Nutricion Anumales Laboratorio PDF

Captulo 4.
Nutricin y alimentacin
EMILIO MARTNEZ DE LA VICTORIA MUOZ
Instituto de Nutricin y Tecnologa de los Alimentos (INYTA)
Universidad de Granada
MARIANO MAAS ALMENDROS
Instituto de Nutricin y Tecnologa de los Alimentos (INYTA)
JESS MARTN ZIGA
Servicio Produccin y Experimentacin Animal.
Centro de Instrumentacin Cientfica
NECESIDADES NUTRICIONALES
Energa
Protenas
Evaluacin de la calidad de una protena
ndices qumicos
ndices biolgicos
ndices microbiolgicos
Necesidades de protenas
Hidratos de Carbono
Fibra
Grasa
Minerales
Vitaminas
Otros nutrientes
Agua
REQUISITOS NUTRICIONALES
PROCEDIMIENTO Y PRESENTACIN DE LAS DIETAS
Ventajas e inconvenientes del tipo de procesamiento
FORMULACIN DE DIETAS PARA ANIMALES DE LABORATORIO

Dietas de ingredientes naturales
Frmula cerrada
Frmula abierta
Dietas purificadas
Dietas qumicamente definidas
Dietas carenciales enriquecidas
REGMENES ALIMENTICIOS
Alimentacin ad libitum
Alimentacin restringida
Alimentacin horaria o controlada
Alimentacin a la par
Alimentacin ad libitum frente a restringida
CONSERVACIN Y CONTROL DE CALIDAD DE LAS DIETAS

Almacenamiento de las dietas
La necesidad del control nutricional
Contaminantes biticos
Estndares microbiolgicos recomendados
Mtodos y protocolos de esterilizacin
RESUMEN
BIBLIOGRAFA
La primera pregunta que podemos plantearnos acerca de la alimentacin y nutricin animal

es por qu un animal necesita los alimentos?. En realidad, el alimento es el material primario a
partir del que se van a formar todos los tejidos y estructuras corporales tanto las formadas de
novo, por ejemplo durante el crecimiento, como aquellas ya existentes que deben ser
reemplazadas por un proceso de desgaste.
En este momento nos surgen dos conceptos que debemos definir: alimentacin y nutricin.
La alimentacin es la forma de proporcionar, en nuestro caso, al animal de laboratorio, los
alimentos necesarios para que alcance un crecimiento y desarrollo ptimo. La nutricin estudia,
sin embargo, el conjunto de procesos mediante los que el organismo animal recibe, transforma,
incorpora y utiliza los nutrientes contenidos en los alimentos y que constituyen los materiales
esenciales para el mantenimiento de la vida. Como se deduce de las dos definiciones, ambos
conceptos representan funciones distintas. La alimentacin se relaciona con una serie de
actividades conscientes y voluntarias dependientes del cuidador, casi exclusivamente, mediante
las cuales se suministra al animal los alimentos que precisa tanto desde el punto de vista
cuantitativo como cualitativo y que el animal voluntariamente ingiere y deglute. A partir de este
momento comienzan las funciones de nutricin que se sitan en el plano involuntario y que
incluyen la digestin, absorcin, transporte y utilizacin metablica de los nutrientes. En
consecuencia, podemos deducir que existen varias formas de alimentarse pero una sola de
nutrirse.
El estado nutricional de un animal de laboratorio esta directamente relacionado con una
alimentacin adecuada (cualitativa y cuantitativamente). Un correcto estado nutricional permite
que el animal alcance todo su potencial gentico en aspectos como el crecimiento, la
reproduccin y las expectativas de vida (longevidad), a su vez todo ello afecta al estado fsico y
a su salud global. Asimismo, una alimentacin correcta permite al animal presentar respuestas
ms favorables a factores de estrs ambiental como la presencia de patgenos.
La nutricin es una variable que puede afectar, en distinta direccin, los resultados
experimentales obtenidos. As, los resultados de un determinado estudio pueden estar sesgados,
o falseados de forma involuntaria por factores que afecten a la composicin de la dieta que
ingieren, como pueden ser los cambios desconocidos en los constituyentes que forman parte de
ella. Esta alteracin de la informacin experimental obtenida puede conducir a conclusiones
errneas o no exactas que implican el sacrificio intil de individuos y a una prdida de tiempo y
de recursos de investigacin.
Para realizar una correcta planificacin de la alimentacin y conseguir un estado nutricional
ptimo se deben conocer los requerimientos nutricionales tanto de tipo cuantitativo como
cualitativo de las diferentes especies. Esto es fundamental en el proceso de formulacin de
dietas. Sin embargo, se puede planificar una dieta bien balanceada que los animales no ingieran,
o bien que aunque la ingieran, la disponibilidad digestiva y metablica de los distintos
nutrientes no sea la adecuada. Por tanto, a la hora de determinar estos requerimientos se deben
tener en cuenta una serie de factores como la palatabilidad que va a condicionar la ingesta de
alimento, la utilizacin digestiva y metablica y su excrecin. Todos estos procesos pueden, a
su vez, venir influenciados por factores externos como la forma fsica del alimento, o las
caractersticas orosensoriales, junto con la presencia de sustancias antinutritivas y
contaminantes. Adems, hay que tomar en cuentan las posibles perdidas de nutrientes derivadas
de los procesos de fabricacin y almacenamiento de las dietas. Igualmente se deben considerar
otros factores dependientes del propio animal como la especie considerada, la ontogenia, el
estado fisiopatolgico, etc.
NECESIDADES NUTRICIONALES DE LOS ANIMALES DE LABORATORIO

Con independencia de la especie y tipo de modelo experimental, todos necesitan ingerir una
serie de nutrientes que son comunes, a todos ellos. Los macronutrientes son las protenas, los
hidratos de carbono y las grasas. Los micronutrientes estn constituidos por los minerales y
vitaminas.
En la formulacin de una dieta lo ms importante es asegurar el aporte adecuado de los
distintos nutrientes. Para poder conseguir este fin debemos conocer los requerimientos de todos
y cada uno de estos nutrientes para la especie considerada. Sin embargo, puesto que la cantidad
de alimento ingerido va a venir determinado por los requerimientos energticos de la especie en
cuestin, es del mximo inters establecer la densidad calrica de la dieta, es decir la cantidad
de cada nutriente por un nmero determinado de kilocaloras (kcal) o kilojulios (kJ).
Energa
En el mbito de la nutricin el trmino energa se utiliza para describir los componentes de
la dieta que aportan al animal el combustible necesario para mantener los procesos vitales
basales como el latido cardiaco o la respiracin, la produccin de calor para mantener la
temperatura corporal y para la actividad fsica necesaria para comer, roer, cavar, etc. La energa
de la dieta es aportada principalmente por los Hidratos de Carbono (HC) y la grasa, y en menor
grado por los esqueletos hidrocarbonados de las protenas.
Hasta hace relativamente poco tiempo la energa de la dieta se meda en trminos de calor.
La unidad es la calora pequea, sin embargo desde el punto de vista prctico se utiliza la
kilocalora (o calora grande). No obstante, la calora no es una unidad absoluta y puede variar
ligeramente de acuerdo con una serie de factores, como por ejemplo la altitud. Actualmente, por
acuerdo del Sistema Internacional de Unidades, se utiliza el Julio (J) como unidad de energa y
la equivalencia es 1 calora = 4.184 J.
La Energa Bruta (EB) que contiene una dieta es medida en trminos de calor generado
cuando una cantidad dada es quemada completamente en una bomba calorimtrica. Sin
embargo, no toda esta EB esta disponible para el animal que la ingiere. Parte no puede ser
digerida (por ejemplo la celulosa) y de la digerida parte puede perderse por la orina, sudor, etc.,
o bien disiparse en forma de calor no pudindose utilizar por los tejidos del organismo. La
Energa Digestible (ED) tiene en cuenta las prdidas fecales, y se calculara por la diferencia
entre la EB de la dieta y la EB de las heces correspondientes. La Energa Metabolizable (EM) es
un valor que utilizado con frecuecia en las dietas para animales de laboratorio. Es el ndice ms
adecuado pues representa la parte de la energa de la dieta que es transformada en energa til
para el animal. Se calcula restando las prdidas energticas de la orina y los productos
combustibles gaseosos de la ED.
En los animales de laboratorio no se pueden establecer unas necesidades energticas en los
animales de laboratorio de forma general, ya que estas vienen influenciadas por factores
variables como la actividad fsica, la temperatura ambiental y el estado fisiolgico. En la
prctica la mayora de las especies de laboratorio son alimentadas ad libitum y en estas
circunstancias el animal regula de forma voluntaria su ingesta de alimento para cubrir sus
requerimientos energticos. Es poco importante si la energa proviene de los hidratos de carbono
o de la grasa, solo debemos tener en cuenta que debido a la mayor densidad calrica de la grasa,
al elevar sus niveles en la dieta la ingesta total de alimentos disminuye; esto lleva
inevitablemente a un descenso en la ingesta de protena, minerales y vitaminas. En este sentido
las necesidades de los distintos nutrientes se expresan en funcin del contenido energtico y no
del peso.
Los estndares para ratas y ratones se sitan en un valor de densidad calrica entre 3.6 y 3.8
kcal/g de dieta (aprox. 15-19 kJ/g) para una alimentacin ad libitum y con un contenido
adecuado en otros nutrientes. En dietas con un contenido energtico alto se recomienda elevar
los niveles de otros nutrientes.
Protenas
Son macronutrientes cuya funcin principal en el organismo, es participar en la formacin
de estructuras corporales y en la sntesis de molculas reguladoras de distintas funciones
orgnicas. Por tanto, se dice que la protena es un nutriente de tipo plstico, aunque su esqueleto
hidrocarbonado puede ser utilizado como combustible para obtener energa. En realidad, los
animales no necesitan las protenas como tales aportadas por los alimentos sino los
Aminocidos (AA) que la componen para poder sintetizar tras su incorporacin, sus propias
protenas. Adems, no necesitan todos los AA sino solo los esenciales.
Los procesos digestivos rompen la protena alimentaria en sus monmeros, los AA, o en
pequeos pptidos que son los que atraviesan la barrera de mucosa del intestino delgado hasta
llegar al medio interno y de all a todos los tejidos para la sntesis de protenas propias. Los
mecanismos de la sntesis proteica requieren que todos los AA que van a formar parte de una
determinada protena deben estar presentes de forma simultnea y en la proporcin adecuada.
Por tanto, la falta de un AA o el AA que se encuentre en menor proporcin respecto a las
necesidades biosintticas, van a condicionar la tasa de sntesis de esa protena.
Sobre esta base, en el diseo de una dieta se debe tener en cuenta, no solo la cantidad sino la
calidad, es decir en que medida los AA que forman parte de ella se adecuan a la composicin de
las protenas propias del animal. La calidad de una protena puede afectarse negativamente por
distintos causas como un incorrecto almacenaje, un sobrecalentamiento en el proceso de
peletizacin y por un tratamiento trmino inadecuado. Este dao no es fcilmente detectable y
es necesario realizar algunas pruebas para conocer la calidad proteica de una dieta.
Evaluacin de la calidad de una protena
El primer criterio de evaluacin es determinar su composicin cuantitativa, ya que si la
protena bruta de la dieta no alcanza un nivel adecuado puede comprometer el crecimiento y
desarrollo del animal. Para ello se cuantifica el contenido en nitrgeno total por mineralizacin
de la dieta, mediante el mtodo de Kjelhdajh. Posteriormente, el valor de nitrgeno total
obtenido se multiplica por un factor, dependiendo del tipo de fuente proteica utilizada y su
composicin en AA para obtener la cantidad de protena. Los factores mas utilizados son 6.25
(obtenido de dividir 100/16 - peso molecular del nitrgeno -) y 5.4 (para la protena de trigo y
productos lcteos). Este dato cuantitativo nos dice muy poco o nada acerca de las propiedades
de esa protena o protenas y por tanto de su calidad nutricional.
De manera general, la calidad depende de su composicin en AA y de la disponibilidad
relativa de los mismos con relacin a los requerimientos por una determinada especie de AA
esenciales y nitrgeno no proteico. En cuanto al primero, el perfil de AA de la protena, hay
tcnicas muy fiables como la Cromatografa Lquida de Alta Eficacia (HPLC). Para determinar
la calidad de una protena. Se emplean ndices de tipo qumico, biolgico y microbiolgico.
ndices qumicos
Aminograma. Consiste en la determinacin del perfil de AA de una protena previa
hidrlisis de esta. El aminograma ayuda a conocer las deficiencias y excesos que pueden
aparecer en un ensayo biolgico y a predecir la respuesta al mezclar protenas. Sin embargo, hay
que ser discreto en la interpretacin de los aminogramas, sobre todo si no estn bien
establecidos los requerimientos de cada uno de ellos para una especie concreta.
Cmputo qumico. Al ser difcil comparar los mritos nutricionales de distintas protenas
con diferentes perfiles de AA, se propuso un sistema de cmputo qumico para clasificar las
protenas. La escasa calidad proteica depende, principalmente, de la deficiencia relativa de
algunos AA esenciales. Como protena patrn o ideal se toma la protena de huevo completo
y se determina el porcentaje de exceso o defecto de AA individuales de la protena problema
respecto a la patrn. A partir de estos datos se establece el concepto de AA limitante, definido
como aquel que presenta mayor deficiencia con respecto a la protena patrn. As, el cmputo
qumico de una protena dada es el porcentaje de la deficiencia del AA limitante. Por ejemplo, la
protena de trigo tiene como AA limitante la lisina cuya deficiencia respecto a la protena patrn
es de un 63 %, por tanto su cmputo qumico es 37 (100-63).
ndice de AA esenciales (IAAE). Para su clculo se establece primero la relacin huevo de
los aminocidos esenciales, que es el porcentaje en que un AA de la protena problema se desva
de la cantidad presente en la protena patrn que se considera del 100 %. A partir de estos datos
el IAAE se calcula como la media geomtrica de la relacin huevo.
Existen algunos mtodos para calcular la biodisponibilidad de algunos aminocidos como el
caso de la lisina disponible.
ndices biolgicos
En general son ms exactos que los qumicos pero ms caros y requieren una infraestructura
mayor. En el Cuadro 4-1 se recogen las formulas correspondientes para el clculo de los
diferentes ndices. Entre ellos se encuentran:
Valor global de la protena (VGP). Este ndice nos informa del valor de una protena
como suplemento de una dieta basal. Se emplea como animal de experimentacin el
pollo y se define como la ganancia de peso adicional por unidad de protena
suplementaria ensayada, expresada como porcentaje.
Coeficiente de eficacia en crecimiento (CEC). Realizado con ratas al destete, utilizando
una dieta al 10 % de protena durante 4 semanas. Los resultados se comparan con una
dieta que contiene casena. Los clculos son iguales que para el VGP.
Ambos ndices se utilizan para conocer las diferencias en la calidad proteica entre muestras
procesadas segn distintas tcnicas o para apreciar cambios debidos a la fabricacin, siempre
que estas alteraciones afecten al AA limitante.
Valor sustitutivo de la protena (VS). Nos informa, a travs del balance de nitrgeno,
del grado en que una protena puede sustituir a cualquier otra. Para ello se realizan dos
balances de nitrgeno (ver ms adelante) (BN1 y BN2) con ingestas de nitrgeno (IN)
semejantes.
Valor biolgico (VB). Es el procedimiento ms utilizado. La tcnica seguida es la de
Thomas-Mitchell. En esencia, este mtodo relaciona el nitrgeno ingerido (o la protena
ingerida) que es retenido por el animal con el nitrgeno que es absorbido. Para su
aplicacin deben tenerse en cuenta las prdidas endgenas de nitrgeno, tanto urinarias
como fecales. La determinacin del VB permite determinar el nivel de protena
requerido para obtener un balance positivo de nitrgeno y describir diferentes
alteraciones en las protenas debido al procesado. Incluso puede servir para examinar la
eficacia de la protena para satisfacer las demandas en situaciones fisiolgicas
singulares (crecimiento, lactancia, gestacin, etc.)
Utilizacin neta de la protena (UNP). Expresa el tanto por ciento del nitrgeno retenido
en relacin al ingerido. Aritmticamente es el producto entre el VB y el coeficiente de
digestibilidad verdadero (CDV).
Valor productivo de la protena (PPV). Indica tambin el nitrgeno retenido pero
analizando directamente el nitrgeno corporal.
Tabla 4.1. ndices biolgicos para la valoracin de la calidad de las protenas en la dieta.
Valor global de la protena (VGP) y coeficiente de eficacia en crecimiento (CEC):
Pp
Pc
100
Pp = Incremento de peso (g) por gramo de protena problema ingerido

Pc = Incremento de peso (g) por gramo de casena ingerido
Valor sustitutivo de la protena (VS):
VS (%) = 100
100( BN1 BN 2 )
NI
BN1 = balance de nitrgeno con la protena 1

BN2 = balance de nitrgeno con la protena 2
NI = nitrgeno ingerido (media entre los dos valores con las dos fuentes proteicas)
Valor Biolgico (VB):
VB =
I ( H He (O Oe )
100
I ( H He )
I = nitrgeno ingerido, H = nitrgeno fecal, He = nitrgeno fecal endgeno,

