
o Em vrios genes foram encontradas sequncias associadas a doenas (cncer de mama, cegueira,
surdez, doenas musculares).
Vrios pases de Amrica Latina (Argentina, Brasil, Chile e Mxico) desenvolveram ou participam em
projetos de genmica. De um modo geral, esses projetos envolvem parcerias entre instituies
pblicas e privadas, sendo beneficiados por acordos internacionais com pases desenvolvidos (Estados
Unidos, Frana, Alemanha) ou por redes de cooperao inter-regionais (Brasil, Argentina, Chile,
Uruguai e Paraguai). Um dos primeiros xitos foi o sequenciamento por pesquisadores brasileiros da
bactria Xylella fastidiosa, causadora da praga do amarelinho das videiras (2000).
OS AVANOS POSTERIORES
Nos ltimos anos, os custos e o tempo necessrios para sequenciar um genoma diminuram
extraordinariamente. Atualmente, muito do trabalho feito por robs e computadores est altamente
automatizado, e a informao est armazenada em grandes bancos de dados, acessveis pela Internet.
O desenvolvimento da Bioinformtica, um conjunto de novas tecnologias que utiliza mtodos
computacionais e matemticos para analisar a informao, tem sido fundamental para o progresso
dos estudos sobre os genomas. Muitos dos estudos atuais no so mais feitos in vivo nem in vitro, mas
in silico.
Ao Projeto Genoma sucederam outros projetos, alguns deles concludos e outros em andamento,
desenvolvidos por redes de cooperao internacional. O projeto HapMap (do ingls, Map of Human
Genetic Variation) publicou um catlogo das variaes genticas que ocorrem nos seres humanos.
O projeto ENCODE confirmou ser pouco mais de 20.000 o nmero de genes codificadores de
protenas e descobriu que 80% do DNA restante cumpre alguma funo reguladora, de modo que no
pode ser considerado lixo.
O Projeto Epigenoma Humano ir identificar, catalogar e interpretar os padres de metilao dos
genes humanos em cada tecido. Como estes padres mudam em resposta a fatores exgenos, o
epigenoma pode ser um elo unindo genes, doena e ambiente.
O Projeto Genoma do Cncer fornece informao sobre a doena e especialmente sobre o cncer
de pulmo e o melanoma maligno.
O Projeto dos 1000 Genomas visa sequenciar o conjunto de um nmero amplo de pessoas. O
Projeto UK10K do Wellcome Trust, lanado em 2010, visa comparar os genomas de 4.000 pessoas
saudveis com os de 6.000 pessoas afetadas por uma doena de presumida origem gentica.
A Genmica surgiu como uma nova disciplina que tenta responder a algumas questes
fundamentais: Onde esto os genes? O que faz cada gene? Como diferem os organismos em relao a
seus genes? Cada uma dessas perguntas criou especialidades como a Genmica estrutural, a Genmica
funcional ou a Genmica comparativa.
No rastro do Genoma, outras perguntas comeam a ser formuladas e surgem outras reas de
investigao:
o A transcriptmica, concernente ao RNA transcrito ou transcriptoma, isto , aos padres de
expresso gnica.
56
OS CIDOS NUCLEICOS
APLICAES
Identificao de microrganismos patognicos.
Controle da qualidade dos alimentos.
Medicina molecular (diagnsticos, tratamentos personalizados, terapias
gnicas).
DNA, RNA e
genmica
57
CAPTULO 6
BIOPROCESSOS
Por motivos histricos, os biotecnlogos ainda utilizam o termo processos fermentativos para qualquer
processo microbiano operado em grande escala, independentemente de ser ou no uma fermentao.
O recipiente onde ocorre o processo chamado de biorreator ou fermentador (Figura 6.1). Clulas
animais e vegetais tambm podem ser cultivadas em escala, como ser visto no prximo captulo sobre
cultura de tecidos.
OS MICRORGANISMOS INDUSTRIAIS
NOES SOBRE O METABOLISMO PRIMRIO E SECUNDRIO
Denominamos metabolismo o conjunto de reaes qumicas de degradao (catabolismo) e de sntese
(anabolismo) de substncias em um organismo. As primeiras liberam energia, as outras a consomem.
As clulas e a maioria dos microrganismos retiram dos compostos orgnicos a energia que
precisam, para a manuteno de sua estrutura e para suas atividades. Nas vias catablicas, a
degradao de compostos orgnicos em molculas menores libera energia; uma parte desta ser
acumulada sob a forma de ATP (trifosfato de adenosina), e a restante dissipada como calor.
OS BIOPROCESSOS
CH3 CH2OH
Etanol
+ CO2
+ 2 ATP
59
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FASE DE LABORATRIO
Preparao do inculo
FASE INDUSTRIAL
Preparao do meio
Esterilizao
Ar
Controles (temperatura, pH)
Esterilizao
Tratamento final
Subprodutos
Produtos
Resduos
Glicose
GLICLISE (2 ATP)
Citoplasma
cido pirvico
Sem O2
FERMENTAO
Com O2
RESPIRAO
Ciclo de Krebs e cadeia respiratria
60
Citoplasma (procariontes)
Mitocndria (eucariontes)
Substncia orgnica
(etanol, cido lctico)
OS BIOPROCESSOS
Alm das vias metablicas primrias, que so comuns a todos os microrganismos, existem outras vias
metablicas secundrias especficas. A ativao de umas e/ou de outras depende do microrganismo e
das condies em que ele se desenvolve em seu ambiente natural ou em que ir ser cultivado.
Os metablitos primrios esto relacionados com o crescimento dos microrganismos e a
transformao de nutrientes em biomassa; sendo os principais exemplos o etanol, o cido lctico ou
os aminocidos. Mesmo no sendo essenciais, os metablitos secundrios permitem a sobrevivncia
em ambientes extremamente competitivos e com escassos nutrientes. So metablitos secundrios
os antibiticos, os alcaloides, os pigmentos, algumas enzimas e toxinas.
Com vistas ao desenvolvimento de um bioprocesso, a escolha do microrganismo ter que ser feita
em funo de suas vias metablicas; e as condies de cultivo dependero do objetivo da fermentao,
um metablito primrio ou um metablito secundrio (Figura 6.3B).
--------------FIGURA 6.3. As diversas fases do crescimento de uma populao microbiana e a produo de metablitos
A. As fases de crescimento de uma populao
Log do nmero
de clulas
Tempo
Fase lag
B.
Fase log
Fase estacionria
Fase de declnio
Os nutrientes do meio permitem a multiplicao celular e a formao do metablito primrio, que pode ser
utilizado pelas clulas para sintetizar o metablito secundrio (a); este pode tambm ser sintetizado diretamente
a partir de alguma substncia do meio (b).
Meio nutriente
Clulas
Metablito primrio
Metablito secundrio
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Com vistas a uma explorao comercial, os meios definidos so substitudos na indstria por matriasprimas de baixo custo como, por exemplo, soro de leite, melao de cana ou de beterraba, amido de
milho etc. Em alguns casos, a matria-prima passa por um tratamento prvio com mtodos fsicos e/ou
qumicos.
No caso de se tratar de um processo enzimtico, o meio dever levar, alm do substrato adequado,
os elementos necessrios para que a enzima possa desenvolver sua atividade cataltica (precursores,
cofatores etc.).
A OBTENO DAS LINHAGENS
De um modo geral, para que o cultivo em um fermentador resulte economicamente vivel, o
microrganismo deve ser capaz de se multiplicar rapidamente, sintetizando grande quantidade do
produto a partir de uma matria-prima barata. Existem Bancos e Colees de Cultura que vendem esse
tipo de linhagens de microrganismos como culturas puras, geneticamente estveis e aptas para o
cultivo em grande escala.
Apesar de terem sido isoladas do meio ambiente, as linhagens industriais diferem substancialmente
das linhagens originais, em virtude de uma srie de alteraes genticas (mutaes, recombinaes)
obtidas no laboratrio. Atualmente, as grandes empresas selecionam os microrganismos mais
eficientes mediante um processo de evoluo dirigida, miniaturizado em plataformas robticas (Figura
6.4).
A triagem de alta produtividade (HTS, do ingls high throughput screening) permite a seleo em
paralelo de milhares de linhagens e a realizao dos ensaios biolgicos bsicos, em menos tempo e
com menor consumo de reagentes que os mtodos tradicionais. Testes com centenas de milhares de
amostras dirias tornam-se rotineiros e acessveis, graas aos recentes avanos em mtodos
fluorescentes e sistemas robticos que colocam lquidos em quantidades nanomtricas.
Nas linhagens industriais, algumas vias metablicas, especialmente as do metabolismo secundrio,
podem ter sido alteradas, de maneira a aumentar ao mximo a sntese do produto desejado e evitar a
produo de algumas substncias desnecessrias. Em geral, por estar to selecionadas geneticamente,
tendo inclusive algumas vias metablicas anuladas ou desbalanceadas, estas linhagens sobrevivem
pouco tempo no meio ambiente. Porm, como norma geral, as linhagens industriais no devem ser
patognicas nem produzir toxinas. A produo de medicamentos ou de vacinas um caso crucial,
porque exige medidas de segurana estritas.
62
OS BIOPROCESSOS
Os microrganismos constituem um grupo biolgico muito diversificado e, ainda, pouco conhecido, por
isso existem muitas expectativas em relao prospeco de linhagens em ambientes extremos ou
pouco usuais. No se precisa desenvolver um processo novo para cada microrganismo que apresente
alguma caracterstica comercial interessante. A tendncia atual transferir os genes correspondentes,
por engenharia gentica, a algum dos microrganismos conhecidos, adaptados s condies industriais.
--------------FIGURA 6.4. A metodologia HTS para triagem e evoluo dirigida de linhagens bacterianas
106 1010 de variantes
bacterianas
Biblioteca de mutantes
Gene parental
Mutao
Transformao
Triagem
63
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C.
Controles
Injeo de ar
Umidade
Sada de ar
Motor
Vapor
Bomba
Sonda de pH
(controle)
Misturador
Sada
de gases
Sonda de temperatura
(controle)
Vapor
Entrada de ar
Sada do produto
64
OS BIOPROCESSOS
OS PROCESSOS SUBMERSOS
O desenho do biorreator deve se adequar ao objetivo do processo, respondendo eventualmente a
diversos imperativos, tais como a esterilizao do sistema, a aerao e homogeneizao do meio, o
acrscimo de nutrientes e de aditivos antiespumantes, a manuteno do pH etc.
A maioria dos processos industriais se desenvolve em cubas de vidro ou de ao. Os agentes
biolgicos submersos no meio de cultivo ocupam somente 75% da cuba porque, se for necessrio
injetar ar, formar espuma.
--------------FIGURA 6.7. Fermentaes, agentes biolgicos e biorreatores
FERMENTAES SUBMERSAS
Podem ser conduzidas por
CLULAS E ENZIMAS
Livres
Imobilizadas
Em suportes inertes
Reatores com
agitao mecnica
Entre membranas
Reatores com
agitao pneumtica
Reatores de
leito fixo
Reatores
em torre
Reatores STR
Reatores de
fibra oca
ou com
membranas planas
ou de leito
fluidizado
Coluna de bolhas
Reatores air-lift
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Os modelos de fermentadores mais utilizados com microrganismos contam com aerao e agitao
mecnica. Esta facilita a distribuio dos nutrientes, mas o calor gerado deve ser eliminado mediante
a circulao de gua fria (Figura 6.6). Se o processo exigir assepsia, esta ser conseguida mediante:
o
Bancada
Fermentador de laboratrio
1 - 10 litros
LABORATRIO
66
Fermentador piloto
50 200 500 litros
PILOTO
Fermentador industrial
5.000 50.000 200.000 litros
5 50 200 m3
INDSTRIA
OS BIOPROCESSOS
DO LABORATRIO INDSTRIA
A MUDANA DE ESCALA
Uma operao simples de laboratrio pode ser impraticvel, ou pouco econmica, quando realizada
em grande escala. No laboratrio, aps a triagem das linhagens mais eficientes ou das primeiras
experincias realizadas na bancada, o processo passa a ser estudado em um biorreator de at 10 litros
de capacidade, onde se analisam o rendimento da linhagem selecionada e as variveis fsico-qumicas
em outra escala.
A capacidade de uma cuba varia entre 1 e 10 L para um fermentador de laboratrio, chegando a
5.000 l em uma planta piloto e 100.000 l em uma planta industrial. Ao aumentar o tamanho do
equipamento, altera-se a relao superfcie/volume, de modo que as condies de operao do
fermentador na planta piloto devero ser ajustadas at se aproximar das correspondentes a um
processo comercial. Se a experincia na planta piloto for bem-sucedida, o processo poder ser
desenvolvido em um fermentador industrial (Figura 6.8).
A automatizao do monitoramento e do controle da fermentao permite que a informao
relativa aos parmetros fsicos e qumicos (pH, temperatura, oxignio, velocidade de agitao, o nvel
do meio etc.) seja recolhida on-line por sondas e sensores. Para que o processo se aproxime das
condies ideais, a informao analisada em relao a um modelo previamente estabelecido. Como
este se elabora a partir da experincia obtida com cubas menores (laboratrio, piloto), os ajustes
mudana de escala so de grande complexidade.
A CONDUO DO PROCESSO
O processo fermentativo pode ser conduzido de maneira contnua ou descontnua (batelada), sendo
que ambas as formas apresentam vantagens e inconvenientes.
Em um sistema descontnuo de produo, uma vez que o fermentador carregado com a
matria-prima e o inculo correspondentes, a fermentao prossegue at o esgotamento dos
nutrientes. Concludo o processo e extrado o produto, o fermentador esvaziado, limpo e esterilizado
antes de receber outra carga.
Apesar do tempo improdutivo entre uma batelada e a seguinte, o sistema relativamente
flexvel, j que o mesmo equipamento pode ser utilizado na fabricao de produtos diferentes. A
produo em bateladas bastante utilizada na indstria farmacutica porque o risco de contaminao
permanece relativamente baixo.
J no sistema contnuo de produo, o acrscimo de nutrientes e a retirada do produto ocorrem
simultaneamente ao longo do processo, eliminando-se quase totalmente o tempo improdutivo. Como
o risco de contaminao aumenta, o sistema se adapta a processos que no exigem assepsia, como a
produo de protena microbiana e de lcool e, obviamente, o tratamento de gua. Entre o sistema
em batelada e o sistema contnuo existe um sistema intermedirio de batelada alimentada em que,
periodicamente, parte do contedo (meio de cultivo + produto) retirada e substituda por meio
fresco.
A RECUPERAO DO PRODUTO
A recuperao do produto representa uma frao considervel do custo de um processo fermentativo.
Se o produto for secretado fora da clula, estar disperso em um volume grande de gua e ser
necessrio separ-lo por decantao ou filtrao. Mas se o produto permanecer dentro das clulas,
estas tero que ser desintegradas antes de proceder a sua extrao.
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68
OS BIOPROCESSOS
Injeo de ar esterilizado
Filtrao
Miclio
+ Ca (OH)2
Caldeiras
Metano
Fermentador
anaerbico
Descarte
Precipitado de citrato de clcio
+ H2SO4 concentrado
Gipsita
---------------
OS BIOFERTILIZANTES
O termo biofertilizante se aplica aos produtos que contm agentes biolgicos vivos capazes de
favorecer o desenvolvimento vegetal. Um destes agentes o Rhizobium, uma bactria simbionte das
razes de leguminosas que fixa o nitrognio atmosfrico, reduzindo a necessidade de aplicar
fertilizantes nitrogenados nas lavouras e permitindo assim a substituio de produtos qumicos
derivados do petrleo por agentes biolgicos, menos prejudiciais para o meio ambiente.
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CAPTULO 7
Gema apical
Estpula
Limbo
Pecolo
Folha
Razes laterais
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COMPONENTES
CARACTERSTICAS E EXEMPLOS
gua destilada
Fonte de carbono
Substncias inorgnicas
Macroelementos (N, P, K, Ca, Mg, S) e microelementos (Fe, Co, Zn, Ni, B, Al, Mn, Mo,
Cu, I), em uma proporo que depende da planta escolhida.
Vitaminas
Reguladores de crescimento
Misturas de substncias
pouco definidas
Materiais inertes
72
OS MEIOS DE CULTURA
Um meio de cultura inclui gua, uma fonte de carbono, substncias inorgnicas (sais minerais),
vitaminas, hormnios e fatores reguladores do crescimento (Tabela 7.1). Alguns desses componentes
podem ser substitudos por misturas pouco definidas, mais econmicas ou simples de manipular (gua
de coco, suco de tomate, suco de laranja). Geralmente, o pH do meio varia entre 5,0 e 6,5.
A composio do meio de cultura muda em funo das necessidades de cada espcie. O crescimento
e a diferenciao celular so controlados mediante as substncias reguladoras de crescimento (Tabela
7.1). De um modo geral, se a proporo entre citocininas e auxinas for maior que 1, desenvolvem-se
brotos, se for menor, razes e, se for igual, calos.
A incubao ocorre a uma temperatura entre 23 e 28C, com 12 a 14 horas dirias de iluminao.
AS ETAPAS DO PROCESSO
Cultivam-se assepticamente os explantes em meios de composio adequada, possibilitando a
regenerao direta da planta. O processo envolve quatro etapas:
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Separao
dos explantes
Esterilizao
Lavados
Dissecao
e semeadura
Incubao
gua + detergente
+ hipoclorito de sdio
gua estril
Planta-me
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A CULTURA DE CALOS
Um calo uma massa de clulas desdiferenciadas que prolifera de maneira irregular em resposta aos
ferimentos em rgos e tecidos, formando in vivo um tecido tumoral. A semeadura in vitro de um
explante em meio adequado gera um calo que pode ser mantido indefinidamente, com a condio de
proceder a uma subdiviso e transferncia peridica a um meio nutriente com a mesma composio.
Se o calo for transferido a outro meio com uma concentrao diferente de hormnios, formar-se-o
rgos ou embries, a partir dos quais podero ser regeneradas numerosas plantas (Figura 7.5).
A cultura de calo a modalidade alternativa para plantas que no podem ser propagadas
diretamente a partir de meristemas e, por isso, menos conveniente para micropropagao. Contudo,
sua utilizao inevitvel no caso de algumas espcies economicamente importantes (cereais,
leguminosas, forrageiras, espcies florestais e palmeiras tropicais).
--------------FIGURA 7.4. A cultura de meristemas
Gema apical
Meristema
Transferncia a um meio
de diferente composio
Planta-me
Cultura de meristema
Formao de rgos
Planta-filha
Planta-me
Explante
Calo
Formao de rgos
Planta-filha
Metablitos
secundrios
Biorreator
Clulas
Embrioides
Sementes artificiais
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---------------
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Entretanto, diferena dos microrganismos, que podem ser repicados indefinidamente, as clulas
animais normais sofrem um tipo de morte programada (apoptose) depois de 20 a 80 divises. Devese ento reiniciar o cultivo com uma nova amostra.
Existem algumas excees que escapam dessa limitao, como as clulas extradas de tumores ou
as clulas-tronco; e tambm os linfcitos B, imortalizados por infeco com o vrus de Epstein-Barr ou
por fuso com clulas de mieloma (hibridomas). Estas clulas, que podem crescer em suspenso ou
em camada, no dependem de um suporte onde aderir nem demostram inibio por contato,
dividindo-se a cada 12-24 horas, em vez de 24-96 horas como as clulas normais.
OS MEIOS DE CULTIVO
O cultivo de clulas animais s comeou a se desenvolver com sucesso na dcada de 1950, quando H.
Eagle conseguiu definir quais os nutrientes indispensveis para o crescimento celular (Tabela 7.2).
Basicamente, um meio para o cultivo de clulas animais inclui gua, sais minerais, aminocidos,
vitaminas, glicose, soro humano, bovino ou de cavalo (fatores de crescimento) e antibiticos (para
prevenir as contaminaes microbianas).
--------------FIGURA 7.7. As culturas de clulas de origem animal
B.
Amostra de
sangue com
anticoagulante
Separao dos
leuccitos por
centrifugao
Cultivo dos
leuccitos
Adio de colchicina
e lise celular
Fixao e colorao
(Bandeamento)
Observao
e comparao
B. Etapas da cultura de clulas a partir de um fragmento de tecido
Meio de cultivo
Suspenso
celular
Desagregao
mecnica ou enzimtica
(tripsina, colagenase)
Cultura
primria
Cultura
secundria
Repique
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O soro bovino fetal um suplemento de baixo custo, geralmente adicionado na proporo de 2-10%.
Alm de melhorar as caractersticas fsico-qumicas do meio, o soro facilita a aderncia ao suporte e
fornece nutrientes, hormnios, fatores de crescimento etc. Em compensao, a qualidade pode variar
de um lote a outro, e a riqueza de nutrientes favorece a contaminao. O soro tambm dificulta os
estudos imunolgicos e a purificao dos produtos proteicos.
Em um meio definido, o soro substitudo por quantidades determinadas de diversas substncias
inorgnicas e orgnicas, algumas destas ltimas produzidas por engenharia gentica em bactrias ou
leveduras.
AS LINHAGENS CELULARES
Nas Colees de Culturas encontram-se linhagens celulares de diversos tipos, conservadas por
criopreservao (Tabela 7.3).
A linhagem de clulas HeLa, uma das mais utilizadas, continua sendo cultivada desde a dcada de
1950, quando foi isolada do carcinoma uterino de Henrietta Lacks, uma mulher negra e pobre de 31
anos, no Hospital Johns Hopkins (Maryland, Estados Unidos).
--------------TABELA 7.2. Os componentes de um meio de cultura bsico para clulas animais
COMPONENTES
CARACTERSTICAS E EXEMPLOS
gua
Desmineralizada, destilada.
Fonte de carbono
Glicose.
Substncias inorgnicas
L aminocidos
Vitaminas
Misturas de substncias
pouco definidas
Outros
ORIGEM
APLICAES
HeLa(*)
Pesquisa
MDCK
Rim de cachorro
3T3
Tcnicas laboratoriais
Nawalwa
Linfoma humano
-interferon
COS-7
VERO (**)
CHO
Hamster
80
A histria de Henrietta Lacks levanta vrias questes de biotica. Sem o seu consentimento ou o de
seus parentes, as clulas foram distribudas a laboratrios do mundo inteiro com o nome fictcio de
Helen Lane e, durante anos, foi negada a sua famlia qualquer forma de compensao que aliviasse sua
situao econmica. Por outro lado, experimentos da dcada de 1960 em que se injetaram clulas
HeLa em presidirios constituem uma das experincias mais antiticas da histria da cincia.
Alm de ser mais difcil detectar uma contaminao por clulas que outra por bactrias ou fungos,
as clulas HeLa so uma fonte de contaminao temvel, devido facilidade e velocidade com que se
multiplicam. Em 1966, o geneticista S. Gartler descobriu que 18 das culturas de clulas mais usadas
continham o marcador glicose-6-fosfato desidrogenase (G6PD-A), caracterstico da populao negra
americana. A partir de esse momento, as linhagens celulares so monitoradas com marcadores
especficos.
CONDIOES DE CULTIVO
As clulas devem ser isoladas, inoculadas, e cultivadas assepticamente em um meio com os nutrientes
essenciais (aminocidos, carboidratos, vitaminas, sais minerais) adicionado de hormnios e fatores de
crescimento, ambiente fsico-qumico regulado (pH, presso osmtica, temperatura entre 350 a 370 C,
umidade, proporo definida de O2 e CO2). A viabilidade das clulas avaliada microscopicamente no
hemocitmetro, aps colorao das clulas mortas com azul tripano.
Uma das limitaes destas tcnicas que o crescimento sempre ocorre em um plano, o que dificulta
a compreenso do que acontece dentro de um organismo, por isso trabalhos recentes desenvolvem
outras formas de cultivo que permitam o desenvolvimento em 3D.
A riqueza do meio de cultivo e a diferena na velocidade de crescimento entre uma bactria e uma
clula favorecem as contaminaes das culturas. O risco de contaminao com algum patgeno se
estende ao operador, especialmente se o trabalho envolve uma cultura primria de clulas humanas
ou de primatas. O risco potencial abrange os vrus HIV e HBV em amostras de sangue, bactrias como
Mycobacterium tuberculosis em amostras de pulmo, vrus SV40 em clulas transformadas e clulas
tumorognicas.
DO LABORATRIO INDSTRIA
A cultura in vitro de clulas animais a rota seguida para a manufatura em grande escala de vrios
produtos, tais como as vacinas e os anticorpos monoclonais. Tambm adequada para a produo de
citocinas (linfocinas, interferones, eritropoietina) e de outras protenas de origem recombinante (fator
ativador de plasminognio, p.ex.) que, por exigir modificaes ps-traducionais complexas, no podem
ser produzidas em bactrias ou leveduras transformadas.
Na hora de passar da escala do laboratrio escala industrial, algumas consideraes devem ser
levadas em conta. A cultura de clulas animais exige um cuidado extremado, meios de cultivo
complexos e caros e condies muito rigorosas. Como as clulas se dividem lentamente (a cada 20
horas aproximadamente), a assepsia deve ser mantida durante perodos prolongados. A demanda de
oxignio alta, e as clulas so muito frgeis e sensveis ao cisalhamento. Finalmente, as
concentraes celulares so baixas, o que diminui a produtividade e a rentabilidade do processo.
Embora algumas clulas possam crescer livremente em suspenso, outras precisam de um suporte
ao qual aderir. No biorreator, este problema pode ser resolvido de diversos modos: mediante o
confinamento das clulas dentro de membranas semipermeveis, imobilizao em gis ou cpsulas ou
fixao sobre suportes, tal como pequenas partculas de 100 a 400 m em vidro, plstico ou dextrina,
em modelos de fermentadores anlogos aos representados no captulo anterior.
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82
CAPTULO 8
A TECNOLOGIA DO DNA
AS FERRAMENTAS DISPONVEIS
A tecnologia do DNA compreende uma srie de procedimentos para extrair, fragmentar, sintetizar,
marcar, identificar, amplificar e sequenciar o DNA. Trata-se de um conjunto de ferramentas de uso
rotineiro em laboratrios, geralmente em sistemas automatizados especialmente desenhados para
efetuar rapidamente um nmero altssimo de operaes.
O primeiro passo a dar no campo da biologia molecular a extrao dos cidos nucleicos. Os
sistemas tradicionais coexistem com mtodos de extrao em fase slida, geralmente oferecidos como
kits por numerosas empresas. Estima-se que o mercado de extrao e purificao de cidos nucleicos
supere os 3.8 milhes de dlares em 2020.
AS NUCLEASES OU ENZIMAS DE RESTRIO
Entre as numerosas enzimas utilizadas diariamente nos laboratrios, as nucleases merecem ateno
especial porque quebram as ligaes entre os nucleotdeos de uma cadeia de DNA. As exonucleases
comeam pelas extremidades enquanto as endonucleases cortam a molcula por dentro. Pertencem
a este ltimo grupo as enzimas de restrio que reconhecem stios especficos no DNA.
As enzimas de restrio so produzidas por bactrias como uma arma de defesa contra o ataque
de vrus (bacterifagos): cortando o DNA viral impedem sua multiplicao. O DNA bacteriano no
atacado por suas prprias enzimas, seja porque faltam as sequncias correspondentes, seja porque
estas esto camufladas pela adio de um grupo metila.
Desde sua descoberta por Werner Arber, na dcada de 1960, j foram isoladas centenas de enzimas
de restrio que agem como tesouras qumicas ao reconhecer, como os seus pontos-alvo,
determinadas sequncias de 4 a 8 bases. Por exemplo, a enzima EcoRI, cujo nome deriva de
"Escherichia coli linhagem RY13 (R), primeira endonuclease a ser descoberta" corta o DNA em dois
pedaos (Figura 8.1). A sequncia um palndromo porque pode ser lida do mesmo modo (GAATTC)
nos dois sentidos (5- 3 ou 3- 5), de forma anloga a frases como Amor a Roma (Figura 8.1).
Assim como h enzimas que cortam o DNA com pontas lascadas, outras fazem um corte reto.
Outras enzimas colam os fragmentos, restabelecendo a ligao entre os nucleotdeos (ligases).
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A ELETROFORESE DO DNA
A eletroforese separa os fragmentos de DNA obtidos com uma enzima de restrio. As amostras so
colocadas em um gel no qual se aplica um campo eltrico. Os fragmentos de DNA carregados
negativamente se movimentam na direo do polo positivo. Ao encontrar uma resistncia menor, os
fragmentos menores migram mais rapidamente (Figura 8.2).
--------------FIGURA 8.1: As enzimas de restrio (EcoRI corta o DNA na sequncia palindrmica GAATTC)
G A A T T C
AATTC
C T T A A G
C T T A A
A. Sistemas de eletroforese
Fonte de eletricidade
Vertical
Horizontal
Ctodo
Amostra
Tampo
Marco de plstico
Fonte de
eletricidade
Gel
Gel
Tampo
Tampo
Eletrodo
nodo
C. Migrao de diferentes amostras no gel
Eletrodo
B. Formao de bandas por migrao
dos fragmentos de restrio no gel
Fragmentos
maiores
Amostra
Fragmentos
de DNA
Migrao
Eletrodo
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Fragmentos
menores
A TECNOLOGIA DO DNA
O poder de separao varia com o suporte (gel de agarose ou de poliacrilamida) e com o tamanho do
poro, que depende da concentrao do meio. Tambm varia com as caractersticas do campo eltrico
aplicado. Os fragmentos de restrio formam bandas que podem ser observadas na luz ultravioleta,
aps colorao com uma substncia fluorescente. Fragmentos de tamanho conhecido inseridos no gel,
maneira de uma rgua molecular, servem como padro de comparao para estimar o tamanho das
bandas do DNA analisado.
Uma das primeiras aplicaes da eletroforese dos fragmentos de restrio foi o estudo dos
polimorfismos. A modificao do stio de restrio de uma molcula de DNA (como, por exemplo, de
GAATTC para GAACTC) origina fragmentos de tamanhos diferentes, denominados RFLPs ou rifleps
(do ingls, restriction fragment length polymorphism). Os RFLPs so marcadores que podem ser
estudados do mesmo modo que um gene que determina um carter visvel ou uma modificao
bioqumica (Figura 8.3).
--------------FIGURA 8.3. Os polimorfismos
Eletroforese
Caso I (Homozigoto)
Caso II (Heterozigoto)
Caso I (6,2)
Caso II (3,3)
VNTR
Stio de restrio
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Molculas de DNA
Sonda radioativa ou
fluorescente
Dissociao
Reassociao
--------------
O MTODO DE SOUTHERN
Em 1975, E.M. Southern descreveu um mtodo para analisar fragmentos de restrio com sondas
especficas. As bandas de DNA cromossmico do gel de eletroforese so transferidas a uma membrana
de nilon ou de nitrocelulose e o alvo reconhecido por hibridizao com uma sonda radiativa de DNA,
registrando-se o resultado em um filme apropriado (Figura 8.5).
O mtodo, denominado Southern blotting, aplicado no diagnstico de doenas genticas, algumas
das quais causadas por mutaes que modificam o padro de bandas, ao eliminar ou criar um stio de
restrio. Mtodos anlogos foram desenhados para estudos de RNA (Northern blotting) e de
protenas (Western blotting). No primeiro caso, a sonda pode ser um fragmento de cido nucleico, mas
no segundo a sonda um anticorpo especfico.
O FINGERPRINT
Descrita por A. Jeffreys em 1985, trata-se de uma variante do mtodo de Southern que focaliza as
regies do genoma que no se expressam e se repetem dispersas ao longo do genoma. Denominadas
VNTR ou vinters (do ingls variable-number tandem repeats), o nmero de repeties pode variar de
um cromossomo ao seu homlogo (Figura 8.3). Sendo assim, os fragmentos de restrio
correspondentes tm um tamanho diferente, o que pode ser visualizado por eletroforese.
Ao aumentar o nmero de sondas para o reconhecimento de vrios tipos de VNTRs, obtm-se um
padro de bandas individual, parecido com o cdigo de barras do comrcio. Assim como as impresses
86
A TECNOLOGIA DO DNA
2. Eletroforese
Papel absorvente
Membrana
Gel
3. Transferncia
Buffer
Papel de filtro para
garantir a hidratao
Buffer
4. Sonda radioativa
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SNTESE DE cDNA
A transcrio da informao gentica no sentido RNA DNA pela transcriptase reversa garante aos
vrus com genoma de RNA (HIV, por exemplo) sua multiplicao no hospedeiro. Como ferramenta de
laboratrio, a transcriptase reversa possibilita a construo de filamentos de DNA complementares
(cDNA) a qualquer molcula de RNA (Figura 8.7). Diferente do gene original, no haver ntrons no
cDNA reconstrudo a partir de RNA.
-------------FIGURA 8.6. A sntese de oligonucleotdeos
Bloqueio
Suporte
O primeiro nucleotdeo
(Base 1) est fixado a um
suporte. Acrescentam-se os
nucleotdeos seguintes (Base
2), bloqueados no stio 5
Reinicia-se o processo
com a incorporao do
nucleotdeo seguinte
(Base 3)
mRNA
Transcriptase reversa
Degradao do RNA
88
Peptdeo
A TECNOLOGIA DO DNA
A. Os elementos necessrios
Fragmento de DNA
Desoxinucleotdeos
Primers
Os primers so pequenos fragmentos de DNA, complementares s extremidades da sequncia que se quer amplificar
e indispensveis para que a enzima DNA-polimerase inicie a sntese de DNA.
B. A amplificao do DNA
PRIMEIRO CICLO
950C
Molcula
original
680C
Dissociao dos
filamentos
complementares
720C
Associao dos
primers com a
sequncia
complementar
A polimerase inicia
a sntese de DNA a
partir do primer
2 cpias
SEGUNDO CICLO
2 cpias
4 cpias
TERCEIRO CICLO
4 cpias
8 cpias
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A TECNOLOGIA DO DNA
1.
2.
Primer
3.
DNA-polimerase
Desoxinucleotdeos
Didesoxinucleotdeos
4.
5.
Os fragmentos so separados por eletroforese. O sequenciador identifica cada um deles pela fluorescncia do
nucleotdeo didesxi incorporado e fornece a sequncia.
Fragmentos maiores
Migrao
Sequncia
Fragmentos menores
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Vrias tecnologias de sequenciamento next generation coexistem atualmente no mercado (454 Life
Sciences, Ion Torrents PGM, Pacific Biosciences RS and the Illumina MiSeq). O fator comum o
sequenciamento em paralelo dos fragmentos de DNA sobre um substrato slido (High throughput
sequencing). A leitura das bases incorporadas simultnea sua incorporao, no sendo necessrio
separar os fragmentos, como no mtodo didesxi.
Em 2006, os mtodos utilizados eram 500 vezes mais rpidos que os da dcada anterior. Hoje, alm
de serem ainda mais velozes, as tecnologias next generation derrubaram os custos do
sequenciamento. Se, em outubro de 2004, o custo do sequenciamento de 1 Megabase (1.000.000 de
pares de bases) era de US$ 1598,91, em abril de 2014 o preo era de US $ 0,05.
Essas tecnologias revolucionaram as pesquisas genticas e genmicas. Em consequncia, temos
uma enorme avalancha de dados possibilitando estudos comparativos e evolutivos de uma dimenso
inimaginvel alguns anos atrs. Tambm abre o caminho para estudos sobre as diferenas genticas
que afetam a sade e a doena.
OS ARRAYS
Como resultado do conhecimento acumulado sobre o genoma do homem e de outros organismos, j
podem ser estudados alguns aspectos relacionados com a expresso e a interao dos genes. Lidar
com um nmero enorme de informaes demanda novos avanos tecnolgicos, entre os quais a
construo de chips de DNA ou microarrays. Estes podem analisar em paralelo grandes quantidades
de material biolgico (HTS).
Em um tipo de microarray, os testes so processados em microplacas de poliestireno com um
nmero varivel de pequenas cavidades, cada uma delas cumprindo a funo de um tubo de ensaio.
Estas placas permitem realizar simultaneamente numerosos testes, utilizando uma quantidade mnima
de reagentes e automatizando a leitura dos resultados.
Um segundo tipo de dispositivo consta de at 100.000 sondas de DNA por centmetro quadrado,
fixadas mediante diferentes tecnologias (robtica, fotolitografia a uma lmina de vidro, nilon ou
slica). A hibridizao dessas sondas com as molculas de cidos nucleicos (cDNA) marcados ser
visualizada por varredura (scanner) como pontos fluorescentes e analisada com um software
apropriado para o tratamento da informao (Figura 8.10).
Escolhem-se as sondas entre os genes codificadores de protenas que se expressam na clula. Desse
modo, se excluem os genes que correspondem ao rRNA, aos tRNAs, s sequncias de controle e ao
DNA extragnico. A escolha de sequncias transcritas, denominadas ESTs (do ingls, expressed
sequence tags), aumenta as chances de detectar os genes que participam de alguma resposta
patolgica.
Os microarrays so utilizados nos estudos de expresso gnica e para o sequenciamento rpido de
oligonucleotdeos. O estudo simultneo de centenas de genes um caminho para desvendar as
interrelaes existentes entre eles e vrios aspectos do funcionamento do genoma.
Numerosas empresas fabricam arrays comercialmente; algumas estimam que em pouco tempo
sero construdos arrays do tamanho de uma moeda, contendo todo o genoma humano.
A CONSTRUO DE GENOMAS MNIMOS
Com o desenvolvimento da genmica e a apario de novas plataformas tecnolgicas e na interface
entre a biologia e a engenharia, nasce a biologia sinttica. Trata-se de uma nova rea de conhecimento
com finalidades prticas, estimulada pela chegada dos mtodos de sequenciamento next generation
e a existncia de plataformas tecnolgicas accessveis para a sntese de oligonucleotdeos.
92
A TECNOLOGIA DO DNA
Hibridizao
--------------
Na vanguarda deste movimento esto os pesquisadores do Instituto J. Craig Venter com a bactria
sinttica (Synthia, 2010). Na construo, unidades bsicas de DNA de Mycoplasma mycoides foram
introduzidas em uma bactria receptora de outra espcie, Mycoplasma capricolum, eliminando-se
posteriormente o genoma desta. Synthia se reproduz normalmente e carrega sequncias especficas
que confirmam sua origem artificial.
Bactrias especialmente desenhadas seriam de interesse para a indstria e para projetos de grande
envergadura, mesmo que hoje nos paream um tanto fantasiosos, como a colonizao de Marte.
Contudo, alguns aspectos resultam preocupantes. A sntese do vrus da plio (2002) e a ressurreio
do vrus da gripe espanhola levantaram inquietude em relao disseminao de material que possa
ser utilizado para elaborar armas biolgicas ou toxinas.
Outro aspecto de biossegurana a considerar o desenho de sistemas de conteno que impeam
a liberao de organismos sintticos no ambiente, seja utilizando sistemas bioqumicos no naturais,
como a introduo de benzopurinas ou benzopirimidinas no DNA, seja construindo ribossomos que
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94
CAPTULO9
A ENGENHARIA GENTICA
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FIGURA 9.1. Cortar, colar, copiar: a experincia que deu origem engenharia gentica
A. Preparao dos plasmdeos recombinantes
Bactrias T R
CORTAR
COLAR
Enzimas de
restrio
Bactrias T S
pSC 101
pSC 102
Bactrias T R K R recombinantes
Plasmdeos
Bactrias T S K S
COPIAR OU CLONAR
Multiplicar
Meio de cultivo com
tetraciclina e kanamicina
Legenda
T: tetraciclina, Ts: sensvel tetraciclina, Tr: resistente tetraciclina, K= kanamicina, Ks: sensvel kanamicina, Kr:
resistente kanamicina, pSC101: plasmdeo de Stanley Cohen n0 101; pSC102: plasmdeo de Stanley Cohen n0 102.
Xenopus
DNA de Xenopus
Bactria recombinante
Molculas de Xenopus
Fragments of amplified Xenopus laevis DNA, coding for 18S and 28S ribosomal RNA and generated by EcoRI
restriction endonuclease, have been linked in vitro to the bacterial plasmid pSCl01; and the recombinant
molecular species have been introduced into E. coli by transformation. These recombinant plasmids,
containing both eukaryotic and prokaryotic DNA, replicate stably in E. coli. RNA isolated from E. coli minicells
harboring the plasmids hybridizes to amplified X. laevis rDNA.
Extrado de: Replication and Transcription of Eukaryotic DNA in Escherichia coli (MORROW J.F., COHEN S.N.,
CHANG A.C. Y., BOYER H.W., GOODMAN H.M.E R.B. HELLING. Proc. Nat. Acad. Sci. USA 71:5, 1974
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A ENGENHARIA GENTICA
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nenhum acidente relacionado com essa tecnologia. Talvez valha a pena lembrar que Prometeu foi
liberado depois de 30 anos, e que bem no fundo da caixa de Pandora estava a esperana.
AS BIBLIOTECAS DE GENES
O enorme tamanho de um genoma dificulta a localizao de um gene e seu mapeamento. Uma forma
de facilitar a manipulao extrair o DNA de um organismo determinado, cort-lo com enzimas de
restrio, inserir os fragmentos em plasmdeos e introduzir os plasmdeos recombinantes em
bactrias. Cada bactria formar um clone e cada clone levar um fragmento do genoma do organismo
estudado. O conjunto de clones representa o genoma inteiro de um organismo, constituindo uma
biblioteca genmica (Figura 9.3).
Boa parte do DNA no leva genes codificadores de protenas. Por isso, um procedimento alternativo
a montagem de uma biblioteca gnica, incluindo exclusivamente os genes que se expressam, ou seja,
os genes responsveis pela sntese de protenas. Separa-se o mRNA codificador, e, com a enzima
transcriptase reversa, constroem-se as molculas correspondentes de cDNA. Inserem-se estas em
plasmdeos, e os plasmdeos em bactrias. Com este procedimento, obviamente, o nmero de clones
na biblioteca ser menor (Figura 9.3).
O nmero de clones tambm depende do tamanho do fragmento que o vetor pode carregar. Tanto
os plasmdeos bacterianos como o bacterifago transportam fragmentos pequenos de DNA de 10 a 20
kb, outros vetores genticos foram especialmente desenhados para carregar fragmentos maiores
(cosmdeos, YACs ou yeast artificial cromossomes, BACs ou bacterial artificial chromossomes,
transposons etc.).
A construo de bibliotecas de genes representa o primeiro passo para o mapeamento de um
genoma. Ao sequenciamento dos fragmentos segue a montagem da informao. Trata-se de uma
etapa complexa em que se alinham as sequncias, se preenchem lacunas e se verificam os dados. O
tratamento matemtico das informaes demanda algoritmos sofisticados e computadores
poderosos. Uma vez organizada a sequncia, esta armazenada em bancos de dados. O usurio tem
acesso atravs da Internet, mediante programas especializados que acumulam uma enorme
quantidade de informaes.
A CONSTRUO DE UM MICRORGANISMO RECOMBINANTE
Uma das primeiras protenas de origem recombinante foi a somatotropina ou hormnio de
crescimento. Como a enzima de restrio eliminava do cDNA, alm da sequncia codificadora do
peptdeo-guia, os nucleotdeos correspondentes aos primeiros aminocidos da molcula, estes
tiveram que ser acrescentados quimicamente, em um processo extremamente engenhoso (Figura 9.4).
A transferncia gnica permite obter microrganismos que sintetizem alguma substncia diferente,
geralmente visando o cultivo em grande escala. O gene de interesse costuma ser selecionado e
estudado na bactria de laboratrio Escherichia coli e, posteriormente, transferido espcie na qual
se pretende produzir a protena correspondente.
Alm de Escherichia coli e de Saccharomyces cerevisiae, existem vrios outros microrganismos que
so habitualmente utilizados como hospedeiros: Bacillus subtilis, Picchia pastoris, Pseudomonas,
Streptomyces, Aspergillus nidulans, Neurospora crassa etc. Estes microrganismos so utilizados na
produo de frmacos (insulina, hormnio de crescimento, vacinas) ou de enzimas (quimosina) e,
tambm, na degradao de poluentes.
98
A ENGENHARIA GENTICA
BIBLIOTECA GENMICA
Contm todas as sequncias do genoma
BIBLIOTECA GNICA
Contm as sequncias codificadoras
de protenas
Extrao de DNA
Extrao de mRNA
Transcriptase reversa
Fragmentao com
enzimas de restrio
Sntese do cDNA
Insero no vetor
Insero no vetor
Plasmdeos
Plasmdeos
Bactrias
Bactrias
Multiplicao e seleo das clulas transformadas
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Peptdeo guia
cDNA obtido a partir do mRNA da somatotropina
A remoo do sinal correspondente ao peptdeo-guia, com a enzima de restrio Hae III,
remove tambm 72 bases, codificadoras dos primeiros 24 aminocidos da molcula
Transformao
Transcrio
Traduo
Somatotropina
Biblioteca genmica
Biblioteca gnica
100
A ENGENHARIA GENTICA
ENCONTRAR O GENE
De um modo geral, encontrar um gene equivale a procurar uma agulha num palheiro. O gene pode ser
localizado por triagem dos clones de uma livraria gnica ou genmica (Figura 9.3). Se esta no existir,
pode ser necessrio constru-la, em uma primeira rodada de clonagem, para achar o gene de interesse.
