r

Enzimas

I. VISION DE CONJUNTO
Practicarnente todas las reacciones del organismo estan mediadas por enzimas, que son protelnas catalizadoras que aumentan
la velocidad de las reacciones sin experimentar cam bios en el
proceso. Entre las much as reacciones biol6gicas que son enerqeticamente posibles, las enzimas canalizan selectivamente los
reactantes (denominados sustratos) en vias utiles, Las enzimas,
por tanto, dirigen todos los acontecimientos metab6licos. En este
capitulo se examina la naturaleza de esas molecules cataifticas
y su mecanismo de acci6n.

CH3- CHI

Cada enzima tiene asignado dos nombres. EI primero es su nombre recomendado, corto, c6modo para el uso cotidiano. EI segundo es el nombre sistematico mas completo, que se utiliza
cuando debe identificarse una enzima sin ambigOedad.
A. Nombre recomendado
Los nombres utilizados con mas frecuencia para las enzimas
tienen el sufijo -asa unido al sustrato de la reacci6n (p. ej.,
glucosidasa, ureasa, sacarasa) 0 a una descripci6n de la acci6n que realizan (p. ej., lactato deshidrogenasa y adenilato
ciclasa). [Nota: algunas enzimas conservan sus nombres triviales originales, que no dan ninguna pista sobre la reacci6n
enzlrnatica asociada, p. ej., tripsina y pepsina.)

Lactato
deshidrogenasa

"

2H

Lactato

Piruvato

2. Transferasas

Catalizan la transferencia de
grupos que contienen
C-, N- 0 P-, como:

H20

CH2-+ CH COO- + THF

t)
CH2 COO- + THF
' H
'+
Serina hidroximetilI
+
C' H'
0

NH3

NH3

transfel8sa

3. Hidrolasas

Glicina
Catalizan la escisi6n de enlaces
mediante la adici6n de agua,
como:

4. Liasas

Catalizan la escisi6n de los

enlaces C-C, C-S Yciertos
C-N, como:

CH3 - C +- COo-

--+

Piruvato
descarboxilasa

o"
Piruvato

Acetaldehido

5. Isomerasas
~

Catalizan la racemizaci6n
de los is6meros 6pticos
o geometricos, como:

?H3
-OOC} CH2-C-CoA

Metilmalonil-CoA

B. Nombre sistematico
6. Ligasas

En la nomenclatura sistematica.las enzimas se dividen en

seis clases principales (fig. 5-1), cada una con numerosos
subgrupos. Para una enzima dada, se une el sufijo -asa a
una descripci6n bastante completa de la reacci6n quirnica
catalizada, en la que se incluyen los nombres de todos los
sustratos; por ejemplo, lactato:NA[)+" oxidorreductasa. [Nota:
a cada enzima se Ie asigna tambien, un nurnero de clasificaci6n.) Los nombres sisternaticos son inequivocos e informativos, pero a menudo son demasiado complicados para
ser de uso general.

CH3 - C - coo- + NADH + H

COO- + NAD+

OH 2e-

Serina

II. NOMENCLATURA

Catalizan reacciones de
oxidorreducci6n, como:

1. Oxidorreductasas

~sfatos
CH3 C

~
MetilmalonllCoAmutasa

Piruvato

Succinil-CoA

Catalizan la formaci6n de enlaces

entre el carbono y el 0, el S y el N
acoplados a la hidr61isisde
de alta energia, como:

COO- + CO2

l!

-OOC-CH2CH2-C-CoA
0"

-OOC CH2 C - COO-

PiruVBto
carboxllasa
I
~
ATP
ADP + Pi

I!

0
Oxalacetato

Figura 5-1
Ejemplos de las seis principales clases
de la clasificaci6n internacional de enzimas.
THF, tetrahidrofolato.

53

p
54

5. Enzimas

sustrato~

{-~

Nomenclatura de enzimas potencialmente confusa: sintetasa (requiere ATP), sintasa (no requiereATP); fosfatasa (utiliza agua para retirar un grupo fosforilo), fosforilasa (usa Pi para romper un enlace y generar un producto
fosforilado); deshidrogenasa (NAD+/FAD actua como
aceptor de electrones en una reacclon redox), oxidasa
(EI O2 es aceptor de electrones pero no se incorporan
atornos de oxrgeno en el sustrato), oxigenasa (se incorporan uno 0 ambos atornos de oxfgeno en el sustrato).

III. PROPIEDADES DE LAS ENZIMAS

Figura 5-2
Representaci6n esquernatica de una
enzima con un sitio activo al que se
une a una molecule de sustrato.

Las enzimas son protefnas catalizadoras que aumentan la velocidad de una

reaccion qufmica y no se consumen durante la reaccion. [Nota: algunos ARN
pueden actuar como enzimas, normalmente catalizando la escision y sfntesis
de enlaces tostodlester. Los ARN con actividad cataiftica se denominan ribozimas y se encuentran con mucha menos frecuencia que los catalizadores
proteicos.]
A. Sitios activos

MITOCONDRIAS
Cicio de los ATC
Oxidaci6n de los acidos grasos
Oxidaci6n del piruvato

CITOSOL
Gluc6lisis
Via de las hexosas

Las rnoleculas enzimaticas contienen una bolsa 0 hendidura especiales

denominada sitio activo. EI sitio activo contiene cadenas laterales de
arninoacidos que participan en la union del sustrato y la catalisis (figura
5-2). EI sustrato se une a la enzima y forma un complejo enzima-sustrato
(ES). Se piensa que la union causa un cambio conformacional en la enzima (ajuste inducido) que permits la catalisis. EI complejo ES se convierte en un complejo enzima-producto (EP) que se disocia posteriormente en la enzima y el producto.
B. Eficiencia catalitica
Las reacciones catalizadas por una enzima son muy eficientes: transcurren a velocidades 103 a 108 veces mas rapidas que las reacciones no
catalizadas. EI numero de molecules de sustrato convertidas en producto por molecule de enzima por segundo se denomina nurnero de recambio, 0 kcat' Y suele ser de 102 a 104 S1
C. Especificidad
Las enzimas son muy especificas: interaccionan con un sustrato, 0 unos
pocos sustratos, y catalizan solo un tipo de reaccion quimica. [Nota: EI
conjunto de enzimas sintetizado en una celula determina que vias metabolicas se producen en esa celula.]
D. Holoenzimas

Sintesis de
ADN yARN

LlSOSOMA
Degradaci6n de
macrornolecutas complejas

Figura 5-3
Localizaci6n intracelular de algunas
vias bioqulmicas importantes.
ATe, acidos tricarboxflicos.

