VIROLOGA DEL VIH

INDICE
1. INTRODUCCIN
2. ESTRUCTURA DEL VIH
3. GENOMA DEL VIH
4. CICLO REPLICATIVO DEL VIH
4.1. ENTRADA EN LA CLULA
4.2. TRANSCRIPCIN INVERSA
4.3. INTEGRACIN
4.4. SNTESIS DE ARN Y PROTENAS DEL VIRUS
4.5. ENSAMBLAJE Y SALIDA DE LA CLULA
4.6. MADURACIN

5. CICLO DEL VIH Y FRMACOS ANTIRRETROVIRALES

6. BIBLIOGRAFA RELACIONADA

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FIGURAS Y TABLAS

Figura 1. Esquema de la estructura del VIH.

Figura 2. Organizacin genmica del ARN del VIH-1.
Localizacin y funcin.
Figura 3. Ciclo replicativo del VIH.
Figura 4. Unin virus-clula.
Figura 5. Modelo de fusin virus-clula.
Figura 6. Estructura de la retrotranscriptasa (RT).
Figura 7. Retrotranscripcin del VIH.
Figura 8. Generacin de recombinantes durante la retrotranscripcin
Figura 9. Integracin del ADN viral procedente de la retrotranscripcin en el genoma
celular.
Figura 10. Generacin del LTR en el ADN proviral tras la retrotranscripcin.
Figura 11. Estructura del LTR en el VIH-1.
Figura 12. Transcritos y protenas del VIH.
Figura 13. Salto ribosmico para regular las protenas gag y pol generadas.
Figura 14. Ensamblaje del VIH.
Figura 15. Precursores Gag y Gag-Pol del VIH-1, protenas derivadas y GCS.
Figura 16. Cambio de morfologa del virus tras el procesamiento.
Figura 17. Dianas teraputicas frente al VIH en el ciclo del VIH.

Tabla 1. Clasificacin de los retrovirus humanos.

Tabla 2. Genes del VIH que codifican para las distintas protenas del virus.
Tabla 3. Protenas virales diana de los antirretrovirales en uso o desarrollo
avanzado.

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1. INTRODUCCIN
El virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) es el agente causal del sndrome de la
inmunodeficiencia adquirida (SIDA) en humanos. Su origen se remonta a mltiples
transmisiones zoonticas del virus de la inmunodeficiencia del simio (VIS) desde diversos
primates no humanos que tuvieron lugar en frica central y occidental a principios del siglo
XX. Fue aislado por primera vez en 1984 y desde entonces se ha realizado un enorme
esfuerzo para detener esta pandemia. El SIDA supone uno de los problemas de salud
pblica en los pases desarrollados y alcanza prevalencias alarmantes de determinados
pases de bajos recursos. Existen muchos datos sobre el comportamiento biolgico del
VIH, su estructura genmica y el papel de los distintos genes reguladores del virus. Sin
embargo, a pesar de los avances realizados, algunos de los mecanismos fisiopatolgicos
responsables de las diferentes manifestaciones del SIDA siguen siendo mal comprendidos.
Por otra parte, a pesar del progreso realizado en el estudio del VIH, no disponemos de un
tratamiento eficaz capaz de eliminarlo, debido a su extremadamente alta variabilidad
gentica, a que se integra en el genoma de las clulas infectadas, y a que se esconde en
reservorios en la persona infectada.

En 1970 Howard Temin y David Baltimore, de forma independiente, aportaron la

primera evidencia de que exista una actividad ADN polimerasa ARN dependiente
(retrotranscriptasa, transcriptasa inversa o RT) en determinados virus denominados hasta

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entonces virus ARN asociados a tumores (ARN tumor viruses). Con ello se descubri que
la transmisin de la informacin gentica no era slo en sentido de ADN a ARN, sino
tambin en sentido inverso: de ARN a ADN. Estos virus ARN pasaron a denominarse
retrovirus y en los aos siguientes se fueron sucediendo varios descubrimientos en los
que la RT estaba implicada. La familia Retroviridae engloba un nmero importante de
virus distintos que infectan mayoritariamente a vertebrados, pero tambin se han
identificado en otros organismos. Muchos de ellos se han asociado a enfermedades,
incluyendo tumores, trastornos neurolgicos e inmunodeficiencias. A pesar de la
diversidad de especies husped, todos los retrovirus son similares en cuanto a
organizacin genmica, estructura y ciclo replicativo.

