PRACTICA DE LABORATORIO N°1: Enfoque de láminas coloreadas.

OBJETIVOS

- Utilizar el Microscopio como instrumento óptico para visualizar en preparaciones

estructuras de diferentes grados de complejidad biológica que, por su tamaño, no son
observables a simple vista.

- Identificar el microscopio de luz, definir sus partes y especificar la función que cumple
cada una.

- Enfocar una preparación “en fresco” con los objetivos de vista panoramica (4x),
pequeño aumento (10X) mediano aumento (40x) y gran aumento (100x)

- Verificar y calcular la ampliación de un objeto de dimensión dado, de acuerdo al

objetivo y ocular usados.

MATERIALES

- Microscopio óptico

- Aceite de inmersión

- Solución limpiadora de lentes (Etanol)

- Láminas de letras coloreadas

PROCEDIMIENTO:

CONOCIMIENTO DEL MICROSCOPIO

- Ubicar en su microscopio cada una de las partes

- Determinar la función de cada una de estas partes.

MANEJO DEL MICROSCOPIO

Enfoque 10X:

- Colocar sobre un porta objetos una lámina de letra coloreada.

- Conectar el microscopio.

- Prender la fuente de luz.

- Revisar que las siguientes partes del microscopio estén en posición:

- La platina en su tope inferior.

- Objetivo 10X abajo.

- El condensador en su tope inferior.

- Observar que el campo del microscopio se encuentre uniformemente iluminado.

- Colocar la lámina en el porta objeto.

- Sujetar la lámina con la palanca del carro de transporte.

- Mirar la platina por el lado y mover el botón de ajuste, subir, hasta llegar al tope.

- Mirar ahora por el ocular y bajar suavemente la platina hasta lograr captar la imagen del
objeto en observación.

- Hacer el ajuste de las lentes oculares.

- Ajustar la nitidez de la imagen moviendo lentamente el tornillo micrométrico de ajuste.

- Dibujar los hallazgos

Enfoque 40X:

- Señalar con una flecha en el esquema que acaba de realizar, la célula, o la estructura
que desea estudiar con el objetivo 40X

- Centrar sobre la parte iluminada de la platina la célula o estructura señalada.

- en el paso de 10x a 40x es muy importante pues de no quedar centrado podría salirse
del campo microscópico ya que al cambiar el objetivo el campo queda reducido en la
misma proporción.

- Sin mover la posición de la platina, girar el revólver hasta colocar el objetivo 40X en
posición.

- Abrir un poco el diafragma

- Subir a la mitad el condensador

- La imagen aparecerá en el microscopio con aspecto borroso.

- Ajustar la nitidez de la imagen moviendo lentamente el tornillo micrométrico de ajuste.

- Dibujar los hallazgos

Enfoque 100X.

- La platina en su tope inferior

- El carro de transporte centrado

- El condensador en su tope inferior

- El diagrama casi cerrado

- Observar que el campo del microscopio se encuentre uniformemente iluminado.

- Colocar la lámina coloreada sobre la platina

- Por la parte posterior dejar caer sobre la preparación una gota de aceite de inmersión,
teniendo el cuidado de no tocar la lámina.

- Sin mover la posición de la platina, girar el revólver hasta dejar el objetivo 100X en su
tope

- Bajar el objetivo de 100X hasta que quede en contacto con el aceite.

- Bajar la lámina y limpiarla suavemente con etanol.

- Devolver limpio la muestra y limpiar el revólver en 100x del microscopio.

DATO: El aceite de inmersión tiene el mismo índice de refracción del vidrio (1.5) e impide
la refracción de los rayos de luz que salen de la preparación antes de entrar al objetivo. Al
no utilizar el aceite y dejar la capa de aire que tiene un índice de refracción 1, parte de los
rayos luminosos no penetran al objetivo que por su alta curvatura tiene un diámetro muy
pequeño y la imagen aparece borrosa.
PRACTICA DE LABORATORIO N°2: Intestino de gato e hígado de mamífero.

OBJETIVOS:

• Comprender el manejo del microscopio óptico

• Conocer y aprender a observar una muestra cualquiera en el microscopio óptico

• Llevar a la práctica las diferentes precauciones dadas

• Aprender sobre las tinciones

MATERIALES:

• Se utiliza un microscopio óptico para poder observar cada una de los objetivos de
4x a 100x. Cuando se llega al 100x se debe utilizar el aceite de inmersión.

Poner la muestra de intestino de gato y la muestra de hígado de mamífero y

observar cada una de sus partes.

Una vez terminado el procedimiento limpiar el microscopio con etanol.

PROCEDIMIENTO: El mismo utilizado en el practico n°1 (ver procedimiento pag )

RESULTADOS:

Descripción de la observación:

Muestra 1:

• Objetivo: observación intestino de gato.

• Material: intestino de gato teñido.

• Método para observar: células por tinción

• Tipo de tinción: Hematoxilina – eosina.

• Aumento: 4x, 10x, 40x y 100x

• Características: El intestino absorbe nutrientes, mientras mayor sea la superficie

mayor es la cantidad de sustancias absorbidas.
Observaciones:
4x: la tonalidad de la célula que se puede observar es de color morado con líneas blancas
aun no se puede visualizar bien cada una de sus partes.