Algunas enzimas necesitan molecules que no son proteinas para realizar su actividad enzimatica, EI terrnino holoenzima se refiere a la enzima
activa con su componente no proteico, mientras que la enzima sin su mitad no proteica se denomina apoenzima y es inactiva. Si la mitad no proteica es un ion metallco como el Zrr' 0 el Fe2+,se denomina cofactor. Si
se trata de una molecule orqanica pequeria, se conoce como coenzima.
Las coenzimas que solo se asocian transitoriamente con la enzima se
denominan cosustratos. Los cosustratos se disocian de la enzima en un
estado alterado (p. ej., NAD+, v. paq. 101). Si la coenzima esta asociada
permanentemente con la enzima y vuelve a su forma original, se denomina grupo prostettco (p. ej., FAD, v. pag. 110). Las coenzimas normalmente proceden de las vitaminas. Por ejemplo, el NAD+ contiene niacina,
y el FAD contiene riboflavina (v. cap. 28).

pst

IV. Como actuan las enzimas

55

E. Regulaci6n
La actividad enzirnatica puede ser regulada, es decir, incrementarse 0
reducirse, de modo que la velocidad de la forrnacion del producto responde a las necesidades de la celula.
F. Localizaci6n

dentro de la celula

Muchas enzimas estan localizadas en orqanulos especfficos dentro de

la celula (fig. 5-3). Dicha compartirnentalizacion sirve para aislar el sustrato 0 el producto de la reacclon de otras reacciones competidoras.
Esto proporciona un ambiente favorable para la reacci6n y permite organizar las millares de enzimas presentes en la celula en vfas definidas
y con un objetivo.

IV. COMO ACTUAN LAS ENZIMAS

EI mecanismo de accion enzimatica puede considerarse desde dos perspectivas diferentes. La primera trata la catalisis en terrninos de cambios de
energfa que se producen durante la reacci6n, es decir, las enzimas proporcionan una vfa de reaccion alternativa, enerqeticarnente favorable, en
comparacion con la reaccion no catalizada. La segunda perspectiva describe como el sitio activo facilita qufmicamente la catalisis.
A. Cambios de energla que ocurren durante la reacci6n
Practicamente todas las reacciones qufmicas tienen una barrera de energfa que separa los reactantes de los productos. Esta barrera, denominada energfa libre de activaclon, es la diferencia de energfa entre la energfa de los reactantes y un intermediario de energfa elevada que aparece
durante la formacion del producto. Por ejemplo, en la figura 5-4 se muestran los cambios de energfa producidos durante la conversion de una rnolecula de reactante A en el producto B a medida que avanza a traves del
estado de transicion (intermediario de energfa elevada), T*:

T*

1. Energia libre de activaci6n: el pico de energfa que se muestra en

la figura 5-4 es la diferencia de energfa libre entre el reactante y
T*, donde el intermediario de energfa elevada se forma durante la
conversion del reactante en producto. Debido a la elevada energfa
libre de activacion, las velocidades de las reacciones qufmicas no
catalizadas suelen ser lentas.
2. Velocidad de reacci6n: para que las moleculas reaccionen, deben contener suficiente energfa como para superar la barrera de
energfa del estado de transicion. En ausencia de una enzima, solo
una pequefia proporcion de una poblacion de rnoleculas puede
poseer esa energfa suficiente como para alcanzar el estado de
transicion entre el reactante y el producto. La velocidad de la
reaccion viene determinada por el nurnero de dichas rnoleculas
energizadas. En general, cuanto menor sea la energfa libra de activaci6n, mayor es el nurnero de molecules con energfa suficiente
para atravesar el estado de transiclon y, por tanto, mas raplda es
la velocidad de la reaccion.
3. Via de reacci6n alternativa: una enzima permite que una reaccion
transcurra rapidarnente en las condiciones que prevalecen en la
cetula al proporcionar una vfa de reacci6n alternativa con una energfa libre de activacion mas baja (fig. 5-4). La enzima no cambia la

No hay diferencia en la enerqla libre

de la reacclon global (Ia enerqla de los
reactantes men os la energla de
los productos) entre las reacciones
catalizada y la no catalizada.

Energra libre
de activacion
(no catalizada)

Estado final
(productos)
Progreso de la reacci6n --~

Figura 5-4
Efecto de una enzima sobre la energfa
de activaci6n de una reacci6n.

F
56

5. Enzimas
energfa libre de los reactantes ni de los productos y, por consiguiente, no cambia el equilibrio de la reaccion (v. pag. 71). Sin embargo, acelera la velocidad con la cual se alcanza el equilibrio.

T*

1\.

Progreso de
la reacci6n

---+

B. Qufmica del sitio activo

EI sitio activo no es un receptaculo pasivo para la union del sustrato, antes bien, es una maquina molecular compleja que emplea mecanismos
qufmicos diversos para facilitar la conversion del sustrato en producto.
Una serie de facto res son responsables de la eficiencia catalftica de las
enzimas, entre ellos los siguientes:
1. Estabilizaci6n del estado de transici6n: el sitio activo a menudo actua
como una plantilia molecular flexible que enlaza el sustrato e inicia su
conversion a un estado de transicion, una estructura en la cual los
enlaces no son como los del sustrato 0 el producto (v.T* en la parte superior de la curva de la fig. 5-4). AI estabilizar el estado de transicion,
la enzima aumenta en gran medida la concentracion del intermediario reactivo que puede convertirse en producto y, por tanto, acelera la
reaccion,
2. Otros mecanismos: el sitio activo puede proporcionar grupos cataliticos que intensifican la probabilidad de que se forme el estado de transicion. En algunas enzimas, estos grupos pueden participar en catalisis acidobasicas generales en las cuales restos de arninoacidos
proporcionan 0 aceptan protones. En otras enzimas, la catalisis puede
implicar la forrnacion transitoria de un complejo covalente ES. [Nota: el
mecanismo de accion de la quimotripsina, una enzima intestinal de digestion proteica, abarca catalisis por base general, acido general y covalente. Una histidina del sitio activo de la enzima gana (base general)
y pierde (acido general) protones, debido al pK de la histidina en protefnas que estan proxirnas al pH tistoloqico. La serina en el sitio activo
forma un enlace covalente con el sustrato.]

ai
IBI
~

Progreso de ---+
la reacci6n

T*

A
iii.

-----r:::::====~p
Progreso de
la reacci6n

---+

3. Visualizaci6n del estado de transici6n: la conversion catalizada enzimaticarnente de un sustrato en un producto puede visualizarse
como algo similar a quitarle un jersey a un lactante que no coopera
(fig. 5-5). EI proceso tiene una energfa de activacion elevada porque
la unica estrategia razonable para quitar la prenda (practicamente
arrancandosela) requiere que la sacudida aleatoria dellactante haga
que los dos brazos queden completamente extendidos por encima
de la cabeza (una postura improbable). Sin embargo, podemos imaginar a uno de los padres actuando como una enzima, primero poniendose en contacto con ellactante (formando el ES), luego guiando los brazos dellactante a la posicion vertical extend ida, analoqa al
estado de translclon ES. Esta postura (conformacion) dellactante facilita la retirada del jersey, dando lugar al nino desnudo, que aquf representa el producto. [Nota: el sustrato unido a la enzima (ES) tiene
una energfa ligeramente menor que el sustrato no unido (S) y explica la pequefia depresion en la curva en ES.]

Figura 5-5
Esquema de los cam bios de energia
que se asocian a la formaci6n de
un complejo enzima-sustrato y la
subsecuente formaci6n de un estado
de transici6n.

