Bol. Micol. Vol. 23 pp.

1 - 101 Valparaso (CHILE) Diciembre 2008

CONTENIDO

MICOLOGIA MEDICA Aspergilosis cerebral: reporte de caso. E. Contreras, G.

ir al artculo 43
E. Posada & S. X. Zuluaga ...................................
Aspergilosis sinusal no invasiva por Aspergillus
parasiticus en nio inmunocomprometido. R. Salim & TAXONOMIA
ir al artculo 1
R. Runco. .................................................................
Aportes morfotaxonmicos en el gnero Aspergillus Link:
Caso clnico: Aspergilosis pulmonar invasiva tratada con Claves para las especies ambientales y clnicas ms
Voriconazol en paciente con Sindrome de Inmuno- comunes. E. Piontelli. ...........................................
ir al artculo 49
deficiencia Adquirida. H. Arias, R. Cruz, M. de la Prida,
ir al artculo 9
W. Jensen, R. Ahumada, M. Huilcaman ............. ECOLOGIA

Actividad lipasa de especies de Malassezia aisladas en Aeromicota de ambientes internos: Comparacin de

pacientes sanos y con lesiones drmicas. M. Sosa, F. Rojas, mtodos de muestreo. T. I., Rojas, E. Martnez, M. J. Aira,
ir al artculo 15
S. Toma, M. Mangiaterra, G. Giusiano. ................ ir al artculo 67
& M. Almaguer. .............................................................

Actividad de fosfolipasa y susceptibilidad in vitro a Microhongos oportunistas asociados al musgo Pompon

Fluconazol en aislamientos clnicos y aviarios de desecado (Sphagnum magellanicum Brid.) en Chile. E.
Cryptococcus neoformans. G. Prez, G. Gonzlez & M. ir al artculo 75
Piontelli, R. Cruz & V. Vivar. ...................................
C. Daz. ..........................................................................
ir al artculo 21
Notas sobre el gnero Geastrum Pers. en Chile central.
Especies de Fusarium como agentes de queratitis H. Madrid. ......................................................................
ir al artculo 87
micticas en adultos en Tucumn, Argentina. R. Salim &
R. Runco. ...................................................................
ir al artculo 27
REVISTA DE REVISTAS, RESUMENES DE
Zigomicosis cutanea primaria por Rhyzopus oryzae en ir al artculo 93
CONGRESOS, CURSO ..................................................
una nia con Leucemia Linfoblastica Aguda Tipo B. R.
Salim, R. Runco, C. Alvarez, S. Romano, M. Charre.
ir al artculo 35
.....................................................................................

Universidad de Valparaso: Boletn Micolgico

www.uv.cl/servicios/externos/lab_micologia/laboratorio_micologia.htm (Texto completo)
Boletin Micolgico Vol. 23 : 1 - 7 2008

ASPERGILOSIS SINUSAL NO INVASIVA

POR Aspergillus parasiticus
EN NIO INMUNOCOMPROMETIDO
(Non invasive sinusal aspergillosis by Aspergillus parasiticus in an
immunecompromised child)

R. Salim1 & R. Runco1,2

1. Ctedra de Micologa. Instituto de Microbiologa Fac. de Bioqumica,
Qumica y Farmacia Universidad Nacional de Tucumn
Ayacucho 491. (4000) San Miguel de Tucumn. R. Argentina.
2. Lab. Micologa del Hospital del Nio Jess. Pasaje Hungra 750.
(4000) San Miguel de Tucumn. R. Argentina
e-mail: rqsalim@rectorado.unt.edu.ar
Palabras claves: aspergilosis sinusal, nio, inmunocomprometido
Key words: sinusal aspergillosis, immunocompromised child.

RESUMEN ABSTRACT

El presente trabajo tiene la finalidad de exponer
un caso clinico de un nio inmmunosuprimido con
antecedentes de hospitalizacin previa, a los 6 aos de
edad con mltiples sntomas y signos (poliadenopatas,
desnutricin, sepsis en cavidad bucal y foco pulmonar,
adems de pancitopenia). Permaneci en terapia
intermedia durante 38 das, cumpliendo varios esquemas
antibiticos sin buena respuesta a los mismos. Fue
derivado al Hospital Ricardo Gutirrez (Buenos Aires)
desconocindose la teraputica seguida en esa
oportunidad. Cinco aos despus (2007) es ingresado
nuevamente a nuestro hospital por cuadro de epistaxis
cefala, compromiso del estado general y neutropenia
febril, por lo que se inicia tratamiento antibitico,
adems de estudio con mielograma confirmndose el
diagnstico de leucemia linfoctica aguda. Cinco das
despus de su ingreso expulsa espontaneamente, desde
las fosas nasales material granulomatoso el cual fu
enviado a estudio micolgico (examen directo y cultivo),
detectndose alta presencia de Aspergillus parasiticus
en ambos examenes, lo cual fue ratificado por
histopatologa como una aspergilosis sinusal no
invasiva. El paciente fue remitido a la Sala de
Inmunodeprimidos donde recibi tratamiento
intravenoso con 350 mg/da de anfotericina B-complejo
lipdico y terapia especfica para LLA. Present una
evolucin trpida y al 12 da el paciente falleci por su
mal estado general y progresin terminal de su
enfermedad de base.
Recibido el 1 de Octubre 2008
Aceptado 29 Noviembre 2008
This present paper is meant to reveal the clinical
case of an immunesuppressed boy having been previously
in a hospital, when he was 6, showing multiple symptoms
and signs (polyadenopaties, malnutrition, buccal sepsis
and pulmonary focus, in addition to pancitopia). He
stayed under intermediate therapy for 38 day being
submitted to varied antibiotic schemes, though yielding
no satisfactory responses to them. Later on he was derived
to the Hospital Ricardo Gutirrez (Buenos Aires), yet
therapeutics used at that place being unknown. Five
years later (2007), he is admitted again in our hospital
because of cephalea epistaxis, a compromised health
condition and fevered neutropenia, so he is given an
antibiotic treatment in addition to a mielographic study
yet it is confirmed the diagnosis of an acute lymphocitic
leukemia. Five days after his admittance, he discharges
granulomatous matter from his nasal cavities which was
sent for a mycological study. Direct exam and culture,
detecting high presence of Aspergillus parasiticus on
both exams which was ratified by histopathology as a
non invasive sinusal aspergillosis. The patient was sent
to the Immunedepressed Ward where he received
intravenous treatment with 350mg/day anfotericina B-
lipidic complex and a specific therapy for LLA. He had a
torpid evolution and on the 12nd day the patient died as
a result of his very bad health condition as well as the
terminal progression of his base disease.
INTRODUCCION
La patologa fngica sinusal es poco frecuente, sin
embargo, su diagnstico ha aumentado desde hace

