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urens (HYDROPHYLLACEAE)
Presentado por:
El suscrito director y jurados del presente trabajo de grado, una vez revisada la
versin escrita y presenciado la sustentacin oral, decidimos otorgar la nota de:
Con la connotacin:
Asesor: ___________________________________
Nombre: Dr Leovigildo Quijano
Jurado: ___________________________________
Nombre: Oscar Marino Mosquera
AGRADECIMIENTOS
A toda mi familia por su apoyo siempre en los momentos difciles y creyeron en que este
trabajo poda ser posible.
A todos mis amigos del laboratorio 2-6 que siempre con su apoyo hicieron de este trabajo
algo ameno y me brindaron su amistad incondicional.
A mis amigos que siempre me acompaaban desde la distancia, dando un momento de
alegra que sirvi de apoyo para seguir adelante.
Al Dr. Leovigildo Quijano, ya que gracias a l fue posible concluir este trabajo y desde el
inicio hasta su final pude contar con su colaboracin desinteresada, y sus enseanzas
fueron en pro de que saliera lo mejor posible. Adems siempre inculcaba el amor por la
investigacin.
A la Directora Luz Stella porque siempre hacia ms fcil los procesos.
Al Profesor Oscar Marino que estuvo al tanto de la tesis, de su revisin y de tratar de que
las cosas salieran lo mejor posible.
Al todo el personal del instituto que facilitaron los medios para hacer ms rpido y
eficiente los anlisis.
Y a todo aquel que de alguna manera haya colaborado para hacer esto posible.
INDICE
1. RESUMEN
2. ABSTRACT
3. INTRODUCCIN
4. MARCO TERICO
Generalidades
3
3
de Wigandia urens
Antecedentes qumicos
Aspectos cromatogrficos
11
Aspectos espectroscpicos
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5. JUSTIFICACIN
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6. OBJETIVOS
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General
27
Especficos
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7. SECCIN EXPERIMENTAL
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Materiales y equipos
28
Mtodos
29
8. RESULTADOS Y DISCUSIN
30
Aislamiento y Purificacin
30
Identificacin espectroscpica
45
9. CONCLUSIONES
75
10. BIBLIOGRAFIA
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11. ANEXOS
79
LISTA DE TABLAS
Tabla 1.Sinnimos usados para Wigandia urens
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74
LISTA DE FIGURAS
Figura 1. Wigandia urens (Hydrophyllaceae).
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29
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46
46
Figura 32. Correlacin entre el protn del OH con el protn aromtico H-3,
en el espectro NOESY.
47
Figura 33. Efecto NOE entre un protn olefnico H-6 y el metilo C-15
en el ciclodecadieno del wigandol (configuracin cis del doble enlace).
48
Figura 34. Efecto NOE entre el protn olefnico H-7 y el protn del metileno H-8
48
49
Figura 36. Correlaciones 1H-13C (HMBC) a dos y tres enlaces en el wigandol (1)
50
52
53
Figura 39. Efecto NOE entre los protones del metoxilo y el protn
aromtico H-2.
53
54
Figura 41. Efecto NOE entre el protn olefnico H-6 y el metilo C-15 del
ciclodecadieno del flavidulol A (configuracin cis del doble enlace).
54
Figura 42. Efecto NOE entre el protn olefnico H-7 y el protn del metileno H-8. 55
Figura 43. Relaciones 1H - 1H (COSY) del flavidulol A.
56
Figura 44. Relaciones 1H - 13C (HMBC) a dos y tres enlaces en el flavidulol A (2). 57
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70
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73
ABREVIATURAS
Cromatografa en Capa Fina
CCF
Cromatografa en Columna
CC
RMN 1H
RMN 13C
Ultravioleta
UV
Infrarrojo
IR
Constante de acoplamiento
dd
Seal simple
Seal doble
Seal triple
sa
da
ta
CG-EM
Impacto electrnico
IE
Punto de fusin
pf
Mega-Hertz
MHz
Hertz
Hz
ppm
Gramos
Miligramos
mg
Centmetros
cm
Milmetros
mm
LISTA DE ESQUEMAS
Esquema 1. Partes fundamentales de un equipo de Cromatografa de gases (CG)
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INDICE DE ANEXOS
Espectro1. RMN 1H (400MHz, CDCl3) para el wigandol
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RESUMEN
Wigandia urens es un arbusto que pertenece a la familia Hydrophyllaceae la cual se
distribuye en todo el mundo. Crece en el pedregal de San ngel, al interior del campus de
la UNAM. Del extracto hexnico de hojas secas de esta planta se aisl dos compuestos no
conocidos en la especie, el flavidulol A y la geranilhidroquinona. El primero es un
benzociclodecadieno aislado anteriormente de un hongo2, compuesto muy similar al
wigandol, reportado antes de la misma planta1 y asilado nuevamente en este estudio. El
segundo es una hidroquinona prenilada reportada en otros gneros de la misma familia.
Adicional se encontraron 5 compuestos ya aislados en esta especie dos de ellos derivados
de la geranilhidroquinona.
PALABRAS CLAVES: Flavidulol A, wigandol, geranilhidroquinona, Wigandia urens,
RMN
ABSTRACT
Wigandia urens is a urban shrub, it belongs to family Hidrophyllaceae, located around the
all world. It grows in Pedregal de San Angel, inside to UNAM campus. From the hexanic
extract of the dried leaves, two compounds dont know in the plant were isolated, flavidulol
A and geranylhydroquinone. First is a previously isolated benzociclodecadiene from a
fungus 8, very similar to wigandol, reported from the same plant 1 previously and isolated
again in this study. The second compound is a prenylated hydroquinone reported in other
genera of the same family. Additional 5 compounds were isolated in this species and two of
them were geranylhydroquinone derivates.
KEYWORDS: Flavidulol A, wigandol, geranylhydroquinone, Wigandia urens, NMR.
INTRODUCCIN
La interaccin del hombre con los recursos naturales en su bsqueda de conocer lo que lo
rodea y de obtener los medios para su supervivencia, se ve a travs de la historia reflejada
en muchas actividades como la minera, la agricultura, la medicina tradicional, entre otras.
La obtencin de metabolitos secundarios de plantas es uno de los temas de mayor inters en
la actualidad con el fin de buscar y conocer de donde provienen, los diferentes mecanismos
de su produccin (biosntesis) y la utilizacin de estos en la planta para los diferentes
procesos que permitan su crecimiento (alimentacin, mecanismos de defensa, interaccin
con el medio, entre otros), la utilizacin de estos en reemplazo de productos sintticos;
mostrando siempre un desarrollo del conocimiento y ayudando a entender mejor otras
ramas de la ciencia como la qumica, la biologa y la medicina
Algunas de las tcnicas ms utilizadas para el aislamiento y purificacin de estos
metabolitos son las tcnicas cromatogrficas, las cuales comenzaron con la separacin de
compuestos de plantas con cromatografa en columna que permita visualizar la
purificacin por diferentes bandas coloreadas. Con esto se increment la utilizacin de
estas tcnicas en diferentes ramas de la qumica y de otras ciencias a partir de la dcada de
los 50 hasta la fecha50.
La Resonancia magntica nuclear has sido tambin una de las tcnicas espectroscpicas de
mayor impacto en la actualidad en la determinacin de compuestos, permitiendo grandes
avances en diferentes reas de la qumica como la inorgnica, sntesis y productos
naturales. Es una tcnica que permite entender la estructura de un compuesto puro o de
mezclas a partir de las propiedades de sus ncleos, a travs de diferentes experimentos en
una y dos dimensiones, convirtindose en una herramienta fundamental de anlisis en
investigacin.
Con el aislamiento y caracterizacin de estos metabolitos se contribuye de buena manera al
entendimiento de estos procesos y tambin de forma significativa al conocimiento qumico
y taxonmico de una familia de plantas y de manera puntual en una especie como Wigandia
urens.
MARCO TERICO
GENERALIDADES
DISTRIBUCIN, CLASIFICACIN TAXONMICA Y DESCRIPCIN DE
WIGANDIA URENS
En Mxico existe una amplia diversidad biolgica en especies de plantas, entre las que se
encuentran la familia Hydrophyllaceae que se compone de ms de 20 gneros distribuidos
en los 5 continentes.
