tecnologia Biotecnologiay

Remdio
na planta
Medicamento anti-HIV obtido de soja transgnica

uso milenar de plantas para aliviar

doenas ganha outras formas sob o
domnio da biotecnologia. Dezenas
de experimentos em todo o mundo,
em empresas ou instituies acadmicas, utilizam tcnicas de insero de genes em
genomas de plantas que possam codificar enzimas de interesse farmacolgico. Assim possvel
que o cultivo de soja, milho e batata ou mesmo
plantas ornamentais possa no futuro ser usado
em larga escala, em verses transgnicas, para a
produo de medicamentos. Um exemplo desses
experimentos que acontecem no Brasil, na unidade
de Recursos Genticos da Empresa Brasileira de
Pesquisa Agropecuria (Embrapa), em Braslia,
o desenvolvimento de uma variedade de soja com
um viricida ou microbicida, capaz de prevenir a
contaminao pelo vrus causador da Aids. Com a
ajuda da engenharia gentica, essa leguminosa est
produzindo sementes, em uma estufa na capital
federal, com a enzima cianovirina-N que j teve
comprovada sua eficcia contra o vrus em testes
laboratoriais em estudos pr-clnicos.
Esse tipo de experimento ganhou fora em
maio de 2012, quando a Food and Drug Administration (FDA), a agncia federal norte-america62 z abril DE 2013

na de regulao de medicamentos e alimentos,

aprovou para uso comercial o primeiro frmaco
produzido com engenharia gentica em clulas
de plantas para seres humanos. O princpio ativo a protena taliglucerase alfa, produzida em
clulas de cenoura transgnica para tratamento
da doena de Gaucher, uma enfermidade gentica e rara provocada pela falta no organismo
da glucocerebrosidase, uma enzima atuante no
processamento de glicocerebrosdeos, um tipo
de gordura celular. O paciente tem anemia e
aumento do bao e do fgado. O medicamento
desenvolvido e produzido pela empresa israelense Protalix, e distribudo em parceria com a
norte-americana Pfizer, foi tambm aprovado em
Israel e no Brasil, pela Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (Anvisa), em maro deste ano,
com o nome de Uplyso. O tratamento at agora
era feito com outro frmaco em que a protena
produzida em linhagens de clulas modificadas
de hamsters, num processo biotecnolgico que
est mais sujeito a contaminaes.
A protena sintetizada na cenoura similar
produzida pelo prprio organismo humano. No
caso da cianovirina a histria diferente. Ela foi
isolada na dcada de 1990 de uma cianobactria,

ilustraesAbiuro

Marcos de Oliveira

que leva o nome cientfico de Nostoc ellipsosporum, em pesquisas do Instituto Nacional de

Cncer (NCI, na sigla em ingls) e dos Institutos
Nacionais de Sade (NIH) dos Estados Unidos.
As cianobactrias so bactrias azuis e chamadas erroneamente de algas azuis. Pesquisadores
dos NIH e da Universidade de Londres, na Inglaterra, idealizaram um gel com a cianovirina
para ser aplicado antes das relaes sexuais. O
princpio ativo inibe a replicao do HIV ao se
ligar aos oligossacardeos (acares) do vrus. A
cionovirina-N est no estgio de desenvolvimento pr-clnico, portanto ainda no foi testada em
seres humanos, diz o pesquisador Barry OKeefe,
vice-chefe de biologia molecular do laboratrio de
alvos moleculares do NCI. Ele liderou um estudo
publicado em 2003 que demonstrou a atividade
da protena tambm contra alguns vrus da gripe
(influenza A e B) e participa dos estudos para o
desenvolvimento da cianovirina. Falta um meio
comercialmente vivel, de baixo custo, de produo em larga escala da cianovirina-N, e as plantas
so um bom caminho para esse fim, diz OKeefe.
Obter a protena em grande quantidade foi
a dificuldade inicial dos pesquisadores norte-americanos logo depois dos estudos laboratoriais que indicaram as atividades contra alguns
tipos de vrus. Os NIH tentaram a produo via
DNA recombinante, em que o gene codificador da
protena inserido no genoma de outra bactria
mais fcil de cultivar, a Escherichia coli, para a
posterior extrao da substncia. Mas a produo
foi baixa e se mostrou economicamente invivel. A soluo encontrada pelo pessoal dos NIH,
liderado por OKeefe, foi procurar o professor
Elbio Rech, da Embrapa, coordenador do grupo
brasileiro que havia depositado uma patente no
exterior, de uma tcnica para insero de genes
em soja, e tinha experincia no desenvolvimento
de culturas transgnicas. Os norte-americanos
nos procuraram em 2007 e fizemos a parceria.
Eles nos repassaram a sequencia gentica codificadora do gene que inserimos no genoma
de uma variedade de soja da Embrapa, a 10-16.
E deu certo, j temos as sementes das plantas
engenheiradas por ns produzindo a cianovirina, diz Rech. Eles isolaram o princpio ativo da
soja. O ensaio viral para a confirmao da ao
da cianovirina produzida pela Embrapa foi feito
pESQUISA FAPESP 206 z 63