V. FACTORES QUE AFECTAN A LA VELOCIDAD

DE LA REACCION
Las enzimas pueden aislarse de las celulas y sus propiedades estudiarse
en un tubo de ensayo (es decir, in vitro). Enzimas diferentes muestran respuestas diferentes a cambios en la concentracion del sustrato, la temperatura y el pH. En esta seccion se describen los facto res que influyen en la ve-

pi

V. Factores que afectan a la velocidad de la reaccion

57

locidad de reaccion de las enzimas. Las respuestas enzirnaticas a estos

facto res nos proporcionan pistas valiosas con respecto a como funcionan
las enzimas en las celulas vivas (es decir, in vivo).
A. Concentraci6n

Las enzimas que siguen la

cmetica de Michaelis-Menten
muestran una curva hiperb6lica.

del sustrato

1. Velocidad maxima: la tasa 0 velocidad de una reaccion (v) es el numere de molecules de sustrato que se convierte en producto por unidad de tiempo; la velocidad suele expresarse como urnol de producto
formado por minuto. La tasa de una reaccion catalizada enzimaticamente aumenta con la concentracion del sustrato hasta alcanzar una
velocidad maxima (Vmax) (fig. 5-6). La nlvelacion de la velocidad de la
reaccion a concentraciones elevadas de sustrato refleja la saturacion
con sustrato de todos los sitios de union disponibles en las molecules
de enzima presentes.
2. Forma hiperb61ica de la curva de la cinetica enzimatice: la mayorfa de
las enzimas muestran una clnetica de Michaelis-Menten (v. pag. 58),
en la cual, la representacion de la velocidad de reaccton inicial (vo)frente a la concentraclon de sustrato ([8]) es hiperbolica (de forma similar
ala curva de dlsoclacton de oxfgeno de la mioglobina, v. pag. 29). Por
el contrario, las enzimas alostericas no siguen la cinetica de MichaelisMenten y muestran frecuentemente una curva sigmoidea (v. paq. 62)
cuya forma es similar a la de la curva de disociacion de oxfgeno de la
hemoglobina (v. paq, 29).

Las enzimas
alostericas muestran
una curva sigmoidea.
[Sustratoj

Figura 5-6
Efecto de la concentraci6n del sustrato
sobre la velocidad de la reacci6n.

B. Temperatura
1. Aumento de la velocidad con la temperatura: la velocidad de la
reaccion aumenta con la temperatura hasta que se alcanza una velocidad maxima (fig. 5-7). Este aumento es consecuencia del mayor
nurnero de rnoleculas que tienen energia suficiente como para atravesar la barrera enerqetica y formar los productos de la reaccion.

Inactivaci6n de la
enzima por calor
c:

'0
'(3
U
III

e
.!!!
Q)

2. Disminuci6n de la velocidad con temperaturas mas elevadas: un aumento ulterior de la temperatura provoca una disminucton de la velocidad de la reacclon como consecuencia de la desnaturalizacion de
la enzima inducida por la temperatura (v. fig. 5-7).

"tI
"tI
III

"tI
'(3

~
80

La temperatura optima para la mayoria de las enzimas humanas esta comprendida entre 35C Y
40 C. Las enzimas humanas empiezan a desnaturalizarse a temperaturas por encima de 40C, pero
bacterias terrnofilas encontradas en las aguas termales tienen temperaturas optimas de 70C.

C. pH
1. Efecto del pH sobre la ionizaci6n del sitio activo: la concentracion de
H+ afecta a la velocidad de reaccion de varias formas. En primer lugar, el proceso catalitico suele precisar que la enzima y el sustrato
tengan grupos quimicos especificos en un estado ionizado 0 desionizado para interaccionar. Por ejemplo, la actividad catalitica puede
precisar que un grupo amino de la enzima este en la forma protonada (-NH3+)' A pH alcalino, este grupo se desprotona y la velocidad de
la reaccion, por tanto, disminuye.
2. Efecto del pH sobre la desnaturalizaci6n de la enzima: los valores extremos de pH tarnbien pueden inducir desnaturatizacion de la enzima,
porque la estructura de la rnolecula proteica cataliticamente activa depende del caracter ionico de las cadenas laterales de los amlnoacidos.

Temperatura (Oe)

Figura 5-7
Efecto de la temperatura sobre una
reacci6n catalizada enzirnaticamente.

5. Enzimas

58

3. EI pH optlmo varia para las diferentes enzimas: el pH al cual se atcanza la actividad enzimatlca maxima es diferente para las diferentes enzimas, y a menudo refleja la [W] a la cual funciona la enzima
en el organismo. Por ejemplo, la actividad maxima de la pepsina, una
enzima digestiva del est6mago, se encuentra a pH 2, mientras que un
ambiente tan acldo desnaturaliza otras enzimas, disefiadas para trabajar a pH neutro (fig. 5-8).

VI. ECUACION DE MICHAELIS-MENTEN

3

11

pH

Figura 5-8
Efecto del pH sobre las reacciones
catalizadas enzimaticarnente.

A. Modelo de reacci6n
Leonor Michaelis y Maude Menten propusieron un modelo simple que
explica la mayorfa de las caracterfsticas de las reacciones catalizadas
por enzimas. En este modelo, la enzima se combina irreversiblemente
con su sustrato para formar un complejo ES, que posteriormente rinde el producto y permite la regeneraci6n de la enzima libre. EI modelo,
en el que interviene una rnolecula de sustrato, se representa a continuaci6n:
kl
E

k2

+ S .;::=:t ES ~

+ P

k.l
donde

S es el sustrato
E es la enzima
ES es el complejo enzima-sustrato
P es el producto
k1' k., Y k2 son las constantes de velocidad

B. Ecuaci6n de Michaelis-Menten

Vmax

----------------------

Enzima 1

La ecuaci6n de Michaelis-Menten describe c6mo varia la velocidad de

la reacci6n en funci6n de la concentraci6n del sustrato:

_ Vmax [S]
Km + [S]

Vo -

donde
La gran Km de la
enzima 2 refleja una
baja afinidad de la
enzima p~r el sustrato.
La pequeiia Km de la
enzima 1 refleja una
gran afinidad de la
enzima p~r el sustrato.

Figura 5-9
Efecto de la concentraci6n de sustrato
en las velocidades de la reacci6n
catalizada por dos enzimas: enzima 1
con una Km pequefia y la enzima 2 con
una Km alta.

= velocidad de reacci6n inicial

V max = velocidad maxima
Km = constante de Michaelis = (k'1 +k2)/k1
[S] = concentraci6n del sustrato
Vo

Para obtener la ecuaci6n de velocidad de Michaelis-Menten se consideran las siguientes suposiciones:

1. Concentraciones relativas de E y S: la concentraci6n de sustrato ([Sl)
es mucho mayor que la concentraci6n de enzima ([El), de modo que
el porcentaje de sustrato total unido por la enzima en cualquier momento es pequefio.
2. Suposicion del estado estacionario: el [ES] no cambia con el tiempo (Ia suposici6n del estado estacionario), es decir, la velocidad de
formaci6n de ES es igual a la de descomposici6n de ES (a E + S y
a E + P). En general, se dice que un intermediario en una serie de
reacciones esta en estado estacionario cuando su velocidad de sintesis es igual a su velocidad de deqradacion.

p
VI. Ecuaci6n de Michaelis-Menten

59

3. Velocidad inicial: en el anal isis de las reacciones enzirnaticas se utilizan las velocidades de reacci6n iniciales (vo)' Esto significa que la
velocidad de la reacci6n se mide en cuanto se mezclan la enzima y
el sustrato. En este momento, la concentraci6n de producto es muy
pequefia y, por consiguiente, la velocidad de retrorreacci6n de P a 8
puede ignorarse.

