DISEO DE LABORATORIO

Condiciones ptimas de pH para el funcionamiento

de la enzima catalasa

Nombre:
Curso:
Profesora:
Fecha:

Valentina Corts Roncagliolo

Biologa IB NS
Magaly Nilo
6 de octubre del 2011

INTRODUCCIN
El objetivo de este laboratorio es descubrir cules son las condiciones ptimas de
pH para el funcionamiento de la enzima catalasa. Mediante este aplicaremos nuestros
conocimientos respecto a la actividad enzimtica y adems utilizaremos la informacin de
las fuentes para poder obtener un diseo con el cual se controlen las variables
satisfactoriamente.
Es de gran importancia para este
experimento entender qu es una enzima y sus
propiedades. Una enzima es un catalizador
biolgico. Son de naturaleza proteica, aunque
existen algunas excepciones como las
robozimas, las cuales son molculas de ARN.
Su funcin es aumentar la velocidad de las
reacciones, para esto, reducen la energa de
activacin (energa necesaria para que la
reaccin ocurra). La reaccin catalizada llega
6
14
a ser de 10 hasta 10 veces ms rpido que la misma reaccin no catalizada. Las enzimas
tienen caractersticas especiales:
Son reutilizables: debido a que no se consumen, ni sufren cambios durante una
reaccin pueden participar en otras.
Son altamente especficas tanto del tipo de reaccin que catalizan como
del sustrato involucrado en la reaccin.
Actan en bajas cantidades, es ms, tpicamente, cada molcula de enzima es capaz de
transformar cada segundo de 100 a 1000 molculas de sustrato en producto.
Las enzimas poseen una hendidura a la que
se
une el sustrato llamado sitio activo, cuando
esta unin ocurre el complejo es llamado
enzima-sustrato, es aqu en donde la enzima
convierte el sustrato en producto y se
separan, obteniendo como resultado la
enzima y el producto. Existen dos modelos
para explicar la unin de la enzima con el sustrato:
1. Llave-cerradura: el sustrato encaja perfectamente en el sitio activo de la
enzima. Este se relaciona con la alta especificidad de las enzimas.
2. Encaje inducido: el sitio activo cambia su conformacin para encajar con el
sustrato.
A medida que se aumenta la cantidad de sustrato, aumenta la efectividad de la reaccin,
sin embargo, esto sucede hasta el punto en que la cantidad de enzimas no basta para la
de sustratos ya que todos sus sitios activos estn utilizados, esto se llama saturacin.

E: enzima
S: sustrato
P:

Existen diversos factores que afectan la funcionalidad de las enzimas: la polaridad

del disolvente, la fuerza inica del medio, la temperatura y el pH, en este caso nos
enfocaremos en el ltimo mencionado. El pH mide la concentracin de H +, por lo tanto este
afecta la carga de la enzima y del sustrato. El pH ptimo es el rango en el cual la enzima
acta con ms eficiencia, este vara en gran medida dependiendo de la enzima. Es
importante destacar que el pH ptimo de la catalasa es de 7,6. A continuacin se presenta
una grfica que muestra el pH ptimo de distintas enzimas.

Si la enzima est en un medio alejado de su pH ptimo podra

desnaturalizarse. La desnaturalizacin es algo que le podra
suceder a todas las protenas ya que constan de niveles de
estructuras: la estructura terciaria es la que le da su
funcionalidad, pero las fuerzas intermoleculares que mantienen
la tridimensionalidad pueden romperse, por ejemplo por el pH.
desnaturalizacin
Si el pH del medio se aleja del ptimo de la enzima, esta ver
modificada su carga elctrica al aceptar o donar protones, se
podran formar o romper enlaces, esto modificar
la estructura de la enzima, incluso la de el sustrato y por tanto la actividad enzimtica.
La catalasa, con la que experimentaremos, es una enzima
que se encuentra en los peroxisomas. El perxido de hidrgeno
es un residuo del metabolismo, es txico y por lo tanto debe ser
transformado en molculas menos reactivas. La catalasa realiza
esta funcin, descompone el agua oxigenada (perxido) en
oxgeno y agua. Se calcula que una molcula de catalasa puede Burbujas de O2 por la
convertir 40 millones de molculas de agua oxigenada por descomposicin de H2O2
segundo. La frmula para la descomposicin es la siguiente:
2 H2O2 2 H2O + O2
Esta reaccin ser la que utilizaremos para el laboratorio. Debemos agregar agua
oxigenada a un trozo de tejido que posea catalasa y luego medir la cantidad de volumen de
oxgeno que se desprenda de l. La manera ms simple para medir el volumen es
utilizando el Kit Harris para la obtencin de gases su armado se detallar ms adelante.
Debido a que existe alta presencia de catalasa en la papa y a la vez, al ser un tejido vegetal,
esta resulta de simple manipulacin utilizaremos a este tubrculo en el experimento.

