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INTEGRANTES
DOCENTE
MARTIN NUEZ
INTRODUCCION
Las protenas son uno de los principales componentes de todas nuestras clulas. Los
aminocidos (compuestos orgnicos) son los ladrillos de construccin de la protenas. Los
aminocidos se agrupan de acuerdo con su comportamiento qumico.
En esta prctica de laboratorio nos proponemos a realizar y demostrar los diferentes
mtodos para identificar protenas teniendo en cual los mtodos y su distinto
procedimiento.
OBJETIVOS
FUNDAMENTO TEORICO
Los aminocidos son pptidos de peso molecular alto que se encuentran en el protoplasma
de todas las clulas animales y vegetales, pero su composicin es variable segn su origen.
Estos contienen los elementos de C, H, O Y N y a veces otros como el P (nucleoprotena)
Fe (hemoglobina) yodo (tiroglobulina).
Son de naturaleza coloidal, sin puntos de fusin caractersticos; algunas, no obstante se han
obtenido en forma cristalina. Todas son pticamente activas. Son biopolmeros de
aminocidos, de alto peso molecular. En las protenas naturales se encuentran 20
aminocidos diferentes con excepcin de la glicina, todos presentan a nivel del grupo
amino una configuracin (L). En cuanto a tamao las protenas que se clasifican en simples,
las que por hidrolisis producen nicamente aminocidos, pueden ser globulares (albumina)
fibrosas (fibrina de seda) y conjugadas.
Su forma fundamental depende de enlaces peptdicos entre cada par de cidos aminados en
su orden especifico. Las estructura secundaria y terciaria obedecen a otras fuerzas intramoleculares, en particular puente de hidrogeno. Los cambios de propiedades fsicas,
qumicas y biolgicas por ejemplo. Las alteraciones en casos de desnaturalizacin se
acompaan de modificaciones de las fuerzas de unin no covalentes que en ltima instancia
establecen la forma o la geometra de las molculas proteicas.
Dentro de las pruebas cualitativas y cuantitativas para valorar e identificar protenas
tenemos:
Reaccin de la nihidrina
Reaccin de biuret
Reaccin milln
Reaccin xantoproteica
Reaccin sakaguchi
Mtodo van slike
Folin gicolteau
Electroforesis
Cromatografa
PROTEINAS SERICAS
El plasma sanguneo contiene en solucin coloidal una gran cantidad de protenas, siendo
su concentracin aproximada de 7gr/100ml. Mediante tcnicas como la electroforesis se
han clasificado en fracciones o grupos: albumina, alfa, beta, y gamma globulina y
fibringeno. Estas fracciones estn constituidas por un conjunto de protenas caractersticas
fsicos qumicas y semejantes.
Las protenas plasmticas cumplen distintas funciones tales como: nutricin celular, soporte
y vehculo de distintas sustancias (lpidos B12, Fe, Ca) adems intervienen en la
coagulacin sangunea. Al conjunto de protenas del plasma se les denomina protenas
totales, protenas plasmticas o sricas aunque el plasma da resultado ms elevado por la
presencia de fibringeno
Una elevacin de protenas sricas puede encontrarse en caso de:
Deficiencia relativa de agua
Ciertas enfermedades crnicas
Una disminucin de protenas plasmticas puede encontrarse en:
Exceso relativo de agua
Perdida excesiva de protena
Disminucin de la sntesis proteica por deficiencia proteica grave o mala absorcin.
MATERIALES
Gradilla
Trpode
Malla
Balanza
Pipeta
Probeta
Tubos de ensayo
Agitador
Erlenmeyer
Embudo
REACTIVOS
cido clorhdrico
cido ntrico
Acido pcrico
Acido tnico
cido fosfotunstico
Alcohol etlico
Nitroprusiato de sodio
Reactivos de milln y biuret
EXPERIMENTO 2: COAGULACION.
En 5 tubos de ensayos se colocaron porciones de aproximadamente 2 ml de albumina y
realizamos lo siguiente:
TUBO 1: Se calent la porcin de albumina y observamos que se torn de un color
blanco, luego procedimos a agregar 2 gotas de actico diluido y se produjo un burbujeo
y al agregarle la acetona como solvente la albumina se disolvi completamente.