A identificao do clone de interesse envolve a identificao de uma protena com anticorpos
marcados ou o reconhecimento de um gene por hibridizao com uma sonda marcada.
A segunda dificuldade est na obteno de numerosas cpias desse gene. Uma soluo a
multiplicao do clone correspondente e posterior isolamento do gene procurado. Outra a
amplificao do gene mediante a PCR, sempre que se conheam as sequncias iniciais e finais ou,
eventualmente, as sequncias adjacentes regio onde est inserido. Se a sequncia do gene for
conhecida e relativamente curta, podem-se construir cadeias curtas de oligonucleotdeos e associlas, formando um gene sinttico que ser amplificado por PCR. Existem numerosas estratgias, que
dependem do caso e, tambm, das caractersticas e possibilidades do laboratrio (Figura 9.5).
Seja qual for o caminho seguido, uma vez que as cpias do gene de interesse forem obtidas, estas
tero que ser transferidas ao hospedeiro definitivo.
INSERIR O GENE
A transferncia de um fragmento estranho de DNA se v facilitada pela utilizao de vetores. Um vetor
uma molcula de DNA que se duplica de maneira autnoma dentro de uma clula, carregando vrios
genes, entre os quais alguns marcadores que permitam reconhecer sua presena dentro da clula.
no vetor que ser inserido o fragmento de DNA estranho, para multiplicao ou integrao no genoma.
Alm dos plasmdeos (bacterianos e de leveduras) e bacterifagos (, m13), tambm se utilizam
como vetores os transpsons, que so elementos genticos mveis capazes de pular de um lugar a
outro do genoma, espalhando ou no cpias. Construdos em funo das necessidades, existem hoje
vetores bacterianos, vetores de leveduras e vetores bifuncionais que podem ser utilizados tanto em
bactrias como em leveduras.
As primeiras experincias de Engenharia Gentica foram feitas na bactria Escherichia coli, um
microrganismo muito conhecido e fcil de cultivar em laboratrio. Porm, Escherichia coli no o
organismo ideal para a expresso de genes eucariticos. Clulas procariticas e eucariticas diferem
em relao ao processamento do mRNA e s modificaes das protenas depois da traduo. Por este
motivo, quando se procura expressar genes de mamferos, Escherichia coli substituda por outras
clulas eucariticas, como a levedura Saccharomyces cerevisiae, um fungo utilizado h sculos na
produo de alimentos e bebidas.
Para que um gene se expresse em uma clula hospedeira, necessrio que esta reconhea seus
prprios sinais de expresso. Para poder sintetizar uma protena exgena, a clula dever ler a
sequncia codificadora com seus prprios sinais de transcrio (promotor) e de traduo (stio de
ligao com o ribossomo, trmino de leitura).
O ideal construir um vetor que j contenha os genes marcadores para seleo ou reconhecimento,
os stios de restrio, uma sequncia promotora e os sinais adequados de incio e fim da transcrio.
Ao colocar a sequncia codificadora da protena, o vetor funciona como um cassette de expresso
(Figura 9.6).
Outros fatores adicionais intervm na construo de um vetor de expresso. Um promotor forte,
por exemplo, permitir sintetizar uma quantidade grande de protena, o que ser comercialmente
interessante se esta for uma enzima. Entretanto, se a protena em questo for uma toxina que possa
afetar o hospedeiro, ser prefervel escolher um promotor fraco. Uma possibilidade interessante a
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mRNA
Promotor
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102
A ENGENHARIA GENTICA
Alm dos marcadores seletivos, os pesquisadores contam com outro tipo de marcadores que
permitem identificar as bactrias transformadas e, tambm, acompanhar a expresso de um gene no
organismo modificado. Destacam-se entre estes marcadores, ou genes reprteres: GAL e GUS,
respectivamente o gene da -galactosidase e o gene da glucuronidase, que transformam o substrato
correspondente em um composto colorido; GFP, um gene da medusa Aequorea Victoria, que sintetiza
uma protena fluorescente, verde brilhante na luz ultravioleta; LUC, o gene da luciferase, uma enzima
dos vaga-lumes, que emite luz em presena do substrato.
A CHEGADA DA COMUNIDADE DIY
A crise econmica do incio de sculo XXI excluiu dos empregos formais numerosos jovens com boa
formao profissional e, paralelamente, o progresso tecnolgico causou uma queda acentuada nos
preos dos equipamentos bsicos de laboratrio e de sntese/sequenciamento de cidos nucleicos.
Nos pases desenvolvidos, onde a cultura do empreendedorismo muito forte, algumas iniciativas
educativas de vrias organizaes (Biobricks Foundation, SYNBIO etc.) e universidades (Harvard, MIT
etc.) promoveram a criao da comunidade DIYBIO (do ingls, do it yourself).
Tomando como referncia o nascimento da indstria dos computadores pessoais na Califrnia, esta
gerao monta laboratrios de fundo de garagem, absorve o conhecimento disponvel em open source
e aproveita equipamentos de segunda mo, quando no cria os prprios. Trabalha com base na livre
difuso de protocolos e sequncias biolgicas standard que so usadas, com segurana, como blocos
fundamentais (biobricks).
O objetivo de desenhar e construir sistemas biolgicos simplificados que cumpram funes
determinadas os integra Biologia Sinttica. Os elementos fundamentais so molculas de DNA,
associadas entre si como os blocos de Lego. Denominados partes, dispositivos e sistemas em funo
de sua complexidade, os elementos sero colocados em um microrganismo ou chassis (Figura 9.7).
Observe-se que os participantes utilizam exclusivamente microrganismos do Grupo de Risco 1, com
baixo ou nenhum risco individual e coletivo, e biobricks seguros disponibilizados por organizaes
responsveis. Inclusive figura na Internet um kit para bioengenharia (Amino, a US$ 700), equivalente
ao Arduino em eletrnica, com tudo o que preciso para sintetizar microrganismos BS1,
geneticamente modificados, e criar fragrncias, flavorizantes, materiais, medicamentos etc
-------------FIGURA 9.7. Semelhanas entre os Legos e os Biobricks (www.biochem.hku.hk/synbio/?_id=148)
A. Classificao hierrquica
PARTES
DISPOSITIVOS
SISTEMAS
Tarefas complexas
Exemplo: oscilar na emisso de duas cores com uma frequncia determinada.
CHASSIS
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Gene funcional
Promotor
c
Vamos mudar o promotor?
Sequncia
codificadora
da protena
Sequncias
finalizadoras da
transcrio
Enzimas de restrio
Novo promotor
+ ligase
c
Novo gene funcional
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A ENGENHARIA GENTICA
O TRANSGENE
Para garantir a transferncia de uma sequncia gnica determinada, deve-se construir em redor uma
estrutura complexa que inclua tambm um gene marcador, um promotor e as sequncias de leitura
adequadas (sequncias iniciais e terminais). Denomina-se transgene o conjunto formado pela
sequncia gnica e a estrutura que o acompanha.
O promotor desencadeia a transcrio da sequncia codificadora de interesse. Um promotor
constitutivo permitir a expresso gnica na maioria dos tecidos e ao longo da vida da planta,
enquanto outro limitar a expresso a um tecido determinado. Tambm existem promotores que
respondem a estmulos ambientais internos ou externos, como a luz.
O gene marcador confere resistncia a substncias normalmente txicas para as clulas vegetais,
tais como os antibiticos ou os herbicidas, de modo que, em um meio seletivo, s sobrevivam clulas
que integraram o transgene.
O uso de marcadores de resistncia a antibiticos na construo de plantas desperta vrios
questionamentos, apesar de se tratar de antibiticos sem uso clnico e que j esto presentes nas
bactrias do intestino do homem. Estes marcadores podem ser substitudos, mas como sua utilidade
se limita ao processo de transformao, o melhor seria elimin-los uma vez cumprida sua funo. J
foram desenvolvidas vrias tcnicas genticas de remoo dos marcadores, esperando-se que nos
prximos anos sua retirada se transforme em uma prtica corriqueira de laboratrio.
A TRANSFERNCIA DOS GENES A CLULAS VEGETAIS
Agrobacterium tumefaciens uma bactria do solo, que leva um plasmdeo denominado Ti (do ingls,
Tumour induced plasmid). Quando infectadas com a bactria portadora desse plasmdeo, as plantas
eudicotiledneas desenvolvem galhas, isto , tumores caractersticos (crown gall).
A eliminao de alguns genes na regio T do plasmdeo Ti conserva sua capacidade de insero no
cromossomo da clula hospedeira, eliminando a propriedade de induzir tumores. Esta caracterstica
transforma o plasmdeo em um vetor adequado para a transferncia de genes de outras espcies s
clulas vegetais. Basta colocar o transgene na regio T do plasmdeo previamente desarmado para se
obter um plasmdeo recombinante que poder ser transferido novamente a Agrobacterium ou a
clulas hospedeiras, onde o transgene ir se inserir em algum lugar do genoma (Figura 9.8).
Com esta tecnologia criou-se a primeira planta transgnica, um tabaco resistente kanamicina.
Continua sendo utilizada at hoje, com as eudicotiledneas. Porm, as plantas monocotiledneas
(arroz, milho, trigo) e algumas leguminosas no so infetadas por Agrobacterium, de modo que, para
conseguir transferir genes, deve-se recorrer a outros mtodos.
Os mtodos fsicos tm a vantagem de poder ser aplicados tanto nas plantas monocotiledneas
como nas eudicotiledneas. A eletroporao e o tratamento com uma substncia desestabilizadora da
membrana plasmtica (polietilenglicol ou PEG) so tcnicas muito utilizadas. Porm, o mtodo
preferido atualmente a biolstica. Um revlver especial (gene gun) dispara microprojteis de ouro ou
tungstnio, recobertos de DNA, em direo s clulas. O dispositivo possibilita a entrada do DNA
exgeno no ncleo, nas mitocndrias ou nos cloroplastos. De um modo geral, a transformao se
realiza em protoplastos, clulas em que a parede celular foi eliminada com enzimas.
DO LABORATRIO AO CAMPO
No laboratrio, transfere-se a construo gentica s clulas receptoras por algum dos mtodos
possveis (geralmente eletroporao, biolstica ou uso de vetores, como o plasmdeo Ti de
Agrobacterium tumefaciens); a seguir, se selecionam e recuperam as clulas transformadas e,
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mediante as tcnicas de cultura in vitro, se regeneram as plantas correspondentes. Note-se que este
trabalho costuma ser realizado em plantas cujo gentipo favorece a transformao e a regenerao
da planta transformada, mas que geralmente resultam pouco vantajosas do ponto de vista
agronmico.
A presena do transgene, assim como o nmero de cpias e o lugar em que estas se integraram no
genoma, conferida mediante tcnicas bioqumicas e/ou marcadores moleculares (polimorfismos na
molcula de DNA, repetio de sequncias), porque so aspectos que podem influir na expresso
gnica. Considera-se alcanado o xito quando o transgene se expressa no lugar correspondente e
com um adequado nvel de atividade, restando por verificar a estabilidade da expresso gnica e o seu
valor agronmico.
-------------FIGURA 9.8. A construo de uma planta transgnica no laboratrio
O plasmdeo Ti "desarmado" portando um gene exgeno transferido a clulas de discos foliares. Formam-se calos que
podero regenerar a planta inteira.
Plasmdeo Ti
Plasmdeo Ti desarmado
DNA exgeno
Plasmdeo recombinante
Planta que ser manipulada geneticamente
Transformao
Discos foliares
Cultura de calos
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A ENGENHARIA GENTICA
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A ENGENHARIA GENTICA
humanas. Desse modo se obtiveram camundongos transgnicos para genes determinantes de algumas
doenas humanas, tais como cncer de mama (BRCA 1), doena de Huntington, anemia falciforme etc.
Estes animais so de grande utilidade para as pesquisas farmacolgicas
-------------FIGURA 9.10. Construo de animais transgnicos
A. Microinjeo.
Aps a transfeco, implantam-se os ovos em fmeas receptivas (pseudogrvidas). Aqueles que incorporaram o transgene
originaro, neste caso, animais de tamanho maior (supermouse).
Cruzamento
Descendncia
Ovos fertilizados
Implantao em fmeas
pseudogrvidas
Injeo de DNA exgeno
Blastocisto
Descendncia
Transfeco e
seleo das clulas
Blastocisto
Camundongo de pelo
marrom (aguti)
Implantao
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Esta estratgia utilizada no s para construir modelos animais com um gene ativo (knock in), mas
tambm para colocar um gene inativo (knock out). Aps a transfeco de clulas-tronco embrionrias
com um gene desativado, realiza-se sua transferncia a blastcitos, que, reimplantados, originaro
animais quimricos, isto , animais com clulas de dois tipos: umas em que o gene est ativado e outras
em que no est ativado porque incorporaram o transgene. Dos cruzamentos entre quimeras com
clulas germinais portadoras do gene desativado nascero animais homozigotos com duas cpias do
gene inativo (Figura 9.10).
AS NOVAS TECNOLOGIAS DE EDIO GNICA
BASEADAS NO RNA INTERFERENTE
A injeo na clula de um RNA artificial (siRNA) de sequncia parcialmente semelhante do DNA de
um gene determinado possibilita silenciar sua expresso. Trata-se de uma ferramenta poderosa para
o estudo da genmica funcional para interferir parcialmente (knockdown) com sua traduo no
citoplasma, de maneira temporria e sem danificar a clula.
Com a integrao no genoma de um DNA codificador de RNA em forma de grampo de cabelo
(shRNA, do ingls, short hairpin RNA) consegue-se uma resposta permanente. Depois de processado
pela maquinaria celular dos miRNA, o shRNA ir interferir na traduo de uma molcula externa que
lhe for complementar. Adicionando construo gnica um promotor induzvel, pode-se regular sua
expresso em diferentes tecidos ou em determinados intervalos de tempo. Um dos frutos desta
tecnologia o feijo resistente ao vrus do mosaico dourado da Embrapa.
110
A ENGENHARIA GENTICA
fragmentao do DNA viral pelas enzimas de restrio bacterianas. Estas reconhecem sequncias
especficas que no prprio genoma esto protegidas por modificaes qumicas (metilao).
A bactria sobrevivente poder, mediante a nuclease Cas, incorporar algumas sequncias de DNA do
fago em seu genoma, entre os segmentos repetitivos do sistema CRISPR (do ingls, Clustered regularly
interspaced short palindromic repeats). Se houver um novo ataque, a transcrio e o processamento
desse DNA pode levar degradao Cas-dependente do DNA do bacterifago. Estes mecanismos de
defesa (CRISPRs) so frequentes e tm sido encontrados em 40% das eubactrias e 90% das arqueas
sequenciadas.
Baseadas nesse mecanismo de imunidade bacteriana, E. Charpentier (Universidade de UMEA,
Sucia; Universidade de Viena, ustria) e J. Doudna (Universidade de Califrnia, Estados Unidos)
mostraram que bastava juntar um RNA de fita nica com a enzima Cas9 em um tubo de ensaio para
cortar qualquer sequncia de DNA no lugar desejado. No ano seguinte, F. Zhang e G. Church (Harvard
Medical School) usaram o sistema CRISPR-Cas9 para editar o genoma de clulas animais e humanas.
Assim como as nucleases stio-dirigidas ZNFs ou TALEN, CRISPR pode ser utilizada para gerar
mutaes de ponto, delees ou inseres. Com pequenas alteraes, CRISPR-Cas9 se transforma na
maquinaria ideal para inibir ou ativar genes, desenvolver estudos epigenticos e induzir a expresso
gnica por substncias qumicas ou estmulos luminousos. Entre outras aplicaes, O sucesso de
CRISPR-Cas9 se deve tanto a sua versatilidade como simplicidade, j que as ferramentas bsicas so
a enzima Cas e o RNA-guia, bem mais fcil e econmico de sintetizar que as protenas (Figura 9.11).
Qual o status de um organismo editado? Em primeira aproximao, seria um organismo
geneticamente modificado. Porm, diferentemente dos OGMs que esto no mercado, um organismo
editado no carrega necessariamente genes de outras espcies. A edio pode inativar um gene, gerar
uma verso mais favorvel de um gene existente ou transferir uma variante da mesma espcie, tal
como ocorreria na natureza por mutao espontnea ou por melhoramento. Deste ponto de vista, os
organismos editados no deveriam ser enquadrados na legislao existente.
--------------
Cas9
RNA-guia
DNA genmico
Corte
Transgene +
Gene reprter
Mutao de ponto
Deleo
Insero de um transgene
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Em mamferos, a enzima e o RNA-guia podem ser introduzidos por injeo em clulas embrionrias;
em plantas por transfeco de protoplastos ou por agroinfiltrao. Posteriormente edio, as
nucleases so degradadas pelas clulas e desaparecem do organismo. No caso de usar uma construo
gnica, esta desaparece por segregao na diviso celular. Legalmente, a edio gnica no entraria
nos padres atuais da regulamentao.
Existem repositrios onde so armazenadas centenas de plasmdeos e milhares de linhagens virais,
expressando Cas e um guia diferente de RNA. Nas bibliotecas de vrus (lentivrus, vrus adenoassociados) esto armazenadas as sequncias de mais de 18.000 genes. Estes bancos pertencem a
instituies como Harvard Plasmid Database, DNASU Plasmid Repository, National Institutes of
Healths PlasmID, Mammalian Gene Collection ou a organizaes independentes como Addgene e Zinc
Finger Consortium. Empresas como Thermofisher oferecem, alm dos vetores, sistemas que por
transfeco mediada por lipdios podem ser introduzidos diretamente na clula, gerando resultados
em 4 dias.
A relevncia das novas tecnologias de edio indiscutvel, como mostram algumas das primeiras
aplicaes. Em bactrias, CRISPR permite remover modificaes genticas para se adequar a critrios
de biossegurana ou de proteo da propriedade intelectual; na indstria de laticnios, utilizada para
proteger os bacilos lcticos das infeces virais. Tambm possibilita a obteno de plantas resistentes
a vrus e rvores com menos lignina e menos taninos (Populus).
Como ferramenta de pesquisa, CRISPR utilizada no estudo de ativadores e inibidores epigenticos
e na edio de clulas-tronco para entender as doenas neurolgicas. Desativando simultaneamente
vrios genes, abre-se a possibilidade de estudar doenas polignicas como autismo, diabetes ou
esquizofrenia. Conseguem-se criar animais knockin ou knockout por injeo de Cas9 e do RNA
especfico no zigoto fertilizado. Basta que um animal ou as clulas de uma cultura in vitro tenham
incorporado por transfeco o gene codificador de Cas, para que s seja necessrio acrescentar o RNAguia especfico para as sequncias-alvo escolhidas.
A patente das tcnicas de edio gnica est sendo disputada por Doudna, Charpentier e Zhang. A
biotecnologia hoje um empreendimento milionrio construdo sobre pesquisadores, universidades,
empreendedores, empresas, interesses econmicos de grandes capitais.
Pesquisadores chineses criaram macacos com dois genes alterados. Na Inglaterra, foram autorizados
experimentos de edio gnica com embries que no sero implantados. A comunidade cientfica de
vrios pases comea a vislumbrar a possibilidade de edio gentica de embries para terapias
gnicas. A alterao da linhagem germinal representa at o momento uma fronteira tcnica e
moralmente intransponvel, mas qual ser o posicionamento da sociedade?
BIOSSEGURANA E REGULAO
No Brasil, a principal norma reguladora sobre as atividades com organismos geneticamente
modificados a Lei de Biossegurana (Lei n0 11.105, de 24 de maro de 2005) que agrega diferentes
reas do direito: ambiental, sanitrio, defesa do consumidor, propriedade intelectual, civil,
administrativo e penal.
A palavra final sobre as questes tcnicas corresponde Comisso Nacional Tcnica de
Biotecnologia (CTNBio), uma instncia colegiada multidisciplinar cuja finalidade prestar apoio
tcnico consultivo e assessoramento ao Governo Federal na formulao, atualizao e implementao
da Poltica Nacional de Biossegurana relativa a OGM, bem como no estabelecimento de normas
tcnicas de segurana e pareceres tcnicos referentes proteo da sade humana, dos organismos
vivos e do meio ambiente, para atividades que envolvam a construo, experimentao, cultivo,
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A ENGENHARIA GENTICA
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C A P T U L O 10
BIOTECNOLOGA E INDSTRIA
O PROCESSO WEIZMANN
No sculo XIX, os principais produtores de borracha natural eram o Brasil e a Inglaterra (plantaes na
Malsia). O processo de vulcanizao, que confere ao material sua elasticidade e resistncia (C. B.
Goodyear, 1839), e a inveno dos pneus (J. Dunlop, 1888) transformaram a borracha em um insumo
estratgico para o crescimento da indstria automotora.
Quando, em uma tentativa de dumping, os pases produtores diminuram a oferta e provocaram
um aumento significativo do preo, desencadeou-se a corrida borracha sinttica. Enquanto a
Alemanha tentava sintetizar a borracha a partir de um derivado do petrleo (butadieno), a Inglaterra
explorava as possibilidades de sntese de molculas precursoras por fermentao.
Nesse contexto histrico, o qumico de origem russa Chaim Weizmann desenvolveu, na
Universidade de Manchester (1914), um processo fermentativo que utilizava a bactria Clostridium
acetobutilycum para a produo de butanol (um precursor do butadieno) e acetona. Por ser o primeiro
processo fermentativo industrial desenvolvido em condies asspticas, o processo Weizmann
considerado um marco histrico na biotecnologia industrial.
No incio da Primeira Guerra Mundial, a ateno da Inglaterra desviou-se da borracha para a
produo de explosivos e, especialmente, de cordite, uma plvora base de nitrocelulose cuja
preparao demanda acetona. Por ser sintetizada a partir de carbonato de clcio, um insumo
importado da Alemanha, a via qumica de produo de acetona tornou-se invivel, tendo a Inglaterra
que comear a explorar a via biotecnolgica.
Recrutado pelo Comit de Munies e tendo cedido a patente do processo ao governo britnico,
Weizmann comeou a produzir acetona, por fermentao microbiana de amido de milho, na Nicholson
Gin Distillery (Londres), mas, devido guerra e falta de alimentos, o suplemento de carboidratos
acabou se tornando um fator limitante na produo.
Em 1916, os britnicos transferiram a produo para uma destilaria em Toronto (Canad), ao tempo
que era construda outra instalao na ndia. Em 1917 comeou a funcionar uma fbrica produtora de
acetona por fermentao de milho em Indiana (Estados Unidos). Finalizada a guerra, a acetona e o
butanol continuaram a ser utilizados como solventes.
Os caminhos da cincia, da tecnologia e da poltica se cruzaram vrias vezes. Qumico e jornalista,
Weizmann chegou a ser um dos mais importantes lderes comunitrios do movimento sionista
mundial. Sua contribuio ao esforo blico da Primeira Guerra Mundial estaria relacionada com a
declarao Balfour (1918), que prometera ao povo judeu um lar na Palestina. Finalizado o mandato
conferido pela Liga das Naes Gr-Bretanha (1947), criou-se o Estado de Israel (1948), do qual
Weizmann foi o primeiro presidente. Fundado em Rehovot (Israel), o Instituto de Pesquisas Cientficas
e Tecnolgicas leva o seu nome.
BIOTECNOLOGIA: ENSINO E DIVULGAO (http://bteduc.com)
BIOTECNOLOGIA E INDSTRIA
A INDSTRIA QUMICA
A VIA QUMICA
A indstria qumica se caracteriza por produzir substncias que atendem as necessidades de outras
indstrias. Enquanto algumas empresas sintetizam os derivados petroqumicos bsicos (etileno,
propileno, butadieno), outras os transformam nos petroqumicos finais: polietileno (PE), polipropileno
(PP), policloreto de vinil (PVC), polisteres e xido de etileno. Um terceiro grupo converter esses
materiais em objetos de consumo tais como filmes, recipientes, objetos diversos etc.
As empresas devem responder s mudanas do mercado ajustando-se rapidamente a qualquer
variao de preo da matria-prima ou da energia. Para subsistir, uma indstria ter que reagir com
versatilidade, mediante o desenvolvimento de processos tecnolgicos inovadores e rentveis. Os
processos descartados podero ser reutilizados, se a condio do mercado tornar-se favorvel
novamente.
Um exemplo tpico a evoluo do mercado da acetona. Subproduto da corrida borracha sinttica
durante a Primeira Guerra Mundial, a acetona passou a ser um produto indispensvel para a indstria
de armamentos. Uma vez concludo o conflito, reapareceu como solvente essencial na fabricao de
lacas, uma funo da qual seria afastada mais tarde por outras substncias.
A indstria qumica do sculo XX se baseou, principalmente, no petrleo e seus derivados. A crise
dos anos 1970 chamou a ateno da sociedade para os riscos da dependncia de um recurso no
renovvel. A diminuio das reservas conhecidas cria a necessidade de apelar a tecnologias de
extrao novas e caras, geralmente insustentveis. A situao poder mudar quando, respondendo
aos apelos da sociedade para diminuir as emisses de carbono, o petrleo seja substitudo parcial ou
totalmente, por fontes de energia alternativas.
A VIA BIOTECNOLGICA
A via biotecnolgica est baseada na transformao da biomassa, um recurso barato e renovvel. Para
substituir a via qumica, devem-se desenvolver processos que possibilitem a obteno de produtos,
materiais e energia a um custo competitivo e com menor impacto ambiental. Todas estas condies
se encontram satisfeitas na obteno de numerosas molculas de interesse industrial, a partir de
milho, de leos vegetais ou de madeira (Tabela 10.1).
-------------TABELA 10.1. Diversidade de produtos derivados de algumas matrias-primas renovveis
SETOR
MATRIA-PRIMA
COMPONENTES
APLICAES
Acar e
amido
Cana-de-acar, beterraba
aucareira, sorgo sacarino, trigo,
milho, batata, arroz, mandioca
etc.
Acar, amido,
melao.
leos
vegetais
Triglicerdeos,
cidos graxos,
glicerol.
Madeira
Pinho, eucalipto.
Celulose, papel e
lignina.
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BIOTECNOLOGIA E INDSTRIA
LCOOIS E SOLVENTES
Vimos previamente alguns aspectos histricos relacionados com a produo de acetona e butanol por
fermentao. Estima-se que a imobilizao de microrganismos daria um novo impulso sntese de
solventes, aumentando a produtividade em aproximadamente 60%. Tambm deve-se destacar a
importncia do etanol, 95% do qual produzido por via biotecnolgica.
CIDOS ORGNICOS
A produo de cido ctrico (4.0 x 105 toneladas/ano) depende quase exclusivamente do cultivo do
fungo filamentoso Aspergillus niger, em processos fermentativos de diversos tipos. O cido ctrico
utilizado na indstria de alimentos como aditivo (acidulante e antioxidante), na cosmtica como
regulador do pH e, na indstria farmacutica, como anticoagulante e ingrediente de tabletes
efervescentes.
Em relao ao cido actico, os processos industriais modernos tambm dependem da ao
bacteriana (gneros Acetobacter, Gluconacetobacter e Gluconobacter). Com numerosas aplicaes, o
cido actico um precursor de vrias molculas intermedirias, como o anidrido actico e os acetatos
ster, e de produtos como o acetato de celulose, o celofane, o acetato raiom etc. Tambm participa
como solvente na produo de borracha, plsticos, gomas, resinas e leos volteis. A indstria
farmacutica o utiliza como acidificante.
O cido lctico obtido por fermentao bacteriana (Lactobacillus) ou fngica (Rhizopus oryzae),
sendo um importante insumo para as indstrias de alimentos e de frmacos e a cosmtica. Tambm
toma parte, como monmero, na sntese de um polmero biodegradvel, o cido polilctico (PLA).
O cido succnico encontra aplicaes em vrias indstrias (alimentos, frmacos, cosmtica), assim
como na produo de plsticos e de materiais para a indstria automotora. Trata-se de outro bloco
fundamental para a sntese de polmeros, resinas de ABS (acrilo-nitrilo-butadieno), Nylon 6.6,
solventes etc.
AMINOCIDOS
A produo industrial de aminocidos se destina, principalmente, nutrio humana (66%) e ao
enriquecimento de raes animais (33%) e, em menor grau, s indstrias farmacuticas e cosmticas
(1%). O mtodo produtivo mais antigo a extrao, por hidrlise de protenas (soja, cabelos); os outros
mtodos incluem a sntese, a fermentao e a biocatlise.
A sntese qumica apresenta o inconveniente de gerar misturas das duas formas isomricas (acil-D
e acil-L), representadas habitualmente como tipo mo direita" e tipo "mo esquerda". Como os
organismos vivos s assimilam L-aminocidos, estes devem ser separados das misturas racmicas por
biocatlise. A imobilizao de enzimas estereoespecficas nos biorreatores facilita a produo
industrial, reduzindo os custos de maneira significativa. Observe-se que a separao desnecessria
no caso da glicina, que no apresenta ambas as formas, e da DL-metionina, j que os seres vivos
convertem a forma D em L.
A via fermentativa conveniente para a produo de vrios aminocidos. O agente biolgico
Corynebacterium glutamicum produz cido glutmico (1,1 milho de toneladas/ano), que usado na
cozinha oriental como flavorizante (glutamato monossdico), para realar o sabor dos alimentos.
A L-fenilalanina e o cido L-asprtico so obtidos por imobilizao conjunta de Escherichia coli e
Pseudomonas dacunhae, em uma coluna de fermentao, ou por uma bactria geneticamente
modificada (Escherichia coli). Ambos so os componentes do adoante no calrico Aspartame
(15.000 toneladas/ano).
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TABELA 10.2. Metablitos primrios e secundrios obtidos por fermentao e/ou bioconverso enzimtica
METABLITOS PRIMRIOS
EXEMPLOS
lcoois e solventes
cidos orgnicos
cido lctico, cido ctrico, cido actico, cido glucnico, cido itacnico, cido
mlico, cido tartrico, cido pirvico, cido succnico.
Aminocidos
Polissacardeos
Nucleotdeos e nucleosdeos
Vitaminas
Corantes
METABLITOS SECUNDRIOS
EXEMPLOS
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BIOTECNOLOGIA E INDSTRIA
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BIOTECNOLOGIA E INDSTRIA
FIGURA 10.1. As etapas necessrias para a produo de etanol a partir de diferentes matrias-primas
BIOMASSA AMILCEA
BIOMASSA SACARINA
Hidrlise enzimtica
BIOMASSA CELULSICA
ETANOL
--------------
A tecnologia fermentativa nos oferece combustveis eficientes, como o etanol ou o biogs. Existem
outras possibilidades, tais como a obteno de biodiesel por transformao qumica de leos vegetais
e, futuramente, a produo de hidrognio a partir de gua, utilizando a capacidade fotossinttica das
microalgas.
Os biocombustveis contribuem para reduzir alguns dos problemas ambientais que tanto nos afligem,
tais como a acumulao de CO2 e outros gases de efeito estufa (xido nitroso e metano). Nos pases
que os adotam, os biocombustveis substituem a gasolina, parcial ou totalmente, modificando a
realidade do setor de transportes.
Curiosamente, os primeiros automveis de Henry Ford, com motores de ignio por centelha,
funcionavam com etanol de milho, e os primeiros motores de Rudolf Diesel, de ignio por
compresso, o faziam com leo de amendoim. Com o petrleo barato, passou-se a utilizar gasolina e
leo diesel para os automotores, mas o aumento dos preos, ocorrido na dcada de 1970, mostrou a
convenincia de substituir os derivados do petrleo por etanol e biodiesel.
Atualmente, o etanol o principal biocombustvel lquido para transporte. A maior parte da
produo (90%) est concentrada no Brasil e nos Estados Unidos, como produto da fermentao da
cana-de-acar e do milho, respectivamente. Os outros pases produtores so o Canad, a China, a
Unio Europeia (Frana e Alemanha) e a ndia.
Embora um litro de etanol fornea bem menos energia que um litro de gasolina (66%), sua maior
octanagem melhora o desempenho das misturas etanol-gasolina. At que ponto o etanol ser capaz
de substituir a gasolina? A resposta depender da tecnologia disponvel, do processo produtivo e do
preo do petrleo. Estima-se que, no Brasil, o bioetanol de cana-de-acar seria competitivo com o
barril de petrleo a US$ 30-35; nos Estados Unidos, onde o etanol se produz a partir de milho, isso
ocorreria com o barril de petrleo a US$ 55-80.
No entanto, a produo de etanol a partir de biomassa levanta alguns problemas. Como os cultivos
do milho e da cana demandam muita gua, procura-se encontrar outras fontes menos exigentes:
pinho-manso, sorgo sacarino, capim (Panicum virgatum) e outras gramneas perenes (Miscanthus).
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Uma fonte de controvrsia o desvio de matrias-primas alimentcias, como o milho ou a soja, para a
produo de biocombustveis, porque redunda no aumento do preo dos alimentos e penaliza os
setores mais pobres da populao. Tambm preocupa a expanso dos cultivos agroindustriais,
favorecendo o desmatamento e afetando a biodiversidade. A soluo parece estar na obteno de
etanol a partir de resduos lignocelulsicos, uma tecnologia complexa, ainda em desenvolvimento
(Figura 10.1).
O ETANOL
A PRODUO POR VIA FERMENTATIVA
A produo de etanol pela via biotecnolgica envolve a ao fermentativa de leveduras sobre um
substrato adequado: cana-de-acar, beterraba aucareira, sorgo sacarino, milho. No Brasil, a matriaprima a cana-de-acar (Figura 10.2).
Aps a colheita, a cana transportada at a usina onde triturada, separando o caldo do bagao, que
utilizado como combustvel, gerando calor e eletricidade para o prprio estabelecimento. Reservase o caldo produo de acar ou de etanol. Um subproduto da produo de acar, o melao,
reincorporado ao processo produtivo de sacarose ou misturado ao caldo de cana para a obteno de
etanol.
Antes de dar incio fermentao, so acrescentados no caldo os nutrientes e antisspticos
necessrios, ajustando-se tambm outros parmetros, como a temperatura e o pH. O processo
fermentativo ocorre nas dornas (biorreatores) por obra das leveduras, naturais ou selecionadas. A
conduo do procedimento, contnua ou descontnua, depende do estabelecimento assim como da
complexidade e automao dos equipamentos disponveis. Concluda a fermentao, recuperam-se as
leveduras por centrifugao, com vistas a uma posterior reutilizao e/ou produo de rao animal.
Da destilao do vinho se obtm a flegma, um lquido com lcool em maior concentrao, e um
resduo denominado vinhaa ou vinhoto, que deve ser tratado antes de despejado no ambiente. A
retificao, isto , a eliminao das impurezas da flegma, gera o lcool hidratado, que convertido em
lcool anidro por desidratao.
A SUBSTITUIO DA GASOLINA O CASO DO BRASIL
No Brasil, 63% da energia provm de fontes renovveis: grandes hidroeltricas (42%), madeira (10%),
cana-de-acar (9%), outras (2%). A contribuio da cana-de-acar est diretamente relacionada com
o uso do etanol como combustvel.
Calcula-se que 60% da cana-de-acar plantada no Brasil destina-se produo de etanol por
fermentao. Em outros pases utilizam-se matrias-primas diferentes, tais como a beterraba
aucareira (Unio Europeia) ou o milho (Estados Unidos). A desvantagem das matrias-primas
amilceas que demandam um tratamento enzimtico (sacarificao), antes da fermentao (Figura
10.1).
A crise do petrleo, na dcada de 1970, provocou um aumento significativo do preo, mostrando a
necessidade de substituir a gasolina por outras fontes de energia. Em 1975, o Brasil instituiu o
Programa Nacional do lcool (Pr-lcool), visando a produo de etanol como combustvel alternativo
para os carros de passeio. Pouco tempo depois, na dcada de 1980, 5.000.000 de carros funcionavam
com etanol (94% de etanol, 6% de gua), e outros 9.000.000 com uma mistura de lcool e gasolina
(78% de gasolina, 22% de lcool).
Em 1989, a queda do preo do petrleo e os problemas inerentes ao prprio Pr-lcool (subsdios,
baixa produtividade) provocaram uma crise de desabastecimento, abalando seriamente o programa.
122
BIOTECNOLOGIA E INDSTRIA
Reativado na dcada de 1990, desta vez obedecendo a critrios de produtividade, tanto na lavoura
como na indstria, o programa deixou de receber subsdios.
Hoje, mais de trs milhes de carros so movidos com lcool hidratado, enquanto o lcool anidro
aditivado gasolina, em uma proporo que varia entre 20 e 24%, dependendo da relao
oferta/procura. A introduo, em 2003, da tecnologia flexfuel, que permite abastecer os carros tanto
com gasolina como com lcool hidratado, deixa ao consumidor a possibilidade de escolher o
combustvel, em funo de consideraes econmicas e ambientais.
A produo de etanol no Brasil, estimada em 29,2 bilhes de litros, passa por uma fase de pouco
crescimento, devido s polticas energticas. O setor sucroalcooleiro de hoje um enorme complexo
-------------FIGURA 10.2. A produo de etanol a partir da cana-de-acar
LAVOURA
Transporte
CANA-DE-ACAR
Triturao e extrao
CALDO, GARAPA
OU MOSTO
BAGAO Combustvel
LEVEDURAS
Reaproveitamento
Fermentao
MELAO
ACAR
CO2
VINHO
Destilao
FLEGMA
VINHAA Fertilizante
Retificao
ETANOL HIDRATADO
Desidratao
ETANOL ANIDRO
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BIOTECNOLOGIA E INDSTRIA
ACETATO
Aerobiose
H2O
Anaerobiose
CO2
H2 O
CH4
CO2
BIOGS
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MATRIA-PRIMA
MOLCULAS COMPLEXAS
Microrganismos fermentativos
MOLCULAS SIMPLES
Bactrias acidognicas
BIODIGESTOR
CIDOS E LCOOIS
Bactrias acetognicas
ACETATO
Bactrias metanognicas
BIOGS
GS
Butano
Propano
Metano
GS
Gs natural
Biogs
Gs de cidade
BIOGS
PLANTAS PURIFICADORAS
E DE ARMAZENAMENTO
ENERGIA TRMICA
ENERGIA ELTRICA
COMBUSTVEL
TRANSPORTE AUTOMOTOR
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BIOTECNOLOGIA E INDSTRIA
O BIODIESEL
A TRANSESTERIFICAO
O biodiesel um combustvel composto por steres (etlicos ou metlicos) produzidos na reao
qumica de transesterificao entre leos vegetais e lcool (etanol ou metanol), em presena de um
catalisador inorgnico ou enzimtico (lpases) (Figura 10.6).
Um dos subprodutos da reao o glicerol (5 a 10% do produto bruto), geralmente aproveitado
pelas indstrias de alimentos, de cosmtica e de medicamentos. Diferentemente do bagao de cana,
o glicerol gera uma substncia txica (acrolena) quando queimado, de modo que aumentar a
produo de biodiesel significa aumentar o leque de aplicaes do glicerol.
O biodiesel fornece entre 88 e 95% da energia do diesel, mas pode ser misturado com o diesel
convencional, em proporo variando de 1% (B1) a 20% (B20), aumentando a qualidade do
combustvel e diminuindo a emisso de partculas poluentes e de gases txicos na atmosfera.
-------------FIGURA 10.6. A reao de transesterificao
H2C O CO R
HC O CO R
CH2OH
+
3R OH
H2C O CO R
Triglicerdeos
HCOH
3R O CO R
CH2OH
lcool
Glicerol
steres
--------------
A PRODUO DE BIODIESEL
A produo de biodiesel est localizada principalmente na Unio Europeia (60%) e, em menor parte,
nos Estados Unidos, na China, na Indonsia e na Malsia. A matria-prima variada: soja nos Estados
Unidos, canola na Unio Europeia e no Canad, soja e girassol na Argentina, dend na sia. No Brasil,
tem-se experimentado soja, mamona, babau, dend, girassol, milho, amendoim, pinho-manso etc.
A implementao do Programa Nacional de Produo e Uso de Biodiesel (PNPB) estimula a
produo sustentvel, enfatizando a incluso social e o desenvolvimento regional. Desde 2010,
adiciona-se no Brasil 5% de biodiesel ao diesel convencional, estimando-se que a proporo chegue a
20% at 2020.
Restam alguns pontos a considerar, especialmente em relao utilizao de matrias-primas
como a mamona, com o intuito de estimular o pequeno agricultor. Em princpio, o biodiesel carbononeutro. No entanto, diferente do etanol de cana, o sistema produtivo seria carbono-negativo, quando
se leva em conta a energia necessria para adubao e irrigao da terra, a movimentao da
maquinaria agrcola, o armazenamento e transporte da matria-prima e dos produtos etc.
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Do ponto de vista energtico, os sistemas produtivos tradicionais mais eficientes seriam os associados
aos complexos agroindustriais (soja, milho, girassol), embora apresentem o grave defeito de desviar
para a produo de energia as matrias-primas de alimentos e raes.
O PANORAMA ATUAL
A primeira gerao de biocombustveis abrange o etanol (acar de cana-de-acar, sorgo sacarino ou
beterraba, amido de milho) e o biodiesel (leos vegetais). A segunda gerao de bioetanol utilizaria
biomassa lignocelulsica proveniente dos resduos agroindustriais, tais como bagao e folhas de cana,
palha e sabugo de milho, serraduras e aparas de madeira etc.
A maior dificuldade reside na prpria estrutura da matria-prima lignocelulsica. A celulose
(polmero de hexoses) e a hemicelulose (polmero de hexoses e de pentoses) se encontram
circundadas por lignina, uma substncia de suporte das plantas, sendo necessrio um pr-tratamento
que as separe, possibilitando a hidrlise enzimtica e a liberao de acares fermentescveis (hexoses
e pentoses).
Equipamentos com o design apropriado e enzimas celulolticas (celulases e hemicelulases) para uso
indstrial j esto a caminho. Algumas indstrias funcionam experimentalmente na Sucia, na
Espanha, na Dinamarca, no Canad e nos Estados Unidos. O Brasil conta, desde 2013, com uma
instalao piloto em Alagoas (GranBio).
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BIOTECNOLOGIA E INDSTRIA
Escherichia coli
ARTEMISINA
Saccharomyces cerevisiae
B.
Produtos gerados na plataforma tecnolgica baseada na engenharia metablica da levedura (via dos
isoprenoides ou terpenos)
MATRIA-PRIMA (Acar)
ARTEMISINA (antimalrico)
BIOFENO
Farneseno (C15)
Farnesano
NEOSSANCE
Esqualeno e
Hemiesqualeno
COSMTICOS
Isopreno (C5)
COMBUSTVEL DE AVIAO
Isoprenoides (C10)
POLMEROS
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A empresa conta hoje com leveduras capazes de transformar a cana de acar (Amyris do Brasil) ou o
sorgo sacarino (Amyris Fuels, Estados Unidos) em biodiesel ou combustvel de avio, este ltimo
testado em parceria com a empresa TOTAL. Atualmente, a plataforma tecnolgica do farneseno
renovvel pode sintetizar mais de 1.000 produtos, entre combustveis, cosmticos, emolientes,
fragrncias, polmeros, lubrificantes e biofrmacos.
De particular interesse so o esqualeno e hemiesqualeno, derivados do farneseno, que compem
a linha Biossance, um emoliente com numerosas aplicaes em cosmtica, inclusive na remoo de
maquillage.
O CASO SOLAZYME (TerraVia)
Assim como as plantas, as microalgas sintetizam e acumulam lipdios. Existem dois mtodos clssicos
para o cultivo de microalgas autotrficas, ambos com algumas vantagens e desvantagens. Os grandes
tanques ao ar livre aproveitam terras no cultivveis, gua salobra e luz solar, mas contaminam com
facilidade. Os fotobiorreatores fechados contaminam muito menos, mas so mais caros, porque
demandam iluminao artificial e certa complexidade tecnolgica.
A empresa Solazyme modificou geneticamente a alga heterotrfica Prototheca moriformis, de
modo a produzir grande quantidade de leos vegetais (triglicerdeos) e bioprodutos a partir de uma
matria-prima que pode ser sacarose de cana, dextrose de milho e, inclusive, materiais de origem
celulsicos (Figura 10.8).
Em relao ao biodiesel, o uso de algas para a produo de hidrocarbonetos e triacilglicerdeos
permitiria dedicar terras frteis e gua doce produo de alimentos. Por outro lado, a adio de
bioquerosene ao querosene diminuiria os custos do combustvel de avio. A plataforma tecnolgica
permite a produo de biodiesel, surfactantes, lubricantes, polmeros, leos comestveis, suplementos
nutricionais etc.
