Manejo de microorganismos y medios de cultivo

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1. INTRODUCCIN

Manejo de microorganismos y
medios de cultivo
Nez Jorge1; Ordez Gabriela2; Quinaluisa Jhon3
1

Escuela Politcnica Nacional, Facultad de Ingeniera Qumica y

Agroindustria, Quito, Ecuador

Resumen: El crecimiento de los microorganismos

depende de varios factores, entre ellos el manejo,
temperatura y medios de cultivo que se utilicen,
por lo cual, los objetivos de esta prctica son:
familiarizarse y aplicar normas de higiene y
tcnicas de manejo de microorganismos,
determinar la temperatura y medios de cultivo
ptimos para cada tipo de microorganismo, as
como algunas caractersticas morfolgicas; para
esto se inocul tres tipos de microorganismos:
Aspergillus Niger (hongo), levadura de pan y
staphylococus (bacteria) en tubos que contenan
diferentes medios de cultivo: Malta-Agar,
CZAPEC y PCA utilizando tcnicas de asepsia
para evitar la contaminacin, se expuso stos a
temperatura ambiente y a 30C durante
aproximadamente una semana. Los resultados
obtenidos muestran que no se produjo
contaminacin ya que los microorganismos se
desarrollaron normalmente; los hongos crecieron
mejor en Malta-Agar tanto a temperatura ambiente
como a 30 C, mientras que las levaduras crecieron
en PCA a ambas temperaturas, a diferencia de las
bacterias que no se desarrollaron en ninguno de
los medios y temperaturas establecidas. As mismo,
se determin a simple vista las caractersticas de
los microorganismos; los hongos presentaban dos
colores: negro y blanco, y las levaduras tenan una
coloracin amarilla con aspecto lechosa e inodora.
Palabras clave: microorganismos, inocular, medio
de cultivo, crecimiento, temperatura, asepsia.

Management of microorganisms
and culture media

Abstract: The growth of microorganisms

depends on several factors, among them the
management, temperature and culture media
used, therefore, the objectives of this practice
are: Familiarize and apply standards of hygiene
and management techniques of microorganisms,
determine the temperature and culture media
optimal for each type of organism, as well as
morphological features; for this is inoculated
three types of microorganisms: Aspergillus
niger (fungus), yeast and staphylococcus
(bacteria) in tubes containing different culture
media: Malta-Agar, CZAPEC and PCA using
techniques of asepsis to avoid contamination,
exposed them to ambient temperature and 30C
for approximately one week. The results
obtained show that there was no contamination
since the microorganisms were developed
normally; fungi grew best in Malta-Agar both
at room temperature and at 30 C, while the
yeast grew in PCA both temperatures, unlike
bacteria that were not developed in any of the
culture media and temperatures laid down. It is
determined at a glance the color and odour of
the
microorganisms.
Likewise,
the
characteristics of the microorganisms were
determined at a glance; fungi showed two
colors: black and white, and yeast had a yellow
coloration, sticky and odorless.
Keywords: microorganisms, inoculated, culture
media, growth, temperature, asepsis.
Es importante conocer los principios bsicos en el
manejo de los microorganismos para alcanzar un
correcto aprendizaje de la microbiologa. Adems,
conocer el uso de los materiales y manipular
correctamente los mismos, ya que el conocimiento
de asepsia y trabajo ordenado generan buenos
resultados al final de la prctica. (Toro, 2005).
No es posible estudiar los microorganismos de
forma individual debido a su tamao, por lo que se
usa medios nutritivos artificiales de acuerdo al
microrganismo, en donde crecen con una alta
velocidad y generan poblaciones grandes. En esta
forma se logra manejar y realizar los estudios
deseados (Moran, 2004).