O = nitrgeno urinario, Oe = nitrgeno urinario endgeno
Utilizacin neta de la protena (UNP):
NPU = I ( H H e ) ( O Oe ) 100
ndices microbiolgicos
El ms utilizado es el realizado con Streptococcus zymogenes. Los requerimientos en AA de
este microorganismo pueden satisfacerse completamente, suplementando con casena. Midiendo
el crecimiento de este microorganismo con otra fuente proteica se puede determinar el valor
nutricional relativo (RNV) de esa protena respecto a la casena tomada como el 100 %.
Necesidades de protenas
En funcin de todo ello y a la vista de los problemas de digestibilidad, disponibilidad y
balance de AA es muy difcil establecer, de forma precisa la cantidad de protena que debe
administrarse a los animales para conseguir su desarrollo ptimo. Adems, ya que la protena es
el ingrediente ms caro de la dieta debe sacrsele el mayor rendimiento y evitar su utilizacin
como fuente energtica. Las fuentes proteicas ms utilizadas se recogen en el Cuadro 4-2. Como
puede observarse, casi ninguna aporta la seleccin ideal de AA, por tanto al disear una dieta
para animales de laboratorio se recomienda la utilizacin de mezclas en las que las deficiencias
de una fuente son compensadas por los excesos en la otra u otras.
El exceso de protena en la dieta, en estudios a medio y largo plazo, favorece la aparicin de
ciertas alteraciones patolgicas (principalmente renales) y reduce la longevidad del animal.
Cuadro 4-2. Composicin en aminocidos (mg/g de nitrgeno) de protenas purificadas utilizadas en

dietas de animales de laboratorio (se asume que la protena tiene 16 g de nitrgeno).
Aminocido
Casena cida
Alanina
Arginina
Asparragina
Cistina
Ac. Glutmico
Glicina
Histidina
Isoleucina
Leucina
Lisina
Metionina
Fenilalanina
Prolina
Serina
Treonina
Triptfano
Tirosina
Valina
188
231
431
25
1306
113
181
288
569
481
181
319
650
363
269
75
344
356
Casena
ANRC
188
231
469
25
1563
125
200
313
594
488
200
331
706
381
300
75
369
388
Lactoalbmina
369
188
769
200
925
144
131
319
875
669
131
244
319
313
369
144
250
313
Concentrado de
protena de trigo
331
175
681
169
1094
125
131
338
744
588
156
219
331
338
413
125
206
319
Protena de
soja aislada
269
475
725
81
1194
263
163
306
513
394
81
325
319
325
238
81
238
313
Al elegir la fuente proteica se debe optar por aquella que tenga, a priori, una mejor
utilizacin digestiva y metablica, es decir una protena de alta calidad. Por otro lado debemos
tener en cuenta la densidad energtica de la dieta. De hecho, en muchos casos las necesidades de
protena se expresan como el cociente protena/energa, con objeto de evitar las posibles
interferencias cuando nos encontramos con dietas que presentan grandes diferencias en su
densidad energtica. Tras numerosos estudios de balance de nitrgeno, crecimiento, desarrollo y
capacidad reproductiva utilizando distintas protenas a distintos niveles en la dieta, se ha
propuesto, en dietas de ingredientes naturales y para animales en crecimiento, una concentracin
del 15 % de una protena o mezcla proteica de alta calidad. Estos requerimientos se formulan
para una concentracin de energa del 17 kJ de energa metabolizable (EM) por gramo alimento
(4 kcal de EM/g).
Si estamos considerando dietas de ingredientes naturales, y a efectos prcticos, los
porcentajes de protena cruda deben establecerse en torno al 18-25 %. Por lo general, un nivel
del 20% de protena cruda resulta adecuado, en la mayora de los casos, siempre que se incluya
una fuente proteica de alta calidad, como polvo de leche, harina de pescado o de soja. Es
importante en este ltimo caso utilizar el concepto de suplemento proteico, empleando mezclas
de protenas con perfiles de AA esenciales complementarios.
Las dietas que slo se basan en cereales son inadecuadas para el crecimiento y la reproduccin
de la mayora de las especies. De hecho, el contenido de protena cruda de los cereales se
encuentra entre el 10-15%, y adems son bastante deficientes en lisina. Aparte de la lisina, los
AA azufrados metionina y cistina suelen estar en niveles bajos (y a veces tambin el triptfano)
cuando el maz es la base de las dietas. Hoy en da, alguno de estos AA, incluyendo la
metionina y la lisina, se fabrican a escala comercial y relativamente baratos, por lo que es
econmicamente factible completar la dieta con ellos.
La protena aportada en la dieta para adultos y animales en crecimiento debe ser de alta calidad,
si bien los requerimientos durante el desarrollo son ms elevados. Se ha propuesto para los
adultos un nivel de protenas del 4.5-6%, lo que se traduce en una dieta de ingredientes naturales
con unos niveles alrededor del 7%.
Respecto a las necesidades en AA, los estudios realizados se basan en la capacidad de las
mezclas de estos para provocar, no solo un ptimo crecimiento, sino una ganancia neta de
nitrgeno (es decir un balance positivo de nitrgeno). En el Cuadro 4-3 se recogen los valores
aceptados en la elaboracin de dietas para rata, ratn, cobaya, hmster y conejo.
La insuficiencia proteica se manifiesta tanto si es cuantitativa como cualitativa, por afectar a
los tejidos de rpido crecimiento principalmente en animales jvenes y en hembras gestantes.
Los sndromes ms acusados residen en un desarrollo inferior al normal, crecimiento ms lento
de los huesos largos, deformidades craneales. La anemia es la consecuencia ms frecuente de un
inadecuado nivel proteico de la dieta, con ello disminuye el contenido srico de la albmina
apareciendo desequilibrios vitamnicos, minerales y endocrinos.
Actualmente, se estudia la posible relacin entre las aportaciones de protena y la presencia
de algunas enfermedades infecciosas y parasitarias. Se ha comprobado que aportes proteico
superiores a los recomendados, aumentan la frecuencia y la gravedad de la "salmonelosis" por
Tiphimurium en ratones, siendo mucho mayor la tasa de mortalidad que cuando el aporte
proteico en la dieta es el adecuado.
Por otro lado, debemos tener en cuenta no slo la cantidad de protena, sino la calidad de
sta y las propiedades de los alimentos que la proporcionan. As, por ejemplo, la soja contiene
una protena cristalizada, inhibidora de tripsina, que puede dificultar la accin intestinal,
disminuyendo la absorcin a travs de las mucosas.
Hidratos de Carbono
En la dieta de ingredientes naturales para animales de experimentacin los almidones de los
cereales son la principal fuente de Hidratos de Carbono (HC). En dietas purificadas el aporte de
HC se realiza utilizando almidn y sacarosa, que adems contribuye a dar sabor al alimento,
mejorar su aceptacin y, por tanto, su ingestin. En los ltimos aos se ha ido sustituyendo parte
de la sacarosa por maltodextrinas, debido a los problemas de acumulacin de grasa en hgado
que genera (esteotasis heptica). La principal funcin de los HC es aportar energa a corto plazo,
por lo que no existen requerimientos especficos sino en funcin del aporte de energa.
Hay fuentes de HC que deben utilizarse con precaucin e incluso no emplearse. Este es el
caso de la fructosa y la sacarosa (disacrido que contiene fructosa), con capacidad para alterar el
flujo glucoltico del hepatocito. Se ha descrito, tras la alimentacin con estos azcares un
incremento en el peso del hgado junto con un mayor contenido en glucgeno y triglicridos,
hipertrigliceridemia y alteraciones renales con nefrocalcinosis. Estos efectos aparecen con
niveles de sacarosa del 55 % y de fructosa del 63 %.
Son escasos los problemas patolgicos asociados a alteraciones en la composicin de
almidones y fculas. En conejo, suelen presentarse ciertas deficiencias enzimticas relacionadas
con la amilasa, que actan como factor predisponente en la enteritis mucoide.
Tabla 4-3. Raciones de nutrientes recomendadas para animales alimentados ad libitum, expresados por kg de
alimento compuesto por un 90% de materia seca 1. Los requerimientos corresponden a animales en crecimiento. Para
ratas en mantenimiento y hembras en gestacin, ver en NRC (1995)
Ratn
Rata
Hmster
Cobaya
Conejo
Energa Digerible 2 (kJ/g)
16.8
16.0
17.6
12.6
10.5
Grasa (g/kg)
s.u.
50
50
s.u.
20
Fibra (g/kg)
r.u
r.u.
s.u.
100
110
Protena (g/kg)
180
1203
150
180
160
Arginina (g/kg)
3
6
7.6
s.u.
6
Asparagina (g/kg)
s.u.
4
s.u.
s.u.
s.u.
cido glutmico (g/kg)
s.u.
40
s.u.
s.u.
s.u.
Histidina (g/kg)
2
3
4
s.u.
3
Isoleucina (g/kg)
4
5
8.9
s.u.
6
Leucina (g/kg)
7
7.5
13.9
s.u.
11
Lisina (g/kg)
4
7
12
s.u.
6.5
Metionina+Cistina (g/kg)
5
6
3.2
s.u.
6
Fenilalanina+Tirosina(g/kg)
4
8
14
s.u.
11
Prolina (g/kg)
s.u.
4
s.u.
s.u.
s.u.
Treonina (g/kg)
4
5
7
s.u.
s.u.
Triptfano (g/kg)
1
1.5
3.4
s.u.
2
Valina (g/kg)
5
6
9.1
s.u.
7
Glicina (g/kg)
s.u.
s.u.
s.u.
s.u.
s.u.
Minerales y elementos traza
Calcio (g/kg)
4
5
5.9
9
4
Cloro (g/kg)
r.u.
0.5
r.u
r.u
3
Magnesio (g/kg)
0.5
0.4
0.6
2
0.35
Fsforo (g/kg)
4
4
3
5.5
2.2
Potasio (g/kg)
2
3.6
6.1
9.5
6
Sodio (g/kg)
r.u
0.5
1.5
s.u
2
Sulfuro (g/kg)
r.u
0.5
1.5
s.u
s.u
Cromo(mg/kg)
2
0.3
s.u
0.6
s.u
Cobre (mg/kg)
4.5
5
1.6
6
3
Flor (mg/kg)
s.u
1
0.024
s.u
s.u
Yodo (mg/kg)
0.25
0.15
1.6
1
0.2
Hierro (mg/kg)
25
35
140
50
r.u
Manganeso (mg/kg)
8.5
Selenio (mg/kg)
r.u.
0.1
0.1
0.1
s.u
Zinc (mg/kg)
30
12
9.2
20
r.u
Vitaminas
Retinol (mg/kg)
0.15
1.2
1.1
7.0
0.17
4
25
62
25
r.u.
Colecalciferol (g/kg)
18
27
2.7
45
36
Acetato dl--tocoferilo (mg/kg)
Menadiona (mg/kg)
3
0.05
4
5
r.u
Tiamina (mg/kg)
5
4
20
2
r.u
Riboflavina (mg/kg)
7
3
15
3
s.u
Piridoxina (mg/kg)
1
6
6
3
39
10
50
10
10
180
Cianocobalamina (g/kg)
cido nicotnico (mg/kg)
10
20
90
10
180
cido flico (mg/kg)
0.5
1
2
4
s.u
Biotina (mg/kg)
0.2
s.u
0.6
0.3
r.u
cido pantotnico (mg/kg)
10
8
40
20
s.u
Colina (mg/kg)
600
1000
2000
1000
1200
Inositol (mg/kg)
r.u
n.r
100
n.r
s.u
cido ascrbico (mg/kg)
n.r
n.r
n.r
200
n.r
No se pueden dar valores absolutos de las raciones de nutrientes, y diferentes comits proponen distintas raciones.
La energa metabolizable generalmente vara entre un 90 a 95% de la energa digerible.
3
Raciones recomendadas para la llamada protena ideal.
n.r = no requerida; r.u = requerida, pero requerimiento desconocido; s.u. = estatus desconocido.
2
10
Fibra
Es un componente hidrocarbonado no digestible de la dieta en animales monogstricos. Esto
significa que no aporta energa, en cantidades apreciables, ni otros nutrientes. Sin embargo,
debido a su papel regulador de todo el proceso digestivo, disminuyendo el tiempo de trnsito y
aumentando el volumen de las heces, entre otras funciones, se le considera un componente
diettico ms. La fibra da mayor volumen a la dieta, evitando la formacin de masas
alimenticias slidas que impiden la penetracin de los jugos digestivos. Tiene efecto laxante por
distender el intestino y contribuye a la palatibilidad de los alimentos, sobre todo en conejo y
cobayo. Un exceso conduce a un menor consumo de alimento provocando a largo plazo la
desnutricin del individuo.
Al ser prcticamente acalrica acta como diluyente energtico en las dietas, y su adicin
provoca un incremento en la ingesta de alimento del animal. Esta caracterstica es aprovechada
para el diseo de dietas experimentales en las que es necesario modificar la densidad calrica
para cambiar la ingesta global de alimentos del animal o bien en estudios de sobre regulacin de
la ingesta. Normalmente en dietas purificadas se aade en proporciones cercanas a 5 % en forma
de fibra no soluble (celulosa). Estudios realizados en rata muestran que la fibra insoluble hasta
niveles dietticos del 20 % no afecta al crecimiento del animal. En dietas de ingredientes
naturales la fibra procede de distintas fuentes vegetales (soja, alfalfa, maz, etc.).
Grasas
La grasa de la dieta formada por lpidos, mayoritariamente triacilglicridos, tiene distintas
funciones dentro del organismo. Por una parte constituye una fuente excelente de energa por su
alta densidad calrica (9 kcal/g), aproximadamente el doble de la contenida en HC y protenas.
Por otro lado, es un elemento estructural de las membranas celulares, aportando cidos grasos
(AG) esenciales que intervienen en diversas funciones corporales como la formacin de
eicosanoides; asimismo es necesaria para la absorcin de vitaminas liposolubles (A, D, E y K).
Por ltimo, tiene un papel importante en la palatabilidad de los alimentos y por tanto en la
aceptacin de la dieta por el animal incrementando su ingestin.
La grasa, en dietas de componentes naturales, esta formando parte de algunas semillas (haba
de soja, cacahuete o linaza) o de algunos componentes de origen animal (harinas de pescado o
carne, polvo de leche). Tambin la grasa de la dieta, tanto en dietas de componentes naturales
como purificadas, puede ser aadida en forma ms o menos pura (aceite de hgado de pescado,
sebo, aceites vegetales, etc.).
El componente lipdico ms abundante en la dieta son los triacilglicridos (grasas neutras),
junto con fosfolpidos y colesterol, en menor proporcin. Los AG presentes en los triacilglicridos determinan la calidad de la grasa de la dieta. Existen tres tipos de AG, los saturados,
monoinsaturados y poliinsaturados, dependiendo de si no contienen, presentan uno o dos o ms
dobles enlaces en su molcula respectivamente. En la Figura 4-1, se recoge la composicin en
AG de distintas fuentes de grasa utilizadas en las dietas para animales de experimentacin.
11
Grasa de coco
Mantequilla
Aceite de palma
Grasa de cerdo
Margarina normal
Grasa de pollo
Aceite de pescado
Margarina poliinsat.
Aceite de oliva
Aceite de maiz
Aceite de soja
Aceite de girasol
0%
20%
40%
60%
80%
100%
% de A.G. totales (Valores medios)

AG SAT
AG MONO
AGPI. n-6
AGPI. n-3
Otros AG
Figura 4-1. Perfil de cidos grasos de distintas grasas dietticas. (Tomado de Mataix J y Carazo, E.
Nutricin para Educadores. Ed. Diaz de Santos 1995)
Los AG esenciales pertenecen al grupo de los poliinsaturados. Entre ellos se encuentra el

cido linoleico (C18:2 n-6), que no puede ser sintetizado en el organismo y debe, en
consecuencia, ser aportado en la dieta. Pertenece a la serie n-6 y a partir de l, por elongacin y
desaturacin, se forman numerosos AG de cadena larga, entre los que cabe destacar el cido
araquidnico (C20:4 n-6), a partir del cual de forman los eicosanoides (prostaglandinas,
tromboxanos, leucotrienos, etc.), con muy variadas acciones biolgicas, adems de formar parte
de las membranas celulares y subcelulares. Las necesidades de este AG se presentan en funcin
de la EM en porcentaje. Existen diferencias en los requerimientos dependiendo del sexo
(mayores en el macho que en la hembra). En ratas en crecimiento, las necesidades se sitan en
el 0.5% de la EM en la hembra y en el 1.3% en el macho. Estas mismas cifras o algo mayores
son las descritas en animales gestantes y durante la lactancia. Utilizando como ndice de
necesidades en cido linoleico la concentracin tisular de cido araquidnico, se ha establecido
como nivel adecuado, en la rata, 1200 mg por 100 g de alimento (2.5% de la EM).
Los AG poliinsaturados de la serie n-3 se originan a partir del cido linoleico (C18:3 n-3), a
partir del cual, por elongacin y desaturacin se forman distintos cidos grasos de importancia
biolgica, ya que a partir de ellos tambin se forman eicosanoides de la serie 3 (los formados a
partir del cido araquidnico se denominan de la serie 2). Entre ellos podemos citar el cido
eicosapentaenoico (EPA) (C20:5 n-3) y el docosahexaenoico (DHA) (C22:6 n-3). El carcter
esencial del cido linoleico ha sido objeto de discusin a lo largo de las ltimas dcadas.
Recientemente parecen existir algunas dudas acerca de dicho carcter, sobre todo en lo que se
refiere a algunas funciones cerebrales y en especial al desarrollo funcional de la retina.
Utilizando como referencia los niveles cerebrales de AG n-3 se han establecido los
requerimientos de cido linoleico en 2g/kg de alimento (0.4% de la EM).
Son numerosos los signos clnicos de deficiencias en cidos grasos esenciales. En el Cuadro
4-4 se recogen algunos de ellos y la capacidad comparativa de los AG n-6 y n-3 para revertir
dichos signos patolgicos. Las deficiencias cuantitativas y cualitativas en cobayo ocasionan
alopecias en hembras gestantes y otro tipo de sndromes en jvenes, tales como dermatitis, piel
escamosa y seca. Estas deficiencias se corrigen completando la dieta con cidos grasos no
saturados o paja troceada. En determinadas cepas de ratones, tambin es necesario un mayor
aporte sobre todo en lactantes. Un exceso de cidos grasos de origen animal origina procesos
gerontolgicos.
12
Signo
Disminucin del crecimiento
Trastornos reproductores
Dermatitis
Cociente trieno/tetraeno en tejidos y sangre
Fragilidad capilar
Capacidad para aliviar el sntoma