1
 Boletin Micolgico Vol. 23 : 1 - 7
algunos aos gracias al avance vertiginoso de la radiologa
y el desarrollo de la ciruga endoscpica nasal (1,7). Com-
prende una extensa variedad de entidades patolgicas con
diferente expresin clnica, cuyo denominador comn es
la presencia de hongos en los senos paranasales (10, 11).
Se define como Aspergilosis sinunasal, a un grupo
de afecciones relacionadas con varias especies de
Aspergillus, hongos saprotrofos comunes que crecen
como una masa de hifas anchas y tabicadas. Aspergillus
spp. son las causas ms comunes de todas las formas de
patologa mictica sinunasal (5, 12,17, 22, 23).
Los integrantes del gneroAspergillus, son
ubicuos, abundan en el suelo, en la materia orgnica en
descomposicin y en granos almacenados. Estudios
ambientales han indicado que los humanos pueden inhalar,
diariamente, acorde al ambiente, varios cientos de sus
conidios (26). Sin embargo, su inhalacin por individuos
inmunocompetentes, raramente tiene efectos adversos,
debido a que estos propgulos son eficientemente
eliminados por la inmunidad celular (3, 34). Puede provocar
complicaciones en individuos con alteracin de la defensa
celular, fundamentalmente en enfermos neutropnicos,
especialmente en pacientes leucmicos o transplantados
de mdula sea, terapia corticoesteroide, quimioterapia
citotxica y SIDA (16, 17, 19). El paciente tpico es
granulocitopnico, que ha recibido un sobre tratamiento
con antibiticos de amplio espectro por fiebres
inexplicables (9, 14, 30, 33). Por su oportunismo puede
causar desde alergias hasta infecciones invasivas
implicando las vas areas superiores, pulmones, y otros
rganos (4, 15, 23, 25, 29).
Los cambios de la mucosa y la obstruccin del
orificio nasal, disminuyen la ventilacin del seno, reducen
el pH, y en consecuencia favorecen la colonizacin y la
proliferacin mictica (1, 31, 32).
Adems de los factores del husped, se han citado
diversos factores ambientales como causa del desarrollo
de sinusitis mictica (1,10). El tamao del inculo necesario
para desarrollar manifestaciones de aspergilosis es
desconocido, pero parece que tiene que ser bajo en los
pacientes inmunocomprometidos. Respecto al tiempo de
incubacin entre la exposicin a Aspergillus spp. y el
desarrollo de aspergilosis invasiva Chacn et al. (5),
establecen que vara entre 36 horas y 3 meses. En los
pacientes neutropnicos no se presentan sino hasta
despus de 12 das de neutropenia severa, aun cuando
los pacientes pueden estar colonizados en pulmn o
cavidad sinusal a su llegada al hospital (5,18).
Al parecer, el clima tambin es un factor que puede
favorecer la incidencia de esta patologa, pues existen
zonas donde la sinusitis mictica es endmica; entre ellas
se encuentra Sudn, Norte de India y Arabia Saudita, todas
con clima caliente y seco (3).
2
2008
En los ltimos aos se han asociado otros factores
al aumento de las aspergilosis, entre ellos, las nuevas pautas
de quimioterapia antineoplsica, el incremento exponencial
de los trasplantes de rganos y la utilizacin de frmacos
inmunosupresores cada vez ms potentes frente a
enfermedades auto-inmunes (9, 14, 25).
Si bien existe consenso que la incidencia de las
diferentes formas de presentacin de micosis nasosinusal
es variable y la diversidad de hongos involucrados est
aumentando, desafortunadamente, la verdadera incidencia
de estas infecciones es desconocida (29). Segn una
revisin efectuada en la Clnica Mayo su frecuencia, basada
en las muestras quirrgicas codificadas como sinusitis
inflamatoria fue 6,9%; de sinusitis fngica alrgica, 3,7%;
de bola fungosa 3,7%; y 0,003% de invasora (12).
De las ms de 200 especies que comprende el
gnero Aspergillus, unas 20 han sido reconocidas, hasta
la fecha, como patgenas en el hombre. De stas, la especie
ms frecuentemente aislada es Aspergillus fumigatus
complex. le siguen : A. flavus, A. niger, A. terreus y A.
nidulans, que tambin juegan un papel importante en
patologa humana (4,18).
Los brotes de aspergilosis que implican la piel, la
mucosa oral o los tejidos subcutneos, se asocian ms a
menudo a A. flavus que a las otras especies (3, 4, 18, 27).
Se cree que el tamao mayor de las esporas de A. flavus
con respecto a las de A. fumigatus favorece su deposicin
en la zona respiratoria superior lo que podra explicar su
incidencia como un agente etiolgico comn de la sinusitis
fngica y de las infecciones cutneas. Posiblemente, las
caractersticas de la superficie de las esporas tambin son
determinantes importantes de la localizacin (24).
A. flavus es la segunda causa de aspergilosis
invasiva y es el agente ms comn de la infeccin
superficial no invasiva (4, 10, 18, 19). Los sndromes
clnicos comunes asociados a esta especie incluyen,
particularmente, sinusitis granulomatosa crnica,
queratitis, aspergilosis cutnea, infecciones de heridas y
osteomielitis postraumaumticas y/o de inoculacin (18).
El presente trabajo tiene la finalidad de exponer
el hallazgo casual de Aspergillus parasiticus en material
granulomatoso sangrante de descarga nasal espontnea
en un paciente inmunocomprometido de 11 aos de edad,
con desenlace fatal, comentar aspectos clnicos y de
diagnsticos de la aspergilosis sinusal.
CASO CLINICO
Paciente masculino de 11 aos de edad, residente
en San Miguel de Tucumn (R. Argentina) ingresado por
1 vez en nuestro hospital a los 6 aos de edad (Marzo de
2002) por un sndrome febril prolongado (>30 das de
 Aspergilosis sinusal no invasiva por Aspergillus parasiticus en nio inmunocomprometido - R.Salim & R.Runco
evolucin), prdida de peso (aproximadamente 7 kilos en
un mes) y diarrea. Fue internado, en estado crtico. El
examen fsico revel adenopatas en cadena latero-cervical,
preauricular y submaxilar de 1 a 1,5 cm, duras, mviles,
indoloras, adems en regin inguinal. Desnutrido de primer
grado con dficit del 15% (85% peso para edad). Se
diagnostic sepsis a foco en cavidad bucal y a foco
pulmonar, sndrome anmico, leucopenia severa sin
diagnstico etiolgico confirmado, sndrome de colestasis
con hepatomegalia, insuficiencia heptica y enteropara-
sitosis (huevos de Ascaris). Registraba, adems, lesiones
pustulosas en regin lateral de cuello y perianal. La
puncin-aspiracin de mdula sea inform ausencia casi
total de la serie granuloctica (agranulocitosis). Al mismo
tiempo, se diagnostic neumona derecha, con clnica y
radiologa positiva. Permaneci en terapia intermedia
durante 38 das, cumpliendo varios esquemas antibiticos
sin buena respuesta a los mismos, continuando febril, sin
bacteriemia. Fue derivado al Hospital Ricardo Gutirrez
(Buenos Aires) desconocindose la teraputica seguida
en esa oportunidad.
El 10 de Diciembre de 2007, consulta por epistaxis
de 3 h. de evolucin, de difcil manejo a pesar de la
colocacin de un tapn nasal anterior y administracin de
concentrado plaquetario. Refiere padecer sensacin de
taponamiento nasal, sangrado nasal, cefalea, fatiga y
malestar general de ms de 2 semanas de evolucin. Se
decide su hospitalizacin. Al momento del ingreso
presenta fiebre, neutropenia y plaquetopenia, por lo que
se administra concentrado plaquetario y se inicia
tratamiento con cefalotina y ceftazidima. Con diagnstico
presuntivo de leucemia linfoctica aguda (LLA) se efecta
puncin-aspiracin de mdula sea.
A los 5 das de su admisin, por una descarga
nasal espontnea (estornudo), elimina material granuloma-
toso y sangrante que es transportado rpidamente al
laboratorio. El tejido es procesado para diagnstico
bacteriolgico y micolgico arrojando examen directo
positivo, con abundantes hifas hialinas tabicadas
compatibles con elementos fngicos. Este resultado es
inmediatamente comunicado al mdico tratante, lo cual
llev a una orientacin diagnstica preliminar de sinusitis
fngica. Se decidi practicar biopsia por curetaje,
obtenindose un tejido granulomatoso, friable y sangrante,
que fue enviado para estudios histopatolgicos y
microbiolgicos (examen directo y cultivo micolgico).
El resultado de la biopsia fue compatible con
aspergilosis sinusal sin invasin tisular.Los resultados de
los cultivos y examen histopatolgico fueron positivos
para hongos compatibles con Aspergillus parasiticus.
Con el diagnstico de leucemia linfoctica aguda el paciente
fue remitido a la Sala de Inmunodeprimidos donde recibi
tratamiento intravenoso con 350 mg/da de anfotericina B-
complejo lipdico y terapia especfica para LLA. Present
una evolucin trpida y al 12 da el paciente falleci por
su mal estado general y progresin terminal de su
enfermedad de base.
Estudios Microbiolgicos
Se efectuaron exmenes microscpicos directos
y cultivos del material de descarga nasal espontnea,
previamente macerado en mortero estril con SF estril. Al
examen directo se observaron abundantes hifas hialinas,
septadas, de 2 m de dimetro con ramificaciones en
ngulos de 45. Coincidentemente con este hallazgo, el
diagnstico histolgico de los materiales de biopsia nasal
revel abundantes hifas septadas, ramificadas, no
invasivas de la mucosa sinusal.
Los cultivos se realizaron en Sabouraud
glucosado agar (SGA) e incubados a 37 C. A partir de las
72 h se observ en todos los tubos abundante desarrollo,
en cultivos puros, de numerosas colonias de aspecto
fngico que fueron identificadas como Aspergillus
parasiticus Link, de acuerdo a la descripcin para la
identificacin de especies de Aspergillus provista por el
Departamento Micologa INEI ANLIS (R. Argentina) (28).
La identificacin se bas en el estudio de los caracteres
macro y micromorfolgicos de las colonias aisladas. Su
identidad fue corroborada por comparacin con la
descripcin de esta especie en la literatura especializada
(8,20) (Fig. 1 y 2).
El diagnstico micolgico se bas en la
observacin macro y micromorfolgica de la colonia aislada
en SGA y en Agar Czapeck extracto de levadura. En SGA
se asla un hongo de crecimiento rpido, color amarillo
verdoso a marrn claro uniforme que se oscurece con el
tiempo, borde difuso, dentado y superficie densamente
tapizada de conidiforos, anverso color dorado a rojo-
marrn. Al esporular, la colonia toma un color verde oliva
claro uniforme, que se oscurece con la edad. En Agar
Czapeck extracto de levadura a 28 C la colonia, al principio
de color amarillo, rpidamente pasa a color verde oscuro y
el reverso amarillo-crema, al envejecer se torna amarillo-
naranja. Mrgenes microlobulados, textura algodonosa.
La observacin microscpica muestra conidiforos de
longitud variable, pared hialina, gruesa, con ornamentacin
equinulada, vesculas esfricas, uni o biseriadas (24-25
m), las filides cubren completamente la vescula. Conidios
globosos o subglobosos verrugosos (2,5-3 m) con
paredes delgadas (20, 21).
DISCUSION
El aumento de las enfermedades infecciosas en el
mundo, a expensas del creciente nmero de individuos
3
 Boletin Micolgico Vol. 23 : 1 -7
Fig. 1. Colonia de A. parasiticus .En SGA a 10 das de
incubacin a 28 C
que tienen afectada su competencia inmunolgica,
significa un enorme reto para el equipo de salud en
trminos de diagnstico y tratamiento. Las infecciones
oportunistas se producen cuando fallan los mecanismos
defensivos del husped para enfrentar los procesos
infecciosos, en el que las micosis alcanzan un lugar cada
vez ms importante, por su frecuencia, difcil diagnstico
y elevada mortalidad (35, 36, 37, 38, 39).
Por su baja frecuencia, alta complejidad
diagnstica y teraputica, estas enfermedades caen
generalmente en el campo del especialista, pero el clnico
general debe conocer su existencia y caractersticas
generales, para pedir ayuda o derivarlas oportunamente.
Por ello, es necesario insistir en que la eficiencia con la
que es evaluado un paciente y la eficacia de su tratamiento
depende de un equipo de salud multidisciplinario (35, 38,
39). El laboratorio y la tecnologa, no deben estar fuera,
sino dentro del mtodo clnico, jugando un papel muy
importante y muchas veces decisivo en el diagnstico,
porque son capaces de poner en evidencia situaciones,
all donde no llega la sensibilidad de la clnica (40, 41).
Para ello se debe disponer de materiales especficos y
tcnicas adecuadas, rpidas y confiables para
proporcionar la informacin, acertada y precoz, sea sta
bacteriana, viral, fngica o parasitaria (25,30). En nuestro
pas, los resultados de una encuesta nacional sobre
micosis diagnosticadas entre enero y diciembre de 2004,
con datos provistos por 72 laboratorios, mostraron que
tan slo un 8% de las muestras microbiolgicas fueron
sometidas a estudios micolgicos (6).
El caso que exponemos, es una muestra de lo
importante que resulta no olvidar la posibilidad de una
patologa fngica, que puede quedar oculta por los complementarios por otras patologas o patologas no
sntomas y signos propios de la enfermedad de base en
pacientes inmunodeprimidos. De hecho, el estudio
micolgico del material granulomatoso y sangrante de la
descarga nasal espontnea, fue un episodio fortuito, ya
4
2008
Fig. 2. Micromorfologa de A. parasiticus en agar malta,
en el recuadro se aprecia la rugosidad de los conidios.
D IC (1000X)
que la muestra fue llevada directamente al laboratorio sin
un pedido mdico formal para su anlisis micolgico. La
evaluacin de un paciente con fiebre y neutropenia es un
hecho frecuente en la prctica clnica y puede obedecer a
una gran cantidad de situaciones patolgicas, entre ellas
infecciones invasivas por hongos filamentosos o
levaduriformes (2, 9, 30).
Los pacientes cuya neutropenia es prolongada
y profunda, sobre todo si es secundaria a las quimioterapias
ms agresivas, habitualmente las de rescate, son los que
con ms frecuencia se infectan con integrantes del gnero
Aspergillus. Es sabido que la terapia esteroidal en altas
dosis, aumenta la susceptibilidad a la infeccin por este
agente (19, 30).
El diagnstico de micosis sinusal requiere un alto
grado de sospecha. Como los sntomas de sinusitis
bacteriana y mictica son generalmente similares y su
distincin clnica resulta prcticamente imposible es
necesario sospecharla para as efectuar un diagnstico
correcto y plantearlo cuando existe recurrencia o
persistencia de enfermedad en un mismo sitio (1, 4, 11, 29).
En nuestro laboratorio, nos encontramos
abocados a un programa rutinario de rastreo diario de
muestras clnicas, no derivadas al laboratorio micolgico,
al menos en algunos casos seleccionados de pacientes
cuyas historias clnicas nos llevan a la sospecha de una
posible micosis. Esto podra justificar, en parte, el
incremento en la incidencia de infecciones fngicas en la
edad peditrica que se registr en nuestro medio, en los
ltimos aos (35, 36, 37, 38, 39, 40, 41).
Asimismo, el diagnstico casual de micosis
superficiales y profundas en nuestro hospital ha sido cada
vez ms frecuente en el transcurso de estudios
relacionadas. Esto explicara el aumento progresivo en las
solicitudes mdicas de diagnstico micolgico en los
ltimos tiempos lo que pone en evidencia el reconocimiento
mdico de la importancia y frecuencia de las micosis en el
 Aspergilosis sinusal no invasiva por Aspergillus parasiticus en nio inmunocomprometido - R.Salim & R.Runco
Hospital de Nios de Tucumn, as como de la necesidad
de la utilizacin racional de los recursos de laboratorio
(37, 38, 39).
Los hongos del gnero Aspergillus se distinguen
por su capacidad de causar afecciones muy diferentes
segn el terreno del paciente. Resulta significativo que a
la luz del conocimiento actual, la aspergilosis siga teniendo
una alta morbilidad y mortalidad en grupos de individuos
inmunodeprimidos (con enfermedades malignas,
trasplantados, con SIDA, etc.) lo cual determina su
condicin actual de enfermedad reemergente. Se expresa
con nuevas formas graves en el curso de neutropenias
severas en trasplantados, enfermedades malignas bajo
tratamiento, trasplante de mdula sea, enfermos de SIDA,
etc. (2, 15, 16, 21, 33).
En la actualidad, la aspergilosis es la micosis ms
comn de senos paranasales. En infecciones de vas
respiratorias altas se encuentran sntomas nasales,
retronasales, sinusales y orbitarios Los sntomas nasales
se relacionan con secrecin mucoide o mucopurulenta,
inflamacin de la mucosa nasal, aumento de tamao de los
cornetes y en ocasiones plipos o dolor facial. La
inflamacin granulomatosa es el sello histolgico distintivo
de esta condicin. Se presenta ms comnmente en
pacientes con leucemia aguda y que han recibido
transplantes de mdula sea, los cuales son sometidos a
terapias con corticosteroides que interfieren de manera
importante con la funcin de los macrfagos (33).
Los hospederos ms frecuentes son los pacientes
neutropnicos con enfermedades hematolgicas malignas,
los trasplantados y los que padecen de enfermedades
granulomatosas. La evolucin casi siempre es de curso
fatal con series que reportan mortalidades entre 80-100 %.
De ah la importancia del diagnstico precoz, la profilaxis
y el tratamiento especfico temprano. Hay que sospechar
cuando el curso febril permanezca por ms de 72 h en este
tipo de paciente, pese a tratamiento antibacteriano de
amplio espectro (14, 19, 33).
Aun cuando las caractersticas clnicas de las
aspergilosis son generalmente idnticas para todas las
especies del Aspergillus, a menudo se describen algunas
particularidades referidas a las infecciones causadas por
A. flavus. Esta especie es ms probable de ser recuperada
de la zona respiratoria superior que cualquier otra especie
de Aspergillus (1, 2, 4, 10, 18). Las presentaciones clnicas
del rinosinusitis aspergilar incluyen sndromes
granulomatosos agudos y crnicos invasivos y sndromes
granulomatosos no invasivos (4, 11). Para un diagnstico
correcto, se debe obtener muestras de tejido para estudios
histopatolgicos, que son esenciales, con cultivos de los
especimenes quirrgicos. Los cultivos de moco nasal no
son confiables para el diagnstico porque pueden reflejar
slo la presencia del hongo en el aire, ms que la
enfermedad.
Es importante enfatizar que debido a su naturaleza
cosmopolita, un cultivo positivo de un sitio no estril,
necesita del respaldo del estudio de microscopia directa
de la muestra y el aislamiento del hongo en muestras
repetidas para considerarlo significativo. Aspergillus es
capaz de crecer fcilmente en los medios de cultivo de un
laboratorio, de tal forma que en ocasiones es difcil
diferenciar si se trata de un contaminante de la muestra, de
un colonizador o de un invasor del husped (13). Por ello,
si bien el cultivo de la muestra obtenida permite la
identificacin del hongo, el diagnstico se establece
definitivamente mediante el estudio histopatolgico (1).
En un estudio realizado en la India, de 119
personas con molestias sinunasales (de los cuales slo
dos, diabticos, tenan afeccin inmunitaria), el 42% tuvo
cultivos positivos para hongos. En 80% de los casos,
Aspergillus flavus fue el agente causal. Los dems hongos
cultivados fueron A. fumigatus (6%), Aspergillus spp.
(4%), Alternaria spp. (4%), Rhizopus arrhizus (4%) y
Candida albicans (2%) (22).
Actualmente se carece de datos confiables sobre
la frecuencia de las micosis en la Repblica Argentina. La
informacin disponible sobre frecuencia de micosis en
nuestro pas ha sido fragmentaria y geogrficamente
limitada. Por esta razn existe muy poca bibliografa
nacional sobre la incidencia de esta patologa (6l).
El tratamiento depende si la sinusitis mictica,
es invasiva o no,requiriendo la primera tratamiento
quirrgico y antifngicos sistmicos (9, 33). Actualmente
la droga de eleccin es el Voriconazol, siendo la
anfotericina una alternativa principalmente por su menor
costo . Debe considerarse la resistencia a Anfotericina B
de Aspergillus terreus.
A. fumigatus es el mayor causante de la
colonizacin e invasin de senos paranasales como ruta
area de infeccin al tracto respiratorio (21, 22, 23),
mientras A.parasiticus, se consiera una especie
cosmopolita, comn en suelos cultivados, granos,
alimentos granulados, compost, vegetales, insectos,
productos almacenados y otros ambientes diversos, en
muchas localizaciones geogrficas, incluyendo Argentina
(42, 43, 44, 46, 49). Sin embargo, a pesar de ser considerada
una especie alergnica no se han documentado en la
linteratura casos de micosis invasivas por esta especie
(8), lo que demuestra su aparente escaso poder patgeno
en los mamferos, una situacin que se corrobora en este
caso clnico al colonizar saprofticamente una descarga
sinusal del enfermo sin la invasin de la mucosa nasal a
pesar de la neutropenia grave y terminal.
Su falta de poder patgeno no se compara con su
5
 Boletin Micolgico Vol. 23 : 1 - 7
actividad toxicognica donde A.flavus y A.parasiticus
son los ms comunes e importantes productores de
aflatoxinas en alimentos y piensos, sin dejar de mencionar
que actualmente ambos taxa pueden contener ms de una
especie (47, 50). Esta especie no se considera un habitante
comn de ambientes internos como A.flavus y
A.fumigatus (47), pero se ha descrito en muy baja cantidad
en ambientes hospitalarios (45). En nuestro caso no
podemos precisar su orgen ambiental, sin embargo, es
probable su entrada desde una fuente exgena por la
particular biogeografa de la zona.
Debe destacarse el raro y casual hallazgo de
A.parasiticus colonizando saprofticamente los senos
nasales
REFERENCIAS
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Sinusitis Fngica. Nuestra Experiencia. Acta Otorrinolaringol Esp;
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y Gmez Barreto, D. (2006). Aspergilosis invasiva en el paciente
peditrico oncolgico: Revisin del tema a propsito de un caso.
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G.; y Solbas, A. (200 1). Aspergiloma a sintomtico del seno
frontal. Presentacin de un caso. Acta Otorrinolaringolgica. 13
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Boletn Micolgico Vol. 23 : 9-14 2008
CASO CLINICO: ASPERGILOSIS PULMONAR INVASIVA
TRATADA CON VORICONAZOL EN PACIENTE CON
SINDROME DE INMUNODEFICIENCIA ADQUIRIDA
(Clinical case: invasive pulmonary aspergillosis treated with Voriconazol
in an AIDS patient)
W. Jensen (4), R. Ahumada (4), M. Huilcaman (4)
(1) Medicina Interna, Hospital Gustavo Fricke, (2) Ctedra de Micologa
Palabras clave: Aspergilosis invasiva, VIH, Voriconazol
Key words: Invasive aspergillosis, VIH, Voriconazol
RESUMEN
Se reporta un caso clnico de aspergilosis
pulmonar invasiva en un paciente de 29 aos VIH(+) en
etapa SIDA, sin antecedentes mrbidos conocidos, con
diagnstico inicial de neumona por Pneumocystis
jirovecii. Fue tratado con exito, pero sin asistir a
controles posterior a su alta . Tres meses despus ingresa
al servicio de Urgencias del Hospital Gustavo Fricke
con tos productiva mucopurulenta, disnea progresiva,
fiebre intermitente y compromiso del estado general. La
radiografa de trax sugiri neumona atpica, detectn- condition resulting deeply compromised. Thorax X-ray
dose en los exmenes Pneumocystis jirovecii y Entero-
bacter aergenes , por lo que se inicia tratamiento con
Cotrimoxazol y Ertapenem. En los cultivos en agar
Sabouraud se detect abundante desarrollo de
Aspergillus fumigatus , por lo que se empieza tratamiento
con anfotericina B en dosis crecientes hasta alcanzar
50 mg/da, sin embargo, por reacciones adversas severas
se decidi tratamiento con Voriconazol intravenoso y
luego oral, con buena respuesta clnica, radiolgica y
de laboratorio. Es dado de alta con tratamiento con
Voriconazol oral, adems de profilaxis secundaria para
P. jirovecii y Mycobaterium avium .
INTRODUCCION
Las infecciones fngicas invasivas han aumentado
en las ltimas dcadas debido al aumento de los pacientes
inmunodeprimidos y a tratamientos mdicos y quirrgicos
Recibido el 21 Octubre 2008
Aceptado el 15 Diciembre 2008
H. Arias(1), R. Cruz (2) , M.de la Prida (3),
U de Valparaso, (3) Respiratorio, Hospital Gustavo Fricke
(4) Infectologa ,Hospital Gustavo Fricke
rcruzchoappa@gmail.com
ABSTRACT
A clinical case of an invasive pulmonary asper-
gillosis in a 29 aged VIH (+) patient, at an AIDS stage,
lacking any known morbid data, and bearing an initial
diagnosis of pneumonia by Pneumocystis jirovecii is
herein described. Was successfully treated even though
he failed to attend subsequent health controls. Three
months later he is admitted in the Hospital Gustavo
Fricke, showing productive mucupurulent cough, pro-
gressive disnea, intermittent fever and his overall health