Esta familia est constituida principalmente por especies herbceas, arbustos y rboles
pequeos.
En la Republica Mexicana, esta se encuentra representada por 3 de ellos: Phacelia, Nama y
Wigandia.
Especies del gnero Wigandia es comn encontrarlas en zonas perturbadas, mientras que
las especies de Phacelia y Nama se encuentran frecuentemente en zonas cerca de algn
cuerpo de agua en el bosque tropical caducifolio y en pastizales.46
El gnero Wigandia se distribuye desde Norteamrica hasta Argentina y en algunos lugares
de Asia. Algunos autores plantean que en la repblica mexicana el gnero est representado
por una sola especie Wigandia urens 46, 48, mientras otros plantean que se trata de dos taxas
diferentes Wigandia urens y Wigandia caracasana, las cuales se diferencian en la presencia
o ausencia de setas (tricomas) 45, 47. Sin embargo, varias especies han sido descritas por
diferentes autores.
En Colombia segn el herbario nacional se tiene clasificada como dos especies Wigandia
urens y Wigandia caracasana. Se han encontrado en los departamentos de Cundinamarca,
Valle del Cauca, Tolima, Santander, Antioquia y Nario.
Nombre
Hidrolea urens
Autor
Hiplito Ruiz y
Jos Pavn
Karl Kunth
Wigandia caracasana
W. macrophylla
W. kunthii
W. scorpioides
J.D. Choisy
W. peruviana
William Miller
August Brand
W. caracasana var.
macrophylla
W. kunthii var. intermedia
A. Brand
W. caracasana var.
calycina
W. kunthii var. viscosa
A. Brand
James Mcbride
Dorothy Gibson
A. Brand
A. Brand
Referencia
Flora Peruviana 3: 2122, t. 243.
1802
Nova Genera et Species Plantarum
(quarto ed.) 3: 128. 1818.
Linnaea 6(2): 382383. 1831
Mmoires de la Socit de Physique
et d'Histoire Naturelle de Genve 6:
116. 1833
Annales des Sciences Naturelles
(Paris) 30: 249. 1833
Prodromus Systematis Naturalis
Regni Vegetabilis 10: 184. 1846
Revisio Generum Plantarum 2: 434.
1891
Cyclopedia of American
Horticulture. 1900-1902
Das Pflanzenreich IV. 251(Heft 59):
137. 1913.
Das Pflanzenreich 59[IV, 251]: 136.
1913
Das Pflanzenreich IV. 251(Heft 59):
137. 1913
Das Pflanzenreich IV. 251(Heft 59):
136. 1913
Das Pflanzenreich IV. 251(Heft 59):
137. 1913
Contributions from the Gray
Herbarium of Harvard University
49: 42. 1917
Fieldiana, Botany 31(15): 353354.
1968
Divisin taxonmica:
REINO: Plantae
PHYLUM: Magnoliophyta
CLASE: Magnoliopsida
ORDEN: Solanales
FAMILIA: Hydrophyllaceae
GNERO: Wigandia
ESPECIE: urens
Wigandia urens es una planta erecta que puede alcanzar hasta de 6 m de altura llegando a
ser arborescente, con tallos hispidos a cerdosos, muchas veces con tricomas gladulares y
urticantes46. Sus hojas alternas que pueden alcanzar hasta 50 cm de largo por 37 cm de
ancho con lminas ovaladas, pice por lo general agudo o en ocasiones redondeado u
obtuso. Las flores dispuestas en cimas escorpioideas, con 5 spalos, estambres con
filamentos, estigmas clavados y corolas externas de color moradas, violceas, azules o
lila-blanquecinas 44, 45, 46 ,47.
Esta especie se ha encontrado en altitudes entre los 150 y 2200 msnm, florece y produce
frutos en el periodo comprendido entre septiembre y mayo. La densidad de los tricomas
sobre la superficie foliar depende de la cantidad de luz y agua a la que est expuesta y se ha
encontrado que aumenta su densidad en temporada de sequa 43, 46. Estos tricomas son su
mecanismo de defensa contra herbvoros y dependen en la edad de la planta y las hojas44.
OH
OH
farnesilhidroquinona
geranilhidroquinona
OH
OH
O
MeO
geranilbenzoquinona
2,3-dimetoxi-6geranilbenzoquinona
MeO
O
OH
En 1988 se public el aislamiento de este ltimo compuesto a partir del hongo Lactarius
flavidulus12, dndosele el nombre de flavidulol A, as como otros dos compuestos
estructuralmente relacionados; el producto de la transposicin de Cope, flavidulol B, y un
dmero del flavidulol A, flavidulol C. (Figura 5)
OMe
OMe
OH
OH
Flavidulol A
Flavidulol B
OMe
OMe
OH
OH
Flavidulol C
OMe
OMe
OH
OH
O
O
Cordiacromo A
Globiferina
O
Cordiacromo B
Cordiacromo C
HO
OH
H
Cordiacromeno
HO
CHO
Eleagin
OH
Cordiaquinol C
HO
CHO
Aliodorin
OH
OH
OAc
OH
OAc
10
OMe
OH
cido 3-geranil-4-metoxibenzoico
Geranilhidroquinona
COOH
OH
OH
Farnesilhidroquinona
OH
OH
cido 3-geranil-4-hidroxibenzoico
COOH
ASPECTOS CROMATOGRFICOS
La cromatografa se denomina como un conjunto de tcnicas que permite la separacin de
los componentes de una mezcla que en algunos casos no son separables por otros mtodos.
Se fundamenta en la distribucin de una muestra entre dos fases de acuerdo a su afinidad, la
primera es la fase mvil (inmiscible sobre la fase estacionaria y puede ser gaseosa, lquida o
un fluido supercrtico) y la segunda es la fase estacionaria la cual se soporta sobre un
slido.
La clasificacin de los mtodos cromatogrficos puede darse en dos aspectos:
De acuerdo a la fase mvil usada, en cromatografa de gases, de lquidos y de fluidos
supercrticos.
De acuerdo al contacto entre las dos fases en: Cromatografa en plano (CCF, cromatografa
en papel) y cromatografa en columna (de reparto, Cromatografa de Gases, HPLC,
Cromatografa de exclusin molecular, cromatografa de adsorcin, intercambio inico).
En este documento se utilizar la segunda clasificacin de acuerdo al uso que se le dieron a
estas tcnicas
11
Donde:
12
13
Las fases estacionarias ms empleados en esta tcnica son la slica-gel, celulosa en polvo,
resinas de intercambio inico y sephadex. Esto depender de la naturaleza de los analitos.
El xito de la separacin por columna radica en varios factores, como el empaquetado de la
fase estacionaria, el dimetro y altura de la columna sin embargo el ms importante es la
seleccin de la fase mvil.
Este parmetro es el que permite el equilibrio de cada uno de los analitos en las dos fases de
acuerdo a su afinidad con cada una de ellas. Por lo tanto el escoger una buena fase mvil
dar excelentes resultados en la separacin.
Cuando una cromatografa se hace en fase normal (slica-gel) y si no se conocen los
analitos a separar se comienza utilizando un solvente apolar como es el hexano o ter de
petrleo, y se incrementa su polaridad gradualmente hasta llegar a solventes de alta
polaridad como el metanol, etanol o butanol, pero que no arrastren la fase estacionaria.
En fase reversa ocurre el proceso inverso debido a que la fase estacionaria utilizada es
apolar (C8, C18).Por lo tanto el disolvente utilizado al comenzar la cromatografa es
butanol o metanol hasta llegar a uno de baja polaridad.
Sin embargo hay muchos casos en que se conocen los analitos que se van a separar, por lo
tanto se deben usar mezclas de disolventes con afinidades diferentes que permitan una
buena resolucin en la separacin.
A continuacin se muestra un diagrama que muestra los grupos de disolventes que pueden
ser mezclados para una buena separacin:
Xa: Corresponde con solventes aceptores de protones: ter etlico, ter isoproplico,
diclorometano.
Xd: Solventes donadores de protones: cido actico, formamida, agua.