n-6 mejor que n-3
n-6 si alivia; n-3 no afecta
n-6 si alivia; n-3 no afecta
n-6 igual que n-3
n-6 igual que n-3
Cuadro 4-4. Capacidad relativa de los cidos grasos esenciales n-6 y n-3 para aliviar los signos de
deficiencia en cidos grasos esenciales en ratas
La utilizacin digestiva de la grasa diettica se relaciona con la longitud de la cadena por un

lado y con el grado de instauracin de los AG por otro. Respecto a la longitud de la cadena, los
de menor longitud (AG de cadena media) son ms fcilmente absorbibles al ser menos
dependientes de la lipasa y los cidos biliares; adems se absorben va sangunea y no linftica.
Conforma aumenta la longitud de la cadena la digestibilidad disminuye. En general los
coeficientes de digestibilidad superan el 80 %, excepto con algunos tipos de grasa como
determinados aceites de pescado, concentrados de EPA (cido eicosapentaenico), mantequilla
de coco y varios tipos de grasas hidrogenadas.
Respecto a los niveles ptimos de grasa en la dieta, los datos disponibles hasta el momento
relacionados con la longevidad y la aparicin de tumores, apuntan a cifras cercanas al 5 % ya
que estos niveles presentan las mximas ventajas y mnimos inconvenientes. Adems, este
contenido en grasa permite que muchas fuentes dietticas de este nutriente aporten niveles
aceptables de AG esenciales.
Minerales
Se sabe cul es el papel que desempea la mayor parte de los minerales en el correcto
crecimiento y funcin de los organismos animales. Existen algunos cuyas necesidades son
relativamente elevados, como el calcio, fsforo y magnesio, que entre otras funciones tienen la
de formar parte de estructuras orgnicas como el hueso y los dientes. El sodio, potasio y cloruro
les siguen en orden de importancia cuantitativa. Son los responsables del mantenimiento de una
correcta presin osmtica y un balance hdrico y electroltico (incluyendo el equilibrio
cido/base) en los fluidos corporales; son los llamados electrlitos. Otros elementos
inorgnicos, necesarios en muy pequeas cantidades, son los oligoelementos o minerales traza.
As, el hierro es un componente esencial de la hemoglobina, el molibdeno participa en distintos
sistemas enzimticos, etc. Por ltimo, otros elementos se necesitan en tan pequeas cantidades
que no es necesario aadirlos a las dietas de ingredientes naturales, ya que se encuentran entre
sus componentes, como contaminantes en los suplementos minerales, o bien en el agua de
bebida, de donde el animal los toma, pero s es necesario aadirlos en las dietas purificadas.
Calcio y Fsforo: se consideran juntos ya que sus papeles funcionales estn estrechamente
relacionados. Cerca del 80 % del fsforo y prcticamente todo el calcio se encuentran en el
cuerpo formando parte del esqueleto o del diente, el resto se encuentra en los tejidos blandos
donde realizan funciones importantes. As el fsforo forma parte de los cidos nucleicos y de
distintos sistemas enzimticos y molculas energticas. El calcio es importante en la contraccin
muscular y en los procesos de coagulacin.
Al considerar las recomendaciones dietticas de estos minerales, no slo debemos pensar en
las cantidades absolutas de cada mineral, sino cuidar la relacin que existe entre ellos, ya que si
alguno est en exceso, esto puede afectar a la utilizacin del otro. Para la mayor parte de las
13
especies, la relacin ptima Ca:P es de 2:1 1:1. Los ltimos estudios ponen de manifiesto que
las relaciones menores de 1 (0.96) pueden cubrir las necesidades de ambos minerales. Existen
intereses contrapuestos al intentar determinar las necesidades de calcio; por una parte se trata de
maximizar las concentraciones de calcio y fsforo en el hueso, pero por otra, se tiende a evitar
la osificacin de los tejidos blandos, y en concreto la nefrocalcinosis.
Para animales en crecimiento y adultos (no durante la lactancia) se recomiendan 5g/kg de
alimento de calcio y 3 de fsforo. En hembras en lactantes se debe incrementar un 25 % de
media (6.3 g/kg de alimento de calcio y 3.7 de fsforo). Para una correcta absorcin intestinal
de calcio y su depsito seo, es necesaria la presencia de vitamina D. Una deficiencia en esta
vitamina puede paliarse, en parte, incrementando la ingestin de calcio y fsforo.
Las etapas de la vida en las que se incrementan las necesidades de ambos minerales son el
periodo de crecimiento como consecuencia de la formacin del esqueleto y en las hembras
adultas las etapas de gestacin y lactacin, para compensar las prdidas debidas a la
transferencia de estos elementos al embrin en desarrollo y a la leche. Las aves, necesitan, sobre
todo el calcio para la formacin de la cscara del huevo. Cuando la ingesta de calcio es
inadecuada y se entra en una situacin de balance negativo de calcio, existe una movilizacin
del calcio y fsforo del esqueleto para atender las funciones orgnicas lo que conduce a una
desmineralizacin sea (osteoporosis) hacindose los huesos ms frgiles y fcilmente
fracturables.
Los cereales son una fuente pobre de calcio, y al menos que la dieta contenga cantidades
importantes de productos animales como leche en polvo o harina de carne y huesos, el calcio
debe aadirse a la dieta en forma de harina de hueso esterilizada, fosfato clcico y polvo de
caliza. El fsforo es ms abundante en los productos vegetales, particularmente en el salvado y
en el forraje. Sin embargo, gran parte de este se encuentra en forma de cido ftico con el que el
calcio y otros elementos forman sales insolubles. El fsforo en esta forma no es fcilmente
absorbido, y adems otros elementos, entre ellos el calcio, tampoco estn disponibles para el
animal. El exceso de calcio y fsforo en la dieta puede impedir la absorcin de otros minerales a
travs de la formacin de sales dobles.
Existen una serie de factores dietticos que pueden afectar en uno u otro sentido
(favoreciendo o impidiendo) la absorcin de calcio y fsforo de la dieta por parte de los
animales de experimentacin (Cuadro 4-5).
Las protenas son fuente de fsforo de la dieta en distintas cantidades pero todo el fsforo
que contienen presenta la misma biodisponibilidad en funcin de la forma qumica en que se
encuentra. Dietas pobres en fsforo pero adecuadas en calcio, originan clculos en ratas cuando
el aporte proteico es insuficiente.
Factores que reducen la absorcin
Bajos niveles de vitamina D
Altos niveles de calcio en la dieta (10 g/kg)
Altos niveles de fsforo en la dieta
Alto contenido en grasa (> 20 %)
Presencia de oxalatos
Presencia de fitatos
Aislados de protena de soja
Accin
Disminuyen la absorcin
Disminuyen la absorcin de fsforo
Disminuyen la absorcin de calcio
Disminuye la absorcin de calcio y fsforo en adultos y viejos
Disminuyen la absorcin de calcio
Disminuyen la absorcin de fsforo y calcio
Disminuyen la absorcin de fsforo
Factores que favorecen la absorcin
Accin
Dietas altas en fructosa

Aumentan la absorcin de fsforo
Dietas altas en disacridos (Lactosa, sacarosa) Aumentan la absorcin de calcio
Tabla 4.5. Factores dietticos que afectan a la absorcin de calcio y fsforo
14
Magnesio: se encuentra principalmente en el esqueleto pudindose movilizar de ese

depsito igual que el calcio y el fosfato cuando la ingesta es inadecuada. Su presencia es
esencial en los sistemas enzimticos. La deficiencia lleva a un crecimiento pobre y a una
mineralizacin sea incorrecta y si esta es severa aparecen alteraciones neurolgicas que pueden
conducir a la muerte con convulsiones arritmia y vasodilatacin entre otros sntomas.
La absorcin y excrecin de magnesio esta muy relacionada con la de calcio y fsforo, por
tanto el aumento de estos dos ltimos minerales incrementa las necesidades de magnesio como
resultado de una menor absorcin y/o una mayor excrecin. Inversamente, un exceso de
magnesio puede alterar la capacidad de retener calcio. Un bajo porcentaje de magnesio y calcio
producen afecciones en la osificacin y excitabilidad neuromuscular.Tambin los fitatos
interfieren en la absorcin de magnesio por lo que es aconsejable elevar los niveles cuando hay
fuentes alimenticias ricas en cido ftico. Vanse necesidades en el Cuadro 4-3.
Sodio, potasio y cloruro: estos tres elementos estn implicados en el balance de agua y
electrolitos del organismo. El potasio se localiza, principalmente en el interior de la clula, el
sodio predomina en el lquido extracelular. Las concentraciones de sodio, potasio, cloruro y
bicarbonato controlan la actividad osmtica dentro y fuera de la clula y regulan el pH de los
lquidos orgnicos. Junto con los iones carbonatos, mantienen la presin osmtica y el equilibrio
cido-base. Cualquier deficiencia puede llegar a retrasar e incluso inhibir el crecimiento normal.
El contenido en potasio de los alimentos ms corrientes es suficiente para cubrir las
necesidades, sin embargo es costumbre aadir cloruro sdico (sal comn) para el aporte de
sodio y cloruro. Esta prctica tiene la ventaja de que la sal estimula la secrecin salival y por
tanto acta como un estimulador del apetito (aumenta la palatabilidad). Estas altas ingestas de
sal carecen de efectos indeseables si el animal no tiene restricciones en la ingestin de agua.
Las necesidades en lo que se refiere a los electrlitos y por cada kg de alimento son: 0.5 g
de cloro, 3.6 g de potasio (5.0 g durante la lactancia) y 0.5 g de sodio.
El sodio, el potasio y el cloro, junto con los iones carbonatos, mantienen la presin osmtica
y el equilibrio cido-base. Dietas pobres en sodio han llegado a producir reblandecimiento de
los huesos en rata, acompaado de otros sndromes como uveitis, ulceracin corneal, trastornos
en la reproduccin y eventualmente la muerte. Un complemento adicional de sodio se consigue
agregando cloruro sdico. Las deficiencias de potasio son rpidamente acusadas en la necropsia,
observando ascitis e hidrotorax.
Hierro y cobre: es conocido que la ingesta inadecuada de hierro conduce a una anemia
ferropnica ya que este elemento forma parte de la hemoglobina. Sin embargo, al necesitarse
muy pequeas cantidades de este elemento, las necesidades suelen cubrirse con el contenido en
hierro que contienen los componentes de la dieta de ingredientes naturales. Aunque la leche es
pobre en hierro, los animales lactantes cubren sus necesidades de hierro gracias al aporte
durante la gestacin siendo prioritario para las gestantes. Los requerimientos de hierro para el
periodo de crecimiento se sitan en 35 mg/kg de dieta y para hembras gestantes y en lactacin
sube a 75 mg/kg de dieta.
El cobre, en pequesimas cantidades, tambin es necesario para la sntesis de hemoglobina,
y la formacin de los glbulos rojos, flavoprtidos y oxidasas. Su carencia est relacionada con
sndromes de tipo nervioso. Sin cobre, el hierro no puede incorporarse a la molcula de
hemoglobina. Ya que la leche contiene poco cobre, el aporte a las gestantes debe estar
asegurado al igual que en el caso del hierro para cubrir las necesidades del recin nacido. Este
metal tambin interviene en la sntesis de queratina y melanina y por tanto su deficiencia
provoca una escasez de pelo, escasamente pigmentado.
15
El contenido en cobre de los alimentos naturales vara en funcin del contenido de este
elemento en el suelo de cultivo. Hay que tener cuidado con el suplemento, ya que el exceso de
cobre puede ser perjudicial y favorecer la aparicin de anemia hemoltica. Los requisitos son de
5 mg/kg de dieta para animales en crecimiento y adultos y de 8 mg/kg de dieta para hembras en
lactacin y gestantes. En dietas con alto contenido en cinc, cadmio y vitamina C hay que
incrementar la cantidad de cobre.
Manganeso: la deficiencia de manganeso como elemento integrante de varios sistemas
enzimticos se traduce en alteraciones del sistema reproductor tanto en machos como en
hembras. Se observan retrasos en la madurez sexual, ciclos estrales irregulares, reabsorcin de
fetos y camadas dbiles. El manganeso tambin se relaciona con el crecimiento normal del
hueso conduciendo su dficit a malformaciones seas. Las altas ingestas de calcio y fsforo,
hierro y cobre pueden dificultar la utilizacin del metal y, por tanto, aumentar sus necesidades.
Cinc: es el componente esencial de una enzima respiratoria, la anhidrasa carbnica.
Interviene, tambin en procesos de queratinizacin y formacin del hueso. Las deficiencias en
este metal conducen a crecimiento retardado, escaso desarrollo del pelo y malformaciones
seas. Su disponibilidad en la dieta se ve afectada por elevados niveles de calcio y fsforo y la
presencia de cido ftico. La harina de soja afecta de forma negativa la asimilacin nutricional
de este metal tanto por su contenido en fitina y en otro factor quelante del calcio. Antiguamente
los roedores obtenan parte de los requerimientos de zinc al lamer y mordisquear las jaulas
galvanizadas. El exceso es txico presentndose anemias probablemente como resultado del
antagonismo entre zinc y cobre. Los requerimientos para animales adultos y en crecimiento son
de 12 mg/kg de dieta, si se utiliza harina de soja se deben incrementar las cantidades hasta 18
mg/kg de dieta. Para ratas en lactacin y gestantes las necesidades se sitan en 25 mg/kg de
dieta. El cinc es necesario en la formacin de distintas enzimas (fosfatasas, catalasas, etc), se
sospecha su deficiencia cuando existe disminucin de crecimiento, prdida de peso e hiper
queratosis; el cobalto est relacionado con la aparicin de anemias micro y normocticas.
Yodo: es imprescindible para la sntesis de las hormonas tiroideas yodadas. Su deficiencia
provoca hipotiroidismo con retraso en la maduracin sexual, inactividad y obesidad; adems la
glndula se hipertrofia apareciendo bocio. La deficiencia en este elemento no es comn aunque
puede aparecer en reas con bajo contenido de yodo en el suelo de cultivo. Los requerimientos
son, para la rata, de 150 mg/kg de alimento.
Selenio: este elemento presenta funciones semejantes a las de la vitamina E en el
organismo, de hecho, es difcil producir una deficiencia en selenio en eratas con un aporte
adecuado de vitamina E. Se conoce, recientemente que el selenio forma parte de muchas
protenas enzimticas (selenoproteinas) en forma de selnometionina o selenocisteina. Tambin
existen proteinas fijadoras de selenio. De entre las selenoproteinas podemos destacar la
glutation peroxidasa y la iodotironina-5-deyodinasa tipo I. El selenio puede estar en dos formas
inorgnicas principales en los alimentos, como selenito o como selenato, en la forma orgnica
adopta una de las dos mencionadas antes. La utilizacin digestiva y metablica de ambos tipos
de fuentes son bastante diferentes siendo de peor a mejor biodisponibilidad la siguientes selenito
< selenato < selenometionina < selenocisteina.
Utilizando distintos criterios los requerimientos se ha establecido en: 150 g/kg de dieta
para dietas de crecimiento y mantenimiento y de 400 g/kg (en forma de selenito) o algo menos
en las otras formas para ratas en gestacin y lactacin.
Molibdeno: es un cofactor para la xantina oxidasa/deshidrogenasa, la aldehido y la sulfito
oxidasas todas ella participan en sistemas redox. Sus requerimientos nutricionales estn todava
mal establecidos ya que faltan criterios fiables. El NRC (1995) apunta la cifra de 150 g/kg de
dieta. Es importante sealar que presenta interacciones con otros minerales como el cobre y el
azufre.
16
Otros minerales: presentes en muy bajas concentraciones en las dietas de ingredientes

naturales, pero que no se conoce su asociacin a ningn enzima o complejo enzimtico o su
participacin como cofactor en ninguna ruta metablica del organismo. Sin embargo, se
defiende su papel como nutriente esencial, y su ausencia o su dficit en dietas para animales de
laboratorio, como ocurre en dietas purificadas o qumicamente definidas, pueden causar
alteraciones en el ptimo crecimiento y desarrollo, as como en la capacidad reproductiva de
estos animales. Entre ellos se encuentran el cromo, arsnico, boro, nquel, vanadio, silicio,
estao, litio, fluoruro, plomo, azufre y cadmio. El cromo y el vanadio se han asociado con el
metabolismo de la glucosa y la funcin de la insulina, el litio se ha asociado con una mayor
eficacia en la reproduccin, el silicio se relaciona con un crecimiento ptimo y el azufre con
presencia en los aminocidos azufrados y su participacin en la formacin del cartlago
Vitaminas
Las vitaminas son sustancias orgnicas que, aunque se requieren en pequeas cantidades,
son esenciales para la salud y el bienestar del animal. Su funcin biolgica es actuar como
biocatalizadores de las distintas reacciones que tienen lugar en la materia viva, formando parte
de distintos sistemas enzimticos. Los efectos de la deficiencia en una vitamina dada son
bastante diferentes en las distintas especies, aunque a veces aparecen manifestaciones
particulares. En el Cuadro 4-6 se recogen las principales alteraciones producidas por las
deficiencias en las distintas vitaminas.
Las vitaminas A, D, E y K son liposolubles y consecuentemente se encuentran en la
fraccin lipdica de los alimentos y se absorben con ella. Estas vitaminas se pueden almacenar
en el organismo, y especialmente en el hgado, lo que permite al animal no tener
obligatoriamente que ingerirlas diariamente. Las vitaminas del complejo B y la C son
hidrosolubles y no se almacenan en el organismo, si exceptuamos a la vitamina B12, por lo que
es necesario su aporte diettico diario. Algunas vitaminas del complejo B se encuentran, de
forma natural en los alimentos, unidas a otras macromolculas, frecuentemente protenas, siendo
fcilmente separadas por los procesos digestivos. Estas formas ligadas deben tenerse en cuenta
en los mtodos de valoracin de las vitaminas en los alimentos para no infravalorar su
contenido.
Vitamina
Nombre qumico
Retinol
B1
Tiamina
B2
Riboflavina
cido nicotnico
cido pantotnico
B6
Piridoxina
Efecto de la deficiencia
Retardo en el crecimiento
Problemas en la reproduccin
Alteraciones de la visin nocturna
Queratinizacin de epitelios
Mayor sensibilidad a la infeccin
Polineuritis; Convulsiones y Fallo cardiaco
Perdida de pelo; Cataratas
Anormalidades nerviosas
Dermatitis
Prdida del apetito
Baja velocidad de crecimiento
Anemia
Lengua negra (perro)
Despigmentacin capilar
Necrosis adrenal
Prdida del apetito
Dermatitis
17
Biotina
cido Flico
B12
Cianocobalamina
C
D2
D3
E
cido ascrbico
Ergocalciferol
Colecalciferol
Tocoferoles
K1
K2
K3
Filoquinona
Menaquinona
Menaftona
Anemia microctica
Hiperexcitabilidad
Convulsiones
Crecimiento pobre
Disminucin en la produccin de anticuerpos
Dermatitis
Parlisis
Alopecia
Trastornos en la reproduccin
Crecimiento pobre
Anemia macrocitica
Leucopenia
Trastornos en la reproduccin
Anemia perniciosa
Escorbuto ( en primates y cobaya)
Raquitismo en animales jvenes
Osteoporosis en animales adultos
Distrofia muscular
Alteraciones en la reproduccin
Necrosis heptica
Enfermedades hemorrgicas
Aumento en el tiempo de coagulacin
Tabla 4.6. Efecto de las deficiencias vitamnicas en los animales de laboratorio
Vitamina A: preformada se encuentra en los alimentos de origen animal en forma de

