Centro de Tecnologia Mineral

Ministrio da Cincia e Tecnologia

Coordenao de Tratamento de Minrios - CTM

AVALIAO DA BIOSSORO DE CDMIO POR

MICROCOCCUS LUTEUS

Luciana Maria Souza de Mesquita

Claudia Cunha
Selma Gomes Ferreira Leite

Rio de Janeiro
2001

CT2001-645-00 Comunicao Tcnica apresentada no XIII

SINAFEM Simpsio Nacional de Fermentaes
Agosto de 2000, Terespolis-RJ.

Avaliao da Biossoro de Cdmio por Micrococcus luteus

de Mesquita, L. M. S.; Cunha, C. D.; de S , M. C. C.; Leite, S. G. F.
Universidade Federal do Rio de Janeiro, Centro de Tecnologia, Escola de Qumica,
Departamento de Engenharia Bioqumica, e-mail: selma@eq.ufrj.br

Resumo
Vrios metais pesados, especialmente zinco e cdmio, esto presentes em efluentes provenientes de
diversas atividades industriais. Nos ltimos anos, algumas biomassas microbianas tm sido
investigadas na remoo de metais txicos destes efluentes. O tratamento baseado na tecnologia de
biossoro representa uma tcnica promissora para remoo e recuperao de metais pesados de
soluo aquosa.
O presente trabalho teve como objetivos caracterizar a atividade de biossoro de ons cdmio de
soluo aquosa por uma linhagem de Micrococcus luteus isolada de solo contaminado e avaliar a
influencia do pr-tratamento custico na captao do metal.
A caracterizao da atividade de captao de cdmio demonstrou uma rpida taxa de remoo, altos
nveis de toxidez e uma eluio de mais de 83% do metal captado por lavagem com EDTA 10 mM.
Estes resultados indicam a predominncia de mecanismos de captao independentes de atividade
metablica. Com relao a influncia do pr-tratamento caustico das clulas , foi realmente constatado
a reduo do tempo de contato para a biossoro de cdmio.

Introduo
Nas ltimas dcadas o interesse nas questes ambientais tem estimulado pesquisas que visam avaliar os
impactos da poluio na biosfera. Entre os numerosos poluentes se encontram os metais pesados que
tm recebido ateno especial, j que alguns so extremamente txicos a uma grande variedade de
organismos.
Muitos metais pesados so essenciais ao crescimento tanto de organismos procariticos como
eucariticos. No entanto, alguns destes metais, como o cdmio por exemplo, no possuem funo
biolgica conhecida e so extremamente txicos mesmo em baixas concentraes[7, 10].
As principais fontes poluidoras de cdmio provm da produo de baterias (Ni-Cd), da fabricao de
pigmentos para materiais cermicos (CdS-CdSe), como agente estabilizante na produo de PVC e em
processos de galvanoplastia[1].
Muitos microrganismos, incluindo bactrias, algas e fungos possuem a habilidade para remover metais
pesados do ambiente externo. A capacidade, assim como os mecanismos de acumulao podem variar
amplamente de acordo com a espcie microbiana. Os mecanismos vo desde interaes fsico-qumicas
como adsoro do metal superfcie celular a mecanismos dependentes do metabolismo como
transporte e compartimentao interna[2,8].
A acumulao de metais pesados por mecanismo independente do metabolismo celular se d atravs de
interaes fsico-qumicas entre o metal e constituintes da parede celular, de exopolissacardeos e de

pigmentos, dentre outros materiais externos clula microbiana. O mecanismo pode ocorrer tanto em
clulas vivas como em clulas mortas e geralmente rpido[7].
Muitos metais so essenciais para o desenvolvimento e metabolismo microbiano, por ex. Zn, Fe, Mn,
Co. Neste caso os microrganismos possuem sistemas de transporte com especificidade para captao do
on metlico do ambiente externo. Os metais no essenciais podem tambm ser captados por estes
sistemas[6,9].
O presente trabalho teve como objetivo avaliar a influncia de alguns fatores e caracterizar a atividade
de captao de cdmio de soluo aquosa pela linhagem Micrococcus luteus, proveniente de solo
contaminado por metais pesados.

