AO DE LA DIVERSIFICACIN PRODUCTIVA Y DEL FORTALECIMIENTO

DE LA EDUCACIN

UNIVERSIDAD NACIONAL JOS FAUSTINO SNCHEZ CARRIN

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS, IND. ALIMENTARIAS Y ING.

AMBIENTAL
ESCUELA DE INGENIERIA AMBIENTAL

BIOQUIMICA

PRACTICA N 03
MESA N 01 7:00 9:00 pm
CDOVA MELNDEZ, Gabriela Georgette
DIAZ
HUERTA, Migayl Sogel
FACTORES
QUE
DIAZLA
RAMIREZ, Nuria del Pilar
ALTERAN
ACTIVIDAD
QUEZADA
PACHECO, Brian Stephano30 07 15

CATALITICA DE
LOS ENZIMAS

FACTORES QUE ALTERAN LA ACTIVIDAD

CATALITICA DE LAS ENZIMAS
I.

OBJETIVOS
Demostrar el efecto de los factores: concentracin de
sustrato, concentracin de enzima, concentracin de pH y
temperatura sobre la actividad enzimtica de la amilasa
salival sobre el almidn.

II.

FUNDAMENTO TEORICO
La eficacia de un enzima se mide por la velocidad de
transformacin del sustrato en producto. La actividad de las
enzimas se ve afectada por diversos factores entre los que
destacan los siguientes:
I.1.

CONCENTRACIN DEL SUSTRATO

En toda reaccin catalizada por un enzima, si se mantiene constante

la concentracin del E, la velocidad de la reaccin aumenta
exponencialmente al incrementarse la concentracin del sustrato, ya
que al existir ms molculas de sustrato es ms probable el
encuentro con el enzima y la formacin del complejo E-S.
Este aumento de velocidad es rpido para concentraciones bajas de
sustrato y, a medida que este aumenta, se va haciendo ms lento
hasta que la concentracin del sustrato alcanza un cierto valor, a
partir del cual, aunque aumente la concentracin del mismo, no
aumenta la velocidad de la reaccin. Esto es debido a que el enzima
esta saturada por el sustrato; es decir, todas las molculas del
enzima estn unidas al sustrato formando el complejo E-S. Cuando
ocurre esto, se dice que la reaccin ha alcanzado la velocidad
mxima.
En 1913 Leonor Michaelis y a Maud Menten estudiaron la variacin de
la velocidad de una reaccin enzimtica en funcin de la
concentracin del sustrato y propusieron la siguiente ecuacin, que
es vlida para concentraciones de sustrato no saturante.

Donde:
V es la velocidad de la reaccin para una determinada
concentracin de sustrato.
Vmax es la velocidad mxima de la reaccin.
[S] es la concentracin del sustrato.
Km es una constante denominada constante de MichaelisMenten, es caracterstica de cada enzima.
Si en la ecuacin (1) hacemos V = Vmax
obtenemos que Km = [S]

y despejamos Km

Km. Se puede definir como la concentracin de sustrato necesario

para que la velocidadde la reaccin sea la mitad de la velocidad
mxima. Se mide en unidades de concentracin. La Km nos indica la
afinidad de un enzima por su sustrato:
Si Km es alta indica que el enzima tiene poca afinidad por el sustrato
ya que se necesita una concentracin de sustrato elevada para
alcanzar la mitad de la velocidad mxima.
Si Km es baja indica que el enzima tiene mucha afinidad por el
sustrato ya que se necesita una concentracin de sustrato baja para
alcanzar la mitad de la velocidad mxima.
I.2.

TEMPERATURA

La T influye en la actividad enzimatica. En general por cada 10C

que aumente la temperatura la velocidad de la reaccin aumenta de
2 a 4 veces. Esta regla se cumple hasta que la temperatura alcanza
un valor mximo (T ptima) donde la actividad es mxima. Esto se
debe a que al aumentar la T aumenta el movimiento de las
molculas y, por tanto aumenta la probabilidad de encuentro entre el
S y el E.
Si la T aumenta por encima de la T ptima, disminuye e incluso
cesa la actividad enzimtica debido a que la enzima se desnaturaliza.
Cada enzima posee una T ptima, en las enzimas humanas suele
estar alrededor de 37C. Los animales poiquilotermos debido a que
carecen de mecanismos para regular la T corporal, se ven obligados

a hibernar en la estacin fra pues la actividad de sus enzimas debido

a las bajas temperaturas es muy baja.
I.3.

pH

El pH es otro factor que influye en la actividad enzimtica, debido a

que el pH influye en la ionizacin de los grupos funcionales de los
aminocidos que forman la protena enzimtica. Cada enzima realiza
su accin dentro de un determinado intervalo de pH, dentro de este
intervalo habr un pH ptimo donde la actividad enzimatica ser
mxima. Por debajo del pH minimo o por encima del pH mximo el
enzima se inactiva ya que se desnaturaliza. En la mayora de las
enzimas el pH ptimo esta prximo a la neutralidad, aunque hay
excepciones.
I.4.