Manejo de microorganismos y medios de cultivo

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Los microorganismos ms pequeos son las

bacterias y estas son capaces de crecer y
desarrollarse dentro del medio que se encuentren,
presentan tres tipos de formas, esfricas cilndricas
y bacilos. Los hongos son eucariotas, unos son
filamentosos denominados mohos y otros que son
unicelulares llamadas levaduras (Garca, 2008).
2. METODOLOGA
2.1 Marco Terico
Como se dijo previamente las bacterias son los
organismos ms pequeos procariotas, en su parte
externa tienen una pared celular rgida que esta
alrededor de la membrana citoplasmtica que
protege a la bacteria de daos mecnicos. La
mayora se reproducen asexualmente, de todos los
factores necesarios para el crecimiento de las
bacterias el de mayor influencia es la temperatura,
ya que cada bacteria requiere una temperatura
mnima de crecimiento (Garca, 2008).
Los hongos filamentosos que son los mohos
poseen tallos compuestos de filamentos largos
denominados hifas. Las levaduras que son hongos
unicelulares sin filamentos tienen una forma
esfrica u oval, las levaduras por lo general son
encontradas en las frutas y hojas como una capa de
polvo blanco (Tortora, 2007).
Inculo es el material microbiano que se usa para
sembrar o inocular un frasco de cultivo, se realiza
con un asa que se esteriliza en una llama antes de
ser usada. Aqu se encuentra el medio de cultivo
que es un sustrato o solucin de nutrientes
necesarios para el desarrollo de un determinado
microorganismo (Roger, 2000).
Los medios de cultivo se clasifican segn su
consistencia en lquidos, slidos y semislidos
adems segn su origen pueden ser: naturales los
cuales son preparados con sustancias naturales
animales o vegetales, sintticos que contienen
composiciones qumicas definidas y semisintticos
que son sintticos aadidos un extracto orgnico de
crecimiento (Torres, 2006).
En la Tabla 1 se presentan los componentes de los
3 diferentes medios de cultivo de los
microorganismos por litro de medio producido.
Tabla 1. Componentes de los medios Malta Agar
(MA), Plate Count Agar (PCA), y CZAPEC.

Medio de
cultivo

PCA
(compone
ntes /litro
sol)
Triptonas
5g
Extracto
de
levadura
2.5 g

Malta
agar
(compone
ntes /litro
sol)
Extracto
de malta
30g

CZAPEC
(compone
ntes /litro
sol)
Nitrato
sdico
2,00 g

Cloruro
potsico
0,50 g
Sulfato
component
Glucosa 10
ferroso
es
g
0,01 g
Fosfato
dipotsico
Agar
Agar 15 g 1,00 g
Sacarosa
bacteriolg
30,00 g
ico 12 g
Agar agar
12,00 g
pH
5,5
5,5 6,8 +-0,2
Recuperado de: http://www.biokar-diagnostics.com/

Los recipientes de cultivo deben estar inicialmente

estriles y despus de la introduccin del
microorganismo
hay
que
evitar
las
contaminaciones externas, para evitar la
contaminacin de los tubos se usa generalmente
tapones de algodn. Adems, el exterior del
recipiente puede contaminarse y es posible que
cuando se abra se contamine el interior, es por esta
razn que se pasa el orificio del tubo por la llama
del mechero despus de retirar el tapn y antes de
cerrarlo nuevamente (Roger, 2000).
2.2 Metodologa
En esta prctica se usaron tres microorganismos un
hongo: aspergillus niger, una levadura: levadura
de pan y una bacteria: staphylococcus. Los cuales
se sembraron a temperatura ambiente y
temperatura de 30C, en tres medios de cultivos
distintos: malta-agar,CZAPEC y PCA. Para esto se
esterilizo el asa en el mechero hasta llegar al rojo
vivo, despus se enfri la misma en un medio
estril para evitar quemar a los microorganismos.
Se tom el microorganismo y posteriormente se lo
inoculo en el medio de cultivo tapando
inmediatamente el recipiente, a cada tubo se lo
flameaba antes de tomar o colocar el
microrganismo para evitar contaminacin. Este
proceso se realiz para cada microorganismo antes

