Reaccin de Hill en cloroplastos aislados de Spinacea oleraceae

(espinaca)
Resumen:
La reaccin de hill es una reaccin de oxido reduccin en la que se observa
la evolucin del
Oxigeno y la reduccin de un aceptor de electrones. En el siguiente trabajo
se realizaran
experimentos para demostrar que la reaccin de Hill se da en los
cloroplastos, y se realizara la
cintica de uno de los tratamientos. Los resultados muestran que la reaccin
de Hill es
altamente dependiente de la luz y que efectivamente esta se da en los
cloroplastos.
Introduccin:
La reaccin de Hill es una reaccin a travs de la que se observa la evolucin del
oxgeno y fotorreduccin de un receptor de electrones artificial en una preparacin
de cloroplasto, en ausencia de dixido de carbono, y de esta forma simular el efecto
de los fotosistemas. Esta tcnica fue descubierta por Robert Hill en 1939, era un
bioqumico que adems de descubrir esto, realizo otros aportes a la fotosintesis.
El proceso de la fotosntesis son raciones interconectadas entre si, en una
secuencia de oxido-reduccin, que se inicia en las molculas de agua, la cual dona
los electrones a una serie de transportadores membranales, hasta el NADP. Esta
secuencia es denominada esquema en Z de Hill y Bendall, la cual posee 2 centros
de captacin de la energa; el fotosistema II, con un mximo de absorbancia de 680
nm y en el cual se produce oxigeno como un subproducto de la captura de la
molcula de agua y el fotosistema I, con un mximo de absorbancia a 700 nm y
donde es reducido el NADP.
EL cientfico Robert Hill durante su trabajo con preparaciones de cloroplastos
extrados de hojas verdes, demostr que la luz es el factor limitante para que dichas
preparaciones fuesen capaces de reducir los aceptores electrnicos artificiales
aadidos al sistema, como el DCPIP, lo que provocaba adems un desprendimiento
simultaneo de oxigeno, proveniente del agua.
El herbicida, cuyo nombre comercial es Afaln, contiene el compuesto fitotxico, al
igual que algunos derivados de la urea, como el monurn o CMU (3-p-clorofenil-1,1
di metil urea) y el DCMU [3-(3,4 di cloro fenil) 1,1 dimetil urea], se aplican al suelo
y se desplazan por el xilema hasta las hoja, donde bloquean el transporte de
electrones entre las plastoquinonas QA y QB . Inhiben la reaccin de Hill en el
fotosistema II por lo que no ocurre la fotlisis del agua ni la liberacin de O 2.

Objetivos:

Obtencin de cloroplastos a partir de tejido foliar fresco de Spinacea

olerace (espinaca)
Llevar a cabo in vitro las reaccin luminosas de la fotosntesis,
utilizando un aceptor artificial de electrones (DCPIP).
Comprobar que la luz es limitante para los procesos redox de la
fotosntesis y que la alteracin de la estructura proteica de los
cloroplastos origina un efecto inhibidor en dicho proceso.
Observar el efecto producido in vitro por compuestos qumicos capaces
de bloquear el proceso fotosinttico.

Resultados:

Tabla 1. Densidad ptica segn el tiempo para el tubo 2

Tiempo
(minutos)

D.O
0
1
3
5
7
9

0.15
0.14
0.1
0.06
0.03
0.01

Tabla 2. Densidades pticas iniciales y finales para los tubos 1 3 4 y 5.

Tubo 1
tubo 3
tubo 4
tubo 5

D.O
Inicial
D.O Final
0.19
0.18
0.16
0.16
0.16
0.11
0.16
0.16

Imagen 1. Cintica del cambio de la densidad ptica en funcin del tiempo

para la reaccin de Hill.

0.16
0.14
0.12
0.1
Densidad Optica

0.08
0.06

Tubo 2

0.04
0.02
0
0

Tiempo (minutos)

Discusin:
Las densidades pticas medidas son una base para demostrar si las
reacciones en los diferentes tubos de ensayo a lo largo del tiempo est
ocurriendo, ya que el DCPIP es un compuesto que cuando se encuentra
oxidado tiene un color azul, pero al ir transcurriendo la reaccin con los
cloroplastos y el agua en presencia de luz, el DCPIP comienza un proceso de
reduccin por la toma de electrones, eso causa un cambio en la coloracin
de la solucin pues cuando dicho compuesto esta reducido es incoloro, por lo
que es posible demostrar si la reaccin ocurre o no dependiendo de los
cambios en su densidad ptica.
Como se puede observar en el nico tratamiento en donde ocurri la
reaccin, es en el correspondiente al tubo 2, ya que en este es en el nico en
el que estaban presentes todas las condiciones para que esta se diera.
En el tratamiento al cual no se le agrego cloroplastos (tubo 1) se puede
observar que no hubo cambio de densidad ptica a lo largo del tiempo, esto

es lgico, ya que sin los cloroplastos es imposible que la reaccin se d. Esto

demuestra que la reaccin de Hill se tiene que dar en esta organela.
Para el tratamiento sin presencia de luz (tubo 3) no debi de ocurrir cambio
en la densidad ptica, ya que sin presencia de luz la reaccin no se puede
dar ya
que es dependiente de la luz. El ligero cambio en las densidades
pticas para este tratamiento, puede estar relacionado en el momento en
que se midi la densidad ptica final, ya que el tratamiento pudo estar un
tiempo en presencia de la luz y esto altera nuestros resultados.
Para el tratamiento en el que se desnaturalizan los cloroplastos (tubo 4) se
observa que no hubo cambio en sus densidades pticas, esto se debe a que
los cloroplastos fueron desnaturalizados, por lo tanto no puede darse la
reaccin en este tratamiento.
El tratamiento con herbicidas (tubo 5) se le agrego Afaln un herbicida que
detiene el proceso fotosinttico ya que interrumpe la reaccin entre los
fotosistemas II y I, evitando el paso de electrones entre los mismos y por lo tanto
estos no pueden llegar al DCPIP para que sea reducido causando as que la
coloracin no vare, lo que demuestra a su vez que la reaccin no est ocurriendo,
pues los electrones dentro les sistema no estn llegando al siguiente fotosistema y
por consecuencia tampoco a su aceptor final.

Conclusiones:

La reaccin de Hill es altamente dependiente de la luz, sin esta dicha

reaccin no puede ocurrir ya que ocurren las reacciones de oxidoreduccin que permiten la oxidacin del agua.

El DCPIP es un compuesto til para reacciones de oxido-reduccin, pues el

cambio en el mismo causa cambios de coloracin y por lo tanto puede ser
medido este proceso a lo largo del tiempo.
El herbicida Afaln es un compuesto que interfiere en la reaccin de Hill
alterando el paso de electrones entre los fotosistemas en el diagrama Z
planteado para la fotosntesis.
Los cloroplastos a altas temperaturas pueden desnaturalizarse y llegar al
punto en el cual inutilizan totalmente su funcin.

Bibliografia:

Taiz- Zeiger, 2010 Plant Physiology Fifth Edition. Sinauer. Massachusets U.S.A