RUTA CLSICA: ALGUNOS DETALLES MOLECULARES.

Requiere de la participacin
de complejos inmunes. Implica la activacin de C1 a C9.
*Unin de C1: El complejo antgeno - anticuerpo desencadena la cascada a travs de la etapa
de reconocimiento,

con

participacin

de

C1, formado por las subunidades q, r, s. El

reconocimiento es efectuado por C1q (cadenas: A,B y C), que cuenta con 2 porciones: fibrilar y
globular. Posee dmeros A-B y dmeros C-C, unidos por puentes disulfuro. La porcin fibrilar
es sensible a la colagenasa, C1r y C1s se unen a la porcin fibrilar de C1q, en forma no
covalente. Al activarse, cada cadena se fragmenta y el sitio cataltico aparece en el fragmento
menor, con presencia de cistena. Esto permite que la actividad enzimtica se mantenga
incorporada al complejo C1q-Ac-Ag. Por su parte, C1q se une, en forma no covalente, a travs
de sus porciones globulares, al dominio CH2 de la porcin Fc Ig G1, 2 y 3, presentes en
complejos inmunes. IgG4 no es activadora eficiente.
Las IgG e IgM no activan al complemento cuando estn libres en el suero porque C1q debe
formar un complejo con 2 molculas de Ac en que Fc se debe encontrar a cierta distancia. En la
IgM los Fc estn a una distancia adecuada, ya que es un pentmero de monmeros de
inmunoglobulina tetramrica. Esta molcula es capaz de producir la lisis del eritrocito. Cuando
reacciona con antgenos en membrana, cambia de estructura y su dominio CH3 se une a la parte
globular de C1q; adems, media el ataque temprano del sistema del complemento.
C1r tendra una capacidad limitada de autoactivarse.
Activacin de C4 y C2: C1s activa secuencialmente a C4, generando C4a y C4b, y luego a C2,
generando C2a y C2b. Esta etapa cumple al menos 3 funciones, mediante la unin covalente de
C4b y C3b sobre la superficie activante:
a) Se genera C3 convertasas: mediante C4 y C2, continuando la activacin de C3 para generar
C5-convertasas, con posterior activacin de C5 y generacin de MAC.
b) Se facilita la fagocitosis a travs de la unin a los receptores para C3b y C4b presentes en la
superficie de los fagocitos.
c)

El depsito covalente de C3 y C5, direcciona los antgenos hacia rganos linfoides,

facilitando as la induccin de la respuesta inmune adaptativa.

C4 acta como matriz o cofactor positivo esencial para el ensamblaje de las C3 y C5

convertasas. Le permiten interactuar con:
a)

C1s de la ruta clsica, o MASP2 de la ruta de las lectinas, para su activacin.

b)

Membranas biolgicas atacadas (unin covalente).

c)

C2, para formar la convertasa de C3.

d)

CR1, de clulas fagocticas, lo que le permite actuar como opsonina.

e)

C4bp, lo que media su inactivacin, cuando pasa a fase fluida.

f)

I, lo que media su inactivacin en fase fluida, cuando es reconocido por C4bp.

g)

C3, requisito para la activacin de ste por parte de C2b. As, C3 puede actuar como

opsonina, o formar parte de la convertasa de C5.

Convertasa de C3: La generacin de esta convertasa es un hecho de importancia central en la
activacin del sistema. Reacciona con C3 a nivel de membrana, se encuentra en fase fluida,
generando C3b. C3 es digerido en su cadena alfa por el sitio cataltico presente en C2b del
complejo C4b,2b (C3 convertasa). 3 funciones, derivadas de C3b:
a) Facilitar la fagocitosis.
b) Sitio de unin para C5, protena que es modulada y digerida por C2b presente en la nueva
convertasa de C5 o C4b,2b,3b.
c) Direccionar antgenos hacia rganos linfoides, facilitando as la induccin de la respuesta
inmune adaptativa. Funcin compartida con C4, dado que el receptor CR1 de los linfocitos B es
comn para C3b y C4b.
Se unen covalentemente a las superficies celulares y son capaces de generar las C3 y C5
convertasas por accin de dos serino proteasas, tambin estructural y funcionalmente anlogas
(C2b y Bb).
Solo el 10-15% del total del C3b generado se une a las clulas. Es otro paso de amplificacin
ya que aproximadamente 200 molculas de C3b se depositan sobre la clula por cada C3
convertasa. Al igual que en el caso de C4b, la gran cantidad de C3b que pasa a la fase fluida
debe ser inactivada.