Recentemente, a empresa Solazyme mudou seu nome para TerraVia anunciando que no futuro sua
plataforma estaria dedicada produo de produtos alimentcios (protena, lipdios, leos de cozinha)
e cosmticos. Um dos produtos de sucesso o Algenist um emoliente para a pele, de interesse
cosmtico, que pode ser encontrado em grandes redes de distribuio dos Estados Unidos, da Europa
e do Japo (Sephora).
-------------FIGURA 10.8. O caso Solazyme
Triglicerdeos
ALIMENTOS E RAES
(Suplementos nutricionais, leos comestveis)
COSMTICA (emolientes, Algenist para o cuidado da pele)
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C A P T U L O 11
O DESENVOLVIMENTO SUSTENTVEL
Qual o impacto das atividades humanas sobre o meio ambiente? Que legado deixaremos para as
prximas geraes? Da resposta emerge o conceito de desenvolvimento sustentvel, definido como
a capacidade de atender s necessidades do presente, sem comprometer a capacidade das geraes
futuras em atender suas prprias necessidades (Informe Brtland, 1987).
O desenvolvimento sustentvel depende das aes realizadas nas reas econmica, social e
ambiental. Esse o consenso alcanado ao longo de mais de duas dcadas, de vrias conferncias
internacionais (Rio de Janeiro, 1992 e Agenda 21; Kyoto, 1997; Johanesburgo, 2002; Copenhague,
2009; Cancn, 2010; Durban, 2011; Rio de Janeiro, 2012) e dos acordos alcanados, na Agenda 21 e
nas Conferncias das Partes sobre Biodiversidade e Clima. Os relatrios publicados, em 2007, pelo
Painel Intergovernamental sobre Mudanas Climticas (IPCC) apontaram a responsabilidade do
homem no futuro do planeta, indicando que no podem ser proteladas as aes concretas de proteo
do meio ambiente.
Qual a contribuio das biotecnologias para o desenvolvimento sustentvel? Em relao
economia, diminuir os custos no s da matria-prima como da produo industrial, com processos e
produtos novos e/ou de maior valor agregado. Na rea social, possibilitar a conservao ou a criao
de empregos atravs do desenvolvimento de novas plataformas tecnolgicas. E, na rea ambiental,
cumprir um importante papel na preveno, no monitoramento e na remediao da contaminao.
Pensar globalmente, agir localmente. Os problemas ambientais so muito pontuais, cada um deles
demanda um tratamento particular, e o procedimento deve ter uma relao custo/benefcio
interessante. Nem sempre existe um produto a patentear; havendo um servio a prestar, a tecnologia
fica a cargo de organizaes governamentais ou de firmas que agem localmente. A fim de responder
s diversas demandas do mercado, algumas contam com uma plataforma de produo de
microrganismos, isolados da natureza, em escala industrial.
AS TECNOLOGIAS LIMPAS
Pouco a pouco, a sociedade est aceitando que prefervel deixar de contaminar, a desenvolver
mtodos para limpar o ambiente. No contexto das chamadas "biotecnologias brancas", vrias
tecnologias limpas podem substituir outras mais poluentes, ajudando tambm a reduzir o volume de
resduos domsticos, agrcolas e industriais.
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MADEIRA
Lignina + celulose + hemicelulose
Extrao alcalina a alta temperatura
Lignina (90%)
PASTA KRAFT
Lignina (10%) + celulose + hemicelulose
EFLUENTE
POLPA BRANCA
EFLUENTE
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PRAGA COMBATIDA
Diversas, florestais.
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No Brasil, existem atualmente numerosos produtos a base de Bacillus thuringiensis para o combate s
pragas que afetam a agricultura, comercializados com diferentes nomes (Bac-control, Bactur, Dipel,
Ecotech, Thuricide etc.) por vrias empresas nacionais e estrangeiras (Vectorcontrol, Milenia,
Sumitomo, Bayer, Iharabras etc.).
Com o desenvolvimento da engenharia gentica, os genes correspondentes foram transferidos a
vrias plantas (milho, algodo etc.) que agora produzem diretamente a toxina inseticida. Baseado no
conhecimento da ecologia dos agroecossistemas, o controle biolgico permite o Manejo Integrado de
Pragas (MIP). No Brasil, deve-se destacar o trabalho da Embrapa e de vrias universidades visando a
preservao das plantaes e a salvaguarda da produo de alimentos.
A formao de nuvens de gafanhotos, uma das pragas mais temidas da humanidade, atualmente
monitorada e companhada por via satlite. A aplicao do feromnio PAN (fenilacetonitrilo) induz a
disperso dos insetos e sua volta a um comportamento solitrio. No combate aos gafanhotos tambm
so utilizados reguladores de crescimento e, como biopesticida, o fungo Metarrizhium anisopliae
varacridum.
O controle biolgico envolve, alm do uso de feromnios, armadilhas e atrativos alimentares.
Alguns procedimentos so econmicos e muito engenhosos, como o desenvolvido em Cuba para
combater o tetun del camote, um gorgulho (Cylas formicarius) que ataca a batata-doce. Pendura-se
na plantao uma lata com uma pequena quantidade de feromnio, pulverizando em redor esporos
do fungo Beauveria bassian. Atrados pelo feromnio, os machos se aproximam da lata e so
contaminados mortalmente pelo fungo, que incuo para os seres humanos, os animais e as plantas.
Para Cuba, a experincia de vrias dcadas de trabalho com controle biolgico resultou crucial
quando, devido ao embargo propiciado por Estados Unidos, o pas teve que substituir o uso de
agrotxicos nas lavouras. Atualmente, o programa cubano de controle biolgico de pragas envolve
laboratrios regionais, estaes de defesa vegetal, postos equipados com laboratrios de diagnsticos
e mais de 200 centros de reproduo de entomfagos e entomopatgenos.
BIOINSETICIDAS VS. INSETICIDAS QUMICOS
Em 2016, o Brasil vive uma situao sanitria dramtica, devido proliferao do mosquito Aedes
aegypti, cuja fmea transmissora de vrias doenas de origem viral: dengue, chikungunya, zika. Em
fins do sculo XIX e incio do sculo XX, o Aedes causou epidemias terrveis de febre amarela, sendo
erradicado das zonas urbanas graas ao pioneira de Oswaldo Cruz. Por falta de saneamento bsico
e de medidas de combate eficientes, hoje, o mosquito est novamente disseminado no Brasil e no
restante das Amricas.
A primeira medida para diminuir o nmero de focos do mosquito a eliminao das guas paradas,
onde ele deposita os ovos e as larvas proliferam. Se isso no for feito, dever se apelar para os
inseticidas qumicos, como o Pyriproxyfen, um produto para uso em campanhas de sade pblica.
Inseticidas qumicos podem ser substitudos por bioinseticidas. Desenvolvido a partir de estudos da
Embrapa Recursos Genticos e Biotecnologia, a empresa Bthek Biotecnologia comercializa um
bioinseticida que tem como ingrediente ativo a bactria Bacillus thuringiensis israelensis e permite o
controle das larvas do mosquito (Aedes aegypti) e do borrachudo (Simulium spp.).
Outra das armas para evitar a transmisso de doenas por Aedes aegypti contempla a infeco da
populao natural do mosquito pela bactria Wolbacchia pipientes, um parasita intracelular frequente
em vrias espcies de insetos, sem risco algum para os vertebrados.
Os mosquitos infetados com Wolbacchia no transmitem dengue e passam a bactria a sua
descendncia. Como o acasalamento de uma fmea no infetada com um macho infetado estril,
basta liberar mosquitos infetados com Wolbacchia para que a infeco com Wolbacchia se espalhe,
diminuindo o nmero dos transmissores de dengue.
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Pupa
Ovos (100-200)
4 a 5 dias
2 a 3 dias
Larva
Ovos infetados
Cruzamentos possveis
Criao de mosquitos
Pupas
Irradiao
Seleo
adultos estreis
Mosquitos
transgnicos
Mosquitos
da natureza
Sem tetraciclina,
as larvas morrem
Seleo
(com tetraciclina)
Acasalamento
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AR
GUA
FONTE DE NITROGNIO
CALOR
CO2
GUA
OUTRAS SUBSTNCIAS
COMPOSTO
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Em tanques de lodo ativado (2), onde o meio agitado e oxigenado, mediante a injeo de ar
comprimido.
o Tratamento tercirio.
Este realizado para eliminar substncias inorgnicas e orgnicas, envolvendo procedimentos
como a filtrao, a volatilizao da amnia, a precipitao de fosfato etc.
o Tratamento avanado.
A degradao microbiana dos resduos orgnicos diminui consideravelmente a carga de
microrganismos patognicos liberada no ambiente, mas no a elimina totalmente. Os
microrganismos patognicos recalcitrantes s podem ser eliminados mediante alguns mtodos
adicionais, como a clorao, a irradiao UV e o tratamento com oznio.
-------------FIGURA 11.4. O tratamento das guas residuais
ESGOTO
Fossas spticas
Gradeamento
Lagoas de oxidao
Tanque de areia
EFLUENTE
Tanque de
sedimentao
Tanque de
sedimentao
Lodo ativado (2 )
EFLUENTE
Lodo
EFLUENTE
Lodo
Biodigestor
anaerbico
RESDUO
SLIDO
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Outro caso interessante o dos efluentes das indstrias de laticnios, utilizados como matria-prima
para o crescimento de microrganismos que, posteriormente, sero adicionados s raes animais. De
forma anloga, o licor sulftico dos efluentes da indstria de papel e celulose pode ser eliminado
produzindo biomassa, com o fungo Paecilomyces.
Em 2014, a enxurrada de lama provocada pela ruptura de uma barragem, com o refugo de extrao
de minrio da empresa Samarco, causou 17 mortes, alm da destruio do vilarejo de Bento Rodrigues
e a contaminao do Rio Doce. A tragdia de Mariana, considerada o pior acidente da histria da
minerao, reflete o descaso de algumas empresas com o meio ambiente.
diferena dos resduos agrcolas e urbanos, que so biodegradados, os metais procedentes das
atividades extrativas e industriais (cdmio, zinco, chumbo, selnio) permanecem no ambiente, em
concentraes txicas. Sua absoro e concentrao (bioacumulao) por plantas tolerantes aos
metais reduz a toxicidade do solo e facilita sua remoo em faixas de terreno pouco profundas.
Existem j plantas geneticamente modificadas para transformar os compostos organomercuriais
formados em diversas atividades (extrao de carvo e de ouro etc.) em uma forma voltil muito
menos txica.
Em relao aos resduos gasosos de processos industriais, o tratamento de compostos orgnicos
volteis (VOCs, da sigla em ingls) feito mediante filtros biolgicos de diferentes tipos e
complexidade tecnolgica.
AS EMISSES DE GASES E O EFEITO ESTUFA
Existem fontes naturais de gases, como os vulces e os cupins. Estes, devido atividade da flora
intestinal simbionte que lhes permite digerir celulose, liberam 40 milhes de toneladas de metano por
ano. No entanto, o homem o principal responsvel pela emisso dos gases que causam o efeito
estufa, atravs de atividades como o depsito do lixo em aterros sanitrios, o cultivo do arroz, a criao
de gado, a liberao de efluentes agroindustriais sem tratamento e a queima de combustveis fsseis
(petrleo, gs natural e carvo).
Os nveis de metano atmosfrico so hoje duas vezes maiores que na era pr-industrial, um dado
preocupante, sabendo que a contribuio do metano para o efeito estufa 20 vezes superior do
dixido de carbono. Embora sua utilizao como combustvel elimine uma fonte de contaminao
atmosfrica, a rentabilidade do processo nem sempre justifica o seu aproveitamento.
Vrias iniciativas tendem a recuperar o metano dos aterros sanitrios e utiliz-lo como combustvel
alternativo. A Amrica Latina, que emite 6% dos gases contaminantes, j est entrando neste mercado
com vrios projetos de reaproveitamento do metano (aterros sanitrios, resduos agroindustriais) na
Argentina, no Brasil, no Chile, em Cuba, no Mxico, no Uruguai. As iniciativas dependem de empresas
privadas e/ou de organismos governamentais; alguns estudos preliminares contaram com
financiamento do Banco Mundial.
Em relao gasolina, a combusto dos biocombustveis (mistura gasolina-etanol ou etanol puro)
emite quantidades menores de monxido de carbono (CO), xidos de enxofre (SOx), hidrocarbonetos
e outros compostos poluentes. Em compensao, liberam-se aldedos cancergenos e, dependendo do
motor, xidos de nitrognio (NOx). Apesar disso, estima-se que, entre 2004 e 2008, o uso de
biocombustveis na frota flexfuel brasileira teria deixado de liberar na atmosfera 35 milhes de
toneladas de CO2. Calcula-se tambm que, para que essa economia fosse de 530 milhes de toneladas
de CO2, bastaria misturar com lcool apenas 10% da gasolina disponvel no planeta.
O Protocolo de Kyoto (1997) previa a reduo da emisso de gases contaminantes (dixido de
carbono, metano, xidos nitrosos e clorofluorocarbonetos). Ratificado por numerosos pases, mas no
por Estados Unidos nem Rssia, responsveis respectivamente por 36% e 17% das emisses, o
protocolo de Kyoto no teve ainda os resultados esperados.
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TCNICAS IMUNOLGICAS
As tcnicas imunolgicas utilizam anticorpos especficos, marcados ou associados a enzimas. As
tcnicas imunoenzimticas, cujos resultados podem ser apreciados, simplesmente, por uma mudana
de cor, resultam especialmente apropriadas para os testes de campo. Substituem testes tradicionais e
lentos, que exigem um equipamento complexo, como os de presena de coliformes na gua.
Imunoensaios de diversos tipos permitem o monitoramento contnuo, automatizado e barato de
pesticidas como o dieldrin, o parathion e os PCBs.
BIOSSENSORES
Os biossensores combinam diferentes componentes biolgicos e eletrnicos, geralmente sob a forma
de um chip; alguns so muito seletivos, outros so sensveis a um amplo espectro de substncias.
O componente biolgico pode ser uma enzima, um anticorpo ou um microrganismo. Respondendo
a um estmulo ambiental se verifica uma mudana em suas propriedades, mudana que detectada
ptica ou eletronicamente, fornecendo uma medida quantitativa do contaminante (Figura 11.5).
Bactrias ou leveduras imobilizadas revelam a presena de uma determinada substncia, seja
porque a metabolizam, seja porque esta inibe o prprio metabolismo microbiano. Especialmente
interessante a utilizao de organismos geneticamente modificados, associando o promotor do gene
de uma enzima, que reage com a substncia procurada (arsnico, por exemplo), com genes indicadores
(luminescncia, fluorescncia ou produo de uma substncia colorida).
-------------FIGURA 11.5. O funcionamento de um biossensor
O sinal aumenta ou diminui em funo da concentrao do substrato contaminante, que estimula ou inibe a ao do agente
biolgico.
Substrato
Membrana
Biodetector imobilizado
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A BIORREMEDIAO
Como resultado das atividades humanas, aproximadamente 2,5 milhes de toneladas de substncias
qumicas perigosas so liberadas anualmente no meio ambiente (Tabela 11.2). Em alguns casos, tratase de emisses deliberadas e regulamentadas (resduos industriais), em outros, de escapamentos
acidentais (manchas de leo ou de petrleo).
Muitas das substncias qumicas presentes no ambiente foram geradas pelo homem. Algumas
podem ser degradadas, em poucos meses, por algum organismo; outras persistem na natureza
durante um longo tempo. Consideradas recalcitrantes, essas molculas so alheias ao mundo dos seres
vivos (xenobiticas). No so biodegradadas ou, quando o so, o processo lentssimo, podendo
demorar centenas de anos.
Existem vrias estratgias para retirar substncias recalcitrantes do meio ambiente (Figura 11.6).
As opes contemplam a construo de barreiras fsicas, a lavagem ou ventilao do solo contaminado
e sua destruio, por incinerao ou por biorremediao. Para que esta ltima possa ser aplicada,
necessrio que o poluente seja transformado metabolicamente por algum agente biolgico, que os
produtos finais sejam seguros e que as condies ambientais favoream a atividade microbiana.
-------------TABELA 11.2. Os principais contaminantes do meio ambiente
CATEGORIA
EXEMPLO
Inorgnicos
Metais (cdmio, mercrio, prata, cobalto, chumbo, cobre, cromo, ferro), istopos radiativos,
nitratos, nitritos, fosfatos, cianetos, asbestos.
Orgnicos
Gasosos
Gases: dixido de enxofre (SO2), dixido de carbono (CO2), xidos nitrosos (NOx), metano (CH4).
Compostos volteis: clorofluorocarbonetos (CFCs), compostos orgnicos volteis (VOCs).
Microrganismos
do ambiente
Microrganismos
selecionados
Microrganismos geneticamente
modificados (em sistema fechado)
MEIO CONTAMINADO
Otimizao dos fatores que estimulam
a ao bacteriana (estrutura do solo,
pH, aceptores de eltrons).
Suplemento de nutrientes
MEIO DESCONTAMINADO
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Uma forma de biorremediao o tratamento in situ, que envolve a produo de biomassa especfica
no local contaminado. Bactrias e/ou fungos do ambiente digerem o material txico, transformandoo em produtos inofensivos, voltando posteriormente a seu nvel populacional normal no ambiente ou
morrendo. O crescimento da populao microbiana pode ser estimulado pelo acrscimo de nutrientes.
Outra forma de biorremediao dos solos contaminados o tratamento ex situ, em que o solo
escavado transferido a um biodigestor. Como a liberao de microrganismos geneticamente
modificados no ambiente vista com extrema desconfiana, sua utilizao costuma estar restringida
a esses sistemas fechados.
Uma das razes dessa desconfiana pode ser atribuda Conferncia de Asilomar. Em 1975, a
preocupao principal dos pesquisadores era a conteno dos microrganismos geneticamente
modificados, recomendando o uso de microrganismos fracos que, eventualmente, no sobrevivessem
no ambiente. Essas condies eram fundamentais para a continuidade das pesquisas, apesar de ter
estimulado o medo e a hostilidade da sociedade, em relao liberao de microrganismos
geneticamente modificados engenherados no ambiente.
Na dcada de 1980, com o objetivo de evitar o congelamento dos cultivos de morango da Califrnia,
a empresa AGS (Advanced Genetic Sciences) desenvolveu a bactria Pseudomonas syringae,
geneticamente modificada para eliminar uma protena que facilitava a formao de gelo.
Boa parte da opinio pblica se mostrou totalmente contrria utilizao da P.syringae, variedade
ice minus, temendo que alterasse a composio das nuvens e o regime de chuvas. Em 1987, um
processo judicial culminou com a autorizao para realizar os testes de campo correspondentes. Os
experimentos foram bem-sucedidos, mas, em funo da resistncia encontrada, a empresa
abandonou o projeto.
Em compensao, AGS comercializou Snowmax, um produto criado para aumentar a eficincia da
maquinaria produtora de neve artificial. Um dos principais ingredientes era a variedade convencional
de P. syringae, produtora da protena facilitadora da formao de gelo. Snowmax garantiu a neve
dos Jogos Olmpicos de Inverno de 1988, em Calgary (Canada).
OS VAZAMENTOS DE PETRLEO
A formao de carvo e de petrleo nas profundezas da terra possvel porque, em condies
anaerbias, tanto a lignina como os hidrocarbonetos so compostos qumicos estveis. Porm, em
condies aerbias, ambos so degradados pelos microrganismos presentes no ambiente.
Um dos mais srios problemas de contaminao ambiental o derramamento de petrleo nos
mares, devido a acidentes notrios (Prestige, Exxon Valdez, Torrey Canyon, Amoco Cadiz, Braer and
Sea Empress, British Petroleum) e a situaes blicas (Guerra do Golfo). As manchas de leo
despejadas no mar contm compostos txicos, que representam uma ameaa para a ecologia marinha
e costeira, afetando todas as formas de vida aqutica e constituindo um risco para a sade da
populao.
O petrleo derramado no mar flutua na superfcie, onde os componentes volteis evaporam
rapidamente. O que no for recuperado pelo homem ser dispersado pelo movimento das ondas,
permanecendo em alto-mar, ou sendo levado at a costa. Sua degradao depender dos
microrganismos naturalmente presentes no ambiente marinho.
Em 1971, A. Chakrabarty desenvolveu, a partir de vrias linhagens de Pseudomonas spp., uma
superbactria que reunia, em um nico plasmdio, os genes necessrios para degradar quatro
componentes do petrleo: cnfora, xileno, octano e naftaleno. Depois de um longo processo judicial
que culminou em 1980, Chakrabarty recebeu a primeira patente de um ser vivo: uma bactria
geneticamente modificada, projetada para degradar componentes do petrleo. Embora tenha
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passado com xito nos testes laboratoriais, a bactria de Chakrabarty no chegou a ser utilizada no
acidente do Exxon Valdez no Alaska (1989) nem em outros vazamentos posteriores.
Hoje, admite-se que um microrganismo geneticamente modificado teria poucas possibilidades de
sobrevivncia na natureza, onde enfrentaria populaes de microrganismos extremamente
competitivas. Por isso, a tendncia atual de estudar consrcios microbianos naturais, selecionados
de modo a que cada tipo de microrganismo sintetize alguma das enzimas necessrias para a
degradao da substncia contaminante.
Obviamente, existem tambm pesquisas sobre microrganismos ambientais, como Alcanivorax
borkumensis, que capaz de metabolizar 70% dos componentes do petrleo; sendo de especial
interesse toda informao nova sobre suas rotas metablicas e seus requerimentos de fsforo e de
nitrognio. Tambm h pesquisas visando a produo de biosurfactantes por algas, para substituir os
surfactantes usados atualmente, que so muito txicos.
A principal estratgia aplicada, atualmente, para remediar os vazamentos de petrleo a
bioestimulao. Como o ambiente marinho geralmente pobre em nitratos e fosfatos, acrescentamse nutrientes aos dispersantes qumicos (detergentes), ou s espumas de limpeza das rocas da costa,
de maneira a estimular a ao dos microrganismos presentes no stio contaminado. Estima-se que, at
o momento, o solo de mais de 30.000 stios contaminados com petrleo, proveniente de vazamentos
de tanques de armazenamento, tenha sido tratado por bioaumentao.
A RADIAO
Aps o acidente da planta nuclear de Chernobyl (1986), tentou-se remover a contaminao mediante
o plantio de girassis, que absorvem e concentram o csio radiativo. As plantas devem ser cortadas e
tratadas como material contaminado, aps a florao e antes da frutificao, porque as sementes
poderiam ser dispersadas pelos pssaros. Devido estrutura diferente do solo, esta estratgia no
funcionou em Fukushima (Japo), onde uma mistura de algas e fungos parece ser mais eficiente.
ARMAS E CONFLITOS BLICOS
Alm de causar enorme sofrimento humano, a indstria blica cria tambm problemas ambientais de
grandes propores, como ocorrido na Carolina do Sul (Estados Unidos), na dcada de 1990, quando
o tricloroetileno (TCE) utilizado, como desengordurante, na fabricao de armas, fora despejado no
solo, contaminando as guas subterrneas e o rio Savannah.
Na descontaminao, utilizaram-se microrganismos que sobrevivem no ambiente contaminado,
por ter sistemas enzimticos capazes de digerir os poluentes-alvo, ligeiramente diferentes de seus
substratos normais. Escolheu-se uma bactria que metaboliza metano, mas capaz de degradar o TCE.
Ao bombear metano no solo, a bactria se multiplica; ao suspender o bombeamento, ela passa a
degradar o TCE por um tempo, at o bombeamento de metano se tornar novamente necessrio.
A repetio cclica do processo reduziu a contaminao a um nvel aceitvel. A utilizao do
metabolismo gratuito bacteriano considerada vivel do ponto de vista comercial.
Outro composto que causou danos incalculveis foi o Agente Laranja, lanado como desfolhante
nas florestas vietnamitas, pelos Estados Unidos, durante a guerra do Vietnam. Em fins da dcada de
1960, Chakrabarty conseguira uma mistura de linhagens bacterianas capaz de degradar um de seus
principais componentes, o herbicida 2,4,5-T. No temos encontrado registros de uso dessa bactria.
Porm, recentemente, foram aplicadas com sucesso tcnicas de biorremediao no entorno da base
de Danang para eliminar a dioxina, outro dos componentes do Agente Laranja.
Um problema de difcil soluo a deteco e eliminao das 60 a 70 milhes de minas
antipessoais, espalhadas no mundo. Uma possvel sada parece ser a utilizao de plantas de
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C A P T U L O 12
BIOTECNOLOGIA E BIODIVERSIDADE
O conceito de biodiversidade abrange toda a variao existente nos seres vivos. H 1,75 milho de
espcies identificadas at o momento, o que representa uma pequena frao dos 13 milhes que
existiriam no planeta. Pouco sabemos da biodiversidade existente em regies remotas, como as
calotas glaciares ou as profundezas submarinas.
Em outra acepo do termo, a biodiversidade compreende a variabilidade gentica intraespecfica.
Considerando que apenas estamos comeando a entender a estrutura dos genomas correspondentes
s diferentes espcies, muito resta a estudar.
As mudanas climticas tero graves consequncias para a biodiversidade. A desestabilizao dos
ecossistemas afetar a extenso de terra cultivvel, deixando sequelas na produo de alimentos e
favorecendo a apario de doenas emergentes e reemergentes. O Plano Estratgico para a
Conservao da Biodiversidade (Naes Unidas) fixa, para a dcada de 2011 a 2020, os seguintes
objetivos: conservar a biodiversidade e fomentar sua utilizao sustentvel; distribuir de maneira justa
os benefcios do uso dos recursos genticos.
A DESAPARIO DOS ECOSSISTEMAS NATURAIS
O cultivo de plantas e a domesticao de animais acompanharam o homem na passagem de uma vida
nmade para uma vida sedentria; uma mudana que ocorreu repetidas vezes, em diversas
populaes e em lugares diferentes. As primeiras plantas cultivadas foram a cevada e o trigo (vales do
Eufrates e do Nilo, entre 13.000 a.C. e 10.000 a.C.), o arroz (regies fluviais da China e da ndia, 10.000
a.C.), e o milho e a abbora (Amrica Central, entre 9.000 e 7000 a.C.).
No continente europeu, durante a Antiguidade, os cultivos estiveram restringidos a umas poucas
espcies locais. As plantas provenientes de outros lugares chegaram lentamente, atravs do incipiente
intercmbio comercial, ou como trofus de guerra, de romanos e cruzados. As tcnicas agrcolas
primitivas limitavam-se trao animal do arado e ao armazenamento de alimentos. Na Idade Mdia,
a introduo da rotao trienal de culturas possibilitou a conservao do solo e o aumento da
produo.
As grandes navegaes e a descoberta do Novo Mundo mudaram o perfil das plantas cultivadas em
cada continente. O milho, a batata, o tomate, o feijo, o girassol e o tabaco foram introduzidos na
Europa. Procedentes de diferentes lugares, o trigo, o gro-de-bico, o arroz, os ctricos, a banana, o caf
e a cana-de-acar se aclimataram na Amrica (Figura 12.1).
No Novo Mundo e ligado ao trfico de escravos, o ciclo da agricultura das plantaes providenciou
o cultivo de plantas produtoras de fibras (algodo, juta) e de borracha (caucho), de acar (cana-deacar), de leo (amendoim, palma), de frutos (banana), de substncias estimulantes (ch, caf, cacau)
etc.
BIOTECNOLOGIA: ENSINO E DIVULGAO (http://bteduc.com)
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FIGURA 12.2. Distribuio da produo agrcola (gros e cereais, pradarias e pastagens, cultivos diversos) na rea
habitvel do planeta
Florestas (31%)
Pradarias e pastagens (24%)
--------------
Nesse marco econmico, ficaram definidas algumas das caractersticas da agricultura moderna, que
visa satisfazer as necessidades dos consumidores, relativas produo de alimentos e de insumos
industriais.
A histria da domesticao dos animais segue um curso parecido, comeando com o cachorro, na sia,
no final do Paleoltico. Entre 8.000 e 7.000 a.C., foram domesticadas a cabra e a ovelha (Mesopotmia),
o boi e o zebu (Mesopotmia, Egito), o porco (China, Europa) e o gato (Mediterrneo). A domesticao
do cavalo ocorreria bem mais tarde (Ucrnia, 4.000 a.C.).
Antes da chegada dos europeus ao continente americano, os povos originrios sustentavam
criaes de lhamas, alpacas, vicunhas, perus e pres. Os europeus importaram seus animais
domsticos uma vez conquistado o Novo Mundo. Cavalos, vacas, porcos e cachorros se multiplicaram
rapidamente, causando grande devastao na flora local e tornando as grandes plancies um lugar
ideal para a criao de gado.
A expanso dos ecossistemas agrcolas acompanhou a ocupao, pelo homem, da superfcie
habitvel do planeta, que exclui os oceanos, os mares, os desertos, as montanhas e as regies polares
(Figura 12.2). O aumento significativo da produtividade agrcola no sculo XX esteve diretamente
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BIOTECNOLOGIA E BIODIVERSIDADE
EXEMPLOS
Cereais
Plantas proteaginosas
Razes e tubrculos
Plantas oleaginosas
Plantas produtoras de
acar
Frutas e hortalias
Banana, tmara, coco, azeitona, abacate, manga, uva, fruta-po, couve, couve-flor, tomate,
pimenta, quiabo, berinjela, pepino, abbora etc.
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--------------
Segundo a Food and Agriculture Organization (FAO), para responder s necessidades da populao, a
produo de alimentos dever aumentar em 60%, nos prximos 30 anos. Considerando que 90% das
pessoas vivero na faixa intertropical do planeta, onde est situada a maioria dos pases em
desenvolvimento, a falta de alimentos poder se agravar. Em parte, porque, salvo algumas excees
significativas (ch, caf, cacau, banana etc.), os alimentos so consumidos no mesmo lugar onde so
produzidos. E tambm porque, em funo das mudanas climticas e da tendncia migratria para as
grandes cidades, aumentar o nmero de pessoas que, em vez de produzir alimentos, dever comprlos.
Embora em vrios lugares tenham aparecido sinais de eroso e de esgotamento do solo, a expanso
da fronteira agrcola parece improvvel. Boa parte da terra no utilizada se encontra em regies pouco
frteis, distantes, carentes de infraestrutura ou cobertas por florestas. Sua ocupao aceleraria a
degradao de ecossistemas, com perda de biodiversidade e risco de apario de doenas.
Os grandes desafios atuais da humanidade so o aumento da produtividade dos sistemas agrcolas
e a reduo da desigualdade de acesso aos alimentos. Se, para o primeiro, o desenvolvimento
tecnolgico indispensvel, a histria mostra que, sem mudanas sociais e polticas, no haver
soluo para o problema da fome.
AS PLANTAS COMERCIAIS
A PRODUO DE INSUMOS
Vrias plantas so cultivadas e comercializadas, s vezes internacionalmente, como matria-prima
para diversas indstrias (Tabela 12.2). Assim como o ouro, a carne, o petrleo e o gs natural, os gros
so considerados produtos equivalentes (commodities), independentemente do produtor. Os preos
so fixados em mercados futuros, que estabelecem a quantidade e a qualidade da commodity a ser
comercializada.
De todas as plantas industriais, a soja uma das mais importantes, devido extraordinria
versatilidade de seus produtos.
O gro e os brotos podem ser consumidos diretamente ou como farinha na composio de pes,
doces, bebidas, massas, biscoitos etc. Os gros fermentados so utilizados na culinria oriental (mis,
tempeh).
A frao proteica do gro substitui a protena de origem animal como carne de soja. Tambm
usada na elaborao de produtos dietticos, pastas e cremes, massas, sucrilhos, comida de bebs,
bebidas etc. A torta de soja includa nas raes animais. Por outro lado, essa frao proteica entra
na composio de adesivos, reagentes analticos, colas de madeira, emulso asfltica, produtos de
limpeza, cosmticos, substitutos de couro e plsticos.
O leo extrado do gro usado para cozinhar e como condimento para saladas e, na indstria de
alimentos, entra na composio de molhos, maioneses, coberturas de bolo, bebidas, pats e
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BIOTECNOLOGIA E BIODIVERSIDADE
PLANTAS INDUSTRIAIS
Biocombustveis
Fibras txteis
leos e gorduras
Soja, algodo, colza, canola, amendoim, girassol, dendezeiro, babau, mamona, ssamo,
oliveira, linhaa.
Essncias e fragrncias
Ltex
Ceras
Carnaba, jojoba.
Resinas
Blsamos e gomas.
Especiarias
Taninos
Tinturas
--------------
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sendo monitoradas, desde o ano 2000. Outros estudos visam a resistncia salinidade, ao estresse,
seca etc.
A FLORICULTURA
A floricultura o cultivo de plantas ornamentais e de flores. Trata-se de um mercado em expanso, de
importncia comercial para a Amrica do Sul, o Oriente Mdio, a Asia e a frica. A produo de material
de propagao (mudas, sementes e bulbos) para a floricultura tende a se concentrar em grandes
empresas internacionais. Cultivam-se poucas espcies nativas para exportao. A maioria das plantas
comercializadas o resultado de cruzamentos tradicionais, tcnicas de cultivo de tecidos
(micropropagao e embriognese somtica), haploidizao e fuso de protoplastos.
A produo comercial de orqudeas, por exemplo, depende hoje totalmente das tcnicas de cultura
in vitro; boa parte do desenvolvimento das plantas ocorre em condies de laboratrio bem
controladas, que permitem a obteno de mudas sadias e de variedades novas.
O Brasil exporta flores e plantas tradicionais (crisntemos, rosas, gladolos, cravos, grberas etc.) e
plantas tropicais (helicnias, bromlias, orqudeas, antrios etc.) em diferentes modalidades (flores de
corte, flores em vaso, plantas verdes e plantas para paisagismo).
A Argentina exporta rosas, cravos e palmas para cidades como Miami e Milo, de onde so
distribudas internacionalmente. Tambm exporta bulbos de tulipa e uma variedade de rosa preta sem
espinhos. O Instituto Nacional de Tecnologia (INTA) e a Japan International Cooperation Agency (JICA)
participam de um programa de cooperao para o desenvolvimento da floricultura, assim como da
produo hortifrutcola.
Aproximadamente 75% do mercado mundial de flores corresponde a cravos, rosas, crisntemos e
grberas, espcies nas quais faltam os pigmentos responsveis pela colorao azul (antocianinas). Com
a transferncia de um gene de petnia ao cravo, as empresas Florigene (australiana) e Suntori
(japonesa) conseguiram colocar no mercado flores inovadoras, tais como os cravos (Dianthus
caryophyllus L.) de cor malva (Moondust) ou violeta (Moonshadow).
Na Colmbia, os cravos azuis so cultivados, desde 2000, por Flores Colombianas S.A., uma filial da
empresa holandesa Floriyin, e comercializados em diversos pases, inclusive dentro da Unio Europeia,
onde levam a seguinte ressalva: Este produto um cravo geneticamente modificado e inapropriado
para o consumo por seres humanos e animais.
Em 2009, a Colmbia iniciou o cultivo de rosas e crisntemos azuis transgnicos, que no so
vendidos na Unio Europeia; os melhores clientes esto no Japo que, no sculo VIII, adotara o
crisntemo como emblema do selo imperial.
Em relao engenharia gentica, no h muito interesse em desenvolver novas variedades,
porque os custos dos testes necessrios para obter a aprovao de um transgnico so muito altos.
No entanto, existem vrias linhas de pesquisa visando o desenvolvimento de fragrncias e a resistncia
a doenas e ao estresse. Tambm se estuda a transferncia, a vrias espcies ornamentais, de genes
que prolonguem a conservao das flores nos vasos.
A COSMTICA
As indstrias cosmticas utilizam, em seus produtos, numerosos ativos vegetais extrados de plantas e
de algas. Em conjunto com pequenas comunidades rurais, vrias empresas desenvolveram uma forma
de produo sustentvel de substncias intermedirias, como leos (coco, castanha) e outros extratos
vegetais (maracuj, aa, andiroba etc.).
A onda verde que se alastra na sociedade levou vrias empresas nacionais (Natura, O Boticrio,
Granado etc.) e estrangeiras (LOral-Body Shop, Zhiels, Yves Rocher etc.) a aderir, com sucesso, a este
modelo.
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BIOTECNOLOGIA E BIODIVERSIDADE
AS PLANTAS MEDICINAIS
At o momento, foram identificadas aproximadamente 20.000 espcies de plantas medicinais. Sem
acesso aos medicamentos comercializados, 80% da populao rural depende delas.
A metade das drogas medicamentosas consumidas atualmente extrada de 250 espcies de
plantas silvestres, que representam 0,1% das 250.000 plantas vasculares. Em alguns casos, o princpio
ativo das plantas foi identificado e sintetizado quimicamente. O cido acetilsaliclico da frmula da
aspirina, por exemplo, tem um efeito comparvel ao do cido saliclico, extrado da casca do salgueiro
e administrado como analgsico e antitrmico, em chs e poes, desde a Antiguidade.
A procura por novos medicamentos comea pela coleta das plantas, seguida da extrao de
substncias qumicas que so submetidas a testes de atividade biolgica. Encontrar um princpio ativo
pode gerar lucros muito altos, embora s um, em cada 10.000 produtos testados, chegue ao mercado.
Entre os fitoqumicos bem-sucedidos esto: a diosinina (produo de anticoncepcionais), a vincristina
e a vinblastina (medicamentos anticancerosos), a morfina (anestsico) e o curare (relaxante em
cirurgias).
A BIODIVERSIDADE AMEAADA
A EROSO GENTICA
A perda de biodiversidade acarreta a perda de variao gentica (eroso gentica). Os dados so
estarrecedores: 11 milhes de Ha/ano de florestas destrudas; avano da desertificao em 27 milhes
de Ha/ano; desapario de 30 a 300 espcies por dia. A destruio dos ecossistemas, a diminuio do
nmero de espcies existentes e a perda de variabilidade gentica so danos irreparveis, porque
preciso recorrer aos genes das variedades silvestres para melhorar geneticamente as plantas
cultivadas e os rebanhos existentes.
A eroso gentica inquietante em relao s plantas alimentcias, cultivadas em nmero restrito
e uniformizadas em funo das prticas agrcolas modernas. Se, no incio do sculo XX, existiam na
ndia mais de 30.000 variedades nativas de arroz, hoje provavelmente no restam mais de 50. Por
outro lado, o risco de extino ameaa, aproximadamente, 30% das variedades ou raas dos animais
de criao.
Tambm preocupa o futuro das plantas medicinais, muitas delas silvestres, porque as melhores
plantas so as primeiras a ser colhidas, enquanto as restantes ficam no terreno, produzindo as
sementes que daro origem s prximas geraes. Este tipo de seleo negativa contribui para a
eroso gentica das espcies.
A EXPANSO DO AGRONEGCIO
Embora as novas tecnologias de edio gentica possam modificar rapidamente o panorama, as
plantas geneticamente modificadas se limitam, por enquanto, a um nmero reduzido de espcies e a
poucos traos, principalmente tolerncia a herbicidas e resistncia a insetos. A globalizao dos
cultivos de plantas geneticamente modificadas traz alguns questionamentos relativos ao seu impacto
sobre a biodiversidade.
Vrios cenrios so possveis, com diferentes consequncias para os ecossistemas e sua
biodiversidade. No primeiro, a expanso do agronegcio afetaria os espaos dedicados a outras
culturas, pastagens e florestas. No segundo, ao aumentar a produo agrcola, as variedades
transgnicas diminuiriam a presso sobre as reas no cultivadas, especialmente as florestas.
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BIOTECNOLOGIA E BIODIVERSIDADE
A PROTEO DA BIODIVERSIDADE
OS CENTROS DE DIVERSIFICAO
No incio do sculo XX, o gegrafo e geneticista russo Nikolai I. Vavilov organizou mais de 100
expedies que percorreram 64 pases, coletando sementes, gros, tubrculos etc. Nessas viagens, ele
observou que a diversidade das variedades cultivadas era muito maior em algumas reas que em
outras. Essas reas geogrficas seriam os centros de origem dessas variedades.
Na Cordilheira dos Andes, existem mais de 1.000 variedades de batata, cada uma delas identificada
com um nome pela populao local. Para Vavilov, isso revelaria que a regio andina seria seu centro
de origem e de diversificao. A partir de observaes anlogas, ele localizou seis a oito centros
geogrficos onde, presumivelmente, teria-se originado a agricultura (Tabela 12.3).
Vavilov no chegou a completar sua obra. Encarcerado por defender o conceito mendeliano da
herana, faleceu na priso de Saratov, em 1943. Como comentado anteriormente, a gentica foi
considerada uma teoria reacionria e burguesa, na antiga Unio de Repblicas Socialistas Soviticas
(URSS), entre 1929 e 1964.
A teoria de Vavilov foi extremamente fecunda para os estudos evolutivos das plantas cultivadas e,
consequentemente, para a conservao da biodiversidade. Admite-se hoje que a diversidade das
plantas cultivadas e silvestres, bem maior em alguns pontos geogrficos, indica que alguns biomas
foram mais propcios que outros para o nascimento de prticas agrcolas.
Atualmente, sabe-se que os centros origem nem sempre coincidem com os centros de diversidade,
porque as migraes humanas geraram centros de diversidade secundria em que, respondendo s
prticas agrcolas e presso do ambiente, as espcies se diversificaram, tornando-se tolerantes s
condies ambientais e resistentes s doenas locais.
A CONSERVAO DA BIODIVERSIDADE
Uma das consequncias do processo evolutivo a extino de espcies: o nmero de espcies vivas
no chega a 1% das que, alguma vez, povoaram a Terra. Mais que a apario e desapario das
espcies, o que preocupa a velocidade com que isso est acontecendo, porque configura uma
extino em massa, causada pelo homem.
-------------TABELA 12.3. Os centros de diversificao e os cultivos originrios
REGIO
CULTIVOS
Milho, amaranto, feijo, batata-doce, mandioca, algodo, sisal, papaia, abacate, goiaba,
pimenta, abbora, tomate, baunilha, cacau, girassol, morango, noz pec, tabaco etc.
Amrica do Sul
Amaranto, amendoim, feijo, lupino, batata, mandioca, amendoim, algodo, caju, frutade-conde, abacaxi, papaia, abacate, morango, pimento, abbora, coca, mate, borracha
etc.
Limo, pepino, arroz, melo, manga, cana-de-acar, algodo, cnhamo, coco, arroz, frutapo, laranja, tangerina, banana, pltano, noz-moscada, berinjela etc.
China
Soja, colza, lichia, pera, pssego, repolho, ch, gengibre, ginseng, cnfora etc.
frica (Etipia)
sia menor
Alfafa, trigo, aveia, centeio, cevada, rabanete, cenoura, ervilha, gro-de-bico, lentilha,
azeitona, figo, amndoa, vinha, ma, beterraba, alho, cebola, aafro, papoula, alcauz
etc.
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Consideremos, por exemplo, o caso da Mata Atlntica brasileira, cuja biodiversidade maior que a da
Amaznia. A devastao tal que s restam pedaos da floresta original, e sua conservao depende
da manuteno de corredores entre os diversos fragmentos.
Preservar a biodiversidade e os recursos genticos muito mais que salv-los da extino, significa
conservar suficiente diversidade dentro de cada espcie, de forma a garantir que seu potencial
gentico possa ser usado no futuro.
Todas as variedades cultivadas atualmente tm incorporados genes de variedades selvagens, ou
dos estoques genticos, conservados pelos povos que praticam uma agricultura tradicional. A
produo comercial do tomate, por exemplo, seria impossvel sem a contribuio de genes silvestres
de Amrica Latina. Graas aos trigos selvagens, dispomos de variedades resistentes aos fungos, seca,
ao calor ou ao frio. A resistncia a quatro doenas do arroz cultivado atualmente deve-se a uma nica
variedade, encontrada na ndia central.
A CONSERVAO IN SITU
A biodiversidade pode ser conservada in situ, mediante a proteo ambiental de uma determinada
regio. Alm de manter a dinmica evolutiva das espcies, nas Unidades de Conservao Ambiental
devem-se contemplar as necessidades da populao local, criando reservas de desenvolvimento
sustentvel (Mamirau, Brasil; Slan Kan, Mxico). Na Costa Rica, uma lei de 1996 compensa aqueles
que conservem, ou aumentem, a rea de floresta dentro de suas propriedades.
Algumas iniciativas interessantes para a proteo da biodiversidade envolvem o rastreamento por
satlite (baleias, lontras) e o uso de aplicativos para telefones celulares, que facilitam o monitoramento
da fauna silvestre (SISSGEO, Centro de informao em Sade Silvestre, Fiocruz).