alcohol, retinol, steres del cido retinoico o como aldehido, retinal. En alimentos vegetales se
encuentran las provitaminas, los pigmentos carotenoides, que pueden convertirse en vitamina A
en el organismo.
Los aceites de hgado de peces son fuentes ricas, aunque poco estables, de vitamina A. Los
cidos grasos poliinsaturados de los aceites de pescado se oxidan fcil y rpidamente y los
productos resultantes aceleran la destruccin de la vitamina A. Por ello si se utilizan estas
fuentes en la formulacin de dietas deben, previamente, estabilizarse con la adicin de algn
antioxidante. Actualmente la vitamina A se aade, de sntesis en forma de retinil acetato o
palmitato en preparaciones protegidas de la oxidacin con cubiertas protectoras de cera o
gelatina que tienen la ventaja de su alta estabilidad y el inconveniente de su difcil dispersin y
mezcla por el gran tamao de la partcula.
Dentro de los carotenoides con actividad vitamina A el ms significativo es el -caroteno,
un pigmento naranja que se encuentra en los vegetales como la zanahoria y el maz. Esta
formado por dos molculas de vitamina A y en el intestino se hidroliza, tericamente en ellas.
En la prctica, la transformacin del caroteno en vitamina A esta influenciada por distintos
factores y la relacin de conversin ideal difcilmente se consigue. La equivalencia entre las
cantidades de -caroteno y retinol dependen de la concentracin a la que se administre el
primero de acuerdo con Brubacher y Weiser (1985).
En el Cuadro 4-7 se recogen las equivalencias entre ambos para distintas concentraciones de
-caroteno. Es importante hacer notar que el gato es incapaz de transformar los carotenoides en
vitamina A y por tanto se le debe administrar la vitamina preformada. El -caroteno es ms
estable que la vitamina A.
18
Dosis de -caroteno
mol/kg P.C.
< 0.3
1
2
6
12
48
Biopotencia molar
relativa (%)
Moles de -caroteno
equivalentes a 1 mol
de retinol
g de -caroteno
equivalentes a 1 mol
de retinol
100
50
30
15.4
9.5
4.3
1.0
2.0
3.0
6.5
10.5
23.3
1.84
3.75
6.25
12.20
19.70
43.60
Tabla 4.7. Equivalencias de -caroteno y retinol en diferentes concentraciones (NRC, 1995).
Actualmente las necesidades de vitamina A se establecen en funcin del peso corporal ms

que por la ingesta de energa. Los requerimientos de esta vitamina, en la rata, dependen de la
fuente que se vaya a utilizar; as, si administramos esteres del cido retinoico las necesidades
son de 2.4 mol/kg de diets (2300 UI/kg). Desde un punto de vista prctico los requerimientos
pueden cubrirse con 0.7 mg/kg de dieta por retinol, 0.8 mg/kg de dieta por el retinil acetato y
1.3 mg/kg de dieta para el retinil palmitato. A estas concentraciones tan bajas 1.3 mg/kg de dieta
de -caroteno (equivalente a 12.4 mol/kg) es suficiente para cubrir dichas necesidades de
vitamina A.
Las necesidades de vitamina A dependen de otros factores nutricionales, que deben tenerse
en cuenta a la hora de formular la dieta. Las dietas hipoproteicas disminuyen los niveles
plasmticos de vitamina A de forma paralela a los de su protena transportadora (protena
transportadora de retinol). Estas dietas bajas en protena que cursan con cambios en la velocidad
de crecimiento afectan de forma directa a las reservas hepticas y renales de esta vitamina. En
ratas con dficit de cinc disminuye la liberacin heptica de vitamina A, y una escasa ingestin
de vitamina E disminuye el contenido heptico de vitamina A. El estrs aumenta los
requerimientos de esta vitamina.
El exceso de vitamina A puede tener efectos txicos, como se ha demostrado en diversos
animales de laboratorio tras sobredosis. Se han descrito deformidades esquelticas, anemia,
retraso en el crecimiento y escaso desarrollo del pelo. Estos efectos txicos se corresponden con
altas ingestas de retinol o retinil esteres no para las altas ingestas de -caroteno.
La influencia de esta vitamina puede demostrarse en el metabolismo de los hidratos de
carbono, protenas, cidos nucleicos, esfenoides y fosfolpidos. Su mecanismo de accin se
desconoce salvo para la funcin retinal. El porcentaje de protena, grasa, vitamina D y E, zinc y
cidos grasos insaturados, pueden afectar a la absorcin y la utilizacin de la vitamina A. Dietas
deficientes en protenas provocan una disminucin srica y tisular de vitamina A, aunque el
porcentaje de almacenamiento sea normal. Dosis de 25000-75000 UI de vitamina A, son txicas
para las ratas si se las administra 16 das consecutivos, con signos de alopecia, posturas
anormales al andar y prdida de peso. El dficit de esta vitamina est asociado a un retraso en el
crecimiento, hemoconcentracin, aumento del lquido cefalorraqudeo, mayor susceptibilidad a
las infecciones, queratinizacin de la piel, degeneracin retiniana y fracaso de la reproduccin.
Ratas alimentadas con una dieta exenta de vitamina A dejen de crecer a las 6-8 semanas,
pierden peso, y mueren a las 10-16 semanas.
Vitamina D: tiene un papel relevante en el metabolismo del calcio y los fosfatos, y por tanto
en el metabolismo seo, ya que es precursora del 1,25 dihidroxicolecalciferol (1,25-DHCC),
una hormona que participa en el metabolismo de estos minerales a nivel digestivo, renal y seo.
Sin embargo, esta vitamina participa en la sntesis de eritrocitos y en los mecanismos de
proliferacin de linfocitos inmunocompetentes (B y T).
19
En la naturaleza se encuentran distintas formas de esta vitamina. Las ms importantes

desde el punto de vista nutricional son el ergocalciferol (D2) que se obtiene por radiacin
ultravioleta de los esteroles vegetales, como el ergosterol y el colecalciferol (D3) que se obtiene
por radiacin ultravioleta del 7-dehidrocolesterol presente en los tegumentos animales. De
nuevo, los aceites de hgado de pescado son fuentes ricas en vitamina D3. Hoy da se aaden a
las dietas preparados comerciales de la vitamina en vehculo lipdico o en polvo. Los pjaros no
pueden utilizar el ergocalciferol por lo que se le debe administrar el colecalciferol en la dieta.
Los mamferos utilizan tanto la D2 como la D3, aunque recientemente se ha observado en
primates del nuevo mundo que tienen requerimientos especficos de colecalciferol. Por
exposicin solar se puede sintetizar la vitamina a partir de los precursores presentes en los
tejidos superficiales por lo que sus necesidades dietticas disminuyen.
Aunque no hay ninguna duda de que el aporte de vitamina D es imprescindible para un
ptimo crecimiento y desarrollo, el establecimiento de las necesidades dietticas es difcil ya
que la aparicin de signos clnicos de raquitismo pueden retrasarse mucho en ratas con dietas
deficientes en vitamina D siempre que la dieta contenga cantidades adecuadas de calcio y
fsforo y la relacin entre ambos se acerque a 1. Los requerimientos de esta vitamina se sita en
1000 UI/kg de dieta (65 nmol de colecalciferol/kg de dieta; 25 g/kg).
Una ingestin elevada de vitamina D puede ser txica y causar desmineralizacin sea y
deposicin de calcio en los tejidos blandos.La deficiencia de esta vitamina est asociada a
procesos de poca mineralizacin del hueso, adems de ensanchamiento y descalcificacin del
cartlago en lminas.
Vitamina E: este nombre se aplica a todos los compuestos de tocoferol, el ms activo
biolgicamente es el -tocoferol (RRR--tocoferol). Hoy en da se utiliza el all-rac--tocoferol
que es una mezcla de ocho esteroismeros, siete de ellos con menor actividad que el RRR-tocoferol. La correspondencia entre ambos, en cuanto a actividad vitamina E es de 1:1,36 (1 mol
de RRR--tocoferol tiene una actividad igual a 1.36 moles de all-rac -tocoferol. Esta vitamina
se distribuye ampliamente en los componentes vegetales de la dieta y es particularmente
abundante en el germen de los granos de cereales. El aceite de germen de trigo se usa desde
hace tiempo como suplemento de vitamina E aunque actualmente se utilizan compuestoas de
sntesis como el DL--tocoferil acetato en solucin oleosa o en polvo. Este es hidrolizado en el
intestino y el tocoferol es absorbido. El hecho de estar esterificado protege a la molcula de
tocoferol.
La vitamina E se asocia con una gran variedad de funciones orgnicas, aunque los efectos
de su deficiencia difieren entre las distintas especies. En ciertas circunstancias se comporta
como antioxidante celular y puede reemplazarse con xito por otros antioxidantes como el
difenil-p-fenilendiamina (DPPD). Otros efectos, como hemos mencionado, son intercambiables
con el selenio. En los animales de laboratorio la funcin ms importante es el mantenimiento de
una reproduccin normal. Su deficiencia conduce a una infertilidad del macho y en las hembras
la camada no llega a trmino. Esta funcin no puede ser sustituida por otras sustancias. Hoy en
da se considera como el mejor parmetro para valorar el estatus de vitamina E la respuesta del
sistema inmune.
Los requisitos de vitamina E por los animales de laboratorio estn ligados a las
concentraciones diettica y tisulares de cidos grasos poliinsaturados ya que esta vitamina evita
el dao oxidativo de ellos, tanto en la dieta como cuando forman parte de los tejidos
(fosfolpidos de membrana). Para dietas con un contenido en grasa inferior al 10 % los
requerimientos de vitamina E, en forma de RRR--tocoferol se establecen en 18 mg/kg de dieta
(42 mol/kg)(27 UI/kg de dieta). Si se utiliza el all-rac--tocoferol las cantidades se elevan
ligeramente a 27 mg/kg de dieta (57 mol/kg). Las altas concentraciones de retinol y -caroteno
interfieren con la absorcin de vitamina E.
20
Vitamina K: esta implicada en los procesos de coagulacin sangunea debido a su papel en

la conversin del cido glutmico en cido -carboxiglutmico (Gla) que forma parte de las
proteinas que intervienen en los procesos de formacin del cogulo, protrombina y factores VII,
IX y X.
La forma de la vitamina ms adecuada desde el punto de vista de su biodisponibilidad es la
filoquinona (vitamina K1) que se encuentra en las plantas verdes. Las menaquinonas (vitamina
K2) son sintetizadas por las bacterias intestinales. Los animales coprofgicos cubren parte de sus
necesidades en vitamina K de esta manera. La aparicin de enfermedades hemorrgicas en
colonias de ratas libres de patgenos (SPF Specific Patoghen Free Libres de Grmenes
Patgenos-) sugiere que la contribucin de los microorganismos al aporte de vitamina K en los
animales criados convencionalmente puede ser, desde el punto de vista nutricional, muy
significativa. En ambientes SPF la flora intestinal esta restringida y pueden faltar las bacterias
productoras de vitamina K. Por tanto, los animales SPF tienen necesidades superiores de esta
vitamina respecto a los normales. Por supuesto, los animales libres de grmenes dependen
totalmente del aporte de vitamina K por la dieta. La menadiona (vitamina K3) es un derivado
sinttico de la vitamina K que ligado al bisulfito o difosfato sdico es hidrosoluble por lo que se
utiliza frecuentemente en las dietas para animales de laboratorio por su conversin heptica en
menaquinona. Su actividad biolgica es una decima parte de la que presenta la filoquinona, sin
embargo, su derivado hidrosoluble (bisulfito) se absorbe con mayor eficacia y es prcticamente
tan activo como la filoquinona.
Aunque las necesidades de vitamina K son difciles de establecer por diversas razones
(coprofaga, dificultad de obtener dietas carentes de vitamina K, solo la protena de soja extrada
con etanol tiene muy pequeas cantidades de esta vitamina, la diversidad entre razas y los
criterios de valoracin) hoy se establece, en general, una cifra de 1 mg de filoquinona por kg de
dieta (2.22 mol/kg). En la rata se recomienda la filoquinona y no la menadiona por razones
digestivas y metablicas. Existe interacciones negativas entre vitamina K y vitaminas A y E.
Los principales signos de deficiencia de esta vitamina son las hemorragias espontneas o
inducidas por pequeas lesiones.
Vitaminas del grupo B: todas las vitaminas de este grupo actan como cofactores en
diversos sistemas enzimticos. Los requerimientos de las distintas vitaminas del grupo B se
recogen en el Cuadro 4-8. En la naturaleza se encuentran en el hgado y, con excepcin de la
vitamina B12, en los cereales y tambin en las levaduras. Son coenzimas de reacciones
metablicas. Son absorbidas en el intestino grueso salvo la vitamina B12 que se absorbe en el
leo. Algunas son sintetizadas por las bacterias intestinales. Son razonablemente estables, pero
el cido flico, la vitamina B12, tiamina y riboflavina pueden ser destruidas por el calor, la luz y
la exposicin al aire.
Vitamina
Biotina
cido flico
Niacina (cido nicotnico)
Pantotenato (clcico)
Riboflavina
Tiamina (ClH)
Piridoxina (B6)(*)
Cianocobalamina (B12)
(*)
Unidad
mg
mg
mg
mg
mg
mg
mg
g
Cantidad por kg de dieta