revealed an atypical pneumonia together with the presen-
ce of P. jirovecii and Enterobacter aerogenes, and decided
to treat him with Cotrimoxazol and Ertapenem. Meanwhi-
le in agar cultures a heavy development of Aspergillus
fumigatus was detected, thus the patient was given Anfo-
tericina B in increasing doses up to reach 50mg/day;
however due to some severe adverse reactions, the treat-
ment with intravenous and later oral Voriconazol, which
rendered satisfactory clinical, radiological and labora-
tory responses was ultimately preferred. The patient is
discharged from the hospital and advised to continue
with oral Voriconazol besides undergoing secondary
profilaxis for P. jirovecii and Mycobaterium avium.
agresivos (Bennet, 2005). Aproximadamente unas 20
especies de Aspergillus se han relacionado con patologas
humanas. De stas, las ms importantes en frecuencia son
A. fumigatus (80% del total), A. flavus, A. niger, A.
nidulans y A. terreus (Thompson et al., 1987; Walsh &
Dixon, 1989; Herbrecht et al., 2002). La mayora de estas
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 Boletn Micolgico Vol. 23 : 9-14
especies esporulan profusamente con una alta dispersin
anemfila de sus conidios, los cuales por su reducido
tamao, pueden ser inhalados causando multiplicacin e
invasin pulmonar o de otros rganos, en dependencia
de la respuesta inmune del husped (Bennet, 2005;
Sanchez, 2000). Las aspergilosis invasivas presentan una
alta mortalidad, la cual vara desde un 50% hasta un 90%
dependiendo de la localizacin de la infeccin, patologa
de base del paciente y de la precocidad del diagnstico e
inicio de tratamiento (Pontn, 2003). En la actualidad se
cuenta con exmenes como el test de galactomanano y la
tomografa axial computada (TAC), cuyo signo ms precoz
en aspergilosis pulmonar invasiva es el signo del halo.
Estas pruebas, adems de cultivos, examen microscpico
directo, biopsia y biologa molecular (Guzmn, 2005),
permiten un diagnstico oportuno en pacientes con
factores de riesgo para tales infecciones. El patrn de
referencia que permite establecer de forma probada,
probable o posible la existencia de una infeccin fngica
por un hongo filamentoso, corresponde a los criterios
conjuntos de la EORTC (European Organization for
Research and Treatment of Cancer) y el Mycoses Study
Group del NIAID (National Institute of Allergy and
Infectious Diseases) de EE.UU (Pontn, 2003; Ascioglu et
al., 2002).
Los factores de riesgo, criterios microbiolgicos y
clnicos para aspergilosis invasiva son variados, entre los
factores de riesgo se destacan: (a) Menos de 500 neu-
trfilos /mm3 por ms de 10 das, (b) fiebre persistente
(ms de 96 hrs) refractaria a antibiticos de amplio espectro
en pacientes de alto riesgo, (c) t emperatura mayor de 38C
o menor de 36 C, (d) neutropnia por mas de 10 das en los
60 das anteriores, (e) uso de inmunosupresores en los 30
ltimos das, (f) infeccin fngica invasiva (probada o
probable) durante el episodio neutropnico previo, (g)
coexistencia de SIDA sintomtico, (h) signos y sntomas
de enfermedad injerto contra husped severa o enferme-
dad extensa crnica, (j) uso prolongado (ms de 3 semanas)
de corticoides en los 60 das previos.
Dentro de los criterios microbiolgicos en
aspergilosis pulmonar se debe considerar: (a) cultivo
positivo para Aspergillus spp. a partir de esputo o lavado
broncoalveolar, (b) cultivo positivo o citologa o
microscopia directa positiva para Aspergillus spp. de
esputo o lavado broncoalveolar, (c) antgenos de Asper-
gillus spp. positivo en muestras de lavado broncoalveolar,
(d) citologa o microscopia directa positiva para Asper-
gillus spp. en muestras habitualmente estriles.
Dentro de los criterios clnicos de infeccin
pulmonar por Aspergillus se deben considerar: (a)
criterios mayores: cualquiera de los siguientes hallazgos
de la tomografa axial computarizada: signo del halo, signo
10
2008
del crecente areo (o signo de la media luna) o cavitacin
sin rea de consolidacin (excluyendo Mycobacterium,
Legionella o Nocardia spp.) y (b) criterios menores:
sntomas (tos, dolor torcico, hemoptisis, disnea), roce
pleural, nueva opacidad radiolgica, derrame pleural.
CASO CLINICO
Paciente de 29 aos, soltero, homosexual, sin
antecedentes mrbidos conocidos.
El 15 de Enero del 2008 tras cuadro de tos seca,
baja de peso y disnea progresiva, es derivado desde el
Hospital de Quintero con diagnstico presuntivo de
neumona por Pneumocystis jirovecii. En esa oportunidad
se detecta una LDH de 1046 UI/l, elevacin de PCR y un
infiltrado radiolgico intersticial de ambos campos
pulmonares, por lo que se inici tratamiento con Ceftriaxona
y Cotrimoxazol E.V, el mismo que se mantuvo por 14 das
hasta el alta, continuando con tratamiento oral. Durante la
hospitalizacin se realiz un test de Elisa para VIH el cual
result positivo y un recuento de CD4 de 14 clulas. El
examen del lavado broncoalveolar no detect presencia
de Pneumocystis y el cultivo de Koch fue negativo.
El paciente no asisti a controles en policlnico de
infectologa hasta el 15 de abril del 2008, fecha en la que es
derivado por mdico particular al servicio de Urgencias
del Hospital Gustavo Fricke con historia de cuadro de tos
productiva mucopurulenta, disnea progresiva, fiebre
intermitente y compromiso del estado general asociado a
radiografa de trax que sugiri neumona atpica sin que
se pudiera descartar un proceso tuberculoso (Fig. 1).
Ingres al Hospital Gustavo Fricke el da 17 de Abril
de 2008. Dentro del examen fsico destac leucoplasia
vellosa, sin adenopatas cervicales, axilares ni inguinales,
murmullo pulmonar disminuido globalmente y crepitantes
bilaterales pero con predominio izquierdo y condilomas
acuminados en regin anal.
De los exmenes de laboratorio destac una
elevacin significativa de PCR, no se solicit LDH a su
ingreso, leucocitos de 4.600 x mm3, hematocrito de 29%,
sin falla respiratoria hipoxmica y baciloscopas negativas.
El da 18 de Abril se observ en muestra de expectoracin
y mediante tincin de azul de toluidina presencia de
moderada cantidad de Pneumocystis jirovecii por lo que
se inicia tratamiento con Cotrimoxazol ev.
Se solicit fibrobroncoscopa la cual mostr una
arquitectura conservada del rbol bronquial y abundante
secrecin mucopurulenta. El cultivo del LBA mostr
desarrollo de Enterobacter aergenes con un recuento
de colonias significativo por lo que se inici tratamiento
segn antibiograma con Ertapenem a dosis de 1 g al da.
Al mismo tiempo, los 6 cultivos en agar Sabouraud a 37
mostraron abundante desarrollo de Aspergillus fumigatus
 Caso clnico: Asperguilosis pulmonar invasiva tratada con Voriconazol en paciente con VIH
Fig. 1. Radiografa de trax que sugiri neumona
atpica
Fig. 3. TAC inicial con compromiso parenquimatoso
bilateral, predominantemente en pulmon izquierdo
Fig. 5 . TAC control de tratamiento
complex (Fig. 2), por lo que se inici tratamiento con
Anfotericina B (AMB) en dosis crecientes hasta alcanzar
los 50 mg/da , tratamiento que se mantuvo por 10 das,
tiempo en el cual present deterioro moderado de su
- Arias et al.
Fig. 2. Aspergillus Fumigatus
Fig 4. TAC de trax que muestra signo del halo,
caracterstico de la aspergilosis pulmonar invasiva.
funcin renal, hipokalemia y datos que apoyaron una
colestasia, por lo que se suspendi la Anfotericina y se
inici terapia con Voriconazol en dosis de 6mg/kg cada 12
horas el primer da y posteriormente 4 mg/kg cada 12 horas
inicialmente por va endovenosa.
El scanner de trax inicial mostr lesiones
pulmonares bilaterales, con compromiso predominante-
mente del parnquima pulmonar izquierdo (Fig.3) y lesin
cavitada con signo del halo caracterstico de aspergilosis
pulmonar invasiva (Fig.4) y mnimo derrame pericrdico.
Finalmente el recuento de CD4 fue de 9 clulas por
lo que se inici profilaxis para Mycobacterium avium con
Azitromicina 500 mg semanal.
El paciente evolucion favorablemente mantenien-
do parmetros spticos apagados y clnicamente estable
una vez iniciado el tratamiento. Se realiza TAC de trax de
control dos semanas posteriores a inicio de tratamiento, el
cual muestr una resolucin del patrn inflamatorio
parenquimatoso y cavitaciones secuelares (neumatoceles)
(Fig. 5).
11
 Boletn Micolgico Vol. 23 : 9-14
Es dado de alta con indicacin de tratamiento va
oral con Voriconazol en dosis de 200 mg cada 12 horas,
adems de profilaxis secundaria para Pneumocytis
jirovecii (Cotrimoxazol forte un comprimido diario) y
Mycobaterium avium (Azitromicina 500 mg semanal).
Estudio micolgico.
Los cultivos de expectoracin fueron enviados a
la Ctedra de Micologa de la Universidad de Valparaso.
En agar Sabouraud a 37 crecieron colonias que tanto a la
macro como a la microscopia eran sugerentes de
Aspergillus fumigatus, las cuales se traspasaron a agar
Czapec extracto de levadura (CYA) y agar Malta (MEA) a
25 y 37C. A 25C en CYA durante 7 das, crecieron colonias
entre 45 y 65 mm de dimetro, mientras en MEA a la misma
temperatura 40-60 mm. En CYA a 37C (60-66 mm) mientras
en MEA (62-64 mm). Mximo crecimiento 52C ( 1).
Conidios verde oscuros a verde turquesa, micelio blanco,
con exudado y sin pigmentos, reverso amarillento en CYA.
A la microscopa, las cabezas conidiales fueron
predominantemente columnares, con conidiforo incoloro,
de pared lisa, grises cerca del pice, vesculas piriformes a
espatuladas, entre 18-25m; filides uniseriadas entre 5-9
por 2-3 m cubriendo la mitad superior de las vescula;
conidios, globosos a elipsoidales, lisos a finamente
rugosos 2-3 m.
Con estas caractersticas morfofisiolgicas se
confirm el aislado como Aspergillus fumigatus
DISCUSION
Distintas especies del gnero Aspergillus pueden
colonizar las vas respiratorias y posteriormente producir
una invasin en aquellos pacientes con algn grado de
inmunodepresin celular, en especial los neutropnicos.
A. fumigatus es la especie ms aislada en todas las formas
clnicas de aspergilosis, tanto en la no invasiva como en la
invasiva (Henderson & Chapman, 2004; Cruz et al., 2005 ).
Esta ltima destaca por su mayor gravedad y por su alta
mortalidad dependiendo de la condicin inmune del
paciente, el diagnstico precoz y el oportuno tratamiento
con antifngico de ltima generacin. El cuadro clnico de
una aspergilosis pulmonar es inespecfico y puede
confundirse con una neumona bacteriana o viral (Arteaga
& Grande Argudo, 1999). Las imgenes en la radiografa
son variables y difciles de diferenciar en su etiologa, razn
por la cual es urgente en estos pacientes, poder contar
con TAC y test de galactomanano, el cual ha demostrado
su mayor utilidad diagnstica en pacientes neutropnicos
que cursan precozmente una aspergilosis invasiva, adems
de su utilidad pronostica en el control de la respuesta al
tratamiento antifngico (Pereira et al., 2005; Pontn, 2003).
Con respecto al tratamiento, en los ltimos aos
12
2008
han aparecido nuevos medicamentos que han demostrado
una mejor respuesta clnica y con menos reacciones
adversas que la Anfotericina B deoxicolato, entre ellos
los azoles de ultima generacin como el Voriconazol, las
Equinocandinas como la Caspofungina y las formulaciones
lipdicas de Anfotericina B como la liposomal (Saballs et
al., 2000; Wieland et al., 2005). El Voriconazol es
considerado como la droga de eleccin en la aspergilosis
invasiva; es un Triazol de segunda generacin, derivado
sinttico del Fluconazol que acta inhibiendo la 14-alfa
demetilasa y la 24 dihidrolanosterol demetilasa,
disminuyendo la sntesis de ergosterol, componente
fundamental de la membrana celular fngica(Wieland et
al., 2005). La casustica nacional referente a aspergilosis
pulmonar se inicia en la mitad del siglo pasado,
evolucionando desde aportes del diagnstico basados
solo en hallazgos microbiolgicos e histolgicos (estos
ltimos principalmente post mortem) a los primeros intentos
de anticuerpos anti Aspergillus en el suero de los enfermos
(Yarzabal et al., 1974). Posteriormente se han publicado
varios casos de aspergilosis principalmente invasivas
(Thompson et al., 1985; Mendoza et al., 1985; Pillaux, et
al., 2000; Zambrano et al., 2007 ), adems de los aspectos
anatomopatolgicos, clnicos y tcnicas modernas como
PCR, que apoyan al diagnstico convencional (Oddo &
Thompson, 1990).
El caso expuesto evidencia lo importante de la
sospecha precoz de aspergilosis en los pacientes con
SIDA, su diagnstico oportuno con cultivos e
imagenologa, adems de la buena respuesta al tratamiento
con Voriconazol y las reacciones adversas severas de la
Anfotericina B deoxicolato (falla renal, colestasia e
hipokalemia).
Los mtodos ms empleados en los laboratorios
en la identificacin de las especies de Aspergillus de
origen clnico, se basan mayoritariamente en el anlisis de
sus caractersticas de cultivo, propiedades fisiolgicas y
la morfologa de sus estructuras asexuales o sexuales.
Sin embargo, los esquemas morfolgicos pueden presen-
tar ciertas dificultadas cuando las cepas clnicas impor-
tantes y comunes, muestran grados de variabilidad en sus
caracteres fenotpicos, situacin que dificulta la determina-
cin a nivel de especie (Samson et al., 2006).
Los miembros de la seccin Fumigati en particular,
son unos de los ejemplos actuales a considerar por poseer
caractersticas morfolgicas que se superponen al incluir
distintas especies genticas dentro de una nica morfo-
especie (Balajee et al.,2005a; 2005b; 2007; Katz et al., 2005).
A. fumigatus sigue siendo el ms comn agente de asper-
gilosis, sin olvidar que sus aislamientos clinicos no son
siempre morfolgicamente caractersticos y se han
cometido errores en el pasado en su identificacin aplican-
do solo caractersticas morfolgicas (Balajee et al., 2006).
 Caso clnico: Asperguilosis pulmonar invasiva tratada con Voriconazol en paciente con VIH
Estudios actuales, con mtodos polifsicos
(morfolgicos, fisiolgicos y molculares), han reevaluado
la seccin Fumigati (as como otras) (Hong et al., 2005;
Yaguchi et al., 2007) y sus resultados determinaron que
las especies anamrficas de esta seccin pueden ser
divididas en 5 clades: la clade I incluye A. fumigatus y sus
otras 7 especies consideradas como sinnimos, la clade
II: A.lentulus y A.fumisynnematus; la clade III: A. fumi-
gatiaffinis y A. novofumigatus; la clade IV: especies
atpicas de A. fumigatus incluyendo A. viridinutans y la
clade V: A. brevipes, A. duricaulis y A. unilateralis. La
mayora de las cepas clnicas obtenidas en Japn se
agrupan juntas en la clade I, otras en la clade II y IV, y
ninguna en las clades III y V.
Se han analizado tambin las correlaciones entre
morfologa, mximo crecimiento a diversas temperaturas
y la filogenia de los aislados dentro de la seccin (Balajee
et al. 2005a, 2007; Katz et al., 2005). El mximo desarrollo
a diversas temperaturas de las clades I, II, III, IV y V fueron
calculadas sobre los 50 C, 45 C, 45 C, 42 C y 42 C,
respectivamente; estos datos fisiolgicos son muy tiles
en la separacin de especies dentro de la seccin Fumigati,
mostrando buena correlacin entre las caractersticas
filogenticas y fenotpcas (Balajee et al., 2007; Samson et
al., 2007).
Nuestra cepa clnica, se clasific morfofisio-
lgicamente como A. fumigatus mediante cultivos en
medios estandarizados, creciendo a una temperatura
mxima de unos 52C. A 25C en MEA, present una
morfologa caracterstica de sus vesculas, filides y
conidios, por lo cual se separ de una especie similar capaz
de crecer a la misma temperatura mxima, pero con una
vescula diferente como se observa en la nueva especie
Aspergillus turcosus Hong, Frisvad & Samson, aislada en
Korea del Sur (en Samson et al., 2007).
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Boletn Micolgico Vol. 23 : 15 - 20 2008
ACTIVIDAD LIPASA DE ESPECIES DE Malassezia
AISLADAS EN PACIENTES SANOS Y CON
LESIONES DERMICAS
(Lipase activity of Malassezia species isolated from healthy patients
and having dermic lesions)
Maria de los Angeles Sosa, Florencia Rojas, Sergio Toma Vanacore
Magdalena Mangiaterra, Gustavo Giusiano
Palabras Claves: Malassezia, activididad lipasa
Key words: Malassezia, lipase activity
RESUMEN
Las levaduras del gnero Malassezia forman parte
de la microbiota normal de piel humana y animal.
Excepto M. pachydermatis, todas las especies de este
gnero son lipodependientes. Bajo ciertos factores,
Malassezia se asocia como agente etiolgico en diversas
afecciones drmicas. Uno de los principales factores de
virulencia de estas levaduras es su actividad de lipasa
(AL). El objetivo de este trabajo fue introducir modifica-
ciones a las tcnicas de determinacin de la actividad
lipasa (AL) para su aplicacin en levaduras lipodepen-
dientes y estudiar la AL en cepas de Malassezia aisladas
de personas con piel sana y de pacientes con pitiriasis
versicolor (PV), dermatitis seborreica (DS) y psoriasis
(PS). Se estudiaron 94 cepas aisladas de 34 pacientes
con lesiones de PV, 20 con DS, 7 con PS y 33 cepas de
personas con piel sana. Las modificaciones planteadas
a la tcnica, que incluyeron variacin del medio de
cultivo y tiempos de incubacin, permitieron la
determinacin semicuantitativa de la AL con resultados
claros y definidos. El 88,23% de las cepas present AL.
No se obtuvieron diferencias estadsticamente significa-
tivas al comparar la AL entre las cepas de pacientes con
afecciones de piel y las cepas aisladas de personas sanas.
La produccin de lipasas de las especies de Malassezia
en orden decreciente fue: M. sympodialis, M. slooffiae,
M. furfur, M. globosa, M. restricta. M. globosa y M.
furfur fueron las especies en que se observaron mayor
cantidad de cepas no productoras de AL y cepas con
gran variabilidad en la medida de AL.
Recibido el 23 Abril 2008
Aceptado el 2 Julio 2008
Departamento Micologa. Instituto de Medicina Regional.
Universidad Nacional del Nordeste. Av. Las Heras 727,
3500 Resistencia, Argentina
E-mail: gusgiusi@medreg.unne.edu.ar
ABSTRACT
Yeasts of the genus Malassezia are part of the
regular microbiota in human and animal skin. Except
for M. pachydermatis, all the species of this genus are
lipodependent. Malassezia, under certain factors, is
associated as an etiological agent in diverse dermic
affections. One of the main virulence factors of these yeasts
is their lipase activity (LA).
The objective of this research was to introduce
some changes in the techniques adopted to determine
the lipase activity (LA) in order to apply them to
lipodependent yeasts and to study likewise the LA in
Malassezia strains isolated from healthy skin people and
patients diagnosed with pitiriasis versicolor (VP),
greasy dermatitis (GD) and psoriasis ( PS). Ninety four
strains isolated from 34 patients having VP lesions, 20
with GD, 7 with PS and 33 strains from healthy skin
people. Changes suggested to the technique involved a
variation in the medium of culture as well as in the time
of incubation what resulted in the semiquantitative
determination of the LA together with clear and precise
results.
The presence of LA was observed in of 88.23%
strains. The comparison of the LA among strains of
patients bearing injured skin and those isolated from
healthy skin did not show any significant statistical
difference. The production of lipasae from Malassezia
species were in decreasing order: M.sympodialis, M.
slooffiae, M.furfur,M.globosa and M.restricta. M. glo-
bosa and M. furfur were the species that revealed the
highest number of non producting LA strains as well as
strains with the highest variability in the degree of LA
15
 Boletn Micolgico Vol. 23 : 15 - 20
INTRODUCCION
En contraste con las bacterias, pocos son los
hongos que se pueden definir como patgenos primarios
y sus mecanismos de patognesis son mucho menos
comprendidos. La mayora de estos organismos viven
como saprfitos ambientales o como simbiontes,
coexistiendo con el hospedador sin consecuencias
negativas. Sin embargo, algunos son capaces de parasitar
hospedadores sanos y generar desde infecciones
superficiales hasta las diseminadas o invasoras (1).
Actualmente el gnero Malassezia est confor-
mado por las siguientes especies: M. furfur, M.
sympodialis, M. globosa, M. restricta, M. obtusa, M.
slooffiae, M. dermatis, M. yamatoensis, M. japonica, M.
pachydermatis, M.nana y M. equii. Las 9 primeras forman
parte de la microbiota normal de la piel del hombre y las 3
ltimas estn adaptadas al estrato crneo de los animales
(2, 3, 4, 5, 6, 7, 8). Desde el punto de vista fisiolgico estas
levaduras se distinguen por su lipodependencia, debido a
que tienen un defecto en la sntesis de cidos grasos que
se manifiesta en su requerimiento exgeno; excepto M.
pachydermatis, la cual es lipoflica pero no lipodendiente
(9, 10, 11, 12).
Bajo la influencia de ciertos factores, las especies
de Malassezia pueden volverse patgenas y participar
en diversas enfermedades dermatolgicas superficiales e
infecciones sistmicas (2, 9, 13, 14, 15). Est demostrado
que este gnero es el agente etiolgico de la pitiriasis
versicolor y la foliculitis y que se asocia a dermatitis
seborreica, exacerba la dermatitis atpica y se lo considera
como patgeno secundario a otras afecciones de piel. (2,
3, 16, 17).
La virulencia es una compleja interrelacin entre el
organismo infeccioso y el hospedador. La patognesis
fngica involucra una interaccin y a veces una
modificacin de factores para ambos (1, 12) y uno de los
principales en la virulencia de estas levaduras es su
actividad de lipasa (17).
El conocimiento sobre los patrones bioqumicos
del gnero Malassezia es exiguo y los escasos informes
existentes sobre la produccin de lipasa y lipoxigenasa,
tanto in vivo como in vitro, fueron realizados antes de la
revisin del gnero cuando se consideraban slo dos
especies, M. furfur y M. pachydermatis (17, 18, 19, 20).
El objetivo de este trabajo fue introducir modi-
ficaciones a las tcnicas de determinacin de la actividad
lipasa (AL) para su aplicacin en levaduras lipo-
dependientes y estudiar la AL en cepas de Malassezia
aisladas de personas con piel sana y de pacientes con
pitiriasis versicolor (PV), dermatitis seborreica (DS) y
psoriasis (PS).
16
2008
MATERIALES Y METODOS
Entre los meses de octubre del 2005 y diciembre de
2007, se estudiaron cepas de Malassezia aisladas de
personas que asistieron al Instituto de Medicina Regional
(UNNE) y agrupadas de la siguiente manera:
Criterio de inclusin:
Grupo I: Cepas aisladas de todos los pacientes
con PV, DS y PS que demandaron atencin.
Grupo II: Cepas aisladas de personas clnicamente
sanas, sin lesiones de piel.
Criterios de exclusin:
Grupo I: Cepas aisladas de pacientes con
diagnstico de PV, DS y PS que no hubieran suspendido
el tratamiento tpico u oral 7 das previos a la toma de
muestra.
Grupo II:
Cepas aisladas de personas clnicamente sanas
que presentaran algn antecedente de afeccin de piel de
cualquier ndole en los 5 meses precedentes a la toma de la
muestra.
Cepas aisladas de personas con tratamiento
antibitico y/o corticoide durante los 15 das precedentes
a la toma de la muestra.
En el caso del Grupo I se tomaron muestras de las
lesiones y del Grupo II desde la espalda y el cuero
cabelludo. Las muestras fueron recolectadas por raspado
con bistur estril y sembradas en medio de Agar Dixon
modificado e incubadas a 32C hasta 7 das, con observa-
ciones diarias (21).
Identificacin
Todas las cepas de Malassezia aisladas se
tipificaron en base a sus caractersticas macro y micro-
morfolgicas y a sus propiedades bioqumicas y
fisiolgicas, segn la metodologa propuesta por Guillot
et al. (21). Para confirmar la identificacin se realizaron
estudios moleculares, aplicando la metodologa de PCR-
RFLP basada en la tcnica de Mirhendi et al. (22).
Como cepas control se incluyeron cepas de
referencia CBS 7886 M. globosa, CBS 7019 M. furfur,
CBS 7222 M. sympodialis, CBS 9169 M. dermatis, CBS
9432 M. japonica, CBS 10533 M. pachydermatis, CBS
7991 M. restricta, CBS 9725 M. yamatoensis y CBS 7956
M. slooffiae.
Actividad lipasa
La determinacin de la AL se realiz tomando
como base la tcnica de Riciputo et al. (20), con modifi-
caciones para el estudio de levaduras lipodependientes,
introducidas por este grupo de investigacin. Al medio
base de acuerdo a Riciputo et al. que incluye yema de
huevo como fuente de lpidos, se le agreg taurocolato
 Actividad lipasa en especies de Malassezia - Sosa et al.