Uma nova tendncia o retorno da vida selvagem, mediante a reintroduo de animais como o
urso, nos Pirineus, ou o lobo, nas florestas europeias. Projetos mais arrojados contemplam a criao
de comunidades de grandes mamferos. Em Oostvaarderplassen (Pases Baixos), o objetivo
reconstituir, sem interveno humana, a paisagem original da regio. Os animais extintos foram
substitudos por outros que lhes so aparentados. Em vez do auroque, que desapareceu em 1627,
introduziu-se o auroque de Heck, criado em 1920 por cruzamento entre as mais antigas raas de
bovinos europeus. O pnei Konik da Polnia ocupa o lugar do tarpan, um cavalo selvagem extinto.
A ideia controvertida porque, inevitavelmente, o ecossistema reconstitudo ser diferente do
padro antigo e, tambm, porque os defensores dos direitos dos animais consideram uma crueldade
o abandono dos animais a seu destino. Um projeto anlogo procura recriar as estepes da tundra,
anteriores ltima era glacial (Parque Pleistocnico, Rssia).
Outra tendncia o uso da biotecnologia moderna para salvar espcies ameaadas, como os
rinocerontes, mortos por caadores inescrupulosos para extrair e vender os chifres, como trofu ou
como medicamento. Uma empresa norte-americana transferiu a uma levedura um gene capaz de
sintetizar queratina de rinoceronte que, misturada ao DNA do animal, seria utilizada para fabricar
chifres artificiais. Outra empresa, envolvida na conservao dos rinocerontes, injeta no chifre do
animal anestesiado um corante azul que pode causar vmitos e diarreias, de modo a impedir seu uso
como ornamento ou medicamento.
A CONSERVAO EX SITU
Os anfbios enfrentam srios riscos de extino em massa, devido perda de habitats e a uma doena
causada pelo fungo Batrachochytrium dendrobatidis, nativo de frica do Sul, onde vive em forma
simbitica com a r de unhas africana (Xenopus laevis). Na dcada de 1930, essa r fora distribuda no
mundo inteiro, para a realizao de testes de gravidez. Embora a doena possa ser tratada facilmente
158
BIOTECNOLOGIA E BIODIVERSIDADE
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800.000 pessoas e a migrao forada de dois milhes de pessoas. Durante esse perodo, organizaes
internacionais conservaram, em bancos de germoplasma, as sementes essenciais para a reconstruo
do pas.
A LEGISLAO VIGENTE
Aprovada por 175 pases, a Conveno sobre Diversidade Biolgica (1992) reconhece a soberania
nacional sobre a biodiversidade, estabelece a repartio de bebefcios decorrentes do uso dos recursos
genticos e reconhece os direitos das comunidades locais e indgenas sobre seus conhecimentos.
No Brasil, a proteo da biodiversidade est regida pela Lei n 13.123/2015 que determina as regras
para acesso ao patrimnio gentico e ao conhecimento tradicional associado, assim como a repartio
de benefcios.
O CGIAR E O CENTRO INTERNACIONAL DA BATATA
Uma das organizaes dedicadas conservao da biodiversidade e ao desenvolvimento agrcola dos
pases em desenvolvimento a Future Harvest, uma iniciativa com 16 centros localizados em diversos
lugares, porm mantendo uma estrutura descentralizada que favorece a difuso das informaes. Os
centros so mantidos pelos governos de 165 pases, fundaes privadas e organizaes internacionais
e regionais que integram o Consultative Group on International Agricultural Research (CGIAR), apoiado
pela Food and Agriculture Organization (FAO). Os centros do CGIAR na Amrica Latina so: o Centro
Internacional para el Mejoramiento del Maz y el Trigo (CIMMYT) no Mxico, o Centro Internacional de
la Papa (CIP) no Peru e o Centro Internacional de Agricultura Tropical (CIAT) na Colmbia.
A batata originria da regio andina. No sculo XVI chegou Europa onde, depois de vencer a
resistncia da populao, transformou-se em um dos poucos alimentos consumidos pela populao
mais pobre. Quando, em meados do sculo XIX, o fungo Phytophtora infestans infectou as batatas,
desencadeou-se na Irlanda um terrvel perodo de fome, que causou a morte de um milho de pessoas
e a emigrao de boa parte da populao.
Hoje, a batata o quarto cultivo mais importante do mundo, com uma produo anual de 300
milhes de toneladas. Em muitos pases, a populao depende de batata e de outros tubrculos
(batata-doce) para sua alimentao, por serem relativamente ricos em energia e nutrientes.
O Centro Internacional da Papa (CIP) preserva a batata (Solanum tuberosum), a batata-doce
(Ipomoea batatas) e nove tubrculos ou razes andinas (Oca, Ulluco, Mashua, Arracacha, Yacon, Achira,
Ahipa, Maca, Mauka). O banco de germoplasma de batata inclui amostras de uma centena de espcies
selvagens, coletadas em 8 pases de Amrica Latina, alm das variedades cultivadas tradicionalmente
pela populao andina.
Entre os objetivos do CIP se encontra o melhoramento da qualidade nutricional, da resistncia a
doenas e a condies climticas adversas, como a seca e a geada. O centro utiliza a biotecnologia para
criar formas adaptadas s condies locais e distribui as variedades tradicionais e melhoradas sob a
forma de sementes, tubrculos ou vitroplantas. Atualmente tambm estimula as utilizaes comerciais
das variedades autctones: distribuio em pacotes (tikapapa), elaborao de chips ou hojuelas a
partir de rodelas com um visual variado.
O PROTOCOLO DE CARTAGENA DE BIOSSEGURANA
Vigorando desde setembro de 2003, o Protocolo de Cartagena de Biossegurana suplementa a
Conveno sobre a Diversidade Biolgica. O acordo contempla o risco potencial decorrente do
transporte e do manuseio de todos os organismos vivos modificados (OVMs) que possam ter um efeito
160
BIOTECNOLOGIA E BIODIVERSIDADE
161
C A P T U L O 13
BIOTECNOLOGIA E AGRICULTURA
BIOTECNOLOGIA E AGRICULTURA
Em 1960, o milho hbrido era cultivado, com raras excees, em todas as plantaes dos Estados
Unidos e do Canad. O melhoramento das plantas j no dependia daqueles que estavam diretamente
envolvidos em seu cultivo, mas daqueles que produziam as sementes.
Na dcada de 1960, o desenvolvimento de uma variedade de trigo de alto rendimento e resistente
a doenas permitiu aumentar a quantidade de alimentos disponveis, salvando da fome mais de 1
bilho de pessoas. Por ser o artfice da revoluo verde, uma contribuio fundamental para a paz
mundial, o engenheiro agrnomo Norman Borlaug recebeu o Prmio Nobel da Paz (1970).
A revoluo verde duplicou a produtividade dos cereais mediante o desenvolvimento e cultivo de
variedades melhoradas geneticamente, complementados por prticas agrcolas complexas (irrigao,
mecanizao, aplicao de fertilizantes e pesticidas). Porm, trouxe problemas ambientais, sociais e
de sade, devido necessidade de grandes investimentos de capital para a mecanizao e aplicao
de produtos qumicos, que foram usados em quantidades excessivas.
-------------FIGURA 13.1. O milho
O milho de 5.000 a 7.000 anos atrs era bem menor do que o que
conhecemos atualmente. O cruzamento acidental com o teosinto, uma
erva que ainda existe na natureza, teria dado origem ao milho moderno,
que passou por vrias modificaes at se estender pela Amrica prcolombiana. Diversas variedades de milho persistem at hoje no
continente.
www.learner.org/courses/essential/life/session5/closer1.html
FIGURA 13.2. A produo de milho hbrido
A hibridizao permite obter hbridos simples, a partir de duas linhagens, e hbridos duplos, a partir de quatro linhagens.
Existem hbridos mltiplos construdos a partir de pelo menos cinco linhagens.
Linhagem A
Linhagem B
Linhagem (AxB)
Linhagem (AxB)x(CXD)
(Planta de milho hbrido)
Colheita
Linhagem C
Linhagem D
Linhagem (CxD)
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Em alguns pases, os pequenos agricultores no chegaram a usufruir a revoluo verde. Se, desde
1960, a produo de cereais aumentou em mais de 40% na sia e na Amrica do Sul, na frica diminuiu
13%.
Com a crise do petrleo da dcada de 1980, o setor de sementes agrcolas foi invadido por grandes
empresas transnacionais, produtoras de agrotxicos e fertilizantes que, mediante um investimento
extraordinrio de recursos em pesquisa e desenvolvimento, conseguiram introduzir as tcnicas de
engenharia gentica no melhoramento das sementes. Traspassando as barreiras interespecficas,
obtiveram plantas mais produtivas ou com propriedades novas.
Comercializadas a partir de 1996, as principais plantas geneticamente modificadas (PGMs)
cultivadas atualmente so a soja, o milho, o algodo e uma variedade de colza denominada canola. Os
traos mais frequentes so a tolerncia a herbicidas e/ou a resistncia a pragas. Em relao aos
mtodos tradicionais, as biotecnologias modernas inserem a tecnologia na semente.
Em 2015, dos 28 pases que semearam cultivos biotecnolgicos, 20 deles foram pases em
desenvolvimento. Produtores de Amrica Latina, sia e frica cultivaram 54% da rea global plantada
com PGM.
A OBTENO DE NOVAS VARIEDADES
MUTAO GNICA E SELEO
O melhoramento clssico est baseado na reproduo seletiva entre indivduos de uma mesma
espcie. A variao intraespecfica limitada, mas alguns agentes fsicos e qumicos podem induzir
mutaes aleatrias. No caso de aparecer algum mutante interessante, ser cruzado por vrias
geraes com um dos tipos parentais, at que este incorpore, por introgresso gnica, as
caractersticas desejadas.
Esse processo de mutao e seleo demora de cinco a quinze anos e, quando finalizado, o gene
selecionado pode estar acompanhado por outros no desejveis. Duas variedades comerciais de
batata (Lenape, 1960; Magnum bonum, 1990), obtidas por este mtodo, tiveram que ser retiradas do
mercado devido ao alto contedo de alcaloides, caracterstico das plantas selvagens.
O progresso alcanado na induo de mutaes (TILLING, do ingls Targeting induced local lesions
in genomes) e na seleo assistida por marcadores moleculares facilita a obteno de novas variedades
(batata Amflora, BASF). A genmica tambm trouxe avanos notveis, como a identificao de 40
genes de resistncia a patgenos no tomate, que foram reunidos em um gentipo nico. Contudo, em
ambos os casos, a variao se deve a genes pertencentes mesma espcie.
ALTERAO DO NMERO DE CROMOSSOMOS
A multiplicao do nmero de cromossomos (poliploidia) um fenmeno que acontece
espontaneamente nos vegetais, seja por no disjuno dos cromossomos ou por uma falha da
citocinese durante a diviso celular. Ao longo do processo evolutivo, duplicaes dos lotes
cromossmicos originais (autopoliploidia) ocorreram em vrias das espcies cultivadas atualmente,
tais como a batata ou a cana-de-acar.
A multiplicao dos lotes cromossmicos pode ocorrer em hbridos interespecficos, pouco frteis
ou estreis, restaurando a fertilidade e gerando uma nova espcie, diferente de ambas as linhagens
parentais. Este mecanismo (alopoliploidia) deu origem a plantas como o trigo, a colza, a aveia, o
tabaco, o algodo, o caf etc.
A descoberta da colchicina (1935), uma substncia que interfere com a formao dos fusos
mitticos, permitiu a criao de novas espcies poliploides. A hibridizao do trigo e do centeio,
164
BIOTECNOLOGIA E AGRICULTURA
seguida de uma duplicao cromossmica, originou o triticale, uma planta que rene a qualidade do
gro do primeiro e a rusticidade do segundo.
Outra forma de alterao do nmero de cromossomos a cultura de anteras, para a obteno de
plantas haploides. Essa tecnologia permite identificar mutantes recessivos e obter rapidamente
variedades diferentes por hibridizao ou duplicao cromossmica.
ENGENHARIA GENTICA
medida que a distncia entre as espcies aumenta, os cruzamentos se tornam cada vez mais difceis
e a transferncia dos genes pode exigir o uso de tcnicas complexas, como a fuso de protoplastos e
o cultivo de embries. Quando os recursos genticos provm de outros organismos distantes na escala
evolutiva (plantas, microrganismos ou animais), sua transferncia s possvel por engenharia
gentica.
Qual a diferena entre uma planta obtida por cruzamento seletivo e outra por engenharia gentica?
Na primeira, genes da mesma espcie ou de uma espcie muito prxima so introduzidos
aleatoriamente. Na segunda, incorpora-se diretamente uma construo gnica, proveniente da
mesma espcie (construo cisgnica) ou de uma espcie distante (construo transgnica). Trata-se
de uma tecnologia poderosa demais para ser negligenciada.
NO LABORATRIO
A construo de uma planta geneticamente modificada (PGM) comea com o isolamento e
caracterizao do gene de interesse (transgene) e a construo de uma estrutura gentica complexa,
que inclui um gene promotor e um gene marcador. O primeiro possibilita a transcrio do transgene,
determinando se este ir se expressar em todas as clulas ou somente em alguns tecidos. O segundo
permite selecionar as clulas transformadas.
A construo gentica transferida s clulas receptoras por algum dos mtodos disponveis
(eletroporao, biolstica ou uso de vetores, como o plasmdeo Ti de Agrobacterium tumefaciens). As
clulas transformadas so recuperadas, procedendo-se regenerao das plantas mediante tcnicas
de cultura in vitro. Mediante tcnicas bioqumicas e/ou acompanhamento de marcadores moleculares
(polimorfismos na molcula de DNA, repetio de sequncias), constata-se a transferncia gnica e
outros aspectos que podem influir na expresso gnica, como o nmero de cpias e o lugar em que
estas se integraram ao genoma.
O trabalho laboratorial realizado com plantas cujo gentipo favorea a transformao e a
regenerao da planta transformada, geralmente pouco vantajosas do ponto de vista agronmico.
Considera-se alcanado o sucesso quando o transgene se expressa no lugar correspondente e com um
adequado nvel de atividade, restando por verificar a estabilidade da expresso gnica e o seu valor
agronmico.
AS ETAPAS POSTERIORES
Acabada a etapa de laboratrio, iniciam-se os testes controlados em casa de vegetao, para
selecionar as plantas-me das quais procedero vrias geraes de retrocruzamentos seletivos com
alguma das linhagens elite, visando a obteno de uma linhagem transgnica de alto rendimento,
adaptada a um contexto especfico. O resultado uma variedade ou cultivar que expressa o trao
codificado pelo transgene e apresenta um potencial de produtividade parecido ao da linhagem elite.
Conceitualmente, a metodologia seguida depois da transformao mantm semelhana com do
melhoramento tradicional, mas o processo acelerado pela utilizao de tcnicas de cultura in vitro e
de marcadores moleculares na caracterizao da prognie.
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Uma vez obtida a nova variedade de PGM, d-se incio liberao planejada no meio ambiente, que
abrange o cultivo em experimentos protegidos e testes de campo realizados em diferente escala, at
a nova variedade estar pronta para o seu cultivo comercial. A liberao do cultivo depender da
autorizao da legislao local, geralmente bastante restrita a esse respeito (Figura 13.3).
No Brasil, esta autorizao dada pela Comisso Tcnica Nacional de Biossegurana (CTNBio),
definida pela Lei de Biossegurana como o rgo multidisciplinar responsvel pelo controle dessa
tecnologia no pas (Lei 11.105/2005, Poltica de desenvolvimento da Biotecnologia; Decreto
6.041/2007).
Transformao
166
BIOTECNOLOGIA E AGRICULTURA
Ainda hoje, parte da opinio pblica considera que as PGMs no deveriam ter sido introduzidas no
ambiente, nem utilizadas para o consumo humano, at no ser demonstrada a ausncia de qualquer
risco. A exigncia apoia-se no princpio de precauo, um princpio que pode ser entendido de diversas
maneiras.
Podemos dizer, de maneira simplista, que havendo a possibilidade de algo ruim me acontecer na
rua, melhor ficar em casa, ou que havendo a possibilidade de algo ruim me acontecer na rua, ao sair
de casa bom ter cuidado e prestar ateno no sinal, nos carros, nas bicicletas que circulam na
contramo e, tambm, no bandido. Note-se que a deciso de no sair de casa tambm envolve
riscos, tais como escorregar e levar um tombo no banheiro, queimar-se ao acender o fogo ou receber
um vrus via Internet. No existe risco zero, toda ao apresenta riscos que devem ser analisados para
ser posteriormente gerenciados.
No Brasil, o cultivo de plantas transgnicas regido pela Lei de Biossegurana, que estabelece a
observncia do princpio da precauo para a proteo do meio ambiente. O Princpio 15 da Declarao
do Rio de Janeiro sobre Meio Ambiente e Desenvolvimento Sustentvel (1992) diz o seguinte: De
modo a proteger o meio ambiente, o princpio da precauo deve ser amplamente observado pelos
Estados, de acordo com as suas capacidades. Quando houver ameaa de danos srios ou irreversveis,
a ausncia de absoluta certeza cientfica no deve ser utilizada como razo para postergar medidas
eficazes e economicamente viveis para prevenir a degradao ambiental.
Diferente da preveno, que trata de riscos conhecidos, a precauo contempla riscos potenciais
que demandam uma avaliao detalhada. Mesmo havendo incertezas ou falta de unanimidade entre
os expertos, o princpio de precauo no justifica a falta de aes concretas para a proteo do meio
ambiente.
Por outro lado, o Princpio 10 da mesma declarao nos diz que: A melhor maneira de tratar
questes ambientais assegurar a participao, no nvel apropriado, de todos os cidados
interessados. No nvel nacional, cada indivduo deve ter acesso adequado a informaes relativas ao
meio ambiente de que disponham autoridades pblicas, inclusive informaes sobre materiais e
atividades perigosas em suas comunidades, bem como a oportunidade de participar em processos de
tomada de decises. Os Estados devem facilitar e estimular a conscientizao e a participao pblica,
colocando a informao disposio de todos. Deve ser propiciado acesso efetivo a mecanismos
judiciais e administrativos, inclusive no que diz respeito compensao e reparao de danos.
Vrios pontos merecem ser destacados: admite-se a incerteza e a falta de unanimidade entre os
expertos, afirma-se o direito de todos informao e pede-se a participao, no nvel apropriado, de
todos os cidados interessados. A responsabilidade pela tomada de decises no ser exclusivamente
de um grupo de indivduos, sejam estes cientistas, administradores, empresrios, polticos ou
comunicadores. Ter que ser democraticamente assumida por um grupo heterogneo que represente
os interesses da sociedade, mesmo tendo que abrir as portas ao marketing, aos lobbies e presso
dos grupos polticos, ambientalistas ou no.
Considerado por alguns grupos de opinio como um dos alicerces do desenvolvimento sustentvel
e uma proteo contra o controle da tecnologia pelas grandes empresas, o princpio de precauo
tambm visto por outros como um obstculo ao progresso e uma tentativa de protecionismo.
A formalizao do princpio mediante uma estrutura jurdica, como a Lei de Biossegurana, assim
como o estabelecimento de normas, regras e procedimentos claros, a melhor maneira de gerenciar
o desenvolvimento tecnolgico, minimizando os riscos correspondentes.
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BIOTECNOLOGIA E AGRICULTURA
Outro herbicida utilizado o glufosinato, presente em outro grupo de produtos (Basta, Liberty,
Ignite etc.). As sementes tolerantes ao glufosinato so comercializadas com o nome LibertyLink por
BayerCropScience.
Glifosato e glufosinato no so os nicos herbicidas no mercado. Existem outras substncias, do
grupo das imidazolinonas, cuja tolerncia tem sido transferida soja Cultivance, um
empreendimento conjunto da Embrapa e da Basf.
O GLIFOSATO
No Brasil, o glifosato no est limitado exclusivamente agricultura, sendo utilizado, desde 1978, em
reas urbanas e na manuteno de estradas e ferrovias, sem evidncias de impactos no meio
ambiente.
Em 2015, o IARC (do ingls, International Agency on Research on Cancer), uma extenso
semiautnoma da Organizao Mundial da Sade, reclassificou o glifosato como provvel agente
carcinognico, no grupo 2 A. Esta categoria inclui, alm do malation e da acrilamida, o chimarro
quente, a malria, a carne vermelha, a disrupo dos ritmos circadianos e as emisses de frituras em
alta temperatura.
Das quatro agncias encarregadas de avaliar o glifosato, o IARC foi a nica a encontrar essa
associao. Outras agncias manifestaram seu desacordo e questionaram a reclassificao. Nos
Estados Unidos, a EPA (do ingls, Environmental Protection Agency) continua classificando o glifosato
na categoria E, que rene substncias que apresentam evidncias de ausncia de carcinogenicidade
em seres humanos. Na Unio Europeia, a EFSA (do ingls, European Food Safety Agency) considera
improvvel que o glifosato represente um risco para os seres humanos e no justifica sua classificao
como agente carcinognico potencial.
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A RESISTNCIA A INSETOS
A TRANSFERNCIA DA TOXINA Bt S PLANTAS
Os insetos causam quebras de safra, estimadas em 20 a 40% da produo agrcola. Contudo, o combate
mediante o uso de agrotxicos tem causado problemas no ambiente e na sade humana, sendo,
portanto, necessrio encontrar mtodos alternativos de luta.
H mais de 50 anos que os agricultores convencionais e orgnicos utilizam um inseticida biolgico
para proteger suas colheitas. Trata-se da toxina produzida por um microrganismo do solo, o Bacillus
thuringiensis, incua para o ser humano e fatal para os insetos. Uma vez ingerida pelas lagartas, a
toxina age no sistema digestrio, matando-as em poucos dias. O produto comercial vendido com os
nomes de Dipel, Thuricida ou Vectobac.
Uma vez transferido o gene codificador da toxina do Bacillus thuringiensis s plantas, estas passam
a produzi-la diretamente. Existem diversas verses do gene Cry que codificam toxinas muito
especficas, efetivas em diferentes ordens de insetos. Algumas variedades (YieldGard, Agrisure)
diferem pela posio do transgene, o que caracteriza eventos diferentes e permite a comercializao
com nomes diferentes, como algodo Bollgard e milho Yieldgard, da Monsanto, ou milho Agrisure,
da Syngenta.
As plantas Bt demandam menos pesticidas e reduzem as emisses de carbono, ao diminuir o uso
de combustvel. Outra das vantagens das variedades Bt sobre as variedades convencionais est na
menor quantidade de micotoxinas (aflatoxina e fumonisina) perigosas para a sade humana, em
funo da menor contaminao por fungos dos ferimentos causados pelos insetos.
AS PRTICAS AGRONMICAS
Todo inseticida age como agente seletivo, sendo inevitvel a apario de insetos resistentes. A fim de
evitar ou retardar a apario de larvas resistentes toxina do Bacillus thuringiensis, uma possibilidade
utilizar variedades Bt que produzam uma quantidade de toxina maior que a dose aplicada
habitualmente como inseticida.
Outra possibilidade mais sutil o plantio de variedades convencionais (no Bt) em espaos
predeterminados onde os insetos no entram em contato com a toxina. Em vez de tentar eliminar o
inseto, diminui-se a infestao mediante uma presso seletiva mais frouxa, que mantm a
sensibilidade ao inseticida em uma proporo considervel da populao. Hoje, a manuteno de
refgios nas lavouras de plantas Bt (algodo, milho) uma prtica bem estabelecida para o controle
de insetos.
O gerenciamento dos riscos envolve algumas medidas complementares que visam amortecer o
impacto eventual do fluxo gnico a outros cultivos. Um gene que confere tolerncia a um herbicida
no ser vantajoso em ausncia do mesmo. Mas o que ocorreria se esse gene conferisse algum valor
adaptativo, tal como a produo de um inseticida?
O risco de polinizao cruzada depende da espcie, sendo mais fcil de acontecer no milho, em que
o plen se dispersa levado pelo vento, do que na soja ou no trigo, plantas com autofecundao. A
presena de espaos ou corredores de isolamento evita a disseminao de plen transgnico para as
variedades silvestres e, tambm, para as convencionais semeadas nos campos vizinhos, evitando
prejuzos significativos para o agricultor que as comercializa.
O tamanho dos espaos ou corredores de isolamento depende das caractersticas reprodutivas da
espcie em questo e de fatores ambientais, como o vento. No caso do milho, por exemplo, estima-se
que o risco de polinizao cruzada entre os cultivos diminui, de 1% a zero, quando a distncia entre
ambos aumenta de 100 a 1.000 ps.
170
BIOTECNOLOGIA E AGRICULTURA
A VIDA SILVESTRE
A probabilidade de ocorrer fluxo gnico aumenta se houver, na proximidade, espcies silvestres
compatveis. Por isso, devem-se extremar os cuidados em relao ao cultivo de plantas geneticamente
modificadas nos lugares onde existam variedades silvestres aparentadas, tais como a batata no Peru,
o milho no Mxico, o arroz na ndia, a soja na Coreia e na China. No Brasil, onde existem variedades
silvestres do algodo, a CTNBio delimitou preventivamente zonas de excluso para o cultivo de algodo
biotecnolgico.
Em relao vida silvestre, apesar do estardalhao causado oportunamente pela notcia de que as
borboletas monarcas seriam afetadas pelo contato com plen de plantas de milho Bt, os prprios
autores do estudo declararam que era uma experincia laboratorial, desenvolvida em condies
diferentes das de um ambiente natural.
A RESISTNCIA A VRUS
Assim como a vacinao, a resistncia a vrus est baseada na transferncia ao hospedeiro de uma
parte do genoma viral. A produo em excesso da protena de revestimento viral, por exemplo, inibe
a sntese de seu material gentico. Esta tecnologia foi utilizada para erradicar viroses da batata, da
beterraba, do pepino, do tomate, da couve-flor e do melo.
Os produtos hortcolas tm recebido menos ateno que os cereais e as leguminosas, em parte
devido resistncia do consumidor e, tambm, porque o custo da construo de uma planta
transgnica para cultivos com pequena produo no interessante economicamente. Contudo, as
variedades de papaia resistente a vrus (UH Rainbow, UH SunUp), comercializadas nos Estados Unidos,
salvaram o estado do Hava de um desastre econmico.
No Brasil, a CTNBio autorizou em 2011 o cultivo do feijo tolerante ao vrus do mosaico dourado,
desenvolvido pela Embrapa, por tecnologia do iRNA. O vrus transmitido pela mosca branca Bemisia
tabaci e causa a perda de 40 a 85% da safra, uma quantidade de feijo que poderia alimentar entre 9
milhes a 18 milhes de pessoas adultas. Esse feijo deve ser comercializado a partir de 2016.
A COEXISTNCIA ENTRE PLANTAS CONVENCIONAIS E PGMs
Todos os sistemas agrcolas exercem algum impacto sobre o meio ambiente. No entanto, uma
agricultura sustentvel pode minimizar os efeitos negativos da produo agrcola, restaurando a
fertilidade e limitando a eroso da terra.
Algumas prticas agrcolas j so compartilhadas pelas diversas modalidades agrcolas (orgnica,
industrial ou de preciso), incluindo a rotao de culturas, a adubao verde, o manejo de pragas e de
nutrientes, o plantio direto com uma cobertura na superfcie do solo etc. Outras so especficas, como,
por exemplo, a proibio para os produtores orgnicos de utilizar sementes geneticamente
modificadas ou de cultivar terrenos onde previamente tenham sido plantadas PGMs.
Cultivos convencionais e biotecnolgicos ocupam diferentes faixas de mercado e crescem em
funo das oportunidades econmicas. A proporo de variedades convencionais e biotecnolgicas
varia nos principais cultivos industriais, que so a soja, o algodo, o milho e a canola. No Brasil a CTNBio
exige um isolamento mnimo de 400 metros, ou de 40 dias, entre os plantios de milho GM e milho
convencional.
A contaminao de um cultivo convencional por um cultivo biotecnolgico acarreta perdas
considerveis para o produtor rural. Nos Estados Unidos, a contaminao de cultivos convencionais de
arroz e milho por cultivos geneticamente modificados custou 1 bilho de dlares s empresas
produtoras de sementes.
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BIOTECNOLOGIA E AGRICULTURA
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Multiplicadores
Produtores e comerciantes
Agricultores
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BIOTECNOLOGIA E AGRICULTURA
O produtor rural pode pagar os royalties ou taxa tecnolgica (TT) na compra da semente. Quando as
sementes biotecnolgicas no tm as limitaes dos hbridos, ele pode optar por guardar legalmente
parte do produto da safra para o prximo plantio, pagando um percentual antes da entrega na moega.
Se ele no salvar as sementes de acordo com a lei, ser cobrado na entrega do gro.
As patentes tm uma durao limitada; entre as que j expiraram esto a do herbicida Roundup
(2000) e a da primeira variedade RR1 de soja RoundupReady (2015). Algumas organizaes se
manifestaram a favor de uma verso pblica sem royalties, algo assim como um genrico (Open Source
Seed Iniciative), mas a inovao est nas mos das empresas produtoras de sementes, que logo lanam
no mercado produtos cada vez mais eficientes, para substituir os que perderam a proteo.
A novidade no mercado so as plantas piramidadas, que combinam vrios eventos, tais como a
tolerncia a dois herbicidas, a tolerncia herbicida e a resistncia a insetos, ou a resistncia a dois
tipos de insetos, um que ataca a raiz e outro a parte superior da planta.
Seu nmero aumenta a cada dia. A soja RR2 Bt, que rene a tolerncia herbicida e a resistncia a
insetos, substituiu a soja RR1. O milho Genuity SmartStaxTM (Monsanto, DowAgroSciences), por
exemplo, rene oito genes para o controle de pragas acima e abaixo do solo, e a tolerncia a herbicidas
para o controle de plantas daninhas. Na frica, o projeto WEMA (do ingls, Water Efficiency for Africa)
espera dispor, em 2017, de um milho Bt com eventos piramidados de resistncia a insetos e tolerncia
sequia.
A ADOO DOS CULTIVOS BIOTECNOLGICOS NO MUNDO
Em 1996, Estados Unidos, China, Argentina, Canad e Austrlia iniciaram o cultivo de PGMs em 1,7
milho de hectares.
O International Service for the Aquisition of Agri-Biotech Applications (ISAAA) uma organizao
internacional que divulga anualmente os dados correspondentes adoo dos cultivos biotecnolgicos
no mundo. Segundo o ISAAA, em 2015, 28 pases semearam com PGMs uma superfcie de 179,7
milhes de hectares, liderados por Estados Unidos, Brasil, Argentina, ndia e Canad.
Dos 28 pases que semearam PGMs, 8 so industrializados e 20 em vias de desenvolvimento. Dentre
os pases que no permitem o cultivo de PGMs, 39 os importam (Tabela 16.1). O trao dominante foi
a tolerncia herbicida e os principais cultivos soja, milho, algodo e canola, seguidos por beterraba
sacarina, alfafa e papaia.
Mais de 90% dos 18 milhes de agricultores que plantaram sementes biotecnolgicas so pequenos
produtores rurais, especialmente na China, na ndia, nas Filipinas e na frica do Sul. Os cultivos
biotecnolgicos possibilitaram o aumento da produo agrcola e melhoraram as condies
econmicas desses agricultores.
Nos pases onde a mo de obra agrcola est constituda principalmente por mulheres, os cultivos
biotecnolgicos melhoraram suas condies de vida, ao permitir que elas dedicassem mais tempo ao
cuidado das crianas ou a outras atividades. Os problemas de sade causados pela contaminao
ambiental com agrotxicos diminuram em funo de uma reduo de 14% na aplicao de inseticidas,
sendo que em alguns casos essa diminuio teria chegado a 50% (China, Argentina).
Com a liberao da comercializao do arroz Bt na China e do feijo resistente a vrus no Brasil,
inicia-se uma nova etapa que contempla as principais fontes de alimento locais. Encontram-se em
andamento vrios estudos, sobre o gro de bico na frica, a berinjela na ndia, o milho resistente
seca nos Estados Unidos e na frica subsaariana.
OS ESTADOS UNIDOS E A UNIO EUROPEIA
Nos Estados Unidos, trs agncias controlam e regulamentam o uso das novas tecnologias genticas:
USDA (United States Department of Agriculture), EPA (Environmental Protection Agency) e FDA (Food
175
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and Drug Administration). Embora a resistncia aos cultivos transgnicos seja muito baixa, sendo
plenamente adotados desde 1996, cresce em alguns estados um movimento de oposio que pede a
rotulagem.
Na Unio Europeia, a resistncia s PGMs muito alta. Em 1999, uma moratria suspendeu o
cultivo de novas variedades transgnicas, assim como a comercializao de seus produtos. No atingiu
algumas variedades autorizadas anteriormente para cultivo, importao ou utilizao na produo de
alimentos ou de raes.
Em 2003 foram estabelecidas normas de rotulagem e de rastreamento de traos transgnicos e
com a implantao de diretrizes para o cultivo de plantas transgnicas, de maneira a minimizar a
contaminao dos campos de cultivos orgnicos e convencionais.
Recentemente o Conselho da Unio Europeia estabeleceu que cada Estado poder interditar um
cultivo geneticamente modificado com base em consideraes ticas ou socioeconmicas, sem
invocar argumentos cientficos. Apesar da hostilidade das autoridades do Conselho Europeu, h um
bom nmero de organizaes favorveis ao cultivo de plantas geneticamente modificadas: 33 no Reino
Unido, 23 na Itlia, 16 na Espanha e 11 na Alemanha.
ISRAEL
Israel no assinou o Protocolo de Cartagena e no restringe a importao de PGMs nem de seus
derivados. Desenvolve pesquisas biotecnolgicas sobre tomate, batata, eucalipto, soja, algodo,
milho, morango, banana e flores. Os testes de campo devem ser autorizados pelo PPIS (do ingls, Plant
Protection and Inspection Services of Israel).
Encontra-se em preparao uma regulamentao que exige a rotulagem dos produtos com mais de
0,9% de ingredientes derivados de PGMs. Os produtos sem DNA ou protena derivada de uma OGNM
no sero rotulados.
OS PASES DE AMRICA LATINA
Na Amrica Latina (Brasil, Argentina, Paraguai, Uruguai, Bolvia, Colmbia, Chile, Costa Rica, Cuba e
Honduras), os principais cultivos biotecnolgicos so a soja, o milho e o algodo (Tabela 16.1). Embora
o desenvolvimento das sementes dependa geralmente do setor privado, em vrios pases (Argentina,
Brasil, Mxico, Colmbia) o setor pblico comeou a gerar suas prprias variedades, respondendo
demanda local.
Na Argentina, os primeiros exemplos so a soja tolerante sequia da empresa Indear e a batata
resistente vrus, desenvolvida pela Tecnoplant, uma empresa do grupo Sidus. No Brasil, o feijo
resistente a vrus desenvolvido pela Embrapa, e a soja tolerante ao glufosinato, fruto de uma
colaborao entre a Embrapa e a Basf.
Os pases da Amrica Latina contam com uma comunidade acadmica de alto nvel cientfico e
tecnolgico, ativa nas universidades e nos centros de pesquisa, com empresas de tradio histrica na
difuso da tecnologia agropecuria e, em vrios casos, com condies econmicas limitadas pelas
sucessivas crises polticas. Em ambos os pases, numerosas empresas privadas ocupam lugares de
destaque em diferentes setores do mercado biotecnolgico. A existncia de convnios e programas
de intercmbio cientfico tende a elevar o nvel das atividades cientficas e tecnolgicas.
Ao longo dos primeiros quinze anos de implantao das novas tecnologias agrcolas, cada pas seguiu
sua prpria trajetria at estabelecer as normas legais que garantem o progresso em condies
seguras.
FRICA SUBSAARIANA
O desenvolvimento da agricultura africana permitiria reduzir a pobreza e aumentar a segurana dos
alimentos. At o momento, frica do Sul, Burkina Faso e Sudo comercializam o algodo resistente a
insetos e a soja e o milho tolerantes ao glifosato. Em Burkina Faso, Qunia, Moambique, Nigria,
176
BIOTECNOLOGIA E AGRICULTURA
frica do Sul, Tanznia e Uganda a comunidade cientfica conta com o apoio de organizaes
internacionais para desenvolver cultivos de interesse local: milho, batata-doce, mandioca, arroz, sorgo
e banana. Os traos principais so a resistncia a pragas, a tolerncia sequia e salinidade e outras
condies, como a biofortificao em vitamina A, zinco e ferro.
Contudo, existem dificuldades devido presso cultural da Unio Europeia e, tambm, falta de
regulamentaes locais que possibilitem avanar nos testes de campo.
CHINA
Com uma populao de mais de 1,3 bilho de habitantes e graves problemas ambientais, a China estar
investindo 4 bilhes de dlares em biotecnologia, at 2020.
A China o maior importador de alimentos do mundo, de modo que parte das pesquisas est
relacionada com o arroz, o milho, o trigo e a soja. Em relao ao meio ambiente, a adoo do algodo
BT por 70% dos agricultores permitiu em 5 a 8 anos a reduo do uso de pesticidas em 50 a 60 %.
AS NOVAS TECNOLOGIAS
Nos ltimos 20 anos, diferentes pases tiveram uma atitude que variou entre a rejeio absoluta e a
aceitao dos cultivos geneticamente modificados. Atualmente, 271 organizaes e instituies
cientficas reconhecem a segurana dos cultivos geneticamente modificados e seus benefcios
potenciais.
Tanto o setor pblico como o setor privado de vrios pases tm capacidade para utilizar a
tecnologia em benefcio da sociedade, colocando no mercado cultivos adaptados s condies locais,
uma vez satisfeitos os requerimentos e as regulamentaes determinados pelas autoridades
competentes.
As novas tecnologias de edio gnica j esto sendo usadas: na China, para obter um trigo
resistente a fungo e um arroz mais produtivo; no Reino Unido, para produzir uma variedade de cevada
resistente seca. O primeiro produto comercializado a SU Canola, resistente ao herbicida
sulfoniltiouria. Contudo, ainda cedo para prever qual ser o destino das novas variedades, porque
sua implantao depende do processo regulatrio a ser adotado.
-------------TABELA 16.1. As plantas geneticamente modificadas no mundo (Dados do ISAAA, maro de 2016)
A. Os cultivos de plantas geneticamente modificadas
Abbora (Cucurbita pepo), Alfafa (Medicago sativa), Algodo (Gossypium hirsutum L.), Ameixa (Prunus domestica), Arroz
(Oryza sativa L.), Batata (Solanum tuberosum L.), Berinjela (Solanum melongena), Beterraba sacarina (Beta vulgaris), Canade-acar (Saccharum sp), Canola argentina (Brassica napus), Canola polonesa (Brassica rapa), Chicria (Cichorium intybus),
Choupo (Populus sp.), Cravo (Dianthus caryophyllus), Eucalipto (Eucalyptus sp.), Feijo (Phaseolus vulgaris), Grama Creeping
Bentgrass (Agrostis stolonifera), Linho (Linum usitatissumum L.), Ma (Malus x Domestica), Melo (Cucumis melo), Milho
(Zea mays L.), Papaia (Carica papaya), Petnia (Petunia hybrida), Pimento doce (Capsicum annuum), Rosa (Rosa hybrida),
Soja (Glycine max L.), Tabaco (Nicotiana tabacum L.), Tomate (Lycopersicon esculentum), Trigo (Triticum aestivum).
B. Pases que pararam de plantar cultivos geneticamente modificados
Pases
(N0 de eventos aprovados)
Egito (1)
Indonsia (15)
Ir (1)
Unio Europeia*** (86)
177
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(**) ustria, Blgica, Crocia, Chipre, Dinamarca, Estnia, Finlndia, Grcia, Hungria, Irlanda, Itlia, Letnia, Litunia, Luxemburgo, Malta,
Pases Baixos, Eslovnia, Reino Unido
178
C A P T U L O 14
BIOTECNOLOGIA
E CRIAO DE ANIMAIS
Das 148 espcies conhecidas de mamferos terrestres, onvoros ou herbvoros, que alcanam um peso
de 45 kg, somente 14 foram domesticadas. Em relao s restantes, o fracasso costuma ser atribudo
a seis razes: uma dieta que o homem no pode ministrar; crescimento lento e espaado (elefantes e
gorilas); tendncias agressivas (ursos e rinocerontes); relutncia a se reproduzir em cativeiro (pandas,
guepardos); falta de estruturas de liderana (antlope); tendncia ao pnico em lugares fechados ou
em presena de um predador (gazelas).
Seja como for, a criao de animais para a alimentao est limitada a um pequeno nmero de
espcies de mamferos, ruminantes (bovinos, ovinos, caprinos) e monogstricos (sunos, coelhos e
aves), de peixes, de crustceos e de mariscos. Tambm se criam animais para a prtica de esportes
(cavalos) e como companhia (gatos, cachorros, pssaros, peixes).
Os grandes estabelecimentos agrcolas praticam a cultura extensiva de gado (bovino, ovino,
caprino) em pradarias e pastagens, enquanto os menores tendem a investir em culturas intensivas de
altos rendimentos (gado leiteiro, aves, sunos e peixes), que degradam o ambiente.
A produo agrcola depende tambm de fatores econmicos e sociais. medida que melhora o
nvel de vida da populao, mudam os padres de consumo e, consequentemente, a atividade
agropecuria. Estima-se que, entre 1993 e 2020, os pases em desenvolvimento duplicaro o consumo
de carne. Pequenas empresas familiares sero substitudas por outras de produo intensiva,
orientadas a satisfazer o mercado urbano; a criao de aves e sunos aumentar em detrimento da
criao de ruminantes. Essas mudanas exigiro maior eficincia na seleo, no gerenciamento das
empresas e nos cuidados com a alimentao e a sade dos animais.
Nos pases desenvolvidos, o objetivo primordial aumentar, ou manter, a quantidade de produtos
(leite, ovos, carne e l) e, simultaneamente, diminuir os custos. Em relao aos mtodos produtivos,
isso significa reduzir o nmero de animais, o trabalho humano e o impacto causado pelas doenas.
As biotecnologias inserem-se tanto na alimentao, como na conservao da sade dos animais,
possibilitando tambm o controle da reproduo e a acelerao da seleo gentica. Perspectivas
novas surgem com a utilizao dos animais como biorreatores, para a produo de frmacos.
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180
laticnios. A bactria Methylophilus methylotropus cresce sobre metanol, obtido a partir do gs do Mar
do Norte, originando uma SCP que comercializada, no Reino Unido, sob o nome de Pruteen.
O acrscimo de enzimas (proteases, celulases, amilases etc.) tende a aumentar a digestibilidade das
raes. Uma dieta baseada em gros tem o inconveniente de introduzir fsforo e outros nutrientes,
complexados ao cido ftico. No caso dos ruminantes, a flora microbiana do sistema digestrio
consegue disponibilizar parte do fsforo, mas isso no ocorre nos animais monogstricos como os
sunos, as aves e, inclusive, o homem. Os fitatos impedem a assimilao do fsforo, porm, a adio
da enzima fitase na rao melhora a assimilao dos nutrientes e diminui a quantidade de fsforo
excretado no ambiente, que uma das causas da eutrofizao dos cursos de gua.
A adio de antibiticos visa proteger as raes da ao bacteriana. J a adio de probiticos
procura modificar o ambiente gastrintestinal, estimulando a multiplicao de certos tipos bacterianos
em detrimento de outros.
A fitase produzida por fermentao microbiana e, na Europa, obrigatrio adicion-la s raes.
O mercado global de fitase de, aproximadamente, 500 milhes de dlares, 40% do qual situado na
China.
AS RAES TRANSGNICAS
A Unio Europeia exige o etiquetado de toda rao contendo mais de 0,9% de um Organismo
Geneticamente Modificado aprovado previamente, mas no considera necessrio rotular os alimentos
provenientes de animais alimentados com raes geneticamente modificadas (carne, ovos, leite).
O escndalo da vaca louca, seguido pelo caso dos frangos contaminados com dioxina, mostrou o
descaso dos produtores europeus em relao s raes animais. Isso explica a repercusso de alguns
trabalhos (A. Pusztai, 1998; G-E. Sralini, 2012), declarando ter encontrado alteraes do sistema
imune ou formao de tumores em ratos alimentados com batatas ou milho transgnico. Esses
trabalhos foram totalmente desqualificados pela comunidade cientfica, mas ainda so citados como
prova do perigo das raes e dos alimentos transgnicos.
As raes representam at 70% dos custos da criao de animais. Por ser um dos gargalos da
produo agrcola, toda tentativa de baratear as raes costuma ser assimilada rapidamente. Contudo,
devido aos escndalos precedentes e desconfiana da populao, a introduo de plantas
geneticamente modificadas teve que ser analisada cuidadosamente, em diversos tipos de animais. No
foram encontrados sinais de toxicidade da soja, da ervilha, do lupino, do algodo e da batata em ratos
nem da colza em coelhos. As caractersticas das carcaas, dos tecidos e das carnes no mudaram em
animais que receberam alimentos transgnicos.