Manejo de microorganismos y medios de cultivo

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mencionado. Finalmente se dej transcurrir una

semana para observar los resultados de crecimiento
de cada uno de los microorganismos.

percibi la presencia de crecimiento de levaduras,

por lo que posiblemente este medio no estuvo
adecuado con los nutrientes necesarios para el
crecimiento del tipo de levadura de pan. Para
3. RESULTADOS Y DISCUSIN
ambas temperaturas, el crecimiento de levaduras
fue relativamente el mismo, es decir no afecto la
En la Tabla 2, se presentan los datos cualitativos diferencia de temperaturas para el mismo, esto se
referentes al crecimiento de los diferentes debe a que el rango de temperaturas adecuado para
microorganismos a temperatura ambiente y 30C, el crecimiento de levaduras se encontr entre la
siendo el valor 3 aquel que refleja la mejor temperatura ambiente y los 30 C, como se
apreciacin de crecimiento y 0 donde no se haya presenta en el documento de BIOKAR, 2016.
percibido algn indicio de crecimiento.
Con respecto a las bacterias, como se observa en la
Tabla 1, no se percibi crecimiento alguno de
Tabla 2. Valores cualitativos del crecimiento de microorganismo como se observa en la Figura 2, a
los diferentes microorganismos a las 2 pesar de que PCA y MA, son los medios adecuados
temperaturas de prueba para los 3 medios de para el desarrollo de bacterias, en especial el PCA,
crecimiento utilizados.
ya que el extracto de malta es el ms adecuado para
nutrir bacterias Gram positivas siendo el
estafilococo una de ellas, por lo que existen varios
Como se observa en la MEDIO
factores que pudieron
CZAPEC
PCA
MA
T
T
T
Tabla 1, para la
impedir
el
TEMPERATURA
amb.
30
C
amb
30
C
amb.
30
C
levadura se apreci un
crecimiento de las
LEVADURA
0 0 0 0 3 3 3 3 1 1 1
1 bacterias como son,
crecimiento
1 1 1 1 2 2 2 2 3 3 3
3 una
satisfactorio
en
el HONGO
incorrecta
1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
0
medio PCA para ambas BACTERIA
inoculacin, aunque
temperaturas, donde se
no se contamin el
observ una coloracin amarilla un poco lechosa y medio, es posible que no se haya podido implantar
sin olor caracterstico como se observa en la Figura la bacteria, tambin pudo requerirse un medio de
1, mientras que para el medio CZAPEC no existi crecimiento selectivo como el Estreptococo 110
indicio de crecimiento microbiano. Respecto al Agar, que adems de contener peptonas, esta
medio de Malta Agar se apreci un crecimiento enriquecido con fosfato dipotsico D- manitol, y
menor de las levaduras que en el PCA. El PCA establecido con un pH adecuado de 7.0, totalmente
tiene una composicin que brinda un ambiente adecuado para proporcionar los nutrientes que
adecuado para el crecimiento de las levaduras permitan el crecimiento de este tipo de bacteria
como es la presencia de glucosa, triptonas, para (Gran Farmacutica, 2014) . Otro factor
descomponer los azcares y protenas necesarias importante, pudo haber sido que no fue suficiente
para su crecimiento, adems de su composicin en el tiempo de la experiencia, y posiblemente hubiera
extracto de levadura como se presenta en sido necesario esperar ms tiempo para percibir el
BIOKAR, 2016. Este medio PCA es ms adecuado crecimiento. Adems hay que tomar muy en cuenta
para el crecimiento de bacterias, pero, en este caso que el estafilococo crece en ausencia de
fue beneficioso para el crecimiento de levaduras microorganismos competitivos, y por esa razn,
por el pH del medio que seguramente fue cido, proporcionar el medio adecuado no fue suficiente
siendo el rango adecuado para su desarrollo un pH para mantener las condiciones adecuadas para su
entre 3,5 a 5.
crecimiento, ya que esto no garantiza que no exista
Para el crecimiento de levaduras el MA es un la presencia de un microorganismo competitivo
medio muy adecuado para su crecimiento, por su que se haya introducido en el medio en el proceso
composicin de azcares y el extracto de malta, de inoculacin.
pero talvs el pH de este medio no haya sido Con respecto a los hongos se puede observar que
adecuado para un desarrollo ptimo del su crecimiento fue favorable en los 3 medios,
microorganismo. CZAPEC es un medio adecuado siendo Malta Agar, el sitio con los nutrientes
para el crecimiento de levaduras, pero no se adecuados para el desarrollo de estos

