LABORATORIOS DE BIOQUMICA

INFORMES ESCRITOS
Practicas 1 y 2: ESPECTRO DE ABSORCION Y CURVA DE CALIBRACION MEDIANTE
FOTOCOLORIMETRA; CUANTIFICACION DE PROTEINAS DEL SUERO SANGUINEO.
Nicols Antonio Escobar Daz, Isabela Sofa Correa Cardona.
Ingeniera Qumica (Sexto Semestre).
naescobard@unal.edu.co, iscorreac@unal.edu.co
RESUMEN
El presente documento muestra de manera concisa las practicas 1 y 2 desarrolladas en el laboratorio,
en este se llevaron a cabo dos procedimientos esencialmente: en el primero, obtuvimos un
acercamiento a la calibracin y espectros de absorcin, desarrollados mediante la tcnica de
fotocolorimetra, utilizando la albumina como muestra problema y a partir de los datos obtenidos, se
pudo hallar de una forma indirecta concentraciones de la misma utilizando la ley de Beer. En la
segunda, obtuvimos una aplicacin directa a la tcnica vista en la practica anterior, esta vez se
utilizaron protenas presentes en el suero sanguneo para su posterior cuantificacin
Fotocolorimetra, Protenas, Absorbancia, Ley de Beer, Cuantificacin.
INTRODUCCIN
La fotocolorimetra es una tcnica que consiste en medir
la intensidad de luz absorbida (A) por una muestra que
presenta color y se compone de una o varios
componentes, esto sirve para hallar concentraciones de
diferentes muestras, con el fin de obtener informacin de
tipo cintico-qumica de procesos biolgicos, muy
importantes para la comprensin de conceptos
fundamentales.
Cada sustancia coloreada absorber luz a cierta longitud
de onda, y la intensidad de la luz vara de acuerdo a la
concentracin de la sustancia en la solucin, el color que
se observa, como luz invisible, es el producto de la luz
transmitida. Las transmisiones electrnicas que se
producen en la zona de radiacin visible y de radiacin
ultravioleta se deben a la absorcin de radiacin o de luz
por determinados grupos pticos, enlaces y grupos
funcionales en el interior de la molcula, la longitud de
onda de la absorcin y la intensidad dependern de
muchos factores.
La segunda sesin buscaba introducir la extraccin y
purificacin de protenas, puntualmente en suero
sanguneo,
adems
de
la
aplicacin
de
espectrofotometra, y a la generacin de curvas de
calibracin
para determinacin de concentraciones
desconocidas.

Finalmente fue posible aplicar los conceptos

fundamentales para la extraccin y cuantificacin de
protenas, hacer uso del espectrofotmetro, determinar y
construir curvas de calibracin para posteriormente
determinar concentraciones de muestras que contenan
protenas, para su determinacin cuantitativa.
METODOLOGA
-Reactivos y equipos:
Para la segunda prctica, se utiliz una solucin de NaCl
hidratada al 0.9%, solucin saturada de (NH4)2SO4 (750
g en 1 L de agua), la solucin patrn de albmina (0.45 g
en 100 mL de solucin salina), una solucin de Biuret, y
las muestras de suero sanguneo, la centrfuga del
laboratorio y el fotocolormetro, entre otros elementos
tales como tubos de ensayo, probetas, pipetas, goteros,
etc.
-Procedimiento:
Para la segunda prctica, se vierte suero sanguneo
(1mL) y agua destilada (4mL) junto con una solucin
saturada de amonio (5mL) hasta obtener precipitacin,
luego de un reposo 15 minutos, se lleva a la centrifuga a
2500rpm durante 15 minutos y al precipitado del proceso
se le retira el lquido sobrenadante y se disuelve con
NaCl(5mL), obteniendo as una solucin de globulinas.
Se preparan la solucin de protenas totales, mezclando
en una probeta 1 mL de suero sanguineo con NaCl para
un volumen total de 20 mL.

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Se rotulan 4 tubos de ensayo con diferentes
combinaciones NaCl, albumina, globulinas, y suero,
todas disueltas en 4mL de reactivo de Biuret.
Posteriormente, se mide la absorbancia de las soluciones
junto con una solucin patrn de NaCl y registramos los
datos obtenidos.
Se obtiene la curva de calibracin, al repetir el
procedimiento, para 7 tubos de ensayo con diferentes
concentraciones de albumina, NaCl y reactivo de Biuret,
realizando el barrido a la longitud de onda de mxima
absorbancia y obteniendo as la absorbancia de cada
muestra, para posteriormente obtener la concentracin
de cada una mediante la ley de Beer.

Tabla 1.El ttulo va con letra arial cursiva 9, centrado y arriba.

Si incluye tablas no sombrear.

Ejemplo

Resultado
ejemplo 1

Resultado
ejemplo 2

Fig. 2. Las figuras llevan una descripcin corta al pie, centrada

con tamao 9, letra arial cursiva.

ANLISIS DE RESULTADOS
Fig. 1. Las figuras llevan una descripcin corta al pie, centrada
con tamao 9, letra arial cursiva.

RESULTADOS
Aqu se consigna las medidas, observaciones y dems
resultados obtenidos durante la prctica. Utilicen en lo
posible tablas (Tabla 1.), grficos (Fig 2.), o figuras para
representar sus resultados de una manera clara, vistosa
y fcil de apreciar por el lector. Recomendable convertir
los grficos en figuras e incluirlos dentro de los cuadros
sugeridos para figuras.

Realizar aqu el anlisis detallado de cada uno de los

resultados obtenidos, de forma ordenada y concisa.
Recuerden que los resultados son solo nmeros y datos,
y que lo relevante del trabajo es lo que usted argumenta
acerca de lo obtenido, tanto bueno como malo; y tambin
como se justifican las causas de error.
CONCLUSIONES
Generalizar acerca de lo obtenido con la prctica. Las
conclusiones deben ser precisas y coherentes con los
objetivos trazados y los resultados obtenidos.
Si lo cree competente, en un prrafo aparte unas
recomendaciones objetivas, respecto a la metodologa
sugerida en la gua.
BIBLIOGRAFA

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Las citas se escribirn en letra normal Arial tamao 9.
Cuatro citas bibliogrficas es un nmero mximo
adecuado para un trabajo de esta extensin. Las
referencias en el texto debern ir numeradas, en
parntesis y en orden de aparicin (2). Los ejemplos a
continuacin son para artculo, captulo de libro y
memorias de congreso (3), respectivamente. Nada de
wikipedia, investiguen por favor.
1. Apellido, Inicial del nombre; Apellido, Inicial del nombre;
Apellido, Inicial del nombre (Ao). Ttulo del artculo. Nombre
abreviado de la revista en letra cursiva. Volumen (nmero): pgpg.
2. Apellido, Inicial del nombre; Apellido, Inicial del nombre (Ao).
Ttulo del capitulo. En: ttulo del libro en letra cursiva. Apellido
del Editor e Inicial del nombre. Editorial, Pas de edicin. pgpg.
3. Apellido, Inicial del nombre. (Ao). Ttulo del trabajo. Nombre
del congreso en letra cursiva. Entidad organizadora. Lugar de
realizacin, fecha, pg-pg.

Agradecimiento. De ser necesario, a criterio de los

autores, escribir aqu los agradecimientos a las personas
colaboradoras para la realizacin de la prctica o del
informe de la misma.
Notas:

1.

Las palabras: Introduccin, Metodologa, Resultados y discusin,

Conclusiones, Bibliografa y Agradecimientos van escritas con letra
Arial negrita 10. El resto del texto de cada seccin deber ir escrito
con letra normal Arial en tamao 10.

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