Xn:Solventes con interacciones dipolo: Nitrobenceno, diclorometano
14
CROMATOGRAFA DE GASES
Es una tcnica cromatogrfica en la que los analitos deben ser introducidos en fase gaseosa,
por lo tanto el anlisis se har sobre mezclas de compuestos voltiles. La elucin se
produce por el flujo de un gas inerte (fase mvil), cuya funcin es la de transportar el
analito a travs de la columna, sin que hay interaccin con esta.
Existen dos tipos de cromatografa de gases: la cromatografa gas-slido y la cromatografa
gas-lquido, esta ltima es la que ms se usa en la actualidad
A continuacin se hace la descripcin de las partes fundamentales del cromatgrafo de
gases:
Fase mvil (gas de arrastre):
El gas de arrastre tiene dos propsitos: Transportar los componentes de la muestra, y crear
una matriz adecuada para el detector. Para la utilizacin de este deben tenerse ciertas
condiciones:
El gas debe ser inerte, tanto con la muestra como con la fase estacionaria.
Debe
ser
de
fcil
acceso
y
estar
puro.
Ser econmico por el alto gasto y adecuado para el detector.
Los ms utilizados son: Helio, Argn, Nitrgeno, Hidrgeno y CO2,
Sistema de inyeccin
Generalmente se emplea una microjeringa con capacidad de varios microlitros, la cual est
sellada por una goma de silicona (septum)
La cantidad de muestra que se inyecta depende del tipo de columna, si es rellena el
volumen a inyectar ser de unos 20 L, y en el caso de las columnas capilares es de 1 a 2
L, aunque en general la cantidad a inyectar se determina al establecer el mtodo con las
condiciones a usarse para un optimo anlisis.
Hay ocasiones que la muestra est muy concentrada por lo tanto se requiere solo tomar
parte de esta y se hace una divisin y tomar una parte que se introduce en la columna, o si
viene diluida no se hace este proceso
Hay dos mtodos de inyeccin de la muestra con divisin (split) o sin divisin (splitless).
En el primero se toma una sola parte de la muestra para evitar la saturacin en el puerto de
inyeccin y la columna.
Fase estacionaria:
En GC se emplean dos tipos de columnas: las empacadas o de relleno y las capilares. En la
actualidad se usan las segundas debido a su mayor rapidez y eficiencia. La longitud de estas
columnas es variable, de 2 a 60 metros, y estn construidas en acero
inoxidable, vidrio, slice fundida o tefln.
Horno:
La temperatura es una variable importante, ya que de ella va a depender el grado de
separacin de los diferentes analitos. Por lo tanto la rampa de temperatura es un factor muy
importante, y en algunas ocasiones se estandariza tras ensayo y error. Adems se
15
Alta sensibilidad: Es necesario que pueda determinar con precisin cundo sale
analito y cuando sale slo el gas portador.
Respuesta lineal al analito con un rango de varios rdenes de magnitud.
Tiempo de respuesta corto, independiente del caudal de salida.
Intervalo de temperatura de trabajo amplio.
Estabilidad y reproducibilidad, es decir, a cantidades iguales de analito debe dar
salidas de seal iguales.
CILINDRO
(GAS DE
ARRASTRE)
HORNO
(COLUMNA)
PUERTO DE
INYECCIN
DETECTOR
PROCESADOR
DE SEALES
ADQUICICIN
DE DATOS
Esquema 1. Partes fundamentales de un equipo de Cromatografa de gases (CG)
16
ASPECTOS ESPECTROSCPICOS
INFRARROJO
Se basa en la absorcin de la radiacin infrarroja por compuestos orgnicos los cuales tras
la absorcin producen movimientos de tensin y flexin en los enlaces que hace ver ciertas
bandas caractersticas de los diferentes grupos funcionales.
Los parmetros a tener en cuenta para su medicin son la absorbancia o transmitancia
versus longitud de onda () dado en nm o su inverso el nmero de onda () dado en cm-1.
El espectro de IR se divide en tres zonas:
(nm)
(cm-1)
IR cercano
700-2500
14300-4000
IR medio
2500-15000
4000-650
IR lejano
15000-100000
650-250
17
ESPECTROMETRA DE MASAS
Es una tcnica analtica que permite determinar la masa molecular de un compuesto con la
fragmentacin de la molcula o con la obtencin de la frmula molecular con la masa
exacta. Es una tcnica muy sensible y es destructiva (la muestra utilizada no se recupera).
Los fragmentos obtenidos son iones positivos que llegan a un analizador en el equipo y
luego pasan al detector. En el equipo debe usarse una bomba de alto vaco que permita
mantener presin ms baja a al atmosfrica ya que los iones pueden interactuar con los
componentes de esta y transformarse.
A continuacin se muestra un diagrama de bloques del funcionamiento del espectrmetro
de masas.
SISTEMA DE
ENTRADA
FUENTE DE
IONES
ANALIZADOR
DE IONES
DETECTOR
PROCESADOR
DE SEALES
LECTURA
Esquema 2. Partes fundamentales de un equipo de Espectrometra de masas
Algunas de las tcnicas ms utilizadas son:
Impacto electrnico:
En esta tcnica la fuente contiene un filamento caliente el cual produce los electrones, estos
son acelerados por una diferencia de potencial de 70 e-V que se da entre el filamento y un
nodo.
Las molculas pasan a travs de la fuente de electrones acelerados, los cuales al impactar
con ellas por repulsin electrosttica hace que pierdan un electrn y empiecen a
fragmentarse, formando iones positivos
Estos iones son atrados a una rendija la cual luego los transporta hasta el analizador de
masas. As los iones formados son de menor relacin carga/masa al in molecular, entre
ellos se obtiene un fragmento llamado pico base que es el ms estable y el ms abundante
(100%).
Algunas ventajas de esta fuente son su alta sensibilidad y alta fragmentacin de la
molcula que permite su identificacin
Algunas desventajas es que deben usarse muestras voltiles, y que no se descompongan
trmicamente., adems que en algunos casos la fragmentacin no muestra el in molecular.
18
Ionizacin qumica:
Los tomos gaseosos de la muestra se ionizan tras la colisin con iones producidos por un
gas reactivo que se bombardea con electrones, generalmente metano, butano o amoniaco.
El gas se introduce en una proporcin 1000:1 para que los electrones del filamento logren
ionizar el gas y no la muestra. Los iones formados del gas pueden donar o recibir un protn
de la muestra formando iones [M+1] y [M-1] y por adicin electroflica se forman los iones
[M+15], [M+24], y [M+18] (con NH4+).
Este es un mtodo de ionizacin suave, ya que no usa la colisin de electrones de alta
energa sobre la muestra como en impacto electrnico, la transferencia de energa durante la
ionizacin es de alrededor de 5 e-V, lo que hace que no haya casi fragmentacin.,
generalmente se observan uno o dos iones.
Por lo tanto se obtiene una buena concentracin de un solo in con buena resolucin, pero
se obtiene poca informacin de la estructura.
Bombardeo rpido de tomos (FAB) :
La muestra se encuentra disuelta en un lquido de baja presin de vapor como el glicerol y
se ioniza por el bombardeo de tomos de Xenn o Argn de alta energa (6-10 ke-V) sobre
esta., formndose los iones por ataque catinico [M+1], por desprotonacin [M-1] y
[M+23] (Na+).
Se usa en compuestos no voltiles y de alto peso molecular. La fragmentacin es til en
compuestos con varias unidades monomricas como polisacridos, protenas, etc., ya que la
fragmentacin ocurre sobre el enlace peptdico o sobre el enlace glicosdico permitiendo
conocer cada unidad monomrica o cada residuo de aminocido y saber la secuencia de
estos compuestos.
RESONANCIA MAGNTICA NUCLEAR (RMN)
Esta tcnica se fundamenta en el estudio de la interaccin ondas electromagnticas con
longitudes de onda en la regin de la radiofrecuencia con los ncleos de los tomos
sometidos a un campo magntico intenso.
Las propiedades de los ncleos a tener en cuenta en el fenmeno son:
El momento angular: Es el movimiento de los ncleos sobre su propio eje.