Numerosos estudos, desenvolvidos em instituies de pesquisa e universidades, mostraram que,
tanto em relao composio qumica, como digestibilidade e ao valor nutritivo, as plantas
biotecnolgicas disponveis so substancialmente equivalentes s convencionais (no transgnicas).
Organizaes internacionais como FAO/WHO (Food and Agriculture Organization e World Health
Organization) consideram, desde 1991, que a ingesto de DNA segura, independentemente de ser
sua fonte transgnica ou no. As organizaes norte-americanas FDA (Food and Drug Agency), em
1992, e EPA (Environmental Protection Agency), em 2000, manifestaram-se no mesmo sentido.
Segundo a FASS (Federation of Animal Science Societies), as raes so digeridas normalmente
pelos animais estudados, sem que sejam detectados cidos nucleicos ou protenas de origem
transgnica na carne, no leite ou nos ovos. Este era um resultado esperado, porque, em funo dos
conhecimentos sobre digesto e absoro, tanto as protenas como o DNA so degradados durante o
processo digestivo.
Em alguns casos, em que as plantas tm as propriedades agronmicas modificadas, como, por
exemplo, o milho resistente a insetos (milho-bt), verifica-se uma reduo substancial de micotoxinas.
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Estas so muito perigosas, para os animais que ingerem os gros contaminados, porque causam
hemorragias, danos no fgado e nos rins, diarreias e cncer. Ao diminuir os ataques de insetos, h
menos leses que possibilitem a infeco e o crescimento dos fungos. Em consequncia, o milho
transgnico melhora a qualidade do alimento e a sade animal, especialmente dos monogstricos,
mais sensveis as micotoxinas que os ruminantes.
A aprovao do milho com fitase (Academia de Cincias Agrcolas da China, Origin Agritech Ltda.)
representa um marco importantssimo para a China.
Esto sendo estudadas plantas com maior digestibilidade, como uma alfafa transgnica com menos
lignina. Por outro lado, o melhoramento das plantas forrageiras tambm abre perspectivas
interessantes. Observou-se, por exemplo, aumento de peso e bom crescimento da l em ovelhas
alimentadas com lupino transformado geneticamente, para sintetizar uma protena de girassol com
alto contedo de metionina.
O MELHORAMENTO GENTICO DO GADO
Existem hoje mais de 5.000 raas de gado, resultantes de muitos anos de adaptao a diferentes
condies ambientais. O melhoramento gentico visa trs objetivos fundamentais: aumentar a
eficincia da converso do alimento para incrementar a taxa de crescimento corporal; acrescer a
produtividade (leite, ovos); modificar a composio da carcaa, aumentando a quantidade de protena
(carne e leite), em detrimento da gordura.
Diferentemente da rea de melhoramento vegetal em que, atravs da venda anual de sementes,
as grandes empresas conseguem recuperar rapidamente seus investimentos; a rea de melhoramento
animal tem um retorno mais lento porque existem perodos maiores entre uma gerao e outra.
Muitas das caractersticas selecionadas em animais mostram uma variao contnua, que, em vez
de responder a um gene nico, resulta da contribuio de vrios genes (herana polignica ou
quantitativa). Se estiverem situados em cromossomos diferentes, a seleo dos genes de interesse
acarretar genes vizinhos, que podem ser desfavorveis.
Os frangos do tipo broiler, por exemplo, tm-se transformado em um alimento comum e barato,
em contraste com anos atrs. Selecionados por 50 geraes, esses frangos crescem quatro ou cinco
vezes mais rpido que seus antepassados. Mas, no caminho, apareceram alguns efeitos deletrios, tais
como o aumento do teor de gorduras, a fertilidade baixa e a presena de anormalidades esquelticas.
Por outro lado, galinhas selecionadas como poedeiras desenvolveram osteoporose, ao desviar o
clcio do esqueleto para a construo da casca dos ovos. E os perus desenvolveram um tamanho tal
que no conseguem acasalar sem riscos, sendo necessrio proceder inseminao artificial. A seleo
assistida por marcadores moleculares obteve um grande sucesso na rea, justamente por amenizar a
dificuldade de se lidar com traos multignicos.
Ciclos de vida mais longos tornam mais lenta a recuperao dos investimentos de modo que, a
exceo da produo de frangos, o setor resulta menos atrativo para as grandes empresas privadas. A
distribuio do material gentico se encontra nas mos dos pecuaristas e de pequenos
empreendimentos privados, responsveis por mais de 80% da pesquisa e desenvolvimento na rea
agropecuria dos pases desenvolvidos.
O CONTROLE DA REPRODUO
O controle da reproduo dos animais permite a expanso rpida dos estoques, reduzindo os custos
de transporte de animais. O processo comea com a seleo dos pais (reprodutores e matrizes),
escolhidos pelas suas caractersticas genticas, relativas produtividade e sade (Figura 15.1).
182
Desde meados do sculo XX, pratica-se a inseminao artificial no gado bovino, ovino, caprino, porcino
e em aves (perus, frangos). A tcnica mais utilizada com o gado de leite que com o de corte, porque
o preo por cabea mais alto. Complementa-se a inseminao artificial com a sexagem prvia do
smen, a fim de escolher os espermatozoides que podero dar origem a fmeas.
O smen colhido de um reprodutor introduzido no tero das matrizes. Considerando que uma
nica ejaculao de um touro produz aproximadamente 100 doses de smen, que um animal chega a
produzir 4.000 doses por ano e que a eficincia da inseminao chega a 50%, o mtodo permite obter
aproximadamente 2.000 crias por reprodutor ao ano.
O desenvolvimento das tcnicas de criopreservao permite utilizar tanto o smen fresco como o
congelado, possibilitando, tambm, a conservao da biodiversidade de raas em perigo de extino.
Uma dose de smen custa a partir de 15 reais e, se for de qualidade comprovada, 20 reais. O touro
Bandido, que teve uma exitosa participao em uma novela de televiso e morreu prematuramente,
deixou smen congelado. Dele descendem os touros Zango, Matador e Carrancudo, que participam
em festas de rodeio por todo o Brasil.
Normalmente, uma vaca produz uma cria por ano. Tratada com hormnios para induzir uma
superovulao e inseminada artificialmente, essa vaca poder gerar simultaneamente cinco embries,
que sero colhidos mediante a lavagem do tero e transferidos a uma vaca receptora. A
criopreservao garante que 25 a 50% dos embries congelados possam originar animais vivos. Como
o processo todo (superovulao + inseminao + transferncia dos embries) pode ser repetido quatro
vezes por ano, apesar de algumas limitaes tcnicas, uma vaca parir 10 crias por ano.
-------------FIGURA 14.1. O Controle da reproduo em bovinos
O controle da reproduo dos animais domsticos depende de diversas tcnicas (superovulao, inseminao artificial, coleta
de ovcitos ou de embries, criopreservao, transplante de embries).
Vaca doadora
Touro reprodutor
Vaca doadora
Ovrios obtidos
nos matadouros
Superovulao
Smen
Congelamento
Inseminao artificial
Superovulao
Coleta dos
ovcitos
Coleta dos
ovcitos
Fecundao in vitro
Transplante
Vacas receptoras
Transplante
Vacas receptoras
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Outra variante consiste em extrair os ovcitos das vacas superovuladas, ou dos ovrios de animais
sacrificados, procedendo a uma fecundao artificial, antes de reimplantar os embries nas vacas
receptoras. O nmero de embries tambm pode ser aumentado por bipartio, por
micromanipulao do blastcito com 64 a 128 clulas. A aplicao de testes genticos nos pais e nos
embries, antes de ser reimplantados, permite uma seleo apurada da descendncia.
Sendo a produo de alimentos um dos objetivos fundamentais da atividade agropecuria, os
modificadores metablicos so utilizados tanto para incrementar a produo, como para modificar a
relao entre carne e gordura, e, assim, diminuir o desperdcio.
AS NOVAS TECNOLOGIAS
MARCADORES MOLECULARES E SELEO GENMICA
O estudo do genoma dos animais domsticos fornece informaes para a seleo de alguns caracteres.
Em relao aos monognicos, o processo seletivo oferece poucas dificuldades, especialmente se o
gene responsvel por uma caracterstica de interesse estiver estreitamente associado a um
determinado marcador, que possa ser detectado facilmente por tcnicas moleculares. O processo se
complica com os caracteres polignicos, porque devem correlacionar-se os principais genes que
participam na variao do trao escolhido, e as sequncias no funcionais que, distribudas ao longo
do genoma, iro cumprir o rol de marcadores moleculares.
Centenas de marcadores foram identificados em diferentes espcies. Trata-se de SNPs e de
sequncias curtas de DNA repetidas um nmero varivel de vezes (mini ou microssatlites), que so
transmitidas de uma gerao a outra e podem ser identificadas por eletroforese. Alm de facilitar a
seleo, os marcadores permitem a determinao do parentesco (pedigree) e a identificao dos
animais, tanto no campo como nos produtos derivados.
J foram sequenciados vrios genomas de animais domsticos: frango (Gallus gallus), porco (Sus
scrofa), cachorro (Canus familiaris), vaca (Bos taurus), cavalo (Equus caballus), gato (Felis catus), coelho
(Oryctolagus cuniculus), peru-selvagem (Meleagris gallopavo), dromedrio (Camelus dromedarius),
abelha (Apis melfera), ovelha (Ovis aries), peixe-zebra (Danius raris) etc.
medida que um genoma completado, as tcnicas eletroforticas so substitudas por chips de
DNA (microarrays). O sequenciamento do genoma cria uma quantidade extraordinria de dados,
correlacionando marcadores e caractersticas fenotpicas. Com essa informao, estabelecem-se
equaes preditivas para os cruzamentos seletivos, substituindo a seleo por marcadores pela
seleo genmica.
A CLONAGEM
Em 1975, J. Gurdon (Prmio Nobel de Medicina 2012) mostrou que, transferindo um ncleo de girino
a um ovcito anucleado de r, gerava-se um girino normal e, aps a metamorfose, uma r adulta. O
sucesso do experimento diminua notavelmente quando o ncleo era extrado de clulas
diferenciadas.
No Instituto Roslin (Esccia), Ian Wilmut tentou transferir o ncleo de uma clula de glndula
mamria de ovelha Finn Dorset a um ovcito receptor anucleado de uma ovelha Scottish Blackface. O
embrio resultante seria implantado em uma ovelha Scottish Blackface. Depois de 277 tentativas
frustradas, nasceu uma ovelha Finn Dorset, Dolly (1977-2003), o primeiro animal obtido por
transferncia nuclear (Figura 14.2). Fenmeno miditico, Dolly desenvolveu um tumor no pulmo,
sendo sacrificada depois de desenvolver artrite em uma pata e de mostrar sinais de envelhecimento
precoce.
184
Cultivo de clulas
de glndula mamria
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Diferente dos bovinos, os equinos nasceriam mais saudveis. Em 2003, a mula Joy of Idaho foi o
primeiro clone de um hbrido de uma gua e um jumento. No mesmo ano e depois de 847 tentativas,
nasceu na Itlia a gua Prometea, gerada a partir de uma clula somtica materna, o que a torna ao
mesmo tempo filha e irm gmea de sua me. Em 2005 obtiveram-se os primeiros clones de um cavalo
de corrida (Pieraz Cryozootech) e de um cavalo de salto (Paris-Texas). Recentemente, nasceu na
Argentina BS andubay, clone de andubay, um cavalo crioulo (Halitus, BioSidus). No Brasil, as potras
Branca e Neve foram obtidas por bipartio embrionria. Observe-se que a inseminao artificial e os
tratamentos de fertilidade esto proibidos em cavalos de corrida, puros-sangues.
Contudo, as possibilidades da clonagem vo alm do aumento da taxa de fertilidade de animais
elite e da conservao de animais com caractersticas interessantes. A clonagem pode ser utilizada
para a conservao de espcies raras e em risco de extino, para a criao de rebanhos homogneos
que facilitem trabalhos de pesquisa e para a propagao rpida de alguns organismos transgnicos.
A TRANSGNESE
Na dcada de 1980, a transferncia de um gene codificador de hormnio de crescimento humano
originou ratos duas vezes maiores. Quando repetida a experincia com porcos, obteve-se o Beltsville
pig, um animal que apresentou problemas variados: dificuldades respiratrias, artrite, letargia etc. O
experimento suscitou vrios questionamentos ticos em relao ao tratamento infligido aos animais.
De um modo geral, salvo em peixes, a transgnese do hormnio de crescimento (GH, do ingls growth
hormone e GHFR, do ingls growth hormone factor releasing) nos animais domsticos revelou-se
problemtica.
Um caso interessante pelos benefcios que poderia trazer para o meio ambiente o do Enviropig
(Universidade de Guelph, Canada), um porco portador de um gene bacteriano codificador de fitase.
Secretada na saliva, a enzima reduz em 40% a concentrao de fsforo no esterco. Por falta de apoio
financeiro e sem a aprovao das autoridades pertinentes, em 2012, o projeto teve que ser
descontinuado, e os porcos, sacrificados.
A partir de 1988 comearam a ser produzidos vacas, cabras, coelhos, ovelhas, frangos, porcos e
peixes transgnicos. As novas tecnologias de edio gnica podero modificar a velocidade do
processo. No entanto, a comercializao de animais transgnicos ou seus produtos seguir avanando
lentamente, no s pelos altos custos, como pelo tempo demandado para responder ao processo
regulatrio e pela resistncia eventual dos consumidores.
Experincias de transgnese visam melhorar a qualidade do leite de vaca, modificando as protenas
(leite humanizado para lactantes) ou reduzindo a lactose (para as pessoas com intolerncia). Na Nova
Zelndia e nos Estados Unidos vm sendo obtidas vacas que produzem mais casena no leite, uma
propriedade interessante para a indstria de queijos.
Algumas tentativas tambm foram feitas em relao produo de fibras animais: ovelhas
transgnicas que no precisassem de determinados suplementos de aminocidos na dieta;
modificao da estrutura das fibras de l e de caxemira para facilitar o tingimento e diminuir o
encolhimento; alterao das propriedades da seda. A partir de uma protena de aranha, sintetizada
por uma cabra transgnica, se desenvolveu e patenteou o BiosteelTM, um produto muito resistente
que pode ter diversos usos, inclusive militares.
Uma das maiores preocupaes existentes o risco de escapamento de um animal transgnico, e
a consequente possibilidade de difundir o transgene nas populaes naturais. O risco depende de
algumas caractersticas do animal, especialmente a mobilidade, a capacidade de escapar do cativeiro
e a de voltar ao estado selvagem (Tabela 14.1). Outros fatores adicionais que devem ser considerados
em uma simulao de risco so a viabilidade juvenil, a idade de amadurecimento sexual, a fertilidade
do macho, a fecundidade da fmea, a viabilidade do adulto etc.
186
MOBILIDADE
CAPACIDADE DE VOLTAR
AO ESTADO SELVAGEM
CAPACIDADE DE ESCAPAR
DO CONFINAMENTO
Camundongos
Alta
Alta
Alta
Peixes
Alta
Alta
Alta
Insetos
Alta
Alta
Alta
Porcos
Baixa
Alta
Moderada
Aves
Baixa
Baixa
Baixa
Vacas
Baixa
Baixa
Baixa
--------------
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Gene codificador
de hormnio de crescimento
Gene codificador de
protenas anticongelamento
188
Salmo AquAdvantage
(AquaBounty Technologies)
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modo geral, a sade animal movimenta muito menos dinheiro que a sade humana. Salvo em relao
aos animais de estimao, o mercado de sade animal cresce lentamente. Algumas experincias em
andamento so a produo de anticorpos monoclonais para a artrite reumatoide no leite de
ruminantes, ou a sntese de um antibitico de amplo espectro por vacas leiteiras, a fim de diminuir a
incidncia de mastite por Staphylococus aureus.
Na Amrica Latina, numerosas empresas do setor privado elaboram medicamentos, vacinas e
testes diagnsticos dirigidos sade animal. Entre as principais: Biognesis e Bag (Argentina), Valle
(Brasil), BiosChile (Chile), Laverlam (Colmbia), IASA (Mxico), Laboratrios Santa Elena (Uruguai).
Cuba se destaca pela vacina contra o carrapato, que vendida em vrios pases da Amrica Latina.
A aquicultura abre um espao para as empresas que desenvolvem testes de diagnstico e vacinas
para os patgenos que afetam as fazendas, como a argentina Tecnovax S.A. e as chilenas Recalcine e
AquaGestin, que desenvolveram uma vacina contra o vrus da anemia infecciosa do salmo.
Em relao febre aftosa, uma endemia que afeta a produo de carne e de leite, novas vacinas
mais eficientes e fceis de aplicar so indispensveis nas regies em que a doena no foi totalmente
erradicada e em que aparecem surtos eventuais: Argentina, Brasil, Colmbia, Mxico, Paraguai e
Uruguai.
Do ponto de vista comercial, as vacinas DIVA (do ingls, differentiating infected from vaccinated
animals) so especialmente interessantes porque permitem distinguir animais infectados de animais
vacinados. Estuda-se tambm a substituio da vacina atual de vrus inativado, por alfafa transgnica
que expresse algumas protenas do vrus da aftosa (plant-pharming).
Tecnologias avanadas so habitualmente aplicadas na produo de vacinas veterinrias. At o
incio de 2016, 20 vacinas geneticamente modificadas foram liberadas no Brasil pela CTNBio (Comisso
Tcnica Nacional de Biossegurana).
NOVAS UTILIZAES DOS ANIMAIS DOMSTICOS
MODELOS DE ESTUDO PARA DOENAS HUMANAS
A transgnese utilizada em vrios animais (ratos, camundongos, coelhos e macacos), para transferir
caractersticas que permitem sua utilizao como modelo de doenas humanas.
O primeiro modelo foi obtido em 1988, ao se transplantar tecidos do sistema imune extrados de
um feto humano a camundongos geneticamente imunodeficientes; os animais adquiriram um sistema
imune humano. No mesmo ano, obtivera-se o oncomouse, um camundongo com um gene para cncer
de mama que permite testar tanto o efeito carcinognico de algumas substncias como a ao
teraputica de outras. Com este camundongo, a Universidade de Harvard recebeu a primeira patente
para um animal transgnico.
A partir desse momento vrios animais foram redesenhados para servir como modelo; coelhos com
diferentes genes para lipoprotenas humanas constituem linhagens sensveis ou resistentes a regimes
ricos em colesterol; camundongos modificados geneticamente possibilitam os estudos sobre epilepsia,
obesidade; mapeamento gentico de doenas neuropsiquitricas em cachorros etc.
Mediante as novas tcnicas de edio gnica (TALENs), o Instituto Roslin obteve, recentemente,
um modelo animal (porco) para o estudo da arterioesclerose. Foram alterados os genes codificadores
dos receptores da lipoprotena de baixa densidade (LDL), sem os quais essa frao do colesterol se
acumula no sangue, causando a doena.
Alguns animais domsticos constituem um reservatrio de doenas e as transmitem ao homem.
Preservar a sade dos animais diminui o risco de contgio. Deste modo, uma vacina contra a
leishmaniose canina desenvolvida recentemente no Brasil visa a cortar a corrente de transmisso da
doena do cachorro ao homem.
190
XENOTRANSPLANTES
O porco considerado o fornecedor ideal de rgos para transplante, porque o tamanho e a funo
destes so equivalentes aos dos humanos. Vlvulas de porco substituem j as vlvulas cardacas
humanas, depois de eliminar todas as clulas de porco. A rejeio a um rgo transplantado poderia
ser evitada por knock out ou pelas novas tcnicas de edio gnica, do gene da 1,3galactosiltransferase (1,3 GalT). Contudo, restaria um dos maiores riscos dos xenotransplantes, que
a transmisso de vrus de uma espcie a outra.
OS ANIMAIS COMO BIORREATORES
As protenas teraputicas incluem hormnios, anticorpos, fatores de crescimento e fatores de
coagulao. Os genes codificadores de vrias delas j foram transferidos a microrganismos. Porm,
devido necessidade de modificaes ps-traducionais, algumas protenas s podem ser sintetizadas
em clulas animais, cultivadas em biorreatores. Contudo, a quantidade de protena produzida muito
pequena e os custos operacionais muito altos.
Uma alternativa a transformao gentica de um animal para convert-lo em um biorreator que
expresse a protena de interesse no leite, no sangue, na urina ou nos ovos. De fato, precisa-se de 2 a 3
vezes menos capital inicial, e o custo da protena recombinante cai entre cinco e dez vezes.
Obviamente, a eleio de uma ou outra tecnologia depender da demanda do mercado e da dosagem
requerida. A aprovao de um produto demanda os testes clnicos correspondentes e normas
regulatrias so estritas e demoradas.
Poucos meses depois do nascimento de Dolly, o mesmo grupo do Instituto Roslin e PPL Therapeutics
anunciou o nascimento de Polly, uma ovelha transgnica para o gene codificador do fator IX, uma
protena fundamental para a coagulao sangunea e que falta nos hemoflicos. Muitos produtos esto
sendo desenvolvidos atualmente no leite (vacas, cabras, ovelhas, porcos) e nos ovos (aves). Em relao
ao fator IX humano, por exemplo, porcos transgnicos excretam a protena no leite em quantidade
250 a 1.000 vezes maior do que se consegue em biorreatores microbianos. Bastariam algumas
centenas de animais para suprir as necessidades de toda a populao.
Testes clnicos de vrios medicamentos encontram-se em andamento. Na Esccia, PPL Therapeutics
Ltd. cria 200 ovelhas produtoras de AAT (-1-antitripsina), uma substncia que se encontra em testes
clnicos para o tratamento de enfisema hereditrio e fibrose cstica. Nos Paises Baixos, Pharming BV
obteve vacas produtoras de lactoferrina humana, uma protena com propriedades antimicrobianas.
Na Argentina, BioSidus mantm um tambo farmacutico com duas dinastias de vacas: Pampa,
produtora de hormnio de crescimento, e Patagonia, produtora de insulina. No Brasil, a Universidade
do Cear mantm um rebanho de cabras transgnicas de raa Canind que secreta no leite o fator de
estimulao de colnias de granulcitos humanos (hG-CSF).
Hematech Inc. mantm um rebanho em que os genes bovinos foram removidos (knock out) e
substitudos (knock in) por genes humanos. Uma vez imunizados, os animais produzem anticorpos
policlonais humanos que podem ser utilizados para combater infeces, assistir a pessoas com o
sistema imune comprometido ou tratar doenas autoimunes (artrite reumatoide). Anticorpos
humanos (Origen Therapeutics) e interferon (AviGenics) tambm so produzidos em ovos de aves
transgnicas.
A empresa GTC Biotherapeutics produz mais de 60 protenas teraputicas diferentes no leite de
cabras e vacas.Com a liberao de ATryn, uma antitrombina com propriedades anti-inflamatrias e
anticoagulantes, na Europa (2006) e nos Estados Unidos (2009), esperava-se uma modificao no
mercado de fatores de coagulao recombinantes. Porm, as promessas no se confirmaram. S em
dezembro de 2015, o FDA aprovou a liberao comercial do medicamento Kanuma (sebepilase alfa),
191
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de Alexion Pharmaceuticals, para o tratamento de uma doena lisossmica. A enzima produzida nos
ovos de galinhas geneticamente modificadas.
Outros produtos esto sendo preparados para fazer frente a um eventual surto de bioterrorismo
como, por exemplo, anticorpos humanos contra antraz, varola e botulismo em vacas transgnicas
(TransOva), ou antdotos contra as armas qumicas como o gs Sarin em cabras (Nexia).
Todas estas aplicaes exigem o respeito a normas de segurana estritas. Parece fundamental
extremar os cuidados com a eliminao das carcaas e evitar o escapamento de animais transgnicos
para produtos medicinais, assim como a entrada acidental de seus produtos na cadeia dos alimentos.
O MARCO CONCEITUAL DOS TRS Rs
O uso de animais em experimentos tem suscitado numerosos debates, em funo do sofrimento que
se lhes infringe e da dificuldade em se transpor ao ser humano a informao obtida nessas pesquisas.
Estima-se em 115 milhes o nmero de animais utilizados por ano em pesquisas cientficas entre
roedores (83,5%), primatas (0,15%), gatos (0,06%) e ces (0,24%).
Em 1959, Russell e Burch estabeleceram um marco conceitual conhecido hoje como os trs Rs
(do ingls replacement, reduction and refinement). No momento atual, a cincia no tem como
prescindir dos testes em animais em algum momento do desenvolvimento de novos medicamentos e
de outras pesquisas. Contudo, os Rs deram incio a uma reflexo tica em relao aos animais (Tabela
14.2).
Admite-se hoje que nem tudo o que tecnicamente possvel deve ser permitido, cabendo aos
Comits de tica das instituies de pesquisa discutir este aspecto em relao aos projetos que
envolvem seres vivos, a fim de evitar o conflito entre o bem dos seres humanos e o dos animais.
Nos ltimos anos tem-se desenvolvido numerosas iniciativas para substituir ou reduzir o nmero
de animais no ensino, especialmente na formao de pesquisadores e tcnicos. Em bancos de dados
como NORINA (A Norwegian Inventory of Alternatives) encontram-se numerosas alternativas para
substituir as disseces e outras prticas que envolvam procedimentos com animais.
Contudo, nem sempre os maus-tratos decorrem dos procedimentos experimentais, tambm
podem ser genticos. Um exemplo significativo o da raa bovina Belgian Blue, que apresenta um
crescimento muscular extraordinrio devido a uma mutao no gene codificador da miosina. A carne
macia e com muito pouca gordura, mas devido largura reduzida do canal plvico e ao grande
tamanho dos bezerros, o nascimento s possvel por cesrea. Alguns pases, como a Dinamarca,
pedem a extino desta raa.
-------------TABELA 14.2. Significado e alcance dos trs Rs (do ingls replacement, reduction, refinement)
R
SIGNIFICADO
EXEMPLOS
Substituir
Substituio de animais vertebrados conscientes por seres inscientes ou por mtodos in vitro.
Reduzir
Refinar
192
OS ANIMAIS DE ESTIMAO
O bem-estar dos animais domsticos uma responsabilidade do homem, que deve lhes dar qualidade
de vida e minimizar o sofrimento e a dor. Entre estes, os bichinhos de estimao constituem um grupo
parte. Submetidos a processos seletivos diversos, eles experimentam algumas consequncias
negativas como a surdez, que atinge quase 10% dos dlmatas. Os cachorros, alis, carregam 300
condies genticas recessivas das quais 250 foram descritas tambm no homem.
Em 2015, estimaram-se em mais de 14 bilhes de dlares os gastos em produtos de sade para os
pets norte-americanos. Trata-se de vacinas (raiva, hepatite, leucemia felina etc.) e medicamentos
(artrite, parasitas, alergias, problemas dentrios, doenas cardacas, falncia renal, ansiedade de
separao, sndrome de disfuno cognitiva etc.).
O mercado tambm propcio para a clonagem dos animais de estimao. Algumas empresas j
esto envolvidas com a tecnologia, que at agora parece ser mais fcil em relao aos gatos que aos
cachorros.
O desenvolvimento de Night Pearls, um peixe transgnico que brilha no escuro, custou US$ 2,9
milhes. Inicialmente desenhado para monitorar a qualidade da gua, este peixe se transformou em
mascote. Existem variedades com fluorescncia verde, vermelha e com uma combinao das duas
cores, a um preo de US$ 17,40, no lanamento em Taiwan (2003).
193
C A P T U L O 15
BIOTECNOLOGIA E ALIMENTOS
OS ALIMENTOS FERMENTADOS
As fermentaes foram descobertas empiricamente por diversos povos, em diferentes momentos
histricos. Assimiladas rapidamente pelo homem, suas duas vantages fundamentais eram a
preservao dos alimentos e a eliminao das substncias txicas de alguns gros.
Os processos fermentativos desenvolveram-se de modo artesanal at a segunda metade do sculo
XIX, quando as descobertas cientficas sobre os microrganismos e as enzimas possibilitaram o
desenvolvimento da indstria de alimentos, que soube se apropriar de todas as cincias afins
(microbiologia, bioqumica, engenharia qumica, automao etc.).
Os alimentos fermentados constituem hoje a terceira parte da dieta humana. Seja por facilitar a
assimilao dos nutrientes, seja por apresentar menos substncias txicas, esses alimentos entram na
categoria dos denominados alimentos funcionais, isto , alimentos que provm benefcios extras, alm
dos que seriam esperados em funo de sua composio.
Afora os produtos de panificao, as bebidas alcolicas e os laticnios, existem muitos outros tipos
de alimentos fermentados. Alguns so de origem animal (pescado, embutidos e presuntos), mas a
maioria de origem vegetal, tanto no Ocidente (chucrute, picles, azeitonas, caf, cacau, ch) como no
Oriente (shoyu, mis, tempeh, kimchi etc.) e na frica (gari, kokonte ou lafun, agbelima, togwa, kenkey
etc.).
O PO
A arte da panificao surgiu em diferentes lugares, entre 7000 e 5000 a.C. Os primeiros pes eram
umas bolachas planas, de cereais modos e gua, cozidas sobre pedras quentes. Logo deve ter sido
observado que, deixando a massa em repouso por um tempo, melhorava-se a textura e a
digestibilidade dos pes. O passo seguinte ocorreu, provavelmente, ao observar o crescimento do po
quando se juntava, massa recm-preparada, uma pequena parte da massa crua da preparao
anterior (massa cida ou p de massa). Este procedimento j era conhecido por egpcios e hebreus,
5 mil anos atrs.
Os estudos microbiolgicos atuais indicam a coexistncia, no p de massa, de bactrias lcticas e
leveduras. As enzimas presentes no gro catalisam a transformao do amido em acares, que so
transformados em cido lctico, pelas bactrias, e em etanol pelas leveduras. Devido liberao de
CO2, formam-se bolhas que conferem porosidade e leveza massa. Alm de acelerar o crescimento, a
preparao de um p de massa permite a seleo e o enriquecimento dos microrganismos dos
cereais.
BIOTECNOLOGIA E ALIMENTOS
Farinhas
gua
Leveduras
Enzimas
Outros Aditivos
Fermentao principal
Diviso da massa
Boleamento
Fermentao secundria
Moldagem
Fermentao final
Cozimento
Resfriamento
Corte em fatias
Embalagem e distribuio
--------------
195
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O processo fermentativo envolve vrias etapas, durante as quais o CO2 liberado forma bolhas que,
retidas na massa, aumentam seu volume. Entre uma e outra etapa, a massa dividida e boleada,
facilitando a redistribuio dos ingredientes e o desenvolvimento das caractersticas organolpticas. A
moldagem visa o alinhamento das fibras proteicas do glten. Durante a coco, a mistura etanol-gua
se transforma em vapor, e a crosta adquire uma cor dourada. A seguir, os pes so cortados e
embalados (Figura 15.1).
O VINHO
A VINIFICAO
O vinho uma bebida proveniente da fermentao alcolica da uva, originada no norte da frica e na
Europa, por volta de 3000 a.C. Durante o amadurecimento da uva, vrias espcies microbianas se
sucedem, primeiro transformando os acares em etanol e, posteriormente, o etanol em cido
actico. Considerando que o destino natural da uva o vinagre, a arte da vinificao representa um
ganho tecnolgico indiscutvel.
A uva composta por gua (86%), acares fermentescveis (12%) e molculas diversas (2%). Retirase o sumo espremendo ou prensando a polpa, sendo frequente o agregado de enzimas de macerao
(pectinases, celulases e hemicelulases) para melhorar o rendimento.
O agente biolgico da fermentao alcolica a levedura Saccharomyces ellipsoidea, que se
encontra na pele da uva. Salvo na produo artesanal, a fermentao no depende das leveduras
naturais da uva; a indstria vitivincola conta com um leque amplo de linhagens, selecionadas para
favorecer o processo fermentativo.
Na vinificao, monitora-se cuidadosamente a fermentao alcolica, at a concluso do processo.
Procede-se ento a duas trafegas, entre as quais ocorre uma segunda fermentao, denominada
fermentao maloltica. Esta etapa, que uma das mais complexas na elaborao dos tintos, se deve
ao de bactrias lcticas, como Oenococcus oeni, que transformam o cido mlico (dicido) em
cido lctico (monocido). Em consequncia da fermentao maloltica, a acidez do vinho diminui e
aparecem as primeiras modificaes aromticas. Posteriormente, o vinho clarificado e colocado para
envelhecer em tonis ou garrafas, at o total desenvolvimento do buqu.
A obteno de um vinho tinto ou branco depende basicamente do tipo de uva e do procedimento
seguido (Figura 15.2). Se quisermos obter vinho branco, utilizaremos uvas brancas ou tintas sem a pele
ou casca que as recobre. As uvas tintas com pele originam vinhos tintos, porque esta libera compostos
fenlicos (antocianinas, flavonas, taninos).
O CULTIVO DA VIDEIRA
Existem diferentes espcies de videiras. A Vitis vinifera fornece os vinhos mais finos, enquanto a Vitis
labrusca, a Vitis ripari e outras variedades mais rsticas da prpria Vitis vinifera so utilizadas para a
elaborao de vinhos comuns. Para cada cultivo, existe uma combinao de solo e clima ideais,
denominada terroir, sem a qual dificilmente se obtero os melhores resultados.
Alguns vinhos resultam da mistura de uvas diferentes, sendo chamados vinhos genricos ou de
corte. Os que so elaborados a partir de uma nica variedade denominam-se varietais. Esta categoria
inclui nomes como Pinot Noir, Chardonnay e Pinot Blanc (vinhos de Borgonha), Cabernet-Sauvignon
(vinhos de Bordeaux), Alvarinho (vinhos de Portugal e Galcia), Tempranillo (vinho da ribeira do Douro),
Sangiovese (vinhos de Chianti) e Zinfendel (vinhos da Califrnia). Observe-se que, dependendo do
processo utilizado para a elaborao do vinho, a partir de uma variedade de uva como a Pinot Noir
podero ser obtidos vinhos to diferentes como um Borgonha ou um Champanhe.
Em 2007, um grupo franco-italiano completou o mapa do genoma da Vitis vinifera, variedade Pinot
196
BIOTECNOLOGIA E ALIMENTOS
Noir. A informao abrange mais de 30.000 genes, muitos dos quais respondem pelos aromas e
sabores dos vinhos, e outros regulam a quantidade de resveratrol, uma molcula que diminui os nveis
de colesterol. Os estudos genmicos abrem numerosas perspectivas para os viticultores. Uma
aplicao importante o monitoramento da madurao da fruta, mediante arrays de marcadores
moleculares, possibilitando a escolha do momento adequado para a vindima.
-------------FIGURA 15.2. A vinificao
Vinificao em tinto
O mosto obtido por esmagamento da uva tinta passa para a cuba de fermentao, uma vez corrigidas a acidez e a quantidade
de acar. Depois da primeira fermentao (fermentao alcolica), separa-se, por trasfega, o mosto da borra. Inicia-se a
segunda fermentao (fermentao maloltica). Depois de clarificado, o vinho deve aguardar dois anos at estabilizar e ser
engarrafado. Os vinhos rosados ou ross so obtidos seguindo um procedimento semelhante, mas deixando macerar durante
menos tempo o mosto com as cascas de uva. Tambm possvel consegui-los misturando vinhos brancos e tintos.
Vinificao em branco
O mosto obtido por esmagamento de uva branca ou de uva tinta sem casca, sem permitir a macerao. Salvo em alguns
vinhos brancos de Borgonha, evita-se a fermentao maloltica. Os vinhos espumantes (Champagne, Cava, Prosecco) passam
por uma segunda fermentao alcolica na garrafa.
Uva tinta
Desengaamento e esmagamento
Uva branca
Desengaamento e esmagamento
Macerao
Inoculao
Fermentao alcolica
Inoculao
Fermentao alcolica
Fermentao maloltica
Clarificao
Clarificao
Envelhecimento
Engarrafamento
Engarrafamento
Vinho tinto
Vinho branco
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O cultivo da videira uma tarefa complexa que exige tratamentos, enxertos e podas. Os viticultores
praticam a multiplicao vegetativa das videiras, o que garante uma qualidade constante, porm
aumenta a susceptibilidade da plantao aos patgenos. Espera-se que os estudos genmicos
permitam identificar e selecionar genes de resistncia a algumas das enfermidades que afetam as
videiras.
A transferncia de genes de resistncia de uma variedade a outra vista com muita desconfiana
pelos produtores, porque o rtulo de varietal parte da estratgia de vendas dos vinhos de qualidade.
Contudo, alguns produtores consideram aceitvel a transferncia de genes de videiras rsticas para
plantas de elite, com o objetivo de melhorar a produo.
Com a entrada no mercado internacional de pases menos apegados s tradies (Estados Unidos,
Chile, Argentina, Brasil, frica do Sul, Austrlia etc.), pode ser que as novas tecnologias genmicas se
apliquem na produo de plantas resistentes a doenas e pragas.
O ROL DA LEVEDURA NA VINIFICAO
Embora as propriedades organolpticas dos vinhos dependam basicamente do cultivar escolhido, as
enzimas da uva e as atividades metablicas microbianas cumprem, tambm, um papel importante.
A transformao do mosto em vinho envolve inmeras reaes qumicas, desenvolvidas por
leveduras e bactrias lcticas. Com o mapeamento do genoma de ambos os microrganismos, e a
construo de microarrays adequados, estas reaes podero vir a ser bem conhecidas e controladas.
Existe a tendncia, na indstria moderna, de substituir as leveduras selvagens por leveduras
enolgicas selecionadas. Contudo, alguns produtores consideram que estas ltimas massificam a
qualidade do vinho, preferindo utilizar as leveduras nativas e obter assim um produto original
qualitativamente diferente dos outros. Bancos de leveduras nativas facilitam a preservao da
biodiversidade.
Recentemente, duas linhagens de leveduras geneticamente modificadas fizeram sua entrada na
indstria de vinhos dos Estados Unidos e Canad. Trata-se da levedura ML01, que realiza ambas as
fermentaes (alcolica e maloltica), evitando a produo de histaminas e da levedura ECMo01 que
degrada a ureia, impedindo a formao de uma substncia carcinognica.
A CERVEJA
As bebidas fermentadas representam uma opo saudvel, na falta de gua ou no caso de ela estar
contaminada. Todos os povos elaboraram alguma bebida fermentada a partir dos elementos de seu
entorno, fossem gros, frutas, razes, caules ou folhas.
Em 4000 a.C, os habitantes das margens dos rios Tigre e Eufrates (Mesopotmia) preparavam 20
variedades de cerveja a partir de um procedimento bem simples. Esmigalhava-se o po de cevada em
um recipiente com gua aucarada e, uma vez concluda a fermentao, a bebida era filtrada e
transvasada a outro recipiente.
Os procedimentos melhoraram a partir do sculo VII, quando os frades introduziram algumas
inovaes, como incluir diferentes tipos de ervas, uma prtica que culminou com a adio de lpulo,
no sculo XI. A descoberta da tcnica de fermentao baixa, no sculo XIV, deu maior estabilidade
bebida. Os trabalhos de Pasteur e o progresso da Microbiologia permitiram, no sculo XIX, o
desenvolvimento de uma poderosa indstria, cuja produo mundial supera os 1.000 milhes de
hectolitros por ano.
A fabricao da cerveja comea com a maltagem, um processo em que os gros de cevada
germinados so secados e modos. O malte assim obtido contm as enzimas desenvolvidas durante a
germinao, capazes de catalisar a transformao do amido em acares fermentescveis (Figura 15.3).
Este processo indispensvel porque, no tendo amilases, as leveduras no fermentam o amido.
198
BIOTECNOLOGIA E ALIMENTOS
Na brasagem o malte misturado com gua, possibilitando a digesto do amido por ao enzimtica.
Mais tarde o mosto filtrado e fervido, sendo ento acrescentadas as flores de lpulo (Humulus
lupulus, da famlia das Canabinceas) que, alm de ter uma ao antissptica, conferem bebida seu
sabor amargo caracterstico.
A maltagem e a brasagem so atividades prvias fermentao alcolica, que ser conduzida por
leveduras (Saccharomyces cerevisiae e Sacharomyces carlbergiensis). Os processos mais tradicionais
utilizam leveduras que se acumulam no topo da cuba, originando as cervejas do tipo ale, com menos
de 4% de lcool. Contudo, existem outras leveduras que sedimentam no fundo, gerando as cervejas
de tipo lager, com mais de 6% de lcool. Uma vez concluda a fermentao do mosto, este recebe os
tratamentos finais que consistem em maturao, clarificao, carbonatao, pasteurizao e
engarrafamento.
No momento, a tecnologia do DNA-recombinante se limita a transformaes com genes do mesmo
gnero (Saccharomyces), visando conseguir linhagens mais eficientes em relao ao processo
fermentativo, adequadas cevada e ao lpulo de diferentes regies do mundo. At o momento, essas
linhagens no so utilizadas comercialmente.
-------------FIGURA 15.3. As etapas da produo de cerveja.
Cevada
Maltagem
(Macerao, germinao secagem e moagem do malte)
Malte
Brasagem
(Mistura, filtrao e fervura do mosto)
Mosto
Fermentao alcolica
Cerveja
Acabamento
(Amadurecimento, pasteurizao e engarrafamento)
Comercializao
--------------
OS QUEIJOS E IOGURTES
A PRODUO DE LATICNIOS
As razes da produo de laticnios remontam ao ano 3000 a.C. (Oriente Mdio), quando o homem
comprovara que o leite mudava de consistncia e de sabor ao azedar. O soro podia ser consumido
fresco, e a adio de sal ao cogulo o conservava por mais tempo. Em torno de 2.000 a.C., a utilizao
de estmagos de cabras e de ovelhas, como recipientes para o leite, permitiu obter queijos mais
199
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slidos e robustos. Mais tarde, os romanos introduziram extratos de plantas, como o figo, para
coagular o leite.
A explicao destes fenmenos simples. As bactrias que normalmente se encontram no bere
dos animais contaminam o leite, proliferando e formando cido lctico. Nesse meio cido, as protenas
precipitam, separando-se do soro. A coagulao tambm ocorre em presena das enzimas renina e
pepsina, da mucosa estomacal, e da ficina, do figo. Hoje, a produo mundial de leite fermentado
(iogurte, coalhada, quefir etc.) de trs milhes de toneladas por ano, enquanto a de queijos chega a
15 milhes de toneladas por ano (Figura 15.4 A).
Vrias espcies bacterianas podem fermentar o leite: Streptococcus thermofilus, Lactobacillus
bulgaricus, Lactobacillus acidophilus, Streptococcus lactis, Bifidobacterium bifidum etc. A maioria dos
produtos vendidos como leite fermentado contm um nmero alto de microrganismos vivos; sendo
consumidos como probiticos, para prevenir o desenvolvimento de outros microrganismos
indesejveis ou patognicos no tubo digestivo.
Todos os queijos passam por trs etapas: a coagulao, o dessoramento e a maturao (Figura 15.4
B). No entanto, a tecnologia de produo de queijos permite uma srie de variaes, que se traduz em
mais de 400 tipos diferentes. Algumas dessas variaes so a origem do leite (vaca, cabra, ovelha,
bfalo), o agente da coagulao (calor, enzimas, bactrias lcticas ou ambas), a umidade e consistncia
(mole, semiduro, duro e muito duro) e a maturao. Muitos pases aceitam 35 variedades, definidas
por regras internacionais.
O ROL DE MICRORGANISMOS E ENZIMAS
A produo de queijos envolve a acidificao do meio pelas bactrias lcticas, geralmente Lactococcus
lactis e Streptococcus thermophilus. O coalho, uma substncia extrada do estmago de bezerros, foi
utilizado, durante sculos, como agente da coagulao enzimtica, mas sua obteno ficou cada vez
mais cara e difcil.
Para estabilizar a produo, e satisfazer a maior demanda pelos produtos lcteos, transferiu-se o
gene da renina a uma bactria (Escherichia coli) e, mais tarde, a uma levedura (Kluyveromyces) e um
mofo (Aspergillus). Alm da enzima produzida (quimosina) ser mais pura que a renina, os suplementos
so constantes, aumentando a eficincia da produo de laticnios e diminuindo os custos.
O desenvolvimento de bactrias e fungos durante a maturao confere suas caractersticas tpicas
a alguns queijos como, por exemplo, a presena de olhaduras produzidas por Propionabacterium no
Gruyre, ou de um manto branco de Penicillium no Camembert e no Brie ou, ainda, as estrias azuis de
Penicillium no Gorgonzola ou no Roquefort.
O melhoramento de bactrias lcticas visa a obteno de linhagens mais estveis, resistentes aos
vrus bacterifagos, e produtoras de bacteriocinas, que so substncias com atividade antimicrobiana.
Linhagens capazes de liberar mais rapidamente suas enzimas poderiam acelerar o processo de
formao de aromas. Com o mapeamento do genoma, espera-se uma intensificao das pesquisas
nessa direo.