A altas concentraciones de
sustrato ([5] Km) la
velocidad de reacci6n es del
orden de 0, es decir, es
constante e independiente
de la concentraci6n de sustrato.

C. Canclusianes impartantes sabre la cinetica de Michaelis-Menten

1. Caracteristicas de la Km: la Km (Ia constante de Michaelis) es caracteristica de una enzima y su sustrato concreto, y refleja la afinidad
de la enzima por ese sustrato. La Km es nurnericarnente igual a la
concentraci6n de sustrato a la cual la velocidad de la reacci6n es
igual a lf2Vmax' La Km no yarra con la concentraci6n de la enzima.
a. Km pequeiia: una Km numericarnente pequefia (baja) refleja una
afinidad elevada de la enzima por el sustrato, porque se necesita
una baja concentraci6n de sustrato para saturar la mitad de
la enzima, es decir, para alcanzar una velocidad que sea lf2Vmax
(fig. 5-9).
b. Km grande: una Km numerlcarnente grande (elevada) refleja una
afinidad baja de la enzima por el sustrato, porque se necesita
una concentraci6n elevada de sustrato para saturar la mitad de la
enzima.
2. Relacion de la velocidad con la concentracion de la enzima: la
velocidad de la reacci6n es directamente proporcional a la concentraci6n de la enzima a todas las concentraciones de sustrato. Por
ejemplo, si la concentraci6n de la enzima se divide por la mitad, la velocidad inicial de la reacci6n (vo). asl como la Vmax' se reducen a la
mitad del valor original.
3. Orden de la reacclon: cuando la [8] es mucho menor que la Km, la velocidad de la reacci6n es aproximadamente proporcional a la concentraci6n del sustrato (fig. 5-10). 8e dice entonces que la velocidad
de la reacci6n es de primer orden con respecto al sustrato. Cuando [8]
es mucho mayor que la Km, la velocidad es constante e igual a la Vmax'
La velocidad de la reacci6n es entonces independiente de
la concentraci6n del sustrato y se dice que la reacci6n es de orden
cero con respecto a la concentraci6n del sustrato (v. fig. 5-10).

1Vmax
C
'0

'0
o
~ Vmax

co -a;
2
'tl
'tl

co
'0

'tl

A bajas concentraciones
de sustrato ([5] Km) la
velocidad de reacci6n es
de primer orden, es decir,
es proporcional a la
concentraci6n de sustrato.

Figura 5-10
Efecto de la concentraci6n del sustrato
sobre la velocidad de la reacci6n para
una reacci6n catalizada por una enzima.

D. Representacion de Lineweaver-Burk
Cuando se representa la Vocon respecto a [8], no siempre es posible determinar cuando se ha alcanzado la Vmax' debido a la pendiente ascendente gradual de la curva hiperb61ica a concentraciones de sustrato elevadas. 8in embargo, si se representa vv; con respecto a 1/[8], se
obtiene una Ifnea recta (fig. 5-11). Esta qraflca, la representaci6n de Lineweaver-Burk (tam bien denominada como representaci6n doble recfproca) puede utilizarse para calcular la Km Y la Vmax' as! como para determinar el mecanismo de acci6n de los inhibidores enzimaticos.
1. La ecuaci6n que describe la representaci6n de Lineweaver-Burk es:

Km
= ---''-'--

V max [S]

+ ---

Vmax

donde la intersecci6n en el eje de las x es igual a -1 /Km Y la intersecci6n en el eje de las yes igual a 1Nmax'

Figura 5-11
Representaci6n de Lineweaver-Burk.

r
5. Enzimas

60

VII. INHIBICION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA

Cualquier sustancia que pueda disminuir la velocidad de una reacci6n catalizada por una enzima se denomina inhibidor. En general, los inhibidores
irreversibles se unen a las enzimas mediante enlaces covalentes. Los inhibidores reversibles se unen a las enzimas mediante enlaces no covalentes,
de modo que la diluci6n del complejo enzima-inhibidor provoca la disociaci6n del inhibidor unido reversiblemente y la recuperaci6n de la actividad
enzlrnatica, Los dos tipos de inhibici6n reversible encontrados con mas frecuencia son la inhibici6n competitiva y la no competitiva.
A. Inhibici6n competitiva
Este tipo de inhibici6n se produce cuando el inhibidor se une de manera reversible al mismo sitio que ocuparfa normal mente el sustrato y, por
consiguiente, compite con el sustrato por ese sitio.
1. Efecto sobre la Vmax: el efecto de un inhibidor competitive se invierte aumentando la [S]. A una concentraci6n de sustrato suficientemente elevada, la velocidad de la reacci6n alcanza la V max observada en ausencia del inhibidor (fig. 5-12).
2. Efecto sobre la Km: un inhibidor competitive aumenta la Km aparente para un sustrato determinado. Esto significa que, en presencia de
un inhibidor competitivo, se necesita mas sustrato para alcanzar

Y2Vmax
3. Efecto sobre la representacion de Lineweaver-Burk: la inhibici6n
competitiva muestra una representaci6n de Lineweaver-Burk caracterfstica en la cual las graficas de las relaciones inhibida y no inhibida cortan transversalmente en el eje yen 1Nmax (no se modifica la
V max)' Las reacciones inhibida y no inhibida muestran diferentes puntos de intersecci6n con el eje de las x, 10 que indica que la Km aparente aumenta en presencia del inhibidor competitive porque -1/Km se
ace rca a cero desde un valor negativo (v. fig. 5-12).

A
oVmsx
e,
c

La velocidad maxima, Vmsx,

es la misma en presencia de
un inhibidor competitivo.

---------------------------------------------------

'0

'uo

to

~
.!!!

Con inhibidor
competitivo

Q)

"0
"0

to

"0

'0

t
Km

Km

[S]
La constante de Michaelis, Km, aumenta
aparentemente en presencia de un inhibidor
competitivo.

Figura 5-12
A. Representaci6n del efecto de un inhibidor competitivo sobre la velocidad de la reacci6n 010) frente al sustrato ([S]). B. Representaci6n de Lineweaver-Burk de la inhibici6n competitiva de una enzima.

61

VII. Inhibici6n de la actividad enzirnatlca

4. Estatinas como ejemplos de inhibidores competitivos: este grupo

de antlhiperlipidemicos inhibe competitivamente la primera etapa
determinante de la sfntesis del colesterol. Esta reacci6n esta catalizada por la hidroximetilglutaril-CoA reductasa (HMG-CoA reductasa,
v. pag. 220). Las estatinas, como la atorvastatina y la pravastatina,'
son analoqos estructurales del sustrato natural de esta enzima y compiten eficazmente para inhibir la HMG-CoA reductasa. De este modo,
inhiben la sfntesis de novo del colesterol, reduciendo asf los niveles
plasrnaticos de colesterol (fig. 5-13).

HMG-CoA reductasa

B. Inhibici6n no competitiva

HO

Este tipo de inhibici6n se reconoce por su efecto caracterfstico sobre la

Vmax (fig. 5-14). Se produce inhibici6n no competitiva cuando el inhibidor
y el sustrato se unen a sitios diferentes de la enzima. EI inhibidor no
competitive puede unirse 0 bien a la enzima libre 0 bien al complejo ES,
impidiendo asf que se produzca la reacci6n (fig. 5-15).