TUBO 2: Se calent la porcin de albumina y se le agrego 2ml de etanol, observamos
que se form un precipitado en medio del tubo y al aadirle las 3 gotas de cetona y
flamearlo el precipitado se esparci por todo el tubo y no solo en el medio como estaba
inicialmente.
TUBO 3: Se calent la porcin de albumina y se le agrego 1ml de solucin de NaOH y
observamos que no hubo reaccin, pero el color de la solucin de albumina se aclar un
poco y al aadirle las 3 gotas de cetona notamos la formacin de un aro en la parte de
arriba del tubo la cual era de color amarillo.
TUBO 4: Se calent la porcin de albumina y se le agrego 1ml de HCl observaos que
inmediatamente la albumina se coagulo y con las gotas de cetona al llevarlo al fuego
este volvi a su estado normal y cuando se enfri quedaron porciones solidas de color
blancos lo que corresponde a la albumina
TUBO 5: Se calent la porcin de albumina y al agregarle 1 ml de HNO3 se observ la
formacin de un precipitado en casi todo el tubo de ensayo y en su interior se torn de
color amarillo y al llevarlo al fuego desapareci el precipitado y toda la mezcla tomo un
color amarillo.
Observamos que las gotas hicieron que la mezcla se tornar de un color verde mientras se
terminaba el procedimiento fue tomando un color amarillo y cuando se le agreg 5 gotas de
nitrato se form un precipitado y cambio de color a blanco lechoso.
EXPERIMENTO 6: DESNATURALIZACION
cidos fuertes:
A un tubo de ensayo se le agrego 1ml de solucin de albumina al 5% y se le adicion 1 ml
de cido tricloroacetico y se observ la formacin de un precipitado denso y blanco y en la
parte inferior color cristalino
Iones metlicos pesados:
A un tubo de ensayo se le agrego 1 ml de solucin de albumina al 5% mas 5 gotas de
solucin de nitrato de plata y hubo una desnaturalizacin total dando como resultado un
color blanco lechoso.
PREGUNTAS
La prueba de Biuret nos permite detectar compuestos que poseen dos o ms enlaces
peptdicos. Cuando estas sustancias se tratan con soluciones de sulfato de cobre disuelto en
solucin alcalina (Reactivo de Biuret), dan un color violeta caracterstico. El color
desarrollado es debido aparentemente al
complejo de coordinacin formado entre el
teme de cobre del Reactivo de Biuret, y
cuatro tanos de nitrgeno peptdicos
presentes en las cadenas peptdicas.
Libres, la cual se concentra en el balance entre los oxidantes y los antioxidantes. Los
cientficos han profundizado en varios cientos de procesos patolgicos diferentes en las que
los antioxidantes desempean una funcin de vital importancia. Los anaqueles de las
tiendas de alimentos naturistas y las farmacias estn llenos de una amplia gama de
productos antioxidantes. Sin embargo, a pesar de que estos antioxidantes, incluyendo la
vitamina C y la E, son generalmente naturales, stos no son naturales para su cuerpo. Si
usted ingiere estas vitaminas, stas no se encontrarn en sus clulas naturalmente. Debido a
la importancia de los antioxidantes en cientos de procesos patolgicos, uno se hace la
pregunta: Cul es el antioxidante que nuestro cuerpo produce para defenderse de estos
procesos? El glutatin es el antioxidante ms abundantemente producido en nuestro
cuerpo. De hecho, la presencia de esta pequea protena es crucial para el funcionamiento
de todos los dems antioxidantes que conocemos, haciendo que esto le otorgue el ttulo de
Antioxidante Maestro.
I Alimento para el Sistema Inmunitario
Su sistema inmunolgico est en la bsqueda constante de patgenos y antgenos externos
(agentes que daan las clulas y provocan toxicidad y enfermedad). Estos antgenos
incluyen a los virus, bacterias, parsitos, hongos e incluso clulas pre-cancergenas. Para
neutralizar estos patgenos, el cuerpo necesita reservas listas de glutatin ya que si no
cuenta con una cantidad suficiente, los invasores pueden penetrar infectando el cuerpo y/o
contribuyendo al envejecimiento, a daos acumulativos a largo plazo y hasta a un posible
cncer. No podemos evitar enfermarnos y envejecer al mismo tiempo (aunque algunos
cientficos siguen detrs del viejo sueo de evitar el envejecimiento) pero slo manteniendo
altos nuestros niveles de glutatin intercelulares vamos a mantener nuestro sistema
inmunolgico en completa alerta y completamente armado. El Dr. Gustavo Bounous,
descubridor de Immunocal, se ha enfocado en el glutatin como respaldo al sistema
inmunolgico. El factor limitante para la actividad adecuada y la multiplicacin de los
linfocitos (glbulos blancos) es el grado de disponibilidad del glutatin. La investigacin
del Dr. Bounous en la Universidad McGill ha engendrado en todo el mundo otras
numerosas investigaciones que examinan este fenmeno.