Isolamento e purificao
produo da soja transgnica

produo do medicamento

1
Cianobactrias
Nostoc ellipsosporum

DNA da
cianobactria

Gene produtor
da cianovirina

o princpio ativo do
medicamento est pronto para

cianobactria Nostoc

seguir para a formulao e

ellipsosporum, em outros

produo de um gel ou spray

organismos os pesquisadores
sequenciaram a bactria
codifica a protena

Conhecendo o gene,

Depois de isolado e purificado,

cianovirina, isolada da

para verificar qual gene

Para introduzir a protena

possvel por tcnicas

Obtidas as sementes transgnicas

passa-se ao processo de purificao
da cianovirina, feito com a interao de

biotecnolgicas

uma espcie de suco de soja com resinas

introduzi-lo no

especficas que fazem a separao

genoma da soja

das protenas contidas no vegetal

DNA da
cianobactria

extrao da cianovirina

Cianovirina
e outros
componentes

DNA
da soja

Resina

Depois da verificao
da insero
e ativao do gene,
novas sementes
de soja transgnica

Cianovirina
purificada

Semente de soja
modificada
geneticamente

so produzidas
para iniciar uma
plantao em estufa

Soja transgnica
fonte Elbio rech/embrapa

2g

o total do
medicamento
extrado a
partir de 1 kg
de soja.
A meta
extrair 5 g

64 z abril DE 2013

pelo professor Amilcar Tanuri, da Universidade

Federal do Rio de Janeiro (UFRJ), e tambm no
laboratrio de OKeefe, nos Estados Unidos. E o
resultado foi positivo.

desafio atual melhorar o processo de

extrao da protena, purificando quantidades maiores da cianovirina das sementes de soja. Nossos resultados apontaram a
presena de 10 gramas (g) da protena por quilo
de sementes frescas. Sabemos que no podemos
tirar os 100% de frmaco do gro da leguminosa
porque normal que ocorram perdas no processo de purificao. At agora j atingimos os 20%,
ou 2 g, e nossa meta atingir 50%, diz Rech.
O processo de purificao de protena trabalhoso, exige vrias fases. No caso da Embrapa,
a purificao est sendo realizada com resinas.
Conforme o leo de soja passa por um processo
semelhante a uma filtrao em que as resinas fazem o papel de filtros, as protenas contidas na
soja vo se dissolvendo, inclusive a cianovirina.

Nossa inteno produzir uma quantidade

suficiente da protena para testar o principio ativo
em macacas nos Estados Unidos, e posteriormente
em seres humanos, explica Rech. O propsito do
trabalho dos NIH, da Universidade de Londres e
do Conselho para a Pesquisa Cientfica e Industrial (Csir Biosciences) da frica do Sul, que so
grupos que participam da pesquisa, levar o gel
para o continente africano, onde a transmisso de
Aids ainda grande. A produo da cianovirina
tambm est sendo testada em plantas de tabaco na Inglaterra, na Universidade de Londres, e
nos Estados Unidos. No tabaco, o medicamento
no est apenas nas sementes, mas se expressa
na planta toda. Na frica, sob a liderana da pesquisadora Rachel Chikwamba, do Csir, os experimentos tambm seguem o caminho de produzir
a cianovirina em soja e em tabaco, mas ainda no
obtiveram sucesso, diz Rech.
Outra conquista da Embrapa em Braslia foi o
desenvolvimento de algumas linhagens de soja
transgnica que produzem em suas clulas o fa-

infogrficoAna paula campos

Protena com atividade anti-HIV extrada de bactria e introduzida na soja

tor IX de coagulao, um componente existente

no sangue humano cuja falta uma das causas
da hemofilia, doena gentica em que a pessoa
sofre problemas na cicatrizao e na conteno
de hemorragias. Ele produzido atualmente de
plasma sanguneo, a partir do sangue doado nos
hospitais, ou em cultura de clulas de camundongos por meio da insero no genoma do roedor
do gene que codifica a protena do fator IX. H
um gargalo tambm no desenvolvimento de siste-