Tabla 1: Distribucin de especies aisladas segn grupo y afeccin de procedencia

Grupo I Grupo II
Especie Pitiriasis Dermatitis Total
Psoriasis Piel sana
Versicolor Seborreica
M. furfur 11 5 2 11 29
M. sympodialis 9 3 1 6 19
M. globosa 14 10 3 14 41
M. restricta 0 1 1 1 3
M. slooffiae 0 1 0 1 2
Total 34 20 7 33 94

de sodio como activador de la produccin de lipasas. Las
placas con medio yema de huevo-taurocolato una vez
inoculadas se incubaron a 32C. Se hicieron lecturas los
das 3, 5, 7 y 10. La formacin de zonas de liplisis o
aclaracin alrededor de la colonia se consider indicativa
de la produccin enzimtica.
La medida y el clculo de la zona de AL se realiz
de acuerdo al mtodo descripto por Price et al. (23). La AL
se calcul como la relacin entre el dimetro de la colonia
y el dimetro de la zona de liplisis (23, 24). Estos
coeficientes posteriormente se agrupan en 3 clases, lo que
permite hacer una medicin semicuantitativa de la actividad
enzimtica:
AL = Dimetro de la colonia
Dimetro de la zona de produccin enzimtica
AL 0.69: actividad lipasa alta (+++)
0.69 >AL < 0.89: actividad lipasa media (++)
0.9 > AL < 1: actividad lipasa baja o no detectable (+)
Aquellas cepas en las que no se detect produccin
de la enzima, es decir, que se obtuvo una AL=1, se
categorizaron como no productoras de lipasa. Para obtener
un promedio de AL se midi la AL de 3 colonias de cada
cepa estudiada. Todas las determinaciones se realizaron
por triplicado.
Se incluyeron cepas de referencia: CBS 7886 M.
globosa, CBS 7019 M. furfur, CBS 7222 M. sympodialis,
CBS 7991 M. restricta y CBS 7956 M. slooffiae.
RESULTADOS
Se estudiaron 94 cepas aisladas de 34 pacientes
con lesiones de PV, 20 con DS, 7 con PS y 33 cepas de
personas con piel sana. En la Tabla 1 se presenta la
distribucin de las especies aisladas segn el origen de la
cepa.
De los 94 aislados de Malassezia spp., 83 (88,23%)
presentaron AL. En la Tabla 2 se muestra el ndice de AL
por grupo y afeccin drmica.
La distribucin por especie de los valores de AL de
los 94 aislamientos estudiados se muestra en la Tabla 3. El
valor mnimo de AL obtenido se ubic en 0,198 y el mximo
en 1.
La produccin de lipasas de las especies de
Malassezia en orden decreciente fue: M. sympodialis, M.
slooffiae, M. furfur, M. globosa, M. restricta.
Respecto a los tiempos de lectura, al 3er da no se
observ desarrollo de M. globosa ni de M. restrica. A
partir del da 5, todas haban desarrollado e iniciado su
actividad. Entre el da 7 y el 10 se observ una disminucin
en la relacin dimetro de la colonia/dimetro de la zona
de produccin enzimtica. Por esta razn se tom el

Tabla 2: Actividad lipasa de Malassezia spp. segn grupo y cuadro clnico de procedencia.

