Aislamiento de cafena a partir del caf

Objetivos

Emplear la tcnica de extraccin como mtodo de separacin y purificacin de la cafena en

diferentes medios
Determinar la concentracin de cafena en el caf.
Disear el diagrama de separacin para el caso particular de la cafena en los medios
mencionados.

Informacin
La extraccin es una de las operaciones qumicas ms antiguas de la humanidad. La preparacin de
una taza de caf o t involucra la extraccin del sabor y el olor de los componentes de materia
vegetal seca con agua caliente. Los extractos acuosos de hojas de laurel, varitas de canela, granos
de pimienta y clavos son usados para dar sabor a la comida a lado de extractos alcohlicos de vainilla
y almendra. Por el ltimo siglo y medio, la qumica orgnica ha estado extrayendo, aislando,
purificando y despus caracterizado un gran nmero de compuestos producidos por las plantas que
han sido utilizadas durante siglos como medicamentos y perfumes. Sustancias como la quinina del
rbol de quina, la morfina de las plantas de opio, cocana de las hojas de coca y mentol de las hojas
de yerbabuena.
Particularmente, la cafena es uno de los derivados ms importantes de la xantina (un alcaloide). La
cafena fue aislada por primera vez por Friese de las semillas de Genipa americana y por Sthenhouse
de los granos de caf. La cafena es un estimulante del sistema nervioso central y produce efectos
miocrdicos y diurticos, as como el relajamiento del pequeo msculo de los bronquios; se trata
de un diurtico menos potente que la teobromina. Un consumidor habitual de caf, que consume
al menos cuatro tazas al da, puede experimentar dolores de cabeza, inmsomnio, e incluso nauseas
tras la abstinencia de la droga. La cafena es la droga ms extensamente abusada en los Estados
Unidos: durante el curso del da, una persona moderna puede inconscientemente consumir hasta
un gramo de esta sustancia. La cafena est contenida en muchos alimentos y medicamentos
comunes, como se muestra en la siguiente tabla.
Caf
Caf descafenado
T
Cocoa
Leche de Chocolate
Chocolate para hornear
Coca-cola
Anacin, Bromo-Seltzer
Excedrin, extrafuerte
Dexatrim, Dietac, Vivarin
Maleato de Clorferamina (Antihistaminico)
NoDoz (tabletas de cafena)
Cafiaspirina

80 a 125 mg por taza

2 a 4 mg por taza
30 a 75 mg por taza
5 a 40 mg por taza
6 mg por onza
35 mg por onza
46 mg por 12 onzas (355mL)
32 mg por tableta
65 mg por tableta
200 mg por tableta
15 mg por tableta
100 mg por tableta
30 mg por tableta

La cafena pertenece a una gran clase de compuestos, conocidos como

alcaloides. Estos tienen origen vegetal, contienen nitrgeno bsico, a
menudo tienen sabor amargo y estructrura compleja, y usualmente
tienen actividad psicolgica. Su nombre usualmente termina en Ina,
como nicotina, cocana, morfina, etc.
El caf que se utilizar es caf de grano de la marca Blasn Gourmet. El
empaque indica que es caf 100% Arbica, es decir que proviene de cafeto
arbigo (Coffea arabica), que es un arbusto de la familia de las rubiceas
Ilustracin 1 Molcula de cafena
nativo de Etiopa y/o Yemen. Es la principal especie cultivada para la
produccin de caf (obtenido a partir de las semillas tostadas), y la de mayor antigedad en
agricultura, datndose su uso a finales del I milenio en la pennsula arbiga.
El mayor problema del aislamiento de cafena, es que esta no se encuentra sola en el caf, es
acompaada por otras sustancias naturales de las cuales debe ser separada. El grano de caf verde
(seco) contiene cafena (de 1 a 2%), taninos (compuestos fenlicos que poseen propiedades
astringentes y antiinflamatorias), glucosa, grasas, protenas y celulosa. En el proceso de tostado
tambin se desarrollan las caractersticas del aroma y el sabor. El aroma es
debido a un aceite llamado cafeol. El aceite voltil contiene principalmente
furfural con trazas de varios cientos de otros compuestos. El proceso de
tostado tambin libera la cafena de una combinacin con cido
clorogenico que existe en el grano sin tostar. Algo de cafena es sublimada Ilustracin 2 Furfural
de los granos mientras se lleva a cabo el proceso de tostado. La solubilidad de la cafena en agua es
de 2.2 mg/mL a 25C, 180 mg/mL a 80C y 670 mg/mL a 100C. Es altamente soluble en
diclorometano, el solvente que se utilizar para extraer la cafena del agua.