Actualmente en la familia Retroviridae se definen 7 gneros, de los cules 5

presentan potencial oncognico (Tabla 1). Hay dos que tienen especial importancia por
infectar a humanos: los Lentivirus y los HTLV-oncovirus. Estos dos gneros presentan
diferentes patogenicidades y efectos morfolgicos en las clulas infectadas. As, los
Lentivirus presentan periodos de incubacin largos, tiene efecto citoptico en las clulas
infectadas, son portadores de un genoma complejo y no son oncognicos. El VIH es un
retrovirus del gnero Lentivirus y se han identificado dos tipos (VIH-1 y VIH-2). Los HTLVoncovirus son virus inmortalizadores de sus clulas diana, oncognicos y tambin con
genoma complejo. Existen 3 tipos de HLTV-oncovirus: HTLV-I, HTLV-II y HTLV-III, aunque
slo el HTLV-I y HTLV-II tienen importancia clnica y epidemiolgica.

Tanto el VIH como el HTLV emplean las mismas vas de transmisin y tienen como
diana los linfocitos T, aunque ambos han adoptado distintas estrategias para evadir el
sistema inmune. El VIH es un virus citoptico, con alta tasa de replicacin, presenta

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viremia libre y variabilidad gentica y antignica que le permite escapar a la respuesta

inmune. Sin embargo, el HTLV es un virus poco replicativo, con apenas produccin de
viriones, que incrementa su progenie a expensas de promover la proliferacin de las
clulas que infecta, lo que adems le permite esconderse de la respuesta inmunolgica.

Tabla 1. Clasificacin de los retrovirus humanos.

FAMILIA RETROVIRIDAE
Gnero

Especie de inters clnico o veterinario

HTLV-oncovirus

Virus de la leucemia T humano y bovino (HTLVI/II, BLV)

Oncovirus tipo B mamferos

Virus de tumor mamario de ratn (MMTV)

Oncovirus tipo C mamferos

Virus Moloney de la leucemia del ratn (Mo-MLV)

Oncovirus tipo D mamferos

Virus Mason-Pfizer de mono

Oncovirus tipo C aves

Virus del sarcoma y leucemia de aves (AVL)

Spumavirus

Espumavirus humano (HFV)

Lentivirus

Virus de la inmunodeficiencia humana tipos 1 y 2 (VIH 1 y 2)

Virus de la inmunodeficiencia de simio (SIV)

2. ESTRUCTURA DEL VIH

A pesar de la enorme diversidad, entre los distintos tipos de retrovirus existe una
gran similitud estructural. El VIH es aproximadamente esfrico y mide entre 80 y 120 nm
de dimetro. Est constituido por una envuelta externa (bicapa lipdica) con origen en la
clula del husped en la cual se insertan la glicoprotena de superficie Gp120 (SU) y la
protena transmembrana Gp41 (TM). En el interior del virus se encuentra la cpside
formada principalmente por las protenas de la matriz (MA, P17), cpside (CA, P24), y
nucleocpside (NC, P7). La capside viral cnica est compuesta por 1.200 a 2.500 copias
de la protena viral P24. Dentro de la cpside viral se localiza el material gentico del virus,
constituido por dos cadenas de ARN de polaridad positiva. El ARN est asociado a las

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protenas de la nucleocpside (que lo protege de la digestin de las nucleasas celulares), y

a los enzimas esenciales para la replicacin del virus como son la RT, proteasa (PR) e
integrasa (IN), as como a las protenas reguladoras (Tat, Rev, Nef, Vif, Vpr, Vpu, Vpx)
virales. La estructura del VIH se muestra en la siguiente figura.

Figura 1. Esquema de la estructura del VIH.

SU (protena de superficie, gp120)

Bicapa lipdica

IN (integrasa)

TM (transmembrana, gp41)

MA (matriz)

PR (proteasa)

RT (transcriptasa
inversa)
CA (cpside)
(+) ARN genmico
NC (nucleocpside)

3. GENOMA DEL VIH

Como hemos dicho antes, el VIH es un virus ARN clasificado dentro de la familia de
los retrovirus humanos y perteneciente al gnero Lentivirus. El genoma de los retrovirus
consiste en dos molculas de ARN de cadena sencilla y polaridad positiva, de
aproximadamente 9.800 nucletidos en el VIH. Cada molcula de ARN incluye, desde el
extremo 5 al 3 un grupo cap, un ARN de transferencia (trp, pro o lys), las regiones
codificantes y una secuencia equivalente a una cola de poli-A (Fig. 2). Las dos molculas
de ARN estn fsicamente unidas mediante puentes de hidrogeno en sus extremos 5, lo
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que dificulta la encapsidacin de ms de dos molculas en un provirus. La organizacin

genmica del VIH es siempre la misma: 5-gag-pol-env-3. Dependiendo del tipo de VIH
(VIH-1 y VIH2), hay genes accesorios que solapan con los genes principales que regulan y
coordinan la expresin de genes virales son: tat, rev, vif, vpu (en VIH-1) o vpx (en VIH-2),
vpr y nef.