Mantenimiento
Crecimiento
Reproduccin
0.2
1.0
15.0
10.0
3.0
4.0
6.0
50.0
0.2
1.0
15.0
10.0
3.0
4.0
6.0
50.0
Cantidad adecuada ms que requerimientos
Cuadro 4-8. Necesidades nutricionales de vitaminas del grupo B en ratas (NRC, 1995)
0.2
1.0
15.0
10.0
4.0
4.0
6.0
50.0
21
En las dietas de ingredientes naturales los cereales contribuyen, en gran parte, a los
requerimientos del animal en vitaminas B, aunque el cido nicotnico en los cereales est en
forma ligada y es difcil su utilizacin por la mayora de las especies. Las levaduras secas y los
extractos de hgado son buenas fuentes naturales de vitaminas B. Normalmente se suplementan
las dietas con las vitaminas puras.
Existe la certeza de que todas las vitaminas de este grupo son sintetizadas por los
microorganismos del tracto gastrointestinal. As, los rumiantes no necesitan aporte diettico ya
que los microorganismos ruminales sintetizan las necesarias. Los conejos, cobayas, ratas y
ratones obtienen parte de sus necesidades por la ingestin de sus heces (coprofaga). Existe, de
hecho, peligro de deficiencias en animales SPF igual que ocurra con la vitamina K. La
deficiencia en vitamina B12 raramente se observa aunque solo se distribuye en alimentos de
origen animal. Las razones son dos, en primer lugar se sintetiza en el intestino y en segundo es
eficientemente almacenada en hgado, rin y otros tejidos. Adems, pasa de la madre al feto.
Los requisitos de algunas de las vitaminas del grupo B pueden estar influenciados por otros
constituyentes de la dieta. El cido nicotnico es sintetizado en los tejidos a partir del triptfano
(40 mg triptfano=1 mg niacina). Sin embargo, el triptfano es uno de los aminocidos
esenciales y por tanto solo estar disponible para la sntesis de la vitamina si esta en exceso
respecto a sus necesidades para la sntesis proteica. Se ha calculado que los requerimientos de
triptofano en la dieta estn alrededor del 0.15 %. El exceso de triptofano se transforma en cido
nicotnico y reduce sus requerimientos dietticos. Dietas enriquecidas o deficitarias en niacina y
triptfano inducen anormalidades en el comportamiento, convulsiones, diarrea, disminucin de
peso y desarrollo con pelo spero y alopecia.
Una de las funciones de la vitamina B12 es catalizar la formacin de grupos metilo que son,
subsecuentemente, incorporados a la homocisteina para formar metionina. Por tanto, las dietas
que contienen cantidades elevadas de metionina o compuestos de metilacin como la colina,
hacen que disminuyan los requerimientos de vitamina B12. No obstante, esta vitamina no puede
ser sustituida totalmente por metionina ya que tiene otras funciones. se necesita una
concentracin mayor en dietas que slo contengan protenas de origen vegetales, en las que se
adiciona metionina y colina pero no vitamina B12. Su concentracin en la dieta vara segn la
concentracin de colina, metionina y cido flico (que puede ser sintetizado en el intestino por
bacterias). Dosis menores de esta vitamina producen una mayor incidencia de anormalidades en
neonatos (hidrocefalia).
Existe una interrelacin importante entre la tiamina y la fuente energtica de la dieta. La
tiamina juega un papel importante en el metabolismo de los hidratos de carbono por lo que las
necesidades de tiamina son sensiblemente mayores cuando la fuente de energa de la dieta son
los hidratos de carbono que cuando esta es la grasa. Su deficiencia origina anormalidades en el
sistema nervioso, corazn y disminucin de la reproduccin. Los signos clnicos caractersticos
son anorexia y prdida de peso, el piruvato puede estar aumentado. A las 5 semanas de dficit
aparecen cuadros de encefalopata e hipertrofia cardiaca. Los animales estarn ataxicos,
replegados y dormidos.
Las necesidades de riboflavina dependen del tipo y nivel de hidratos de carbono de la dieta.
Si disminuye el almidn, sus requerimientos aumentan por incremento de la sntesis intestinal
de las vitaminas. Las hembras que toman una dieta baja producen cras de bajo peso, poco
crecimiento y menor peso y contenido de ADN en cerebro. Ratas deficientes pueden presentar
hgado graso, aumentado el recambio proteico y de la actividad enzimtica del metabolismo
aminocido y disminucin de la sntesis de ATP.
La vitamina B6 puede estar en forma de por piridoxeno, piridoxal y piridoxamina. Se
necesita para la reproduccin y el desarrollo. Las cras de hembras deficientes presentan una
diferenciacin renal retardada, los lpidos cerebrales anormales y un aumento de cistationina
22
urinaria. Las hembras necesitan u aporte mnimo de 3-6 mg\Kg para que las cras tengan un
crecimiento y peso cerebral dentro de la normalidad. Las ratas deficientes presentan dermatitis
escamosa simtrica en rabo, zarpas, cara y orejas, anemia microctica, hiper-excitabilidad y
convulsiones, adems de disminucin en la reproduccin y deficiecias en la produccin de
insulina.
En la rata, la biotina en rata es suministrada por diferentes tipos de bacterias intestinales. Su
carencia produce, en ratas en desarrollo, dermatitis exfoliativa, alopecia, acromotricidad, etc.
Vitamina C: se encuentra en la naturaleza como cido ascrbico. No es sintetizada por
microorganismos pero muchas especies de animales pueden sintetizarla y por lo tanto no
necesitan aporte diettico. Las dos excepciones son los primates y el cobaya en los que no existe
la enzima necesaria para llevar a cabo la ltima reaccin de su sntesis y necesitan el aporte en
la dieta. Las principales fuentes alimentarias son los ctricos y las verduras no encontrndose en
cantidades significativas en los componentes habituales de las dietas de ingredientes naturales
para animales de laboratorio. Debido a su labilidad de temperatura y su destruccin rpida por
oxidacin se suele administrar como suplemento de la dieta.
La carencia de esta vitamina se manifiesta en una incapacidad para formar colgeno y tejido
osteoide, alteraciones en el crecimiento de huesos, dientes y hemorragias. La falta de colgeno
impide la curacin de las heridas, los abscesos bacterianos no forman cpsula y se diseminan. El
animal deficiente presenta falta de vascularizacin de las heridas, alteraciones en el crecimiento
de los incisivos, deformaciones seas y engrosamiento de articulaciones costocondrales.
Otros nutrientes
Colina: difiere de las vitaminas en que no tiene un papel cataltico, pero si aporta el
material bsico a partir del cual se van a formar sustancias de gran importancia biolgica. As,
un ster, la acetilcolina, es un importante neurotransmisor. Asimismo, la colina es una molcula
transferidora de grupos metilo que intercambia con otras molculas como la metionina. La
colina forma parte de los fosfolpidos (lecitina) que participan en el transporte de lpidos y en la
formacin de las membranas biolgicas.
Los animales que ingieren dietas con un bajo contenido en colina presentan esteatosis
heptica. La accin lipotrpica de la colina es compartida por otras sustancias y compuestos
incluyendo la metionina, betaina e inositol. En el pollo, la colina esta implicada en la prevencin
de la perosis.
La colina puede sintetizarse en los tejidos animales pero no a la suficiente velocidad para
poder atender a todas las necesidades y por tanto debe ser administrada con la dieta. Si hay un
aporte suficiente de otros compuestos metilantes como metionina o betaina sus necesidades
disminuyen. Las deficiencias en colina son poco comunes ya que se encuentra en casi todos los
ingredientes utilizados en las dietas y especialmente en las fracciones fosfolipdicas de los
tejidos animales y vegetales.
Las dietas se formulan, habitualmente con cloruro o bitartrato de colina. Normalmente se
tiende a utilizar este ltimo porque es menos higroscpico . Los clculos para el aporte diettico
de colina deben de hacerse en funcin del contenido en metionina y en grasa de la dieta. Se
recomiendan 750 mg/kg de dieta (7.2 mmol/kg) cantidad equivalente a 1.8 g de bitartrato de
colina por kg de dieta. El incremento en la cantidad de grasa, las deficiencias en folato o
vitamina B12 y los incrementos en la temperatura del ambiente incrementan las necesidades de
colina.
Inositol: aunque el inositol (Mio-inositol) se incluye, a veces, como un nutriente esencial,
actualmente no parece estar justificado. Estructuralmente es semejante a los azcares simples.
23
Se encuentra en los tejidos animales y formando parte de un fosfolpido cerebral el fosfatidil

inositol. En ciertas circunstancias tiene una accin lipotrpica y se la ha atribuido la prevencin
de la alopecia en el ratn. Se sintetiza en los tejidos animales una velocidad suficiente para
atender las demandas corporales. Adems es formado por la flora intestinal. Se encuentra en
alimentos de origen animal y vegetal. En vegetales se encuentra como hexafosfato de inositol,
fitina, tambin esta presente en el germen de trigo, soja y cacahuete y en levaduras.
Agua
El agua, por sus propiedades fsicas y qumicas es el constituyente ms importante de la
materia viva, adems de ser el ms abundante ya que la mayora de los tejidos tienen, como
mnimo, un 70% de agua (tejidos blandos). De hecho, un animal puede permanecer en ayuno
durante largos periodos de tiempo y sin embargo, la falta de agua es letal en pocos das.
El agua es el vehculo en el que la mayora de los constituyentes corporales se disuelven o
suspenden. Alrededor del 50% del agua esta en el compartimiento intracelular y el resto en el
extracelular. Los productos de la digestin son transportados en un medio acuoso desde el tracto
gastrointestinal hasta los tejidos y muchos de los compuestos de deshecho originados se
excretan en solucin en la orina. El agua es un constituyente esencial para cualquier reaccin
metablica que implique una hidrlisis. Adems, juega un papel importante en la regulacin de
la temperatura. Debido a su alto calor especfico puede absorber gran cantidad del calor
generado durante el metabolismo y de esta forma la temperatura corporal no se incrementa
excesivamente. Por otra parte su alto calor latente de evaporacin permite prdida grandes de
calor sin prcticamente prdidas de volumen.
Puesto que las prdidas de agua son continuas, a travs de la orina, heces, aire espirado,
piel, para mantener un balance hdrico adecuado las prdidas de agua deben ser reemplazadas.
En la mayora de los animales el aporte de agua se realiza en forma de fluidos o como parte del
alimento, pero una pequea parte proviene del agua metablica generada.
Aunque se ha descrito la cantidad de agua necesaria para los distintos animales de
laboratorio en relacin con el peso corporal, las necesidades de agua del animal dependen de
factores ambientales, fisiolgicos y alimentarios. En ambientes clidos el animal pierde ms
agua por va respiratoria y cutnea. Los animales en crecimiento o gestantes utilizan el agua
para la formacin de nuevos tejidos, y las hembras lactantes pierden un volumen considerable
con la leche. El volumen de orina excretado varia con la composicin de la dieta. Las protenas
dan lugar a productos catablicos nitrogenados, en especial urea, que deben ser eliminados por
la orina. Si la concentracin de electrlitos en el lquido extracelular aumenta, tambin aumenta
la sensacin de sed y la ingestin de agua. Las dietas ricas en protenas o en sales incrementan
las necesidades de agua (Cuadro 4-9).
A la vista de las necesidades variables de agua y de las serias consecuencias de su
restriccin se recomienda, en condiciones normales, que los animales tengan acceso libre al
agua ya que el exceso en la ingesta solo provoca una eliminacin mayor de orina para reajustar
el balance.
ANIMAL
COBAYA
CONEJO
RATN
RATA
HMSTER
CONSUMO DE AGUA(ml/da) CONSUMO DE ALIMENTO (gr/da)

12-15
20-35
80-100
75-100
3-7
4-5
20-45
15-20
8-12
8-15
Cuadro 4-9. Consumo medio de agua y alimento en los principales animales de laboratorio
24
REQUISITOS NUTRICIONALES
El American Institute of Nutrition (AIN) reconoci en 1977 la necesidad e importancia de
estandarizar las dietas para roedores de laboratorio, y de acuerdo con ello elabor unas
recomendaciones generales (AIN 1977 y 1995) dirigidas a los investigadores (vase Cuadro 43). El sustrato cientfico de estas recomendaciones se fundamenta en el crecimiento de ratas y
ratones destetados como ndice de una nutricin optima. La utilizacin de animales no
destetados como modelo hace difcil la extrapolacin de los resultados a animales adultos.
Se han comparado la velocidad de crecimiento y el crecimiento mximo en animales
alimentados ad libitum con dietas que contenan concentraciones diferentes de un nutriente
especfico, manteniendo constante la concentracin de los dems nutrientes.
La concentracin ptima del nutriente estudiado se define como el punto a partir del cual
aumentos adicionales del mismo en la dieta no aumentan significativamente el crecimiento
mximo del animal. Este procedimiento ha aportado luz y ha mejorado el conocimiento
cientfico sobre la naturaleza de los requerimientos nutricionales de los roedores de laboratorio.
Este tipo de trabajos han puesto de manifiesto que el nutriente mas conflictivo es la
protena, necesaria en mayor cantidad para animales jvenes y por lo tanto problemtica en
experimentos de larga duracin donde puede tener una incidencia negativa. En los ltimos 20
aos la reformulacin de dietas en base a los nuevos conocimientos ha incidido
fundamentalmente en este nutriente que se ha ido rebajando para animales adultos. El efecto que
otros nutrientes pueden tener sobre la salud de los roedores en experimentos de larga duracin
es menos importante o esta menos clara que en el caso de las protenas.
Algunos investigadores sugieren que las necesidades de carbohidratos y grasas pueden ser
diferentes para roedores jvenes y adultos. De momento, se necesitan ms estudios para poder
aclarar estas sugerencias (Cuadro 4-10).
Estatus
fisiolgico
Crecimiento
Crecimiento
Crecimiento
Mantenimiento
Gestacin
Lactancia
Peso corporal
(g)
Requerimientos
energticos (MJ/da)
Alimento ad libitum
Consumido1 (g/da)
100
200
300
400
400
400
0.21
0.36
0.49
0.23
0.30
0.65
15
25
34
16
21
46
Densidad energtica de la dieta: 14,5 kJ/g.
Cuadro 4-10. Necesidades estimadas de energa metabolizable en relacin al consumo de alimento en

diferentes gases de desarrollo en rata
PROCESAMIENTO Y PRESENTACIN DE LAS DIETAS

Las dietas para animales de laboratorio se pueden fabricar con distintas formas fsicas
dependiendo del proceso al que sea sometida la mezcla de ingredientes:
Molidas: en forma de polvo ms o menos fino.

Granuladas: mezcla de harinas en agua formando una pasta y posterior compresin y
secado dndole distintas formas.
Pellets: pulverizadas y moldeadas en distintas formas. Se utilizan para roedores, cobayas
y conejos.
25
Expandidas: procesadas a alta presin y calor a travs de un molde. Se utilizan para

gatos, primates y perros.
Semihmedas: dietas enlatadas o no para gatos y perros.
En el caso de roedores el pienso en forma de pellets es el ms utilizado. Ofrece ciertas

ventajas ya que aparte de satisfacer la necesidad de roer de estos animales es fcil de manejar,
almacenar y administrar siendo mnimo el desperdicio cuando se lo comen. Presentan el
inconveniente de para adicionar un nutriente o producto se requiere moler dicho pienso a fin de
lograr la mezcla adecuada.
El pienso molido o en polvo es mal usado por los roedores, que lo esparcen o tiran en
grandes cantidades al comer. Al mismo tiempo, su manejo implica ms tiempo y dificultad,
aunque permite todo tipo de adiciones.
Las dietas semihmedas o en gel son utilizadas cuando se incorporan compuestos
experimentales en polvo o muy txicos. Presentan el inconveniente de ser ms susceptibles al
desarrollo bacteriano que las secas y por otro lado su peso y volumen son mayores por tener
menor densidad calrica y nutricional, lo que dificulta indiscutiblemente su manejo y
administracin.
En general, el tipo de trabajo experimental determinara la presentacin de la dieta a utilizar.
Ventajas e inconvenientes del tipo de procesamiento
Molturacin: favorece la actuacin enzimtica a nivel gastrointestinal por lo que aumenta la

digestibilidad.
Granulacin: el producto resultante es ms apetecible para roedores. Como apuntamos
anteriormente con este tipo de dietas hay menos desperdicio que con las molidas. Las altas
temperaturas empleadas en su elaboracin (en torno a los 80C) reducen la poblacin
microbiana. Se retardan los procesos de oxidacin por ser menor el rea de contacto.
Expansin: produce una dureza aun mayor de los grnulos (lo que hace que se deteriore
menos por el almacenamiento) y una mayor destruccin de nutrientes termolbiles.
El contenido en microorganismos disminuye aun ms con este tratamiento.
FORMULACIN DE DIETAS PARA ANIMALES DE EXPERIMENTACIN

La formulacin de dietas tiene como punto fundamental conseguir las concentraciones
ideales de nutrientes que permitan hacer frente a las necesidades especficas de los distintos
animales de laboratorio, teniendo en cuenta las perdidas debidas a los procesos tecnolgicos y
de almacenamiento (estas perdidas se deben evaluar mediante el anlisis del pienso elaborado).
La elaboracin de dietas de ingredientes naturales es compleja, ya que se parte de
ingredientes con cantidades diferentes de nutrientes y hay que tener en cuenta los nutrientes que
aporta cada uno de los ingredientes naturales.
Los ingredientes se expresan como porcentaje en peso, debiendo tener la frmula un valor
del 100 % (Cuadro 4-3).
El anlisis en nutrientes de los distintos ingredientes nos indicara si hay o no necesidad de
proceder a la adicin complementaria de algunos de ellos (aminocidos, grasa, sodio, calcio o
fsforo, etc). Finalmente se adicionan las premezclas de vitaminas y minerales al pienso. El
denominado corrector mineral o vitamnico (Cuadro 4-11).
26
COMPOSICIN NORMAL DE UNA DIETA
1. Materias primas
Trigo
Soja micronizada
Aceite de soja o manteca
Fosfato biclcico
Clorhidrato de lisina
Antioxidante
Cebada
Pescado rico en protenas
Sal
Carbonato clcico
Aglomerante
2. Corrector tipo con la adicin de los siguientes componentes

Minerales
Cobalto
Manganeso
Vitaminas
Vitamina A
Aminocidos
Menacina
Piridoxina
Cobre
Cinc
Hierro
Selenio
Yodo
Vitamina D3
Vitamina E
Vitamina B12
Tiamina
Felacina
Riboflavina
Niacina
Acido pantotnico
Biotina Colina
Tabla 4.11. Relacin de materias primas y otros elementos de una dieta estndar de frmula cerrada para
roedores
En el caso de las dietas purificadas, la formulacin no es tan compleja al ser cada

constituyente fuente de un nico nutriente. Las fuentes comnmente empleadas son:
Casena o protena de soja como fuente proteica.

