ANALITICOS DE PRESICI

CURSO: ENOLOGIA II
CICLO: VIII

UMENTOS

DOCENTE: ING. SOTELO ALCA

ALUMNO:
CUTIPA CCOARITE NOELI

INSTRUMENTOS ANALITICOS DE PRESICIN

CROMATOGRAFA:
La cromatografa es un mtodo fsico de separacin para la
caracterizacin de mezclas complejas, la cual tiene aplicacin en
todas las ramas de la ciencia y la fsica. Es un conjunto de tcnicas
basadas en el principio de retencin selectiva, cuyo objetivo es
separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo
identificar y determinar las cantidades de dichos componentes.
Las tcnicas cromatografas son muy variadas, pero en todas ellas
hay una fase mvil que consiste en un fluido (gas, lquido o fluido
supercrtico) que arrastra a la muestra a travs de una fase
estacionaria que se trata de un slido o un lquido fijado en un slido.
Los componentes de la mezcla interaccionan en distinta forma con la
fase estacionaria. De este modo, los componentes atraviesan la fase
estacionaria a distintas velocidades y se van separando. Despus de
que los componentes hayan pasado por la fase estacionaria,
separndose, pasan por un detector que genera una seal que puede
depender de la concentracin y del tipo de compuesto.

Diferencias sutiles en el coeficiente de particin de los compuestos

da como resultado una retencin diferencial sobre la fase estacionaria
y por tanto una separacin efectiva en funcin de los tiempos de
retencin de cada componente de la mezcla.
La cromatografa puede cumplir dos funciones bsicas que no se
excluyen mutuamente:

Separar los componentes de la mezcla, para obtenerlos ms

puros y que puedan ser usados posteriormente (etapa final de
muchas sntesis).

Medir la proporcin de los componentes de la mezcla (finalidad

analtica). En este caso, las cantidades de material empleadas
son pequeas.

La cromatografa en papel: Es un proceso muy utilizado en los

laboratorios para realizar anlisis cualitativos ya que pese a no ser
una tcnica muy potente no requiere de ningn tipo de equipamiento.
La fase estacionaria est constituida simplemente por una tira de
papel de filtro. La muestra se deposita en un extremo colocando
pequeas gotas de la solucin y evaporando el disolvente. Luego el
disolvente empleado como fase mvil se hace ascender por
capilaridad. Esto es, se coloca la tira de papel verticalmente y con la
muestra del lado de abajo dentro de un recipiente que contiene fase
mvil en el fondo.
Despus de unos minutos cuando el disolvente deja de ascender o ha
llegado al extremo se retira el papel y seca. Si el disolvente elegido
fue adecuado y las sustancias tienen color propio se vern las
manchas de distinto color separadas. Cuando los componentes no
tienen color propio el papel se somete a procesos de revelado.
HPLS:
En la cromatografa lquida, la fase mvil es un lquido que fluye a
travs de una columna que contiene a la fase fija. La separacin
cromatogrfica en HPLC es el resultado de las interacciones
especficas entre las molculas de la muestra en ambas fases, mvil y
estacionaria
A diferencia de la cromatografa de gases, la cromatografa de
lquidos de alto rendimiento (HPLC, de high-performance liquid
chromatography) no est limitada por la volatilidad o la estabilidad
trmica de la muestra.
La HPLC es capaz de separar macromolculas y especies inicas,
productos naturales lbiles, materiales polimricos y una gran
variedad de otros grupos polifuncionales de alto peso molecular. Con
una fase mvil lquida interactiva, otro parmetro se encuentra
disponible para la selectividad, en adicin a una fase estacionaria
activa.
La HPLC ofrece una mayor variedad de fases estacionarias, lo que
permite una mayor gama de estas interacciones selectivas y ms
posibilidades para la separacin.

Tipos de HPLC
Cromatografa de fase normal
La cromatografa de fase normal o normal phase HPLC (NPHPLC) fue el primer tipo de sistema HPLC utilizado en el campo
de la qumica, y se caracteriza por separar los compuestos
sobre la base de su polaridad. Esta tcnica utiliza una fase
estacionaria polar y una fase mvil apolar, y se utiliza cuando
el compuesto de inters es bastante polar. El compuesto polar
se asocia y es retenido por la fase estacionaria. La fuerza de
adsorcin aumenta a medida que aumenta la polaridad del