Convertasa de C5: fragmenta a C5 en C5a (potente anafilotoxina) y C5b, ltimo paso

enzimtico en la activacin del complemento, servir para la generacin del complejo de ataque
de membranas biolgicas (MAC).
Mecanismos que confinan la activacin del complemento a las membranas blanco
(target) o culpables, en la ruta clsica.
a) La activacin de C1 requiere de inmunoglobulinas que estn a una distancia crtica (en el
antgeno agregadas por otros mecanismos) o de una molcula de IgM unidas a la superficie
antignica. Esto permitir la unin de C1q a dominios inmunoglobulnicos CH2 CH3,
respectivamente.
b)

C2b, elemento enzimtico esencial de las convertasas de C3 y de C5, se une a las

membranas solo a travs de C4b, el que a su vez est unido covalentemente a esas superficies
antignicas.
c) La corta vida de los sitios de unin de C3b y C4b restringe la unin de estas molculas a un
rea circular de 40 nm de radio, cuyo centro est dado por la molcula de C1s o por la C3
convertasa.

6.

LA RUTA ALTERNA: ALGUNOS DETALLES MOLECULARES. Proporciona al

hospedador un mecanismo de defensa innata. Se realiza en ausencia de anticuerpos especficos.

Participan seis protenas plasmticas: C3, B, D, H, I y P, en donde B, D y P son exclusivas de
esta va. Todas las protenas regulan continuamente. El mecanismo de amplificacin genera
C3b, que se unen a antgenos y hospedador, ste ltimo con protenas reguladoras presentes en
el plasma, que inactivan a las C3b que atacan a sus propias clulas. Los organismos sensibles al
ataque de la ruta alterna incluyen bacterias, hongos, virus, clulas tumorales inducidas por virus,
otras lneas de clulas tumorales y eritrocitos humanos carentes de DAF (factor acelerador del
decaimiento de convertasas).
El C3b puede funcionar como opsonina pasar a formar parte de C3 o C5 convertasas
alternas. Las C3 convertasas neoformadas pueden generar ms C3b que se deposita hasta que la

superficie es saturada o hasta que se agota el stock de C3. La ruta alterna

deposita hasta 2

millones de C3b en la superficie de un glbulo rojo, en menos de 5 min.

6.1. Caractersticas principales de las protenas que participan en la ruta alterna

B:

Contiene histidina, cido esprtico y serina con otras serinoproteasas.

D:

Circula en forma activa. Es una proteasa con su sustrato B, y al unirse a C3b libera el
fragmento Bb. Anlogo a C1s.

I:

Serino proteasa que acta como factor regulador negativo. Digiere las cadenas de
C3b y de C4b. Requiere del cofactor H para ejercer su funcin enzimtica sobre C3b, en
fase fluida. Tiene como cofactor a CR1 al actuar sobre C3b y C4b unidos a membranas.
Con C4-bp acta sobre C4b.

H:

Cofactor regulador negativo que se une a C3b en fase fluida cuando se activa cualquiera
de las rutas. La cadena se torna sensible a la digestin por I.

P:

Regulador positivo, exclusivo de la ruta alterna. Se activa en presencia de C3b,Bb (C3b

convertasa alterna) y estabiliza este complejo y a la C5 convertasa alterna, (C3b)n,Bb, (n>1)

Presenta 4 etapas:
a)

Iniciacin. C3 alterado por hidrlisis de su enlace tioster. Se forma C3(H 20), por corta

duracin y es una protena resistente a la inactivacin por H e I, que mantiene intacto el extremo
amino terminal de su cadena alfa; tambin, forma un complejo con B nativo, en presencia de
concentraciones fisiolgicas de Mg2+, despus de la hidrlisis.
El complejo C3(H20),B es activado por D, formndose una C3 convertasa de fase fluida
C3(H20),Bb.. C3(H20),Bb es la primera enzima capaz de generar C3b metaestable que puede
difundir durante 60

seg, hasta encontrar una superficie receptiva (grupos aminos

hidroxilos).
La ruta alterna est siempre iniciada espontneamente. Si contina o no depender de
la naturaleza de la superficie receptiva.