Espn nuclear (I): Es el movimiento que tienen los ncleos con respecto a un eje imaginario
en un campo magntico aplicado, teniendo dos orientaciones: paralelo al campo y en contra
del campo. Se considera que la orientacin paralela al campo magntico es de baja energa
y en contra del campo es de alta energa
Existen algunos tomos que tienen spin nuclear cero, y no pueden ser determinados por
RMN, sucede para elementos con masa y carga par, los cuales no poseen propiedades
magnticas es el caso de 12C, 16O, 18O, 32S.
h: Constante de Planck
B:campo magntico aplicado
: Constante giromagntica
Momento magntico: El ncleo contiene partculas cargadas en su interior (protones) las
cuales al ser sometidas a un movimiento rotacional generan un momento magntico .
Movimiento de precesin:
La aplicacin de una energa en la longitud de onda de radiofrecuencia origina que los
ncleos tengan un movimiento, se pensara que fueran paralelos o antiparalelos al campo
magntico aplicado. Sin embargo esto no ocurre y los ncleos giran alrededor del eje del
campo tanto hacia arriba como hacia abajo, formando como una especie de movimiento de
trompo.
Por lo tanto cuando los ncleos se someten a un campo magntico los momentos
magnticos de los ncleos tienen este movimiento de precesin, a una frecuencia conocida
como frecuencia de Larmor (w).Esta depende tanto de la constante giromagntica
(propiedad de cada ncleo) como del campo magntico.
De acuerdo a esto para que ocurra el fenmeno de resonancia debe haber una frecuencia
igual a la de precesin del ncleo, por lo tanto si se aplica una frecuencia en MHz igual a la
frecuencia de precesin de los ncleos el fenmeno se da.
Esta frecuencia que se debe aplicar debe ser especfica, ay que cada ncleo entra en
resonancia a diferentes frecuencias, dependiendo del campo magntico aplicado.
Por ejemplo para el 13C la frecuencia que se debe aplicar para que los ncleos entren en
resonancia es aproximadamente de la frecuencia de resonancia de 1H.
Por lo tanto si un experimento de protn se hace en un equipo de 400MHz la frecuencia de
resonancia para obtener el espectro de 13C debe ser aproximadamente de 100MHz.
Al aplicar la energia con longitud de onda en la radiofrecuencia necesaria todos los
momentos magnticos se mueven en un solo sentido a la frecuencia de Larmor.
(figura 12 b). Con la oscilacin de los momentos magnticos alineados y del campo
magntico en una sola direccin, se genera una corriente con una frecuencia igual a la de
precesin , la cual se amplifica y se grafica como funcin de la frecuncia de irradiacin,
20
Figura 14. Representacin del movimiento uniforme de los momentos magnticos tras la
aplicacin de la radiofrecuencia.
Desplazamiento qumico:
La frecuencia de resonancia que se obtiene de cada ncleo no solo depende del campo
magntico aplicado sino tambin del ambiente qumico en el que se encuentre.
Los ncleos poseen partculas cargadas las cuales al estar en movimiento generan un campo
magntico, generando una proteccin de los ncleos. Cuando los ncleos se encuentran
cerca de grupos electronegativos la proteccin de estos ncleos disminuye hace que los
ncleos tengan una frecuencia mayor.
Para poder establecer una escala que permita ver las mismas frecuencias al aplicar energa
de radio frecuencias diferentes (80 MHz, 200MHz, 400 MHz) se establece una relacin
entre la diferencia entre la frecuencia del ncleo () y la frecuencia de referencia (r) y la
frecuencia aplicada ( ) y se toma un compuesto de referencia, el ms utilizado el
tetrametilsilano (TMS).
Acoplamientos spin-spin:
Sigue la regla m = 2nI +1 donde n es el nmero de protones vecinales a las seal analizada
En el caso de protn I= por lo tanto:
21
22
23
Experimentos bidimensionales:
Se dividen en Homonucleares y heteronucleares:
Los homonucleares son:
COSY: Permite la visualizacin de acoplamientos entre protones a travs del enlace
generalmente se observan en acoplamientos vecinales (3 enlaces).
NOESY, ROESY: Muestran los acoplamientos de los protones en una molcula a travs del
espacio.
24
25
JUSTIFICACIN
Wigandia kunthii es una planta que se encuentra al interior de la UNAM, cerca al instituto
de qumica. Dicha planta es un arbusto que crece muy fcilmente en la zona y se poda con
frecuencia. Por lo tanto es fcil obtener sus hojas como material de estudio.
Pertenece a la familia Hydrophyllaceae de la que se han hecho algunos estudios qumicos
en el gnero Phacelia1, 2, 3, 4 Nama y otros en Wigandia. De este ltimo se han podido
obtener diferente clases de compuestos tales como quinonas, hidroquinonas, flavonoides,
terpenos y benzociclodecadienos (wigandol y sus derivados). 8, 10, 11
Con el objetivo de contribuir a la diversidad qumica de esta especie y por lo tanto del
gnero, del cual no se tienen muchos estudios de este tipo de metabolitos
(benzociclodecadienos), se busca obtenerlos, aislados y determinar su estructura por
mtodos espectroscpicos modernos. Adems despus de conocidos estos compuestos se
podra pensar en hacer anlisis comparativos con otras especies que presenten esta misma
clase de metabolitos para poder identificarlos con ms facilidad y contribuir al estuido
fitoqumico de diferentes especies. Tambin la obtencin de derivados no identificados
ampliara la variedad y permite conocer caractersticas muy especficas de estos
compuestos.
26
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Contribuir al conocimiento qumico de la familia Hydrophyllaceae mediante el
estudio fitoqumico de la especie Wigandia urens.
OBJETIVOS ESPECFICOS
27
SECCIN EXPERIMENTAL
MATERIALES Y EQUIPOS
Materiales:
Se utiliz Slica-gel 230-400 mesh para cromatografa en columna Placas de Slica-gel de
0.20 mm fueron usadas para TLC analtica y 0.25 -2 mm para TLC preparativa, con
indicador de fluorescencia suministradas por MACHEREY NAGEL.
28
MTODOS
AISLAMIENTO, PURIFICACIN E IDENTIFICACIN ESTRUCTURAL.
A partir del extracto hexnico de hojas secas de Wigandia urens se obtienen 15 fracciones
por cromatografa en columna.
Se utiliz cromatografa en columna sucesiva para disminuir la complejidad en cada una de
las fracciones obtenidas de este extracto. Posteriormente se utiliz CCF preparativa para la
obtencin de los analitos puros o casi puros. Su aislamiento se sigui a travs de
espectroscopia de ultravioleta (UV) y RMN 1H de 200MHz.
Despus es enviado a RMN de 400MHz acompaado de espectrometra de masas e
infrarrojo y se obtienen los datos necesarios para hacer su elucidacin estructural.
La estructura de los compuestos determinada por RMN se hace con los espectros de
RMN 1H y RMN 13C, acompaada de los experimentos DEPT, COSY, NOESY, HSQC y
HMBC.
29
RESULTADOS Y DISCUSIN
AISLAMIENTO Y PURIFICACIN
El residuo del extracto hexnico de las hojas de Wigandia urens (25,58 g), se cromatografi
en una columna de vidrio ( = 7.5 cm, h = 60 cm) utilizando 250 g de slica-gel como
adsorbente y como eluyente mezclas de hexano y acetato de etilo de polaridad creciente. Se
obtuvieron 71 fracciones, las cuales se reunieron de acuerdo con la similitud de sus
componentes determinada por CCF (Tabla 2).