Manejo de microorganismos y medios de cultivo

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microorganismos, ya que en estos se apreciaron

partculas negras y blancas que en conjunto
permitieron
observar
la
cantidad
de
microorganismos que lograron desarrollarse lo que
se puede apreciar en la Figura 3. Segn BIOKAR,
2016 el medio MA es el ms adecuado para el
crecimiento de hongos, por lo que para estos
microorganismos se pudo comprobar la
informacin bibliogrfica con el experimento
realizado, pero hay que tomar en cuenta, que al
crecer favorablemente en los 3 medios, este
microorganismo se puede considerar como muy
poco selectivo, y un medio de cultivo complejo
sera ideal para su crecimiento.

Figura 2. Fotografa del crecimiento de levaduras.

Figura 1. Fotografa del crecimiento de la levadura

de pan. 1. Medio CZAPEC. 2. Medio PCA. 3.
Medio MA.
1

Figura 3. Fotografa del crecimiento de hongos. 1.

Medio MA. 2. Medio PCA. 3. Medio CZAPEC.
Bibliografa.

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4. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
El medio adecuado para el ptimo crecimiento de
levaduras fue el PCA (Plate Count Agar). No
existi indicio de crecimiento de bacteria en
ningn medio por lo que no fue posible determinar
el ms adecuado para su crecimiento. El medio
adecuado para el ptimo crecimiento de hongos fue
MA (Malta Agar). El hongo inoculado en el
proceso experimental es muy poco selectivo. Un
correcto proceso de inoculacin garantiza que el
cultivo no se contamine. Las temperaturas de
prueba no fueron un dato de comparacin ya que
en ambas se obtuvieron los mismos resultados
debido a que se encontraron en los rangos de
ptimo crecimiento de microorganismos.
Probar con nuevos rangos de temperatura para
observar si existe un mejor crecimiento de los
microorganismos. Usar nuevos medios de cultivo
que favorezca el crecimiento de la bacteria.

Roger, Y., (2000), Microbiologa, Barcelona,

Espaa: Editorial Reverte.

Toro, D., (2005), Manual para la introduccin al

laboratorio
de
microbiologa,
Manizales,
Colombia: Universidad de Caldas.

Torres, C., (2006), Medios de Cultivo, Buenos

Aires, Argentina: Universidad Nacional del
Nordeste.

Tortora, G., (2007), Introduccin a la

microbiologa, Buenos Aires, Argentina: Editorial
Panamericana.

6. REFERENCIAS
BIOKAR diagnostics (2016).EUGON BROTH,
recuperado
de:
http://www.biokardiagnostics.com/, Francia.
Garca, V.,
microbiologa,
Reverte.

(2008), Introduccin a la
Barcelona, Espaa: Editorial

Gran farmacutica (2014). Medios de cultivo y

pruebas
bioqumicas,
recuperado
de:
http://es.slideshare.net/roberchavez/medios-decultivo-y-pruebas-bioquimica-presentation.
Morn, E., (2004), Manual de prcticas de
microbiologa, Ciudad de Jurez, Mxico:
Universidad de Jurez.