compuesto y la interaccin entre el compuesto polar y la fase

estacionaria polar (en comparacin a la fase mvil) aumenta el
tiempo de retencin.
La fuerza de interaccin no slo depende de los grupos
funcionales del compuesto de inters, sino tambin en factores
estricos de forma que los ismeros estructurales a menudo se
pueden diferenciar el uno del otro. La utilizacin de disolventes
ms polares en la fase mvil disminuye el tiempo de retencin
de los compuestos mientras que los disolventes ms
hidrofbicos tienden a aumentar el tiempo de retencin.
La NP-HPLC cay en desuso a los aos setenta con el desarrollo
del HPLC de fase reversa o reversed-phase HPLC debido a la
falta de reproductibilidad de los tiempos de retencin puesto
que los disolventes prticos cambiaban el estado de
hidratacin de la silica o almina de la cromatografa.

Cromatografa de fase inversa (o reversa):

La HPLC de fase inversa (RP-HPLC) consiste en una fase
estacionaria apolar y una fase mvil de polaridad moderada.
Una de las fases estacionarias ms comunes de este tipo de
cromatografa es la silica tratada con RMe 2SiCl, donde la R es
una cadena alquil tal como C18H37 o C8H17. El tiempo de
retencin es mayor para las molculas de naturaleza apolar,
mientras que las molculas de carcter polar eluyen ms
rpidamente.
El tiempo de retencin aumenta con la adicin de disolvente
polar a la fase mvil y disminuye con la introduccin de
disolventes ms hidrofbicos. La cromatografa de fase reversa
es tan utilizada que a menudo se lo denomina HPLC sin
ninguna especificacin adicional. La cromatografa de fase
reversa se basa en el principio de las interacciones hidrofbicas
que resultan de las fuerzas de repulsin entre un disolvente
relativamente polar, un compuesto relativamente apolar, y una
fase estacionaria apolar. La fuerza conductora en la unin del
compuesto a la fase estacionaria es la disminucin del rea del
segmento apolar del analito expuesto al disolvente. Este efecto
hidrofbico est dominado por el aumento de la entropa, y la
consecuente disminucin de la energa libre, asociada con la
minimizacin de la interfase compuesto-disolvente polar. El
efecto hidrofbico disminuye con la adicin de disolvente
apolar a la fase mvil. Esto modifica el coeficiente de particin
de forma que el compuesto se mueve por la columna y eluye.
Las caractersticas del compuesto de inters juegan un papel
muy importante en la retencin. En general, un compuesto con
una cadena alquil larga se asocia con un tiempo de retencin
mayor porque aumenta la hidrofobicidad de la molcula. Aun
as, las molculas muy grandes pueden ver reducida la
interaccin entre la superficie del compuesto y la fase

estacionaria. El tiempo de retencin aumenta con el rea de

superficie hidrofbica que suele ser inversamente proporcional
al tamao del compuesto. Los compuestos ramificados suelen
eluir ms rpidamente que sus ismeros lineales puesto que la
superficie total se ve reducida.
Aparte de la hidrofobicidad de la fase inmvil, otras
modificaciones de la fase mvil pueden afectar la retencin del
compuesto; por ejemplo, la adicin de sales inorgnicas
provoca un aumento lineal en la tensin superficial, y como que
la entropa de la interfase compuesto-disolvente est
controlada precisamente por la tensin superficial, la adicin de
sales tiende a aumentar el tiempo de retencin.

Cromatografa de exclusin molecular

La cromatografa de exclusin molecular, tambin conocida
como cromatografa por filtracin en gel, separa las partculas
de la muestra en funcin de su tamao. Generalmente se trata
de una cromatografa de baja resolucin de forma que se suele
utilizar en los pasos finales del proceso de purificacin. Tambin
es muy til para la determinacin de la estructura terciaria y
la estructura cuaternaria de las protenas purificadas.
La cromatografa de filtracin molecular es un mtodo de
cromatografa en columna por el cual las molculas se separan
en solucin segn su peso molecular, o ms precisamente,
segn su radio de Stokes.
En esta cromatografa, la fase estacionaria consiste en largos
polmeros entrecruzados que forman una red tridimensional
porosa. A los fines prcticos, las columnas se empaquetan con
pequeas partculas esferoidales formadas por esos polmeros
entrecruzados. En consecuencia, estas partculas son porosas,
y el tamao de los poros es tal que algunas molculas (las
demasiado grandes) no podrn ingresar a esos poros, en tanto
que otras (las suficientemente pequeas) podrn pasar
libremente. Los poros quedan conectados formando una malla
o red, lo cual determina una serie de caminos a ser recorridos
por las molculas que acceden al interior de esta.