DISEO
Problema: Cules son las condiciones ptimas de pH para el funcionamiento de la enzima
catalasa?
Hiptesis: Si hacemos reaccionar agua oxigenada con las enzimas catalasa de una papa, el
producto de la reaccin ser oxgeno. La mayor cantidad de este gas ser liberado en un
ambiente de Ph 7,6 aproximadamente porque segn las fuentes citadas en la introduccin
este es el pH ptima de la catalasa y por lo tanto la enzima debera tener una actividad
mayor: descomponer ms molculas de perxidos y as, producir ms molculas de
oxgeno.
Las variables que manejaremos son las siguientes:
Independiente: pH de la solucin de perxido de hidrgeno.
Dependiente: volumen de oxgeno liberado.
Controladas: temperatura del medio, cantidad de hgado, cantidad de agua oxigenada.
A continuacin se enlistan todos los materiales que utilizamos para realizar este
experimento:
a. Atril
j. Balanza ( 0,05 gr)
b. Tubo de ensayo
k. Pipeta ( 0,5 ml)
Kit Harris para
c. Tapn
l. PH-metro
la obtencin de
d. Tubo de conexin
m. Agua Oxigenada 10 volmenes
gases
e. Cubeta
n. Papa rallada
f. Gas chimney shelf
o. Rallador
g. Vidrio Reloj
p. cido clorhdrico
h. Esptula
q. Hidrxido de sodio
i. Cronmetro ( 0,5 s)
r.
s.

a.

e.

b.

c.

d.

f.

g.

t. h.

u. l.

i.

m.

j.

n.

k.

o.

v. p.
q.
w.
x. El proceso que seguimos ser descrito paso a paso:
1. Para producir una mayor superficie en la que la enzima pueda reaccionar, la papa se
ralla.

y.
z.
2. Se preparan soluciones de agua oxigenada de distintos pH (1-14) utilizando cido
clorhdrico para las soluciones cidas y hidrxido de sodio para las soluciones
bsicas. Se utilizar un pH-metro para medir el pH, ya que es ms preciso que otros
medidores. Cabe destacar estamos experimentando con todo el rango de pH.

aa.
3. Armar el Kit Harris para la obtencin de gases como se muestra en la siguiente
imagen. Este mtodo resulta de simple manejo y los datos que otorga son precisos.

ab.
ac.
Se coloca un tubo de ensayo en un atril, este se conecta a la cubeta con agua
mediante un tubo de conexin. En la cubeta sobre un gas chimney shelf, que a la
vez est sobre el tubo de conexin, se coloca el segundo tubo de ensayo lleno de
agua. Es importante fijarse en que no queden burbujas de aire en el segundo tubo ya
que puede interferir con los resultados del experimento.

Tapn
Tubo de ensayo

Tubo de ensayo

Cubeta

Atril

Agua
ad.

ae.
af.

Tubo de conexin

Gas Chimney Shelf

ag.
4. Colocamos 1 gramo de papa rallada dentro de un tubo de ensayo y a este agregamos
1,5 ml de una mezcla de agua oxigenada a un pH determinado. Luego es importante
tapar el tubo con rapidez para que no se escape el oxgeno generado por la catalasa.

ah.