En ambos extremos del genoma ARN se encuentra la secuencia repetida R de

aproximadamente 80 nucletidos. A continuacin en direccin 5-3, se encuentra la regin
nica no codificante (U5), que es la primera en transcribirse y que formar el extremo 3
del provirus (virus integrado en la clula husped). Despus se localiza la regin de unin
al primer tARN especfico (PBS), la regin Leader, los genes que codifican para las
protenas del virus, la cola de poliadeninas, y por ltimo la regin U3 que formar el
extremo 5 del provirus (Fig. 2.).

Figura 2. Organizacin genmica del ARN del VIH-1.

Cap

U5

Leader

gag

vpu env

vif

PBS
pol

vpr

P17(MA)
p24 (CA)
P7 (NC)
p6

PR RT, IN
PR,RT,

nef

tat

U3

A(n)

PPT

rev

gp120 (SU)
gp41 (TM)

En la siguiente tabla se muestran los diferentes genes que van a codificar para las
distintas protenas del virus, as como su localizacin y funcin.

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Tabla 2. Genes del VIH que codifican para las distintas protenas del virus.
Localizacin y funcin.
Gen

Protena

Funcin

gag

P24 (CA)

Protena estructural que forma la cpside

P17 (MA)

Protena estructural que forma la matriz

P7 (NC)

Protena estructural que forma la nucleocpside

PR

Enzima proteasa. Implicada en la maduracin del virin.

pol

RT
IN
env

Enzima transcriptasa inversa. Cataliza el paso de ARN a

ADN.
Enzima integrasa. Implicada en la integracin del ADNds
(ADN proviral) sintetizado en el genoma de la clula

gp120 (SU)

Protena estructural que forma la envuelta. Se une al

receptor CD4 y a los correceptores.

gp41 (TM)

Protena estructural que forma la envuelta. Implicada en la

fusin de membranas viral y celular.
Factor viral de transactivacin transcripcional.
Protena reguladora esencial para la replicacin del virus.
Acta unindose a la regin TAR del genoma.
Segunda protena reguladora esencial para el virus.
Es una fosfoprotena que se une a RER y promueve el
transporte y estabilizacin del ARNm entre ncleo y
citoplasma.

tat

Tat

rev

Rev

nef

Nef

Regulador negativo de la presencia del receptor CD4 y

molculas MHC de clase I en la membrana celular.

vif

Vif

Factor de infectividad viral. Inhibe la accin antiviral de

protenas celulares sobre el ARN viral.

vpr

Vpr

Protena implicada en el transporte de complejos de

preintegracin, transactivacin de genes celulares, y parada
del ciclo celular.

vpu

Vpu

Protena nica al VIH-1 implicada en la degradacin de CD4

en el retculo endoplasmtico y liberacin de viriones.

vpx

Vpx

Protena homologa a Vpr de VIH-1 presente solo en VIH-2.

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3. CICLO REPLICATIVO DEL VIH

La replicacin del VIH se puede dividir en las siguientes etapas (Fig. 3):
1) Entrada del virus en la clula husped por la unin de la glicoprotena gp120 con el
receptor CD4+ y el correceptor de quimioquinas CCR5 o CXCR4 de los linfocitos T,
mayoritariamente.
2) Liberacin al citoplasma de la cpside viral.
3) Transcripcin en reverso del ARN genmico viral y formacin del ADN complementario
de doble cadena mediado por la RT.
4) Transporte del ADN al ncleo celular.
5) Integracin en el genoma de la clula hospedadora mediante las secuencias LTR, por la
accin de la integrasa.
6) Transcripcin de los genes provirales utilizando tanto factores celulares como virales
que se van a unir a la regin LTR presente en ambos extremos del provirus integrado.
7) Procesamiento de los transcritos primarios hasta ARN genmico viral y ARNm viral.
8) Traduccin de los ARNm a las distintas protenas virales en el citoplasma
9) Procesamiento de los precursores poliproteicos
10) Salida del virin por gemacin, arrastrando parte de la membrana de la clula
husped.
11) Maduracin por medio de la accin de la proteasa que corta las poliprotenas
precursoras para formar el virin infectivo.

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Figura 3. Ciclo replicativo del VIH.

Figura 3. Ciclo replicativo del VIH.

8
MADURACIN
Y FORMACIN DE
VIRIONES INFECTIVOS

4.1 ENTRADA EN LA CLULA

Los retrovirus entran en la clula mediante la fusin de su envuelta con la
membrana celular (Fig. 4). La glicoprotena de la envuelta viral es una protena integral de
membrana que se genera como una poliprotena precursora de 160KDa denominada
Gp160, que se procesa en el Aparato de Golgi celular por la accin de una proteasa
celular formando la glicoprotena de superficie Gp120 y la glicoprotena transmembrana
Gp41. Las dos glicoprotenas de la envuelta se encuentran unidas no covalentemente y
ancladas en una bicapa lipdica formando trmeros, en un nmero que se estima de 14 por
virin.
El proceso de entrada consta de tres etapas: 1) Unin de Gp120 con el receptor
celular CD4. 2) Interaccin del complejo CD4-Gp120 con los receptores de quimiocinas
(correceptores). 3) Fusin de membranas viral y celular.