INHIBIDORES

Son compuestos qumicos que se unen al enzima, en distintos puntos

del mismo y disminuyen o incluso impiden su actividad. Estos
compuestos pueden ser de distintos tipos: iones, molculas orgnicas
y a veces el producto final de la reaccin. A la accin que realizan se
la denomina inhibicin. La inhibicin puede ser:
Inhibicin
irreversible:
Cuando el inhibidor impide
permanentemente la actividad enzimtica, bien porque se une
de forma permanente con grupos funcionales importantes del
centro activo o bien porque altera su estructura. A estos
inhibidores se les denomina venenosy a la inhibicin que
realizan se la denomina envenenamiento del enzima. Ej. La
penicilina que inhibe las enzimas que sintetizan la pared
bacteriana. El in cianuro acta sobre la citocromo oxidasa
(enzima respiratorio).
Inhibicin reversible: El inhibidor se une al enzima de forma
temporal mediante enlaces dbiles e impide el normal
funcionamiento
del
mism,
pero
no
la
inutiliza
permanentemente.
Puede ser de dos tipos:
Competitiva: El inhibidor es similar al sustrato y se puede unir
al centro activo del enzima impidiendo que lo haga el sustrato.
Es decir ambos, inhibidor y sustrato compiten por unirse al
centro activo del enzima. La accin suele anularse aumentando
la concentracin del sustrato

 No competitiva: El inhibidor no compite con el sustrato, puede

actuar de 2 formas:
- Sobre el enzima, unindose a el en un lugar diferente al centro
activo y modificando su estructura lo que dificulta que el
enzima se pueda unir con el sustrato.
- Sobre el complejo E-S unindose a l y dificultando su
desintegracin y por lo tanto la formacin de los productos.

III.

MATERIALES Y REACTIVOS

IV.

Solucin de almidn
Enzima: Solucin de alfa amilasa salival dializada al 1%
Solucin buffer fosfato 0,1 M a pH 4,6 ; 6,8 y 9,0
Solucin yodo yodurada (Lugol)
Solucin cloruro de sodio 0,2 %

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
A. COLECCIN DE SALIVA
El alumno donante no debe haber ingerido alimento unas horas
antes como mnimo. Previamente se tiene que enjuagar la boca
con agua, luego manteniendo la boca cerrada por unos 5 7
minutos esperar que su boca se llene de saliva. Luego en un
vaso dejara fluir por gravedad la saliva para evitar que se forme
espuma.

B. PREPARACIN DE LA SOLUCIN DE SALIVA AL 1%

Previamente la saliva recolectada se debe filtrar y luego medir
0,5 mL y diluirlo con agua destilada en una probeta de 50 mL.
I.5.

Seguir las indicaciones de las siguientes tablas:

a. Batera N 01
TUBO
REACTIVO
Sol.
Almidn

10

1,5

1%
Buffer pH
4,6
Buffer pH
5
5
6,8
Buffer pH
5
9,0
Sol. NaCl
1,4
1,4
1,4
Agua
2,6
2,0
2,0
destilada
* 1,4 mL de sulfato de cobre

1,4

1,4

1,4

1,4

1,4

1,4*

2,0

2,4

1,5

3,4

2,0

2,0

2,0

HOMOGENIZAR CADA TUBO

Colocar en bao mara a 37C los tubos del 1 al 7 por 20 minutos.
El tubo 8 llevar a 0C por 20 minutos y el tubo 9 a bao mara a
100C.
Cumplido los 20 minutos, agregar la solucin enzimtica, como se
indica en el siguiente cuadro:
Sol.
Enzimtic
a

0,0

0,6

0,6

0,6

0,6

0,6

0,6

0,6

0,6

0,6

MEZCLAR BIEN CADA TUBO SIN RETIRARLO DEL MEDIO EN QUE SE

ENCUENTRAN.
Cumplido el tiempo exacto de 20 minutos, medir 0,5 mL de cada tubo
y aadir a la batera N 02 tal como se indica en la siguiente tabla.
b. Batera N02
TUBO
1
REACTIVO
Sol. HCl
2,5
0,05 N (mL)
Sol. Lugol
5,0
(mL)
Incubado
0,5
(mL)
HOMOGENIZAR

10

2,5

2,5

2,5

2,5

2,5

2,5

2,5

2,5

2,5

5,0

5,0

5,0

5,0

5,0

5,0

5,0

5,0

5,0

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

II.

RESULTADOS

TUBO
TUBO
TUBO
TUBO

N
N
N
N

01:
02:
03:
04:

TUBO N 05:

 TUBO N 06:
TUBO N 07:

TUBO N 08:
TUBO N 09:
TUBO N 10:

III.

CONCLUSIONES

10

IV.

DISCUSION

V.
BIBLIOGRAFIA
http://www.2bachillerato.es/biologia/tema5/p5.html