Tabla 2. Fracciones primarias obtenidas del extracto hexnico
Fraccin
Eluyente Proporcin
1-12
13-25
26-48
49-60
61-71
Hexano 100 %
Hexano-AcOEt 95:5
Hexano-AcOEt 9:1
Hexano-AcOEt 8:2
Hexano-AcOEt 6:4
Fracciones
reunidas
1-2
3-10
11-14
15-16
17-21
22-25
26-31
32-38
39-49
50-53
54-56
57-63
64-69
70
71
Clave
JCV-Wk-A
JCV-Wk-B
JCV-Wk-C
JCV-Wk-D
JCV-Wk-E
JCV-Wk-G
JCV-Wk-H
JCV-Wk-I
JCV-Wk-J
JCV-Wk-K
JCV-Wk-L
JCV-Wk-M
JCV-Wk-N
JCV-Wk-O
JCV-Wk-P
Peso
(g)
0.5245
0.0384
0.0202
2.7646
2.4930
1.0857
3.3902
3.3307
0.6012
0.5661
0.6173
1.1474
0.9880
0.1643
Eluyente-Proporcin
1-19
20
21
Hexano 100 %
Hexano-AcOEt 9:1
Hexano-AcOEt 8:2
30
Fracciones
reunidas
1
2
3-8
9-16
17-19
20
21
Clave
JCV-Wk-AA
JCV-Wk-AB
JCV-Wk-AC
JCV-Wk-AD
JCV-Wk-AE
JCV-Wk-AF
JCV-Wk-AG
Eluyente-Proporcin
1-27
28
DCM 100 %
AcOEt 100%
Fracciones
reunidas
1-3
4-6
7-10
11-18
19-27
28
Clave
Masa (g)
JCV-Wk-DA
JCV-Wk-DB
JCV-Wk-DC
JCV-Wk-DD
JCV-Wk-DE
JCV-Wk-DF
0.4199
0.9069
0.2938
0.6587
0.3025
0.0927
Se tomaron espectros de RMN 1H de 200 MHz de las fracciones JCV-Wk-D2 y JCV-Wk D10 antes de reunir. Esta ltima, mosto la presencia de triglicridos.
31
Eluyente-Proporcin
1-27
28-30
31
32
DCM 100 %
DCM-Acetona 1:1
Acetona 100%
MeOH 100%
Fracciones
reunidas
1-2
3-6
7-13
14-22
23-30
31
32
Clave
Masa (g)
JCV-Wk-EA
JCV-Wk-EB
JCV-Wk-EC
JCV-Wk-ED
JCV-Wk-EE
JCV-Wk-EF
JCV-Wk-EG
0.0054
0.6823
0.1357
0.9173
0.4107
0.0885
0.2471
32
Eluyente-Proporcin
1-2
9-24
25-31
32-35
36-37
38-39
40- 41
42
Hexano 100 %
Hexano-AcOEt 95:5
Hexano-AcOEt 9.1
Hexano-AcOEt 8:2
Hexano-AcOEt 7.3
Hexano-AcOEt 1:1
AcOEt 100%
MeOH 100%
Fracciones
reunidas
1
2
3
4-5
6-9
10-13
14
15
16
17
18
19-21
22-25
26-35
36-39
40-41
42
33
Clave
Masa (g)
JCV-Wk-EBA
JCV-Wk-EBB
JCV-Wk-EBC
JCV-Wk-EBD
JCV-Wk-EBE
JCV-Wk-EBF
JCV-Wk-EBG
JCV-Wk-EBH
JCV-Wk-EBI
JCV-Wk-EBJ
JCV-Wk-EBK
JCV-Wk-EBL
JCV-Wk-EBM
JCV-Wk-EBN
JCV-Wk-EBO
JCV-Wk-EBP
JCV-Wk-EBQ
0.0013
0.0092
0.0231
0.0276
0.0354
0.1989
0.0696
0.0611
0.0979
0.0361
0.0488
0.0634
0.0246
0.
La fraccin JCV-Wk-EBG (69.6 mg) se purific por CCF preparativa en una placa de
20x20cm y de 2 mm de espesor de slicagel. Como sistema de elucin se emple hexanoAcOEt 9:1, y la placa se eluy 3 veces (3x).
Se obtuvieron 6 fracciones: JCV-Wk-EBG (a-f). El espectro de RMN 1H de 200 MHz de la
fraccin JCV-Wk-EBGc (6.6 mg), indico la presencia del flavidulol A (2).
Las fracciones JCV-Wk-EBH y JCV-Wk-EBK, fueron purificadas por CCF preparativa de
silicagel de 1 mm de espesor.
Para la fraccin JCV-Wk-EBH (61.1 mg) se utiliz hexano-AcOEt 9:1 como eluyente y la
placa se eluy 3 veces (3x).
Se obtuvieron 5 fracciones: JCV-Wk-EBH (a-e). La fraccion JCV-Wk-EBHd (38.2 mg), se
identific espectroscpicamente como el Flavidulol A (2), aislado previamente de
Lactarius flavidulus 12.
34
Eluyente-Proporcin
Fracciones
reunidas
1-3
4
5
6
7
8
9-17
18-26
27-32
33-39
40-45
46
DCM 100 %
DCM-Acetona 95:5
DCM-Acetona 9.1
DCM-Acetona 8:2
DCM-Acetona 1:1
Acetona 100%
MeOH 100%
35
Clave
Masa (g)
JCV-Wk-GA
JCV-Wk-GB
JCV-Wk-GC
JCV-Wk-GD
JCV-Wk-GE
JCV-Wk-GF
JCV-Wk-GG
JCV-Wk-GH
JCV-Wk-GI
JCV-Wk-GJ
JCV-Wk-GK
JCV-Wk-GL
0.0042
0.0038
0.0127
0.0256
0.0230
0.0179
0.2487
0.1163
0.2100
0.1671
0.1594
0.0619
La fraccion JCV-Wk-GE (25.6 mg), se purific por CCF preparativa utilizando una placa
de 20x20cm y de 0.25 mm de espesor en slicagel, empleando hexano-AcOEt 9:1 como
eluyente y la placa se eluy por 5 veces (5x).
Se obtuvo 7 fracciones JCV-Wk-GE (a-g) que se analizaron por CCF y RMN 1H
La fraccin JCV-Wk-GEa (7.5mg) se identific espectroscpicamente como una mezcla
con el 3-geranil-4-metoxifenol (5) como componente mayoritario.
Las fracciones JCV-Wk-GE e-g se reunieron (5.7mg) e identificaron como el cido 3geranil-4-metoxi-benzoico (6).
La fraccin JCV-Wk-GF (17.9 mg) se purific por CCF preparativa utilizando una placa
de 20x20cm y de 0.25 mm de espesor en slicagel, empleando hexano-AcOEt 9:1 como
eluyente y la placa se eluy 3 veces (3x). Se obtuvo 5 fracciones JCV-Wk-GF (a-e) que se
analizaron por CCF y RMN 1H.
De las fracciones JCV-Wk-GFd y JCV-Wk-GFe (11.3mg) se aisl nuevamente el cido 3geranil4-metoxibenzoico (6).
36
37
Eluyente-Proporcin
Fracciones
reunidas
1-4
5
6
7
8
9-13
14-20
21-38
39-49
50-52
53-55
56
DCM 100 %
DCM-Acetona 98:0.2
DCM-Acetona 95:0.5
DCM-Acetona 95:5
DCM-Acetona 1:1
Acetona 100%
MeOH 100%
Clave
Masa (g)
JCV-Wk-HA
JCV-Wk-HB
JCV-Wk-HC
JCV-Wk-HD
JCV-Wk-HE
JCV-Wk-HF
JCV-Wk-HG
JCV-Wk-HH
JCV-Wk-HI
JCV-Wk-HJ
JCV-Wk-HK
JCV-Wk-HL
0.0575
0.0870
0.1212
0.1191
0.1138
0.3914
0.5655
0.3704
0.1191
0.0336
0.8335
0.0937
Las fracciones JCV-Wk-H (A-E) se separaron por CCF preparativa, en placas de slica-gel
de 20x20 cm x 1 mm de espesor, utilizando como eluyente DCM-Acetona 99:1 y eluyendo
la placa las veces necesarias para una mejor separacin de los componentes.
De las fracciones JCV-Wk-HAd (22.6 mg), JCV-Wk-HBd (27.2 mg), JCV-Wk-HDe
(20 mg), JCV-Wk-HEc (21.8mg) se obtuvieron cantidades adicionales del cido 3geranil-4-metoxibenzoico (6).
De las fracciones JCV-Wk-HCd (16.5 mg), JCV-Wk-HEb (13.6 mg), JCV-Wk-HF
(129.1mg) y JCV-Wk-HG (187.4 mg) se identific como wigandol (1), mientras que de la
fraccin HH se aisl nuevamente -sitosterol (10) (50.7 mg).