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Figura 4. Unin virus-clula.

Durante la fusin, la Gp120 se une especficamente al receptor que se encuentra en

la superficie celular. El principal receptor es el CD4, una inmunoglobulina presente en la
membrana plasmtica de linfocitos T4, monocitos/macrfagos, clulas de microgla y
clulas dendrticas, incluyendo a las clulas de Langerhans y a las clulas de la mucosa
rectal, vaginal e intestinal. Su funcin es la de iniciar la activacin de las clulas T CD4+.

La interaccin entre la Gp120 y el CD4 da lugar a cambios de conformacin en la

Gp120, exponindose entonces eptopos que se encontraban ocultos que se unen a un
segundo receptor (correceptor) de la familia de las quimiocinas. Se conocen varios
correceptores, aunque el VIH utiliza principalmente CCR5 y/o CXCR4. La unin al
correceptor provoca otro cambio conformacional, esta vez en la protena transmembrana
Gp41.

La Gp41 es la principal responsable del proceso de fusin de las membranas del

VIH-1 y de la clula diana. En su extremo amino terminal o 5 se encuentra el pptido de
fusin, que al ser hidofbico se puede insertar en la membrana celular. A continuacin de
dicho pptido se encuentran las regiones repetidas HR1 (heptad-repeat 1) y HR2 (heptadrepeat 2), con ciertos aminocidos que median la unin de los monmeros de gp41 en la

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forma trimrica de la envuelta viral. Durante la fusin Gp41 se reorganiza estructuralmente

(Fig. 5), favoreciendo la interaccin entre HR1 y HR2, y formando una estructura
termoestable formada por 6 hlices (3 de HR1 y 3 de HR2) esencial para la fusin. Las
regiones de HR2 se unen de forma antiparalela a las estructuras en espiral de HR1.

Figura 5. Modelo de fusin virus-clula.

virus

clula

En estos ltimos aos se ha observado que la transmisin del VIH a travs de

conexiones entre clulas es de 100-1000 veces ms eficiente que la entrada del virus libre
a la clula, y que la entrada por ese mecanismo ocurre en el 90% de los eventos de
infeccin in vivo.

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4.2. TRANSCRIPCIN INVERSA

En el siguiente paso ocurre la sntesis de ADN mediado por la enzima transcriptasa
inversa (RT) codificada por el gen pol. La retrotranscriptasa del VIH es la enzima
responsable de la replicacin del ARN que constituye el material gentico del virus. Se
trata de una enzima heterodimrica, formada por las subunidades RTp66 y RTp51 (Fig. 6),
con una estructura semejante a una mano derecha. Esta enzima posee tres actividades:
ADN polimerasa ARN dependiente, ADN polimerasa ADN dependiente y endonucleasa
(ribonucleasa H o ARNasa H).

Figura 6. Estructura de la retrotranscriptasa (RT).

dedos
palma
pulgares
conexin
ARNsa H

Una vez se han fusionado las membranas viral y celular se libera el ARN viral al
citoplasma y empieza la retrotranscripcin o la sntesis de ADN a partir del ARN viral. El
proceso de retrotranscripcin tiene 9 pasos (Fig. 7):

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Figura 7. Retrotranscripcin del VIH.

tRNA
(+) ARN
R U5

PBS

gag

env

pol

U3

PASO 1

Sntesis de ADN por la RT

(actividad ADN polimerasa ARN dependiente)

PASO 2

Degradacin del ARN del hbrido ARN-ADN

( actividad ARNasa H de la RT)

(-) ADN
(+) ARN

PASO 3

1er salto de cadena o intercambio de molde

(+) ARN
PASO 4

Sntesis de ADN por la RT

(actividad ADN polimerasa ARN dependiente)

PASO 5

Digestin de la cadena ARNss (+) por la ARNasa H

(-) ADN
(+) ARN
(-) ADN
ppt
PASO 6

Sntesis de ADN por la RT

(actividad ADN polimerasa ADN dependiente)

PASO 7

Digstin por la actividad ARNasa H de la RT

(-) ADN
(+) ADN
(-) ADN
(+) ADN

PASO 8

2 salto de cadena o intercambio de molde

(-) ADN
(+) ADN

PASO 9

Sntesis de ADNds por la RT

(actividad ADN polimerasa ADN dependiente)