O sequenciamento de vrias linhagens de Streptococcus thermophilus, na dcada de 2000, revelou
a presena de sequncias CRISPR, relacionadas com a infeco por bacterifagos, sugerindo a
existncia de um mecanismo de defesa bacteriano. Exposta a um vrus, a bactria integra algumas de
suas sequncias gnicas; em um contato posterior essas sequncias serviro como guia para a
destruio de qualquer DNA semelhante. O trabalho fora iniciado na empresa Danisco, posteriormente
adquirida por DuPont, que acumula vrias patentes. A edio gnica a tcnica mais recente
disponvel para conseguir a resistncia das bactrias da indstria de laticnios aos bacterifagos, uma
ameaa que causa grandes perdas.
200
BIOTECNOLOGIA E ALIMENTOS
A. Iogurte tradicional e iogurte batido. As variaes dependem de acrscimos (acar, frutas etc.) e de modificaes de
consistncia (cremoso, firme, batido).
Leite + leite em p (+ acar)
Pasteurizao
Fermentao lctica
Fermentao lctica
Resfriamento
Iogurte tradicional
Iogurte batido
Comercializao
Comercializao
B. Queijo. Os agentes biolgicos intervm nas etapas de coagulao e na maturao de alguns produtos.
Leite
Pasteurizao
Inoculao com lactobacilos, coalho ou enzimas e adio de CaCl 2
Fermentao lctica
Coagulao
Dessoramento
Enformagem, prensagem, viragem e salga
201
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202
BIOTECNOLOGIA E ALIMENTOS
Amilases e glicoamilases
Hidrlise e sacarificao
Glicose
Isomerizao
(Invertase imobilizada)
Frutose
--------------
OS ADOANTES
Outro caso interessante o dos adoantes. O aspartame (cido asprtico e fenilalanina) consumido
para limitar a ingesto de calorias, e o xilitol, para diminuir a incidncia de cries dentrias. Outros,
como o xarope de glicose ou de frutose, substituem o acar na indstria de alimentos.
A hidrlise cida ou enzimtica (-amilase e glicoamilase) do amido do milho produz xaropes de
maltose e de glicose. J a ao enzimtica da lactase sobre o soro das indstrias de laticnios origina
um xarope de dextrose (glicose, galactose). Uma vez refinados e concentrados, esses xaropes podem
ser usados como ingredientes na elaborao de produtos alimentcios (biscoitos, sorvetes etc.).
O poder adoante da glicose menor que o da frutose, mas a transformao enzimtica (invertase
ou glicose isomerase) transforma uma em outra (Figura 15.5). O resultado um xarope (42% de
frutose, 52% de glicose), que pode ser concentrado por mtodos cromatogrficos, at alcanar um
teor de 90% de frutose. A indstria de refrigerantes substitui a sacarose pelo xarope de frutose, com
uma concentrao de 55%, obtido mediante a mistura dos dois tipos.
O processo comeou a ser estudado na dcada de 1960, sendo o custo da glicose-isomerase o
principal fator limitante da tecnologia. Com o desenvolvimento das tcnicas de imobilizao
enzimtica, o processo tornou-se econmico, possibilitando o uso do amido proveniente de cereais
excedentes, mas, por outro lado, prejudicou os pases produtores de acar, que viram diminuir a
demanda por este produto.
O descobrimento de um gene microbiano capaz de transformar a sacarose em cadeias curtas de
frutose (fructanos), com o mesmo gosto e desprovidas de calorias, indica que novos produtos podero
entrar em breve no mercado de adoantes.
OS ALIMENTOS BIOFORTIFICADOS
Combate-se a fome de uma populao dando-lhe acesso aos alimentos. Contudo, a falta total de
alimentos , hoje, um fenmeno menos frequente que a desnutrio, por carncia de determinados
nutrientes na dieta. Descrita magistralmente por Josu de Castro, na dcada de 1950, essa fome
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parcial, ou fome oculta, ainda afeta mais da metade da populao mundial, fundamentalmente
mulheres e crianas, sendo a causa de diversas doenas.
Segundo a Organizao Mundial da Sade, o ferro, o zinco e a vitamina A so as principais
deficincias nutricionais dos pases em desenvolvimento. A estratgia tradicional consiste em
suplementar os alimentos industrializados com os nutrientes correspondentes. Existem outras
possibilidades, tais como a fertilizao dos solos e, consequentemente, o enriquecimento das culturas
de base.
Contudo, o melhoramento gentico parece ser a estratgia mais promissora para aumentar as
concentraes de nutrientes nas culturas de base (arroz, milho, trigo, feijo, mandioca e batata-doce).
A engenharia gentica pareceria, a priori, a via mais rpida para fortificar os alimentos. Porm, os
empecilhos legais encontrados pelo arroz com provitamina A (Golden Rice), que conta com mais de 10
anos pronto sem ter sido comercializado, desestimulam a escolha dessa tecnologia.
Na biofortificao dos cultivos so utilizadas outras tecnologias com base biolgica. Nos Bancos de
Germoplasma do CGIAR j foram encontradas variedades de feijo com maior contedo de ferro, de
arroz e trigo com altos nveis de zinco, de mandioca, milho e batata-doce ricos em vitamina A etc. As
novas tcnicas de anlise gentica de traos quantitativos e, especialmente, a seleo assistida por
marcadores moleculares facilitam o melhoramento gentico das culturas de base.
As novas variedades devero ser altamente produtivas e contar com os nutrientes desejados.
Espera-se que contem com a aceitao das populaes necessitadas e, tambm, que os nutrientes
sejam assimilados de maneira a melhorar sua condio nutricional.
A biofortificao de alimentos um programa internacional desenvolvido por HarvestPlus (CGIAR),
um consrcio de instituies de pesquisa e agncias de desenvolvimento que age especialmente na
Amrica Latina e na frica. No Brasil, a Embrapa Agroindstria de Alimentos participa com o projeto
BioFORT, tendo j desenvolvido variedades biofortificadas de feijo e milho. Os primeiros testes esto
sendo realizados em Sergipe.
SEGURANA ALIMENTAR
A noo de segurana alimentar est baseada na tradio, de modo que inevitvel que, com o
desenvolvimento de uma moderna indstria de alimentos, surjam alguns questionamentos.
Atualmente, utilizam-se linhagens microbianas selecionadas (starters) para iniciar as fermentaes;
ao acabar o processo fermentativo, essas linhagens permanecem no meio, como os lactobacilos dos
iogurtes, ou so eliminadas por calor ou filtrao, como as leveduras do po e da cerveja.
Apesar de ter passado por uma srie de processos seletivos, que as torna muito diferentes
geneticamente das linhagens selvagens, as linhagens starters so bem conhecidas e no representam
risco algum para a sade. Classificadas pelas agncias internacionais como GRAS (do ingls, generally
recognized as safe), essas linhagens so as nicas permitidas na produo de alimentos.
No existem normas explcitas sobre o que seria um OGM food-grade, isto , um microrganismo
transgnico que possa ser utilizado na indstria de alimentos. Alguns aspetos de biossegurana teriam
que ser considerados. Um deles seria evitar ou eliminar qualquer gene de resistncia a antibiticos
que tivesse sido introduzido como marcador seletivo na transferncia gnica. O outro diz respeito aos
organismos doadores de genes, esboando-se diferentes critrios.
Segundo um critrio estrito, para poder ser considerado food grade, um OGM deveria conter
exclusivamente DNA da mesma espcie (cisgnico), aceitando-se a presena de pequenos fragmentos
sintticos de DNA, sempre que no codifiquem DNA ou RNA, na construo gnica. Em outros termos,
a tecnologia do DNA-recombinante utilizaria microrganismos de diferentes linhagens da mesma
espcie.
204
BIOTECNOLOGIA E ALIMENTOS
Atualmente, tem obtido aceitao um critrio mais amplo, permitindo a incluso de DNA de outros
microrganismos alimentares, sob a condio de estes pertencerem ao mesmo grupo de
microrganismos que participam no processo como, por exemplo, a transferncia de genes das
bactrias malolticas para as leveduras da vinificao.
A aceitao de OGMs nos alimentos depende das regulamentaes de cada pas, bem menos
flexveis na Europa que nos Estados Unidos e no Canad, onde recentemente fora colocada no
mercado uma linhagem de Lactococcus, geneticamente modificada e considerada GRAS.
As enzimas cumprem um importante papel em vrias das indstrias de alimentos (produo de
pes, biscoitos, laticnios, sucos de frutas, bebidas alcolicas, derivados do amido e de protenas).
Atualmente, mais de 30 enzimas diferentes so utilizadas no processamento de alimentos.
A primeira enzima sintetizada por um microrganismo transgnico foi a quimosina, utilizada h anos
na produo de queijos, como substituto da renina de origem animal. Hoje, aproximadamente 80%
dos queijos so elaborados com quimosina, sendo aceitos pelos consumidores lactovegetarianos.
Os microrganismos utilizados para a sntese de enzimas food-grade so organismos pertencentes
categoria GRAS, bem conhecidos e altamente produtivos, aos quais foram transferidos os genes de
interesse, mediante engenharia gentica. Esses OGMs no esto presentes na preparao final que,
depois de purificada, contm exclusivamente a enzima. Essa modalidade produtiva garante indstria
de alimentos vrias enzimas seguras e de baixo custo, entre proteases, amilases, lipases, lactases,
pectinases, glicose-oxidase, invertases etc.
A esse respeito, pareceria haver um consenso amplo, incluindo a Comisso Europeia, que considera
que os aditivos (corantes, aromas e flavorizantes), s devem ser rotulados como sendo de origem
transgnica se o produto final tiver DNA ou protena de origem recombinante.
A mais alta autoridade internacional sobre os alimentos o Codex Alimentarius, uma comisso de
FAO/WHO, reconhecida por 169 pases. Esta Comisso se encarrega de estabelecer uma metodologia
que permite analisar a segurana alimentar em relao aos produtos derivados de microrganismos
geneticamente modificados
205
C A P T U L O 16
Ser transgnico? Quantas vezes temos escutado essa pergunta, imbuda de desconfiana? A resposta
nem sempre fcil porque o termo transgnico aplicado, no dia a dia, com distinto sentido e em
contextos diferentes, aos alimentos geneticamente modificados (AGMs).
Mesmo aprovados pelas autoridades correspondentes, poucos AGMs so consumidos
diretamente: o milho, a batata inglesa e a berinjela resistentes a insetos, o feijo e a papaia resistentes
a vrus e o salmo de crescimento rpido. Os cultivos transgnicos biofortificados, como o arroz com
vitamina A (arroz dourado), ainda no foram aprovados.
-------------FIGURA 16.1. O que um transgnico?
(1) Feijo resistente a vrus, milho resistente a insetos, salmo de crescimento rpido; (2) Frango; (3) Queijos, Aspartame;
(4) Arroz dourado; (5) leo de soja; (6) Biscoitos e mistura para bolos.
1. Plantas e/ou animais
transgnicos, consumidos como
alimento
5. Produtos industrializados,
derivados de um cultivo
transgnico
4. Cultivos biofortificados
(transgnicos)
A maioria das raes dos animais de criao contm soja e milho transgnicos, isto , tolerantes a
herbicidas e/ou resistentes a insetos. Sua aceitao cada vez mais ampla, simplesmente porque a
quantidade de milho e soja convencional no suficiente para alimentar os animais de criao.
O leo de soja, utilizado na culinria, extrado do gro de soja geneticamente modificado, sendo
considerado transgnico apesar de no conter DNA. Os alimentos industrializados podem conter
alguns componentes de origem transgnica (soja, milho), assim como substncias produzidas por
microrganismos geneticamente modificados (enzimas, aditivos etc.).
Contudo, para a maioria das pessoas, as diferenas entre esses alimentos permanecem confusas e
o termo transgnico muitas vezes utilizado em forma pejorativa (Figura 16.1).
A ENTRADA DOS TRANSGNICOS NA CADEIA ALIMENTAR
Basta olhar com ateno as naturezas-mortas dos quadros de pintores de sculos passados para
comprovar que os produtos expostos nas prateleiras dos supermercados pouco tm a ver com os
vegetais e animais de outrora.
Sem conhecimento nenhum das leis da hereditariedade, o homem selecionou as variedades que
lhe pareceram mais interessantes, por serem plantas mais produtivas, ter frutos mais saborosos etc.
Em princpios do sculo XX, a Gentica deu embasamento cientfico ao melhoramento vegetal e animal
e, a partir da dcada de 1940, utilizaram-se a radiao e as substncias mutagnicas para obter novas
variedades vegetais, com mais apelo para produtores e consumidores.
A seguinte revoluo gentica ocorreu na dcada de 1990, com a primeira onda de plantas
geneticamente modificadas: milho, soja, algodo e canola. Com traos de tolerncia a herbicidas e/ou
de resistncia a insetos e infeces virais, essas plantas mais produtivas geram mais lucros, sendo
aceitas rapidamente pelos produtores agrcolas de vrios pases.
Embora em alguns casos, como o milho, as novas tecnologias diminuram as contaminaes por
fungos e melhoraram a qualidade da matria-prima, a percepo dos consumidores no identificou
vantagens diretas. Isso poderia explicar, em parte, a adoo de uma atitude negativa em relao aos
organismos geneticamente modificados.
MELHORANDO A CONSERVAO
Para despertar o interesse do consumidor seria necessrio fornecer-lhe produto com qualidades que
o beneficiem diretamente, tais como uma melhor conservao dos frutos. Uma dessas tentativas foi a
produo de um tomate com maior durabilidade na prateleira.
O tomate amolece com o tempo, tendo que ser colhido ainda verde e transportado rapidamente
at o lugar de comercializao, onde a maturao induzida com etileno. Inativando a enzima
responsvel pelo amolecimento do fruto, o fruto permanece mais tempo na planta, ganhando cor e
sabor.
Gerado por tecnologia anti-sense, o primeiro AGM foi o tomate FlavSavr (Calgene Inc.), liberado
nos Estados Unidos em 1994 e descontinuado pouco tempo depois, devido a seu custo. Mais tarde,
outro tomate de maturao lenta ocupou esse nicho de mercado. Diferentemente do FlavSavr, este
tomate, que no transgnico, teve uma expanso muito rpida, sendo comercializado em vrios
pases com diferentes nomes.
Dos AGMs que so consumidos diretamente, poucos foram comercializados: o milho resistente a
insetos (em numerosos pases), a batata e a berinjela resistentes a insetos (esta ltima em Bangladesh)
e a papaia resistente a vrus, que, na dcada de 1980, salvara da falncia os produtores do Hava. Nos
Estados Unidos, j entraram no mercado as mas Arctic Granny e Arctic Golden (Okanagan Specialty
Fruits Inc.). Nas duas variedades foi silenciado o gene codificador da enzima polifenol oxidase, que
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causa o escurecimento das mas. Outro produto aprovado a batata Innate (J.R.Simplot), uma marca
que se aplica a cinco variedades, geneticamente modificadas, para resistir ao mldio e formar menos
acrilamida na fritura.
MELHORANDO AS PROPRIEDADES INDUSTRIAIS
Outra forma de interessar o consumidor melhorando algumas das propriedades dos alimentos
industriais: leo de canola de composio adequada s frituras; trigo com caractersticas especiais para
a panificao; ou batata com mais amido para absorver menos gordura ao fritar.
Contudo, nem sempre a tentativa esteve acompanhada de sucesso. Um tomate com mais pectina,
desenvolvido por Zeneca Plant Science, a partir de variaes genticas detectadas em cultura de
tecidos, chegou a ser comercializado no Reino Unido, na dcada de 1990. Esse tomate era utilizado na
preparao de massa ou pur de tomate, com menos consumo de energia e menor necessidade de
aditivos (espessantes) que o fruto tradicional. O produto resultava mais econmico, para a indstria e
o consumidor, sendo vendido pela rede Sainsbury com bastante aceitao. No auge da campanha
contra os ALMs (Frankenfoods), o produto teve que ser retirado do mercado.
Recentemente aprovado nos Estados Unidos, o salmo AquAdvantage de crescimento rpido
poderia encontrar menos aceitao entre os consumidores que entre os aquicultores de outros pases,
potenciais compradores de alevinos.
MELHORANDO AS CARACTERSTICAS NUTRICIONAIS
Uma terceira forma de chegar ao consumidor seria mediante produtos com melhores caractersticas
nutricionais: carne e leite com menos gordura, soja e batata com mais protena, canola com vitamina
A, milho com metionina, mandioca e batata sem toxinas, camaro e amendoim sem substncias
alergnicas etc.
Tambm seriam bem-vindos alimentos com melhores propriedades organolpticas, tais como
pimentes e meles com mais aroma, ou cebolas que no faam chorar. O consumidor tambm
poderia ser atrado por alimentos com componentes biologicamente ativos, como os antioxidantes do
ch verde ou as substncias capazes de diminuir o colesterol do alho e da cebola.
Contudo, os casos analisados a seguir indicam que o problema pode ser muito mais complexo.
O arroz uma planta que no produz vitamina A. Na sia, onde este constitui a base da
alimentao, a deficincia vitamnica mata 1 milho de pessoas por ano e causa cegueira irreversvel
em outras 500.000. Um grupo de pesquisadores, liderado por I. Potrykus, obteve, na Sua, mediante
a transferncia de genes do narciso, um arroz (Golden Rice) com a capacidade de sintetizar o caroteno, que um precursor da vitamina A.
O projeto, que interessa mais os pobres que os ricos, contou com subvenes privadas, e vrias das
grandes corporaes cederam as suas patentes. Apesar de estar pronto desde 1999, o Golden Rice
ainda no chegou ao mercado, tais os empecilhos legais encontrados pelos grupos contrrios aos
transgnicos, que adiam sua distribuio. Se o arroz dourado tivesse sido obtido por vias
convencionais, estaria no mercado desde 2003.
Bem diferente o caso da soja Vistive (Monsanto), que rene um trao transferido por tcnicas
de melhoramento convencionais (baixo teor de cido linolnico) e um trao de origem transgnica
(tolerncia ao herbicida Roundup). Com 60% menos de gordura saturada, o produto representa um
passo adiante na preveno de doenas cardiovasculares e de altos nveis de colesterol. Lanado no
mercado norte-americano em 2005, empresas como Kellog e Cargill o utilizaram logo na preparao
de alimentos com melhor qualidade nutricional. Por se tratar de um nicho promissor, outras
variedades com alteraes no tipo de cidos graxos esto a caminho (Soymega, com mais mega 3).
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A FAVOR OU CONTRA?
O homem no se alimenta exclusivamente por motivos fisiolgicos. Escolhem-se os alimentos em
funo da satisfao sensorial, emocional e afetiva que se espera obter, sendo determinante o peso
das consideraes econmicas. A seleo dos alimentos ocorre dentro de uma tradio sociocultural,
que inclui a noo do que saudvel, um conceito mal definido e cambiante.
Por essas razes, a pergunta do ttulo banaliza uma questo complexa e reflete a falta de consenso
sobre o tema. Seja qual for a resposta, ela estar atrelada ao momento histrico que vivemos e s
nossas concepes polticas, econmicas e sociais. Nossa atitude depende da confiana depositada no
conhecimento cientfico e no progresso tecnolgico, em funo da qual os novos alimentos sero
vistos como produtos interessantes ou como uma ameaa.
Apesar da subjetividade que rodeia a questo, alguns dados precisos ajudam a compreender
melhor a origem e os alcances da polmica. Em 1996, culmina na Europa a crise da vaca louca. Em
1997, a Unio Europeia aprova o milho resistente broca de Novartis, portador de um gene marcador
de resistncia a ampicilina. Em 1999, estoura na Blgica o escndalo dos frangos contaminados por
dioxinas. No mesmo ano, A. Pusztai faz uma comunicao meditica sobre a toxicidade de batatas
transgnicas (no comerciais) em ratos, que nunca foram confirmadas. Seja como for, a percepo
pblica de insegurana alimentar, possibilitando a formao de uma oposio feroz.
De um lado, estavam as empresas de biotecnologia, ligadas a poderosos conglomerados
multinacionais e com interesses econmicos muito bem definidos. Do outro, as redes de distribuio
de alimentos (Carrefour, Mark & Spencer), associadas aos ambientalistas (Greenpeace, Friends of
Earth) e aos produtores agrcolas (Confdration Paysanne). Com uma bem-sucedida campanha de
marketing (no queremos frankenfood), essas redes aproveitaram a oportunidade para impulsionar
seus prprios produtos e lanar suas prprias marcas.
Sem argumentaes baseadas em princpios cientficos, a discusso acirrou o enfrentamento entre
partidrios e oponentes dos AGMs. Os termos progressista e reacionrio foram usados
indiscriminadamente por ambos os grupos, esquecendo que o dissenso e a discusso fazem parte das
sociedades democrticas. Infelizmente, nessa campanha, queimaram-se comrcios, laboratrios de
pesquisa e campos com cultivos experimentais.
Os fatos continuam sendo preocupantes porque, se nos pases ricos da Unio Europeia no faltam
alimentos, e a escolha de uma tecnologia pode depender de consideraes econmicas ou ideolgicas,
nos pases mais pobres, a adoo ou rejeio de uma tecnologia uma deciso que pode ter
gravssimas consequncias para sua populao, condenando-a inclusive fome. Na Zmbia (2002) e
em Angola (2004), os governos rejeitaram o milho, enviado como ajuda humanitria para alimentar a
populao, argumentando que era transgnico. Outros pases africanos tambm chegaram a proibir a
importao de AGM (Malaui, Moambique e Zimbbue).
O QUE O CONSUMIDOR PRECISA SABER
A NOO DE SEGURANA
A noo de segurana alimentar costuma ser bastante flexvel. Quando introduzida na Europa, a batata
foi vista como um alimento perigoso. A pasteurizao do leite teve opositores ferrenhos,
argumentando que alteraria a qualidade de um alimento saudvel. O amendoim considerado seguro,
mas pode no s-lo se estiver contaminado com fungos. Muitas pessoas so alrgicas ao kiwi,
introduzido recentemente no Ocidente. Algumas pessoas continuam ingerindo gorduras em
quantidade, mesmo sabendo que so perigosas.
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Gene marcador
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Promotor
Transgene
Sequncia terminal
Geralmente, os marcadores utilizados so antibiticos sem uso clnico, e para os quais j se encontrou
resistncia nas bactrias intestinais, de maneira que a transferncia do marcador no mudaria a
situao. Considerando que j existe a tecnologia apropriada, a recomendao das agncias
internacionais de substituir ou eliminar esse tipo de marcadores. Alguns produtos, como o milho
MON810 (YieldGard, Monsanto) e o milho LY038 (Renessen LLC), j no levam marcadores seletivos.
A COMPOSIO QUMICA
Em relao aos produtos comercializados, o AGM tem a mesma composio qumica e o mesmo valor
nutritivo que o alimento convencional equivalente. No caso de um AGM que sintetize uma vitamina
extra, por exemplo, a situao diferente e no pode ser considerado igual ao alimento convencional,
sendo necessrios estudos adicionais.
A PRODUO DE TOXINAS
Outra preocupao diz respeito produo eventual de toxinas. Sabe-se que, para sua defesa, as
plantas sintetizam substncias qumicas que podem ser txicas para o homem ou os animais. Uma
delas a toxina do Bacillus thuringiensis que, por ser prejudicial para os insetos e incua para o
homem, utilizada sem problemas nas lavouras orgnicas, h mais de 50 anos.
Normalmente, a presena de uma toxina investigada mediante ensaios biolgicos em diversas
espcies de animais, alimentados durante um tempo com o produto transgnico. Os ensaios so
complementados com estudos de anatomia patolgica. A avaliao toxicolgica dos AGMs
comercializados no detectou efeitos adversos.
A PRODUO DE ALRGENOS
As alergias alimentares caracterizam-se pela hipersensibilidade a uma ou mais protenas, que
desencadeiam reaes diversas, tais como urticria, vmito ou diarreia. Sua incidncia de 1-2% em
adultos e 5% em crianas, sendo provocadas principalmente por trigo, leite de vaca, ovos, peixe,
amendoim e soja.
A transgnese ou a edio de genes podero vir a melhorar a qualidade dos alimentos, se forem
utilizadas como ferramentas para eliminar substncias sabidamente alergnicas dos alimentos. Mas
no essa a preocupao do consumidor; seu o temor que o transgene sintetize alguma protena
capaz de desencadear alergias.
Uma mesma protena pode ser incua para uma pessoa e alergnica para outra, sendo impossvel
prever o efeito que ela ter em uma terceira. Entretanto, sabendo que alguns alimentos so mais
alergnicos que outros, deve-se ter cuidado em relao origem do transgene. Um projeto citado
frequentemente o da transferncia soja de um gene da castanha-do-par, com o objetivo de
melhorar suas qualidades nutritivas. Porm, frente possibilidade de induzir reaes alrgicas, em
pessoas sensveis castanha-do-par, o projeto foi descontinuado sem que essa soja sasse do
laboratrio.
sabido que o risco de uma protena ser alergnica aumenta se esta apresentar determinadas
sequncias de aminocidos, se ela se degradar lentamente no tubo digestivo ou se permanecer estvel
durante o processamento industrial. Estas caractersticas so passveis de estudos, havendo diretrizes
internacionalmente aceitas para a avaliao de alergenicidade. Complementa-se a informao
mediante anlises laboratoriais com os anticorpos de pessoas sensibilizadas e, tambm, mediante
testes em animais, capazes de desenvolver alergias aos mesmos tipos de alimentos que os seres
humanos.
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Em 2000, o milho Star Link (2000), liberado nos Estados Unidos para compor raes animais,
contaminou tortillas e tacos destinados ao consumo humano. Nenhuma das denncias de alergia
protena correspondente fora confirmada, mas restou uma lio bem clara em relao
biossegurana: no se pode liberar um cultivo para rao se este for inadequado para seres humanos.
O risco de alergenicidade dos AGMs comercializados at agora no maior que o dos alimentos
convencionais. Observe-se que esses alimentos passaram por testes que nunca foram aplicados no
arroz, no milho, na batata ou no kiwi, uma fruta introduzida recentemente no Ocidente e que provou
ser altamente alergnica.
O RISCO DE CNCER
Recentemente, o pesquisador francs G-E. Sralini (2012) noticiou ter detectado tumores em ratos
alimentados com milho geneticamente modificado. Devido a erros no desenho experimental e ao uso
de uma linhagem de ratos, especialmente selecionada para o desenvolvimento de tumores, o artigo
de Sralini teve que ser retirado, em 2013, da revista Food and Chemical Toxicology. Em 2014, o
trabalho de Sralini foi publicado novamente em outra revista (Environmental Sciences Europe).
O posicionamento prvio de Sralini em relao aos transgnicos, assim como sua relao com
organizaes interessadas economicamente no banimento dos ALMs, so pblicos. lamentvel que,
mesmo totalmente desqualificados pela comunidade cientfica, esses trabalhos sejam citados como
prova do perigo das raes e dos alimentos transgnicos.
A UTILIZAO DE UM PROMOTOR VIRAL (CaMV)
Na construo de um transgene, colocam-se sequncias promotoras para determinar quando, onde e
como ir se expressar a protena codificada. Alguns pesquisadores manifestaram sua preocupao com
a utilizao do promotor do vrus do mosaico da couve-flor (CaMV), considerando que sua
transferncia horizontal de uma planta transgnica s clulas do aparelho digestrio poderia ativar
outros genes no virais (oncogenes).
Essa preocupao no tem maiores fundamentos, dado que o promotor CaMV detectado em 14
a 25% da produo de canola, de couve-flor e de repolho convencionais, sendo ingerido pelo homem
em quantidades considerveis, faz dcadas, e sem nenhum efeito reconhecido.
OUTROS EFEITOS
A insero de vrias cpias gnicas em diferentes lugares do genoma poderia gerar a ativao ou
desativao de outros genes, gerando no organismo geneticamente modificado algum tipo de
alterao que no fora previsto. At agora, no fora registrado nenhum efeito deste tipo nos produtos
comercializados, e os avanos tecnolgicos (sequenciamento, microarrays) permitem excluir essa
possibilidade.
PERSPECTIVA HISTRICA
Nem os alimentos convencionais, includos os orgnicos, nem os que foram obtidos por por radiao
ou tcnicas genticas clssicas passam por uma avaliao de risco antes de ser oferecidos ao
consumidor. S os AGMs que chegaram a nossa mesa foram devidamente analisados pelas
autoridades correspondentes e trilhes de refeies consumidas por milhes de pessoas em diferentes
pases, durante duas dcadas, incluram algum componente transgnico, sem que fosse registrado um
nico incidente.
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Vimos no Captulo 13 que os produtores de sementes comerciais admitem como aceitvel uma
contaminao de 1% entre as variedades convencionais. Essa contaminao tambm inevitvel,
quando coexistem plantaes transgnicas e convencionais. Por conseguinte, o limite de 1% redefine
o nvel de pureza de um ingrediente de origem vegetal, admitindo-se que todo valor inferior a esse
limite pode ser o resultado de uma contaminao acidental.
Sendo assim, o consumidor pode comprar um produto com mais de 1% de ingredientes
transgnicos ou um produto convencional cuja composio conta mais de 99% de ingredientes no
transgnicos. Em outras palavras, o rtulo no garante ao consumidor a ausncia de transgnicos.
Finalmente, cabe refletir sobre o significado de um rtulo para a maioria dos consumidores, e se a
escolha entre um produto e outro no depender essencialmente do preo e do marketing. Somente
o processo educativo pode dar populao os elementos bsicos para formar uma opinio informada
e responsvel e fazer suas escolhas.
O RASTREAMENTO DE UM TRANSGENE
Em um mundo globalizado, a variedade de regulamentos e de modalidades de rotulagem um fator
de complicao das transaes comerciais, em que a qualidade de um produto pode ter que ser
definida em relao presena ou ausncia de um transgene.
A aceitao dos transgnicos varia de um pas para outro e, tambm, entre diversos grupos de
consumidores. Por isso importante contar com formas de rastreamento como a tcnica da PCR
(reao em cadeia da polimerase), que pode ser aplicada em diferentes modalidades:
o Testes qualitativos, para reconhecer a presena ou ausncia do transgene.
o Testes semiquantitativos, em que a presena ou ausncia do transgene determinada em funo
de um limite como 1%, por exemplo.
o Testes quantitativos, que fornecem informao sobre a quantidade do transgene por comparao
com amostras de referncia com concentraes conhecidas. A tcnica permite identificar DNA
exgeno em uma quantidade de 0,1% (1 grama em 1 quilograma), mas algumas variantes
extremamente sensveis reconhecem a presena de 0,001% do transgene.
Observe-se que, para aplicar estes testes, se precisa de informao sobre as sequncias do transgene.
Uma forma de simplific-los seria a incluso, em todas as construes genticas, de uma sequncia
conhecida. Esta funcionaria como uma etiqueta molecular, facilitando a identificao de qualquer
transgene.
Por outro lado, nem sempre a PCR informativa. Em amostras de gros ou alimentos processados,
o DNA pode estar quase totalmente degradado. Nesse caso, necessrio saber quais as
transformaes que o produto sofreu e estabelecer protocolos adequados. Existem mtodos
imunolgicos (Western Blot, ELISA) que permitem detectar a protena sintetizada pelo transgene e,
eventualmente, estimar a quantidade presente. Contudo, o custo de todos esses testes ser pago pelo
consumidor.
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C A P T U L O 17
AS DOENAS INFECCIOSAS
O desenvolvimento da agricultura aumentou a disponibilidade de alimentos, sustentando populaes
mais densas e sedentrias. O contato com os animais domesticados, por favorecer a evoluo e a
passagem dos germes ao homem, estaria na origem de doenas como a varola, o sarampo, a
coqueluche, a tuberculose e a gripe.
Uma vacina um produto destinado a estimular o sistema imune, de maneira a prevenir ou
controlar uma infeco. No sculo XIX, mais de 80% das crianas morriam de doena antes dos 10 anos
de idade. Hoje, programas de vacinao sistemtica as imunizam contra tuberculose, hepatite B,
poliomielite, difteria, ttano, coqueluche, meningite, sarampo, rubola, caxumba e infeces por
rotavrus e pneumococos.
Nos dois sculos que nos separam de Jenner, o descobridor da primeira vacina antivarilica, temos
alcanado o sucesso na preveno de um bom nmero de doenas infecciosas. A vacinao chega s
crianas e aos grupos de pessoas sujeitos a maiores riscos, como as mulheres (sarampo e rubola), os
maiores de 60 anos (gripe, pneumonias) e os profissionais de sade (hepatite B, antraz). Tambm
resguarda os residentes em determinadas reas e os viajantes (febre amarela). A vacinao dos
animais os protege das doenas e quebra o elo de transmisso ao homem.
A melhora das condies econmicas de uma populao repercute na sade da mesma e,
inversamente, a diminuio da incidncia de doenas com suas sequelas de invalidez ou morte
prematura d s pessoas a possibilidade de melhorar suas condies de vida. O custo de implantao
de um sistema de vacinaes baixo, porque a proteo atinge no s a pessoa que as recebe como
as que entram em contato com ela.
Em uma variante do velho ditado prevenir melhor que curar, a WHO (Organizao Mundial da
Sade; do ingls, World Health Organization) ressalta que o maior impacto na rea de sade
conseguido com gua limpa e vacinas. Lamentavelmente, ainda morrem anualmente dois milhes de
crianas de doenas porque as vacinas existentes no chegam at elas, devido aos conflitos armados
e dificuldade de acesso aos centros de sade. E ainda no temos vacinas para doenas como a
tuberculose, a malria ou o HIV/AIDS.
A AQUISIO DE IMUNIDADE
Um antgeno uma substncia que estimula a produo de protenas especficas (anticorpos) capazes
de se ligar a ele. Microrganismos infecciosos, suas molculas e substncias qumicas so antgenos,
assim como as clulas de um organismo transplantadas a outro, o plen, pelos de animais e certos
alimentos nas pessoas sensibilizadas.
BIOTECNOLOGIA: ENSINO E DIVULGAO (http://bteduc.com)
No primeiro contato com um antgeno, o organismo reage com uma resposta imunolgica primria de
intensidade baixa e curta durao, acompanhada de alguns sintomas como febre, dor de cabea,
erupo cutnea. Essa primeira resposta facilita a eliminao do antgeno estranho e a produo de
clulas de memria. Em um segundo contato, a resposta imunolgica envolver numerosas clulas e
molculas e ser rpida, intensa e duradoura (Figura 17.1).
Todo patgeno um antgeno estranho e, como tal, ser detectado pelo sistema imune quando
penetrar no organismo. A resposta envolver uma ao humoral e uma ao mediada por clulas,
coordenadas por diversos componentes do sistema imunolgico. As duas formas de ao dependem
das caractersticas do ataque do patgeno: o pneumococo se multiplica nos pulmes, o bacilo do
ttano produz uma toxina letal, o bacilo de Koch e todos os vrus parasitam as clulas.
No caso de uma bactria ou de uma toxina, os anticorpos especficos produzidos pelos linfcitos B
reconhecem os microrganismos ou as toxinas circulantes, dando incio a sua destruio. Os vrus e
algumas bactrias demandam outro tipo de combate, porque, ao invadir as clulas, ficam protegidos
dos anticorpos. A clula infectada ser destruda pelos linfcitos T matadores (tambm chamados Tc,
do ingls T citotoxic), que reconhecem uma combinao das protenas celulares com algumas
protenas do invasor, expostas na superfcie celular.
Tanto a ao humoral como a ao mediada por clulas dependem da participao dos linfcitos
auxiliadores Ta, tambm chamados Th (do ingls, T helpers), que reconhecem o antgeno e produzem
molculas que estimulam a proliferao das clulas B e T. Finalizada a resposta primria, algumas
clulas de memria (B, T) permanecero no sistema, possibilitando a acelerao dos mecanismos de
defesa em ocasio de um segundo contato com o antgeno (Figura 17.2).
-------------FIGURA 17.1. As respostas primria e secundria do organismo
Intensidade da
resposta imune
Semanas
217
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Uma vacina um produto destinado a ensinar o sistema imune a reconhecer determinado patgeno
e impedi-lo de desencadear uma infeco ou uma doena. A vacina prepara os mecanismos de defesa,
em previso de um segundo contato, desta vez com o patgeno original.
A vacinao estabelece o primeiro contato do organismo com um patgeno que, estando
incapacitado para causar a doena, conserva sua identidade molecular e a capacidade de induzir uma
resposta imune. As vacinas estimulam a imunidade humoral, a imunidade mediada por clulas ou,
preferentemente, ambas ao mesmo tempo.
-------------FIGURA 17.2. A memria imunolgica
Antgeno
Linfcitos T citotxicos
Linfcitos T auxiliadores
Linfcitos B
Sntese de
anticorpos
Clulas de memria
Eliminam as clulas infectadas
--------------
218
Vrus HBV
Gene codificador do
antgeno de
superfcie HBsAg
Sntese do
antgeno
Vacina
Levedura
Levedura transformada
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AS VACINAS CONJUGADAS
Alguns microrganismos (pneumococos, meningococos) protegem-se com uma cpsula de
polissacardeos, que dificulta sua identificao pelo sistema imune, ainda imaturo, de uma criana. As
novas tecnologias possibilitam a associao de um toxoide s subunidades de polissacardeo, de
maneira a estimular a resposta imune e o reconhecimento dos antgenos capsulares.
Estas vacinas de antgenos conjugados so utilizadas na imunizao contra o Haemophilus
influenzae B (meningite) e o Streptococcus pneumoniae ou pneumococo. As vacinas contra este ltimo
devem ser modificadas frequentemente, adicionando outros antgenos capsulares das mais de 80
linhagens que causam pneumonia em seres humanos.
AS VACINAS VETORIZADAS
Outro tipo interessante de vacinas so as vetorizadas, em que o gene codificador do antgeno
transferido a um microrganismo incuo (bactria ou vrus) que age como vetor. Ao infetar o
hospedeiro, ele se multiplica e comea a produzir o antgeno, induzindo uma resposta imune contra o
patgeno. Com uma vacina deste tipo imunizam-se as raposas, atualmente um dos principais elos na
transmisso de raiva na Europa.
Em um segundo tipo de vacinas vetorizadas, o vetor no se multiplica no hospedeiro. Agindo como
uma seringa molecular, ele introduz, na clula, o gene codificador do antgeno. Um vetor deste tipo, o
canarypox, que se multiplica em aves, exclusivamente, utilizado na vacinao contra as doenas de
Marek e Gumboro. Existem 12 vacinas vetorizadas para uso veterinrio, mas nenhuma aprovada para
uso humano.
A LTIMA GERAO
A tecnologia mais promissora parece ser a das vacinas genticas, tambm denominadas vacinas de
DNA nu. Estas consistem de um plasmdeo com uma construo gnica que inclui o gene codificador
do antgeno. Injetado diretamente no msculo, o DNA ir penetrar nas clulas dendrticas,
apresentadoras de antgeno. Estas migraro at os rgos linfoides, onde sintetizaro o antgeno,
estimulando uma resposta imune de tipo celular que permitir imunizar o hospedeiro.
Esta tecnologia teria uma vantagem fundamental, por ser um mtodo genrico que facilita o
desenvolvimento e produo de novas vacinas (Figura 17.4). Estas podero ser elaboradas
substituindo um gene por outro no cassete de expresso gnica, o que diminuiria os custos e o tempo
necessrio para responder a uma emergncia sanitria. Tambm se poderia conseguir uma
supervacina com vrios genes codificadores de antgenos, capaz de imunizar o organismo contra vrias
doenas simultaneamente. Por outro lado, as vacinas de DNA estimulam ambas as respostas, humoral
e mediada por clulas.
Na rea veterinria, j foram aprovadas nos Estados Unidos vacinas de DNA contra o vrus IHNV,
causante da necrose hematopoitica em trutas e salmes; contra o vrus da doena do oeste do Nilo,
que ataca os equinos; contra o melanoma canino e para terapia gnica relacionada liberao
hormonal do fator de crescimento em sunos.
Na rea humana, ainda em fase experimental ou em testes clnicos, se encontram em andamento
vrias vacinas deste tipo contra HIV/AIDS, malria, herpes, tuberculose, hepatite B, influenza, rotavrus
etc.
220
Tipos de vacinas
V. patognico
V. relacionado
V. atenuado
V. morto
Subunidades
Recombinante
Transfeco
Linfcitos
BeT
Doena e recuperao
Imunidade adquirida
(espontnea)
Imunidade adquirida
(artificial)
--------------
A PRODUO DE VACINAS
PESQUISA E DESENVOLVIMENTO
Para chegar a ser comercializada, uma vacina deve cumprir etapas sucessivas de pesquisa,
desenvolvimento e operaes industriais, que podem demandar em mdia 12 anos de trabalho e
investimento.
A etapa exploratria tem uma durao de 2 a 4 anos e se inicia nas bancadas de um laboratrio de
pesquisa, onde sero identificados os antgenos naturais ou sintticos que podem prevenir ou tratar
uma doena.
Segue uma etapa pr-clnica de 1 a 2 anos de durao, que pode envolver pesquisadores de uma
indstria privada. Os experimentos so realizados em cultivos de clulas ou de tecidos e, a seguir, com
animais de laboratrio (camundongos, cobaias e/ou macacos). Depois de comprovar sua capacidade
de imunizar um ser vivo, seleciona-se o melhor candidato vacinal. Os estudos tambm permitem obter
uma estimativa sobre a dose a ser aplicada em etapas posteriores e a forma de administrar a vacina.
A primeira fase dos estudos clnicos em seres humanos inicia-se em um grupo de 20 a 80 voluntrios
adultos e deve ser realizada no pais de produo da vacina, mesmo quando o produto no se destine
a essa populao. Os participantes so monitorados bem de perto, a fim de verificar a segurana
221
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(toxicidade e farmacocintica) do candidato vacinal. Se a vacina for desenhada para crianas, os testes
devem ser iniciados com adultos e jovens.
A segunda fase envolve 80 a 300 pessoas e inclui alguns indivduos da populao alvo, isto ,
pertencentes aos grupos de risco de contrair a doena. Nesta fase os testes incluem um grupo placebo
e visam estudar a imunogenicidade e o efeito protetor da vacina (fase 2 a), isto , sua eficcia por
exposio com inculos padronizados do agente infeccioso. Tambm se avalia a relao dose-resposta
e sua eficcia por exposio natural infeco em reas de transmisso (fase 2b), assim como o melhor
calendrio de vacinaes e a forma de aplicao.
A terceira fase, que envolve milhares de pessoas, testa a eficcia do candidato vacinal em proteger
os indivduos vacinados contra a doena e a ausncia de fatores adversos que possam ter sido
inadvertidos em ensaios com uma amostra menor de pessoas. Testes randomizados, aplicados em
duplo-cego, permitem comparar o efeito da vacina experimental e o de um placebo, seja este uma
soluo salina, outra vacina ou qualquer outra substncia.
A durao total das trs fases correspondentes aos estudos clnicos de 6 a 8 anos para as vacinas
humanas. Se os resultados dos estudos clnicos no forem satisfatrios, ser necessria a realizao
de estudos adicionais, chegando, eventualmente, a interromper os estudos clnicos e proceder
escolha de outro candidato vacinal. Contudo, uma vez comprovado que a vacina segura e eficiente,
a indstria farmacutica poder solicitar aos rgos competentes a licena para comercializar o
produto. Esta etapa dura de 12 a 18 meses.
A liberao da vacina marca o incio do processo de manufatura e da fase de vigilncia
farmacolgica, um monitoramento amplo e rigoroso que coleta toda informao sobre algum efeito
adverso que possa ocorrer. Em 1999, por exemplo, uma primeira vacina contra o rotavrus teve que
ser retirada do mercado em consequncia de alguns casos de intussuscepo relacionados com sua
aplicao.
As vacinas veterinrias passam pelas mesmas etapas, mas as exigncias so menores. possvel
simplificar os testes com animais de laboratrio e testar o candidato vacinal no animal para o qual
destinado o produto. O nmero de indivduos necessrios para os testes clnicos tambm menor.
O MARCO TICO
As pesquisas com seres humanos e, por conseguinte, todos os testes clnicos, devem ser desenvolvidos
dentro do marco tico elaborado pelo tribunal de Nuremberg, por ocasio do julgamento de 20
mdicos condenados como criminosos de guerra, devido aos brutais experimentos realizados com
prisioneiros durante a Segunda Guerra Mundial.
Segundo o Cdigo de Nuremberg (1949), os experimentos em seres humanos devem visar o bem
da sociedade e ser levados a cabo por pessoas cientificamente qualificadas. Os participantes recebero
todas as explicaes necessrias, antes de dar livremente o seu consentimento. As experincias sero
a continuao de outras que, realizadas em modelos animais, permitam prever um resultado tal que
justifique a incluso de testes em seres humanos. O sofrimento mental e fsico ser evitado, e as
pessoas recebero proteo em caso de ocorrer algum efeito adverso.
