PRACTICA #04

1. PROPIEDADES DE LOS MEDIOS DE CUTIVOS

El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve
afectado por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos,
son ajenos por completo al propio medio.

1- DISPONIBILIDAD DE NUTRIENTES ADECUADOS

Un medio de cultivo adecuado para la investigacin microbiolgica ha de
contener, como mnimo, carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales
inorgnicas. En muchos casos sern necesarias ciertas vitaminas y otra
sustancia inductoras del crecimiento. Siempre han de estar presentes las
sustancias adecuadas para ejercer de donantes o captadores de electrones
para las reacciones qumicas que tengan lugar. Todas estas sustancias se
suministraban originalmente en forma de infusiones de carne, extractos de
carne o extractos de levadura. Sin embargo, la 5 preparacin de estas
sustancias para su aplicacin a los medios de cultivo provocaban la prdida
de los factores nutritivos lbiles. Actualmente, la forma ms extendida de
aportar estas sustancias a los medios es utilizar peptona que, adems,
representa una fuente fcilmente asequible de nitrgeno y carbn ya que la
mayora de los microorganismos, que no suelen utilizar directamente las
protenas naturales, tienen capacidad de atacar los aminocidos y otros
compuestos ms simples de nitrgeno presentes en la peptona. Ciertas
bacterias tienen necesidades nutritivas especficas por lo que se aade a
muchos medias sustancias como suero, sangre, lquido asctico, etc.
Igualmente pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y sales minerales
como las de calcio, magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias
promotoras del crecimiento, generalmente de naturaleza vitamnica. Muy a
menudo se aaden al medio de cultivo ciertos colorantes, bien como
indicadores de ciertas actividades metablicas o bien por sus capacidades
de ejercer de inhibidores selectivos de ciertos microorganismos.
2- CONSISTENCIA ADECUADA DEL MEDIO
Partiendo de un medio lquido podemos modificar su
aadiendo productos como albmina, gelatina o agar,
obtendramos medios en estado semislido o slido.
solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de
microorganismos no se desarrollan adecuadamente a

consistencia
con lo que
Los medios
que muchos
temperaturas

inferiores al punto de fusin de este solidificante y de que otros tienen la

capacidad de licuarla. Actualmente los medios slidos son de uso universal,
por su versatilidad y comodidad, pero hay tambin gran cantidad de medios
lquidos cuyo uso est ampliamente extendido en el laboratorio.

3- PRESENCIA (O AUSENCIA) DE OXGENO Y OTROS

GASES
Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmsfera con tensin de
oxgeno normal. Algunas pueden obtener el oxgeno directamente de
variados sustratos. Pero los microorganismos anaerobios estrictos slo se
desarrollarn adecuadamente en una atmsfera sin oxgeno ambiental. En
un punto intermedio, los microorganismos microaerfilos crecen mejor en
condiciones atmosfricas parcialmente anaerobias (tensin de oxgeno muy
reducida), mientras los anaerobios facultativos tienen un metabolismo
capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones.

4- CONDICIONES ADECUADAS DE HUMEDAD

Un nivel mnimo de humedad, tanto en el medio como en la atmsfera, es
imprescindible para un buen desarrollo de las clulas vegetativas
microbianas en los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas
condiciones mnimas en las estufas de cultivo a 35-37C proporcionando
una fuente adecuada de agua que mantenga la humedad necesaria para el
crecimiento de los cultivos y evitar as que se deseque el medio.

5- LUZ AMBIENTAL
La mayora de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad
que en presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sera el
caso de los microorganismos fotosintticos.
6- pH
La concentracin de iones hidrgeno es muy importante para el crecimiento
de los microorganismos. La mayora de ellos se desarrollan mejor en
medios con un pH neutro, aunque los hay que requieren medios ms o
menos cidos. No se debe olvidar que la presencia de cidos o bases en
cantidades que no impiden el crecimiento bacteriano pueden sin embargo
inhibirlo o incluso alterar sus procesos metablicos normales.

7- TEMPERATURA
Los microorganismos mesfilos crecen de forma ptima a temperaturas
entre 15 y 43C. Otros como los psicrfilos crecen a 0C y los temfilos a
80C o incluso a temperaturas superiores (hipertemfilos). En lneas
generales, los patgenos humanos crecen en rangos de temperatura
mucho ms cortos, alrededor de 37C, y los saproftos tienen rangos ms
amplios.

8- ESTERILIDAD DEL MEDIO

Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estriles para evitar
la aparicin de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso
impedir el crecimiento microbiano normal del o de los especimenes
inoculados en dichos medios. El sistema clsico para esterilizar los medios
de cultivo es el autoclave (que utiliza vapor de agua a presin como agente
esterilizante)
2. PREPARACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros
componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los
microorganismos. Puesto que la diversidad metablica de los microorganismos es
enorme, la variedad de medios de cultivo es tambin muy grande. La mayora de
los medios de cultivo se comercializan en forma de liofilizados que es preciso
rehidratar. La preparacin de un medio de cultivo se reduce en general a pesar la
cantidad de medio y disolverla en agua destilada (libre de inhibidores del
crecimiento) siguiendo las instrucciones del fabricante.
PREPARACIN DE UN MEDIO SLIDO EN PLACA.
1. Pesar la cantidad de medio (si el preparado contiene agar debemos
aadirlo a una concentracin de 15 g/l.) y rehidratarlo con agua destilada en
una botella.
2. Autoclavar la botella sin cerrar totalmente el tapn de rosca.
3. Sacar del autoclave, enroscar del todo el tapn e introducir la botella en
un bao a 40C al menos durante 30 minutos.
4. Distribuir el medio en las placas de Petri que estn estriles dentro de
una campana de flujo laminar o en las proximidades del mechero,
flameando bien la boca de la botella para evitar las contaminaciones.
5. Dejar que el medio solidifique

 PREPARACIN DE MEDIO SLIDO EN TUBO (SLANT).