38
39
Eluyente-Proporcin
Fracciones
reunidas
1-2
3-10
11-13
14-18
19-24
25-36
37-47
48-52
53-54
55
56
DCM 100 %
DCM-Acetona 98:2
DCM-Acetona 95:5
DCM-Acetona 9:1
DCM-Acetona 7:3
DCM-Acetona 1:1
Acetona 100%
MeOH 100%
Clave
Masa (g)
JCV-Wk-IA
JCV-Wk-IB
JCV-Wk-IC
JCV-Wk-ID
JCV-Wk-IE
JCV-Wk-IF
JCV-Wk-IG
JCV-Wk-IH
JCV-Wk-II
JCV-Wk-IJ
JCV-Wk-IK
0.0035
2.0224
0.1247
0.1192
0.0979
0.1989
0.4385
0.2082
0.0593
0.0384
0.0695
40
Eluyente-Proporcin
Hexano-DCM 1:1
Hexano-DCM 1:3
DCM 100 %
DCM-Acetona 95:5
DCM-Acetona 9:1
DCM-Acetona 7:3
Acetona 100%
MeOH 100%
Fracciones
reunidas
1-12
13-28
29-36
37-39
40-49
50-53
54-58
59-61
62-63
64-65
66
67-69
70-71
72
73-76
77
78
79
41
Clave
Masa (g)
JCV-Wk-IBA
JCV-Wk-IBB
JCV-Wk-IBC
JCV-Wk-IBD
JCV-Wk-IBE
JCV-Wk-IBF
JCV-Wk-IBG
JCV-Wk-IBH
JCV-Wk-IBI
JCV-Wk-IBJ
JCV-Wk-IBK
JCV-Wk-IBL
JCV-Wk-IBM
JCV-Wk-IBN
JCV-Wk-IBO
JCV-Wk-IBP
JCV-Wk-IBQ
JCV-Wk-IBR
0.0180
0.0136
0.0546
0.0244
0.0564
0.0144
0.0308
0.1033
0.1061
0.0962
0.0654
0.0356
0.2381
0.0995
0.4794
0.1487
0.3038
0.1886
42
COMPUESTOS AISLADOS
Benzociclodecadienos (derivados fenlicos prenilados):
OAc
OMe
OH
OH
OH
OMe
OMe
OH
COOH
Terpenos
7
43
C-1), 26.67 (CH2, C-9), 26.38 (CH2, C-5), 25.68 (CH3, C-12), 17.68 (CH3, C-13), 16.22
(CH3, C-15), 16.04 (CH3, C-14)
2-GERANIL-4-HIDROXI-1-METOXIBENCENO (5): EM-IE: 70 e-v (int. rel.) 260 (M+ 40),
217 (10), 191 (100), 176 (18), 161 (22), 137 (48), 123 (70), 69 (30), 41 (20).
RMN 1H (CDCl3, 400MHz) 6.71 (1H, d, J=8.5 Hz, H-6), 6.65 (1H, d, J=3.0 Hz, H-3),
6.61 (1H, dd, J=8.5, J=3.1 Hz, H-5), 5.29 (1H, d, J=7.4 Hz, H-2), 5.12 (1H, t, J=6.7 Hz,
H-6), 3.78 (3H, s, OMe), 4.39 (1H, s, OH), 3.29 (2H, d, J=7.3 Hz, H-1), 2.07 (2H, m, H4), 2.11 (2H, m, H-5), 1.61 (3H, s, H-8), 1.69 (6H, s, H-9, H-10).
RMN 13C (CDCl3, 100MHz) 151.71 (C, C-1), 149.33 (C, C-4), 136.71 (C, C-2),
136.48 (C, C-3), 131.36 (C, C-7), 116.63 (CH, C-3), 112.56 (CH, C-5), 111.64 (CH, C-6),
124.37 (CH, C-6), 122.07 (CH, C-2), 39.78 (CH2, C-1), 28.08 (CH2, C-4),
26.71 (CH2, C-5), 56.16 (CH3, OMe), 25.66 (CH3, C-8), 17.67 (CH3, C-9),
16.06 (CH3, C-10).
CIDO 3-GERANIL-4-METOXIBENZOICO (6): IR (Sol. CHCl3) 3500-2400 (OH cido),
1722, 1607, 1441, 1392, 1259, 1236, 1045. RMN 1H (CDCl3, 400MHz) 6.88 (1H, d,
J=8.7 Hz, H-5), 7.89 (1H, d, J=2.2 Hz, H-2), 7.97 (1H, dd, J=8.6, J=2.3Hz, H-6), 5.31 (1H,
t, J=7.2 Hz, H-2), 5.11 (1H, t, J=6.8 Hz, H-6), 3.90 (3H, s, OMe), 3.34 (2H, d, J=7.3 Hz,
H-1), 2.07 (4H, m, H-4, H-5), 1.67 (3H, s, H-8), 1.71 (3H, s, H-9), 1.60 (3H, s H-10).
RMN 13C (CDCl3, 100MHz) 161.82 (C, C-4), 130.28 (C, C-3), 121.22 (C, C-1),
136.82 (C, C-3), 131.43 (C, C-7), 131.41 (CH, C-2), 130.21 (CH, C-6), 109.54 (CH, C-5),
124.21 (CH, C-6), 121.49 (CH, C-2), 28.06 (CH2, C-1), 39.61 (CH2, C-4),
26.51 (CH2, C-5), 55.57 (CH3, OMe), 25.51 (CH3, C-8), 15.96 (CH3, C-9),
17.53 (CH3, C-10), 171.71 (C, COOH).
IDENTIFICACIN ESPECTROSCPICA
WIGANDOL (1):
El compuesto 1, se obtuvo de la fraccin JCV-Wk-H como un producto cristalino con un
punto de fusin entre 163-166C y un peso molecular de 258, de acuerdo con el espectro
de masas por I.E., el cual mostr un in molecular de m/z 258, congruente con un
compuesto de formula molecular C17H22O2.
En el espectro de resonancia magntica nuclear protnica (1H), (Ver espectro 1) en la
regin de los aromticos, se observan los dobletes caractersticos de un sistema AB 49, con
constantes de acoplamiento J = 8.5 Hz para ambos que indican la presencia de dos protones
aromticos en posicin orto. Esto es indicativo de un anillo aromtico tetra-sustituido (Ver
figura 12)
45
H
O
H
H3C
H
Figura 32. Correlacin entre el protn del OH con el protn aromtico H-3, en el espectro
NOESY.
47
Figura 33. Efecto NOE entre un protn olefnico H-6 y el metilo C-15
del ciclodecadieno en el wigandol (configuracin cis del doble enlace).
Figura 34. Efecto NOE entre el protn olefnico H-7 y el protn del metileno H-8
48
En el espectro COSY (Fig. 17) se observan las correlaciones entre los protones aromticos
a 6.69 y 6.52, entre el protn vinlico a 5.1 y el metilo y el metileno a 1.57 y 1.99,
respectivamente. As como, entre el protn vinlico a 5.20 con el metilo vinlico a 1.77
y un metileno benclico a 3.42. El otro metileno benclico muestra relacin con el metilo a
1.57. Con estos datos se comprob la relacin entre protones vecinales permitiendo
asignar los carbonos protonados con sus vecinos. Dichas correlaciones se pueden observar
en la figura siguiente.
CH3
OH
H3C
CH3
O
CH3
H
H
OH
H3C
H
1
13
OAc
O
OH
m/z= 43
OH
OH
m/z= 244
m/z= 91
OAc
OH
m/z= 136
m/z= 229
OH
OH
m/z= 188
50
O
1
16
12
13
10
11
14
4
6
8
OH
15
C/H
H (HSQC)
COSY 1H-1H
HMBC 1H 13C
142.85 (C)
119.98 (CH)
6.69 d (8.5)
6.52
113.53 (CH)
6.52 d (8.5)
6.69
153.01 (C)
28.39 (CH2)
3.26 m
1.57
139.26
121.97 (CH)
5.10 ta (8.4)
1.57, 1.99
24.73 (CH2)
1.99
2.14, 1.99
38.34 (CH2)
1.99
10
131.93 (C)
2.14 m,
1.73 m
-
11
122.52 (CH)
5.20 da (13.7)
3.41, 1.77
12
27.80 (CH2)
3.41 m
5.20, 1.77
13
131.67 (C)
14
127.42 (C)
15
22.36 (CH3)
1.57 s
3.26, 5.10
16
17.0 (CH3)
1.77 s
CH3CO
20.86 (CH3)
170.45 (C)
-
2.30 s
C=O
5.12 sa
OH
FLAVIDULOL A (2):
El compuesto 2, fue aislado de las fracciones JCV-Wk-EBGc y JCV-Wk-EBHd obtenidas
del extracto hexnico de Wigandia urens, despus de sucesivas cromatografas, como un
compuesto aceitoso de color amarillo-rojizo.