Nos testes clnicos de avaliao de uma nova vacina, as pessoas participam voluntariamente e so
informadas sobre os riscos e benefcios de sua participao. Contudo, discute-se a validao do
consentimento informado quando os testes so realizados em populaes de escassos recursos, com
baixos nveis de instruo.
222
OPERAES INDUSTRIAIS
Na produo de vacinas, cada lote da vacina deve passar por controles estritos, a fim de garantir a
qualidade e manter a credibilidade no s da indstria, mas da prpria vacinao. Aplicada
correntemente em vrios pases, a vacina Salk de vrus inativados considerada hoje uma das vacinas
mais seguras. Porm, um problema na fabricao da vacina no Laboratrio Cutter (Estados Unidos)
causou a inativao incompleta de algumas partculas virais e, duas semanas depois de liberada, em
1954, induziu 260 casos de plio e 10 mortes.
Uma vacina deve reunir vrias qualidades, principalmente eficincia, pureza, segurana e baixo
custo. O processo industrial varia em funo do microrganismo utilizado e responde a critrios estritos
de qualidade (BPL ou Boas Prticas de Laboratrio; BPF ou Boas Prticas de Fabricao). Atualmente,
o controle de qualidade ocupa 70% do tempo dedicado produo de uma vacina.
As bactrias multiplicam-se em biorreatores, em condies que dependem da produtividade do
prprio processo fermentativo e do tratamento posterior, para a extrao de antgenos ou de toxoides.
Vacinas antibacterianas podem ser preparadas em grandes quantidades, com equipamento
relativamente simples.
As protenas recombinantes de vrus ou bactrias so produzidas em biorreatores, por leveduras,
ou em cultivos celulares. Ao processo de extrao seguem-se vrias operaes de purificao por
tcnicas complexas (ultrafiltrao, cromatografia em coluna etc.).
Os vrus, parasitas obrigatrios, precisam de clulas para se multiplicar. Tradicionalmente, utilizamse pele de bezerro e ovos de galinha, mas a tendncia atual substitu-los por culturas celulares que
possibilitem o desenvolvimento de vacinas virais para uso humano (poliomielite, sarampo, rubola,
influenza, caxumba, raiva) e veterinrio (febre aftosa, raiva, encefalite equina, doena de Mareck e de
Newcastle etc.).
Alm do antgeno, na formulao de uma vacina incluem-se outras substncias: os adjuvantes, que
permitem dosagens menores por serem capazes de estimular a resposta imune; os estabilizantes, que
impedem as alteraes devidas ao calor, luz ou umidade; os conservantes, nos frascos com doses
mltiplas.
Uma das tendncias atuais na administrao de vacinas a reduo do nmero de doses por
imunizao simultnea, em uma mesma injeo, para vrias doenas (trplice viral ou trplice
bacteriana). Tambm se d preferncia a sistemas que diminuam a necessidade de refrigerao, que
representa 15% dos custos dos programas de vacinao.
Outras novidades viro da procura de novas formas de aplicao para substituir o uso de seringas,
tais como pistolas, gis, adesivos cutneos, cpsulas, tabletes, inaladores e sprays nasais. Estes ltimos
comearam a ser utilizados na aplicao de vacinas contra a gripe (FluMist, nos Estados Unidos;
NasVax, em Israel). As vacinas orais tm importantes aplicaes na rea veterinria.
Plantas e animais transgnicos produtores de antgenos podero revolucionar alguns aspectos da
produo de vacinas. A ideia de ter vacinas comestveis e de poder vacinar as crianas com uma
banana em vez de uma injeo muito sedutora. Contudo, alguns problemas de segurana exigem
ateno, como, por exemplo, o risco de se misturar bananas-vacina e bananas-alimento,
contaminando os alimentos ou dificultando o reconhecimento de um medicamento como tal.
Provavelmente, os antgenos sero extrados e administrados em tabletes ou cpsulas.
Em 2005, Dow AgroSciences registrou nos Estados Unidos uma vacina para a doena de Newcastle em
aves, produzida na planta aqutica Lemna. Encontra-se em andamento uma nova vacina contra a febre
amarela em plantas de tabaco, em um centro a ser implantado no Cear, pela Fundao Oswaldo Cruz
(Fiocruz) em parceria com instituies dos Estados Unidos.
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Atualmente, o Brasil produz 75% das vacinas que so distribudas pelo servio pblico, a metade delas
produzida pelo Butantan (Tabela 17.1). Vrias vacinas esto sendo desenvolvidas em parcerias entre
as instituies citadas ou com laboratrios estrangeiros (Sanofi-Pasteur, GlaxoSmithKline, Instituto
Finlay etc.). Algumas das vacinas resultantes desses convnios protegem a populao de sarampo,
caxumba e rubola (trplice viral), influenza, rotavrus, raiva (cultivo do vrus em clulas Vero) etc.
Os diferentes acordos de cooperao internacional entre os pases latino-americanos tambm
tero uma importncia fundamental para o desenvolvimento de polticas de sade pblica que
garantam populao o acesso s vacinas.
-------------TABELA 17.1. A produo de vacinas no Brasil
INSTITUIO
VACINAS
Instituto Butantan
Laboratrio BioManguinhos
Tecpar
Antituberculose (BCG)
Vacina meningoccica C
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O impacto das vacinas na morbidade infantil relega ao passado algumas das temveis doenas que
assolaram o sculo XX: difteria, coqueluche, ttano, poliomielite, meningite, caxumba, sarampo,
rubola, varicela). Lamentavelmente, alguns setores da sociedade se recusam a aceitar o bvio.
Um dos ataques mais desonesto s vacinas foi a publicao em uma revista cientfica de um artigo
relacionando-as com o autismo. A revista teve que se retratar e o trabalho foi declarado fraudulento
pelo Conselho Geral de Medicina do Reino Unido (2011). Organizaes como o CDC (do ingls, Centers
for Disease Control and Prevention), o Instituto de Medicina da Academia Nacional de Cincias (Estados
Unidos) e o Servio Nacional de Sade (Reino Unido) no encontraram relao entre as vacinas e o
autismo.
Em algumas comunidades, a resistncia s vacinas subsiste por motivos culturais, religiosos ou
polticos. Algumas das razes invocadas so: intromisso na liberdade individual, desafio vontade
divina, degradao dos costumes ou interferncia no desenvolvimento nacional. Algumas
comunidades descuidam da preveno quando a doena passa um tempo sem se manifestar,
favorecendo, assim, a reapario epidmica da doena.
O impacto das vacinas pode relegar ao passado algumas das temveis doenas que assolaram a
humanidade, porm, isso no significa que tenham sido totalmente erradicadas. As vacinas
mostraram-se eficazes para erradicar mundialmente a varola e reduzir enormemente o nmero de
casos de poliomielite, na maioria dos pases. Em relao gripe, ainda no h uma vacina capaz de
estimular a imunidade a todas as linhagens do patgeno.
A VAROLA
A varola uma doena eruptiva contagiosa, transmitida por um poxvrus. A incubao dura de 7 a 17
dias; os sintomas principais so febre alta, fadiga e uma erupo de vesculas em todo o corpo. A
mortandade de 30%, e os sobreviventes conservam leses caractersticas.
A varola teria sido levada at a ndia por mercadores do Egito, onde vitimara o fara Ramss V. A
doena se alastrou at a China (sculo I) e o Japo (sculo VI), retornando mais tarde ao Oriente Mdio
e alcanando a Europa com os Cruzados (sculo XI-XII). A varola no fazia distino entre camponeses,
burgueses ou nobres, cobrando vidas de humildes e poderosos, como o rei da Frana Lus XV.
Quem adoece uma vez e se recupera, no adoece uma segunda vez; essa observao deu lugar
primeira estratgia de combate varola. No Oriente (ndia e China, sculo XI), inoculavam-se as
pessoas sadias com o pus das vesculas de doentes com uma forma benigna da varola. A maioria das
pessoas inoculadas manifestava uma doena leve e ficava protegida pelo resto de sua vida. A varola
regrediu entre os povos que praticavam a variolizao, embora 1% a 2% das pessoas inoculadas
morresse ao desenvolver a doena em sua forma mais grave.
Em 1520, com a chegada ao Mxico de um escravo contaminado, a varola entrou no continente
americano. O convvio de vrios sculos com a doena desenvolveu nos europeus alguma forma de
resistncia, mas, para as populaes amerndias, o contato com um germe novo significou o extermnio
de 95% de seus integrantes, em menos de 200 anos.
No sculo XVIII, a prtica da variolizao foi introduzida na Inglaterra. Um inoculador, o mdico
Edward Jenner, observou que as ordenhadeiras nunca desenvolviam a varola. Segundo uma crena
popular, essa resistncia era consequncia da contaminao com a varola das vacas (variola vacum
ou vacina), uma doena inofensiva que se manifesta por pstulas no bere das vacas. Em 1796, Jenner
inoculou a variola vacum em uma criana e, poucos dias mais tarde, a varola humana; a criana no
adoeceu. A partir dessa experincia, a vacinao se estendeu rapidamente por toda Europa.
No Brasil, a vacinao foi introduzida em 1840 pelo Baro de Barbacena. Porm, quando, em 1904,
sendo Oswaldo Cruz o Diretor Geral de Sade Pblica, o governo decretou a vacinao obrigatria, a
resistncia se manifestou no Rio de Janeiro sob a forma de motins, estourando uma revolta que
226
obrigou o governo a rever a medida. Contudo, a populao terminou aceitando a vacinao depois da
violenta epidemia de varola de 1908, que teve 10 mil casos diagnosticados.
Apesar dos surtos terem-se espaado, 300 milhes de pessoas morreram de varola no sculo XX.
Na dcada de 1970, a WHO substituiu a vacinao em massa por uma campanha de erradicao em
anel. A estratgia consiste em isolar os pacientes cada vez que um caso novo detectado, e vacinar
rapidamente todas as pessoas que tiveram algum contato com o doente. Como a vacina tem um efeito
muito rpido, os resultados foram extraordinrios. Contudo, por ocasio de um surto havido na
Iugoslvia (1972), foi necessrio complementar as medidas com uma vacinao em massa. O ltimo
caso de varola registrado ocorreu na Somlia em 1977.
Uma vez confirmada a erradicao da varola em 1979, o vrus da varola comeou a ser eliminado
dos laboratrios para evitar acidentes como o ocorrido um ano antes, quando o escapamento do vrus
de um laboratrio da Universidade de Birmingham (Reino Unido) causou a morte de duas pessoas.
Preventivamente, dois estoques virais foram conservados, um deles no CDC (Center for Disease Control
and Prevention, Atlanta, Estados Unidos), o outro no VECTRO (Instituto para Preparaes Virais,
Moscou, Rssia). Apesar de estar prevista sua destruio no ano 2000, esta no ocorreu.
Ningum pode afirmar que no existe algum estoque de vrus em algum lugar, e a mera
possibilidade de um ato de terrorismo assustadora. Em caso de um surto de varola, os mdicos
teriam dificuldades em diagnosticar uma doena que hoje est restrita aos livros. A populao deixou
de ser vacinada em fins da dcada de 1970, de modo que boa parte da populao nunca foi imunizada;
sem doses de reforo, o restante pode ter perdido a imunidade. Por outro lado, a validade de um
pequeno estoque de vacinas que sobrou de dcadas atrs est comprometida, e a aplicao da vacina
contraindicada em pessoas com eczemas ou imunodeprimidas, muito mais frequentes que no incio
do sculo XX.
Mesmo tendo erradicado a varola, precisaramos de vacinas antivarilicas eficientes e seguras,
formuladas com tecnologia recente. Algumas j se encontrariam na etapa dos estudos clnicos.
A POLIOMIELITE
A poliomielite ou paralisia infantil uma doena causada por um picornavrus (poliovrus), transmitido
pela gua. O perodo de incubao de 4 a 35 dias, e 10% das pessoas infectadas desenvolvem os
seguintes sintomas: febre, fadiga, dor de cabea, vmitos, constipao ou diarreia, rigidez na nuca e
dor nas extremidades.
Em 1% dos casos, o vrus da poliomielite passa do intestino para a corrente sangunea e invade o
sistema nervoso central, onde se multiplica, destruindo os neurnios motores. As pessoas afetadas
desenvolvem a forma paraltica da doena, e, se o vrus se alojar no bulbo, os pacientes precisaro de
ajuda mecnica para respirar. A doena pode deixar sequelas motoras permanentes (SPP ou sndrome
post-plio).
Apesar de haver evidncias da doena no Antigo Egito, os primeiros surtos epidmicos ocorreram
em fins do sculo XIX. Em 1908, confirmou-se que a poliomielite uma doena infecciosa. Na primeira
metade do sculo XX, as epidemias deixaram numerosas vtimas, principalmente entre as crianas,
mas tambm entre os adultos como, por exemplo, Franklin Delano Roosevelt, presidente dos Estados
Unidos.
As melhores condies higinicas do sculo XX diminuram o contato prematuro da populao com o
vrus, suspeitando-se que a exposio de um grupo vulnervel ao vrus, em idade escolar, foi um dos
fatores desencadeante dos surtos. Na dcada de 1950, a doena era aterradora. Quando aparecia a
plio, as escolas fechavam e as crianas eram privadas do contato entre elas, permanecendo isoladas
e trancadas em casa, at o perigo passar.
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A descoberta de uma vacina teve uma repercusso extraordinria. Em 1954, comeou a ser aplicada a
vacina de vrus inativados de Jonas Salk (IPV, do ingls, injetable polio vaccine), elaborada com trs
tipos de poliovrus, cultivados em rim de macaco, e inativada com formalina. Em 1963, houve uma
segunda opo, a vacina de vrus atenuados de Albert Sabin (OPV, do ingls oral polio vaccine).
Modificaes nos processos produtivos aumentaram significativamente a eficincia de ambas as
vacinas.
Ambas tm vantagens e desvantagens. Para ser aplicada, a IPV demanda agulhas e seringas
estreis, um procedimento mais caro e complicado que a ingesto das gotas da OPV. Em contrapartida,
por ser uma vacina de vrus atenuados, a OPV exige a manuteno da rede de frio, o que a IPV dispensa.
Do ponto de vista da eficincia, a OPV confere uma imunidade mais ampla porque abrange a
mucosa digestiva, impedindo a entrada do vrus selvagem no organismo e a infeco das clulas
nervosas. Contudo, como o vrus atenuado da vacina, eliminado nas fezes, permanece no ambiente, a
OPV acaba por atingir outras pessoas, afetando os no vacinados e os imunodeprimidos presentes no
entorno. Por isso, alguns pases preferem a IPV e outros a OPV.
Novas vacinas esto sendo pesquisadas como, por exemplo, uma que leva o gene codificador de
uma protena do capsdeo viral, inserido em Escherichia coli. A sntese dessa protena por uma bactria,
que coloniza normalmente o intestino, possibilitaria a imunizao do hospedeiro.
Quando em 1992-1993, nos Pases Baixos, um surto da doena atingiu um grupo que se ope
vacinao por motivos religiosos, verificou-se que o vrus selvagem continua presente no ambiente.
Em 2000, a plio reapareceu no Haiti e na Repblica Dominicana. Na ocasio, revelou-se que o vrus
atenuado pode reverter a sua forma patognica, de modo que, mesmo tendo desaparecido a doena,
a vacinao ter que ser mantida. Em 2004, com a apario de um novo surto de plio em pases do
oeste africano, confirmou-se que o objetivo ainda se encontra distante.
Apesar do sucesso alcanado pela vacinao, a erradicao da doena parece ser bem mais difcil
do que o esperado. Em 2015, a plio ainda era endmica no Paquisto e no Afeganisto, e alguns surtos
ocorreram em Madagascar, Guin e Ucrnia. Alguns pases so vulnerveis, por estar situados em
regies onde as campanhas de vacinao so complexas e muitas vezes interrompidas por conflitos
blicos, corrupo e/ou superstio (Camares, Guin Equatorial, Etipia, Iraque, Nigria, Somlia,
Sudo do Sul e a Repblica rabe Sria).
A INFLUENZA
A influenza ou gripe uma doena transmitida por um ortomixovrus (influenzavrus) e apresenta os
seguintes sintomas: febre, dores musculares, garganta inflamada, fadiga e dor de cabea. O material
gentico RNA que est rodeado por um capsdeo proteico e um envelope, derivado da membrana
celular do hospedeiro. O RNA confere a seu portador uma enorme variabilidade porque, diferente do
DNA, os erros de replicao no so reparados por nenhum mecanismo celular.
Em funo das protenas do capsdeo, classificam-se os influenzavrus em trs grupos: A, B, e C. Os
vrus dos grupos B e C infetam exclusivamente seres humanos e no causam epidemias. Os vrus da
influenza da categoria A so os mais perigosos, porque se multiplicam tanto no homem como em
outras espcies (aves, sunos, cachorros, cavalos, focas, baleias). As variantes de duas protenas do
envelope, a hemaglutinina (H) e a neuraminidase (NA), so utilizadas para identificar os diferentes
subtipos da categoria A: H1N1, H5N1 etc.
Ao pular de uma espcie a outra, a recombinao do material gentico de diferente origem origina
vrus com caractersticas novas. Basta que esse vrus infecte o homem e sofra uma mutao que
possibilite a transmisso pessoa a pessoa para desencadear uma pandemia.
Ao longo do sculo XX, vrias pandemias de gripe assolaram a terra. Em 1918, um surto de gripe
sobreveio na Espanha, espalhando-se pelo mundo e causando a morte de 40 a 70 milhes de pessoas.
228
O vrus H1N1 da gripe espanhola circulou durante vrias dcadas, embora tenha perdido parte de sua
patogenicidade a partir de 1920.
Em 1957, uma segunda pandemia originou-se na China. A gripe asitica (H2N2) causou a morte de
2 milhes de pessoas. Poucos anos mais tarde, em 1968, o subtipo H3N2 apareceu em Hong Kong e
alastrou-se pelo mundo, deixando 47 mil mortos.
A gripe aviria (H5N1) surgiu na sia, em 1997. Embora a transmisso tenha sempre ocorrido no
sentido ave-ave e ave-homem, milhares de aves foram sacrificadas durante os surtos de 2003 e 2004,
devido ao temor de uma mutao que possibilitasse a transmisso do homem ao homem. A apario
do subtipo H5N1 demandou a modificao dos mtodos tradicionais de produo de vacinas em
embries de galinha. Transferindo a informao gentica relevante do vrus para um vrus de
laboratrio, obteve-se um prottipo viral, codificador dos antgenos correspondentes ao H5N1 que
pode crescer em embries de galinha.
A gripe A (H1N1) ou gripe suna apareceu no Mxico em 2009. Diferentemente das variantes
anteriores, esta causou mais vtimas entre os jovens e as mulheres grvidas. A resistncia dos mais
velhos poderia ser explicada por um contato prvio com vrus de tipo H1N1, que circularam por um
tempo na populao.
A existncia de medicamentos antivirais contribuiu para o controle da pandemia. A rpida
mobilizao das autoridades nacionais e internacionais, assim como das empresas farmacuticas, foi
decisiva para a obteno de uma vacina adequada. Contudo, algumas fraquezas foram expostas. Uma
delas a dificuldade de produzir rapidamente uma vacina, dado que, para obter 300 milhes de doses
de vacina, so necessrios 900 milhes de ovos embrionados. Em caso de urgncia, a produo em
cultivos celulares resultaria mais rpida.
Mutao do RNA e recombinao de RNAs de diferente origem so as duas estratgias que explicam
a enorme variabilidade do vrus da influenza e justificam a necessidade de mudar continuamente os
antgenos da vacina. O candidato vacinal de hoje pode ser incuo amanh, sendo difcil prever contra
quais antgenos do vrus dirigir a vacina. Por isso, as vacinas contra a gripe so preparadas anualmente,
escolhendo as linhagens que se supe que causaro a prxima epidemia.
TUBERCULOSE, MALRIA E HIV/AIDS
Ainda no temos vacinas para a tuberculose, a malria ou o HIV/AIDS, trs doenas que causam um
elevado nmero de mortes.
A malria uma doena causada por um protozorio (Gnero Plasmodium), transmitido atravs da
picada de um mosquito (Gnero Anopheles). O decrscimo da incidncia global da doena em 37%, e
da mortalidade em 60%, observado a partir do ano 2000, deve ser atribudo preveno e ao
tratamento dos doentes. No entanto, em 2015 registraram-se no mundo inteiro 214 milhes de casos.
A maior dificuldade no desenho de uma vacina contra a malria reside no complexo ciclo do
parasita, que se reproduz na glndula salivar do mosquito, se desloca na corrente sangunea do
hospedeiro, se replica no fgado e infecta as hemcias para multiplicar-se novamente. As vacinas em
andamento, dirigidas a uma nica etapa da vida do parasita, s conseguem imunizar parte das crianas
vacinadas. Para ser eficiente, a vacina teria que combater o parasita em cada etapa do ciclo.
Uma possibilidade engenhosa, em fase laboratorial, prope induzir, no homem, anticorpos contra a
forma do parasita que reside nas glndulas salivares do mosquito. Na picada, o Anopheles ingeriria os
anticorpos, e estes bloqueariam a reproduo do parasita.
A tuberculose uma doena causada pelo bacilo de Koch (Mycobacterium tuberculosis),
transmitido pelo ar. O declnio de 47% de casos, observado entre 1990 e 2015, deve ser atribudo aos
melhores mtodos de diagnstico e tratamento. No entanto, em 2014, registraram-se 9,6 milhes de
casos.
229
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Nos alvolos pulmonares, as bactrias so fagocitadas pelos macrfagos, dentro dos quais elas se
multiplicam lentamente, sem ser destrudas. Em algumas pessoas, a infeco permanece latente, em
outras se manifesta com diferentes graus de gravidade.
A vacina existente utiliza o bacilo atenuado BCG (Bacilo de Calmette-Gurin) para induzir imunidade
ao bacilo de Koch. A vacina eficiente em crianas pequenas, mas no imuniza crianas mais velhas
ou adultos. Por outro lado, a eficcia da vacina diminui nas regies perto do Equador, onde h
numerosas infeces por micobactrias aparentadas. As pesquisas atuais visam entender melhor a
imunidade no adulto e as caractersticas hereditrias que tornam as pessoas mais susceptveis.
Por enquanto, a mais insidiosa das trs doenas a HIV/AIDS, porque destri a capacidade do
sistema imune de responder a infeces oportunistas. Os primeiros casos apareceram em 1981 e se
estenderam rapidamente pela populao. Em 2013, 35 milhes de pessoas viviam com HIV/AIDS e 1,5
milho de pessoas morreram de doenas ligadas a AIDS.
A maior parte das novas contaminaes ocorre nos pases em desenvolvimento, especialmente o
sul da frica e a sia. No rasto da HIV/AIDS (e da adio a drogas injetveis), a tuberculose reaparece
com germes resistentes aos medicamentos.
Apesar das medidas preventivas e dos grandes progressos alcanados no tratamento da HIV/AIDS,
o ideal seria encontrar uma vacina. As dificuldades so enormes porque, para ativar a resposta imune,
devem-se ativar as clulas T auxiliadoras que a coordenam, e so justamente estas as que o vrus
destri. Como geralmente o vrus penetra no organismo por via anal ou vaginal, permanecendo um
tempo na corrente sangunea antes de invadir as clulas, a vacina deveria estimular ambas as vias, a
humoral e a celular, e se estender s mucosas.
Na luta contra o HIV/AIDS, diversas estratgias so possveis; uma delas seria impedir a invaso do
organismo pelo vrus, a outra, ajudar o organismo a impedir a progresso e/ou a transmisso da
doena. A falta de um modelo animal adequado e as frequentes mutaes do vrus complicam a tarefa.
Embora os resultados obtidos at agora tenham sido decepcionantes, esto sendo realizados os
estudos clnicos correspondentes a vacinas de subunidades, de vetores virais recombinantes e de DNA.
A AMEAA DAS DOENAS EMERGENTES
medida que eliminamos ou controlamos doenas, outras novas emergem e algumas das antigas
reaparecem. Os microrganismos adquirem resistncia aos medicamentos, e a destruio de habitats
naturais deixa o homem a merc de agentes infecciosos com os quais no teve contato prvio. O
crescimento da populao e sua concentrao em zonas urbanas, as mudanas climticas, o
incremento das viagens internacionais e do comrcio, assim como as mudanas comportamentais, so
outros fatores determinantes para a disperso de agentes infecciosos.
Alguns exemplos de doenas emergentes so a gripe espanhola, a hepatite B, as febres
hemorrgicas (Junn, Lassa, Marburg, Ebola etc.), a doena de Lyme, a BSE (encefalopatia
espongiforme bovina), a doena dos Legionrios, o HIV/AIDS, a Escherichia coli 0157:H7, a doena do
vrus do Nilo ocidental, o SARS (do ingls, severe acute respiratory), o MERS (do ingls, middle east
respiratory sindrome) e a dengue. Vrias dessas doenas contam com testes diagnsticos, e, para
algumas, j temos vacinas (hepatite B, doena de Lyme). Testes clnicos em seres humanos esto sendo
realizados com vacinas contra HIV/AIDS, malria, dengue, clera etc.
Entre 2013 e 2016, uma epidemia de Ebola devastou a frica ocidental, afetando Guin, Libria e
Serra Leoa, e alastrando-se at o Senegal, a Nigria e o Mali. O vrus de Ebola comum na regio, e
embora sua forma de transmisso ao homem ainda no tenha sido totalmente esclarecida, sabe-se
que envolve vrios animais da regio (chimpanzs, gorilas e morcegos).
As mudanas evolutivas do vrus parecem ter infludo menos na gravidade da epidemia que as
condies sociais e culturais existentes: infraestrutura destruda por dcadas de guerras civis;
230
dificuldade das equipes mdicas em distinguir entre diversas infeces com sintomas parecidos;
prticas religiosas de sepultamento dos doentes facilitando o contgio.
Mais de 28 mil casos e 11 mil mortes abalaram a j comprometida estrutura social e econmica dos
pases afetados. Os surtos que ocorreram nos Estados Unidos e na Europa, originados por pessoal das
equipes mdicas transferido para tratamento em seus pases de origem, foram rapidamente
controlados. Tambm a Nigria conseguiu controlar um surto incipiente, utilizando a estrutura
sanitria criada, com o apoio de organizaes internacionais, para a erradicao da plio.
Nenhum pas est preparado para a emergncia de uma doena desconhecida. No entanto, a
epidemia de Ebola deixa duas lies: a necessidade de contar com testes de diagnstico rpidos e a
obrigao moral de manter em alerta uma infraestrutura sanitria slida; as vacinas sero de utilidade
mais adiante, em ocasio do prximo surto.
Atualmente, vrios pases de Amrica Latina (Brasil, Colmbia) enfrentam uma epidemia de
dengue, chikungunya e zika, trs doenas de origem viral transmitidas por mosquitos do gnero Aedes
(A. aegypti e A. albopictus), transmissores, tambm, da febre amarela. Existe uma vacina para a febre
amarela e encontram-se adiantadas duas vacinas contra a dengue (Sanofi-Pasteur e Butantan).
Os fatores determinantes da emergncia dessas doenas so as mudanas climticas, a abertura
de rotas comerciais, as viagens internacionais e, fundamentalmente, a falta de saneamento bsico,
porque facilitam a disperso e a proliferao do mosquito nas reas urbanas. Sistemas de atendimento
mdico precrios e falta de testes de diagnstico agravam a situao da regio.
A apario de numerosos casos de microcefalia, atribudos ao vrus zika, exige uma resposta rpida,
mas qual? Uma vacina demora em chegar, e por muito que se queira apressar, no h como diminuir
o tempo necessrio para fazer os testes clnicos pertinentes e produzir o nmero de doses necessrias.
O caminho parece ser impedir a multiplicao do mosquito, e vrias formas foram descritas no Captulo
11.
BIOTERRORISMO E BIOSSEGURIDADE
Esporos disseminados pelos correios causaram um surto de antraz, logo depois do atentado s torres
do World Trade Center (Estados Unidos, setembro de 2001), alertando o mundo sobre a ameaa de
bioterrorismo.
No foi a primeira vez que foram utilizadas armas biolgicas. Os romanos usavam animais mortos
para infectar os poos de seus inimigos. Antes de levantar o stio cidadela de Kaffa (Crimeia, 1346),
o exrcito trtaro de Janibeg catapultou para dentro das muralhas os mortos de peste, iniciando uma
terrvel epidemia que se difundiu na Europa e dizimou a populao. Na Amrica (do Sul e do Norte),
os colonizadores exterminaram tribos indgenas com cobertores contaminados com varola, deixados
como presente. Em 1941, durante o conflito sino-japons, o exrcito do Japo disseminou a peste
bubnica no norte da China, em cinco ocasies.
Estima-se que uma dzia de pases teria armas biolgicas de destruio em massa, envolvendo
aproximadamente 70 agentes infecciosos. Atualmente, ou em curto prazo, existem vacinas para alguns
deles (Bacillus anthracis, Clostridium botulinicum, Yersinia pestis, Francisella tulariensis, varola e
hantavrus). Entretanto, de um ponto de vista cientfico, sanitrio ou financeiro, a vacinao poderia
no ser o mtodo de combate mais eficiente. Por isso, boa parte do esforo antiterrorista est sendo
orientado atualmente para o melhoramento de diagnsticos e a procura de novos medicamentos
antivirais e antibacterianos.
Outro motivo de preocupao est na quantidade de informao referente ao genoma de
patgenos disponvel nos bancos de dados pblicos, porque existe o temor que esse conhecimento
possa ser utilizado para elaborar armas biolgicas.
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232
C A P T U L O 18
BIOTECNOLOGIA E SADE
OS TESTES DIAGNSTICOS
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234
DEFINIO
Sensibilidade
Especificidade
Exatido
Reprodutibilidade
--------------
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MTODO INDIRETO
Acrescentam-se
anticorpos
especficos
para
a
imunoglobulina humana, ligados a uma enzima E, que se
fixam nos anticorpos do soro, fixados previamente no
antgeno. Retira-se o excesso por lavado.
236
B.
237
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O CROMOSSOMO 6
D.
CRUZAMENTO
Reao mista ou cross-matching. Colocam-se em contato as clulas do doador com o soro do receptor, em presena
de complemento. Se as clulas do doador ficam intactas, h compatibilidade.
TRANSPLANTE INCOMPATVEL
Clulas
do doador
Soro
do receptor
Complemento
Lise
TRANSPLANTE COMPATVEL
Clulas
do doador
Soro
do receptor
Complemento
Clulas intactas
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A palavra final corresponde aos testes de compatibilidade, em que se coloca o soro do receptor em
presena das hemcias do doador. Indispensveis na rotina de um banco de sangue, esses testes
personalizados so realizados por pessoal mdico ou tcnico.
Nos centros hospitalares que processam um nmero alto de amostras de sangue, os testes
sorolgicos clssicos em tubos de vidro esto sendo substitudos por novas tecnologias, em estaes
de trabalho automatizadas. Os Gel Tests para tipificao de hemcias esto baseados na centrifugao
controlada das hemcias em um gel de dextrana-acrilamida.
Entre suas vantagens est a possibilidade de trabalhar com numerosas amostras de pequeno
volume, a eliminao da etapa de lavados e a obteno de resultados estveis. Se for necessrio, os
dados podero ser analisados posteriormente e reavaliados por um supervisor.
Tambm se utilizam tcnicas cromatogrficas como a ACT (do ingls affinity column technology),
para identificar subclasses de imunoglobulinas em hemcias sensibilizadas, e placas de microtitulao,
para pesquisa de anticorpos.
240
241
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242
TIPO DE DOENAS
HERANA
EXEMPLO
Cromossmicas
Espordica
Mitocondriais
Materna
Autossmica recessiva
Autossmica dominante
Recessiva ligada ao X
Dominante ligada ao X
Sndrome de Rett.
Monognicas
Multifatoriais
(artrite,
transtornos
--------------
243
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a possibilidade de fazer escolhas saudveis, modificando seu modo de vida e aumentando a vigilncia
frente a determinados sintomas. Hoje existem testes de predisposio a doenas cardiovasculares e a
vrios tipos de cncer. E esto sendo desenvolvidos testes preditivos de resposta a medicamentos.
A predio tem suas limitaes. Por exemplo, as mulheres com o gene BRCA1 tm 80% de chances
de desenvolver cncer de mama aos 65 anos de idade; um risco considerado alto, mas sem certeza
absoluta (Figura 18.6). Graas ao diagnstico preditivo, elas podero aumentar as medidas
preventivas, isto , mamografias, controles mdicos etc.; outras, como a atriz Angelina Jolie, optaro
por uma mastectomia e a extirpao de ovrios. Contudo, do ponto de vista preventivo, a
predisposio familiar responde s por 5 a 10% dos casos de cncer, os 90 a 95% restantes devem-se
a mutaes adquiridas ao longo da vida.
-------------FIGURA 18.6. O uso de arrays no diagnstico de mutaes nos genes BRCA1 e BRCA2
Compara-se o padro obtido na hibridizao dos fragmentos de DNA marcados de uma paciente e os de um controle normal.
A hibridizao de ambos DNAs, do DNA da paciente ou do DNA do controle com as sondas, detectada por varredura (scanner),
sinalizada com cores diferentes em uma imagem computadorizada.
Tecido da paciente
Tecido controle
Extrao de mRNA
Extrao de mRNA
Preparao de cDNA
(transcriptase reversa)
Preparao de cDNA
(transcriptase reversa)
Varredura e leitura
Diagnstico
Os pontos verdes e vermelhos identificam, respectivamente, os stios de hibridizao de cada um dos DNAs testados.
Os pontos amarelos identificam os stios de hibridizao de ambas as amostras, os pontos pretos, os de nenhuma das duas
amostras.
244
Um caso muito controverso o da empresa 23andMe, com sedes nos Estados Unidos e no Reino Unido.
Mediante 199 dlares e uma amostra de saliva, acondicionada em um kit especialmente preparado e
enviado pelo correio, a empresa informa o cliente sobre sua ancestralidade e algumas caractersticas
gnicas que poderiam passar a sua descendncia. Apesar de ser uma informao pouco relevante e
sem utilidade para a maioria das pessoas, a empresa tem sucesso comercial.
Calcula-se que, em 20 anos, nos pases desenvolvidos, a expanso do mercado dos testes genticos
possibilitar tratamentos de sade pr-sintomticos. Quantos desses testes sero necessrios?
Quantas pessoas estaro dispostas a mudar seu estilo de vida em funo de uma estimativa de risco?
Quantas pessoas se sentiro erroneamente seguras em relao ao estilo de vida que adotarem?
A implementao da medicina preditiva deve ser analisada criteriosamente por todos os setores da
sociedade. Quem controlar a aplicao dos testes genticos? Como garantir que a deciso de se
submeter a um teste obedea exclusivamente a uma escolha pessoal? Como seria armazenada essa
informao e com quem seria compartilhada? Seria possvel formar uma subclasse de indivduos sem
seguros de sade nem empregos, discriminados em funo de seus genes?
AS PATENTES
Nos Estados Unidos, at 2013, uma patente outorgava direitos sobre uma sequncia de DNA ou um
gene a quem os identificara pela primeira vez. O indivduo ou a empresa que obteve a patente podia
determinar, durante 20 anos, como essa sequncia ou esse gene seriam usados em atividades de
pesquisa ou em testes clnicos.
Nessa data, e em ocasio do julgamento dos direitos da empresa Myriad sobre os genes BRCA1 e
BRCA2, a Corte Suprema de Justia revogou todas as patentes anteriores, disponibilizando mais de 4
mil genes. Os juzes argumentaram que, por ser um produto da natureza, um gene no poderia ser
patenteado; em contraposio, o cDNA poderia ser patenteado, porque um produto elaborado pelo
homem e no se encontra na natureza.
No Brasil, no so patenteveis as sequencias de nucleotdeos isolados de organismos vivos
naturais. Contudo, o cDNA pode ser patenteado sempre que seja diferente do DNA codificador, com
base nos requisitos de novidade, atividade inventiva e aplicao industrial.
O ESPORTE
Na Olimpada de Roma (1960), o atleta etope Abebe Bikila ganhou a maratona correndo descalo. Um
fato dessa magnitude desafia a estrutura do esporte. Treinamento? Sem dvida. Predisposio
gentica? Hoje sabe-se que a aptido para atividades de fora ou de resistncia est relacionada com
a estrutura das fibras musculares e da protena codificada pelo gene ACTN3.
Teria a ancestralidade alguma relao com a subida ao pdio? Os atletas do leste africano brilham
nas maratonas, os do norte e oeste africano nas corridas de velocidade, os asiticos nas provas de
levantamento de peso, os chineses na ginstica etc. Baseado nos dados coletados em numerosos
atletas de destaque em diferentes modalidades, o prximo passo poderia ser a utilizao de
marcadores genticos para selecionar atletas e direcion-los para a modalidade esportiva considerada
mais adequada.
O determinismo gentico pode, eventualmente, mostrar uma predisposio a certo tipo de
esporte, mas no define quem levar as medalhas: a vontade de ganhar, os fatores culturais e um
treinamento intenso parecem ser decisivos.
245
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A PRTICA FORENSE
Com exceo dos gmeos idnticos, nenhuma pessoa geneticamente idntica outra. Durante quase
um sculo, a identificao das pessoas dependeu das impresses digitais e, apesar das enormes
dificuldades em encontrar uma quantidade suficiente de material em estado de conservao
adequado, muitos crimes foram resolvidos graas a estudos bioqumicos e imunolgicos.
A anlise do DNA para a identificao das pessoas utilizada desde a dcada de 1980, quando A.
Jeffreys idealizou a tcnica do Fingerprint, estabelecendo uma relao nica entre um indivduo e sua
sequncia gnica. A identificao recorre a pequenas sequncias no codificadoras dispersas no DNA,
denominadas VNTRs ou vinters (do ingls, variable-number tandem repeats). Essas sequncias
polimrficas repetem-se um nmero de vezes que pode variar de um cromossomo ao seu homlogo,
de modo que os fragmentos de restrio tero tamanhos diferentes.
Sondas genticas especficas identificam at 20 tipos diferentes de sequncias VNTRs. No gel de
eletroforese aparecer um padro de bandas individual, parecido com os cdigos de barras usados no
comrcio. Como a probabilidade de duas pessoas escolhidas ao acaso terem o mesmo perfil de DNA
menor a um em um trilho, o resultado praticamente nico para cada indivduo.
Na determinao da paternidade, os estudos de grupos sanguneos e de protenas do soro tm sido
complementados ou substitudos pelos testes de DNA, que se transformaram no eixo de vrias
investigaes muito comentadas na mdia. No Brasil, o jogador de futebol Pel teve que reconhecer a
paternidade de Sandra Regina, e o menino Pedrinho, sequestrado na maternidade logo aps seu
nascimento pde, anos mais tarde, reencontrar sua verdadeira famlia.
Apesar das crticas levantadas em relao s possibilidades de erros laboratoriais devidos
contaminao de amostras, ao risco da participao de pessoal treinado inadequadamente e s
dificuldades de interpretar estatisticamente os dados, em poucos anos a anlise de DNA se
transformou em uma ferramenta indispensvel na prtica forense.
Nos Estados Unidos, uma mancha de smem no vestido azul de uma estagiria se transformou em
uma pea essencial para solicitar o impeachment do presidente Clinton.
Depois de anos de mistrios e rumores, os cadveres enterrados em uma fossa comum perto de
Jekaterinburg foram reconhecidos, em 1994, como sendo os do tzar Nicolau II, sua famlia e servidores,
assassinados durante a Revoluo Russa (1918). Em 2012, a descoberta dos ossos do rei Ricardo III sob
um estacionamento e a anlise do cromossomo Y, transmitido de pai a filho, levantou dvidas sobre a
legitimidade da linha dos Plantagenetas ao trono da Inglaterra.
Em 1992, os ossos encontrados, anos antes, em uma tumba no Brasil, foram identificados como
pertencentes ao comandante do campo de extermnio de Auschwitz, Joseph Mengele, um dos homens
mais procurados aps a Segunda Guerra Mundial. Determinadas variantes gnicas foram decisivas
para a sobrevivncia, com 200 calorias dirias, dos defensores do stio de Leningrado.
A anlise de DNA a nica forma de reconhecer as vtimas de catstrofes, conflitos blicos e
atentados como o do World Trade Center (Nova York, 2001) ou da estao de Madri (2004). E, anos
mais tarde, de seu instigador, Osama Bin Laden.
Quando as amostras esto muito degradadas, analisa-se o DNA mitocondrial. Transmitido por via
materna, esse DNA conta com uma regio muito varivel, apta para identificar pessoas e esclarecer
laos de parentesco. Entre 1976 e 1985, o regime militar que governou a Argentina exterminou 9 mil
a 30 mil pessoas (desaparecidas). Muitas crianas pequenas, separadas de suas famlias, foram
entregues para adoo. A comparao entre o seu DNA e o de suas avs maternas possibilitou a muitos
filhos de desaparecidos recuperar sua identidade verdadeira.
246
C A P T U L O 19
BIOTECNOLOGIA E SADE
A INDSTRIA DE MEDICAMENTOS
A origem da farmcia atribuda a Galeno (sculo II), um mdico romano que utilizava preparaes
medicinais para tentar reestabelecer o equilbrio destrudo pela doena. Durante a Idade Mdia,
conservou-se seu legado, a denominada farmcia galnica, em conventos e monastrios. No sculo
XVI, o mdico e alquimista suo Paracelso formulou dois conceitos fundamentais: existe um remdio
especfico para cada doena e qualquer remdio pode ser txico, dependendo da dose.
No sculo XVIII, o desenvolvimento da qumica na Europa resgatou do medievo algumas tcnicas,
como a destilao e a extrao com solventes. A qumica orgnica nasceu na primeira metade do
sculo XIX e, na mesma poca, fundaram-se os primeiros laboratrios farmacuticos. Rapidamente, os
mtodos artesanais foram substitudos por sistemas de produo industrial.
Ao longo do sculo XX, gerou-se um setor que compreende os fabricantes de diversas categorias
de medicamentos (de marca, genricos e de venda liberada), alm de empresas que elaboram
produtos novos e outras que desenvolvem pesquisas, geralmente terceirizadas.
O mercado mundial de medicamentos movimenta mais de um trilho de dlares por ano. Os
medicamentos mais vendidos so os oncolgicos, os agentes respiratrios, os reguladores de lipdios,
os antidiabticos e os antipsicticos.
Apesar das empresas farmacuticas dedicarem algumas pesquisas s doenas tropicais dos pases
em desenvolvimento, ainda faltam medicamentos adequados para a malria, a doena de Chagas,
a doena do sono, a leishmaniose, a filariose, o dengue e a esquistossomose. S 3% dos medicamentos
desenvolvidos entre 1975 e 1999 foram dedicados ao tratamento das doenas negligenciadas, e a
metade fora incentivada pela Organizao Mundial da Sade.
O controle da produo de medicamentos depende das grandes corporaes multinacionais, que
evoluem em contnuos ciclos de fuso, consolidao e expanso. Por ser extremamente competitivo e
dinmico, o setor capaz de absorver rapidamente os avanos cientficos e tecnolgicos. Na disputa
por um mercado em crescimento, destacam-se como empresas lderes: Pfizer (Estados Unidos),
Novartis (Sua), SanofiAventisPasteur (Frana), Roche Holding (Suia), Merck & Co (Estados Unidos),
GlaxoSmithKline (Reino Unido), Amgen (Estados Unidos), AstraZeneca (Reino Unido), Eli Lilly & Co
(Estados Unidos) e Abbott Laboratories (Estados Unidos).
Apesar do nmero de medicamentos novos colocados no mercado ter diminudo nos ltimos anos,
o nmero de compostos em testes pr-clnicos ou clnicos aumentou. A estrutura do setor poder ser
reorganizada nos prximos anos, em funo da chegada de novas tecnologias robticas, informticas
e biolgicas.
BIOTECNOLOGIA: ENSINO E DIVULGAO (http://bteduc.com)
http://bteduc.com
248
2015, o Remsima (infliximabe) foi o primeiro anticorpo monoclonal aprovado para uso no pas, depois
de demonstrada sua similaridade com o produto biolgico inovador Remicade (infliximabe).
A distribuio de genricos e biossimilares na rede pblica de sade representa, em qualquer pas,
uma economia considervel. A produo de sete antivirais genricos para o tratamento de HIV/Aids
por Farmanguinhos, e a preferncia destes sobre os medicamentos de marca, para sua compra e
distribuio na rede pblica de sade, representaram para o Brasil uma economia de mais de US$ 400
milhes por ano.
Admite-se que, em alguns casos, como situaes de emergncias nacionais, circunstncias de
extrema urgncia e prticas anticompetitivas, o uso de uma patente sem a autorizao do detentor do
direito seja justificado. Esta salvaguarda se encontra no Acordo sobre Aspectos dos Direitos de
Propriedade Intelectual Relacionados ao Comrcio (TRIPS Agreement), da Organizao Mundial do
Comrcio, vigente desde 1995. O artigo 31 assinala que o uso da patente sem autorizao estaria
justificado se tivessem sido feitos os esforos para sua utilizao em condies comerciais razoveis.