ADNds
U3 R U5

U3 R U5

LTR

LTR

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Paso 1. La sntesis de ADN proviral, mediada por la actividad polimerasa ARN

dependiente de la RT viral, empieza en la regin del primer binding site (PBS), cerca del
extremo 5 del genoma de una de las dos cadenas de ARN del virin. All se une a un
ARNt celular que acta como iniciador o primer. Empieza la formacin de una cadena
sencilla (ss) de ADN de polaridad negativa [ADNss (-)] hasta alcanzar el extremo 5 del
genoma.
Paso 2. La porcin de ARN del hbrido ARN-ADN es digerida por la actividad
ARNasa H de la RT originando un producto ADNss (-).
Paso 3. Este ADN intermediario hibrida entonces con la regin R del extremo 3 de
la misma o distinta cadena de ARN genmico. Esta reaccin produce el primer salto o
intercambio de molde para la RT y permite el paso 4.
Paso 4. La retrotranscriptasa termina la polimerizacin o sntesis del ADNss (-),
mientras que la actividad ARNasa H de la RT degrada el ARN hibridado con la cadena
naciente de ADNss (-). Durante la polimerizacin, la RT puede saltar de una cadena de
ARN a otra que exista en el virin, y este es un paso esencial en la generacin de virus
recombinantes (Fig. 8).
Paso 5. La elongacin de la cadena de ADNss(-) pasa una regin especfica en el
extremo 3 del ARN genmico rico en purinas (segmento PPT), que es resistente a la
degradacin o corte por la ARNasa H de la RT. Por ello ste ARN PPT no se separa del
ADNss (-) y as acta como oligonucletido iniciador para la sntesis del ADNss (+)
complementario del ADNss(-), la cual es mediada por la actividad ADN polimerasa ADN
dependiente de la RT viral.
Paso 6. La sntesis contina por un lado hasta la regin U5 utilizando la cadena de
ADNss (-) como molde y por el otro lado contina la sntesis de la cadena ADNss(-)
utilizando la cadena ARN (+) como molde.

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Paso 7. Una vez terminada esta sntesis, el ARN molde es digerido por la actividad
ARNasa H de la RT. Los productos de dicha digestin pueden ser empleados como
oligonucletidos iniciadores o primers adicionales para la sntesis de la cadena ADNss (+)
en lugares internos. La sntesis de la cadena ADNss (+) iniciada en la regin PPT se
detiene despus que la porcin tRNA ha sido copiada formando la cadena ADNss (+). La
secuencia RNAt se elimina por la accin ARNasa de la RT.
Paso 8.

La regin PBS queda expuesta, lo que facilita la hibridacin con su

complementaria en la cadena ADNss (-). En este momento se produce el segundo

intercambio o salto de molde, casi siempre intramolecular.
Paso 9.

La sntesis de ADN de doble cadena (ADNds) contina en ambos

extremos, produciendo una cadena lineal con secuencias largas repetidas en sus extremos
(Long Terminal Repeats o LTR).
Figura 8. Generacin de recombinantes durante la retrotranscripcin. (tomado del AIDS
2002;16:S3-S16)

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En el tema de Epidemiologa Molecular del VIH-1, ya se explico en detalle cmo

durante el paso de retrotranscripcin se genera la mayor diversidad gentica en el VIH,
debido principalmente a la alta tasa de mutacin de La RT y de eventos de recombinacin
durante el proceso.

4.3. INTEGRACIN
Al finalizar la transcripcin inversa, el ADN de doble cadena sintetizado durante la
retrotranscripcin unida a protenas virales y celulares formando un complejo (complejo de
preintegracin) es transportado al ncleo y se integra en el genoma celular pasndose a
llamar ADN proviral (Fig. 9). Esta reaccin es catalizada por la integrasa del VIH. Es
esencial para mantener el genoma viral de forma estable y para la transcripcin eficiente.

Hay un primer paso de procesamiento en el que se produce una digestin de un

dinucletido conservado en cada extremo del LTR, originando una secuencia que se unir
al ADN cromosmico celular en el segundo paso de la reaccin. A continuacin se produce
una reaccin de corte y ligacin. Entonces los dos nuevos extremos 3 procesados se
unen a fosfatos alternos en la diana del ADN husped, generando un producto intermedio
en el que los extremos 5-PO 4 del ADN viral y los extremos 3-OH del ADN celular quedan
libres. Ello genera un hueco o gap, que debe ser reparado en un ltimo paso de la
integracin.

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Figura 9. Integracin del ADN viral procedente de la retrotranscripcin en el genoma

celular.

4.4. SNTESIS DE ARN Y PROTENAS DEL VIRUS

El siguiente paso del ciclo viral consiste en la expresin de genes virales y sntesis
de ARN que formar el genoma del nuevo virin. Los retrovirus utilizan la maquinaria
celular para la transcripcin de sus genes. Sin embargo, el VIH codifica para factores
adicionales reguladores de transcripcin y postranscripcin. Las dos secuencias LTR
(Long Terminal Repeat) que se forman tras la retrotranscripcin en ambos extremos del
genoma son idnticas, y contienen los elementos promotores para el inicio de la
transcripcin. Estn implicadas en la retrotranscripcin, integracin, transcripcin y
regulacin de la expresin gnica, por lo que el LTR viral es similar a un promotor
eucaritico complejo. El LTR se divide en varias regiones: U3-R-U5 (Fig. 10).