Aceites como fuente de grasa.
Azcar y almidn como fuente de hidratos de carbono.
Celulosa como fuente de fibra bruta.
A todo ello se le aade la premezcla de vitaminas y minerales.
Con arreglo al tipo de formulacin, las dietas se dividen en tres grupos: de ingredientes
naturales, purificadas y qumicamente definidas.
Dietas de ingredientes naturales
En este tipo de dietas los ingredientes primarios provienen de fuentes naturales y se
confeccionan usando como elemento de base cereales sin refinar (avena, trigo, etc.). Se
clasifican en dos grupos: frmulas comerciales cerradas y frmulas abiertas
Frmula cerrada
Su composicin no es conocida. La mezcla de materias primas utilizadas es secreta y es
propiedad del fabricante de un determinado pienso comercial. En el etiquetado suele aparecer la
composicin en nutrientes desde un punto de vista cuantitativo (vase Cuadro 4-11).
En general, en su fabricacin se suelen utilizar dos fuentes primarias de protena, una de
origen animal (harina de pescado o subproductos lcteos), y otra de origen vegetal (soja, gluten
de maz). Como fuente lipdica se utilizan grasas animales adicionadas con cierta cantidad de
aceites vegetales poliinsaturados que suministren los cidos grasos esenciales necesarios. La
fuente de HC se obtiene de mezclas de cereales (maz, sorgo, arroz, cebada, trigo, avena). Como
fuente fosfoclcica se utilizan el fosfato biclcico y limestrone molido. Las vitaminas y
minerales restantes se suplementan en forma de premezclas.
27
El uso de ingredientes naturales hace que estas dietas cerradas presenten una estimable
variabilidad en el porcentaje de nutrientes, condicionada a su vez por la variabilidad intrnseca
de los componentes naturales. Los factores de tipo ambiental (suelo, clima, prcticas de cultivo,
etc.) y genticos (variedades vegetales o razas animales), influyen en la composicin de las
materias primas utilizadas. Asimismo, los procesos tecnolgicos y de almacenamiento tambin
tienen su incidencia al variar de un fabricante a otro.
Por otro lado, los ingredientes no refinados de este tipo de dietas, como por ejemplo, maz,
soja, carne, pescado, etc. pueden contener diferentes tipos y cantidades de pesticidas,
micotoxinas y otros contaminantes. Esta elevada variabilidad entre diferentes partidas en el tipo
y cantidad de los componentes nutricionales y no nutricionales puede afectar a los resultados
experimentales y disminuir la reproducibilidad de los mismos.
En las dietas comerciales de formula cerrada encontraremos, por tanto, diferencias de
composicin relacionadas con diferentes fabricantes y tambin con los distintos lotes o partidas
dentro de una misma marca. Este hecho es aplicable incluso a las dieta de formula abierta.
Pueden darse errores debidos a cambios en las fuentes, en la calidad de los ingredientes o a
diferencias en los mtodos tecnolgicos. Por ultimo, muchas veces los valores de etiquetado no
coinciden con los datos obtenidos mediante el anlisis qumico correspondiente.
Estos datos ponen de manifiesto que el empleo de dietas de distintas marcas puede
modificar los resultados. En este sentido, a la hora de la publicar los datos experimentales se
debe especificar la marca de la dieta utilizada y describir lo mas correctamente posible su
composicin ya que se puede concluir que no existe lo que se suele denominar dieta estndar
para ninguna especie de animal de laboratorio, aunque en muchas publicaciones se pueda leer
esta descripcin. Los trabajos experimentales, ya clsicos de Baynen (1985, 1987) y Wise y
Gilburt (1981) ponen en evidencia los diferentes tipos de variaciones descritas.
Frmula abierta
En algunos casos se publica la composicin en ingredientes y a estas dietas se las conoce
con el nombre de formulas abiertas. Tienen una composicin conocida y pueden ser
confeccionadas por los usuarios. Entre ellas, destacan la NIH-07, NTP-90, NTP-91, NTP-92,
NPT-2000 para roedores y conejos, descritas con detalle por el National Research Council
(NRC) y el American Institute of Nutrition. Una dieta certificada debe aportar informacin de al
menos 83 parmetros (vase Cuadro 4-3) y la determinacin cuantitativa y cualitativa de
posibles contaminantes abiticos y biticos.
Desde 1988 se han venido formulando y evaluando diferentes tipos de dietas con objeto de
entender y conocer la influencia de la protena, grasa y fibra en la incidencia de enfermedades
crnicas y de tumores. La composicin de la dieta puede influir sobre el crecimiento, la
aparicin de enfermedades, las expectativas de vida, la aparicin de tumores y la respuesta a
tratamientos qumicos.
En estudios a largo plazo realizados en la rata, se ha visto que entre las causas de
mortalidad, posiblemente relacionadas con la dieta, se puede incluir las nefropatas en machos,
los tumores de mama en hembras y los tumores de adenohipfisis en ambos sexos.
Entre 1980 a 1994, la dieta no purificada de formula abierta NIH-07, alta en protena (24%
en peso), baja en grasa y fibra (5% y 3.5% respectivamente) y con una relacin Ca/P de 0.75,
fue seleccionada como la dieta a utilizar para los estudios de toxicologa y carcinognesis en
roedores dentro del National Toxicology Program (USA). Esta dieta, quizs debido a su alta
proporcin de protena y a su baja relacin Ca/P, puede haber contribuido a las nefrocalcinosis,
28
a la severidad de las nefropatias y otras lesiones encontradas en el tipo de estudios antes

comentados.
Con los resultados obtenidos con esta dietas experimental, se formul una nueva dieta
(NTP-2000), de ingredientes naturales no purificados, aportando el maz y trigo el 60% de estos
(Cuadro 4-12). Los estudios realizados con esta dieta, formulada con un 14.5% de protena, un
8.2% de grasa, un 9.3% de fibra y una relacin Ca/P de 1/3 han puesto de manifiesto que es ms
adecuada que la NIH-07 para el crecimiento y mantenimiento de ratas, ya que previene la
nefrocalcinosis y parece disminuir la incidencia y severidad de lesiones asociadas con la dieta o
con la edad.
El conocimiento cuantitativo y cualitativo de las materias primas utilizadas en la mezcla
permite que se puedan fabricar, tomando como base estas formulas abiertas, dietas especiales en
las que se ajusta la concentracin en nutrientes a objetivos experimentales concretos y
especficos.
INGREDIENTES (g/100g)
Maz molido
Trigo molido
Trigo (calidad media)
Harina de soja (49% de protena)
Harina de pescado (6% protena)
Leche en polvo
Gluten de maz (60% de protena)
Harina de alfalfa
Salvado de Avena
Celulosa
Aceite de maz
Aceite de soja
Levadura de cerveza
Melazas desecadas
Cloruro sdico
Fosfato clcico bibsico
Carbonato clcico
Cloruro de colina (70% colina)
Metionina
Premezcla de vitaminas
Premezcla de minerales
NTP-2000
NIH-07
22.18
22.26
15.0
5.0
4.0
0.0
0.0
7.5
8.5
5.5
3.0
3.0
1.0
0.0
0.3
0.4
0.9
0.26
0.2
0.5
0.5
24.5
23.0
10.0
12.0
10.0
5.0
3.0
4.0
0.0
0.0
0.0
2.5
2.0
1.5
0.5
1.25
0.5
0.09
0.0
+
0.25
Tomado de Rao (1994 y 1996) +: incluido en la premezcla de minerales
Cuadro 4-12. Ingredientes y composicin de las dietas no purificadas NTP-2000 y NIH-07
Dietas purificadas
Estas dietas se formulan con una combinacin de ingredientes naturales, productos
qumicos puros e ingredientes refinados. Las dietas purificadas solucionan las limitaciones de
las dietas de ingredientes naturales, especialmente las relacionadas con la variabilidad de
diferentes partidas y la presencia de contaminantes.
29
Al estar elaborado con cantidades definidas de ingredientes refinados minimizan la

variabilidad encontrada en el tipo y cantidad de nutrientes y componentes no nutricionales, entre
las diferentes partidas de una dieta comercial y las cantidades de contaminantes qumicos
contenidos en los ingredientes naturales. Sin embargo, componentes importantes de las dietas de
ingredientes naturales pueden que no estn en las dietas purificadas o que el balance de los
componentes en las dietas purificadas no sea el ideal.
La dieta purificada utilizada con ms frecuencia para estudios nutricionales y toxicolgicos
ha sido la AIN-76 (Cuadro 4-13), modificada por el American Institute of Nutrition, mediante el
incremento de la concentracin de la vitamina K (10 veces) pasando a denominarse AIN-76A.
Durante 16 aos estas dietas han sido ampliamente usadas por la comunidad cientfica, pero
debido a problemas nutricionales y tcnicos, la FASEB (Federation of American Societies for
Experimental Biology) revisa su formulacin, proponiendo nuevas dietas para crecimiento,
gestacin, lactacin y mantenimiento de Roedores. La composicin de la dieta semipurificada
AIN-76 recomendada para el crecimiento y mantenimiento de roedores durante el primer ao de
vida contiene: Protena 18.4%, Grasa 5.0%, Fibra 5.0%, Hidratos de carbono 65%, Energa 3.79
kcal/g.
Las dietas formuladas fueron la AIN-93G (para crecimiento, gestacin y lactacin) y la
AIN-93M para mantenimiento de los animales adultos (vase Cuadro 4-13). Las diferencias ms
importantes de la AIN-93G respecto a la AIN-76A son:
Para incrementar la cantidad de cido linoleico se sustituyen 7 g/100 g de dieta, de

aceite de soja por 5 g/100 g de dieta, de aceite de maz.
El almidn de maz se sustituye por sacarosa.
La cantidad de fsforo se reduce, tratando de eliminar el problema de
calcificaciones renales encontrados en la rata.
La L-cisteina se sustituye por DL-metionina para suplementar a la caseina.
Las cantidades de vitamina E, K y B 12 se aumentan y se aaden elementos traza a
la mezcla de minerales (litio, vanadio, nquel, molibdeno).
En cuanto a la dieta de mantenimiento AIN-93M se reduce la cantidad de grasa a 40 g/Kg

de dieta y la caseina a 140 g/Kg de dieta. Estas dietas presentan frente a la de 1976 un balance
ms correcto de nutrientes esenciales por lo que se consideran como las ideales, hasta la fecha,
para estudios con ratas y ratones de laboratorio.
AIN-76: Mezcla mineral (g/kg)
Fosfato clcico bibsico
500.00
Cloruro sdico
74.00
Citrato potsico monohidratado
220.00
Sulfato potsico
52.00
Oxido de magnesio
24.00
Carbonato de manganeso
3.50
Citrato frrico
6.00
Carbonato de zinc
1.60
Carbonato cprico
0.30
Yodato potsico
0.01
Selenito sdico
0.01
Sulfato de cromo y potasio
0.55
Sacarosa
118.00
AIN-76: Mezcla vitaminica (g/kg)

Tiamina (mg/kg)
600.0
Rivoflavina (mg/kg)
600.0
Piridoxina (mg/kg)
700.0
cido nicotnico (mg/kg)
3.0
Pantotenato clcico (mg/kg)
1.6
cido flico (mg/kg)
200.0
Biotina (mg/kg)
20.0
Cianocobalamina (mg/kg)
1.0
Vitamina A (IU/kg)
400000
Vitamina E (IU/kg)
5000
Vitamina D3 (IU/kg)
100000
Vitamina K (mg/kg)
5.0
Sacarosa (mg/kg)
972.9
Cuadro 4-13. Diferentes tipos de dietas: AIN-93M y AIN-93G respecto a la AIN-76A
30
Dietas qumicamente definidas

Se elaboran con fuentes qumicamente puras de aminocidos, mono o disacridos y cidos
grasos o triglicridos purificados. Los minerales se suministran mediante reactivos qumicos y
las vitaminas usadas son de una pureza elevada. Las concentraciones en nutrientes de estas
dietas son fijas en el momento de la elaboracin de la dieta pero la disponibilidad puede verse
mermada debido a oxidaciones o a interacciones entre los productos qumicos utilizados.
Este tipo de dietas, ampliamente usadas, pueden tener problemas derivados de la insipidez o
de la textura (para su preparacin es aconsejable moler los ingredientes tan finamente como sea
posible).
Dietas carenciales y enriquecidas
A partir de dietas de formula abierta, purificadas o qumicamente definidas se pueden
confeccionar dietas especiales en las que se ajusta la concentracin en nutrientes a objetivos
experimentales concretos y especficos, como por ejemplo estudiar el efecto de un aumento en
los porcentajes de grasa saturada en la dieta sobre el fisiologismo cardiovascular . Estas dietas
sern por tanto carenciales o ricas (adicionadas) en algn nutriente.
El problema que presentan estas dietas es que al variar el contenido de un macronutriente se
puede ver afectado el consumo de energa o de otros componentes de la dieta. En un rgimen de
alimentacin ad libitum, los animales de laboratorio tienden a consumir una cantidad constante
de energa, por lo tanto, si la densidad calrica de la dieta se incrementa (aumento en el porcentaje de grasa) los animales consumirn menos alimento lo que se traduce en una menor ingesta
generalizada de nutrientes y viceversa.
Cuando se utiliza este tipo de dietas en un experimento, hay que procurar que el consumo de
los otros nutrientes de la dieta sea similar entre el grupo experimental y el control. En el caso de
una dieta alta en grasa habra que disminuir la proporcin de determinados nutrientes, tratando
de que ambas dietas sean isocalricas y por lo tanto no se vea afectada la ingesta global de
protena, vitaminas y minerales. Sin embargo no se pueden descartar ciertos aumentos en el
consumo de la dieta grasa con respecto a la dieta control, por ser esta primera ms grata al
paladar.
En el caso de dietas enriquecidas en fibra a costa de los carbohidratos la densidad calrica
baja con lo que el consumo de dieta sera mayor al compararla con la dieta control lo que nos
llevara nuevamente a cambios en el consumo de otros nutrientes. Este problema se puede
minimizar modificando ligeramente la grasa para conseguir que las dietas sean isocalricas.
Las dietas de ingredientes naturales comerciales suelen utilizarse mal cuando se emplean
para preparar dietas adicionadas ya que al aadir cantidades extras de un macronutriente como
grasa o azcar los dems nutrientes quedan diluidos por la adicin realizada. La dieta control y
la problema tendran porcentualmente cantidades diferentes de nutrientes. Este problema se
minimiza si se aade a la dieta control un suplemento con el que se consiga la misma dilucin
de la dieta problema. Por lo general, las dietas comerciales contienen los nutrientes esenciales
en exceso permitiendo una dilucin entre un 10-20% sin que se produzcan desequilibrios
importantes.
REGMENES ALIMENTICIOS
A la hora de alimentar a los animales de laboratorio y en funcin de los requerimientos
experimentales, se pueden elegir distintos tipos de regmenes relacionados con la cantidad total
ingerida o con los tiempos de ingestin.
31
Alimentacin ad libitum
Este rgimen alimenticio supone el libre acceso al alimento las 24 horas del da. Las ratas,
ratones y conejos consumen, sometidos a este rgimen al menos el 80% del alimento durante el
periodo de oscuridad. La alimentacin ad libitum(AL) es aconsejable en experimentos de corta
duracin porque reduce el tiempo que hay que dedicar al mantenimiento de los animales. As
mismo es el sistema usual en las colonias, tanto para la poblacin reproductora como para los
individuos destinados a experimentacin al menos hasta completar su crecimiento (valor K de la
asintota de crecimiento, en torno a las 8-10 semanas de edad para rata). En experimentos de
larga duracin la alimentacin ad libitum es considerada como la variable incontrolada ms
significativa que afecta el resultado final de los bioensayos con roedores, ver ms adelante.
Alimentacin restringida
Este tipo de rgimen implica una restriccin diettica moderada con objeto de paliar o
limitar la sobrealimentacin, sin que se produzcan deficiencias en algn nutriente o suponga una
desnutricin del animal.
El grupo de San Antonio del National Institute on Aging (NIA), desarrolla diferentes
sistemas de Alimentacin Restingida (AR) para un amplio grupo de animales incluidos
primates, analizando exhaustivamente sus ventajas e incovenientes. Existen diferentes
modalidades:
AR moderada: se restringe en torno al 30% de la ingesta diaria, desde las 6-8 semanas
de edad (unos 12-14 g frente a los 17-20 g/da en al, para rata).
AR estricta: el animal recibe slo entre un 50 a 60% del consumo mximo ad libitum.
Mediante este mtodo se han mantenido ratas hasta los 36-40 meses de edad (fase
senil), de incalculable valor para estudios relacionados con procesos degenerativos
asociados al envejecimiento humano.
La alimentacin restringida implica una mayor asistencia tcnica, material y espacio. En
alimentacin ad libitum a los animales se les suministra comida para varios das (se aconseja no
ms de 48 horas, eliminando los sobrantes, antes del llenado de los comederos). En el caso de
AR, se les debe suministrar a diario (se aconseja en el mismo periodo horario) y deben ser
alojados individualmente, ya que el alojamiento en grupo puede generar competencia y
agresividad, con un desnutricin potencial de los individuos menos fuertes. En la actualidad
existen sistemas automticos de control de acceso al alimento (Chronofeeder), que reducen en
parte estos inconvenientes, al poder programar la cantidad y tiempo de alimentacin a voluntad
de las necesidades experimentales.
Alimentacin horaria o controlada
Se permite consumir a los animales tanta comida como quieran pero slo durante periodos
de tiempo fijados al da. Este rgimen de alimentacin se usa en experimentos en los cuales hay
que estudiar parmetros fisiolgicos o bioqumicos en respuesta a la ingesta y compararlos con
los niveles de los mismos en fase de ayuna o bien en aquellos que requieren un estado
nutricional muy controlado. El empleo de sistemas automticos de acceso de alimento es ideal
para este tipo de rgimen.
Alimentacin a la par
Consiste en tener un grupo control que ingiera la misma cantidad de alimento que el grupo
problema el cual tiene una alimentacin restringida. El objetivo que se persigue es poder
comprobar que efectos son debidos al tratamiento que estemos aplicando al grupo problema y
que efectos son consecuencia de la restriccin diettica. La cantidad consumida por el grupo
tratado diariamente se tomara como medida para alimentar al da siguiente al grupo control.
Este tipo de alimentacin restringida supone por tanto, un mayor trabajo y dedicacin e implica
32
al mismo tiempo el uso de jaulas individuales para evitar que los animales dominantes coman
ad libitum con perjuicio de los ms dbiles del grupo.
Alimentacin ad libitum frente a restringida (importancia en estudios a largo plazo)
Desde el ltimo decenio, se estn generalizando los estudios a largo plazo, no slo en
toxicologa y farmacologa, sino tambin para investigaciones de procesos fisiolgicos y
bioqumicos (oxidacin, radicales libres, neurologa), considerando la variables edad, como
factor clave en el anlisis de los resultados. Frente a ello los requerimientos nutritivos de
roedores maduros (sobre todo rata de las cepas Wistar, Fisher y Sprague-Dowley, mayores de 6
meses), utilizados en estudios crnicos (long-term) son virtualmente desconocidos. En muchos
estudios se mantiene a los animales con las mismas dieta de crecimiento, en regimen ad libitum,
hasta edades superiores a los dos aos, sin tomar en cuanta las variaciones en las raciones
nutritivas y la relacin entre los requerimientos energticos del animal y la densidad energtica
de la dieta. Hasta ahora se ha tomado en cuenta el criterio lineal de que los requerimientos
energticos estn relacionados con el peso metablico, es decir el peso corporal (kg0,75)
estableciendo el Requerimiento de Mantenimiento (RM=0,45x peso corporal0,75) (ver
tab.14.10). Sobre esta base se est controlando el valor energtico de las dietas, utilizando las
tipo hipocalricas para animales de envejecimiento sometidos a ARM o ARE. Esta es el caso de
la NTP-200 con un 14.5% de proteina, 8.5% grasa y un 9.5% de fibra o dietas isocalricas con
modificacin de la fuente y contenido en carbohidratos, en especial la sacarosa.
Otro aspecto es la reduccin y control del consumo de dieta, mediante las diferentes
modalidades de Alimentacin Restringida Controlada (ARC). La sobrealimentacin se
considera como una de las variables ms incontroladas en bioensayos en general. En diferentes
estudios de AR, se ha observado una reduccin de enfermedades degenerativas (nefropatas y
cardiomiopatas), tumores relacionados con nutricin (mamitis y otras neoplasias) y obesidad.
Igualmente, en la alimentacin AL se observa un aumento del tamao de diferentes rganos
frente a animales con AR, correlacionados con un aumento de lesiones degenerativas y/o
proliferativas del rin, hgado, glndulas adrenales, pituitaria y tiroides entre otros rganos.
Las poblaciones con ARC, en comparacin con las alimentadas AL presentan, desde los 24
meses de edad, hasta un 40% ms de supervivencia comparada y un incremento sustancial de la
esperanza de vida media (life span), con un 60% de la poblacin superando los 36 meses de
edad .Todo ello asociado a una a disminucin en la variabilidad intramuestra y entre
laboratorios a la hora de obtener resultados. Actualmente se especula con que muchos de los
benefecios generados por la AR son controlados por el eje hipotalamo-pituitaria-adrenales, via
regulacin hormonal.
La AR no genera cambios apreciables en los parmetros hematolgicos y clnicos en
general con excepcin de los triglicrido y algunos parmetros bioqumicos. No obstante se
aprecian diferencias significativa, en la capacidad de sintesis de proteinas o los niveles de
somatostatina.
Otro aspecto a considerar es la influencia de la alimentacin restringida en las funciones
inmunitarias de los animales de edad avanzada (especialmente roedores), que est siendo objeto de
especial atencin. Entre los beneficios debidos a la dieta restringida, se han citado la prevencin de
la esplenomegalia, el mantenimiento de un mayor tamao en las poblaciones de clulas T
cooperadoras y T citotxicas, y la preservacin de la actividad celular del timo. Dos de los
hallazgos ms interesantes han sido el mantenimiento de una poblacin de clulas T vrgenes, que
asegura la persistencia de la capacidad de produccin de interleucina 2, previniendo el declive de la
inmunidad celular asociado al envejecimiento, y la preservacin de las capacidad de proliferacin
de linfocitos T y B en respuesta a mitgenos, por citar tan slo algunos de los estudios recientes al
respecto.
33
Finalmente, se carece de informacin sobre las condiciones de bienestar de los animales