10x: Las líneas se ven con puntos rosados y, en el interior, el tejido se ve morado y blanco
con pequeños puntos que están incrustadas en ella, pudiendo observar las micro
vellosidades intestinales.
40x: Las partículas se aprecian más grande y ahora se observan unas manchas que no
se habían visto, que es el núcleo Se distingue lo mismo que en 10x solo más detallado
como la membrana y el núcleo. Se observan válvulas corniventes.
100x: Se pueden observar las células mucosas del intestino y detalladamente la
membrana celular y su núcleo. El núcleo ahora se puede apreciar mejor, los poros
nucleares con mayor nitidez, rodeado de una estructura rosada siendo la membrana.
Discución:
Muestra 2:

• Objetivo: observación hígado de mamífero.

• Material: Hígado de mamífero teñido.

• Método para observar: células por tinción

• Tipo de tinción: Hematoxilina – eosina.

• Aumento: 4x, 10x, 40x y 100x

• Características: El hígado
Observaciones:
4x: Solo se puede apreciar una especie de mancha rosada con puntos blancos en su
interior.
10x: En el interior se observan ramificaciones blancas
40x: En el límite celular, las partículas se aprecian más grande y ahora se ven unas
manchas que no se habían visto, que podría ser el núcleo. También en el límite celular
ahora se puede apreciar alrededor de ellos unos filamentos y otras partículas pequeñas
100x:

DESARROLLO DE PREGUNTAS

1.- ¿Qué diferencia existe en la preparación de una muestra para microscopia

electrónica y óptica?

Los pasos a seguir son muy parecidos pero existe diferencias para la fijación, en el
microscopio óptico es más habitual usar formaldehído mientras que para la microscopia
electrónica se usa glutaraldehido, otra diferencia podemos notarla en las tinciones que
son las responsables de identificar algunas unidades estructurales de la célula, en las
ópticas se usa tinciones que colorean artificialmente los componentes celulares y en la
electrónica se emplean átomo de metales pesados.

2.- ¿Qué tipos de tinción existen en microscopia óptica? Describa las distintas
funciones y sus aplicaciones.

• Tinción de Gram: se distinguen las bacterias

• Tinción de giemsa: se aplica en frotis de sangre

• Verde malaquita: tinción de esporas

• Verde malaquita más orseina: células vegetales

• Hematoxilina eocina: principalmente tejidos (núcleo y citoplasma)

• Tinción de PAS revela glicoproteina neutras, musina y el glucogeno

• Entre otras.

3.- ¿Qué métodos existen para poder marcar una muestra en microscopia
electrónica?

Para marcar las muestras de un microscopio electrónico no se emplean colorantes como

en la óptica, si no que se utilizan átomos de metales pesados como el Uranio y el Plomo
los que actúan como contraste proporcionado por el osmio.

4.- ¿Qué diferencia existe entre Micrótomo y ultramicrótomo?

- Ambos son tipos de instrumentos para cortar muestras, sus nombres depende del
espesor del corte. Micrótomo: instrumento para cortar partes finas de tejidos de los
ejemplares (espesor: algunas micras)
Ultramicrótomo: micrótomo modificado para cortar muestras ultra finas para ser
examinadas en el microscopio electrónico. Su punta o filo son de cristal o diamante
(espesor 20 y 80 nanómetros)

5.- ¿Qué función tiene el aceite de cedro?

- Es un sustitutivo del xilol, como agente clarificante, en la preparación de especímenes

para el examen microscópico.

6.- ¿Por qué es necesario que las muestras sean teñidas? ¿Cuál es su objetivo?

- Como la célula está compuesta principalmente de agua y ésta es transparente es

prácticamente improbable que se pueda distinguir con éxito su estructura, es por eso que
se utilizan tintas para su tinción, estas tintas tienen la característica de ser específicas
para algunas estructuras.

Según lo investigado:

A.- ¿Qué microscopio es el más adecuado para estudiar células in vivo?

Microscopio de contraste de fase y el mas especifico para este tipo de células es el

microscopio de nomarski.

B.- ¿Qué método de tinción marca a los grupos glucosaminoglicanos?

El método llamado Pas (ácido periódico mas reactivo de schiff) el reactivo de schiff se
prepara en base de fuccina básica, que se trata con metadisulfito de sodio dando un leuco
derivado incoloro al que llamamos reactivo schiff.

Primero se pone un poco de acido periódico, al haber glucosaminomicano se libera CHO

y este grupo amino se le pone reactivo de schiff quedando la muestra de un color rojo o
púrpura.

C.- ¿Que rol cumplen los alcoholes, la parafina y algunos metales pesados en la
metodología de la preparación de una muestra? ¿Para que tipo de microscopio es
cada una de ellas?

Los alcoholes tienen un rol de fijación y se usan en el microscopio óptico.

La parafina se usa para que en la muestra se forme un bloque un tanto sólido para que
sea más fácil la manipulación y posterior corte de la muestra, y estas muestras se usan en
el microscopio electrónico.

Los metales pesados se utilizan para contrastar el tejido en estudio y se usan en el

microscopio electrónico.
INTRODUCCIÓN:

La palabra microscopio viene del griego mikro, pequeño y skop, visión. Los
microscopios son instrumentos que nos permiten observar objetos pequeñísimos que
no se pueden ver a simple vista ni con la ayuda de una lupa. La palabra microscopio
fue utilizada por primera vez por los componentes de la "Academia de Lincei" una
sociedad científica a la que pertenecía Galileo y que publicaron un trabajo sobre la
observación microscópica del aspecto de una abeja.