"
c-oOH

HO
HaC

Y""C-O-L_cs-co

8
HMG-CoA
(sustrato)

1. Efecto sobre la Vmax: la inhibici6n no competitiva no puede evitarse

aumentando la concentraci6n de sustrato. Por tanto, los inhibidores no
competitivos disminuyen la V max aparente de la reacci6n.

HO
Pravastatina
(inhibidor competitivo)

2. Efecto sobre la Km: los inhibidores no competitivos no interfieren en

la uni6n del sustrato a la enzima. Por tanto, la enzima muestra la rnisma Km en presencia 0 en ausencia del inhibidor no competitive.

Figura 5-13

3. Efecto sobre la representacion de Lineweaver-Burk: la inhibici6n no

competitiva se diferencia tacilmente de la inhibici6n competitiva representando 1/vo frente a 1/[S] Y observando que la V max aparente
disminuye en presencia de un inhibidor no competitive, mientras que
la Km no se modifica (v. fig. 5-14).

La pravastatina compite con la

HMG-CoA por el sitio activo de
la HMG-CoA reductasa.

4. Ejemplos de inhibidores no competitivos: algunos inhibidores actuan

formando enlaces covalentes con grupos especfficos de las enzimas.
Por ejemplo, el plomo forma enlaces covalentes con las cadenas laterales sulfhidrilo de la cistefna de las protefnas. La uni6n del metal pe-

B
La velocidad maxima, Vm~x,
disminuye aparentemente en
presencia de un inhibidor no
competitivo.

() Vmb

Z.

Inhibidor no

r:::

'0
'()
0
(Q

~
.!l!
CI)

'C
'C
(Q

'C
'()
0

Vmb

Con inhibidor
no competitivo

VmAx

2
0
0

[8]

Km

La constante de Michaelis, Km, no se modifica

en presencia de un inhibidor no competitivo.

Figura 5-14
A. Representaci6n del efecto de un inhibidor no competitivo sobre la velocidad de la reacci6n (vo)frente al sustrato ([S)). B. Representaci6n de Lineweaver-Burk de la inhibici6n no competitiva de una enzima.

lVease el capitulo 21 de Lippincott's Illustrated Reviews:

Farmacologfa para una explicaci6n mas detallada de los farmacos para
tratar la hiperlipidemia.

62

5. Enzimas

Enzima (E)

sado muestra inhibici6n no competitiva. La ferroquelatasa, una enzima

que cataliza la inserci6n de Fe2+ en la protoporfirina (un precursor del
hemo, v. pag. 279), es un ejemplo de enzima sensible a la inhibici6n por
el plomo. Otros ejemplos de inhibici6n no competitiva son algunos insecticidas, cuyos efectos neurot6xicos son consecuencia de su uni6n
covalente al sitio catalftico de la enzima acetilcolinesterasa (una enzima que hidroliza al neurotransmisor acetilcolina). [Nota: aunque se forman enlaces covalentes, si la enzima activa puede ser recuperada, la
inhibici6n es reversible.)

Complejo ES

/",Inhibidor

c.

Complejo EI
(inactivo)

Complejo ESI
(inactivo)

Figura 5-15
Un inhibidor no competitivo se une
tanto a la enzima libre como al
complejo enzima-sustrato (ES).

Farmacos que actuan como inhibidores

enzimaticos

AI menos la mitad de los 10 tarrnacos dispensados con mas frecuencia

en Estados Unidos actuan como inhibidores enzimaticos. Por ejemplo,
los antibi6ticos ~-Iactamicos tan generalizados, como la penicilina y la
arnoxtcilina," actuan inhibiendo enzimas que intervienen en la sfntesis de
la pared bacteriana. Los Iarrnacos tambien pueden actuar inhibiendo
reacciones extracelulares. Esto es ilustrado por los inhibidores de la enzima conversora de la angiotensina (ECA), los cuales reducen la presi6n arterial bloqueando la enzima que escinde la angiotensina I para formar el potente vasoconstrictor angiotensina 11.3 Estos tarrnacos, entre los
que se cuentan el captopril, el enalapril y ellisinopril, provocan vasodilataci6n y una reducci6n consecutiva de la presi6n arterial.

VIII. REGULACION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA

----------------------~~~.

____ V_",!a~.

KO,5
[Sustrato]

La regulaci6n de la velocidad de reacci6n de las enzimas es esencial para

que un organismo coordine sus numerosos procesos metab6licos. Las tasas
de la mayorfa de las enzimas responden a cam bios en la concentraci6n del
sustrato, porque el nivel intracelular de muchos sustratos se encuentra en el
intervalo de la Km' Por tanto, un aumento de la concentraci6n del sustrato induce un aumento de la velocidad de la reacci6n, que tiende a devolver la
concentraci6n del sustrato a su nivel normal. Ademas, algunas enzimas con
funciones reguladoras especializadas responden a efectores alostericos 0 a
modificaci6n covalente, 0 muestran velocidades alteradas de la sfntesis (0
degradaci6n) de la enzima cuando se modifican las condiciones fisiol6gicas.
A. Regulacion de enzimas alostericas

Ko,5 Ko,5

Las enzimas alostericas estan reguladas por rnoleculas denominadas

efectores (tambien lIamados modificadores) que se unen de manera no
covalente a un sitio distinto del sitio activo. Estas enzimas suelen estar
compuestas por subunidades multiples y el sitio regulador (alosterico) al
que se une el efector puede estar localizado en una subunidad que no
es catalftica en sf misma. La presencia de un efector alosterico puede alterar la afinidad de la enzima por su sustrato 0 modificar la actividad catalftica maxima de la enzima, 0 am bas cosas. Los efectores que inhiben
la actividad de la enzima se denominan efectores neqativos, mientras
que los que aumentan la actividad enzimatica se conocen como efectores positives. Las enzimas alostericas catalizan frecuentemente la etapa determinante al principio de la via metab6lica.

KO,6

[Sustrato]

Figura 5-16

Efectos de los efectores negativos

o positivos
en una enzima
alosterica, A. Esta alterada la Vmax.
B. Esta alterada la concentraclon del
sustrato que proporciona la velocidad
sernimaxirna (KO,5).

2Veaseel capitulo32 de Lippincott's Illustrated Reviews: Farmacologia para

una explicaci6nde losinhibidoresde la sfntesisde la paredcelularbacteriana.
3Veaseel capftulo19 de Lippincott's Illustrated Reviews: Farmacologia para
una explicaci6nde los inhibidoresde la enzimaconvertidorade angiotensina.

VIII. Regulaci6n de la actividad enzirnatica

1. Efectores homotropos: cuando el propio sustrato actua como efector, se dice que el efecto es homotropo. Es mucho mas frecuente que
un sustrato alosterico funcione como efector positive. En tal caso, la
presencia de una molecule de sustrato en un lugar de la enzima intensifica las propiedades cataifticas de los otros lugares de uni6n del
sustrato, es decir, sus sitios de uni6n muestran cooperatividad. Estas
enzimas exhiben una curva sigmoidea cuando se representa la velocidad de reacci6n (vo) frente a la concentraci6n del sustrato ([S]),
fig. 5-16). Esto contrasta con la curva hiperb61icacaracterfstica de las
enzimas que siguen la cinetica de Michaelis-Menten, como se coment6 previamente. [Nota: el concepto de cooperatividad de uni6n del
sustrato es analoqo al de uni6n del oxfgeno a la hemoglobina.] Los
efectores positives y negativos de las enzimas alostericas pueden
afectar 0 bien a la Vmax 0 bien a la KO5, 0 a ambas (v. fig. 5-16).