La separacin depende de las diferentes solubilidades de varios de los componentes del caf. Las
sustancias polimricas, protenas y celulosa son insolubles en agua. Las protenas son polmeros
formados de aminocidos, mientras que la celulosa es un polmero formado a partir de la glucosa.
Las grasas, que son esteres formados por glicerol y tres largas cadenas de cidos carboxlicos, son
tambin insolubles en agua. Por otro lado, la cafena, los taninos, glucosa y el cido clorogenico son
bastante solubles en agua caliente. As, la primera separacin en crudo puede ser realizada por una
filtracin del extracto caliente de planta de caf.
Tanto los taninos como el cido clorognico son cidos. La adicin de una solucin de acetato de
plomo har precipitar estas sustancias cidas y sus sales de plomo, y podrn ser removidas de la
solucin acuosa. Las sales de plomo sern removidas entonces por filtracin. Mientras, la cafena y
la glucosa permanecern en la fase acuosa
2RCOOH + Pb(OAc)2Pb2+(RCOO-)2 + 2HOAc

Ilustracin 3 cido clorognico

Ilustracin 4 cido glico, ejemplo de un tanino

Finalmente, la cafena es removida de la fase acuosa con diclorometano. La glucosa no es soluble en

diclorometano. El diclorometano ser fcilmente removible por evaporacin para obtener el
rendimiento bruto de cafena. La cafena es purificada por cristalizacin por par de disolventes, y
posteriormente por sublimacin. La cristalizacin se lleva a cabo por par de disolventes basada en
el hecho de que la cafena es mucho ms soluble en acetona que en ter de petrleo/hexano, as
que, al combinar los dos solventes, es posible saber cundo la solucin est saturada de cafena (el
punto en el que la disolucin de torna turbia).

Ilustracin 5 Diclorometano

Ilustracin 6 Glucosa

Equipo
Matraz de bola de 200 mL
Condensador para reflujo
Parrilla elctrica
1 Matraz Kitazato
1 embudo Buschner
1 matraz Erlenmeyer de 200 mL
1 bandeja metlica
1 embudo de separacin
3 vasos de precipitados de 200 mL
1 probeta de 50 mL
1 vaso de precipitados de 100 mL
1 vaso de precipitados de 50 mL
1 embudo Hirsch
1 aspiradora de vaco
1 aparato de sublimacin
1 embudo
1 esptula
1 mechero Bunsen
Papel filtro
Capilares
Portaobjetos

Cmara de luz UV
Cmara de elucin

Reactivos
Diclorometano
ter de petrleo/hexano
Acetato de plomo
Acetona
Disolucin de NaOH 10%
Agua destilada
Silica gel
Metanol
Caf

Procedimiento
Extraccin
Coloca 35 g de caf (molido regular), una piedrita de ebullicin y 125 mL de agua en un matraz de
bola equipado con condensador para reflujo. Calienta la mezcla en una parrilla elctrica por
aproximadamente 20 minutos. Durante el periodo de calentamiento monta el equipo necesario
para realizar una filtracin al vaco con un embudo buschner. Cuando la mezcla haya terminado de
hervir y los granos de caf se hayan asentado un poco, pero la solucin an est caliente, filtra al
vaco.
Transfiere el lquido filtrado a un matraz Erlenmeyer y agrega de 20 a 25 mL de solucin de acetato
de plomo. Usando la parrilla elctrica lleva la solucin a ebullicin y luego colcala en bao mara
para mantenerla caliente por aproximadamente 10 minutos. Durante este tiempo, agita la solucin
frecuentemente para coagular el precipitado. Filtra la solucin caliente al vaco con un embudo
Buschner. Deja que el filtrado caliente llegue a temperatura ambiente y transfirelo entonces a un
embudo de separacin. Extrae la solucin con una porcin de 25 mL de diclorometano. En la
ejecucin de la extraccin, si el embudo de separacin es agitado muy fuertemente, se formar una
emulsin. Para evitar este problema, se debe agitar el embudo gentilmente para mezclar las fases
e invertirlo cuidadosamente varias veces. Haz esto por aproximadamente 5 minutos.
Deja que las capas se separen y drena la fase inferior, que es la de diclorometano . Conserva aparte
esta solucin. Agrega otra porcin de 25 mL de cloroformo para la fase acuosa restante. De nuevo
mezcla suavemente e invierte el embudo de separacin durante 5 minutos. Deja que las fases se
separen y drena la fase inferior correspondiente a diclorometano. Mezcla las dos capas de
diclorometano drenadas. Virtelas de nuevo en el embudo de separacin y lava la solucin, primero
con 10 mL de hidrxido de sodio al 5 o 10%, y luego con 10 mL de agua.