mantenidos a largo plazo y de los efectos colaterales de los procedimientos de envejecimiento
en el estado general del animal. El sistema de ARC supone mantener al grupo experimental en
jaulas individuales. Se sabe que el aislamiento a deprivacin social obligada, a largo plazo,
genera cambio en la respuesta endocrinas, hormonales y diferentes parmetros fisiolgicos. El
aislamiento en el intervalo de 6-24 meses, es tambin un protocolo usual en estudios de
toxicologa y cancerologa y puede modificar las expresiones de toxicidad esperadas.
CONSERVACIN Y CONTROL DE CALIDAD DE LAS DIETAS
Tanto la conservacin como el control, constituyen aspectos fundamentales de la garanta de
calidad de las dietas y de su estandarizacin, con el objeto de garantizar que no ejerzan un
efecto distorsionador de los resultados experimentales. En este apartado se analiza el tema de la
conservacin, almacenamiento y controles de calidad bromatolgicos y microbiolgicos a los
que deben ser sometidas las dietas. Las fuentes de contaminacin pueden ser de origen abitico
(residuos de pesticidas, metales pesados), biticos (microorganismos, hormonas) o antibiticos.
Un aspecto prioritario a evaluar es la presencia en los piensos o dietas de componentes naturales
o artificiales con actividad hormonal, susceptibles de alterar la homeostasis o equilibrio
hormonal de los animales expuestos. En general los contaminantes pueden influir en los
procesos fisiolgicos, metablicos y en el estado de salud de los animales utilizados y
consecuentemente en los resultados esperados.
Almacenamiento de las dietas
El control debe empezar cuando el producto llega al centro de experimentacin y antes de
su aceptacin definitiva. Los tcnicos o investigadores deben:
Asegurarse de que las condiciones de presentacin de los alimentos en el momento de

llegar a su poder sean ptimos (envasado correcto, ausencia de humedad, sacos rotos,
fecha de fabricacin y/o caducidad).
Comprobar que las frmulas que figuran en la etiqueta corresponden al pedido.
Se aconseja no aceptar partidas envejecidas o rancias y fabricadas con 3 meses de

antelacin (menor plazo en el caso de cobayos). Solamente est justificado la compra de
cantidades considerables de pienso para experimentos de larga duracin con la finalidad de
adquirir un slo lote de fabricacin y asegurarse de que no varan las concentraciones de
nutrientes. Igualmente se deben desechar envases rotos, con alto porcentaje de humedad, de olor
extrao, enmohecido y con excrementos de roedores.
Las dietas de ingredientes naturales se deterioran antes. Los piensos deben almacenarse
siempre en sitios fros o frescos (ideal en cmara fra). En los piensos granulados la estabilidad
durante el almacenamiento depende en gran medida de las caractersticas ambientales (humedad
relativa -%HR-, temperatura de almacenamiento, grado de exposicin al oxgeno atmosfrico,
pH del producto). Un nivel de humedad homogneo es preferible a la existencia de "bolsas" con
alto contenido de humedad. El calor y la humedad promueven la incubacin de huevos y la
aparicin de diversas plagas (Tenebrionidos o gusanos de la harina). Toda actividad metablica
origina la produccin de agua que incrementa el contenido de humedad, acelerando el deterioro
de la sabrosidad y contenido nutricional de los alimentos almacenados. La estabilidad de los
piensos est en razn inversa a su contenido en humedad por debajo del 15%. Se aconseja el
almacenaje de las dietas purificadas o qumicamente definidas a bajas temperaturas en sacos
opacos, realizando nuevas mezclas cuando se precise ms pienso en experimentos de larga
duracin. Es esencial evitar la entrada de roedores y pjaros a los almacenes. Estos deben
disponer de mosquiteras, barreras antiroedores y estaciones de cebos en las proximidades, como
barrera preventiva y detectora de la presencia de roedores forneos.
34
La necesidad del control nutricional
Control sobre las especificaciones del etiquetado

El llamado anlisis proximal de una dieta es necesario para dietas de formula cerrada
basadas en dietas estndar de frmula abierta, sometidas a variaciones imprevisibles por
cambios en las materias primas, alteracin en la aplicacin de los correctores o variaciones en la
premezcla y mezcla antes del granulado o extrusin. El objetivo es determinar posibles
desviaciones sobre los valores aportados en las etiquetas de las diferentes partidas. Suponen el
control del control que nos presentan las empresas productoras o abastecedoras.
Este control se debera de realizar de manera rutinaria para garantizar la adecuada nutricin
y evitar alteraciones patolgicas o deficiencias en el crecimiento, desarrollo y tasa reproductora
de la poblacin. Igualmente se hace necesario en estudios de tipo nutricional en el que estas
dietas se utilizan como patrn o control y sobre todo en estudios de toxicologa.
La calibracin de las composiciones

Las fbricas productoras de dietas para animales de consumo y compaa que trabajan con
normas ISO, disponen de modelos de calibrado de los piensos que analizadas con rapidez
permiten determinar si las partidas fabricadas pasan o no los niveles deseados. Los anlisis
repetidos sirven como valores de referencia (patrn) o curvas de calibrado para validar mtodos
de anlisis rpidos a pie de fbrica para control de las desviaciones en el contenido en nutrientes
de los distintos lotes de piensos. Para ello se analizan al menos 50 muestras de distintos lotes de
piensos y se realizan en ella 50 determinaciones de cada uno de los parmetros. El nmero total
de muestras es de unas 10.000 (2.500 por cada parmetro). La calibracin mediante infrarrojos a
partir de valores estndar se hace al menos para protena, grasa, hidratos de carbono, humedad y
algn mineral diana como el Ca. Para posibles alteraciones en la aplicacin del corrector se debe
determinar alguna vitamina (vit. A y tiamina, segn Oller et al 1989,). Esto permite validar la
composicin de las diferentes partidas producidas, garantizando que la composicin indicada en
la etiqueta ha sido contrastada experimentalmente antes de su distribucin al usuario.
Probablemente, para dietas de animales de laboratorio (dado la baja produccin) pocas
empresas disponen de este sistema. Con lo cual se deja al azar la composicin real de estas
dietas. Igualmente el MAPA es muy laxo a la hora de exigir los controles y los intervalos de los
valores de la etiqueta. Posiblemente nadie hace los anlisis por partida que especifica en la
etiqueta, cuyos valores son, sospechosamente, siempre los mismos.
El problema de la homogeneidad de las mezclas

Constituye uno de los problemas diana en la fabricacin de piensos. Las plantas ms
modernas son capaces de producir piensos a la carta sin solucin de continuidad y en
cantidades de un amplio rango de variabilidad. Existen casos de produccin de ms 50 tipos
diferentes de piensos de conejo, de manera rpida y controlada por ordenador. Sin embargo esto
puede originar problemas en la calidad de la mezcla. Para evitarlas, existen controles de
verificacin de la homogeneidad de la mezcla que utilizan como elemento diana los cloruros
analizados mediante la tcnica NIR (Espectroscopia de Reflactancia en Infrarrojo Cercano). Se
toman al menos 10 muestras del punto ms prximo de la mezcladora al que se puede acceder, y
no se aceptan valores superiores al 10% de Coeficiente de Variacin (CV%) sobre el valor de
una mezcla patrn.
35
Componentes que se han de controlar y mtodos

Un anlisis proximal incluye la determinacin cuantitativa de los siguientes parmetros:
Humedad: muestra (4-5 g) sometida a 105+ 2 C en estufa hasta un peso constante.

Protena bruta: determinacin de nitrgeno total por el mtodo de Kjeldah.
Extracto etreo (grasa): tras digestin clorhdrica (hidrlisis con ClH). Mtodo de Stold.
Cenizas (minerales totales): calcinacin de 1-2 g de muestra a 450 C en horno mufla.
Vitaminas clave, como la A, E o D3: muestras saponificadas y extradas con hexano y
preparacin de soluciones patrn de ambos componentes, determinando la cantidad
exacta en sus respectivas disoluciones patrn mediante absorbancia por ultravioleta,
mediante cromatografa Liquida de Alta Resolucin (HPLC).
Contaminantes abiticos
Las empresas especializadas envan controles peridicos de este tipo de contaminantes con
los niveles mnimos aceptados por las reglamentaciones internacionales (USP EPA, Federal
Register, 1979, vol.44, n9, May 9). Su presencia se debe a posible contaminacin de las
materias primas en los procesos de cultivo (utilizacin de pesticidas o herbicidas) y a los
mtodos de conservacin y almacenamiento.
Tanto para animales de laboratorio convencionales de alta calidad como para SPF no se
puede permitir la presencia, en sus dietas, de contaminantes abiticos. Por ejemplo los residuos
de DDT (dentro del intervalo 0-1 mg/kg) influyen en la actividad de ciertas enzimas
microsomales hepticas de la rata, modificando la respuesta del hgado a procesos
experimentales. Detectar su presencia/ausencia es particularmente importante en estudios de
induccin de inmunotoxicidad, induccin enzimtica y el desarrollo y reproduccin de
toxicidades.Destacan por su importancia:
Residuos de plaguicidas organoclorados y organofosforados. La presencia de los primeros
debe ser <0.005 mg/kg de pienso y de los segundos <0.01 mg/kg. La estimacin de pesticidas
pasa por el anlisis mediante gases masas por ionizacin qumica o mediante trampa de iones
(cromatografia en fase gaseosa). Una analtica completa implica la determinacin de 13
organoclorados y 14 organofosforados diferentes. No obstante se pueden determinar elementos
diana en base a familias o grupos con estructura qumica similar. Al menos analizar la presencia
de malatin, PCP, dieldrin, lindane, heptaclorine y DDT.
Minerales, normalmente pesados. Se determinan por mineralizacin por va hmeda. La
deteccin de metales pasados se basa en determinar al menos 12 tipos diferentes. Metales diana
son arsnico, cadmio, mercurio y plomo. Es importante la ausencia de nitratos y nitritos.
Antibiticos (penicilina G y otros). Se les aaden a las materias primas para incrementar su
conservacin y evitar contaminaciones microbiolgicas. En muchos casos su presencia se ha
debido a la utilizacin de materias primas que llevaban mucho tiempo (incluso aos!)
almacenadas o procedentes de terceros pases con inadecuados sistemas de almacenamiento y
conservacin. En el caso de ensayos de antibiticos no se puede aceptar la adiccin de estos
elementos, por los efectos de alteracin de la resistencia o sensibilidad del antibitico ensayado
(problemas de obtencin de antgeno). Para una deteccin puramente cualitativa se utiliza un
test colorimtrico similar al utilizados para detectar su presencia en orina o rin. Su
cuantificacin exige de mtodos ms complejos como HPLC (cromatografa).
36
Componentes naturales o artificiales con actividad hormonal. Se trata de detectar la

presencia de fitoestrgenos, entre los componentes naturales, y de xenobiticos hormonales
(pesticidas organoclorados, bisfenoles, ftalatos y alquilfenoles- entre los contaminantes). Se ha
definido el trmino genrico de disruptores endocrinos para designar al grupo heterogneo de
contaminantes con actividad hormonal. La presencia de los disruptores endocrinos en las
preparaciones comerciales de alimentos pueden tener un origen muy diverso: (i) componentes
naturales de los productos primarios empleados en la fabricacin de los preparados, por ejemplo
soja y sus derivados; (ii) contaminantes presentes en los vegetales como residuos de pesticidas;
(iii) monmeros de plsticos o colas empleados en la fabricacin de los contenedores o sacos en
los que se conservan y o esterilizan las dietas. El equilibrio de las hormonas sexuales
estrgenos y andrgenos parece ser el ms afectado por lo que se ha hecho hincapi en los
trastornos reproductivos y los efectos generales dependientes de los estrgenos.
Melazas: En alimentos destinados a determinadas especies (p. ej., en conejo) se aaden
ingredientes que incrementan su sabor (derivados del procesamiento de la caa de azcar y
otros). Est demostrado que el uso de ingredientes que aaden sabor no incrementa
significativamente el consumo de pienso por largos periodos en las especies comnmente
usadas en la investigacin biomdica. El consumo se reduce cuando los piensos contienen un
gran porcentaje de grasa. Determinados aditivos como aromatizantes, colorantes, hormonas y
promotores del crecimiento no pueden ser permitidos para animales de experimentacin.
Otros elementos relacionados con la contaminacin abitica, son los estrgenos y
aflotoxinas generadas por hongos y levaduras del tipo B1, B2, G1, y G2 (mnimo aceptado <
0.001 mg/Kg). Otras micotoxinas producidas por hongos son las achratoxinas, zerealenona,
sterigmatocistina. Su presencia se determina mediante cromatografa en fase inica. Al menos
se debe determinar presencia/ausencia de aflotoxinas. Debido a su alta toxicidad, su presencia
obligara a desechar una partida de pienso.
Contaminantes biticos
Estndar microbiolgicos recomendados
Las dietas destinadas al consumo del animal de laboratorio, por su propia composicin o
por contaminacin, constituyen de forma directa un medio de transmisin y cultivo de grmenes
especficamente patgenos o que sin serlo pueden originar alteraciones metablicas y/o
digestivas, e indirectamente repercutir sobre los bioensayos que se realizan con ellos. Previo al
proceso de formacin de pellets ya sea por presin en seco o mediante vapor de agua, las
harinas se someten a un pre acondicionamiento con vapor a alta T que oscila entre los 50-90 oC,
reduciendo la carga bacteriana de la mezcla a niveles inferiores del mnimo permitido. La
extrusin de pellets con vapor de agua a presin elevada (8-9 bars) puede reducir hasta 2-4
veces el contenido bacteriolgico total, pero aumenta el %H.R. del pellets favoreciendo a largo
plazo la formacin de hongos, especialmente en el perodo estival.
Existen diferentes patologas que se pueden asociar o atribuir a la carga microbiolgica de
la dieta. Hongos y levaduras producen alteraciones metablicas y estrognicas debido a los
metabolitos fngicos formados por sus micotoxinas; junto con los agentes no patgenos
aerobios (Coliformes y Enterococos) indican la humedad final del producto obtenido o la
conservacin en almacenes sin proteccin, por un perodo de tiempo prolongado o en
condiciones de temperatura y humedad inadecuadas. Agentes patgenos de primer orden son
Salmonella, E. coli, Estafilicocos y Clostridium sp, dependiendo de sus serotipos. Un elemento
importante de contaminacin es Clostridium perfrigens productor de toxiinfecciones
alimentarias (esporas tipo A) y enteritis necrtica (tipo B) producida por enterotoxinas
citoplasmticas de los grmenes en esporulacin, con la circunstancia aadida de que las del
tipo A son muy resistentes al calor. La tolerancia mxima se ha establecido en 102/g de producto
37
y su presencia indica fermentaciones anaerobias intensas por conservacin de la materia prima

en silos de gran tamao, o mantener posteriormente el pienso en condiciones de humedad.
Se debe detectar la presencia al menos de: bacterias aerobias mesfilas (<1x106/g) ;
Coliformes (<1x102/g) ;Escherichia coli (ausencia en 1 g) ; Enterococos (<1x102/g); Salmonella
(ausencia en 25 g); Clostridium perfringens (<1x101/g); Estafilococos patgenos (DNAasa+,
coagulasa+ y termonucleasa+ , mx. 10 ufc/g) y Hongos-levaduras (<1x102/g). En condiciones
normales no se suele realizar la analtica correspondiente a Escherichia coli y Enterococos,
porque se considera que al investigar Coliformes (Enterobacteriaceas lactosa+) y Salmonelas
(Enterobacteriaceas lactosa-), se cubre suficientemente el campo en la deteccin de grmenes
fecales.
Mtodos y protocolos de esterilizacin de dietas
Es difcil encontrar un pienso en el mercado sin contaminacin bitica, procedente en la
mayora de los casos de las materias primas. Un pienso en condiciones normales no suele
presentar unidades formadoras de colonias (ufc), de coliformes, Salmonella y estafilococos
(Cuadro 4-4); si embargo ninguno se libra de aerobios mesfilos, Clostridium y
mohos/levaduras. Un pienso con valores superiores debe ser rechazado, como es el caso de la
muestra problema (MP) con unas 100 veces ms del mnimo aceptado para ufc de
mohos/levaduras (ver Cuadro 4-14).
Otra cuestin es, si en el caso de los animales de experimentacin debemos estar tranquilos
con los mnimos de ufc indicados anteriormente. Si la instalacin es convencional y no dispone
de barreras (ver captulo.5.), se puede aceptar. Pero si disponemos de estas y el objetivo es
producir o mantener animales Gnotobiticos o SPF (ver captulo. 7.), o bien se realizan estudios
de microbiologa, produccin de ascitis, o con inmunodeprimidos o similar, no es aceptable. En
este caso es incuestionable el tratamiento del pienso por medio de calor (trmico) o irradiacin.
La exposicin temporal a vapor a presin elevada o a radiaciones gamma son los mtodos
de esterilizacin ms utilizados. La esterilizacin qumica mediante fumigacin de xido de
etileno o similar ha sido definitivamente desechada por el potencial peligro de toxicidad durante
su manipulacin y la dificultad de eliminar los residuos de xido de la dieta.
DIETA
MC1-6
AMES
10 ufc/g
9. 105+
COLI
100 ufc/g
Ausencia
SALM
Aus/25g
Ausencia
CLOS
10 ufc/g
30.3+1.65
ESTAFI
Aus/g
Ausencia
MOH/LEV
100 ufc/g
290+162.3
MP1-3
MT1-3
MT4-6
MT7-9
MT10-12
1.8104
Ausencia
Ausencia
Ausencia
Ausencia
Ausencia
Ausencia
Ausencia
Ausencia
Ausencia
Ausencia
Ausencia
Ausencia
Ausencia
Ausencia
15.5
Ausencia
Ausencia
Ausencia
Ausencia
Ausencia
Ausencia
Ausencia
Ausencia
Ausencia
195000
Ausencia
Ausencia
Ausencia
Ausencia
6-7
TMA
105
110
115
120
15
15
15
15
TMA: tasa mxima aceptada.