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Figura 10. Generacin del LTR en el ADN proviral tras la retrotranscripcin.

ARN viral

Retrotranscripcin

LTR

LTR

ADN proviral

En la Figura 11 se indican las posiciones que comprende cada regin, as como los
factores celulares de unin a cada una de ellas. La numeracin incluida es con respecto al
aislado de referencia HXB2 del VIH-1.
Figura 11. Estructura del LTR en el VIH-1.

U5

+ 1 +60

Regin moduladora
Promotora

TAR

- + 292

Potenciadora

+ 181

U3

+100

+1

- 454

HIV-1 LTR

RNA VIRAL

DNA
CROMOSOMAL

NF-kB
(I, II)
Sp 1
LEF/TCF-1
-174
-163
(I, II, III)
Core-NRE
MFLNP

AP-1 AP-3

GENES PROVIRALES

Sp1

- 163

- 340

GLS

NRE

(adaptada del AIDS Reviews 2006;8:9-16)

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La regin U3 situada en el extremo 5 de la forma proviral del VIH (posiciones 454

a -1) no es una regin codificante, sino estrictamente reguladora que dirigir la
transcripcin viral. Se subdivide, a su vez, en tres regiones: promotora de U3 (core),
potenciadora (enhancer) y moduladora. La regin promotora es imprescindible para la
transcripcin basal de los genes virales. Contiene la secuencia de iniciacin de la
transcripcin (TATAA) y los sitios consenso Sp1, a los cuales se une la protena celular
Sp1 para ayudar a la activacin de la transcripcin viral. Adyacente a esta zona, se
encuentra la regin potenciadora, cuya funcin es la transcripcin inducible de los genes
virales. Esta presenta el sitio de unin para NF-B, el cual acta en respuesta a seales
celulares y a estmulos inmunolgicos. Por ltimo, la regin moduladora se encarga de
incrementar o inhibir la transcripcin. Para ello, esta regin contiene mltiples secuencias
que sirven como sitios de unin de diversas protenas celulares que modulan la
transcripcin viral.
La regin R (posiciones +1 a +100) se transcribe y forma el ARN llamado TAR, el
cual conforma una estructura terciaria a la que se une la protena viral Tat. Esta protena
estabiliza los complejos de iniciacin y de elongacin transcripcional. Adems, dicha
regin presenta sitios de unin para factores celulares (por ejemplo Ap-1) que modulan la
transcripcin.
Las regiones U5 (+100 a +181) y GLS (Gag Leader Sequence) (+181 a +292) se
encuentran distantes al sitio de iniciacin de la transcripcin. Sin embargo, se ha descrito
la presencia de secuencias consenso para diferentes factores de transcripcin que
parecen jugar un papel en la regulacin de la transcripcin del VIH-1, como Ap-1, Ap3L/NF-AT, DBF/IRF y Sp1 (Fig.11).

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El material gentico del VIH-1, al integrarse en el genoma de la clula hospedadora,

se comporta como un gen celular inducible (estado de latencia/reactivacin) dependiente
de la induccin de seales de activacin celular que van a producir la transcripcin de sus
genes. La regulacin de dicho proceso se va a producir a travs de varios niveles. El
primer nivel de regulacin se produce por la interaccin entre la caja TATA clsica
situada en el LTR del VIH-1 y la maquinaria transcripcional basal o inicial de la clula
hospedadora, la cual est constituida por protenas celulares de unin al promotor
necesarias para el inicio de la transcripcin viral.
En un segundo nivel de regulacin actan los factores de transcripcin que se
unen a las secuencias potenciadoras (enhancer) y reguladoras, que activan la
transcripcin mediante la transactivacin del LTR viral. Distintas seales intra e
intercelulares activan una serie de vas metablicas que movilizan distintos factores de
transcripcin o los translocan al ncleo celular, donde se unen a sus consensos en el LTR,
induciendo as la transactivacin del mismo. De esa manera se produce el inicio de la
transcripcin mediante la accin de factores que actan sobre la regin reguladora y las
protenas de la maquinaria transcripcional basal que se unen a la caja TATA. Sin embargo,
en el caso del VIH-1, la potencia transcripcional de estos factores es limitada y no se
consigue una elongacin completa de ARNm viral.
Para ello es necesario un tercer nivel de regulacin en el que la protena viral Tat
se une al ARN naciente de la regin TAR del LTR y recluta el complejo de distintas
protenas celulares al complejo transcripcional. La accin de los distintos factores debe
contemplarse como un proceso sinrgico que permite, finalmente, la transcripcin del
genoma viral. Por tanto, las protenas celulares y virales de unin a la regin LTR modulan
la regulacin de la transcripcin del VIH-1. La transcripcin del provirus genera un ARN de
longitud completa que funciona como ARN mensajero para su traduccin o como ARN

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genmico. Una vez transcrito, el ARN viral adquiere una secuencia cap en el extremo 5y
es poliadenilado en el extremo 3. Los transcritos y protenas del VIH se muestran en la
Figura 12. La funcin y localizacin de cada una de las protenas virales se mostr en la
Tabla 2.
Figura 12. Transcritos y protenas del VIH.