5. Observamos lo que ocurre por 2.30 minutos. Podemos observar al oxgeno en el

tubo de ensayo ubicado dentro de la cubeta. Se marca hasta qu nivel del tubo el gas
lleg.

O2 proveniente de la
reaccin catalizada por la
catalasa

ai.
6. Con una pipeta se llena con agua el tubo de ensayo marcado hasta llegar a la marca.
El volumen de agua utilizado indicar el volumen de oxgeno producido por la
catalasa.

Pipeta

Marca
aj.
7. Estos paso se repiten para las muestras de los 13 pH restantes. Debemos realizar
cinco rplicas de cada pH.
ak.
al.
am.
an.
ao.
ap.
aq.
ar.
as.

at.
au.
av.
aw.
ax.
ay.
az.
ba.
BB.

bc.

ANLISIS Y PROCESAMIENTO DE DATOS

En la siguiente tabla se presentan los resultados obtenidos de las cinco

rplicas en cada pH. Lo que se midi fue el volumen de oxgeno que la catalasa
produce al agregrsele agua oxigenada en medios de distinto pH. Se calcul el
promedio y la desviacin estndar para facilitar el anlisis de los resultados.
bd.
be. Volumen (ml)

bf.
pH
bn.
1

bg.
1
bo.
0

bh.
2
bp.
0

bi.
3
bq.
0

bj.
4
br.
0

bk.
5
bs.
0

bv.
2
cd.
3

bw.
3,6
ce.
6

bx.
3
cf.
6,5

by.
3,3
cg.
5,4

bz.
2,9
ch.
7,5

ca.
2,6
ci.
7,9

cl.
4

cm.
7,6

cn.
8,1

co.
6,8

cp.
7,4

cq.
8,3

ct.
5

cu.
8,5

cv.
8,7

cw.
8

cx.
7,2

cy.
8,5

bl. P
r
o
m
e
d
i
o
bt. 0
cb. 3,
0
8
cj. 6,
6
cr. 7,
6
4
cz. 8,
1
8

bm.
Desvia
ci
n
Es
t
nd
ar
bu. 0
cc. 0,
27
ck. 0,
93
cs. 0,
53
da. 0,
54

db.
6

dc.
9,3

dd.
8,2

de.
8,3

df.
9

dg.
8,7

dj.
7

dk.

9,4

dl.
9

dm.
9

dn.
8,3

do.
9,2

dr.
8

ds.
10

dt.
7,5

du.
8,3

dv.
8,5

dw.
9,5

dz.
9
eh.
10

ea.
8,3
ei.
7,3

eb.
9,9
ej.
7,7

ep.
11
ex.
12
ff.
13
fn.
14

eq.
2,7
ey.
0
fg.
0
fo.
0

er.
2,7
ez.
0
fh.
0
fp.
0

ec.
11,
ek.
7,9

ed.
11
el.
7,8

es.
2,5
fa.
0
fi.
0
fq.
0

et.
2,7
fb.
0
fj.
0
fr.
0

ee.
10,
em.
8,3
eu.
2,6
fc.
0
fk.
0
fs.
0

dh. 8,
7
dp. 8,
9
8
dx. 8,
7
6
ef. 1
0,
1
8
en. 7,
8
ev. 2,
6
4

di. 0,
86
dq. 0,
37
dy. 0,
89
eg. 1,
08
eo. 0,
32
ew. 0,
08
fe. 0

fd. 0
fm. 0
fl. 0
fu. 0
ft. 0

fv.
fw.

El procedimiento que se sigui para calcular el promedio fue el siguiente:

rplica 1+ rplica 2+rplica 3+rplica 4+rplica 5
x =
5

fx.
fy.

El pH 7 ser utilizado como ejemplo para calcular el promedio:

x =

9,4+ 9+ 9+8,3+ 9,2 44,9

=
=8,98
5
5

fz.

ga.

gb.