Quando da ameaa terrorista de antraz, os Estados Unidos cogitaram quebrar a patente do
antibitico Cipro. Nos pases em desenvolvimento, o acesso aos medicamentos considerado um
direito fundamental dos pacientes de HIV/Aids, porm, apesar das longas discusses no marco da
Organizao Mundial de Comrcio, milhes de pessoas morrem anualmente por falta desses
medicamentos.
--------------
Descoberta
Fase pr-clnica
5.000
compostos
5 compostos
0
2
4
6
8
Testes clnicos
10
12
1 composto
14
16
18
Procedimentos
administrativos
20
Vencimento da patente
22
24
Genricos
Anos
249
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COOH
cido saliclico
COOH
cido acetilsaliclico
OH
O-CO-CH3
--------------
OS FITOTERPICOS
At o momento, os estudos etnobotnicos identificaram mais de 50 mil espcies de plantas medicinais.
Muitas delas representam a nica fonte de tratamento acessvel para a populao mais pobre.
Tambm so utilizadas por outra parcela da populao, adepta das medicinas alternativas e do
consumo de medicamentos fitoterpicos tradicionais, considerados mais suaves e com menos efeitos
colaterais. Nessa corrente de pensamento, o natural percebido como bom, admitindo-se que o
extrato vegetal seria mais eficiente que alguma de suas partes, entre as quais se encontra o princpio
biologicamente ativo.
Os fitoterpicos so produtos relativamente baratos, de venda livre e com poucas oportunidades
de patentes. Contudo, sua eficcia depende das condies de cultivo das plantas, porque a sntese das
substncias ativas depende do solo, da estao e at do momento do dia. Outras limitaes
250
251
http://bteduc.com
farmacuticas. Esses acordos contriburam para aumentar a capacitao do pas desde vrios pontos
de vista: cientfico, tecnolgico e institucional. No entanto, apesar de ter encontrado vrias molculas
promissoras, at o momento nenhuma delas originou um medicamento novo.
Aproximadamente na mesma poca teve incio um programa de prospeco de agentes bioativos
em terras ridas da Amrica Latina. As numerosas crticas levantadas por estas e outras iniciativas,
como o convnio Novartis-Fundao Bio-Amaznia (2000), mostram as dificuldades em estabelecer
normas de trabalho dentro do marco legal para a proteo da biodiversidade, respeitando a
Conveno da Diversidade Biolgica (1992) e os acordos posteriores.
Um exemplo recente refere-se s possveis aplicaes da sabara (Guiera senegalensis), uma planta
do Sahel, tradicionalmente utilizada pelo povo Dogon (Mali). Pesquisadores franceses isolaram um
princpio ativo (Guieranon B) que mostrara atividade anticancerosa nos testes pr-clnicos, registraram
a patente e planejam desenvolver um medicamento. At o momento no foi contemplada nenhuma
compensao para o povo Dogon.
AS SUBSTNCIAS ANTIBITICAS
O CASO DA PENICILINA
At a Segunda Guerra Mundial, as nicas armas disponveis no combate s infeces eram umas
poucas vacinas e antitoxinas. No incio do sculo XX fora descoberto, no laboratrio de Paul Ehrlich,
um derivado do arsnico para o tratamento da sfilis. Comercializado em 1910 pela empresa Hoechst,
o Salvarsan resultou em um terrvel fracasso por duas razes: era txico e devia ser injetado, em uma
poca em que no existiam seringas. Os primeiros inibidores do crescimento microbiano bemsucedidos foram as sulfas, derivados da sulfonamida, no final da dcada de 1930.
Em 1928, o bacteriologista Alexander Fleming observou a ausncia de crescimento bacteriano em
um cultivo de estafilococos contaminado por um fungo. Depois de isolar, cultivar e identificar o fungo
como Penicillium notatum, Fleming conseguiu extrair a penicilina, uma substncia antimicrobiana
eficaz quando testada em animais. Esse resultado no teve repercusso alguma na comunidade
cientfica, e, durante quase 10 anos, Fleming tentou infrutiferamente obter penicilina em estado puro.
Em 1940, nos laboratrios da Universidade de Oxford, H. Florey e E. Chain obtiveram um sal sdico
de penicilina que teve um efeito extraordinrio nos primeiros ensaios clnicos (Figura 19.3). Contudo,
a quantidade disponvel era pequena para uso teraputico e, em plena Segunda Guerra Mundial
(1941), Florey e Chain transferiram-se para Peoria (Illinois, Estados Unidos), com o objetivo de iniciar
uma produo em grande escala.
-------------FIGURA 19.3. A frmula da penicilina
Na frmula da penicilina pode-se observar um anel -lactmico e uma cadeia
lateral (R). Algumas bactrias sintetizam -lactamases, enzimas que, ao destruir
o anel correspondente, desativam as penicilinas naturais. Modificando a cadeia
lateral, obtiveram-se as penicilinas semissintticas, resistentes a essas enzimas.
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Introduo
Sulfonamidas (Sulfas)
1936
-lactmicos
1940
Cloranfenicol, Tetraciclinas
1949
Aminoglicosdeos
1950
Macroldeos
1952
Quinolonas, estreptograminas
1962
Oxazolidinonas
2000
Lipopeptdeos
2003
Glicilciclinas
2005
Mutilinas
2007
--------------
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Cadeia B
Cadeia A
D. A sntese da insulina
a) A sntese in vivo da insulina nas clulas pancreticas
Peptdeo-sinal
Traduo
mRNA de insulina
Remoo do sinal e
unio das cadeias A e B
Molcula precursora
Remoo
da cadeia C
Pr-insulina
Insulina
Sntese da cadeia A
Insero no plasmdeo
e clonagem em E.coli
Sntese da cadeia B
Insero no plasmdeo
e clonagem em E.coli
256
Em 2001, a Novo Nordisk absorveu a rea de produo da Biobrs, uma empresa brasileira que durante
mais de 20 anos abasteceu de insulina grande parte do mercado latino-americano. Uma parceria entre
a Fundao Oswaldo Cruz e a empresa Biomm, que conservou a patente para a insulina humana
desenvolvida anteriormente pela Biobrs, poder colocar a insulina no mercado e distribu-la no SUS
(Sistema nico de Sade), a partir de 2017.
Atualmente, a produo de insulina humana recombinante se concentra em trs grandes
conglomerados farmacuticos: Eli Lilly, Novo Nordisk e Sanofi.
AS PROTENAS RECOMBINANTES
AS BASES TECNOLGICAS
As protenas de uso teraputico tm um tamanho 100 vezes maior que o das molculas presentes nos
medicamentos convencionais. Sua produo seria invivel sem a tecnologia do DNA-recombinante,
porque os mtodos extrativos fornecem quantidades mnimas que nunca chegariam a satisfazer a
demanda do mercado.
A rpida incorporao das novas tecnologias nos mtodos de produo facilitou, j na dcada de
1980, a obteno de insulina e de interferon mediante bactrias e leveduras modificadas
geneticamente, cultivadas em biorreatores. Mais tarde, os microrganismos foram substitudos em
alguns processos por clulas animais que, apesar de mais difceis de cultivar, so capazes de levar a
cabo as modificaes ps-traducionais indispensveis.
Com o objetivo de aumentar a produtividade e diminuir os custos, foram construdos plantas e
animais transgnicos (vacas, cabras, ovelhas etc.) para uma centena de protenas de tipo
recombinante, muitas das quais se encontram j na fase de testes clnicos. O primeiro anticoagulante
extrado do leite de uma cabra transgnica entrou no mercado em 2009 (Atryn, GTC Biotherapeutics).
O medicamento ZMapp (Mapp Biopharmaceuticals), para tratamento de Ebola, rene 3 anticorpos
monoclonais humanizados, produzidos em folhas de tabaco. Ainda em fase experimental, teve sucesso
quando utilizado emergencialmente para tratar pessoal de sade contaminado por ocasio da
epidemia que assolou vrios pases africanos.
A hostilidade da sociedade, em relao s plantas e animais transgnicos, no existe quando se
trata de produzir medicamentos. O princpio de equivalncia, contencioso no setor de agroalimentos,
totalmente aceito em relao aos novos medicamentos. Uma atitude contraditria que incita
reflexo.
OS PRODUTOS E SUAS UTILIZAES
Alm da insulina recombinante, um dos primeiros produtos obtidos por engenharia gentica foi o
interferon (IFN), uma protena que interfere na replicao de vrus, bactrias e clulas tumorais.
Existem vrios tipos e so utilizados no tratamento de cncer, esclerose mltipla, hepatite B e C.
As protenas teraputicas de origem recombinante cumprem diversas funes (Tabela 19.2).
Algumas substituem ou complementam molculas naturais, tais como hormnios, interferones,
interleucinas, fatores estimuladores do crescimento celular, fatores de coagulao sangunea,
enzimas. Outras so produtos especialmente desenhados para cumprir uma funo medicamentosa:
trombolticos (tPA ou fator ativador de plasminognio, estreptoquinase, uroquinase), anticorpos
monoclonais e antgenos bacterianos para vacinas.
Utilizam-se fundamentalmente nas reas de hematologia, oncologia, diabetes e endocrinologia,
artrite, inflamao, doenas imunes e doenas genticas lisossmicas (Gaucher, Hurler, Fabry, Pompe).
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258
(Inglaterra). Wellcome Trust Case Control Consortium encontrou 24 associaes a 7 doenas (Crohn,
diabetes 1 e 2, doena cardiovascular, hipertenso, artrite reumatoide e transtorno bipolar).
A FARMACOGENTICA
Outra disciplina nova a farmacogentica, que investiga as diferenas genticas em uma populao
que permitem prever diferentes respostas a um medicamento. Receadas por mdicos e pacientes, as
reaes adversas so temidas pela indstria farmacutica, que se protege mediante bulas
cuidadosamente redigidas. Nos Estados Unidos, as reaes adversas causam 100 mil mortes e 2
milhes de hospitalizaes por ano.
Os medicamentos passam por vrias fases de estudos clnicos antes de chegar ao mercado.
Contudo, as pessoas no reagem do mesmo modo a um medicamento, que pode ser eficiente para
uns e txico para outros.
Aproximadamente 60% dos medicamentos so metabolizados por uma famlia de enzimas
(citocromo P450). Algumas pessoas os degradam rapidamente, outras no, dependendo de suas
caractersticas enzimticas individuais. Sabendo a qual dos dois grupos pertence um paciente, podese determinar qual a dose do anticoagulante que lhe dever ser administrada, minimizando os efeitos
adversos.
Associando marcadores genticos a respostas diferenciais a medicamentos, pode-se dividir a
populao em subgrupos e oferecer um tratamento personalizado. Atualmente, antes de iniciar um
tratamento de cncer de mama com a herceptina, deve-se realizar um teste gentico na paciente para
saber se o medicamento se ajusta, ou no, ao seu caso. Em pacientes HIV positivos, procura-se
determinar a presena do alelo HLA-B*5701 antes de iniciar o tratamento com abacavir, porque os
portadores desse alelo podem ser hipersensveis ao medicamento. Aprovado pela FDA, o Bidil um
medicamento para doena cardiovascular, destinado exclusivamente aos pacientes afroamericanos.
O desenvolvimento da farmacogentica dar aos pacientes mais chances de receber a medicao
adequada e na dose certa. Por outro lado, as empresas farmacuticas podero escolher seus
voluntrios para os testes clnicos no subgrupo apropriado, evitando que um produto novo seja
descartado por falta de resposta adequada. No futuro, em vez de um nico produto campeo de
vendas, as empresas farmacuticas podero oferecer medicamentos diferentes, cada um dos quais
respondendo s expectativas de um tipo de consumidor.
AS DOENAS RFS
Uma doena considerara rara, ou rf, quando atinge um nmero pequeno de pessoas. Existem
aproximadamente 7 mil tipos de doenas raras, 80% de origem gentica, que afetam 350 milhes de
pessoas. Para a indstria, a menos que receba algumas compensaes, qualquer doena que afete
menos de 200 mil pessoas desinteressante, em termos de pesquisa e desenvolvimento de
medicamentos.
Nos Estados Unidos, o Orphan Drug Act (1983) garante incentivos financeiros s empresas
farmacuticas que desenvolvam produtos para essas doenas. Tambm garante que, durante sete
anos, nenhum medicamento equivalente ser aprovado, a no ser que se trate de outro que lhe seja
superior. Legislaes equivalentes foram promulgadas em outros pases (Japo, 1993; Austrlia, 1998;
Cingapura, 1999; Unio Europeia, 2000).
Abre-se assim um campo no qual as empresas de biotecnologia se inserem com sucesso, j que
seus produtos visam doenas de origem gentica, envolvendo alteraes de receptores celulares,
enzimas e protenas estruturais. Em 2015, a metade dos medicamentos aprovados correspondia a
doenas rfs e, atualmente, mais de 560 encontram-se em desenvolvimento.
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INDICACO TERAPUTICA
FATORES DE COAGULAO
Fator VIII
Hemofilia A
Fator IX
Hemofilia B
Fator VIIa
ANTICOAGULANTES
Fator ativador de plasminognio
Infarto de miocrdio
Infarto de miocrdio
Hirudina
HORMNIOS
Insulina
Diabete
Hormnio de crescimento
Hormnio folculo-estimulante
Hormnio paratirideo
Osteoporose
Gonadotrofina corinica
Reproduo assistida
Tirotrofina
Hormnio luteinizante
Calcitonina
Doena de Paget
Glucagon
Hipoglicemia
FATORES HEMATOPOITICOS
Eritropoietina (EPO)
Anemia
INTERFERON E INTERLEUCINAS
Interferon alfa (IFN alfa)
Esclerose mltipla
Granulomatose crnica
Interleucina 2 (IL-2)
Cncer de rim
VACINAS
Hepatite B
Hepatite A
Doena de Lyme
Asma
Anti-TNF (recombinante)
Artrite reumatoide
Anti-IL2
Fratura de tbia
Galactosidase
Iaronidase
Mucopolissacaridose
Protena C
Sepse severa
-glucocerebrosidase
Doena de Gaucher
DNAse
Fibrose cstica
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NOME COMERCIAL
(Nome genrico)
HUMIRA (Adalimumab)
Abbott / 12.543
REMICADE (Infliximab)
RITUXAN (Rituximab)
ENBREL (Etarnecept)
Amgen / 8.538
Diabete
Sanofi / 7.279
AVASTIN (Bevazizumab)
Roche / 6.957
HERCEPTIN (Trastuzumab)
Roche / 6.793
NEULASTA (Pegfilgastrin)
Amgen / 5.857
REVLIMID (lenalidomide)
Celgene / 4.980
GLEEVEC (Imatinib)
Novartis / 4.695
VELCADE (Bortezomibe)
Takeda/J&J / 1766
Pneumonia meningocccica
PREVNAR (Vacina)
Pfizer/ 4.464
Esclerose mltipla
AVONEX ( e Interferon)
REBIF ( interferon)
Merck / 2.414
SOLIRIS (Eculizumab)
Baxter / 2.083
Doenas hematolgicas
--------------
Para as grandes empresas farmacuticas, uma medida do sucesso significa conseguir um medicamento
que alcance um valor de vendas de 1 bilho de dlares (blockbusters). Em 2014, os maiores lucros
corresponderam aos medicamentos destinados ao tratamento de artrite e doenas relacionadas,
diversos tipos de cncer, diabete, esclerose mltipla e uma vacina antimeningocccica (Tabela 19.3).
No mesmo ano, dos dez medicamentos melhor colocados, 6 eram anticorpos monoclonais.
AMRICA LATINA
Na Amrica Latina existe uma indstria farmacutica que fabrica medicamentos para consumo interno
e para exportao, destacando-se Argentina, Brasil, Cuba e Mxico. Os principais produtos
biotecnolgicos so os anticoagulantes (eritropoietina), os hormnios, os interferones ( e ) e os
fatores estimuladores do crescimento celular.
A Argentina conta com um setor farmacutico slido e competitivo. Vrias protenas
recombinantes so produzidas localmente, por trs empresas biotecnolgicas nacionais (Bio Sidus, PCgen, Zelltek) que vendem seus produtos atravs de suas empresas farmacuticas correspondentes
(Sidus, Pablo Cassar) e os exportam para diversos pases de sia, Oriente e Amrica Latina. Uma
empresa estrangeira, Sanofi, produz vacinas contra a hepatite B.
262
Bio Sidus obteve sucesso com seu tambo farmacutico, pequenos rebanhos de vacas transgnicas
produtoras de hormnio de crescimento, de insulina ou de leite maternizado, um empreendimento
que ir sem dvida lhe garantir uma posio de destaque no setor produtivo. O Laboratrio Pablo
Cassar outra empresa tradicional que proximamente ir colocar no mercado uma nova vacina em
duas doses contra a hepatite B e, recentemente, obteve uma enzima recombinante capaz de reparar
as leses causadas pela exposio aos raios X. Ambas as empresas distribuem seus produtos no Brasil.
Diferente da Argentina, no Brasil as empresas pblicas como Farmanguinhos e Instituto Butant
tem um papel determinante na produo de medicamentos, destacando-se respectivamente na
produo de retrovirais e eritropoietina. Contudo, depende-se ainda da importao de biofrmacos,
alguns dos quais so distribudos pelo Sistema nico de Sade (eritropoietina, imunoglucerase,
infliximab, interferon, somatotropina recombinante humana). Acordos de transferncia de tecnologia,
envolvendo laboratrios nacionais (pblicos e privados) e estrangeiros, visam reverter essa
dependncia.
Mxico produtor de medicamentos de alta tecnologia (antibiticos, antiinflamatrios,
tratamentos contra o cncer). A empresa ProBioMed tem desenvolvido com o setor universitrio uma
dezena de protenas recombinantes (anticoagulantes, interferones, fatores estimuladores do
crescimento celular) para uso interno e exportao para outros pases de Amrica Central e Amrica
do Sul. Outros laboratrios (Instituto Biocln, grupo Silanes) tm se destacado na produo de
antitoxinas.
Cuba tem registrados numerosos produtos biotecnolgicos, desenvolvidos por Centros de Pesquisa
(Centro de Inmunologa Molecular, Centro de Ingeniera Gentica y Biotecnologa, Centro Nacional de
Biopreparados e Instituto Finlay) e comercializados por empresas farmacuticas associadas (Heber
Biotec, CIMAB etc.). Hoje Cuba produz vacinas, molculas teraputicas e vrios sistemas de
imunodiagnstico. Esses produtos renderam aproximadamente 900 patentes no exterior e so
exportados para 40 pases. Assim como o nquel, o tabaco e o acar, a biotecnologia um dos
principais produtos de exportao da ilha.
263
C A P T U L O 20
BIOTECNOLOGIA E SADE
OS NOVOS TRATAMENTOS
OS TRANSPLANTES
OS TRANSPLANTES DE RGOS
Em 1899, a primeira tentativa de transplante de rim de um cachorro a outro causou a morte do
receptor, mostrando que o fenmeno de rejeio seria o principal obstculo aos transplantes de
rgos. Uma exceo a crnea, cujo primeiro transplante bem-sucedido realizara-se em 1905.
O primeiro transplante de corao, realizado pelo cirurgio Christian Barnard (frica do Sul, 1967),
teve uma repercusso enorme nos meios de comunicao. O mundo inteiro acompanhou os
comunicados mdicos emitidos na Cidade do Cabo, at a morte do paciente, 18 dias mais tarde.
Durante vrios anos, os problemas de rejeio pareceram intransponveis.
Na dcada de 1980, a melhoria das tcnicas cirrgicas, a caracterizao dos antgenos dos tecidos
e a descoberta dos primeiros medicamentos imunossupressores (ciclosporinas) revolucionaram os
transplantes, que se tornaram uma interveno rotineira. Hoje, em centros mdicos de todos os pases
so substitudos, com sucesso, diversos rgos e tecidos: corao, rim, fgado, pulmo, intestino, timo,
crneas, medula ssea, pele, pncreas, vlvulas cardacas, veias etc.
A relao entre o doador e o receptor simplifica, ou dificulta, o procedimento. No h rejeio no
isotransplante, em que a transferncia de um ovrio ou de um rim feita de um indivduo a seu gmeo
idntico; nem no autotransplante, em que se substitui uma artria coronria por uma safena do
mesmo indivduo, ou um fragmento de pele danificado por outro. Contudo, o alotransplante, em que
um rgo transferido a outro indivduo, requer a supresso do sistema imune, para que o organismo
possa aceitar uma parte non-self. Caso contrrio, o rgo ser rejeitado e, tambm, o rgo poder
rejeitar o hospedeiro.
OS XENOTRANSPLANTES
dificuldade em achar um doador compatvel se soma a de encontrar doadores, j que o nmero de
doaes insuficiente em relao demanda. Uma alternativa seria o xenotransplante, isto , a
transferncia de um rgo de um animal ao homem.
Devido ao tamanho e a estrutura de seus rgos, o porco parece o animal mais indicado. J em
1902, ligara-se o rim de uma paciente a um porco, em uma experincia que resultou fatal. Hoje
sabido que, devido presena nas clulas sunas de um tipo de molcula (-1-3-galactose), ausente
em primatas, a no ser que sejam aplicadas doses macias de medicamentos imunossupressores,
ocorrer um fenmeno de rejeio violento.
Em 2002, duas empresas (PPL Therapeutics e Immerge Bio Therapeutics) anunciaram a clonagem
de porcos com o gene da -1-3-galactose desativado, por knockout duplo. Esses porcos poderiam vir
a ser uma fonte de rgos, para transplantes temporrios em seres humanos, eliminando o perigo da
rejeio aguda. Porm, no se evitaria o processo lento de rejeio que seria desencadeado pelas
protenas sunas. Existe outra objeo aos xenotransplantes, que o risco de introduzir retrovrus de
outras espcies em seres humanos, com resultados imprevisveis.
O encapsulado das clulas animais em uma matriz inerte que as isole e, ao mesmo tempo, deixe
passar os nutrientes e produtos celulares, poderia evitar a rejeio. Este procedimento foi utilizado
recentemente em pacientes diabticos, que receberam clulas sunas encapsuladas e passaram a
secretar insulina. E em uma centena de pacientes de cncer, para a secreo de molculas que
aliviassem a dor.
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A ENGENHARIA DE TECIDOS
A engenharia de tecidos, uma rea que visa a substituio de rgos e tecidos, ocupa uma interface
existente entre a biologia celular, a medicina, a bioqumica e a bioengenharia.
O cultivo de pele in vitro utilizado rotineiramente para reparar as leses causadas por
queimaduras. Um pequeno fragmento de pele, isolado do prprio paciente, o bastante para, em trs
semanas, formar uma superfcie 50 vezes maior. Amolda-se a nova pele a uma superfcie
biodegradvel para evitar que rasgue quando aplicada no paciente. O procedimento se adapta ao
tratamento de queimaduras e de leses de difcil cicatrizao.
A biomimtica consegue reparar in vivo o tecido sseo, utilizando como molde um polmero, para
onde migram e se expandem as clulas regenerativas internas. A tecnologia se aplica na reparao de
fraturas e de leses causadas por doena periodontal, assim como a reconstruo da cartilagem das
articulaes.
Recentemente, transplantou-se com sucesso uma traqueia, construda com clulas-tronco do
prprio paciente cultivadas sobre um molde poroso. Talvez seja esse o primeiro passo na construo
in vitro de estruturas tridimensionais anlogas aos rgos.
As estruturas mecnicas com poucos tipos celulares diferentes parecem mais fceis de construir
que rgos complexos, como um rim ou um pulmo. Uma tcnica promissora contempla a eliminao
das clulas animais at deixar uma estrutura inerte que seria repovoada com clulas-tronco. Essa
estrutura tambm poderia ser obtida por impresso em 3D.
Do ponto de vista experimental, um dos avanos mais importantes o crescimento in vitro de
organoides a partir de clulas-tronco. Pode-se, por exemplo, transformar uma clula da pele em iPSC
(do ingls, induced pluripotent stem cells), diferenci-la em neurnio e cultivar uma estrutura anloga
a um crebro, comparvel ao de um feto com um trimestre de desenvolvimento.
AS TERAPIAS CELULARES
As clulas-tronco multipotentes so as responsveis pelo crescimento e a reparao dos tecidos.
Presentes em tecidos adultos, conservam a capacidade de se diferenciar em vrios tipos celulares, em
resposta a estmulos adequados.
As clulas-tronco hematopoiticas encontram-se em frequncias baixssimas na medula ssea
(1:10.000 a 1:15.000) e no sangue perifrico (1:100.000). Embora no apresentem caractersticas
morfolgicas que as distingam das outras clulas, a presena de marcadores moleculares especficos
na membrana permite separ-las e introduzi-las mais tarde na mesma pessoa ou em outra que seja
compatvel. O procedimento possibilita a regenerao dos elementos sanguneos no tratamento de
leucemias e de linfomas, de doenas hereditrias hematolgicas e na recuperao dos pacientes que
receberam quimioterapia.
Numerosos bancos de sangue, pblicos e privados, oferecem um servio de armazenamento de
sangue de cordo umbilical que asseguraria a recuperao de clulas-tronco hematopoiticas, em caso
de necessidade. Como a probabilidade de uma pessoa vir a precisar de suas prprias clulas
baixssima (1/100.000), a existncia de grandes bancos pblicos representa a garantia de encontrar
doadores compatveis. At o momento, o nico produto teraputico aprovado para o tratamento de
doenas do sistema hematopoitico o Hemacord, do New York Blood Center.
A presena de clulas multipotentes em tecidos e rgos explica o sucesso alcanado em outros
tratamentos. A capacidade regenerativa das clulas-tronco adultas permite a cicatrizao de
queimaduras, a substituio de clulas da crnea, a regenerao de osso e cartilagem, o tratamento
da artrite e a reparao de fraturas.
266
Clula
saudvel
Transferncia nuclear
Ovcito
Fuso
celular
Embrio
Ovcito
anucleado
Infuso
Clulas-tronco
diferenciadas
Clulas-tronco
recuperadas
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Embora o processo possa levar mais de 50 anos, as mutaes herdadas (predisposio) possibilitaro
um desenvolvimento prematuro do cncer (Figura 20.2).
AS TERAPIAS BIOLGICAS
As terapias biolgicas so complementares aos tratamentos clssicos do cncer, que continuam sendo
a cirurgia, a quimioterapia e a radioterapia. Algumas reforam a atividade imunolgica, atravs de
mensageiros qumicos que estabelecem a comunicao entre as clulas do sistema imune (interferon, interleuquina IL-2). Outras so administradas a pacientes que passaram por quimioterapias
ou sofrem de imunodeficincia, para estimular a proliferao das clulas sanguneas (eritropoietina).
A construo de nanodispositivos, como lipossomos e nanopartculas magnticas, permitiria dirigir
os medicamentos at as clulas-alvo. Tambm em fase experimental, outra possibilidade o bloqueio
mediante um inibidor da glutaminase (CB-839, de Calithera Biosciences) da sntese de cido glutmico,
que a clula cancerosa consome em um ritmo muito maior.
OS VIRUS ONCOLTICOS
Outra via complementar para o tratamento do cncer seria o uso de vrus oncolticos, geneticamente
modificados de modo a infectar e destruir as clulas cancerosas. Na construo desses vrus, eliminamse os genes que os tornam patognicos e alteram-se as protenas de superfcie para que reconheam,
exclusivamente, os receptores de membrana da clula cancerosa.
Aprovado pela FDA em 2015, encontra-se prestes a entrar no mercado o T-Vec (Talimogene
laherparepvec, de Amgen), um vrus herpes simplex 1 modificado para o tratamento de melanoma
que expressa o gene produtor de GMCSF (do ingls, granulocyte-macrophage colony-stimulating fator)
para ativar o sistema imune do paciente.
-------------FIGURA 20.2. A transformao de uma clula normal em cancerosa por mutao (cncer de clon).
Clula normal
Clula cancerosa
270
AS VACINAS TERAPUTICAS
As vacinas profilticas so aplicadas em indivduos saudveis, para a preveno de doenas. Dentro
dessa linha, existem vacinas contra alguns dos agentes virais que, sabidamente, esto relacionados
com o desenvolvimento do cncer. Trata-se das vacinas contra o vrus da hepatite B (VHB), associado
ao cncer de fgado, e contra o papilomavrus (VPH), responsvel por 70% dos cnceres de tero
(Gardasil, de Merck; Cevarix, de GlaxoSmithKline). Essas vacinas cumprem uma ao profiltica.
Uma das primeiras terapias complementares do cncer, ainda usada atualmente, a inoculao
com a vacina BCG (bacilo de Calmette e Gurin), para estimular no paciente uma reao imunolgica
de tipo celular, que se estende s clulas cancerosas.
Diferente das vacinas profilticas, as vacinas teraputicas visam o tratamento dos indivduos que j
esto doentes. O seu objetivo estimular diretamente a resposta imune do organismo, para que este
possa eliminar as clulas cancerosas. Um dos principais problemas reside na escolha dos antgenos que
deveriam entrar na composio da vacina, pois se alguns so comuns a vrios tipos de clulas
cancerosas, outros s aparecem em cnceres especficos. A vacina ideal teria que ser eficaz em
qualquer paciente com um determinado tipo de cncer.
-------------FIGURA 20.3. O tratamento com sipuleucel-T (Provenge).
A. Extrao das clulas dendrticas
Leucoferese (3 horas)
Clulas dendrticas
2 a 3 dias
Clulas dendrticas que incorporaram
o antgeno tumoral PAP-GM-CSF
Clulas dendrticas
+ Provenge (PAP-GM-CSF)
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Uma possibilidade seria a elaborao de vacinas de tumores, com clulas cancerosas enfraquecidas ou
mortas. Provenientes do mesmo paciente ou de algum outro, essas clulas expressariam antgenos
associados a um tumor, estimulando a resposta imune.
Outra estratgia seria a aplicao direta de antgenos sintticos, especficos ou associados ao tumor.
Contudo, as vacinas de antgenos conseguem uma resposta imunolgica mais fraca que as vacinas de
vetores (vrus, DNA nu). Um vetor viral modificado poderia infectar exclusivamente as clulas
cancerosas, levando molculas moduladoras da resposta imune, ou enzimas capazes de transformar
uma droga inativa em ativa.
Uma variante de vacina teraputica envolve o estmulo ex vivo das clulas imunes de modo a que
estas reconheam o antgeno tumoral (Figura 20.3). Essa estratgia deu origem primeira vacina
teraputica (sipuleucel-T ou Provenge, de Dendreon) contra o cncer de prstata hormonorefratrio,
autorizada pelo FDA, nos Estados Unidos, em 2010.
O sipuleucel-T uma protena de fuso entre uma enzima especfica das clulas prostticas cancerosas
(PAP, do ingls prostatic alcaline phosphatase) e um modulador da resposta imune (GM-CSF, do ingls
granulocytes and macrophages colony stimulating factor). O tratamento, que deve ser adaptado a
cada paciente, comea com a extrao das clulas apresentadoras do antgeno do doente, segue com
a incorporao in vitro dos antgenos tumorais e encerra-se com a reinfuso das clulas modificadas
no paciente.
O empreendimento, no qual a empresa Dendreon investiu 1 bilho de dlares, no teve os
resultados esperados devido tanto complexidade tecnolgica, como aos custos de um tratamento
personalizado, estimado em 93 mil dlares. Em bancarrota, Dendreon foi comprada por outra
empresa, Valeant. Embora o sipuleuncel no tenha dados os resultados esperados, abriu um caminho
para o tratamento potencial de outras variedades de cncer mediante outras vacinas teraputicas.
AS TERAPIAS GNICAS
TERAPIA SOMTICA E GERMINAL
Um dos objetivos das terapias gnicas a inativao de um gene, inibindo sua expresso ou
interferindo com o produto gnico. Outro, mais complexo, a substituio de um gene inativo por
uma cpia funcional, que se expresse e sintetize uma protena ausente.
As terapias gnicas pretendem modificar, exclusivamente, as clulas somticas de um indivduo,
sem que essa modificao seja transmitida gerao seguinte. Assim como em um transplante
transfere-se um rgo ou um tecido, na terapia somtica se transfere um gene, e o efeito se limita ao
indivduo que o recebe (Figura 20.4).
Do mesmo modo que em relao a qualquer tipo de terapia experimental, as objees giram em
torno da utilizao de uma tecnologia ainda imperfeita, envolvendo riscos e da qual se desconhecem
os efeitos a longo prazo. Contudo, o que suscita mais controvrsia uma eventual transferncia de
genes s clulas germinais, porque as modificaes seriam transmitidas descendncia.
Qualquer tentativa de modificao da linhagem germinal permitiria a eugenia, isto , a seleo
gentica procura de um gentipo ideal. Dentro desta tica, quais os caracteres que seriam
considerados saudveis? E por quem? A histria do sculo XX, com sua sequela de horrores
(esterilizao de deficientes e doentes mentais nos Estados Unidos, persecues na Alemanha nazista
etc.) mostra que devem ser tomados todos os cuidados para impedir a discriminao gentica e a
implantao de uma sociedade arbitrria.
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Lipossomo
Vrus
Pulmo
Msculo
Fgado
Cultivo de clulas
(medula ssea)
Reimplantao
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Uma tragdia esfriou o interesse pelas pesquisas nesta rea. Em 1999, Jesse Gelsinger, um jovem de
18 anos afetado por uma deficincia de OTC (ornitina transcarbamilase), que se apresentara como
voluntrio para um tratamento de terapia gnica na Universidade da Pensilvnia, morreu de uma
reao imunolgica adversa ao vetor utilizado, um adenovrus.
Em 2000, na Frana, a terapia gnica de uma variante de imunodeficincia (SCID-X1) pareceu
alcanar sucesso em nove de dez crianas tratadas. Contudo, outra tragdia aconteceu quando o vetor
viral se inseriu em um lugar no esperado, inativando um gene supressor de tumor. Quatro das
crianas desenvolveram leucemia e uma delas morreu.
Dois anos mais tarde, renovaram-se as esperanas dos pacientes de SCID e seus familiares com o
descobrimento de uma nova tcnica de remoo parcial da medula ssea, que permite o
desenvolvimento de clulas-tronco e sua modificao gentica. Em 2002, Salsabil, uma menina
palestina de dois anos de idade recebeu o tratamento em Israel. A terapia restaurou a atividade da
desaminase de adenosina e Salsabil cresce saudvel.
Uma terapia que envolve a modificao gentica ex vivo de clulas-tronco um tratamento
personalizado complexo. Os empreendimentos para doenas de baixa frequncia entram na categoria
de tratamentos/medicamentos rfos, garantindo incentivos financeiros s empresas farmacuticas.
OS RESULTADOS ALCANADOS
Do mesmo modo que em relao a qualquer tipo de terapia experimental, as objees se centram na
utilizao de uma tecnologia ainda imperfeita, que envolve riscos e da qual se desconhecem os efeitos
a longo prazo. As dificuldades so grandes, porque alm de transferir um gene a uma determinada
clula de certo tecido, o gene deve funcionar adequadamente e de forma duradoura.
Os dois grandes gargalos ainda so a necessidade de vetores seguros e de procedimentos eficientes.
No entanto, algumas tentativas foram exitosas, como na terapia gnica da amaurose congnita de
Leber, uma doena degenerativa da retina que cega as crianas afetadas. A origem uma mutao no
gene RPE65, que metaboliza uma forma de vitamina A e condiciona o bom funcionamento de cones e
bastonetes.
O vetor escolhido o vrus AAV (do ingls, adeno-associated virus), que no estimula uma reao
imune. A terapia comea injetando diretamente na retina o vrus modificado; o gene exgeno penetra
em 15 a 20% das clulas do epitlio pigmentado da retina, na camada nutritiva situada embaixo das
clulas visuais. As crianas que receberam o tratamento recuperaram, em diferentes graus, a
sensibilidade luz.
O olho um rgo mais fcil de atingir e os oculistas esto familiarizados com os procedimentos,
por isso no de estranhar que os primeiros tratamentos disponveis visem doenas ligadas viso,
como o LentiVector para a degenerao macular, e outros para a doena de Stargardt, a sndrome de
Usher e a rejeio ao transplante de crnea.
Em outras reas, muitos dos numerosos estudos em vias de realizao fracassam nas fases I e II dos
testes clnicos. No entanto, aguardam-se resultados positivos em relao a sndromes genticas
(hemofilia, talassemia, Huntington, Duchenne, fibrose cstica, SCID) e infeces virais (HIV/AIDS), alm
de avanos nos estudos sobre doenas cardiovasculares, neurolgicas e oncolgicas.
O progresso das terapias gnicas levanta tambm algumas inquietudes em relao ao esporte. Em
1998, uma equipe inteira de ciclistas foi eliminada do Tour de France devido ao uso indevido da
eritropoietina, que aumenta o nmero de hemcias. O incidente determinou a criao da World AntiDoping Agency.
No momento, existe um produto comercial disponvel no mercado, desenvolvido e autorizado na
China, em 2004. A Gendicina (Shenzhen SiBiono GeneTech). Trata-se de um adenovrus com o gene
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A. As ribozimas
Ribozima
RNA
RNA clivado
B. O RNA anti-sense
Sntese de protenas
DNA
Transcrio
Transcrio
mRNA
mRNA
mRNA
Traduo
mRNA
RNA anti-sense
No h traduo
C. O RNA interferente
mRNA
dsRNA
(RNA de dois filamentos)
Complexo enzimtico
Clivagem do mRNA
Fragmentos de RNA
Exterior
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Membrana
celular
Citoplasma
O RNA INTERFERENTE
O fundamento da tecnologia do RNA interferente (iRNA) a introduo, na clula, de uma sequncia
de RNA complementar a aquela que se deseja silenciar; a molcula de RNA formada, com dois
filamentos, ser destruda pela maquinaria celular.
Essa tecnologia constitui uma ferramenta de laboratrio poderosa para entender a funo dos
genes e a regulao da expresso gnica. As pesquisas laboratoriais tm dado informaes
valiosssimas sobre genmica funcional. Elas abriram novas perspectivas no tratamento de infeces
virais e esclareceram diversos aspectos de vrias doenas genticas e neurolgicas. Em relao ao
cncer, elas permitiram a inativao in vitro de molculas associadas patologia e progresso da
doena humana.
Antes de superar a fase experimental e chegar clnica mdica, alguns problemas tero que ser
resolvidos, como a maneira de introduzir o cido nucleico na clula e controlar seu raio de ao, para
que a interferncia seja restringida molcula-alvo. Apesar do sucesso alcanado nos estudos in vitro,
a tecnologia do iRNA ainda precisa melhorar suas qualidades de eficincia, segurana e confiabilidade.
Considera-se que os tecidos que poderiam ser mais facilmente tratados seriam o olho, a pele, as
membranas mucosas e os tumores locais. Ainda em fase clnica, os testes mais avanados
correspondem ao tratamento da degenerao macular e da infeco pelo vrus respiratrio sincicial.
OS miRNAs
Diferente dos RNA antisense e do iRNA, que so sintetizados no laboratrio e aplicados no paciente
para diminuir ou impedir a formao de uma protena associada doena, os microRNAs so um tipo
de RNA de duplo filamento, sintetizado pela prpria clula para regular a expresso gnica. Em muitas
doenas, o paciente sintetiza muito ou pouco miRNA. Alguns produtos encontram-se nas fases iniciais
dos testes clnicos.
A EDIO GNICA
Baseada no fenmeno natural de quebra e reparao do DNA, a tecnologia de edio gnica utiliza o
sistema CRISPR (do ingls, clustered regularly interspaced short palindromic repeats), associado ao
complexo enzimtico Cas, para cortar qualquer sequncia de DNA no lugar desejado e gerar mutaes
de ponto, delees ou inseres.
As primeiras tentativas planejam a modificao in vitro de clulas de sangue perifrico ou medula
e sua reimplantao no paciente (Intellia Therapeutics, CRISPR Therapeutics). Outras aplicaes
contemplam o combate hepatite C e s contaminaes por fungos. Ainda em fase experimental, a
transferncia de CRISPR/CAS 9 com um vrus AAV, para impedir a expresso de 3 genes no crebro de
camundongos (Editas Medicine).
Em 2015, pesquisadores chineses anunciaram ter aplicado a tecnologia CRISPR/Cas9 para modificar
geneticamente embries no viveis. No Reino Unido, um grupo de pesquisadores aguarda a
autorizao das autoridades para tentar a transferncia de genes a embries supranumerrios das
clnicas de fertilizao assistida. Esses embries seriam posteriormente descartados. O tema
controverso, porque possibilita o design de bebs e abre a porta para a eugenia, afetando a evoluo
das futuras geraes de maneira imprevisvel.
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C A P T U L O 21
CONSIDERAES FINAIS
A biotecnologia uma rea baseada no conhecimento, com uma plataforma tecnolgica que gera
mltiplas aplicaes em campos muito diversos. Nos captulos anteriores revisamos seus fundamentos
e seu impacto na sociedade, destacando alguns exemplos de empreendimentos latino-americanos
bem-sucedidos: o desenvolvimento do setor agropecurio e da indstria de medicamentos da
Argentina, a plataforma genmica e a produo de vacinas no Brasil, o alcance da biominerao no
Chile, o sucesso da experincia de Cuba etc.
Apesar das dificuldades econmicas e polticas, essas experincias foram possveis porque se
cumpriu a condio fundamental de contar com instituies competentes, uma massa crtica de
pesquisadores e pessoal tcnico treinado. Em alguns casos, estas existiam previamente, em outros,
elas foram criadas.
O avano tecnolgico irreversvel. Em todos os seus nveis, a educao tem um papel fundamental
na formao dos quadros profissionais e na difuso dos conhecimentos bsicos indispensveis, que
permitiro avaliar adequadamente os benefcios dessa tecnologia e estabelecer as normas para sua
utilizao.
As previses futuras dependem das regulamentaes existentes e do projeto poltico e social de
cada pas. No entanto, no se pode descartar a influncia das circunstncias que nos rodeiam:
mudanas climticas, necessidade de aumentar a produo de alimentos, conflitos blicos, migraes,
doenas emergentes etc. Tambm so determinantes os aspectos culturais e a influncia da percepo
pblica.
Vrias so as incgnitas que nos cercam:
o Como estimular o interesse das novas geraes pelo conhecimento cientfico e tecnolgico?
o Como impedir o aumento do distanciamento cientfico e tecnolgico entre os pases desenvolvidos
e os pases em desenvolvimento?
o Como a privatizao da pesquisa cientfica e tecnolgica ir alterar a transparncia do processo de
aquisio e divulgao do conhecimento?
o Como passar da pesquisa cientfica ao desenvolvimento tecnolgico de um produto ou de um
servio?
o Como incubar e agrupar as empresas que esto dando os seus primeiros passos?
CONSIDERAES FINAIS
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BIBLIOGRAFIA
CAPTULO 1
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Maria Antonia Malajovich biloga, com Licenciatura em Cincias Biolgicas pela Universidade de Buenos Aires,
mestrado e doutorado em Gentica pela UFRJ (Brasil). Foi bolsista da CAPES e
CNPq (Brasil), do Ministrio das Relaes Exteriores da Frana, da World ORT e
da Universidade das Naes Unidas (UNU-BIOLAC). Exerceu a docncia na
Universidade do Estado do Rio de Janeiro (UERJ) e na Universidade ORT
Uruguay, onde professora visitante.
Entre 1990 e 2015, desempenhou as funes de Professora e Coordenadora de
Cincias e de Biotecnologia no Instituto de Tecnologia ORT do Rio de Janeiro. Ao
longo de mais de vinte e cinco anos dedicados ao ensino cientfico e tecnolgico,
ministrou cursos de Biotecnologia em vrios pases latino-americanos
(Argentina, Brasil, Peru, Uruguai e Venezuela).
Atua na rea de Educao Cientfica e Tecnolgica, com nfase especial em Biotecnologia, sendo autora do
livro Biotecnologia publicado no Brasil (Axcell Books do Brasil, 2004) e na Argentina (Universidad de Quilmes
Editorial, 2006, 2012), de vrios artigos e manuais de atividades prticas, do site Biotecnologia: Ensino e Divulgao e
de sua verso em espanhol.
Em 2008, recebeu o prmio Beatrice Wand-Polak, outorgado por World ORT aos Professores que se destacam no
desenvolvimento de novos programas, materiais e tecnologias educacionais. Em 2011, foi homenageada pelo Dia
do Bilogo, na Assembleia Legislativa do Rio de Janeiro, em reconhecimento sua dedicao em defesa da
Biodiversidade e do Meio Ambiente. Integra a direo cientfica da Associao Nacional de Biossegurana (ANBIO).
membro da Comisso Tcnica de Biotecnologia do Conselho Federal de Biologia (CFBio). Atualmente Diretora
Cientfica na empresa ACTE- Treinamento e Desenvolvimento.