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Las protenas codificadas por gag y pol se expresan a partir del ARN genmico
completo, son sintetizadas en el retculo endoplasmtico en forma de precursores
proteicos y transportadas a la membrana plasmtica. Debido a que en la replicacin se
requieren muchas ms molculas derivadas del gen gag que las derivadas del gen pol
(PR, RT e IN), el VIH ha desarrollado un mecanismo de regulacin para sintetizar ms o
menos protenas de Gag y Pol. Este mecanismo se denomina salto ribosmico (Fig. 13).
En l los ribosomas se desplazan un nucletido atrs durante la traduccin del precursor
Gag, evitando as el codn de parada y entrando en el marco de lectura del gen pol para
poder continuar la sntesis del precursor Gag-Pol. Hay 5 veces ms abundancia de
Precursor Gag-Pol que de Precursor Gag.
Figura 13. Salto ribosmico para regular las protenas gag y pol generadas.

Las protenas Tat y Rev del virus son esenciales para la sntesis y procesamiento
del ARN viral. La protena viral Vif regula la infeccin viral, al inhibir la funcin de factores
celulares, como el APOBEC3G implicado en fenmenos de hipermutacin viral.

Los precursores poliproticos se modifican despus de su sntesis. Los precursores

Gag y Gag-Pol sufren una miristilacin en el extremo amino-terminal que les permite
anclarse a la membrana plasmtica celular. Tambin la protena gag P17 se fosforila en
sus residuos de tirosina y serina. Los cambios ms importantes que sufren los precursores

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Gag y Gag-Pol se producen cuando el virin es liberado de la clula infectada y estn

producidos por la proteasa del VIH encargada de su procesamiento proteico.

Las glicoprotenas de la envuelta se sintetizan a partir de un ARN subgenmico que

ha sufrido un fenmeno de splicing (reacciones de corte y unin de regiones genticas
requeridas para la expresin de genes discontinuos). Primero se sintetiza la protena
precursora Gp160, que se modifica en el retculo endoplasmtico, donde se oligomeriza
formando trmeros. En el aparato de Golgi la Gp160 se procesa por proteasas celulares
originando las glicoprotenas Gp120 y Gp41 (Fig. 12), esenciales en la entrada del virus a
la clula como se explic anteriormente en el apartado 4.1. Estas se transportan a la
membrana celular.

4.5. ENSAMBLAJE Y SALIDA DE LA CLULA

El ensamblaje ocurre en la cara citoplasmtica de la membrana plasmtica celular
(Fig. 14). Las poliprotenas Gag virales alcanzan la membrana citoplasmtica poco
despus de la traduccin. Los determinantes del ensamblaje de la cpside se encuentran
en el precursor Gag, que es procesado dando lugar a las protenas matriz (MA o P17),
cpsida (CA o P24) y nucleocpsida (NC o P7) del VIH. En el ensamblaje participan
tambin factores celulares, como son las uniones a actina para el transporte hacia la
membrana y a otras protenas celulares, como la Tsg101, entre otras. Es en la membrana
celular donde se van a producir las interacciones entre protenas Gag, y entre stas y la
membrana celular. Estas interacciones son esenciales para generar la nueva partcula
viral.

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La multimerizacin de los precursores gag se produce en regiones de la membrana

ricas en lpidos llamadas rafts, aunque podran empezar antes de alcanzar la membrana.
En los precursores Gag existen dominios implicados en estas interacciones, as como en
el desprendimiento de la partcula viral de la membrana de la clula infectada. Parece ser
que la salida del virus se producira en los rafts, y que protenas asociadas a los mismos
se incorporaran a la envuelta del virus, desempeando un papel importante en la
replicacin del VIH.

Figura 14. Ensamblaje del VIH.