El perfil del espectro de RMN 1H (ver espectro 10) es similar al del wigandol (1), descrito
anteriormente y aislado previamente de la misma especie.8 Se observan en la regin de los
aromticos, dos seales dobles caractersticas de un sistema AB con constantes de
acoplamiento orto (J = 8.7 Hz para ambos), lo que permite suponer la presencia de un
anillo aromtico tetra-sustituido y que los protones estn en posicin orto uno del otro al
igual que en el wigandol.
A diferencia del wigandol (1), en el espectro de RMN 1H del compuesto 2, se observa la
presencia de una seal simple a 3.77 que indica que uno de los sustituyentes es un
metoxilo. Las absorciones en el IR, como una banda ancha en 3422 y 1239 cm-1, estn de
acuerdo con la presencia de enlaces C-O de grupos OH y OMe en la estructura.
52
En el espectro NOESY (ver espectro 14) se observan correlaciones entre el protn vinlico
a 5.11 con los protones del metilo vinlico a 1.61 as como, entre los protones del
metoxilo con el protn aromtico a 6.65 y del protn del OH con el protn aromtico en
6.60. Las correlaciones observadas en el espectro NOESY, permiten asignar la posicin de
los sustituyentes en el anillo, adems de la geometria de los dobles enlaces, C6 como cis y
C10 trans.
H3C
H
O
H
H3C
H
Figura 39. Efecto NOE entre los protones del metoxilo y el protn aromtico H-2
53
Figura 41. Efecto NOE entre el protn olefnico H-6 y el metilo C-15 del
ciclodecadieno en el flavidulol A (configuracin cis del doble enlace).
54
Figura 42. Efecto NOE entre el protn olefnico H-7 y el protn del metileno H-8
En el espectro COSY se observan las correlaciones entre el protn vinlico en 5.26
(da, J = 13.8 Hz) y el metileno benclico a 3.24 y 3.93, y el metilo a 1.78, a tres y cuatro
enlaces, respectivamente. Se observa tambin correlaciones entre el protn vinlico a 5.11
(ta, J = 8.3 Hz) y el metilo a 1.61, el metileno benclico a 3.30 y el metileno a 2.0. En
la siguiente figura se muestran las relaciones mencionadas
55
56
OCH3
CH3
OH
H3C
OCH3
CH3
H
H
OH
H3C
H
Figura 44. Correlaciones 1H-13C (HMBC) a dos y tres enlaces en el flavidulol A (2)
El espectro de masas por I.E. (ver espectro 17) mostr un in molecular de m/z 258, el cual
est de acuerdo con un compuesto C17H22O2, adems de diferentes fragmentos congruentes
con la estructura de la molcula, los cuales se describen enseguida.
OMe
OH
OMe
OMe
m/z=150
m/z=189
O
OH
OH
OH
m/z=243
57
16
12
13
10
11
14
4
6
8
OH
15
C/H
H (HSQC)
COSY (1H-1H)
152.13 (C)
109.46 (CH)
6.65 d (8.7)
112.52 (CH)
6.60 d (8.7)
148.90 (C)
28.35 (CH2)
3.30 s
5.11, 1.61
139.32 (C)
123.92 (CH)
5.11 t (8.3)
24.78 (CH2)
2.0 m
1.73, 5.11
38.44(CH2)
1.73
10
131.36 (C)
2.15 t
1.73 m
-
C-6, C-7,C-9,
C-10
C-7, C-8, C-10,
C-16
-
11
124.13 (CH)
5.26 da (13.9)
12
27.21 (CH2)
3.91, 5.26
3.91 da (17)
13
128.93 (C)
14
127.51 (C)
15
22.43 (CH3)
1.61 s
3.30, 5.11
16
16.93 (CH3)
1.78 s
3.91, 5.26
OMe
56.43
3.77 s
C-1
OH
4.41 s
OMe
16
12
1
2
13
16
12
13
10
3
10
11
14
4
6
6
8
15
OH
15
Wigandol
OH
11
14
Flavidulol A
13
FLAVIDULOL A
6.65 d (8.7)
6.60 d (8.7)
WIGANDOL
6.69 d (8.5)
6.52 d (8.5)
1
2
3
C
(C)
(CH)
(CH)
FLAVIDULOL A
152.13
109.46
112.52
WIGANDOL
142.85
119.98
113.53
3.30 s
3.26
4
5
(C)
(CH2)
148.90
28.35
153.01
28.39
5.11 ta (8.3)
5.10 ta (8.4)
6
7
(C)
(CH)
139.32
123.92
139.26
121.97
2.0 m
2.15 m
5.26 da (13.9)
2.0
2.17
5.21da (13.7)
8
9
10
11
(CH2)
(CH2)
(C)
(CH)
24.78
38.44
131.36
124.13
24.73
38.34
131.93
122.52
3.41 m
12
(CH2)
27.21
27.80
1.59 s
1.77 s
-
13
14
15
16
-
(C)
(C)
(CH3)
(CH3)
CH3O
128.93
127.51
22.43
16.93
56.43
131.67
127.42
22.36
17.0
Metoxilo
CH3-CO
OH
4.41 s
2.30 s
5.12 sa
C=O
CH3-CO
-
170.45
20.86
-
Protones
aromtico
s
CH2
benclico
CH
Olefnico
Metilenos
CH
olefnico
CH2
benclico
Metilos
.
59
60
En el espectro de RMN 1H (ver espectro 19) se observan seales para tres tipos de protones
aromticos: dos dobletes en 6.67 y 6.61 (J=8.4 y J=2.9 Hz) y un doble de dobles en 6.51
con J=8.5 y J=3.1 Hz, las cuales son seales caractersticas de un anillo trisustituido 1, 2, 4.
R1
(d) J=8.4 Hz
R2
(d) J=2.9 Hz
61
OH
CH3
CH3
CH3
H
H
OH
OH
CH3
CH3
H
CH3
H
H
OH
13
m/z= 41
m/z= 246
OH
m/z= 69
OH
OMe
OH
OH
OH
m/z=177
OH
OH
HO
m/z= 123
m/z= 123
m/z=161
62
HO
9'
OH
5'
1'
2'
5
6'
4'
8'
3
4
OH
C/H
H (HSQC)
COSY (H-H)
HMBC (H-C)
148.06 (C)
128.32 (C)
116.57 (CH)
6.61 d (2.9)
149.44 (C)
113.65 (CH)
6.67
116.47 (CH)
6.67 d (8.4)
6.57
29.58 (CH2)
3.30 d (7.2)
5.29, 1.74
121.39 (CH)
5.29 t (7.0)
3.30, 1.74
138.36 (C)
39.65 (CH2)
2.06 m
5.07
26.43 (CH2)
2.11 m
5.07, 1.68
123.87 (CH)
5.07 t (6.2)
131.89 (C)
17.67 (CH3)
1.60 s
5.07
25.65 (CH3)
1.68 s
5.07, 2.11
10
16.14 (CH3)
1.74 s
5.29, 3.30
63
Figura 48. Regin de los protones aromticos en el espectro de RMN 1H del cido 3geranil-4-metoxibenzoico (6).