b) Depsito de C3b. La habilidad del enlace tioster del C3b metaestable para reaccionar con
carbohidratos (grupos hidroxilos), protenas (grupos aminos), capacita a C3b para estar sobre
los microorganismos. Generado constantemente por C3(H2O),Bb, en fase fluida.
c) Reconocimiento. En general, C3b en fase fluida y C3b unido a superficies o membranas del
hospedador (no activadores por definicin) es rpidamente inactivado por H e I. En cambio,
cuando C3b se une a partculas invasoras activantes, la C3 y C5 convertasas son protegidas de la
destruccin mediada por las protenas reguladoras de la fase fluida. C3b, unido a superficies
activantes, no muestra afinidad por el factor H, mientras que su afinidad por el factor B y la
properdina permanece inalterada.
d) Amplificacin y Regulacin. La retroalimentacin positiva, dependiente de C3b, es una
caracterstica exclusiva de la activacin de la ruta alterna del complemento, o sea, la convertasa
de C3 es capaz de generar C3b que tienen la capacidad potencial de generar nuevas convertasas
de C3 y C5. D convierte B en Bb slo cuando ste est unido a C3b.

Este proceso es

controlado por los factores H e I. As, la C3 convertasa y el C3b depositado en una superficie
activadora son relativamente resistentes a la inactivacin por H e I.
La convertasa de C3 estabilizada, C3b,Bb,P, al actuar sobre C3, genera una gran cantidad de
fragmentos C3b parte de los cuales, en presencia de Mg 2+, pueden combinarse con el factor B
que se hace sensible a la accin de D. Se genera as la convertasa de C3 alterna que puede
repetir el proceso.
En sntesis, el depsito de C3b sobre partculas activadoras tiene cuatro caractersticas
importantes: a) Depende del tipo de partcula activante, b) Tiene un perodo de latencia,
probablemente correspondiente a la etapa de reconocimiento, c) Aumenta exponencialmente,
debido a la amplificacin o retroalimentacin y, d) Alcanza un plateau, correspondiente al
agotamiento de componentes o de receptores de superficie.
Properdina: se une slo a la convertasa de C3 o de C5 alterna que se encuentran unidas a
membranas. Participa una vez que se inicia la amplificacin. As, C3b,Bb,P tiene una vida
media ms larga que C3b,Bb.

7. FASE TERMINAL: GENERACIN DEL COMPLEJO DESTRUCTOR DE

MEMBRANAS. Participan siete componentes del Sistema del Complemento, C5-C7, C8 -,
C9 (Tabla 1) y la protena reguladora S. El ensamblaje del MAC presenta 2 etapas: a)
ensamblaje del complejo C5b-7 y b) unin de C8 y polimerizacin de C9.
Generacin de C5b-7: C5b, unido al C3b de la convertasa, tiene un sitio hidrofbico aceptor
para C6, generndose el complejo C5b-6, el que facilita la incorporacin de C7. A la vez, el
complejo C5b-7 se libera de la C5 convertasa y el sitio hidrofbico en C7 permite su entrada en
la bicapa lipdica de la membrana celular. C8 se une al complejo C5b-7 va su cadena , lo que
permite que su cadena se inserte en la membrana, en el contexto de un complejo C5b-8.
La activacin proteolitca de C5 es realizada por cualquiera de las dos C5 convertasas. C5 se
une a C3b de la C5 convertasa con modulacin de substrato y accin proteoltica, por C2b
(clsica y de las lectinas) o Bb (alterna). Como productos se libera C5a y el fragmento C5b
permanece unido a la sub-unidad C3b de la C5 convertasa y modula a C6, para iniciar la formacin de un pilar (formado por C5b a C8) sobre el cual se ordenar C9 para formar el tbulo.
La digestin de C5 es el ltimo paso enzimtico. C5b se une con C6. El complejo C5b-6
permanece an unido al C3b de la convertasa y modula a C7 producindose una transicin
irreversible hacia un complejo anfiflico. Considerando que C5b est unido al C3b de las
convertasas, cuya insercin es muy eficiente en membrana. Por otra parte, si la superficie
activante no es parte de una membrana fosfolipdica, C5b-7 no tendr dnde unirse y el
complejo ser liberado a la fase fluida, generando MAC sobre membranas inocentes. Esto es
evitado por protenas plasmticas o inhibidores de C5b-7 como la protena S. En condiciones
fisiolgicas, CD59, una protena integral de membranas autlogas, inhibe la incorporacin de
C8 y C9 a ese complejo. C5 no forma enlaces covalentes con membranas.
Unin de C8 y polimerizacin de C9: C8 se une al pilar heteropolimrico C5b-C7 a travs de
su subunidad beta. C8 alfa-gama (hidrofbico) inicia la polimerizacin de C9. Todas las
subunidades permiten la funcionalidad de C8 necesarias para que C8 exprese su funcin. C9 se