MC: muestra control, n= 6.
MP: muestra problema.
MT: muestra tratada trmicamente.
AMES: aerobios mesfilos; COLI: coliformes; SALM: salmonella; CLOS: clostridium; ESTAFI:
estafilococos; MOH/LEV: mohos y levaduras.
Cuadro 4-14. Carga microbiolgica de dieta control (MC1-3) y tratada trmicamente (MT) con
diferentes valores de temperatura (C) y tiempo (T). Igualmente se indica la microbiologa de una dieta
altamente contaminada (MP1-3). En todos los casos se indica el valor medio (0+ DS). (Extrado de
Ziga et al (1999).
38
Esterilizacin por calor: una esterilizacin eficiente por vapor, exige de un autoclaveado
con presiones de vapor superiores a 1 Atmsfera y para que sea completa, los piensos deben
someterse a temperaturas superiores a los 120oC.Valores desde 80oC e inferiores 120oC, se
consideran pasteurizacin, capaz de destruir los organismos vegetativos y huevos de parsitos
pero no las esporas y alguna flora bacteriana. La destruccin de los contaminantes microbianos
se produce cuando es liberado el calor latente por condensacin, despus del vaco,
garantizando el mantenimiento de la temperatura precisa durante el tiempo preestablecido, ya
que es esencial la penetracin completa del vapor en los pellets. Para conseguir estas
condiciones los piensos deben ser extendidos en capas inferiores a 3 cm de espesor, a fin de
facilitar una distribucin homognea del calor.
En s mismo es evidente que un proceso de esta naturaleza, diseado para la aniquilacin de
microorganismos, pueda originar alguna destruccin de los componentes nutricionales de la
dieta. Aparentemente no afecta al contenido de protena cruda pero s puede afectar a su
digestibilidad efectiva (DT), valor biolgico (BV) y protena neta utilizada (NPU=TDxBV),
debido a una sensible reduccin en la disponibilidad de aminocidos como la metionina y la
lisina fundamentalmente. Por otra parte la esterilizacin por calor puede producir una severa
afectacin de las vitaminas termolbiles fundamentalmente del complejo B, B1, B6, cido
pantotnico, vitamina A, C y cido flico (Figura 4.2). La composicin del complemento
mineral, tambin es importante debido a posibles alteraciones del pH de la dieta que a su vez
pueden afectar a la perdida de nutrientes. Se considera adecuado suplementar las dietas
esterilizadas con el doble de su contenido vitamnico para compensar posibles prdidas. Otra
secuela de la esterilizacin por vapor es el efecto de bronceado (Millard), como consecuencia
de la reaccin entre los carbohidratos y los grupo amino de los aminocidos.
16
14
12
10
15
20
30
15
20
30
15
20
30
15
20
30
15
20
105
105
105
110
110
110
115
115
115
121
121
121
124
124
124
130
130
H U M E D A D
C E N IZ A S
V IT A
V IT E
Figura 4.2. Variaciones en la composicin de Vitaminas en la dieta tratada trmicamente a diferentes

valores de temperatura. Extrado de Ziga et al (1999).
Se ha observado que esta reaccin induce a diarreas y a una reduccin significativa de la

retencin de Ca, P, Mg y Cu en animales GF (Germen Free), pero no en CV (Convencionales).
Finalmente, la alteracin de la textura, color y sabor del alimento, pueden afectar a su consumo
(palatabilidad), modificando a medio o largo plazo el normal crecimiento o desarrollo de los
animales y sus ndices de produccin: menor peso al nacer, aumento del intervalo entre
camadas, y otros.
39
La dureza del pellets, se ve incrementada en un 49-50% en dietas esterilizadas a 121C, en

un ciclo completo de 2 horas como consecuencia de la caramelizacin de los carbohidratos y el
almidn.
Para obtener una esterilizacin adecuada se debe establecer el vaco antes de la admisin del
vapor para facilitar su penetracin en la masa total a tratar. Para un tratamiento eficaz y
homogneo, el pienso se debe disponer en capas de 2-3 cm en el interior de cajas de inox.18/8
(600x170x630 mm) con perforaciones de 2 mm, cargadas en el interior del autoclave. Se debe
evitar la esterilizacin en el interior de los sacos de papel microperforados ante la posible
liberacin de monmeros txicos provenientes de las colas o pegamentos utilizados para unir las
diferentes capas de papel que los componen.
La pasteurizacin garantiza, a partir de los 105C (15 y 25 de secado) la prdida del
contenido microbiolgico del pienso incluidas las formas de mayor resistencia al calor (vase
Cuadro 4-14). No obstante en partidas de pienso sospechosas o en malas condiciones, se debera
tratar a T > 105C y < 121C, para garantizar la eliminacin de toda fuente de contaminacin
sin necesidad de hacer un anlisis microbiolgico del pienso. En este sentido se considera que
115C (3 prevacos, 15-20 de esterilizacin, 25 de secado) es la temperatura ms adecuada,
cumpliendo sobradamente las expectativas de control de calidad microbiolgica, sin producir
alteraciones apreciables en el crecimiento y desarrollo de los animales de laboratorio ensayados.
Por otra parte, las formas innovadoras de encapsulado de las vitaminas liposolubles y
termolbiles (E y D3) les proporcionan una mayor resistencia al calor, lo que hace injustificado
el adicionar vitaminas a las dietas para su esterilizacin siempre y cuando esta sea inferior a los
121C (Fig.4.3). Esto permite tratar trmicamente las dietas usuales destinadas a los animales en
mantenimiento y reproductores, suministradas por las casas comerciales, sin mermas apreciables
en el crecimiento y productividad. Las alteraciones en la asimilacin del nitrgeno sobre todo en
animales en fase de crecimiento desaconseja esterilizar a T a 121C.
Otro aspecto a considerar es que la exposicin a temperaturas elevada por cortos espacios
de tiempo es menos perjudicial para la integridad de los principios nutritivos que los
tratamientos durante mucho tiempo a bajas temperaturas. Para realizarlos se necesitan
autoclaves que obtenga un alto vaco antes y despus del tratamiento con vapor, y alcanzar al
menos 134 C durante 3 minutos.
Figura 4.3. A. Muestras de pienso sin esterilizar (superior derecha) y esterilizadas a diferente temperatura
(130C superior izquierda, 115C inferior derecha, 120C inferior izquierda). B. Muestras de pienso en
mal estado y sometidas a anlisis microbiolgicos. Se observa la formacin de colonias de mohos y
levaduras. (Fotos cedidas por J. Martn Ziga).
Esterilizacin por radiaciones ionizantes: el mtodo de exposicin a radiaciones ionizantes

del tipo gamma utilizando como fuente CO60 es el ms eficaz debido al intenso poder de
penetracin de las radiaciones y a la escasa alteracin que produce en el contenido nutritivo y
40
estabilidad de las dietas, observando escasas alteraciones en su digestibilidad. La unidad de

medida de la radiacin es el gay (Gy), una dosis de 25 KGy a temperatura normal, es la ms
adecuada para asegurar la esterilizacin de dietas de animales de laboratorio, aunque se prefiere
alcanzar dosis superiores (50 KGy) en el caso de animales Gnotobiticos. El aumento de
temperatura para estas dosis de radiacin es de pocos grados y no hay actividad residual en los
productos tratados. La radiacin es en general menos perjudicial que el calor para los principios
nutritivos de la dieta. En contraste, la presencia de humedad incrementa la posibilidad de
prdida de nutrientes porque la irradiacin del agua incrementa los radicales libres que pueden
originar cambios oxidativos.
En la actualidad, existen algunas instalaciones industriales destinadas a la radiacin de
mltiples productos, que pueden irradiar grandes cantidades de pienso. Su mayor y casi nico
inconveniente es el alto coste (entre un 50-80% ms del precio base del pienso).
Una ventaja prctica de la radiacin es su alto poder de penetracin, lo que permite que
gruesos paquetes sean satisfactoriamente esterilizados. Si la dieta va destinada animales
gnotobiticos deben prepararse volmenes de pienso en bolsas de plstico precintadas, siendo
preferible hacer previamente el vaco en ellas, para de esta forma reducir los cambios oxidativos
inducidos por las radiaciones. Impregnar la dieta en nitrgeno antes de ser precintada es una
buena alternativa en dietas finamente molidas donde las oxidaciones inducidas por la radiacin
pueden crear problemas. El paquete con la dieta es entonces sellado en una segunda envoltura
que puede quitarse inmediatamente antes de situarla en el ambiente estril del aislador (vase
Cap.7). Los paquetes con pienso son protegidos durante el transporte y la irradiacin por
cartones fuertes o sacos compatibles con el equipo mecnico de manejo y con la planta de
irradiacin.
RESUMEN
El estado nutricional de un animal de laboratorio esta directamente relacionado con una
alimentacin adecuada (cualitativa y cuantitativamente). Un correcto estado nutricional permite
que el animal alcance todo su potencial gentico en fases claves como el crecimiento, la
reproduccin y las expectativas de vida (longevidad). Asimismo, una alimentacin correcta
permite al animal presentar respuestas ms favorables a factores de estrs ambiental como la
presencia de patgenos.
En el estado actual de las investigaciones contrastadas se ha observado que los resultados
experimentales se pueden ver afectados de forma no intencionada por la composicin de la
dieta. Estos efectos pueden ser producidos por variaciones no deseadas y desconocidas en la
composicin, distribucin homognea de los nutrientes, variaciones en los constituyentes y
materias primas, junto con posibles fuentes de contaminacin abitica y/o bitica. Igualmente se
da la circunstancia de que en determinado tipo de experimentos, el consumo de alimentos puede
variar entre el grupo control y el experimental generando resultados desviados y por
consiguiente una falsa interpretacin de los datos. Las consecuencias que esto produce van
desde el sacrificio innecesario de animales, hasta la prdida de tiempo y recursos.
Este captulo se centra en la nutricin como factor clave que potencialmente puede
interferir en la experimentacin animal. A partir del concepto de energa se comentan las
caractersticas de los principales macronutrientes de una dieta: la protena, indicando la forma
de valoracin de su contenido y los requerimientos normales; los hidratos de carbono, fibra,
grasa, minerales y vitaminas. Se indican los requerimientos nutritivos mnimos de estos
elementos y se comentan las consecuencias de su deficiencia en el desarrollo normal del animal
y sus efectos patolgicos.
En una segunda parte del captulo y partiendo de lo anterior se establecen los
requerimientos nutritivos que sirven para establecer las frmulas de las diferentes dietas con
indicacin de su procesado, forma fsica y los diferentes tipos segn el origen de las materias
41
primas (ingredientes naturales, semipurificadas, purificadas) y las denominadas dietas

experimentales (carenciales o similar). Se indican los diferentes tipos de regmenes alimentacin
con especial mencin a la alimentacin restringida, sus consecuencias y utilidad.
La tercera parte se dedica a aspectos tcnicos relacionados con la conservacin y control de
calidad de las dietas, tratando aspectos fundamentales tales como su almacenamiento, la
necesidad del control nutricional, los estndar microbiolgicos recomendados y los los
diferentes tratamientos preventivos contra posibles contaminaciones microbiolgicas
indeseables.
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Captulo 4.

FORMULACIN DE DIETAS PARA ANIMALES DE LABORATORIO

CONSERVACIN Y CONTROL DE CALIDAD DE LAS DIETAS

La primera pregunta que podemos plantearnos acerca de la alimentacin y nutricin animal

NECESIDADES NUTRICIONALES DE LOS ANIMALES DE LABORATORIO

Valor global de la protena (VGP) y coeficiente de eficacia en crecimiento (CEC):

Pp = Incremento de peso (g) por gramo de protena problema ingerido

BN1 = balance de nitrgeno con la protena 1

I = nitrgeno ingerido, H = nitrgeno fecal, He = nitrgeno fecal endgeno,

Cuadro 4-2. Composicin en aminocidos (mg/g de nitrgeno) de protenas purificadas utilizadas en

% de A.G. totales (Valores medios)

Los AG esenciales pertenecen al grupo de los poliinsaturados. Entre ellos se encuentra el

Capacidad para aliviar el sntoma

La utilizacin digestiva de la grasa diettica se relaciona con la longitud de la cadena por un

Factores que favorecen la absorcin

Dietas altas en fructosa

Magnesio: se encuentra principalmente en el esqueleto pudindose movilizar de ese

Otros minerales: presentes en muy bajas concentraciones en las dietas de ingredientes

Tabla 4.6. Efecto de las deficiencias vitamnicas en los animales de laboratorio

Vitamina A: preformada se encuentra en los alimentos de origen animal en forma de

Tabla 4.7. Equivalencias de -caroteno y retinol en diferentes concentraciones (NRC, 1995).

Actualmente las necesidades de vitamina A se establecen en funcin del peso corporal ms

En la naturaleza se encuentran distintas formas de esta vitamina. Las ms importantes

Vitamina K: esta implicada en los procesos de coagulacin sangunea debido a su papel en

Cantidad por kg de dieta

Cantidad adecuada ms que requerimientos

Se encuentra en los tejidos animales y formando parte de un fosfolpido cerebral el fosfatidil

CONSUMO DE AGUA(ml/da) CONSUMO DE ALIMENTO (gr/da)

Densidad energtica de la dieta: 14,5 kJ/g.

Cuadro 4-10. Necesidades estimadas de energa metabolizable en relacin al consumo de alimento en

PROCESAMIENTO Y PRESENTACIN DE LAS DIETAS

Molidas: en forma de polvo ms o menos fino.

Expandidas: procesadas a alta presin y calor a travs de un molde. Se utilizan para

En el caso de roedores el pienso en forma de pellets es el ms utilizado. Ofrece ciertas

Molturacin: favorece la actuacin enzimtica a nivel gastrointestinal por lo que aumenta la

FORMULACIN DE DIETAS PARA ANIMALES DE EXPERIMENTACIN

COMPOSICIN NORMAL DE UNA DIETA

2. Corrector tipo con la adicin de los siguientes componentes

En el caso de las dietas purificadas, la formulacin no es tan compleja al ser cada

Casena o protena de soja como fuente proteica.

a la severidad de las nefropatias y otras lesiones encontradas en el tipo de estudios antes

Tomado de Rao (1994 y 1996) +: incluido en la premezcla de minerales

Cuadro 4-12. Ingredientes y composicin de las dietas no purificadas NTP-2000 y NIH-07

Al estar elaborado con cantidades definidas de ingredientes refinados minimizan la

Para incrementar la cantidad de cido linoleico se sustituyen 7 g/100 g de dieta, de

En cuanto a la dieta de mantenimiento AIN-93M se reduce la cantidad de grasa a 40 g/Kg

AIN-76: Mezcla vitaminica (g/kg)

Cuadro 4-13. Diferentes tipos de dietas: AIN-93M y AIN-93G respecto a la AIN-76A

Dietas qumicamente definidas

Finalmente, se carece de informacin sobre las condiciones de bienestar de los animales

Asegurarse de que las condiciones de presentacin de los alimentos en el momento de

Se aconseja no aceptar partidas envejecidas o rancias y fabricadas con 3 meses de

La necesidad del control nutricional

Control sobre las especificaciones del etiquetado

La calibracin de las composiciones

El problema de la homogeneidad de las mezclas

Componentes que se han de controlar y mtodos

Humedad: muestra (4-5 g) sometida a 105+ 2 C en estufa hasta un peso constante.

Componentes naturales o artificiales con actividad hormonal. Se trata de detectar la

y su presencia indica fermentaciones anaerobias intensas por conservacin de la materia prima

TMA: tasa mxima aceptada.

Figura 4.2. Variaciones en la composicin de Vitaminas en la dieta tratada trmicamente a diferentes

Se ha observado que esta reaccin induce a diarreas y a una reduccin significativa de la