Actividad Lipasa
N
cepas con AL (AL SD) %
Pitiriasis versicolor 34 30 0,382 0,246 88.24
Grupo I Dermatitis seborreica 20 18 0,379 0,235 85.71
Psoriasis 7 7 0,292 0,096 100
Grupo II Piel sana 33 28 0,437 0,270 84.85
Total 94 83 88.23
AL: ndice de actividad lipasa. SD: Desviacin estndar

17
 Boletn Micolgico Vol. 23 : 15 - 20 2008

Tabla 3: Distribucin de los valores de AL obtenidos segn la especie.

Especie
AL Clase M. furfur M. globosa M. sympodialis M. restricta M. slooffiae
n % n % n % n % n %
1,00 + 2 6.89 8 19.51 0 0 1 33.33 0 0
0,90 0,99 + 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
0,80 0,89 ++ 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
0,70 0,79 ++ 0 0 1 2.44 0 0 0 0 0 0
0,60 0,69 ++ 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
0,50 0,59 +++ 1 3.44 2 4.88 0 0 0 0 0 0
0,40 0,49 +++ 4 13.80 4 9.75 3 15.79 2 66.67 0 0
0,30 0,39 +++ 11 37.93 15 36.6 2 10.53 0 0 2 100
0,20 0,29 +++ 11 37.93 10 24.39 9 47.37 0 0 0 0
0,00 0,19 +++ 0 0 1 2.44 5 26.31 0 0 0 0
29 100 41 100 19 100 3 100 2 100
* Clase +: 0.9 AL 1; clase ++: 0.69 Lz 0.89; clase +++: Lz 0.69
septimo da como punto de corte para la lectura de AL, En este estudio se plante la utilizacin de un medio
cuando las relaciones fueron ms altas. slido que permite la determinacin semicuantitativa de la
Todos los valores de las Tablas 2 y 3 corresponden AL. El agregado de taurocolato dio buenos resultados, ya
a la medida obtenida el da 7. Utilizando la prueba de anlisis que los halos de produccin enzimtica obtenidos siempre
de la varianza ANOVA para comparar la AL entre las cepas fueron claros y definidos, por lo tanto, de fcil lectura y
de pacientes con afecciones de piel (Grupo I) y las cepas apreciacin.
de personas sanas (Grupo II), no se obtuvieron diferencias Debido a que el gnero Malassezia se desarrolla
estadsticamente significativas. ms lentamente en cultivo que otras levaduras, como
Candida, el tiempo de incubacin fue ms prolongado
DISCUSION que el de la tcnica original que fue ideada para levaduras
no lipodependientes (20). Malassezia se desarrolla entre
La asociacin de las especies de Malassezia a 5 y 7 das, por lo que su mayor actividad se observ al 7mo
diversas patologas ha impulsado el estudio de su da.
capacidad patognica. Se considera que la produccin de En nuestro trabajo encontramos AL en el 88,23%
proteinasas y lipasas juega un papel importante en la de los 94 aislamientos estudiados. Neves et al. (29), en un
patogenicidad de estos hongos oportunistas (17). Existe estudio similar al nuestro, hallaron 100% de AL en 11
un gran nmero de publicaciones en las cuales se examina aislamientos de Malassezia. Probablemente la discrepancia
la produccin de estas enzimas hidrolticas en aislados de en el porcentaje de positividad se relacione con el nmero
C. albicans y su papel en la patognesis de la candidosis de cepas estudiado ya que aquellos autores slo encon-
invasiva, ya que estn relacionadas con su virulencia, traron M. furfur y M. sympodialis.
pero, existen escasos estudios que investiguen su En nuestro trabajo M. sympodialis fue la especie
existencia y su relacin con la virulencia de las levaduras que mostr mayor AL. Por otro lado, las 2 cepas de M.
del gnero Malassezia (25-28). slooffiae presentaron alta AL. Dado el bajo nmero de
Los pocos trabajos publicados sobre la actividad aislamientos obtenidos, es difcil obtener una conclusin
enzimtica de Malassezia fueron realizados antes de la de valor sobre esta especie.
revisin del gnero, cuando se conocan slo dos especies, M. globosa y M. furfur fueron las especies en que
M. furfur y M. pachydermatis (18, 19, 20). Probablemente se observaron, por un lado mayor cantidad de cepas no
esos resultados deben ser reevaluados, ya sea, porque no productoras de actividad, y por otro, cepas con gran
correspondan a alguna de las especies nombradas, o bien, variabilidad en cuanto a la medida de AL, como as tambin,
por la posibilidad de la existencia de mezclas en los en cuanto a su distribucin en relacin a las patologas en
cultivos. El amplio espectro de especies de Malassezia que se asocian y su presencia en piel sana.
reconocido en la actualidad hace interesante el estudio de Si bien esta claro que la actividad lipoltica es
los patrones bioqumicos y del comportamiento de cada esencial para el crecimiento de Malassezia, al parecer no
una de ellas. es su nica funcin. Los lpidos asociados a la pared celular

18

han demostrado estar involucrados en una forma de
evasin de la respuesta, ya que inhiben la respuesta
proinflamatoria normal y esto provee la explicacin de su
estado de biota comensal en la piel. Adems se cree que
estos lpidos tienen importancia en la actividad fagoctica,
dificultando su internalizacin y posterior accin
microbicida (30).
Se ha postulado que la AL est directamente
relacionada a la virulencia, por lo tanto, a mayor AL mayor
virulencia (18). En este trabajo no se encontraron
diferencias significativas entre los niveles de AL de cepas
de afecciones y los de piel sana. Tampoco el ndice ANOVA
detect diferencias significativas entre los resultados de
las AL comparando los aislamientos de las diferentes
afecciones drmicas estudiadas. La AL debe ser
considerada como uno de los factores de virulencia de
estas levaduras, pero no el nico factor que influye sobre
la patogenicidad.
Esta es una contribucin al avance en el estudio de
la ecologa y del rol patognico de las especies hoy
conocidas del gnero Malassezia.
AGRADECIMIENTOS
Agradecemos la asistencia tcnica de la Sra. Liliana
Alegre en el desarrollo del presente trabajo.
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Boletn Micolgico Vol. 23 : 21 - 25 2008

ACTIVIDAD DE FOSFOLIPASA Y SUSCEPTIBILIDAD IN

VITRO A FLUCONAZOL EN AISLAMIENTOS CLINICOS
Y AVIARIOS DE Cryptococcus neoformans
(Phospholipase activity and in vitro susceptibility to fluconazol
in clinical and aviars isolates of Cryptococcus neoformans)

Gabriel Prez C. (1), Gisela Gonzlez H. (2),

M. Cristina Daz J. (3)
(1). Facultad de Medicina, Universidad de Chile
(2). Programa Doctorado en Ciencias Silvoagropecuarias y Veterinarias, Universidad de Chile
(3).- Programa de Microbiologia y Micologa, ICBM,
Facultad de Medicina, Universidad de Chile.
mcdiaz@med.uchile.cl

Palabras clave: Fosfolipasa, Cryptococcus neoformans, susceptibilidad Fluconazol

Key words:Phospholipase, Cryptococcus neoformans, susceptibility Fluconazol

RESUMEN ABSTRACT

Se detect la actividad de fosfolipasa en 19 cepas Phospholipase activity was determined to 19

clinical and 17 aviars trains of C. neoformans var.
clnicas y 17 aviarias de C. neoformans var. neoformans,
neoformans, incubating the yeast for 5 days at 37 C on
usando Agar Sabouraud con yema de huevo,
Sabouraud Agar supplemented with egg yolk. Pz values
incubndose a 37C por 5 dias. Se determin el ndice
were determined and the following ranges were
Pz establecindose los siguientes rangos: Pz muy alto
established:very high (0.9-1), high (0.89-0.80), low
(0.9-1), alto (0.89-0.80), bajo (0.79-0.70) y muy bajo (<
(0.79-0.70) and very low (<0.69). The 84% of the clinical
0.69). El 84% de las cepas clnicas presentaron ndice
isolates showed Pz values very low ( 5% ) and 11%
Pz muy bajo, el 5% bajo y 11% muy alto. Mientras en las
very high. On the other hand, the 82% of the aviars strains
cepas aviarias el 82% presentaron ndice muy bajo y un
presented Pz values very low and 18% very high.
18% muy alto. Los valores de Pz promedio fueron muy
Average Pz values were very low in all isolates , there
bajos en todos los aislamientos, sin existir diferencias
were no statiscally significant differences (p>0.05)
significativas (p > 0,05) entre las cepas clnicas y
impliying a high enzymatic activity. Susceptibility in
aviarias, lo que implica una alta actividad enzimtica.
vitro testing to Fluconazole was performed by a disk
La susceptibilidad in vitro a Fluconazol se realiz por el
diffusion method (M44-A).The 89.5% of the clinical
mtodo de difusin con discos y el 89,5 % de las cepas
isolates were susceptible and 10.5% resistant, while in
clnicas fueron sensibles y el 10,5% resistentes, mientras
avian strains, 59% were susceptible, 29% susceptible
en las cepas aviarias, el 59% fueron sensibles, 29%
dose dependent and 12% resistant.
sensible dosis dependiente y un12% resistentes.

cin de esta enzima extracelular se relaciona eventualmente

INTRODUCCION
Cryptococcus neoformans es una levadura
capsulada que pertenece a los Basidiomycota (Garau,
2002) y que posee diversos factores de virulencia, entre
los cuales se encuentra la fosfolipasa y por ende la produc-
Recibido el 30 Octubre 2008
Aceptado el 5 Diciembre 2008
con patogenicidad (Ghannoum, 2000) .
Paralelamente al aumento de la poblacin en estado
de inmunodepresin, la infeccin por C. neoformans ha
emergido como una causa importante de morbilidad y
mortalidad, afectando especialmente a pacientes con SIDA
en etapa avanzada. Actualmente, representa la causa ms
comn de meningitis fngica en el mundo, y es una de las
levaduras ms frecuentemente asociadas a infeccin fn-

21
 Boletn Micolgico Vol. 23 : 21 - 25
gica invasora (Garca-Ruiz et al., 2004; Warnock, 2007).
La virulencia de esta levadura es un tema amplia-
mente estudiado, diversas investigaciones han descrito
factores de virulencia para C. neoformans, entre los que
se encuentran la actividad fosfolipasa extracelular, la
produccin extracelular de melanina y de prostaglandinas,
la produccin de cpsula de polisacridos y la habilidad
de crecer a 37C (Vartivarian et al.,1993; Vidotto et al.,
1996; Chen, 1997; Casadevall et al., 2000; Cox et al.,
2001; Noverr et al., 2001; Perfect , 2006; Bovers et al.,
2008).
La fosfolipasa puede daar las membranas celulares
del hospedador generando disfuncin y/o disrupcin fsica
de las membranas (Ghannoum, 2000) y jugar un rol
importante en la patognesis de este hongo oportunista
(Vidotto et al., 1998). Ms an, la posible asociacin de
produccin de fosfolipasa por cepas de Cryptococcus
virulentas ya fue reportada por Chen et al. (1998).
Con respecto a la actividad enzimtica extracelular
de fosfolipasa, Ganendren et al. (2006), observaron que
esta es necesaria para la iniciacin de la infeccin pulmonar,
debido a que aumenta considerablemente la adhesin de
la levadura al epitelio pulmonar. Santangelo et al. (2004),
demostraron que la actividad fosfolipasa promueve la
sobrevida y replicacin de C. neoformans en macrfagos,
lo que permite la iniciacin de la infeccin pulmonar
intersticial y que la fagocitosis mononuclear es el vehculo
para la diseminacin sistmica de esta levadura. Shea et
al. (2006), observaron que la actividad fosfolipasa protege
a C. neoformans de la accin ltica de las enzimas del
fagolisosoma del macrfago activado, y que esto aumenta
la diseminacin de la levadura al sistema nervioso.
La actividad fosfolipasa extracelular puede
detectarse en Candida albicans y C. neoformans median-
te diversas metodologas, tales como agar malta ms yema
de huevo, agar Sabouraud glucosado ms yema de huevo
(SEA) ( Price et al., 1982; Chen et al., 1997; Echeverra et
al., 2002) y pruebas especficas colorimtricas y
radiomtricas (Banno et al.,1985; Ghannoum et al., 2000).
El medio de cultivo SEA constituye un mtodo semicuan-
titativo, de amplia utilizacin y de mayor sensibilidad para
la deteccin de esta enzima en C. neoformans que otros
similares (Chen et al., 1997 y Echeverra et al., 2002) .
La sensibilidad de C. neoformans a antifngicos
utilizados en clnica para su tratamiento puede ser evaluada
in vitro mediante tcnicas estandarizadas tales como
mtodos de dilucin en caldo, Etest y mtodos de difusin
en agar , siendo este ltimo el de mayor uso en la actualidad
debido a su elevada precisin y exactitud (Barry et al.
2002; Pfaller et al., 2004), y su mejor relacin costo-
efectividad en comparacin con otros mtodos.
Actualmente, no existe evidencia de que esta infor-
22
2008
macin pueda correlacionarse con la respuesta teraputica
obtenida in vivo; sin embargo, un valor in vitro elevado
de CIM puede predecir el fallo teraputico de un antifngico
(Dannaoui et al., 2006 ).
El objetivo de este estudio es detectar la actividad
fosfolipasa en aislamientos clnicos y aviarios de C.
neoformans y evaluar su susceptibilidad in vitro a
Fluconazol
MATERIALES Y METODOS
Aislados de C. neoformans (Cn). Se utilizaron 19
cepas clnicas de Cn, aisladas de muestras de sangre y
LCR de pacientes con criptococosis, obtenidas en
diversos centros hospitalarios del pas y 17 cepas de Cn
obtenidas de deyecciones secas expuestas al medio
ambiente de aves exticas de 3 colecciones privadas y de
psitcidas de un centro de rehabilitacin de fauna nativa
de la Regin Metropolitana.
Deteccin de la actividad fosfolipasa. La deteccin
y cuantificacin de la actividad fosfolipasa extracelular se
realiz de acuerdo al mtodo de Price (1982), con algunas
modificaciones. Las cepas aisladas previamente fueron
sembradas en placas de Agar Sabouraud sin antibitico e
incubadas a 37C durante 48 hrs, posteriormente se
inocularon en placas con medio de cultivo SEA (agar
sabouraud glucosado con yema de huevo estril) e
incubadas a 37 C durante 5 das. Se midieron los
dimetros de las colonias y el dimetro total de la colonia
ms la zona de hidrlisis producida por la actividad
enzimtica y se calcul la relacin entre ambos valores
(ndice Pz de Price). A mayor valor de Pz, menor produccin
de fosfolipasa por la colonia. La lectura se realiz en todas
las muestras a los 5 das. Cada aislado de C. neoformans
se clasific de acuerdo al valor de su coeficiente Pz como
sigue: Pz muy alto (0.9-1); Pz alto (0.89-0.80); Pz bajo (0.79-
0.70); Pz muy bajo (< 0.69).
Susceptibilidad in vitro a Fluconazol : se evalu
mediante el mtodo de difusin con discos de 25 g de
Fluconazol (Becton Dickinson), de acuerdo a las
recomendaciones del documento M44-A de CLSI,
utilizando medio MuellerHinton con glucosa al 2% y azul
de metileno (MHGAM). Las 36 cepas aisladas previamente
fueron sembradas en placas de Agar Sabouraud sin
antibitico e incubadas a 37C durante 48 hrs, el inculo
se prepar en solucin salina y se ajust a 0.5 en la escala
Mc Farland por medida espectrofotomtrica. Se incluy
Candida krusei ATCC 6258 y Candida parapsilosis
ATCC22019 como cepas de control de calidad.
La interpretacin de los resultados se llev a
 Actividad de Fosfolipasa y susceptibilidad in vitro a Fluconazol en aislamientos clnicos y aviarios. - Perez et al.
.