63

",,,,--,
/

A~Bot(.

oI

''

D~E~F~G

Inhibici6n por retroalimentaci6n de una

via metab6lica.

B. Regulacion de las enzimas mediante modiflcaclon covalente

1. Fcsforilacion y desfostorltacion: las reacciones de fosforilaci6n son

catalizadas por una familia de enzimas denominadas proteincinasas
que utilizan el fosfato de adenosina (ATP) como un donante de fosfatos. Los grupos fosfato son retirados de las enzimas fosforiladas
por la acci6n de fosfoproteinfosfatasas (fig. 5-18).
2. Respuesta de las enzimas a la fosforilaclon: dependiendo de la enzima especffica, la forma fosforilada puede ser mas 0 menos activa que
la forma no fosforilada. Por ejemplo, la fosforllaclon de la g/uc6geno
fosfori/asa (una enzima que degrada el glucogeno) aumenta su actividad, mientras que la adicion de fosfato a la g/uc6geno sintasa (una enzima que sintetiza el glucogeno) disminuye su actividad (v. paq. 132).
C. lnduccion y represlon de la sintesis enzimatica
Los mecanismos reguladores que se acaban de describir modifican la actividad de las molecules de enzima existentes. Sin embargo, las celulas
tambien pueden regular la cantidad de enzima presente alterando su velocidad de degradaci6n 0, mas a menudo, su velocidad de sfntesis. EI aumento (inducci6n) 0 la disminuci6n (represi6n) de la sfntesis de enzimas
induce una alteraci6n en la poblaci6n total de sitios actives. Las enzimas sujetas a regulaci6n de sfntesis suelen ser las que se necesitan en
una sola etapa del desarrollo 0 en condiciones fisiol6gicas seleccionadas.
Por ejemplo, niveles elevados de insulina como consecuencia de una glu-

Figura 5-17

2. Efectores heterotropos: el efector puede ser diferente del sustrato, en

cuyo caso el efecto se dice que es heter6tropo. Por ejemplo, cons ideremos la retroinhibici6n mostrada en la figura 5-17. La enzima que
convierte 0 en E tiene un sitio alosterico al que se une el producto final, G. Si la concentraci6n de G aumenta (p. ej., porque no se utiliza
con la misma rapidez con la que se sintetiza), se inhibe normalmente la primera etapa irreversible exclusiva de esa vfa. La retroinhibici6n proporciona a la celula cantidades apropiadas de un producto
que necesita mediante la regulaci6n del flujo de las moleculas de sustrato a traves de la via que sintetiza dicho producto. Los efectores heter6tropos son frecuentes, por ejemplo, la enzima glucoiftica tostofructocinasa-1 (PFK-1) es inhibida alostericamente por el citrato, que
no es un sustrato de la enzima (v. paq. 99).

Muchas enzimas pueden ser reguladas mediante modificaci6n covalente, 10mas frecuente, mediante la adici6n 0 la extracci6n de grupos fosfato de residuos de serina, treonina 0 tirosina especfficos de la enzima.
La fosforilaci6n de la protefna se reconoce como una de las vias principales por medio de las cuales se regulan los procesos celulares.

ATP~ADP

Enzima

Enzima

OH
I~I

OPO~2-

HP04

Fosioproteinfosfatasa'

H20

Figura 5-18
Modificaci6n covalente mediante la
adici6n y retirada de grupos fosfato.

r
64

5. Enzimas
ACONTECIMIENTO REGULADOR

EFECTOR HABITUAL

RESULTADOS

TIEMPO NECESARIO PARA EL CAMBIO

Inhibici6n por el sustrato

Sustrato

Cambio en la velocidad (vo)

Inmediato

Inhibici6n por el producto

Producto

Cambio en la Vmax 0 la Km

Inmediato

Control alosterico

Producto final

Cambio en la Vmax 0 la KO.5

Inmediato

Modificaci6n covalente

Otra enzima

Cambio en la Vmax 0 la Km

De inmediato a minutos

Sfntesis 0 degradaci6n
de laenzima

Hormona 0
metabolito

Cambio en la cantidad
de enzima

De horas a dias

Figura 5-19
Mecanismos de regulaci6n de la actividad enzlmatica. [Nota: La inhibici6n por producto final de la vfa tambien se conoce como
retroinhibici6n.]

cemia elevada provocan un aumento de la sfntesis de las enzimas fundamentales que intervienen en el metabolismo de la glucosa (v.paq, 105).
Por el contrario, las enzimas en uso constante no suelen estar reguladas
por alteracion de su velocidad de sfntesis. Las alteraciones de los niveles
enzimatlcos como consecuencia de lnduccion 0 represion de la sfntesis
proteica son lentas (de horas a dlas), en cornparacion con los cambios de
la actividad enzimatica regulados de manera alosterica 0 covalente, que
ocurren en cuestion de segundos a minutos. En la figura 5-19 se resumen
las vlas comunes de requlacion de la actividad enzimatlca.

IX. ENZIMAS EN EL DIAGNOSTICO CLiNICO

Las enzimas plasmaticas pueden clasificarse en dos grupos principales. En
primer lugar, un grupo relativamente pequefio de enzimas son segregadas activamente a la sangre por ciertos tipos de celulas. Por ejemplo, el hfgado segrega cirnoqenos (precursores acnvos) de las enzimas que intervienen en la
coaqulacion sangufnea. En segundo lugar, se libera un gran nurnero de especies enzirnaticas de las celulas durante el recambio celular normal. Estas enzimas funcionan casi siempre dentro de la celula y no tienen uso fisioloqico en
el plasma. En las personas sanas, los niveles de estas enzimas son bastante
constantes y representan un estado estacionario en el cual su tasa de liberacion al plasma desde las celulas dariadas se equilibra con una velocidad igual
de retirada de la protefna enzirnatica del plasma. EI aumento de la concentracion plasrnatica de esta enzima puede indicar una lesion tisular (fig. 5-20).

Recambio celular normal

fa

Necrosis celular como consecuencia

de enfermedad 0 traumatismo

Figura 5-20
Liberaci6n de enzimas de celulas normales y enfermas

que han sufrido alguna lesi6n.

IX. Enzimas en el diagn6stico clfnico

65

EI plasma es la parte liquida, no celular, de la sangre. En los anal isis de laboratorio de determinaci6n
de la actividad enzimatloa se utiliza mas a menudo
el suero, que se obtiene mediante centrifugaci6n de
la sangre completa despues de dejar que coagule.
EI plasma es un liquldo fisiol6gico, mientras que el
suero se prepara en el laboratorio.