(tomado de Cell. Mol. Life. Sci Vol 59, 2002)

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4.6. MADURACIN
La partcula viral liberada necesita un paso final de maduracin para que el virus
sea infectivo. Esta maduracin es llevada a cabo por la accin de la proteasa (PR) viral
que corta las poliprotenas precursoras Gag (Pr55gag) y Gag-Pol (Pr160GagPol) en 11 sitios de
procesamiento proteico con secuencia de aminocidos especificos (gag cleavage sites o
GCS) (Fig. 15). Esto ocurre una vez que el virus sale de la clula infectada, ya que la PR
viral se activa durante la gemacin. No todos los cortes son simultneos ni tienen la misma
eficiencia. El precursor Gag se procesa generando las 3 protenas gag (P17, P24 y P7),
flaqueada por dos pptidos espaciadores (P1 y P2) con funciones reguladoras. Una sexta
protena (P6gag) del precursor gag juega un papel esencial en la liberacin del virus de las
membrana celulares. El precursor gag-Pol da lugar tambin a las protenas Gag P17, P24
y P7, a una protena llamada TFP (transframe), a la P6pol y a las 3 enzimas claves para el
ciclo viral: PR, RT (subunidades RTP51 y RTP66) e IN (Fig. 15).

Figura 15. Precursores Gag y Gag-Pol del VIH-1, protenas derivadas y GCS.

Tomado de Torrecilla et al., Plos One 2014 (en prensa)

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La proteasa es slo completamente activa dentro del virin, evitndose as un

prematuro procesamiento de las poliprotenas precursoras dentro de la clula. El cambio
de morfologa observada por microscopa electrnica que sufre el virin tras la maduracin
o procesamiento por la PR viral se muestra en la Fig. 16.

Figura 16. Cambio de morfologa del virus tras el procesamiento.

Despus del procesamiento

por la PR viral

Sin madurar

Virus no infectivo

Virus infectivo

5. CICLO DEL VIH Y FRMACOS ANTIRRETROVIRALES

La Figura 17 muestra las etapas del ciclo frente a las cuales se han desarrollado
frmacos anti-VIH hasta el momento y la Tabla 3 las protenas virales diana de los
antirretrovirales en uso o desarrollo avanzado. Otros mdulos de este mster explicarn en
detalle los frmacos antirretrovirales en uso y en desarrollo. Es importante saber que slo
conociendo el ciclo del virus en profundidad se puede entender el mecanismo de accin de
los antirretrovirales y disear nuevos frmacos frente al VIH.

As, existen antirretrovirales en uso clnico y en desarrollo dirigidos frente a la etapa

inicial de la infeccin viral. stos bloquean la unin de Gp120 con el receptor celular CD4,
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la interaccin del complejo CD4-Gp120 con los correceptores o directamente impidiendo la

fusin de membranas viral y celular y, por consiguiente, evitando el cambio de
conformacin de Gp41 necesario para que la fusin ocurra.

Las protenas esenciales en el ciclo viral responsable de la transcripcin inversa

(RT), de la integracin (IN) y de la maduracin viral (PR) constituyen las dianas
teraputicas ms importantes a nivel clnico en la actualidad. As en la actualidad todos
conocemos la existencia de 2 tipos de inhibidores de la RT en uso clnico que inhiben la
retrotranscripcin viral: los inhibidores anlogos de nuclesido (ITIAN o NRTI) y los
inhibidores no anlogos de nuclesido (ITINAN o NNRTI). Tambin diversos inhibidores de
proteasa (IP) estn aprobados para el tratamiento del VIH.

Actualmente est en desarrollo una nueva familia de frmacos inhibidores cuyo

objetivo es que la maduracin viral no se lleve a cabo y as evitar la produccin de virus
infectivos. Sin embargo, en vez de dirigirse frente a la PR viral como los IP, su mecanismo
de accin trata de alterar el procesamiento proteico en los sitios de procesamiento de los
precursores Gag y Gag-Pol (gag cleavage sites). Por tanto, alteraran la generacin de
protenas Gag.

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Figura 17. Dianas teraputicas frente al VIH en el ciclo del VIH.

CICLO BIOL GICO DEL VIH

Dianas
puticas
Dianas ter
teraputicas
Actualmente estn cobrando relevancia la investigacin en nuevas estrategias de
terapia antirretroviral, donde los frmacos no se dirigen frente a las protenas virales
mostradas en la Tabla 3, sino frente a otras protenas virales reguladoras o frente a
protenas celulares implicadas en el ciclo viral. Por ello, resulta esencial mejorar el
conocimiento del ciclo viral y de las relaciones virus-hospedador, para un diseo de
nuevos antirretrovirales ms efectivo.

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Tabla 3. Protenas virales diana de los antirretrovirales actuales.

PROTENA VIRAL DIANA

FRMACOS ANTIRRETROVIRALES

Proteasa (PR)

Inhibidores de la proteasa

Retrotranscriptasa (RT)

Inhibidores de la retrotranscripcin

Integrasa (IN)

Inhibidores de la integracin

Gp41

Inhibidores de la fusin virus-clula

Gp120

Inhibidores de la entrada viral

Gag

Inhibidores de la maduracin (en fases avanzadas de desarrollo)

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