Tabla 1: Actividad de fosfolipasa en cepas clnicas y aviarias de C. neoformans

Actividad Cepas de C neoformans

Valor Pz
fosfolipasa Clnicas Aviarias
(ndice Pz)a n (%) n (%)

< 0.69 ++++ 16 84,21 14 82,35

0.70 - 0.79 +++ 1 5,26 - -
0.80 - 0.89 ++ - - -
0.90 -1.0 + 2 10,53 3 17,65
a
Pz muy alto (+); alto (++); bajo (+++); muy bajo (++++)

cabo de acuerdo a la tabla N 1 de documento M44-A. DISCUSION

Segn el dimetro del halo de inhibicin del
crecimiento de la colonia; cada aislado frente al disco de
25 g de Fluconazol se clasific como sensible (>19mm),
sensible dosis dependiente (15-18mm), o resistente
(<14mm).
Anlisis Estadstico. Con el objeto de comparar
el valor Pz del da 5 de incubacin de las cepas de Cn de
origen humano y aviar, se utiliz la prueba estadstica de
Mann-Whitney con clculo de U para dos muestras
independientes.
RESULTADOS
Deteccin actividad fosfolipasa. En las 19 cepas
clnicas analizadas, los valores Pz al da 5 de incubacin
variaron en un rango de 0,26 a 1 (Promedio Pz= 0,44 0,21
y coeficiente de variacin (CV) de 48%). Cerca del 90%
present un ndice Pz bajo o muy bajo (1 y 16
respectivamente) y 2 muestras presentaron ndice Pz muy
alto (0.915 y 1). Slo en una de las cepas, no se detect
actividad fosfolipasa (Pz=1)
En las 17 cepas aisladas de deyecciones de aves,
los valores Pz al da 5, variaron entre 0,28 y 1 (promedio
Pz= 0,49 0,264 y CV de 54%). Catorce cepas presentaron
un Pz muy bajo (82%) y 3, muy alto (18%). En estas tres
cepas no se detect actividad fosfolipasa.
No hubo diferencias significativas entre los aislados
clnicos y los aviarios mediante la prueba de Mann Whitney
(p > 0,05), U=144.
La actividad fosfolipasa extracelular ha sido
implicada en la patognesis de infecciones bacterianas y
fngicas Ghannoum et al.( 2000), existen numerosas
publicaciones en que se ha detectado esta actividad en
levaduras, principalmente en Candida albicans y C.
neoformans usando diferentes mtodos para medirla (Price
et al.,1982; Chen et al., 1997; Echeverra et al., 2002).
Entre stos, el mtodo desarrollado por Price resulta
conveniente y sencillo de utilizar en un gran nmero de
aislados (Vidotto et al., 1998). Adems la correlacin entre
el valor Pz y la actividad fosfolipasa ya fue demostrada
(Price et al., 1982).
En el presente estudio, no hubo diferencias
significativas en los valores Pz entre las cepas de ambos
grupos, lo que concuerda con lo comunicado por Chen et
al. (1997), y difiere de lo reportado por Vidotto et al. (1998),
quienes si encontraron diferencias significativas.
En nuestro estudio, las cepas aviarias presentaron,
con respecto a los aislados clnicos un Pz promedio mayor
(0,49 vs 0,44); y un mayor nmero de aislados sin deteccin
de fosfolipasa (15,8% vs 5,3%). Esta tendencia se mantuvo
igual al estudio de Vidotto et al. (1998), donde las cepas
Tabla 2: Susceptibilidad in vitro a Fluconazol en
aislamientos clnicos y ambientales de C. neoformans
Susceptibilidad in vitro a
Cepas de
N Fluconazol
C. neoformans
%S %SDD %R

Susceptibilidad in vitro a Fluconazol . En 19 cepas Clnicas 19 89,47 - 10,53

clnicas, 17 (89,47%) fueron sensibles mientras que 2 Aviarias 17 58,82 29,41 11,77
(10,53%) resultaron resistentes. En 17 aislamientos
aviarios, 10 fueron sensibles (58,8%), 5 (29,4 %) sensibles Sensible (S, 19mm), sensible dosis dependiente
dosis dependiente y 2 (11,8%) resistentes (Tabla 2). (SDD,15-18mm), o resistente (R, 14mm)

23
 Boletn Micolgico Vol. 23 : 21 - 25
aviarias tambin presentaron, con respecto a las cepas
clnicas, un valor Pz promedio mayor (0,941 y 0,652
respectivamente) y un mayor nmero de cepas sin
deteccin de fosfolipasa (74% y 4,76%, respectivamente).
La mayora de las cepas estudiadas fueron
sensibles a Fluconazol (89,5% clnicas, 59% aviarias), pero
en las cepas aviarias se detect un mayor nmero de cepas
sensibles dosis dependiente (29%). Estos resultados son
similares a los obtenidos por Pfaller et al. ( 2007), en cepas
clnicas, que reportan una sensibilidad de 78% a Fluco-
nazol. Referente a las cepas aviares, un estudio identific
los aislados obtenidos a partir de un brote de Cryptoco-
cosis en psitcidas en Brasil como resistentes a Fluconazol
(Raso et al., 2004), mientras que en Malasia, todos los C.
neoformans aislados de deyecciones aviares fueron
sensibles al antifngico (Tay et al., 2005).
En base a lo expuesto podemos concluir que los
valores de Pz promedio fueron muy bajos en aislamientos
clnicos y aviarios de Cn, lo que se traduce en un nivel de
actividad fosfolipasa alta y sugiere un rol de la enzima en
la invasin al hospedero. En muy pocas cepas no se
detect la produccin de fosfolipasa.
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Santangelo, R., Zoellner, H.; Sorrell, T.; Wilson, C.; Donald,
C.; Djordjevic, J.; Shounan, Y.; Wright, L. (2004). Role of
extra cellular phospholipases and mononuclear phagocytes in
dissemination of Cryptococcosis in a murine model. Infection and
Immunity Apr:2229-2239
Shea, J.; Kechichian, T.; Luberto, C.; Del Poeta, M. (2006).
The Cryptococcal Enzyme Inositol Phosphosphingolipid-
Phospholipase C Confers Resistance to the Antifungal Effects of
Macrophages and Promotes Fungal Dissemination to the Central
Nervous System. Infection and Immunity; Oct: 59775988
Tay, S.T.; Chai, H.C.; Na, S.L.; Hamimal, H.; Rohani, M.Y.
 Actividad de Fosfolipasa y susceptibilidad in vitro a Fluconazol en aislamientos clnicos y aviarios.
M.; Soo-Hoo,T.S. (2005). The isolation, characteriza tion and
antifungal susceptibilities of Cryptococcus neoformans from birds
excreta in Klan Valley, Malaysia. Mycopathologia 159:509-513
Vartivarian, S.E.; Anaissie, E.J.; Cowart, R.E.; Sprigg, H.A.;
Tingler, M.J.; Jacobson, E.S. (1993). Regulation of cryptococcal
capsular polysaccharide by iron. J. Infect. Dis. 161:186-190
Vidotto, V.; Sinicco, A.; Di Fraia, D.; Cardaropoli, S.; Aoki,
S.; Ito-Kuwa, S. ( 1996) Phospholipase activity in Cryptococcus
neoformans. Mycopathologia 136:119-123
- Perez et al.
.
Vidotto, V.; Leone, R.; Sinicco, A.; Ito-Kuwa, S.; Criseo, G.
(1998). Comparison of phospholipase production in Cryptococcus
ne oformans isola tes from AIDS patients and bird droppings.
Mycopathologia 142:7176
Warnoc k, D. (200 7). Trends in the epidemiology of invasive
fungal infections. Jpn. J. Med. Mycol.; 48:1-12
25
Boletn Micolgico Vol. 23 : 21 - 25 2008

ACTIVIDAD DE FOSFOLIPASA Y SUSCEPTIBILIDAD IN

VITRO A FLUCONAZOL EN AISLAMIENTOS CLINICOS
Y AVIARIOS DE Cryptococcus neoformans
(Phospholipase activity and in vitro susceptibility to fluconazol
in clinical and aviars isolates of Cryptococcus neoformans)

Gabriel Prez C. (1), Gisela Gonzlez H. (2),

M. Cristina Daz J. (3)
(1). Facultad de Medicina, Universidad de Chile
(2). Programa Doctorado en Ciencias Silvoagropecuarias y Veterinarias, Universidad de Chile
(3).- Programa de Microbiologia y Micologa, ICBM,
Facultad de Medicina, Universidad de Chile.
mcdiaz@med.uchile.cl

Palabras clave: Fosfolipasa, Cryptococcus neoformans, susceptibilidad Fluconazol

Key words:Phospholipase, Cryptococcus neoformans, susceptibility Fluconazol

RESUMEN ABSTRACT

Se detect la actividad de fosfolipasa en 19 cepas Phospholipase activity was determined to 19

clinical and 17 aviars trains of C. neoformans var.
clnicas y 17 aviarias de C. neoformans var. neoformans,
neoformans, incubating the yeast for 5 days at 37 C on
usando Agar Sabouraud con yema de huevo,
Sabouraud Agar supplemented with egg yolk. Pz values
incubndose a 37C por 5 dias. Se determin el ndice
were determined and the following ranges were
Pz establecindose los siguientes rangos: Pz muy alto
established:very high (0.9-1), high (0.89-0.80), low
(0.9-1), alto (0.89-0.80), bajo (0.79-0.70) y muy bajo (<
(0.79-0.70) and very low (<0.69). The 84% of the clinical
0.69). El 84% de las cepas clnicas presentaron ndice
isolates showed Pz values very low ( 5% ) and 11%
Pz muy bajo, el 5% bajo y 11% muy alto. Mientras en las
very high. On the other hand, the 82% of the aviars strains
cepas aviarias el 82% presentaron ndice muy bajo y un
presented Pz values very low and 18% very high.
18% muy alto. Los valores de Pz promedio fueron muy
Average Pz values were very low in all isolates , there
bajos en todos los aislamientos, sin existir diferencias
were no statiscally significant differences (p>0.05)
significativas (p > 0,05) entre las cepas clnicas y
impliying a high enzymatic activity. Susceptibility in
aviarias, lo que implica una alta actividad enzimtica.
vitro testing to Fluconazole was performed by a disk
La susceptibilidad in vitro a Fluconazol se realiz por el
diffusion method (M44-A).The 89.5% of the clinical
mtodo de difusin con discos y el 89,5 % de las cepas
isolates were susceptible and 10.5% resistant, while in
clnicas fueron sensibles y el 10,5% resistentes, mientras
avian strains, 59% were susceptible, 29% susceptible
en las cepas aviarias, el 59% fueron sensibles, 29%
dose dependent and 12% resistant.
sensible dosis dependiente y un12% resistentes.

cin de esta enzima extracelular se relaciona eventualmente

INTRODUCCION
Cryptococcus neoformans es una levadura
capsulada que pertenece a los Basidiomycota (Garau,
2002) y que posee diversos factores de virulencia, entre
los cuales se encuentra la fosfolipasa y por ende la produc-
Recibido el 30 Octubre 2008
Aceptado el 5 Diciembre 2008
con patogenicidad (Ghannoum, 2000) .
Paralelamente al aumento de la poblacin en estado
de inmunodepresin, la infeccin por C. neoformans ha
emergido como una causa importante de morbilidad y
mortalidad, afectando especialmente a pacientes con SIDA
en etapa avanzada. Actualmente, representa la causa ms
comn de meningitis fngica en el mundo, y es una de las
levaduras ms frecuentemente asociadas a infeccin fn-