A. Alteraclon de los niveles plasrnaticos

en la enfermedad

de enzimas

Muchas enfermedades que causan lesi6n tisular provocan un aumento

de la liberaci6n de enzimas intracelulares al plasma. Las actividades de muchas de esas enzimas se determinan sistematica mente con
fines diagn6sticos en enfermedades de los tejidos cardlaco, hepatico,
muscular esqueletico y de otros tejidos. EI nivel de la actividad enzirnatica especffica en el plasma suele mostrar relaci6n con la extension de
la lesion tisular, Por tanto, para evaluar el pron6stico del paciente, a menudo es util determinar el grado de elevaci6n de una actividad enzirnatlca concreta en el plasma.
B. Enzimas plasrnaticas como herramientas

Isoenzimas

y enfermedades

cArODO (-)

Direccion de la miqracion

diaqnosticas

Algunas enzimas muestran una actividad relativamente elevada tan s610

en uno 0 en unos pocos tejidos. La presencia de niveles elevados de esas
enzimas en el plasma refleja, pues, una lesi6n en el tejido correspondiente. Por ejemplo, la enzima alanina aminotransferasa (ALT,v. pag. 251)
es abundante en el hfgado. La apariclon de niveles elevados de esta enzirna en el plasma sefiala una posible lesion del tejido hepatico. [Nota: La
medici6n de ALT es parte de la baterfa de pruebas del funcionamiento
hepatico.] Aumentos en los niveles plasrnaticos <;Ielas enzimas con una
distribuci6n tisular amplia proporcionan una indicacicn menos especffica
del sitio de lesi6n celular y lirnita su valor diagn6stico.

c.

ANODO(+)

CK1

CK2

1. Estructura cuaternaria de las isoenzimas: muchas isoenzimas contienen diferentes subunidades en diversas combinaciones. Por ejemplo, la creatina cinasa (CK) aparece como tres isoenzimas. Cada
isoenzima consiste en un dfmero compuesto por dos polipeptidos
(denominados subunidades By M) asociados en una de tres cornbinaciones: CK1 = BB, CK2 = MB Y CK3 = MM. Cada isoenzima rnuestra una movilidad electroforetlca caracterfstica (v.fig. 5-21). [Nota: virtualmente toda la CK en el encefalo es la isoforma BB, mientras que

0
Origen

Las isozimas de la CK estan

cargadas negativamente
y mig ran hacia el anodo.

cardfacas

La mayorfa de las isoenzimas (tarnbien lIamadas isozirnas) son enzimas

que catalizan la misma reacci6n. Sin embargo, no tienen necesariamente las mismas propiedades fisicas debido a diferencias qeneticamente
determinadas en la secuencia de aminoacidos, Por esta raz6n, las isoenzimas pueden contener cantidades diferentes de aminoacidos con
carga y, por consiguiente, pueden separarse unas de otras mediante
electroforesis (fig. 5-21). Organos diferentes contienen a menudo proporciones caracterfsticas de isoenzimas diferentes. EI patr6n de isoenzimas encontrado en el plasma puede, por consiguiente, servir como un
medio de identificaci6n del punto de lesi6n tisular. Por ejemplo, normalmente se determinan los niveles plasmaticos de creatina cinasa (CK) en
el diagn6stico del infarto de miocardio. Son especial mente utiles cuando el electrocardiograma es diffcil de interpretar, como cuando ha habido
episodios previos de cardiopatfas.

CK3

Infarto de
miocardio

Normal

Figura 5-21
Estructura de subunidades, movilidad
electroforetica y actividad enzimatica
de las isoenzimas de la creatina cinasa
(CK).

5. Enzimas

66

en el musculo esqueletico es MM. En el rnusculo cardfaco, alrededor

de un tercio es MB y el resto es MM.]
2. Diaqnostico del infarto de miocardio: en el dlaqnostico de infarto de
miocardio se utiliza la rnedlcion de los valores sangufneos de protefnas
con especificidad cardfaca porque el musculo rnlocardico es el unlco
tejido que contiene mas del 5 % de la actividad CK total en forma de la
isoenzima CK2 (MB). La aparicion de esta isoenzima hfbrida en el plasma es practicamente especffica del infarto de miocardio. Oespues de
un infarto agudo del miocardio, esta isoenzima aparece aproximadamente de 4 h a 8 h tras el comienzo del dolor toracico, alcanza un maximo de actividad aproximadamente a las 24 h Y vuelve a su valor basal despues de 48 h a 72 h (fig. 5-22). La troponina T y la troponina I
son protefnas reguladoras que intervienen en la contractilidad del rniocardio. Se liberan en el plasma en respuesta a la lesion cardfaca. La troponina cardfaca I (cTnl) es muy sensible y especffica para la lesion del
tejido cardfaco. Aparece en el plasma al cabo de 4 h a 6 h despues de
un infarto de miocardio, alcanza su valor maximo en 8 h a 28 h Y se
mantiene elevada durante 3 a 10 dfas. Asf, los niveles sericos elevados
de las troponinas tienen un mayor valor pronostico de acontecimientos
adversos en la angina inestable 0 el infarto de miocardio que el ensayo convencional de CK2.

x.
Figura 5-22
Aparicion de la creatina cinasa (CK)
y de troponina cardlaca en el plasma
despues del infarto de miocardio.

RESUMEN DEL CAPITULO

Las enzimas son catalizadores proteicos que aumentan la velocidad de

una reaccion qufmica reduciendo la energfa del estado de transicion
(fig. 5-23). Las enzimas no se consumen durante la reaccion que catalizan.
Las molecules enzirnaticas contienen un bolso 0 hendidura especiales que se
denomina sitio activo. EIsitio activo contiene cadenas laterales de arninoacidos que participan en la union del sustrato y la catalisis. EI sustrato se une al
sitio activo formando un complejo enzima-sustrato (ES). Se piensa que la
union causa un cambio conformacional en la enzima (ajuste inducido) que permite la catalisls. EI ES se convierte en enzima-producto (EP), que posteriormente se disocia en la enzima y el producto. Una enzima permite que una reaccion transcurra con rapidez en las condiciones que prevalecen en la celula
proporcionando una via de reacci6n alternativa con una menor energia Iibre de activaci6n. La enzima no cambia las energfas libres de los reactantes
ni de los productos y, por consiguiente, no cambia el equilibrio de la reacclon.
La mayorfa de las enzimas muestran cineticas de Michaelis-Menten y una
representacion de la velocidad inicial de la reacci6n (vo) frente a la concentraci6n del sustrato ([5)) tiene una forma hiperb61ica similar a la curva
de disociacion del oxfgeno de la mioglobina. Cualquier sustancia que pueda
disminuir la velocidad de dichas reacciones catalizadas enzirnaticarnente se
denomina inhibidor. Los dos tipos mas comunes de inhibicion reversible son la
competitiva (que aumenta la Km aparente) y la no competitiva (que reduce la Vmax aparente). Por el contrario, las enzimas alostericas de subunidades multiples muestran a menudo una curva sigmoidea de forma similar
a la curva de dlsociaclon del oxfgeno de la hemoglobina. Tfpicamente catalizan las etapas determinantes (Iimitantes de la velocidad) de una vfa metabolica. Las enzimas alostericas son reguladas por moleculas denominadas
efectores (tambien modificadores) que se unen de manera no covalente a
un sitio distinto del sitio activo. Los efectores pueden ser positivos (aceleran
la reaccion catalizada por la enzima) 0 negativos (disminuyen la velocidad de
la reacclon). Un efector alosterico puede alterar la afinidad de la enzima por su
sustrato 0 modificar la actividad catalltica maxima de la enzima, 0 ambas cosas. Las enzimas tarnbien pueden ser reguladas por moolticacion covalente,
y por cambios en la velocidad de sfntesis 0 de deqradacion. Las enzimas tienen valor diaqnostico y terapeutico en medicina.