1. Pesar el medio que contenga agar y
rehidratar con agua destilada en un matraz.
2. Fundir el medio en un horno microondas o
en una placa caliente. El medio debe hervir
hasta que se vuelva transparente.
3. Distribuir rpidamente el medio en los
tubos antes de que comience a solidificar.
Para ello se emplear una pipeta y los tubos
no se llenarn ms de un tercio de su
volumen.
4. Autoclavar.
5. Sacar de la autoclave e inclinar los tubos
sobre la poyata para obtener tubos con medio
en slant.

PREPARACIN DE MEDIO LQUIDO EN TUBO (CALDO).

1. Pesar y rehidratar el medio.
2. Distribuirlo con una pipeta en los tubos (sin llenarlos ms de 1/3 de su
volumen).
3. Autoclavar.
4. Sacar de la autoclave y dejar enfriar.

Todos los medios se guardan en nevera a 4C.

3. CLASES DE MEDIOS DE CUTIVOS

Segn sus cualidades fsicas, se distinguen:

LQUIDOS
SEMISLIDOS
SLIDOS

SEGN SU ORIGEN:

NATURALES: son los preparados a partir de

sustancias naturales de origen animal o vegetal
como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya
composicin qumica no se conoce exactamente.

SINTTICOS: son los medios que contienen

una composicin qumica definida cualitativamente y cuantitativamente. Se
utilizan para obtener resultados reproducibles.

SEMISINTTICOS: son los sintticos a los que se les aaden factores

de crecimiento bajo una forma de un extracto orgnico complejo, como por
ejemplo extracto de levadura.

SEGN SU FORMULACIN:

QUMICAMENTE DEFINIDOS: se conoce la cantidad exacta de cada

uno de los compuestos que hay en el medio.

COMPLEJOS: se realizan a partir de extractos naturales (extracto

de levadura, sangre, etc.); no se conoce exactamente cul es la composicin
del medio; sin embargo, presenta la ventaja de que ya estn presentes todos o
casi todos los elementos que una clula puede requerir.

SEGN SU USO:

MEDIO GENERAL: medio en donde crecen todo tipo de

microorganismos, excepto los que necesitan condiciones especiales (por
ejemplo, agar CLED).

MEDIO SELECTIVO: permite seleccionar el crecimiento de una especie

o grupo determinado (hongos, bacterias entricas, protozoos...).

MEDIO DIFERENCIAL: permite identificar una especie con otra, ambas

en el mismo medio. Puede ser por su crecimiento, su metabolismo, su
respiracin, etc. (por ejemplo, medio de McConkey).

MEDIO DE ENRIQUECIMIENTO: contiene los nutrientes necesarios

para apoyar el crecimiento de una amplia variedad de microorganismos, se
utiliza para la cosecha de diferentes tipos de microorganismos en un mismo
medio.

MEDIO MNIMO: contiene la mnima cantidad de nutrientes posible que

permite el crecimiento de una especie;

MEDIO
DE
TRANSPORTE:
preparado
para
servir
como
almacenamiento temporal a especmenes transportados o en transferencia;
mantienen su viabilidad y su concentracin;

simple
4. IMPORTANCIA DE LOS MEDIOS DE CULTIVOS

Un mtodo fundamental para estudiar las bacterias es cultivarlas en un medio

lquido o en la superficie de un medio slido de agar. Los medios de cultivo
contienen distintos nutrientes que van, desde azcares simples hasta sustancias
complejas como la sangre o el extracto de caldo de carne. Para aislar o purificar
una especie bacteriana a partir de una muestra formada por muchos tipos de

bacterias, se siembra en un medio de cultivo slido donde las clulas que se

multiplican no cambian de localizacin; tras muchos ciclos reproductivos, cada
bacteria individual genera por escisin binaria una colonia macroscpica
compuesta por decenas de millones de clulas similares a la original. Si esta
colonia individual se siembra a su vez en un nuevo medio crecer como cultivo
puro de un solo tipo de bacteria. Muchas especies bacterianas son tan parecidas
morfolgicamente que es imposible diferenciarlas slo con el uso del microscopio;
en este caso, para identificar cada tipo de bacteria, se estudian sus caractersticas
bioqumicas sembrndolas en medios de cultivo especiales. As, algunos medios
contienen un producto que inhibe el crecimiento de la mayora de las especies
bacterianas, pero no la de un tipo que deseamos averiguar si est presente. Otras
veces el medio de cultivo contiene determinados azcares especiales que slo
pueden utilizar algunas bacterias. En algunos medios se aaden indicadores de
pH que cambian de color cuando uno de los nutrientes del medio es fermentado y
se generan catabolitos cidos. Si las bacterias son capaces de producir
fermentacin, generan gases que pueden ser apreciados cuando el cultivo se
realiza en un tubo cerrado. Con otros medios de cultivo se identifica si las
bacterias producen determinadas enzimas que digieren los nutrientes: as, algunas
bacterias con enzimas hemolticas (capaces de romper los glbulos rojos)
producen hemlisis y cambios apreciables macroscpicamente en las placas de
agar-sangre. Los diferentes medios y tcnicas de cultivo son esenciales en el
laboratorio de microbiologa de un hospital, pues sirven para identificar las
bacterias causantes de las enfermedades infecciosas y los antibiticos a los que
son sensibles esas bacterias.