Cromatografa de intercambio inico:

En la cromatografa de intercambio inico, la retencin se basa
en la atraccin electrosttica entre los iones en solucin y las
cargas inmovilizadas a la fase estacionaria. Los iones de la
misma carga son excluidos mientras que los de carga opuesta
son
retenidos
por
la
columna.
Algunos
tipos
de
intercambiadores inicos son: i) Resinas de poliestireno, ii)
intercambiadores inicos de celulosa y dextranos (geles) y iii)
Silica porosa o vidrio de tamao de poro controlado. En general
los intercambiadores inicos favorecen la unin de iones
elevada carga y radio pequeo. Un incremento en la

concentracin del contrain (respecto a los grupos funcionales

de la resina) reduce el tiempo de retencin. Un incremento en
el pH reduce el tiempo de retencin en las cromatografas de
intercambio catinico mientras que una disminucin del pH
reduce el tiempo de retencin en las cromatografas de
intercambio aninico. Este tipo de cromatografa es
ampliamente utilizado en las siguientes aplicaciones:
purificacin de agua, concentracin de componentes
traza, Ligand-exchange
chromatography, Ion-exchange
chromatography
of
proteins, High-pH
anion-exchange
chromatography of carbohydrates and oligosaccharides, etc.

Cromatografa basada en bioafinidad

Este tipo de cromatografa se basa en la capacidad de las
sustancias biolgicamente activas de formar complejos
estables, especficos y reversibles. La formacin de estos
complejos implica la participacin de fuerzas moleculares como
las interacciones
de
Van
der
Waals, interacciones
electrostticas, interacciones
dipolo-dipolo, interacciones
hidrofbicas y puentes de hidrgeno entre las partculas de la
muestra y la fase estacionaria.

Aplicaciones
Campos de Aplicacin de HPLC

Frmacos: Antibiticos, sedantes esteroides, analgsicos

Bioqumica: Aminocidos, protenas, carbohidratos, lpidos
Productos
de
alimentacin:
Edulcorantes
artificiales,
antioxidantes, aflatoxinas, aditivos
Productos de la industria qumica: Aromticos condensados,
tensoactivos, propulsores, colorantes
Contaminantes: fenoles, Pesticidas, herbicidas, PCB
Qumica forense: Drogas, venenos, alcohol en sangre,
narcticos
Medicina clnica: cidos biliares, metabolitos de drogas, extractos
de orina, estrgenos.

Algunas aplicaciones importantes de la HPLC preparativa

Separacin y purificacin de metabolitos

Separacin y purificacin de los metabolitos de las drogas
procedentes de muestras de orina
Purificacin y separacin de enantimeros
Purificacin de compuestos naturales
Purificacin y caracterizacin de enzimas y protenas

ESPECTROFOTOMETRA:
La espectrometra es la tcnica espectroscpica para tasar la
concentracin o la cantidad de especies determinadas.
En la espectrofotometra se aprovecha la absorcin de radiacin
electromagntica en la zona del ultravioleta y visible del espectro. La
muestra absorbe parte de la radiacin incidente en este espectro y
promueve la transicin del analito hacia un estado excitado,
transmitiendo un haz de menor energa radiante. En esta tcnica se
mide la cantidad de luz absorbida como funcin de la longitud de
onda utilizada.
Transmitancia:
La figura muestra un haz de radiacin paralela antes y despus
de que ha pasado a travs de una capa de solucin que tiene
un espesor de b cm y una concentracin c de una especie
absorbente. Como consecuencia de interacciones entre los
fotones y las partculas absorbentes, la potencia del haz es
atenuada. La transmitancia T de la solucin es entonces la
fraccin de la radiacin incidente transmitida por la solucin:

La tramitancia a menudo se expresa en porcentaje.

Absorbancia
La absorbancia A de una solucin se define mediante la
ecuacin:

Medicin de Transmitancia y Absorbancia La transmitancia y la

absorbancia
se
miden
en
un
instrumento
llamado
espectrofotmetro, la solucin del analito se debe contener en
algn recipiente transparente, tubo o celda.

Como se ve en la representacin, ocurre reflexin en las

interfases: aire-pared, tanto como en la pared-solucin. La
atenuacin del haz resultante es sustancial. Adems, la
atenuacin de un haz puede ocurrir por dispersin de las
molculas grandes y a veces por absorcin de las paredes del
recipiente. Para compensar estos efectos, la potencia del haz
transmitido por la solucin del analito es comparada
comnmente con la potencia del haz transmitido por una celda
idntica que contiene solamente solvente. Una absorbancia
experimental que se aproxima mucho a la absorbancia
verdadera se obtiene con la ecuacin.