Material e Mtodos
1. Microrganismo e Meio de Manuteno
Foi utilizada uma linhagem de Micrococcus luteus (CD5) isolada de uma unidade industrial mnerometalrgica contendo aproximadamente 9 ppm de Cdmio.
A biomassa foi mantida em gelose simples, formando a cultura estoque. Nos experimentos
subsequentes, optou-se pelo uso das clulas frescas recolhidas na metade da fase exponencial de
crescimento, j que esta fase caracteriza uma maior atividade metablica das clulas.
2. Avaliao do Crescimento Celular na Presena de Cdmio
Os experimentos foram conduzidos em frascos de 500 mL contendo 100 mL de meio nutriente e
soluo de CdCl2 cujas concentras variaram de 8 a 75 ppm. Foi utilizada uma concentrao inicial de
inculo de 0,5 g/L. Os frascos foram agitados 150 rpm por 24 h. Foi feita ento a centrifugao
2500 rpm para separao das clulas. O sobrenadante foi acidificado para preservao e reservado para
dosagem do cdmio residual.
3. Experimentos de Biossoro
Os ensaios foram conduzidos em frascos erlenmeyer de 500 mL contendo 200 mL de sol aquosa de
CdCl2 na concentrao de 30 ppm do metal (pH 5,3). Foi utilizada uma concentrao celular inicial de
0,5 g de clulas por litro de soluo. O sistema foi mantido sob agitao em shaker 30C e 150 rpm
por 24 h.
3.1 Cintica de Captao de Cdmio
Foram retiradas alquotas aps 5 min, 1 h, 3 h, 6 h e 24 h de contato. As clulas foram separadas por
centrifugao 2000 rpm e o metal residual foi dosado por espectrofotometria de absoro atmica.
3.2 Viabilidade Celular
A viabilidade celular durante os experimentos de biossoro de cdmio foi verificada atravs de
plaqueamento pour plate em gelose simples. Foram retiradas alquotas aps 5 min e 6 h de contato
das clulas com a soluo do metal. As placas foram incubadas 35C por 72h. O percentual de
inibio foi calculado considerando 100% de viabilidade em 0 h de tempo de contato.
3.3 Eluio de Cdmio
A eluio do cdmio acumulado pelas clulas de Micrococcus luteus foi avaliada atravs da lavagem
das clulas submetidas ao teste de biossoro aps 5 min, 6 h e 24 h de tempo de contato com EDTA
(10 mM). O metal residual foi avaliado por espetrofotometria de absoro atmica.

4. Efeito do Pr-Tratamento Celular com NaOH

O pr-tratamento foi realizado segundo modificao do protocolo descrito por Brierley & Brierley
(1993). Foram utilizadas 4 g de biomassa seca ressuspendidas em 40 mL de gua destilada,
adicionando posteriormente uma soluo 1N de NaOH em partes iguais (40 mL). A soluo foi ento
aquecida at entrar em ebulio. As clulas foram centrifugadas a 2500 rpm por 10 min e lavadas
diversas vezes para eliminao da soda residual e diminuio do pH. (at um valor prximo a 9,0).
O pH da suspenso foi ajustado a 7,0 com H2SO4 1N e a biomassa foi ento seca em estufa 40C por
16 h.
4.1 Experimentos de Biossoro em Sistema Batelada
Foram utilizados frascos erlenmeymer de 500 mL contendo 100 mL de soluo de cdmio em
diferentes concentraes (variando de 50 200 ppm). A biomassa foi adicionada na concentrao de 2
g/L. Os frascos foram postos sob agitao (150 rpm) por 4 e 16 h 30C. Aps este tempo , alquotas
da soluo foram centrifugadas e filtradas em filtro Millipore utilizando membrana de 0,45 m e
estocada frio para posterior anlise da concentrao do metal residual.
4.2 Construo das Isotermas de Biossoro
O valor da capacidade de captao metlica (q) expresso em miligramas de metal por grama de
biomassa foi calculado segundo a equao:
q=V(Ci-Cf)/m (1)
onde V o volume das soluo metlica (L), Ci e Cf so as concentraes inicial e final do metal na
soluo (mg/L), respectivamente, e m a quantidade de biomassa utilizada (g de peso seco). Os dados
resultantes da capacidade de captao metlica (q) plotados contra os valores de Cf representam as
isotermas de biossoro. Vrias equaes so utilizadas para descrever dados experimentais de
isotermas de biossoro, entre elas, o modelo de Langmuir, que expresso da seguinte forma:
q=qmx*b*Cf/(1+b*Cf) (2)
onde qmx representa a capacidade de captao mxima, Cf a concentrao final no equilbrio e b a
constante relacionada a energia de adsoro/dessoro [11].
Foi utilizado o programa computacional STATISTICA for Windows para ajustar os dados
experimentais de q e Cf fornecendo estimativas das constantes de b e q mx. Esses valores so
importantes na avaliao comparativa de performance das biomassas.
Todos os experimentos realizados neste estudo foram realizados em duplicata.
5. Quantificao do Metal
A quantificao do metal foi feita por espectrofotometria de absoro atmica utilizando um
equipamento Perkin Elmer modelo 3100.

Resultados e Discusso

Os resultados obtidos na primeira etapa, que teve como objetivo avaliar o efeito do metal no
crescimento de clulas de Micrococcus luteus, esto apresentados na Tabela 1. Foi observado que com
o aumento da concentrao de cdmio, houve um aumento no efeito de inibio do crescimento.
Observou-se tambm que houve um aumento da eficincia de remoo de cdmio no meio de
crescimento com o aumento da concentrao inicial do metal, variando entre 8 e 40 mg/L. Para
concentraes acima de 40 mg/L, a eficincia de remoo comea a ser reduzida.
Tabela 1. Percentuais de inibio do crescimento e remoo do metal em clulas de Micrococcus
luteus.