O futuro dos mtodos de produo

base de plantas muito
promissor para os biofarmacuticos

Plantas de soja
transgnica com
a protena
cianovirina em
estufa da Embrapa,
em Brasilia

mas de purificao mais eficientes e produtivos,

diz Rech. Terminamos essa soja com fator IX
no ano passado depois de cinco anos, testamos a
molcula presente nas sementes e agora repassamos o material para a Fundao Hemocentro
de Ribeiro Preto [da Universidade de So Paulo
(USP)], parceira do projeto, para a sequncia da
fase de purificao da molcula.
Recebemos 360 g de soja liofilizada transgnica e j foram feitos os testes que mostram
a presena dessa protena, o fator IX. Agora,
como assumi o cargo de professora do Departamento de Gentica da Faculdade de Medicina
de Ribeiro Preto da USP, esses estudos esto
sob a coordenao dos professores Dimas Tadeu
Covas e Lewis Joel Greene, do Hemocentro de
Ribeiro Preto, diz a biloga Aparecida Maria
Fontes, que era pesquisadora do Hemocentro e

parceira na pesquisa. A produo de fator IX

em planta muito importante porque, alm de
no se utilizar o material dos bancos de sangue
que escasso, cria-se uma alternativa com outro veculo de produo. At o momento, a nica
molcula do fator IX produzida com tcnicas
biotecnolgicas elaborada em clulas de hamsters, diz Aparecida.
Em todas as pesquisas e mesmo em futuras plantaes de soja transgnica, que vo produzir medicamentos, so levadas em conta vrias iniciativas
de biossegurana. As plantas so produzidas sob
conteno, em casas de vegetao [estufas] totalmente teladas. Isso acontece para evitar situaes
que so at muito difceis de acontecer como, por
exemplo, que um pssaro pegue uma semente e
leve para outro lugar onde a soja germine e algum possa comer as sementes. No veneno,
mas devemos lidar com essas plantas como fonte
de medicamento, de forma diferente da soja usada na alimentao. As plantaes futuras tambm
devero ser cercadas, de modo a que nenhum estranho tenha acesso, diz Rech.

ntre as vantagens da gerao de frmacos

em plantas esto os custos mais baixos, com
produo de larga escala e tambm com a
segurana se comparada com clulas humanas,
fungos, bactrias e animais. Tambm mais fcil
de manipular o produto agrcola. A vantagem da
soja ou de outro vegetal que podemos colher e
estocar, diz Rech. Em um artigo publicado na
revista Nature em 2012 (10 de maio) na seo
News in Focus, que comentou a aprovao para
uso comercial do medicamento para doena de
Gaucher produzido com cenouras, o autor, Amy
Maxmen, diz que o Elelyso, ou Uplyso, remdio
aprovado pela FDA, pode ser vendido por 75% do
valor do medicamento tradicional, o Cerezyme,
produzido com clulas de hamsters. O tratamento
tradicional pode custar at US$ 300 mil por ano
por paciente. Maxmen informa que o mercado
global de frmacos de produtos biotecnolgicos
alcanou a marca de US$ 149 bilhes em 2010. O
futuro dos mtodos de produo base de plantas muito promissor para os biofarmacuticos.
um momento muito emocionante para quem
trabalha com esse tipo de pesquisa, diz OKeefe
Pesquisa FAPESP. Elibio Rech e seus colegas
na Embrapa fazem parte de uma indstria crescente de grande importncia para o futuro. n

Artigos cientficos

embrapa

OKeefe, B.R. et al. Potent Anti-Influenza Activity of Cyanovirin-N

and Interactions with Viral Hemagglutinin. Antimicrobial Agents and
Chemotherapy. v. 47, n. 8, p. 2.518-25. ago. 2003.
Rech, E.L. et al. High-efficiency transformation by biolistics of soybean,
common bean and cotton transgenic plants. Nature Protocols. v.3,
n. 3, p. 410-18. fev. 2008.

pESQUISA FAPESP 206 z 65