D Sistema de Desintoxicacin
El sistema de enzimas del GSH elimina miles de toxinas, incluyendo productos de
degradacin de las drogas, contaminantes, cancergenos y daos por radiacin. Es bien
sabido que las concentraciones ms altas de GSH se encuentran en el hgado, el principal
rgano desintoxicante del cuerpo. El ser humano inhala e ingiere diariamente toxinas
naturales y sintticas y no hay manera de evitarlo, especialmente en estos tiempos
modernos, con nuestras ciudades congestionadas y contaminadas y nuestros alimentos
modificados genticamente. Algunos estudios experimentales han demostrado que los bajos
niveles de glutatin generan un funcionamiento deficiente del hgado y el rin
ocasionando que grandes cantidades de toxinas circulen por el cuerpo. Una vez all, daan
continuamente clulas y rganos individuales. La lista de toxinas eliminadas incluye el
humo de cigarrillo, las emisiones de los automviles y metales pesados. Normalmente, los
Cromatografa de Afinidad.
La Cromatografa de Afinidad permite la separacin de mezclas proteicas por su afinidad o
capacidad de unin a un determinado ligando. En este caso, las protenas que se retienen en
la columna son aquellas que se unen especficamente a un ligando que previamente se ha
unido covalentemente a la matriz de la columna. Despus de que las protenas que no se
unen al ligando son lavadas o eluidas a travs de la columna, la protena de inters que ha
quedado retenida en la columna se eluye o libera mediante el empleo de una solucin que
contiene bien ligando libre u otro compuesto que rompa la interaccin entre el ligando y la
protena.
Las protenas totales son el resultado de sumar los distintos componentes proteicos
presentes en el organismo tales como: Alfa1, alfa2, beta gamma globulina y albmina. Las
protenas fraccionadas, al contrario que que las protenas totales, miden la cantidad
especfica de cada protena. Ambas pruebas, protenas totales y fraccionadas, son tiles a la
hora de determinar estados anormales y enfermedades que pueden afectar a nuestro
organismo.
Enfermedades relacionadas con las protenas totales
Las protenas totales son tiles a la hora de realizar el seguimiento de los cambios en los
niveles de protenas que causan diversos estados de enfermedad. Generalmente la
comprobacin de las protenas totales se realiza junto con otras pruebas como la
electroforesis de protenas, la seroalbmina o las pruebas de la funcin heptica. La
determinacin de los niveles de protenas totales es til en la deteccin de: Hipoproteinemia
causada por deshidratacin, hemoconcentracin o aumento en la concentracion de protenas
especficas.
Hipoproteinemia por hemodilucin producida por un defecto en la realizacin de la sntesis
proteica, catabolismo proteico excesivo o perdidas excesivas (hemorragias).
La deshidratacin, las enfermedades hepticas crnicas y el mieloma mltiple son estados
que pueden producir niveles altos de protenas totales.
El descenso de los niveles de protenas totales es propio del fallo heptico terminal y de la
enfermedad renal.
Con frecuencia se calcula una proporcin de albumina/globulina a fin de obtener
informacin adicional. El diagnstico clnico debe realizarse teniendo en cuenta todos los
datos clnicos y de laboratorio.
Valores normales de protenas totales
El rango normal de protenas totales es de 6.0 a 8.3 gm/dl (gramos por decilitro). La
cantidad considerada como valor normal de protenas totales puede variar ligeramente entre
pruebas realizadas por distintos laboratorios.
CONCLUSION
BIBLIOGRAFIA
Mara Luisa Salve, Silvia Amich, Santiago prieto, Antonio Casa, manuela de laboratorio
clnico bsico bioqumica, Ed. Mc. Graw Hill SA