asocia a C5b-C8, generndose as un MAC maduro (C5b-9), muy eficiente para promover la
lisis celular, principalmente por la generacin de canales permeables a los iones. Esta estrate gia
es similar a la usada por las clulas T killer o citotxicas y NK que destruyen a la clula
blanco insertando una estructura tubular (perforina) en sus membranas plasmticas. Esta
estructura tubular tiene una notoria similitud al MAC.
Los componentes terminales del complemento son hidroflicos en su estado no activado. Para
destruir o alterar las membranas externas de los organismos invasores, estos componentes deben
sufrir una transicin a un estado anfiflico, para poder insertarse en la fase lipdica de las
membranas.

Esto implica una serie de interacciones entre protenas y el ensamblaje de

complejos macromoleculares heteropolimricos con dominios hidroflicos e hidrofbicos.

La polimerizacin de C9 ocurre simultneamente con el desplegamiento de los monmeros que,
en su forma globular hidroflica no activa, tienen un dimetro de 50A o. Se genera as una forma
alargada anfiflica de 160Ao de longitud.
El poli C9 en solucin es resistente a la disociacin por SDS. La estabilidad del tbulo frente a
SDS se explica por la generacin de enlaces disulfuro entre los monmeros, importante para
cumplir su funcin citoltica en el MAC, resistiendo las defensas proteolticas de las clulas
atacadas.
En el MAC, el receptor de poli C9, esto es C5b-8, es detectado como un apndice de 150 Ao
ubicado en la salida del tbulo. Este apndice se disocia en presencia de SDS, mientras que la
estructura tubular permanece intacta. La estructura tubular del MAC es diferente a la de
poli-C9 ensamblado in vitro. El MAC es una estructura heteropolimrica compuesto de C5b,
C6, C7, C8 - y C8 , una molcula de cada uno, y 10-17 molculas de C9.
Efecto funcional de la insercin del MAC en las membranas: El MAC, insertado en la
membrana, ocupa una rea del 10.000 (A O)2. Si se insertan grandes nmeros de este
heteropolmero, por ej. sobre membranas bacterianas, la superficie total de la bacteria puede
aumentar ms de dos veces. Evidentemente, esta expansin dramtica puede ser devastadora si
consideramos slo el efecto mecnico implicado. Si los atacados son glbulos rojos, la insercin

de slo 800 MAC har que estas clulas pierdan su forma bicncava y adoptarn una forma
esfrica. Es muy posible que slo el efecto mecnico de la insercin de los MACs provoque la
muerte celular independientemente de otros efectos osmticos o metablicos que los canales
puedan inducir. Entre estos otros efectos estn:
1. Entrada de Ca2+ al ambiente intracelular con la activacin indiscriminada de una variedad de
rutas metablicas.
2. Salida K+, entrada Na+. La clula activa una serie de mecanismos de bombeo compensatorio
lo cual conduce a desembolso indiscriminado de ATP, con altos gastos de energa, sucesos que
pueden acelerar la muerte celular.
Existen algunos tipos celulares que han desarrollado mecanismos de escape al ataque por MAC.
As, las bacterias Neisseria gonorrhea, Salmonella minesota, ciertos tipos de Escherichia coli,
y algunas lneas de clulas neoplsicas, activan el complemento, hasta la formacin del MAC,
pero, usando diferentes mecanismos, resisten la accin de este complejo.