21
 Boletn Micolgico Vol. 23 : 21 - 25
gica invasora (Garca-Ruiz et al., 2004; Warnock, 2007).
La virulencia de esta levadura es un tema amplia-
mente estudiado, diversas investigaciones han descrito
factores de virulencia para C. neoformans, entre los que
se encuentran la actividad fosfolipasa extracelular, la
produccin extracelular de melanina y de prostaglandinas,
la produccin de cpsula de polisacridos y la habilidad
de crecer a 37C (Vartivarian et al.,1993; Vidotto et al.,
1996; Chen, 1997; Casadevall et al., 2000; Cox et al.,
2001; Noverr et al., 2001; Perfect , 2006; Bovers et al.,
2008).
La fosfolipasa puede daar las membranas celulares
del hospedador generando disfuncin y/o disrupcin fsica
de las membranas (Ghannoum, 2000) y jugar un rol
importante en la patognesis de este hongo oportunista
(Vidotto et al., 1998). Ms an, la posible asociacin de
produccin de fosfolipasa por cepas de Cryptococcus
virulentas ya fue reportada por Chen et al. (1998).
Con respecto a la actividad enzimtica extracelular
de fosfolipasa, Ganendren et al. (2006), observaron que
esta es necesaria para la iniciacin de la infeccin pulmonar,
debido a que aumenta considerablemente la adhesin de
la levadura al epitelio pulmonar. Santangelo et al. (2004),
demostraron que la actividad fosfolipasa promueve la
sobrevida y replicacin de C. neoformans en macrfagos,
lo que permite la iniciacin de la infeccin pulmonar
intersticial y que la fagocitosis mononuclear es el vehculo
para la diseminacin sistmica de esta levadura. Shea et
al. (2006), observaron que la actividad fosfolipasa protege
a C. neoformans de la accin ltica de las enzimas del
fagolisosoma del macrfago activado, y que esto aumenta
la diseminacin de la levadura al sistema nervioso.
La actividad fosfolipasa extracelular puede
detectarse en Candida albicans y C. neoformans median-
te diversas metodologas, tales como agar malta ms yema
de huevo, agar Sabouraud glucosado ms yema de huevo
(SEA) ( Price et al., 1982; Chen et al., 1997; Echeverra et
al., 2002) y pruebas especficas colorimtricas y
radiomtricas (Banno et al.,1985; Ghannoum et al., 2000).
El medio de cultivo SEA constituye un mtodo semicuan-
titativo, de amplia utilizacin y de mayor sensibilidad para
la deteccin de esta enzima en C. neoformans que otros
similares (Chen et al., 1997 y Echeverra et al., 2002) .
La sensibilidad de C. neoformans a antifngicos
utilizados en clnica para su tratamiento puede ser evaluada
in vitro mediante tcnicas estandarizadas tales como
mtodos de dilucin en caldo, Etest y mtodos de difusin
en agar , siendo este ltimo el de mayor uso en la actualidad
debido a su elevada precisin y exactitud (Barry et al.
2002; Pfaller et al., 2004), y su mejor relacin costo-
efectividad en comparacin con otros mtodos.
Actualmente, no existe evidencia de que esta infor-
22
2008
macin pueda correlacionarse con la respuesta teraputica
obtenida in vivo; sin embargo, un valor in vitro elevado
de CIM puede predecir el fallo teraputico de un antifngico
(Dannaoui et al., 2006 ).
El objetivo de este estudio es detectar la actividad
fosfolipasa en aislamientos clnicos y aviarios de C.
neoformans y evaluar su susceptibilidad in vitro a
Fluconazol
MATERIALES Y METODOS
Aislados de C. neoformans (Cn). Se utilizaron 19
cepas clnicas de Cn, aisladas de muestras de sangre y
LCR de pacientes con criptococosis, obtenidas en
diversos centros hospitalarios del pas y 17 cepas de Cn
obtenidas de deyecciones secas expuestas al medio
ambiente de aves exticas de 3 colecciones privadas y de
psitcidas de un centro de rehabilitacin de fauna nativa
de la Regin Metropolitana.
Deteccin de la actividad fosfolipasa. La deteccin
y cuantificacin de la actividad fosfolipasa extracelular se
realiz de acuerdo al mtodo de Price (1982), con algunas
modificaciones. Las cepas aisladas previamente fueron
sembradas en placas de Agar Sabouraud sin antibitico e
incubadas a 37C durante 48 hrs, posteriormente se
inocularon en placas con medio de cultivo SEA (agar
sabouraud glucosado con yema de huevo estril) e
incubadas a 37 C durante 5 das. Se midieron los
dimetros de las colonias y el dimetro total de la colonia
ms la zona de hidrlisis producida por la actividad
enzimtica y se calcul la relacin entre ambos valores
(ndice Pz de Price). A mayor valor de Pz, menor produccin
de fosfolipasa por la colonia. La lectura se realiz en todas
las muestras a los 5 das. Cada aislado de C. neoformans
se clasific de acuerdo al valor de su coeficiente Pz como
sigue: Pz muy alto (0.9-1); Pz alto (0.89-0.80); Pz bajo (0.79-
0.70); Pz muy bajo (< 0.69).
Susceptibilidad in vitro a Fluconazol : se evalu
mediante el mtodo de difusin con discos de 25 g de
Fluconazol (Becton Dickinson), de acuerdo a las
recomendaciones del documento M44-A de CLSI,
utilizando medio MuellerHinton con glucosa al 2% y azul
de metileno (MHGAM). Las 36 cepas aisladas previamente
fueron sembradas en placas de Agar Sabouraud sin
antibitico e incubadas a 37C durante 48 hrs, el inculo
se prepar en solucin salina y se ajust a 0.5 en la escala
Mc Farland por medida espectrofotomtrica. Se incluy
Candida krusei ATCC 6258 y Candida parapsilosis
ATCC22019 como cepas de control de calidad.
La interpretacin de los resultados se llev a
 Actividad de Fosfolipasa y susceptibilidad in vitro a Fluconazol en aislamientos clnicos y aviarios. - Perez et al.
.

Tabla 1: Actividad de fosfolipasa en cepas clnicas y aviarias de C. neoformans

Actividad Cepas de C neoformans

Valor Pz
fosfolipasa Clnicas Aviarias
(ndice Pz)a n (%) n (%)

< 0.69 ++++ 16 84,21 14 82,35

0.70 - 0.79 +++ 1 5,26 - -
0.80 - 0.89 ++ - - -
0.90 -1.0 + 2 10,53 3 17,65
a
Pz muy alto (+); alto (++); bajo (+++); muy bajo (++++)

cabo de acuerdo a la tabla N 1 de documento M44-A. DISCUSION

Segn el dimetro del halo de inhibicin del
crecimiento de la colonia; cada aislado frente al disco de
25 g de Fluconazol se clasific como sensible (>19mm),
sensible dosis dependiente (15-18mm), o resistente
(<14mm).
Anlisis Estadstico. Con el objeto de comparar
el valor Pz del da 5 de incubacin de las cepas de Cn de
origen humano y aviar, se utiliz la prueba estadstica de
Mann-Whitney con clculo de U para dos muestras
independientes.
RESULTADOS
Deteccin actividad fosfolipasa. En las 19 cepas
clnicas analizadas, los valores Pz al da 5 de incubacin
variaron en un rango de 0,26 a 1 (Promedio Pz= 0,44 0,21
y coeficiente de variacin (CV) de 48%). Cerca del 90%
present un ndice Pz bajo o muy bajo (1 y 16
respectivamente) y 2 muestras presentaron ndice Pz muy
alto (0.915 y 1). Slo en una de las cepas, no se detect
actividad fosfolipasa (Pz=1)
En las 17 cepas aisladas de deyecciones de aves,
los valores Pz al da 5, variaron entre 0,28 y 1 (promedio
Pz= 0,49 0,264 y CV de 54%). Catorce cepas presentaron
un Pz muy bajo (82%) y 3, muy alto (18%). En estas tres
cepas no se detect actividad fosfolipasa.
No hubo diferencias significativas entre los aislados
clnicos y los aviarios mediante la prueba de Mann Whitney
(p > 0,05), U=144.
La actividad fosfolipasa extracelular ha sido
implicada en la patognesis de infecciones bacterianas y
fngicas Ghannoum et al.( 2000), existen numerosas
publicaciones en que se ha detectado esta actividad en
levaduras, principalmente en Candida albicans y C.
neoformans usando diferentes mtodos para medirla (Price
et al.,1982; Chen et al., 1997; Echeverra et al., 2002).
Entre stos, el mtodo desarrollado por Price resulta
conveniente y sencillo de utilizar en un gran nmero de
aislados (Vidotto et al., 1998). Adems la correlacin entre
el valor Pz y la actividad fosfolipasa ya fue demostrada
(Price et al., 1982).
En el presente estudio, no hubo diferencias
significativas en los valores Pz entre las cepas de ambos
grupos, lo que concuerda con lo comunicado por Chen et
al. (1997), y difiere de lo reportado por Vidotto et al. (1998),
quienes si encontraron diferencias significativas.
En nuestro estudio, las cepas aviarias presentaron,
con respecto a los aislados clnicos un Pz promedio mayor
(0,49 vs 0,44); y un mayor nmero de aislados sin deteccin
de fosfolipasa (15,8% vs 5,3%). Esta tendencia se mantuvo
igual al estudio de Vidotto et al. (1998), donde las cepas
Tabla 2: Susceptibilidad in vitro a Fluconazol en
aislamientos clnicos y ambientales de C. neoformans
Susceptibilidad in vitro a
Cepas de
N Fluconazol
C. neoformans
%S %SDD %R

Susceptibilidad in vitro a Fluconazol . En 19 cepas Clnicas 19 89,47 - 10,53

clnicas, 17 (89,47%) fueron sensibles mientras que 2 Aviarias 17 58,82 29,41 11,77
(10,53%) resultaron resistentes. En 17 aislamientos
aviarios, 10 fueron sensibles (58,8%), 5 (29,4 %) sensibles Sensible (S, 19mm), sensible dosis dependiente
dosis dependiente y 2 (11,8%) resistentes (Tabla 2). (SDD,15-18mm), o resistente (R, 14mm)

23
 Boletn Micolgico Vol. 23 : 21 - 25
aviarias tambin presentaron, con respecto a las cepas
clnicas, un valor Pz promedio mayor (0,941 y 0,652
respectivamente) y un mayor nmero de cepas sin
deteccin de fosfolipasa (74% y 4,76%, respectivamente).
La mayora de las cepas estudiadas fueron
sensibles a Fluconazol (89,5% clnicas, 59% aviarias), pero
en las cepas aviarias se detect un mayor nmero de cepas
sensibles dosis dependiente (29%). Estos resultados son
similares a los obtenidos por Pfaller et al. ( 2007), en cepas
clnicas, que reportan una sensibilidad de 78% a Fluco-
nazol. Referente a las cepas aviares, un estudio identific
los aislados obtenidos a partir de un brote de Cryptoco-
cosis en psitcidas en Brasil como resistentes a Fluconazol
(Raso et al., 2004), mientras que en Malasia, todos los C.
neoformans aislados de deyecciones aviares fueron
sensibles al antifngico (Tay et al., 2005).
En base a lo expuesto podemos concluir que los
valores de Pz promedio fueron muy bajos en aislamientos
clnicos y aviarios de Cn, lo que se traduce en un nivel de
actividad fosfolipasa alta y sugiere un rol de la enzima en
la invasin al hospedero. En muy pocas cepas no se
detect la produccin de fosfolipasa.
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Warnoc k, D. (200 7). Trends in the epidemiology of invasive
fungal infections. Jpn. J. Med. Mycol.; 48:1-12
25
Boletn Micolgico Vol. 23 : 27 - 33 2008

ESPECIES DE Fusarium COMO AGENTES DE

QUERATITIS MICOTICAS EN ADULTOS
EN TUCUMAN, ARGENTINA
(Fusarium species as agents of mycotic keratitis in adults,
in Tucumn, Argentina)

R. Salim (1) & R. Runco (1, 2)

(1). Ctedra de Micologa. Instituto de Microbiologa
Fac. de Bioqumica, Qumica y Farmacia
Universidad Nacional de Tucumn
Ayacucho 491. (4000) San Miguel de Tucumn. R. Argentina.
(2). Lab. Micologa del Hospital del Nio Jess. Pasaje Hungra 750.
(4000) San Miguel de Tucumn. R. Argentina.
e-mail: rqsalim@rectorado.unt.edu.ar
Palabras clave: Queratitis, Fusarium spp, diagnstico micolgico.
Key words: Mycotic keratitis, Fusarium spp, Laboratory diagnoses

RESUMEN ABSTRACT

Las queratomicosis por hongos filamentosos
son una de las causas de dao en la crnea en los pases
de climas tropicales y subtropicales y se consideran
dentro de las micosis de difcil tratamiento. El presente
estudio evala la etiologa de las queratitis micticas
en Tucumn (R. Argentina) para determinar su incidencia
e importancia clnica regional. En un lapso de 5 aos se
estudiaron 48 muestras (biopsias, raspados corneales y/
o aspirados oculares) recogidas por el oftalmlogo y
enviadas al laboratorio para anlisis micolgico.
Mediante examen directo, cultivos y estudios macro y
micromorfolgicos se confirm etiologa mictica en 13
pacientes (27%). De ellos, se identificaron 7 cultivos
como Fusarium solani complex, 4 F. oxysporum y 2 F.
verticillioides. Estos hallazgos permiten profundizar el
conocimiento de los agentes etiolgicos locales involu-
crados y los factores de riesgo, dos aspectos importantes
en la prevencin y la teraputica de estas micosis.
Keratomycosis caused by filamentous fungi is one
of the agents of damage to the cornea in subtropical
and tropical climate countries and belongs to those
mycoses identified as of difficult treatment. This study
evaluates the etiology of mycotic keratitis in Tucumn
(R.Argentina) with the purpose of assessing its incidence
and regional and clinical significance. In a 5-year period,
48 samples (biopsy, corneal scrapes and/or ocular
aspiration) collected by the oculist were examined and
sent to the laboratory for a mycological analysis. By
means of direct exam, macro and micromorphological
cultures and studies of the presence of mycotic etiology
in 13 patients (27%) was confirmed. Among them 7 cultu-
res such as a Fusarium solani complex, 4 F. oxysporum
and 2 F. verticillioides were identified. These findings
allow to enlarge the knowledge of the local etiological
agents involved as well as the risk factors, two elements
that are significant in the prevention and therapeutics of
these mycoses.

INTRODUCCION factores: diagnstico tardo, tipo de enfermedad primaria

Las queratomicosis representan una de las formas
de queratitis ms difciles en su diagnstico y tratamiento,
constituyendo un problema oftalmolgico importante que
puede llevar rpidamente a la destruccin de la crnea y a
la prdida de la visin (3, 4, 38, 39). Las tasas de fracasos
teraputicos son muy altas y estaran relacionadas a varios
Recibido el 23 Abril 2008
Aceptado el 2 Julio 2008
o de base, reducida penetracin ocular del medicamento y
baja susceptibilidad antifngica de ciertos agentes
etiolgicos (9, 10, 19, 31, 37, 39).
Los hongos son agentes oportunistas que
raramente infectan las crneas saludables de los individuos
inmunocompetentes (26, 28, 29). Estos microorganismos
no pueden penetrar en el epitelio corneal intacto por lo
que, obviamente, es necesario un traumatismo o una
microlesin previa para iniciar su accin oportunista. El
agente traumatizante origina abrasiones en la crnea y al