Vierte el diclorometano extrado de un matraz Erlenmeyer de 125 mL y agrega aproximadamente

1g de sulfato de sodio anhdrido para secarlo. Revuelve la mezcla varias veces por un periodo de
aproximadamente 10 minutos, o hasta que la solucin se haya secado. Cuando la solucin se haya
secado, debe ser limpiada. Remueve el agente desecante con una filtracin simple en un vaso de
precipitados de 100 mL previamente tarado. Enjuaga los cristales de sulfato de sodio con un poco
de diclorometano (aprox.10 mL) y agrgalo al filtrado. Agrega una piedrita de ebullicin y evapora
los filtrados combinados en bao Mara bajo la campana. El residuo color canela es cafena en bruto.
Seca por fuera el vaso de precipitados y quita la piedrita de ebullicin. Pesa el vaso de precipitados
para obtener la masa del producto en bruto, y calcula qu porcentaje en masa de cafena fue
recuperada del caf. Determina su punto de fusin. Ya que el producto sublima, es necesario sellar
los capilares que se usarn para determinar el punto de fusin. Purifica el producto por
cristalizacin, seguido de una sublimacin como se describe en los siguientes puntos. Asegrate de
conservar una pequea cantidad del producto obtenido en esta etapa para despus usarlo en la
CCF.
Cristalizacin
La cafena cruda es cristalizada por mtodo de par de disolventes. Disuelve el slido en una cantidad
mnima de acetona caliente y agrega ter de petrleo (se propone hexano como alternativa debido
a su baja polaridad y p.e de 69C) de alta ebullicin (60 a 90) para volver la solucin levemente
turbia. Enfra la solucin y recolecta los cristales realizando una filtracin al vaco usando un embudo
Hirsch. Deja el producto en el embudo hasta que est seco. Determina el punto de fusin. Asegrate
de conservar una pequea cantidad del producto obtenido en esta etapa para despus usarlo en la
Cromatografa en capa fina.
Sublimacin
La purificacin final de la cafena es realizada por sublimacin. Arma el aparato de sublimacin como
se muestra en la figura. Coloca toda o parte de tu cafena en el fondo del tubo exterior y vuelve a
armar el aparato de sublimacin de forma que la abertura vertical entre los dos tubos no sea mayor
a de 2 cm. Usando una aspiradora de vaco para despejar el aparato, calienta la muestra despacio y
suavemente con un mechero bunsen para sublimar la cafena.

Ilustracin 7 Aparato de sublimacin

Sostn en tu mano el mechero y aplica el calor moviendo la flama de adelante hacia atrs debajo
del tubo externo. Si la muestra comienza a derretirse, remueve la mezcla por unos pocos
segundos antes de reanudar el calentamiento. Cuando la sublimacin se haya completado apaga
el mechero y deja que el aparato se enfre.
Cuando el aparato se haya enfriado, detn la aspiradora y cuidadosamente retira el tubo interior
del aparato de sublimacin. Si esta operacin se realiza sin cuidado, los cristales sublimados
pueden caerse del tubo condensador de vuelta con los residuos. Coloca el tubo condensador con
el material sublimado en un papel pesado y raspa la cafena sublimada sobre el papel pesado
usando una pequea esptula. Determina el punto de fusin de esta cafena purificada y compara
el color y el punto de fusin de las muestras de cafena obtenidas en cada paso. El punto de fusin
de la cafena pura es de 236C. Asegrate de conservar una pequea cantidad del producto
obtenido en esta etapa para despus usarlo en la CCF.

Cromatografa en capa fina.

Prepara cromatoplacas para CCF con gel de slice como adsobente y la cmara de elucin usando
metanol como eluyente. Prepara una solucin con una pequea porcin de los cristales obtenidos
en cada una de las fases de extraccin/purificacin usando como disolvente una pequea cantidad
de metanol (no ms de 1 mL). En la cromatoplaca haz de un lado 5 aplicaciones de cafena pura
que utilizaras como patrn y del otro 5 aplicaciones de la disolucin preparada con los cristales de
cafena obtenidos. Haz correr las manchas en la cmara de elucin y revela con luz UV de onda
corta. Finalmente, en una misma cromatoplaca, realiza en distintos puntos aplicaciones de la

sustancia patrn y de cada una de las soluciones preparadas con los cristales de cafena obtenidos
en cada etapa. Eluye en metanol, revela con luz UV, y obtn la Rf de cada mancha.
Diagrama

Bibliografa
Fieser Louis F., Williamson Keneth L. Organic Experiments. Seventh Edition. D.C HEATH AND
COMPANY. Lexington, Massachusetts. 1992. Pp. 99-117

Pavia Donald L., Lampman Gary M., Kriz George S. Introduction to Organic Laboratory Techniques.
A contemporary aproach. Third Edition. Harcourt Brace Jovanovich College Publishers. United
States of America. 1982. PP. 67-71