64
65
cido 3-geranil-4-
C/H
121.22 (C)
112.5 (C)
131.41 (CH)
7.89 d (2.2)
130.8 (CH)
7.88 d (2.2)
130.28 (C)
129.7 (C)
161.82 (C)
160.7 (C)
109.54 (CH)
6.88 d (8.7)
109.2 (CH)
6.87 d (8.4)
130.21 (CH)
129.3 (CH)
28.06 (CH2)
3.34 d (7.3)
28.0 (CH2)
3.34 d (7.3)
121.49 (CH)
5.31 t (7.2)
121.6 (CH)
5.31 t (7.3)
136.82 (C)
136.1 (C)
39.61 (CH2)
2.07 m
39.8 (CH2)
2.07 m
26.51 (CH2)
2.07 m
26.4 (CH2)
2.07 m
124.21 (CH)
5.11 t (6.8)
124.0 (CH)
5.10 t (7.2)
131.43 (C)
131.0 (C)
25.51 (CH3)
1.67 s
25.4 (CH3)
1.67 s
15.96 (CH3)
1.71 s
15.8 (CH3)
1.71 s
10
17.53 (CH3)
1.60 s
17.4 (CH3)
1.60 s
COOH
171.71
168.4
OMe
55.57
3.90
55.2
3.90
2-GERANIL-4-HIDROXI-1-METOXIBENCENO (5):
El compuesto 5, se obtuvo de las fraccines JCV-Wk-EBKc y JCV-Wk-GFa como un
aceite de color amarillo-rojizo cuyo peso molecular 260, determinado por CG-EM, est de
acuerdo para un compuesto C17H24O2. En el cromatograma obtenido se observa el pico
correspondiente con el tiempo de retencin de 28.8 min
66
En el espectro de RMN 1H (espectro 38) se observan como en los casos anteriores, las
seales caractersticas para un anillo bencnico trisustituido (1, 2, 4) como dos seales
dobles en 6.71 y 6.65 con J=8.5 Hz (orto) y J= 3.0 Hz (meta) respectivamente, y una
seal doble de dobles en 6.61 con J=8.5 Hz y J=3.1 Hz (orto y meta). Los
desplazamientos qumicos de las seales indican que los sustituyentes deben ser grupos
protectores, como en el caso del compuesto 3.
67
m/z= 69
m/z= 260
OH
OMe
OMe
OH
OH
OH
OH
m/z=191
m/z= 123
m/z= 137
68
OH
HO
2-geranil-4-hidroxi-1-
9'
OMe
1
6
5'
1'
2
2'
4'
8'
6'
3
4
OH
C/H
2-geranil-4-hidroxi-1metoxibenceno Aislado
C
H
2-geranil-4-hidroxi-1metoxibenceno reportado
C
H
151.71 (C)
151.6 (C)
136.71(C)
136.6(C)
116.63 (CH)
6.65 d (3.0)
116.6 (CH)
6.65 d (3.5)
149.33 (C)
149.3 (C)
112.56 (CH)
112.5 (CH)
111.64 (CH)
6.71 d (8.5)
111.5 (CH)
6.62 dd (8.5,
3.5)
6.72 d (8.5)
39.78 (CH2)
3.29 d (7.3)
39.8 (CH2)
3.26 d (7.2)
122.07 (CH)
5.29 t (7.5)
121.9 (CH)
5.27 t (7.2)
136.48(C)
136.5 (C)
28.08 (CH2)
2.07 m
28.0 (CH2)
2.02 m
26.71 (CH2)
2.11 m
26.7 (CH2)
2.11 m
124.37 (CH)
5.12 t (6.8)
124.3 (CH)
5.09 t (6.8)
131.36 (C)
131.4 (C)
25.66 (CH3)
1.61 s
25.2 (CH3)
1.58 s
17.67 (CH3)
1.69 s
17. 7 (CH3)
1.67 s
10
16.06 (CH3)
1.69 s
16.1 (CH3)
1.67 s
OH
4.39 s
OMe
56.16
3.78 s
56.1
3.76 s
FARNESILHIDROQUINONA (4):
En el espectro de RMN 1H se observan seales para tres tipos de protones aromticos: dos
dobletes en 6.68 y 6.61 (J=8.4 y J=3.0 Hz) y un doble de dobles en 6.58 con J=8.5 y
J=3.0 Hz, las cuales son seales caractersticas de un anillo trisustituido 1, 2, 4 nuevamente.
En el espectro de RMN 1H, (ver espectro 29) se observan adems, seales asignables a 3
protones vinlicos, 5.30 (ta, 1H, J=7.0 Hz) y 5.10 (ta, 2H, J= 6.2 Hz), as como seales
para 4 metilos vinlicos, 1.60 (6H), 1.68 (3H) y 1.74 (3H). La seal doble en 3.30
(J=7.2 Hz) es asignada al metileno benclico y una seal mltiple entre 2.0 y 2.2 (8H)
asignada a los otros metilenos de la cadena.
En el espectro de RMN 13C (ver espectro 30) se observan 20 seales las cuales se asignan a
6 metinos, 4 seales correspondientes a 5 metilenos (en una seal se tienen 2 equivalentes),
4 metilos, y las seales restantes para 6 carbonos cuaternarios de acuerdo al DEPT 90 y 135
(espectros 31 y 32)
En el espectro de IR (ver espectro 37) se observan claramente absorciones caractersticas en
3351 y 3602 cm-1 correspondientes a grupos OH en la estructura.
Figura 52. Efecto NOE entre el protn olefnico H-10 y el metilo C-12 en la
farnesilhidrquinona (configuracin cis del doble enlace).
70
OH
CH3
H
OH
OH
CH3
H
CH3
H
H
OH
71
14'
13'
OH
1'
5'
9'
11'
3'
2'
7'
4'
6'
8'
10'
12'
3
4
OH
C/H
H (HSQC)
COSY (H-H)
HMBC (H-C)
148.19 (C)
128.29 (C)
116.56 (CH)
6.61 d (3.0)
3.30
149.32 (C)
113.71 (CH)
116.52 (CH)
6.68 d (8.4)
29.68 (CH2)
3.30 d (7.2)
121.25 (CH)
5.30 ta (7.4)
6.61, 5.30,
1.76
3.30, 1.76
138.62 (C)
39.67
2.09 m
1.60
26.38
2.12 ta
5.10
123.68 (CH)
5.10 t (6.0)
131.52 (C)
1.60, 2.09,
2.12
-
39.67
1.98 m
26.67
2.05 m
10
124.34 (CH)
5.10 ta
1.68
C-12, C-13
11
131.34 (C)
12
25.68 (CH3)
1.68 sa
5.10
13
17.68 (CH3)
1.60 sa
14
16..04 (CH3)
1.60 sa
5.10, 2.09
15
16.22 (CH3)
1.76 sa
3.30, 5.30
72
-SITOSTEROL (7):
De las fracciones GI y HH se obtuvo un slido de color blanco insoluble en MeOH, cuyo
punto de fusin era de 127-132C. Se observaba en la placa analtica al revelar con leum
una mancha muy caracterstica de color rosa (ver figura a continuacin)
Figura 54. Mancha observada en CCF del -sitosterol (izquierda) y estndar (derecha)
Del espectro de RMN 1H se observa una seal doble en 5.3 ppm que correspondera con el
doble enlace presente en la molcula. Adems se observa una gran cantidad de seales
entre 0.8 y 2.5 ppm que indican la presencia de gran cantidad de CH2 y CH3.
En el espectro DEPT 90 se observan 9 seales correspondientes a 8metinos sp3 unos de
ellos muy desplazado en 71.79 ppm por estar enlazado al OH y un metino sp2 del doble
enlace presente en el segundo anillo.
Con el DEPT 135 se observan adems los 6 metilos en la parte positiva y 11 metilenos en
la parte negativa.
En el espectro de 13C se observan en total 29 seales, por lo tanto al hacer la diferencia con
los carbonos del DEPT 135 se sabe que hay 3 carbonos cuaternarios en la estructura 1 de
ellos muy caractersticos por su desplazamiento en 140.74 que tiene el doble enlace.
73
Compuestos aislados
anteriormente
Wigandol
OAc
Referencia
Gmez F., Quijano L., Caldern J. S.,
and Rios T. 1980. Terpenoids isolated
from Wigandia kunthii.
Phytochemistry. 19: 2202-2203.
OH
Farnesilhidroquinona
Idem
-sitosterol
3-geranil-4-metoxifenol
OMe
OH
OMe
Idem
COOH
Compuestos no aislados
previamente en la
especie
Flavidulol A
OMe
OH
Geranilhidroquinona
OH
OH
74
CONCLUSIONES
75
BIBLIOGRAFA
76
77
26. Garrido L., Zuba E., y otros. 2002. New Meroterpenoids from the Ascidian Aplidium
conicum. Journal of Natural Products. 65: 1328-1331.
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Transformation and Biological Activities of Globiferin, a Terpenoid Benzoquinone
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ANEXOS
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Espectro 44. RMN 13C (100MHz, CDCl3) del cido 3-geranil-4metoxibenzoico (6)
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