A Figura 1 apresenta a evoluo da captao de ons cdmio com o tempo de contato. Pode-se notar
que o processo de biossoro foi bastante rpido. Nos primeiros 5 minutos de contato entre as clulas e
o microrganismo, 65% do metal foi removido. Decorrido este tempo, um pequeno aumento foi
observado, atingindo-se uma remoo ao final de 6 h de contato, de 72%. importante registrar que
com 24 h de contato sob agitao, a determinao do metal residual revelou no haver liberao do on
cdmio para soluo, mas sim um aumento na remoo para 95%. Esta rpida taxa de captao
observada tambm foi constatada por Faison et al. (1990) na biossoro de estrncio por Micrococcus
luteus.

Figura 1. Cintica de Captao de cdmio por Micrococcus luteus

A captao de metais por microrganismos envolve mecanismos que podem ser dependentes ou no do
metabolismo. Muitas vezes os dois mecanismos podem estar envolvidos. Pode-se ter a atuao de um
mecanismo independente do metabolismo, ou seja, adsoro superfcie celular e um mecanismo
dependente do metabolismo, onde h o transporte atravs da membrana celular. No caso da bactria M.
luteus , experimentos de cintica de crescimento realizados em testes preliminares, na presena de
cdmio, apresentaram nveis mais altos de captao do metal, comparados aos experimentos aqui
descritos, realizados na presena de nutrientes. Estes resultados aliados a rpida taxa de captao de
cdmio sugerem o no envolvimento de mecanismos dependentes de atividade metablica no processo
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de biossoro do metal. Porm, deve-se considerar que parte do metal pode ser acumulado
intracelularmente como resultado da difuso devido ao aumento da permeabilidade, principalmente se a
toxidez manifestada.
Os resultados dos ensaios de viabilidade celular esto apresentados na Tabela 2.
Tabela 2. Viabilidade celular durante os experimentos de biossoro de cdmio.

Observou-se que com apenas 5 minutos de contato entre a biomassa e a soluo do metal, o percentual
de clulas viveis reduziu para 19%. Aps 6 horas de exposio ao metal, apenas 0,1% da biomassa se
manteve viva, sem no entanto, liberar o metal para a soluo, conforme visto anteriormente. Estes
resultados confirmam a toxidez do metal.
Os resultados dos experimentos de eluio do cdmio captado pelas clulas de M. luteus esto
apresentados na Tabela 3. Observou-se que 83% dos ons cdmio captados so liberados pela lavagem
com EDTA 10 mM, para os trs tempos de contato estudados.
Tabela 3. Eluio de cdmio por soluo de EDTA.

Faison et al. (1990), em estudos de captao de estrncio por M. luteus constataram atravs da eluio
do metal com EDTA e fracionamento celular, que o estrncio, na sua maioria, foi removido da soluo
por mecanismos de adsoro fsico-qumica superfcie celular.
Os resultados obtidos com este experimento de eluio com EDTA reforam a idia de que o cdmio
acumulado pelas clulas de M. luteus via mecanismos independentes do metabolismo celular.
Os resultados quantitativos dos experimentos de biossoro utilizando o pr-tratamento celular com
NaOH e o ajuste dos valores experimentais pela equao de Langmuir esto apresentados na Tabela 4.
Houve um aumento significativo dos valore de qmx comparando a biomassa no tratada com a
biomassa tratada em 4 h de tratamento, o que no ocorreu com os experimentos realizados em 16 h de
tempo de contato.
Foi possvel verificar tambm, que o valor de qmx para a biomassa no tratada em 16 h de tempo de
contato (166,08) e para a biomassa tratada em 4 h (150,73) no foi muito diferente. Estes resultados
confirmam a hiptese de que o tratamento custico aumenta a capacidade de certas biomassas de
6

adsorver metais atravs da remoo de lipdeos e outras matrias orgnicas que mascaram os stios de
captao, reduzindo portanto o tempo de tratamento [3].
Tabela 4. Parmetros de Langmuir resultantes dos experimentos de pr-tratamento custico.

O decrscimo verificado no valor de qmx para a biomassa tratada (125,81) em relao a biomassa sem
tratamento (166,08) durante 16 h de contato com a soluo do metal pode ser explicado pela possvel
liberao do metal adsorvido pelas clulas, aps saturao. A captao por biomassas pr-tratadas com
NaOH mais rpida, permitindo essa liberao do metal adsorvido, durante um longo tempo de
exposio [12]. Isto pode ser resolvido atravs da imobilizao em suportes inertes [4]. Os resultados
apresentados demonstram que o pr-tratamento caustico das clulas de Micrococcus luteus realmente
reduziu o tempo de tratamento para a captao de cdmio em soluo aquosa.

Concluses
Quanto a atividade de captao de cdmio por clulas de Micrococcus luteus, pode-se concluir que:

A captao do metal sugere o envolvimento de mecanismos independentes de atividade metablica

no processo de biossoro, atravs da adsoro superfcie celular.
O pr-tratamento das clulas com NaOH realmente reduziu o tempo de contato para a captao de
cdmio em soluo aquosa.
Atravs dos valores de qmx obtidos, a biomassa apresenta potencial para aplicao em tratamento
de sistemas contaminados com cdmio.

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