Para calcular la desviacin estndar fue esta la frmula utilizada:

( x i + x )2
i=1

n
Utilizaremos el pH 7 nuevamente a modos de ejemplo:
gc. Volum
en
(ml)

gd.
( x i+ x )

ge.
2
( x i+ x )

gf. 9,4

gg. 0,42

gi. 9

gj. 0,02

gl. 9

gm.
0,02
gp. 0,68
gs. 0,22

go. 8,3
gr. 9,2

gh. 0,17
64
gk. 0,00
04
gn. 0,00
04
gq. 0,46
24
gt. 0,04
84

gu.
gv. =
gw.
gx.

gy.

0,1764+ 0,0004+0,0004 +0,4624+ 0,0484

=0,370944739819828 0,37
5
Utilizando el valor del promedio de las rplicas se realiz un grfico.

b. D
e
s
v
i
a
c
i

a. p

E
s
t

n
d
a
r

c.

d. 0

e.

f. 0,3

8
h. 1,0
4
j. 0,5
9
l. 0,6
1
n. 0,4
6
p. 0,4
1
r. 0,9
9
t. 1,2

g.
3

i.
4

k.
5

m.
6

o.
7

q.
8

s.
9

u.

v. 0,3

w.

x. 0,0

11

y.

z. 0

aa.

ab. 0

ac.
1

gz.
ha.

Podemos observar que el grfico resulta muy similar al

que se utiliz en la introduccin para explicar el pH ptimo de
la enzima: est tiene un pick en la que funciona mejor el cual
desciende a medida que nos vamos alejando de este pH ptimo
lo cual indica que la protena se ha desnaturalizado.
Experimentado con pH extremos no obtuvimos ningn ml de
oxgeno, lo que nos indica que la catalasa haba dejado de
funcionar, el aumento de la concentracin de protones en el
medio cido y la disminucin de esta en el medio alcalino
provoc la desnaturalizacin de la enzima. Ntese que son los
af. Volum
medios ms bsicos los que afectan ms su funcionamiento
ya
en
ae. 0 ml Prome
que en tres de estos (pH 12,13 y 14) se obtuvo
mientras
p
dio
que este comportamiento solo se observa con un pH cido (pH
(ml)
1). Esto tambin se puede comprobar mirando la curva, la cual
ag.
crece paulatinamente en los medios cidos hasta
ah.pick
0
1 llegar a un
y despus decrece rpidamente con los bsicos.
Sin
embargo
el
ai.
pH ptimo result ser 9 (alcalino).
aj. 3,08
2
ak.
hb. Los datos que obtuvimos tuvieron bajas
desviaciones
al. 6,6
3
estndar, en otras palabras los resultados de las
rplicas
de cada
am.
an. 7,64
pH se asemejaban entre s y por lo tanto 4los resultados
son
ao.
confiables. Slo existieron dos pH que presentaban una
ap. 8,18
5
desviacin estndar mayor que 1 (pH 3 y 9). Sin embargo, la
aq.
curva presenta una anomala respecto a la que6fue expuesta
en la
ar. 8,7
introduccin. La curva se asemeja a una campana
de Gauss, la
as.
at. 8,98
7 comportamiento
cual es interrumpida en el pH 9, presentaba un
au. en la tabla de
normal hasta un alza con el pH 9. Si nos fijamos
av. 8,76
la izquierda es este pH el que presenta la 8mayor desviacin
aw.
estndar y por lo tanto del que se obtuvieron los datos menos
ax. 10,18
9
precisos. La explicacin a este fenmeno
ay. no puede ser
encontrado en la introduccin, por lo que1 debera intentar
az. 7,8
buscarla en el manejo de los materiales
ba.
1. oxidacin Enzimas
1
bb. 2,64
2. calcular el ph
bc. por las razones
3. de y es ms debera ser considerado descartarlo
1
que explicamos anteriormente.
bd. 0
be.
1

ad. 0

bf. 0

bg.
1

bh. 0

hc.
HD.
HE.
HF.
HG.
HH.
HI.
HJ.
HK.

es.wikipedia.org
www.menorcaweb.net
webs.uvigo.es
www.porquebiotecnologia.com
laguna.fmedic.unam.mx
www.buzzle.com
hl.

FUENTES