Los espectrofotmetros, estn a menudo, equipados con un

dispositivo que tiene una escala lineal que se extiende de 0 a
100%. De manera de hacer tal instrumento de lectura directa
en porcentaje de transmitancia, se efectan dos ajustes
preliminares, llamados 0%T y 100%T. El ajuste del 0%T se lleva
a cabo mediante un cierre mecnico del detector. El ajuste de
100%T se hace con el cierre abierto y el solvente en el camino
de la luz.
Normalmente el solvente est contenido en una celda que es
casi idntica a las que contienen las muestras. 3 Cuando la
celda del solvente es reemplazada por la celda que contiene la
muestra, la escala da la transmitancia porcentual. Los
instrumentos actuales poseen un sistema electrnico que

realiza la operacin matemtica y da la respuesta directamente

absorbancia. Tambin hay que hacer una calibracin previa con
el solvente o blanco.

Espectrofotometra de masas:
Euna tcnica analtica que permite estudiar compuestos de
naturaleza diversa: orgnica, inorgnica o biolgica (incluyendo
biopolmeros y macromolculas naturales o artificiales) y obtener
informacin cualitativa o cuantitativa. Mediante el anlisis por
Espectrometra de masas es posible obtener informacin de la masa
molecular del compuesto analizado, as como obtener informacin
estructural del mismo, o simplemente detectar su presencia y/o
cuantificar su concentracin. Para ello es necesario ionizar las
molculas, utilizando si fuera preciso una separacin cromatogrfica
(UPLC, GC) previa, y obtener los iones formados en fase gaseosa. Este
proceso tiene lugar en la fuente de ionizacin. Los iones generados
son acelerados hacia un analizador y separados en funcin de su
relacin masa/carga (m/z) mediante la aplicacin de campos
elctricos, magnticos simplemente determinando el tiempo de
llegada a un detector. Los iones que llegan al detector producen una
seal elctrica que es procesada, ampliada y enviada a un ordenador.
El registro obtenido se denomina Espectro de masas y representa las
abundancias inicas obtenidas en funcin de la relacin masa/carga
de los iones detectados.
Aplicaciones
Elucidacin estructural y anlisis cuantitativo de compuestos orgnicos y
organometlicos, biopolmeros y macromolculas orgnicas.
Determinacin de masa exacta.

Equipos:
Cromatgrafo de gases 7890N acoplado a espectrmetro de masas 5977A MS
de Agilent Technologies
Rango de masas: hasta 700 Da
Fuentes de ionizacin: Impacto electrnico (EI)

 Cromatgrafo de gases 6890N acoplado a espectrmetro de masas 5973 inert

de Agilent Technologies
Rango de masas: hasta 800 Da
Fuentes de ionizacin: Impacto electrnico (EI) e Ionizacin
Qumica (CI)

Espectrmetro de masas 5973 inert de Agilent Technologies con un sistema de

introduccin directa SIS Direct Insertion Probe
Rango de masas: hasta 800 Da
Fuente de ionizacin: Impacto electrnico (EI)

Espectrofotometra de llamas:
La espectroscopia de emisin con llama es un mtodo analtico
basado en la medida de la energa radiante emitida por tomos (o
iones o molculas) de un elemento que se encuentra en estado de
vapor. A temperatura ambiente, todos los tomos de una muestra se
encuentran esencialmente en el estado fundamental. Los tomos son
elevados a un estado electrnico excitado trmicamente, es decir, a
travs de colisiones con los gases quemados en la llama. El tiempo de
vida de un tomo en el estado excitado es breve y su vuelta al estado
fundamental va acompaado de la emisin electromagntica y la
longitud de onda de esa radiacin est en correspondencia con la
diferencia de energa entre ambos estados.
Mediante un sistema monocromador o de filtro se asla la zona del
espectro de inters y la intensidad de la seal emitida se mide con un
sistema fotomtrico adecuado. La correlacin entre la intensidad de la
seal y la concentracin del elemento emisor en una solucin permite
la utilizacin de este fenmeno con fines cuantitativos. Si la emisin
se produce por la transicin desde el primer estado excitado al
fundamental se obtienen las llamadas lneas de resonancia que son
las ms intensas y las que se utilizan generalmente en este mtodo.

