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As enzimas de restrio ou endonucleases de restrio seccionam a molcula de DNA quando encontram sequncias
especificas de nucletidos.
Para produzir DNA recombinante necessrio que enzimas de restrio cortem o DNA em fragmentos manipulveis
que contm o gene pretendido.
Os fragmentos obtidos so, ento, incorporados num vector, isto , numa molcula capaz de transportar o fragmento de
DNA para uma clula.
Os bacterifagos (vrus que atacam bactrias) e os plasmdeos (pequenos fragmentos livres de DNA com forma
circular que esto presentes em bactrias) so dois exemplos de vectores utilizados na tecnologia do DNA
recombinante.
Para que o fragmento de DNA estranho seja incorporado no vector, necessrio que a mesma enzima de restrio que
actuou sobre esse DNA actue sobre o vector, de forma a expor uma sequncia nucleotdica complementar. Os dois
segmentos de DNA so ligados por aco da enzima DNA ligase produzindo uma nova molcula estvel DNA
recombinante ou rDNA.
Esta tcnica permite, por exemplo, introduzir pores de DNA de uma determinada espcie num microrganismo, que,
em condies adequadas, se divide, permitindo a criao de inmeras cpias do gene (ou do produto do gene) a
inserido. Trata-se de uma clonagem do segmento de DNA manipulado.
A nova molcula de DNA presente nos clones do microrganismo onde foi inserido o DNA recombinante permitir a
produo de uma nova protena, de acordo com a nova informao gentica que possui. Desta forma, possvel, por ex.,
introduzir um gene humano em bactrias para que estas produzam, em larga escala, uma determinada protena
humana.
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A insulina uma hormona produzida pelo pncreas e controla a entrada de glicose nas clulas. A sua falta provoca uma
doena conhecida por diabetes. Durante anos, a nica forma de obter insulina era extraindo-a do pncreas de porco.
A tecnologia do DNA recombinante permitiu baixar o custo de produo de insulina e, sobretudo, torn-la mais segura,
evitando-se as reaces alrgicas. Para tal, os investigadores procederam ao isolamento do gene responsvel pela
produo desta hormona, atravs da utilizao de enzimas de restrio e sua insero em bactrias, tendo, para esse
efeito, utilizado plasmdeos como vectores. Dado que as bactrias utilizadas se reproduzem muito rapidamente, ao fim
de um curto intervalo de tempo, possvel obter um elevado nmero destes microrganismos capazes de produzir
insulina humana em larga escala. De seguida, a insulina isolada do meio que contm diversos nutrientes e produtos do
metabolismo bacteriano, sendo purificada de forma a poder ser utilizada no tratamento da diabetes.
Actualmente, alm da insulina, muitas outras substncias so produzidas custa da tecnologia do DNA recombinante.