OBSERVACIN DE BACTERIAS TEIDAS

I.

INTRODUCCIN

Las bacterias son microorganismos que no pueden ser observados

a simple vista, por ende para conocer su morfologa es necesario
aplicar la tcnica de coloracin para poder observar y diferenciar
a las bacterias, ya sean por ser gampositivas o gramnegativas.
La tcnica de tincin requiere hacer un frotis que consiste en
depositar una gota de agua destilada sobre el portaobjetos, en el
cual se dispersar una pequea parte de la colonia cultivada
haciendo uso para ello del asa de siembra y luego la mezcla se
extender en el portaobjetos. Posteriormente se realiza la fijacin
utilizando el calor, lo que permite que los microorganismos se
queden adheridos al portaobjeto y no se arrastren durante la
tincin.

II.

OBJETIVOS

Observar la morfologa de las bacterias y diferenciar si son

grampositivas o gramnegativas.

III.

MATERIALES

Portaobjetos

Mechero de Bunsen

Asa de siembra

IV.

Colorantes: cristal violeta, lugol, alcohol-acetona y safranina

Agua destilada

REVISIN BIBLIOGRFICA

TINCIN DE GRAM

La tincin de Gram se basa en colocar como colorante primario

cristal violeta, el cual tiene afinidad con el peptidoglicano de la
pared bacteriana. Posteriormente, se coloca lugol, el cual sirve
como mordiente e impide la salida del cristal violeta por la
formacin de un complejo cristal violeta yodo que satura los
espacios del peptidoglicano de la pared bacteriana. En seguida, se
coloca una mezcla de alcohol-acetona, la cual deshidrata la pared
bacteriana y cierra los poros de la misma, tambin destruye la
membrana externa de las bacterias Gram negativas debido a que
sta es soluble a la accin de solventes orgnicos, como la mezcla
de alcohol-acetona. Las bacterias Gram positivas, al contener una
gran cantidad de peptidoglicano, retienen con mayor fuerza este
complejo, mientras que las Gram negativas no lo pueden retener
por tener menos cantidad de peptidoglicano. Por ltimo, se coloca
safranina, la cual funciona como un colorante secundario o de
contra tincin y sirve para teir las bacterias que no pudieron
retener el complejo cristal violeta-yodo.16 Hay bacterias de un
mismo gnero que pueden observarse en la misma muestra como
Gram positivas y como Gram negativas, a este evento se le llama
tincin Gram variable secundaria a alteracin en nutrientes,
temperatura, pH o concentracin de electrolitos.

V.

METODOLOGA

Para la realizacin de la tincin diferencial de las bacterias, se

siguieron con los pasos sealados por el profesor. Los cuales son
los siguientes:

Colocar en un portaobjeto una gota de agua y una pequea

alcuota de un cultivo bacteriano con el asa de siembra

VI.

estril.
Hacer el frotis, formando una partcula homognea sobre el

portaobjeto. Dejar secar.

Fijar la preparacin, pasando el portaobjetos a travs de la

llama del mechero.

Cubrir con unas gotas de cristal violeta durante un minuto.

Lavar el exceso de colorante con agua destilada.

Aadir lugol durante un minuto. Lavar el exceso con agua.
Agregar alcohol-acetona durante un minuto. Lavar ele

exceso con agua.

Cubrir con safranina durante un minuto. Lavar el exceso con

agua.
Dejar secar
Observar con el microscopio

RESULTADOS

FIJACIN DE LA PREPARACIN EN EL
PORTAOBJETOS

TINCIN

Tincin con cristal violeta

Tincin con lugol

Tincin con alcohol-acetona

Tincin con safranina

OBSERVACIN CON EL MICROSCOPIO

VII.

CONCLUSIONES

En la experimentacin se puede observar que al momento de

echar el cristal violeta y el lugol ambas bacterias gram positivas y
negativas se tieron de color violeta. Cuando se agreg al alcoholacetona la gram (+) mantuvo su color, mientras que la gram (-)
perdi el colorante. Por ltimo, con la safranina las gram (+)
siguieron de color violeta y las gram (-) se tieron de rojo.
Esto se debe a que las bacterias gram positivas tienen una gruesa
capa de peptidoglicano que permite retener el colorante cristal
violeta, mientras que las gram negativas al tener una delgada
capa de pepdidoglicano junto con gran cantidad de lpidos externa
de la pared celular aumenta la porosidad y contribuyen a la
perdida de colorante en el momento de la decoloracin con
alcohol-acetona.
VIII.

LINKOGRAFA

http://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2014/ir141b.pdf
http://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_an

io/biotecnologia/practico4.pdf
http://microbiologia3bequipo5.blogspot.pe/2014/10/metodo

s-y-tecnicas-de-tincion.html
http://revistareduca.es/index.php/biologia/article/viewFile/81
9/834