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PNT N 17 (Revisin 1)

Fecha: 18/07/2010
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TTULO: Determinacin de aniones inorgnicos en muestras de planta mediante
cromatografa inica
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1.- INTRODUCCIN
El presente protocolo es aplicable para el anlisis cuantitativo de algunos aniones en
muestras de vegetales. Los analitos son extrados de la muestra pulverizada por medio de agua
desmineralizada y analizados mediante cromatografa inica.

2.- PRINCIPIO
Los aniones objeto de este protocolo, son extrados, en caliente, de la muestra seca y
pulverizada, por medio de agua desmineralizada, y analizados mediante cromatografa inica
utilizando una columna de un cambiador aninico fuerte y un sistema de deteccin de
conductividad electroltica.

3.- MATERIAL
-

Jeringas de plstico de 5 y 25 ml.

Matraces aforados de 25, 100, 1.000 y 2.000 ml.

Micropipetas de 0,1 ml.

Pipetas graduadas de 10 ml.

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Vasos de precipitados, pipetas Pasteur y otro material general de laboratorio.

Columna para cromatografa inica de 25 cm de longitud y 4,6 mm de dimetro


interno, empaquetada con un resina cambiadora de estireno/divinilbenceno con
funcionalizacin de amonio cuaternario (IonPack AS4A, IonPack AS14, Star-Ion
A300, o equivalentes).

Precolumna para cromatografa inica adecuada para la columna analtica a


utilizar(IonPack AG4, IonPack AG14, Star-Ion AGC, o equivalentes).

El material a utilizar deber estar completamente limpio, debiendo enjuagarse


previamente a su utilizacin.
El material volumtrico a utilizar deber ser siempre de clase A.

4.- APARATOS
-

Generador de ultrasonidos, con una potencia mnima de 300 W.

Placa calefactora.

Cromatgrafo inico equipado con una bomba analtica capaz de realizar, al


menos, gradientes binarios y un detector de conductividad electroltica con
supresin qumica de conductividad.

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5.- REACTIVOS
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Agua desmineralizada, de calidad ISO tipo 1 (Milli Q o equivalente).

Tween-20.

Carbonato sdico anhidro.

Bicarbonato sdico.

Cloruro sdico.

Nitrato sdico.

Sulfato sdico.

Dihidrgenofosfato sdico monohidratado.

Filtros de nylon de 25 cm de dimetro y 0,45 m de tamao de poro.

Todos los reactivos a utilizar debern ser de calidad P.A.

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6.- PROCEDIMIENTO
6.1.- PREPARACIN DE LA DISOLUCIN 50 mN DE CIDO SULFRICO
Pesar 4,9 gramos de cido sulfrico concentrado y disolver en aproximadamente 100 ml
de agua desmineralizada. Transferir la disolucin a un matraz aforado de 2.000 ml y aadir agua
desmineralizada hasta enrase.

6.2.- PREPARACIN DE LA FASE MVIL PARA CROMATOGRAFA

6.2.1.- Preparacin de la fase mvil A


Pesar 1,428 g de bicarbonato sdico, 1,908 g de carbonato sdico y disolver en
aproximadamente 250 ml de agua desmineralizada. Transferir la disolucin a un matraz aforado
de 1.000 ml, aadir agua desmineralizada hasta enrase y filtrar la disolucin resultante por medio
de una membrana de 0,45 m de tamao de poro.

6.3.- PREPARACIN DE LAS DISOLUCIONES PATRN


Pesar 0,412 g de cloruro sdico, 0,370 g de sulfato sdico, 0,343 g de nitrato sdico y
0,363 g de fosfato monosdico; disolver estas sales en aproximadamente 250 ml de agua
desmineralizada. Transferir la disolucin a un matraz aforado de 500 ml y aadir agua
desmineralizada hasta enrase para preparar una disolucin madre de 500 mg/l de cada uno de los
aniones.

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Preparar series de patrones a partir de la disolucin madre, hasta concentraciones de 0,5
mg/l, para realizar las rectas de calibracin.

6.4.- PREPARACIN DE LA MUESTRA


Pesar 100 mg de la muestra de planta pulverizada en un vaso de precipitado de 25 ml;
aadir sobre ella 10 ml de agua desmineralizada y 0,1 ml de una disolucin al 1 % de Tween-20;
mezclar y dejar reposar durante 30 minutos.
Agitar la suspensin de la muestra durante 3 minutos en un bao de ultrasonidos y, a
continuacin, colocar los vasos es una placa calefactora hasta que la suspensin llegue a
ebullicin, manteniendose sta durante dos minutos. Dejar enfriar la suspensin, filtrar sta por
medio de una membrana de nylon de 0,45 m y enrasar el extracto a 25 ml.

6.4.- ANLISIS CROMATOGRFICO


Ajustar las condiciones de trabajo del cromatgrafo de acuerdo con los siguientes
parmetros:
Caudal de fase mvil:

2 ml/min

Composicin de la fase mvil:

Isocrtica: 10 % de fase A y 90 % de fase B (agua


desmineralizada)

Temperatura de columna:

Ambiente

Volumen de Inyeccin:

50 l

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Caudal de regenerante:

10 ml/min.

Los parmetros de anlisis mencionados son indicativos y puede ser necesario


modificarlos en funcin del instrumento y de la columna utilizada.
Inyectar la muestra en el cromatgrafo e identificar, por medio de sus tiempos de
retencin, los aniones que pudiesen estar presentes en ella. Para la cuantificacin de los aniones
presentes, se realizar una curva de calibrado inyectando las diluciones preparadas en (6.3) a
partir de la disolucin madre.
En el caso de que la respuesta de alguno de los componentes de inters de la muestra se
salga fuera del intervalo lineal del detector, repetir la inyeccin despus de diluir la muestra hasta
un nivel adecuado (ver nota 8.2).

7.- CLCULOS
Calcular, por medio de una regresin lineal, la recta de calibrado concentracin/rea de
pico a partir de los cromatogramas de las diferentes disoluciones patrn e interpolar en ella el
valor del rea del pico de la muestra para hallar la concentracin de analito en el extracto final.
Calcular a partir de la concentracin en el extracto final y del peso inicial de muestra la
concentracin de analito en sta, teniendo en cuenta los posibles pasos de concentracin o
dilucin realizados.

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8.- OBSERVACIONES
8.1.- Las fases mviles que contienen en su composicin sales slidas disueltas, pueden dar lugar
a la formacin de cristales de sal en el interior del cromatgrafo en caso de que ste no se utilice
durante un periodo de tiempo prolongado. En estas circunstancias, deben retirarse del equipo
todas las fases mviles que contengan sales y lavar con agua desmineralizada todos los circuitos
del equipo que hayan estado en contacto con ellas para evitar la formacin de partculas slidas.
8.2.- Debe tenerse en cuenta la posibilidad de que una concentracin excesivamente elevada de
un anin puede llegar a sobrecargar la capacidad cambiadora de la columna, lo que normalmente
da lugar a fenmenos tales como desdoblamiento de picos, alteraciones en los tiempos de
retencin, etc.

9.- EXCEPCIONES
No procede.

10.- CLAUSULA DE ESCAPE


De existir algn problema acudir al tcnico responsable.

11.- REVISIONES
Una vez al ao salvo introduccin de modificaciones.

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12.- RESPONSABILIDADES
El operario es responsable del seguimiento de este PNT.

13.- DOCUMENTACIN
G. Ghosh and M.C. Drew. Comparison of analytical methods for extraction of chloride from
plant tissue using 36Cl as tracer.
Plant and Soil, 1991, Vol. 136, pp. 265268.

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