 ESPECTROSCOPA PARA EL ANLISIS FENLICO DE LA UVA Y

EL COLOR DEL VINO
Espectroscopa una nueva herramienta rapida para el anlisis fenlico
de la uva y del color del vino tinto.
Entre los parmetros que definen la uva tinta, el contenido fenlico es
uno de los factores ms importantes para la calidad final del vino. En
el sector enolgico, existen numerosos estudios sobre la puesta a
punto de sistemas y mtodos de anlisis de los polifenoles. Algunos
utilizan la evaluacin de las clases de compuestos por
espectrofotometra, mientras que otros ponen en prctica anlisis
ms detallados con el objetivo de llegar a la separacin y
cuantificacin de los compuestos. Algunos mtodos recientes utilizan
la espectroscopa IR para permitir un anlisis no destructivo.

Para paliar la ausencia de mtodos de anlisis rpidos, recientemente

se ha desarrollado un nuevo mtodo rpido basado en la
espectroscopa visible, capaz de determinar directamente, en el
viedo, los fenoles presentes en los hollejos de las uvas tintas, la
cantidad de polifenoles totales y el valor de la intensidad colorante de
los vinos.
El enfoque analtico elegido utiliza la evaluacin de un ndice global,
con el objetivo de diferenciar varios niveles de madurez fenlica,
evitando as las calibraciones, al hacer el anlisis directamente en el
viedo.
ESPECTROSCOPA

La espectroscopa o espectroscopia (ambas acentuaciones son

correctas) es el estudio de la interaccin entre la radiacin
electromagntica y la materia, con absorcin o emisin de energa
radiante. Tiene aplicaciones en qumica, fsica y astronoma, entre
otras disciplinas cientficas.
El anlisis espectral en el cual se basa permite detectar la absorcin o
emisin de radiacin electromagntica a ciertas longitudes de onda y
relacionar stas con los niveles de energa implicados en una
transicin cuntica.
Existen tres casos de interaccin con la materia:
- Choque elstico: Existe slo un cambio en el impulso de los
fotones. Ejemplos son los rayos X, la difraccin de electrones y
la difraccin de neutrones.
- Choque inelstico: Por ejemplo la espectroscopa Raman.
- Absorcin o emisin resonante de fotones.
La espectroscopa se relaciona en la mayora de los casos a la tercera
interaccin. Estudia en qu frecuencia o longitud de onda una
sustancia puede absorber o emitir energa en forma de un cuanto de
luz.
La energa de un fotn (un cuanto de luz) de una onda
electromagntica o su correspondiente frecuencia, equivale a la
diferencia de energa de dos estados cunticos de la substancia
estudiada:
E = h x v h
es la constante de Planck, es la frecuencia del haz de luz u onda
electromagntica asociada a ese cuanto de luz y E es la diferencia
de energa. Esta ecuacin es conocida tambin como la ecuacin
bsica de la espectroscopa. Las diferencias de energa entre estados
cunticos dependen de la composicin qumica de la prueba o de la
estructura de la molcula, y es por eso por lo que este mtodo
proporciona informacin importante para qumicos, fsicos y bilogos.
Por medio de un espectrofotmetro se mide el espectro de la luz
(intensidad de la luz absorbida, reflejada o emitida en funcin de la
frecuencia o de la longitud de onda). Los espectros se diferencian
considerablemente de elemento a elemento.
En general, se denota como espectro a la distribucin de la intensidad
en funcin de la frecuencia o de la longitud de onda.
Adems de la luz visible, la espectroscopa cubre hoy en da una gran
parte del espectro electromagntico, que va de los infrarrojos hasta
los rayos gamma.
El objetivo de la espectroscopa es obtener informacin acerca de una
prueba o de un cuerpo radiante, por ejemplo:

- La estructura interna o la temperatura (por ejemplo, de estrellas).

- La composicin o la dinmica una reaccin qumica.
- La espectroscopa analtica identifica tomos o molculas por medio
de sus espectros.

Linkografa

https://es.wikipedia.org/wiki/Espectr%C3%B3metro_de_masas
http://www.espectrometria.com/
https://es.wikipedia.org/wiki/Espectrofot%C3%B3metro
https://es.wikipedia.org/wiki/Cromatograf%C3%ADa_l

%C3%ADquida_de_alta_eficacia
http://www.ucm.es/data/cont/docs/650-2013-12-02-gases%20l
%C3%ADquidos.pdf
http://urbinavinos.blogspot.pe/2011/08/espectroscoia-para-elanalisis-fenolico.html