X. Resumen del capitulo

67

Enzimas

Oatallsis

son

Velocidad de las reacciones enzimaticas

se estudia utilizando

suele verse influida por

Modelos de reacci6n

Concentraci6n de enzima
Temperatura
Coenzimas, cofactores

porejemplo

que contienen

E + S - ES - E + P

Uno 0 varios
sitios activos
que son una hendidura
o grieta en la superficie
de la enzima
complementarios
a la estructura
del sustrato.

que induce

t
Ecuaciones ctneticas
porejemplo

Ecuaci6n de
Michaelis-Menten
Vmax [S]
vo=..,,.:.:..:.::.:.:....:;~
Km + [5]

I .
que pertniten

t
La union del sustrato

que induce

pH
Concentraci6n de sustrato
Modificaci6n covalente
Inhibidores
c/asificados como
Competitivo

que predice
Como los cambios en la [5]
afectan a la vo
por ejemplo, para Michaelis-Menten:

una representacion de [5]

frente a Voes hiperbolica.

cuando

Cuando [S} es mucho

mayor que Km, la
velocidad de la reacclon
es independiente de [5].

que induce

que se denomina

[ Mayores tasas de S - P ~

Enzimas alostericas
I
amenudo

5in cambio en el
equilibrio de la
reaccion

Estim compuestas por

multiples subunidades.
Catalizan el paso
determinante.
Unen cooperativamente
el sustrato.
Muestran una curva
sigmoidea cuando Vose
representa frente a [S].
Cuando [5] es inferior a
Km, la velocidad de la
reaccion es
proporcional a [5].

Unen efectores alostericos.

I

10que induce

que se denomina
que induce

Cambios en la Vmax, afinidad por

el sustrato (Ko,s) 0 ambas cosas

Figura 5-23
Mapa de conceptos fundamentales sobre las enzimas. E, enzima; Km, constante de Michaelis; Ko.s, concentraci6n de sustrato que
da la mitad de la velocidad maxima; P, producto; S, sustrato, [S), concentraci6n de sustrato; Vmax, velocidad maxima; Yo. velocidad
inicial.

68

5. Enzimas

Preguntas de estudio

MM
MM

Elija LA respuesta correcta.

Paciente
5.1 En los casos de envenenamiento con etilenglicol y su acidosis metab61ica caracteristica, el tratamiento consiste en
la correcci6n de la acidosis, la eliminaci6n de cualquier resto de etilenglicol y la adrnlnlstraclon de un inhibidor de la
alcohol deshidrogenasa (ADH, alcohol:NAD+ oxidorreductasa), la enzima que oxida el etilenglicol a los acidos orqanicos que provocan la acidosis. EI etanol suele ser el inhibidor que se administra para tratar el envenenamiento por
etilenglicol; actua inhibiendo competitivamente la ADH.
Como inhibidor competitivo, el etanol
A.
B.
C.
D.
E.

aumenta la Kmaparente sin afectar a la Vmax'

disminuye la Kmaparente sin afectar a la Vmax'
aumenta la Vmaxaparente sin afectar a la Km'
disminuye la Vmaxaparente sin afectar a la Km'
disminuye a la vez la Vmaxaparente Y la Km aparente.

5.2 La ADH precisa NAD+ para su actividad catalitica. En la

reacci6n catalizada por la ADH, un alcohol es oxidado a aldehido conforme el NAD+ es reducido a NADH y se dlsocia de la enzima. EI NAD+ funciona como un/una

A. apoenzima.
B.
C.
D.
E.

coenzima-cosustrato.
coenzima-grupo prostetico.
cofactor.
efector heter6tropo.

5.3 Un hombre de 70 afios fue ingresado en urgencias con antecedentes de 24 h de dolor toracico. Se mtdio la actividad
serica de la creatina cinasa (CK) en el ingreso (dia 1) Y una
vez al dia (fig. 5-24). EI dia 2 despues de su ingreso experiment6 arritmia cardlaca, que consigui6 controlarse mediante tres ciclos de cardioconversi6n electrica, los dos ultimos a la energia maxima. [Nota: la cardloconverslon se
realiza colocando dos paletas, de 12 cm de diarnetro, en
contacto firme con la pared toracica y aplicando un corto
voltaje electrlco.] Se restableci6 el ritmo cardiaco normal.
En los siguientes dias no hubo recurrencia de la arritmia. EI
dolor toraolco remiti6 y fue dado de alta el dia 10. 6Que
afirmaci6n de las siguientes es mas compatible con los datos presentados?
A. EI paciente tuvo un infarto de miocardio 48 h a 64 h antes del ingreso.
B. EI paciente tuvo un infarto de miocardio el dia 2.
C. EI paciente tuvo una angina antes del ingreso.
D. EI paciente tuvo lesion en el rnusculo esqueletico el
dia 2.
E. Los datos no permiten sacar conclusi6n alguna relativa
a un infarto de miocardio ni antes ni despues de su ingreso en el hospital.

Paciente

Normal

En el momento
del ingreso
(dia 1)

Normal

12 h despues de la
cardioconversi6n
(dia 2)

Figura 5-24
Niveles sericos de creatina cinasa.

Respuesta correcta = A. En presencia de un

inhibidor competitlvo, una enzima parece tener
una menor afinidad por el sustrato, pero a medida que se aumenta el nivel de sustrato,
la veloeidad observada se acerca a la Vmax'
tV. parte B de figs. 5-12 y 5-14 para comparar
los efeetos de los inhibidores competitivos y no
eompetitivos.)

Respuesta correcta = B. Las coenzimascosustratos son rnoleculas orqanicas pequefias que se asocian transitoriamente con una
enzima y dejan la enzima modificada. Las
coenzimas-grupos prostetlcos son moleculas
orqanicas pequefias que se asoeian permanentemente con una enzima y que la enzima
devuelve a su estado original. Los cofactores
son iones rnetahcos. Los efectores heterotropos no son sustratos.

Respuesta correcta = D. EI patron de la isoenzima CK en el momento de su ingreso mostro

una etevaclon de la isozima MB, 10que indica
que el paeiente habia experimentado un infarto de miocardio en las 12 h a 24 h anteriores.
[Nota: 48 h a 64 h despuss de un infarto, la isozima MB habrfa vueIto a sus valores normales.]
EI dia 2, 12 h despuss de las cardioconversiones, la isozimas MB habra disminuido, 10que
indica ausencia de dano ulterior al coraz6n. Sin
embargo, el paciente mostr6 un aumento de la
isoenzima MM despues de la cardioversi6n.
Esto sugiere dario al musculo, probablemente
como consecuencia de las contracciones musculares convulsivas causadas por la cardioversi6n repetida. La angina es normalmente consecuencia de espasmos transitorios de la
vasculatura del coraz6n y no cabrfa esperar
que indujera muerte tisular que provocara un
aumento de la creatina cinasa serlca.