27
 Boletn Micolgico Vol. 23 : 27 - 33
estar contaminado con propgulos fngicos, stos se
implantan en el tejido corneal. Una vez que se localizan en
el estroma, se reproducen, provocan necrosis y reaccin
inflamatoria en la membrana Descemet para llegar a la
cmara anterior o al segmento posterior, pudiendo
ocasionar endoftalmitis (1, 7, 39).
Una amplia variedad de hongos, filamentosos y
levaduras, han sido citados en la literatura mundial
especializada, como agentes etiolgicos de queratomi-
cosis, de los cuales las especies integrantes de los
gneros Candida, Aspergillus, y Fusarium son los ms
comunes (24,31). Las queratitis debidas a hongos
filamentosos ocurren con ms frecuencia en hombres
jvenes sanos, especialmente agricultores y trabajadores
del campo o jardinera, que sufren un traumatismo o
erosin del epitelio ocular por fragmentos de madera, restos
vegetales, polvo o materiales provenientes del suelo o los
animales (2, 20, 31, 32, 33).
Se han descrito numerosos factores predispo-
nentes a la queratomicosis, tales como el uso tpico de
corticoides, solos o combinados con antibiticos de amplio
espectro, el uso frecuente y prolongado de lentes de
contacto, enfermedades oculares preexistentes, cirugas
de crnea, infecciones postquirrgicas, enfermedad
sistmica, cuerpo extrao, edad, sexo, clima y estacin (3,
4, 5, 29, 32).
Ciertos factores ambientales como la humedad,
pluviometra elevada, altas temperaturas y viento intenso,
explican las variaciones en el aislamiento de los diversos
hongos fitopatgenos ambientales, as como la aparicin
estacional de las queratomicosis (9, 17, 19, 28).
La mayora de los hongos filamentosos asociados
con ulceraciones de la crnea en las zonas tropicales y
subtropicales son saprotrofos y termotolerantes que se
encuentran ampliamente distribuidos en el suelo y la
vegetacin, en especial las especies de Fusarium que
son fitopatgenos comunes particularmente en los cereales
(20). Su incidencia se correlaciona con la poca de las
cosechas y las estaciones con alta temperatura y humedad
(4 ,9). Durante las ltimas cuatro dcadas se ha informado,
de manera creciente, el aumento de esta micosis en
diferentes partes del mundo, debido a un mejor diagnstico
(2, 5). El presente estudio evala la etiologa de las queratitis
micticas en Tucumn (R. Argentina) para determinar su
incidencia e importancia clnica regional.
MATERIALES Y METODOS
En un lapso de 5 aos se procesaron 48 muestras
obtenidas por biopsia, raspado de cornea y/o aspirados
oculares de pacientes con diagnstico presuntivo de
queratitis mictica. Las muestras, obtenidas aspticamente
por el oftalmlogo fueron enviadas de inmediato al labora-
28
2008
torio para su procesamiento.
Con una porcin de las muestras se realizaron
preparaciones microscpicas para examen con KOH 10%
entre porta y cubre y tinciones con Gram y Giemsa. El
material restante fue sembrado segn el tamao de la
muestra en un mximo de 4 tubos con Agar-Sabouraud-
glucosado (SGA) adicionado de Penicilina (50 U.I./mL) y
Estreptomicina (80 g/mL). Los cultivos fueron incubados
2 a 27 C y 2 a 37C durante 3 a 20 das y fueron examinados
diariamente. Las muestras fueron consideradas positivas
cuando los hallazgos de la microscopa directa fueron
confirmados con el aislamiento de Fusarium a ambas
temperaturas en 2 ms tubos.
A partir de todas las colonias obtenidas en SGA,
en cada caso se procedi con la metodologa siguiente
(23): se tomaron pequeos inculos desde los esporo-
doquios o de los conidios presentes en el micelio areo,
diluyndose la muestra en un tubo con 5 mL de agua
destilada estril. Previa agitacin se dispersaron 0,2 mL
sobre una placa de PDA para obtener inicios de crecimiento
a partir de conidios aislados en el lapso de 2 das a 25C.
Posteriormente, con un asa de platino se transfiri en el
centro de 2 placas de PDA un trozo de una de las colonias
en desarrollo. El mismo procedimiento se efectu en agar
agua con hojas de clavel (CLA), esterilizadas con hipo-
clorito de sodio durante 5 minutos y lavadas 3 veces en
agua destilada estril (Modificacin de la tcnica de Nelson
et al. (25)). Dos a tres hojas de unos 2-3 cm se distribuyeron
en forma equidistante cerca de los bordes de las placas,
sembrndose trozos de las colonias en desarrollo en sus
orillas. Ambos medios de cultivo se incubaron en oscuridad
durante 7 a 14 das a 25C (12).
La identificacin de las especies se realiz segn
De Hoog & Guarro (8) y Nelson et al.(24), que incluyen
estudios macro y micromorfolgicos de los cultivos
(aspecto, textura, color de las colonias, velocidad de
crecimiento, forma y tamao de los macroconidios, forma,
cantidad y modo de formacin de microconidios, presencia
de mono o polifialides y clamidosporas).
RESULTADOS
De las 48 muestras procesadas, se confirm
etiologa mictica en 13 pacientes (27%). El examen
microscpico directo fue positivo en el 84.6% de los casos
(11:13). La concordancia entre los examenes directos
(elementos hifales, hialinos, finos, ramificados) y los
cultivos fue del 100%. De ellos, 7 (53,8%) cultivos fueron
identificados como Fusarium solani complex ; 4 (30,8%)
F. oxysporum y el resto (15,4%) F. verticillioides.
La Tabla 1 muestra la poblacin afectada por edad
y por sexo y los agentes etiolgicos encontrados. Del total
de 13 pacientes evaluados, 9 fueron de sexo de masculino,
 Especies de Fusarium como agentes de queratitis micticas en adultos en Tucumn, Argentina - R.Salim & R. Runco

Tabla 1. Factores predisponentes, ocupacin, edad, sexo y agentes etiolgicos aislados

Ocupacin /
Edad Sexo Aislamiento
F. predisponente
Agricultor
1 22 M F. solani
Traumatismo por cuerpo extrao
Absceso corneal
2 24 F F. verticillioides
Antibiticos y corticoides tpicos
3 33 F Lentes de contacto / lcera corneal F. oxysporum
Agricultor , Traumatismo por cuerpo extrao/
4 36 M F. solani
Antibiticos tpicos
Transportista de soja/
5 37 M F. solani
Diabetes/ Traumatismo por cuerpo extrao
Ciruga ocular
6 40 M F. oxysporum
Antibiticos y corticoides tpicos
7 48 F Lentes de contacto / lcera corneal F. verticillioides
Traumatismo por cuerpo extrao Leucemia
8 48 M F. solani
/terapia antiblstica
Ciruga ocular
9 50 M F. oxysporum
Antibiticos y corticoides tpicos
Agricultor
10 50 M F. solani
Traumatismo por cuerpo extrao
Agricultor
11 58 M F. solani
Traumatismo por cuerpo extrao
Agricultor
12 64 M Corticoterapia prolongada F. solani
Traumatismo por cuerpo extrao
Ciruga ocular
13 66 F F. oxysporum
Antibiticos tpicos
con un rango de edad entre 22 y 64 aos y 4 de sexo De los 4 F. oxysporum aislados, 3 provinieron
femenino con un rango de edad entre 24 y 66 aos. La de muestras de pacientes con ciruga ocular previa.
mayor incidencia fue encontrada en el grupo de 33-50 aos
(8:13) con predominio en el sexo masculino (9:4) dedicados Descripcin de las especies
a la agricultura (6:9). De los 9 hombres estudiados, 6 Fusarium solani (Mart.) Appel & Wollenw. Emend.
posean antecedentes de traumatismos durante el Snyd. & Hans. complex. En APD es de crecimiento rpido:
desempeo de su actividad laboral. Del total de mujeres >50 mm en una semana. La colonia presenta un aspecto
estudiadas, 2 eran portadoras de lentes de contactos liso y algodonoso de color blanco grisceo, crema a ante.
blandas, una de ellas sufri un traumatismo con las mismas, Generalmente el reverso no es coloreado o es de color
mientras el otro caso sufri un traumatismo con partculas crema plido a tonos caf. En CLA, los microconidios son
de un vegetal. abundantes, en falsas cabezas, ovoides a oblongos 0-1
No se hallaron factores predisponentes diferentes septo. Su tamao oscila entre 8-16 x 2-4,5 m y son
a los ya descritos. Los encontrados incluyeron: trauma- producidas en monofilides alargadas y finas que suelen
tismo (54%), uso de antibiticos tpicos (38%), uso de medir 40-80 x 2,5-3 m. Las monofilides nacen lateralmente
lentes de contacto (15,4%) inmunosupresin sistmica de la hifa y a veces son ramificadas. Hacia la punta se
(7,7%), y ciruga ocular previa (23%). La mayora de los adelgazan y presentan collaretes poco definidos. Los
pacientes (7:13) presentaron lesin corneal causada por macroconidios, cuyo tamao aproximado es de 28-65 x 4-6
traumatismo con partculas vegetales. El uso prolongado m, se observan en menor cantidad que los microconidios
de corticoides como factor predisponente fue observado y nacen de conidiforos cortos y ramificados que
en 1 paciente, y la queratitis fngica con enfermedad frecuentemente forman esporodoquios en la superficie del
sistmica en 2 pacientes (Tabla 1). agar, generalmente de color crema. Presentan entre 3 y 5

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 Boletn Micolgico Vol. 23 : 27 - 33
tabiques y tienen forma de media luna, con las superficies
ventrales y dorsales paralelas en la mayor parte de su
longitud. La clula apical es corta y redondeada y la clula
basal redondeada o claramente con forma de pie. Las
clamidosporas son frecuentes, con una pared lisa o rugosa.
Se observan aisladas o en parejas, terminales o intercalares
y tienen un tamao de 6-10 m de dimetro.
Fusarium oxysporum Schlecht.:Fr. complex. En
APD a 25C presenta un crecimiento rpido: > 50 mm en
una semana. Al principio la colonia es lisa y algodonosa.
Con el tiempo se torna de color blanco a salmn plido,
tindose de violeta plido en su zona central. El reverso
es generalmente de color prpura. Produce un pigmento
prpura-violeta que difunde al medio. Los esporodoquios,
presentes en algunas cepas, dan una coloracin crema
anaranjada al cultivo. En CLA, los microconidios siempre
en falsas cabezas, son ovoides o en forma de rin, con
un tamao de 5-12 x 2,3-3,5 m y, ocasionalmente, con 0, 1
o 2 tabiques. Nacen de monofilides laterales, cortas y
anchas, afiladas hacia la punta, con collaretes poco
definidos, solitarias o ramificadas. Los macroconidios
tienen de 3 a 5 septos. Su tamao es de 25- 42 x 3-4,5 m.
Tienen forma de media luna, ligeramente curvadas, con
pared fina y delicada. Su clula apical es afilada y la clula
basal con forma de pie, pero pueden presentar ambos
extremos aguzados. En la mayora de los cultivos las
clamidosporas son abundantes. Son grandes, hialinas, de
pared lisa o rugosa y pueden observarse aisladas, en
parejas o en cadenas ya sea intercalares o terminales.
Fusarium verticillioides (Sacc.) Nirenberg. En
APD a 25C es de crecimiento rpido, >60 mm en una
semana con abundante micelio areo algodonoso, de color
blanco, rosa salmn que se tie de color azulado o prpura
en pocos das. El color del reverso vara de crema a violeta.
En CLA los microconidios son ovoides o en forma de maza
con base truncada, generalmente sin septos o 1 o 2
tabiques. Se disponen en largas cadenas y en falsas
cabezas y su tamao es de 7-10 x 2,5-3,2 m. La presencia
de abundantes microconidios condiciona el aspecto
pulverulento de la colonia. Los conidiforos nacen
lateralmente de la hifa y son escasamente ramificados. Las
clulas conidigenas son monofilides, habitualmente
delgadas y largas, pero menores que la de F. solani (20-30
x 2,3 m). Los macroconidios a veces son escasos en
algunas cepas. Cuando existen son ligeramente fusiformes,
casi rectos, con superficies dorsales y ventrales levemente
paralelas, de pared fina y delicada. Las clulas basal y
apical son alargadas y ligeramente curvadas. Pueden tener
entre 3 y 7 tabiques y su tamao es de 31-58 x 2,7-3-6 m.
No forma clamidosporas. Los esporodoquios se formaron
raramente en algunos aislamientos, presentando un color
naranja plido.
30
2008
DISCUSION
A nivel mundial, la incidencia de los diferentes
hongos causales de queratomicosis vara segn el rea
geogrfica, y zonas climticas. Los climas tropicales o
subtropicales, calurosos y hmedos, favorecen la
proliferacin ambiental de los hongos filamentosos de hifas
tabicadas, generalmente Fusarium y Aspergillus, mientras
que se da una mayor presencia de Candida en los climas
ms fros (6, 31, 39). Dependiendo de las variaciones
climticas en un mismo pas, se observa que la
presentacin de estas infecciones vara de acuerdo a las
regiones, al grado de exposicin de la poblacin, a los
factores de riesgo y al origen, urbano o rural, de la
poblacin estudiada. Tucumn, su ubica en el noroeste
argentino, regin clida subtropical, con 1000 -1200 mm
de lluvias anuales, de vegetacin abundante, con economa
agrcola. En este contexto, las lceras corneales, al parecer
resultan ms frecuente en economas agrcolas (20, 22, 28).
La cornea humana puede ser infectada por ms
de 70 especies pertenecientes a cuarenta gneros de
hongos de los cuales Candida, Aspergillus, y Fusarium
son los ms comunes (24, 31). En concordancia con los
resultados de otras investigaciones realizadas en pases
Latinoamericanos (2, 6, 21, 22), en el presente estudio
Fusarium ha sido el agente ms frecuente de querato-
micosis en nuestro medio, resultando Fusarium solani la
especie ms aislada. En todos los casos en que se aisl F.
solani, los pacientes, dedicados a la agricultura, refirieron
haber sufrido un traumatismo reciente de crnea. Estos
datos son coincidentes con los observados en otros
estudios (2, 21).
En la mayora de los casos, las especies de
Fusarium son las predominantes. Por ejemplo, en una
revisin de 156 casos de queratomicosis realizada en la
India el 32.3% fueron causadas por Fusarium, 29% por
Aspergillus, 12.9% Alternaria, y 6.4% por Candida (35).
Sin embargo, cada vez se van incluyendo nuevas especies
a la larga lista de agentes fngicos capaces de causar quera-
titis, especialmente en climas tropicales, tales como Curvu-
laria senegalensis (12), Phaeoisaria clematidis (13),
Sarcopodium oculorum (14), Beauveria bassiana (16) y
especies de Fusarium que no haban sido diagnosticadas
como agentes de queratomicosis humana (15).
Los integrantes del gnero Fusarium
(Ascomycota, Pezizomycotina, Hypocreales, Hypocrea-
ceae) son hongos filamentosos, hialinos y septados. Su
frecuencia como agente causal de queratomicosis, en otras
investigaciones, es de hasta un 37% para F. oxysporum, y
24% para F. solani (7).
La queratitis causada por especies de Fusarium
es clnicamente similar a la producida por otros hongos
pero su pronstico es peor (21, 33, 38). La presencia de
 Especies de Fusarium como agentes de queratitis micticas en adultos en Tucumn, Argentina - R.Salim & R. Runco
glaucoma maligno es una complicacin severa de la
queratitis producida por Fusarium (18). La especie ms
comn que causa infecciones oculares es F. solani
complex (8, 30, 32, 40). Los miembros de este complex han
aumentado su importancia como agentes causantes de
micosis humanas, particularmente en pacientes
inmunocomprometidos. Son conocidos como saprofitos
y fitopatgenos. El complejo incluye muchas especies
filogenticos distintas, distribuidas en 4 mayores linajes,
en todos ellos se encontraron especies aisladas desde
infecciones oculares (40). F solani complex, ha sido
descrita en casos de queratitis relacionadas con el uso de
lentes de contacto (3, 18). Le sigue en frecuencia F.
oxysporum (3, 9, 36, 38). F. verticillioides, F. dimerum y
F. sacchari, estn ms raramente implicadas en infecciones
oculares (11, 15, 26, 36, 38). Guarro et al. (2003), ha
reportado un caso de queratitis producido por F.
polyphialidicum (15).
Nuestros resultados son concordantes con los
de diversos estudios, realizados en diferentes pases,as
como en Argentina (42, 43, 44, 45) a pesar que no todos
los agentes corresponden a integrantes del gnero
Fusarium, por lo que se puede afirmar que el traumatismo
es el factor predisponente ms frecuente (44-55%) a las
infecciones fngicas de los ojos, seguido por la
enfermedad sistmica (11,2%) y la ciruga previa (9,8%).
Los traumatismos con elemento vegetal son responsables
del 60-70% de las lesiones que son consideradas
predictoras de una queratitis fngica (21, 27, 28, 30).
Como las lesiones no son patognomnicas de
infeccin mictica del ojo, es el oftalmlogo quien debe
considerar, adems, otras causas microbianas (bacterianas,
virales y/o parasitarias). Si bien el diagnstico comienza
con la sospecha clnica, ste se establece, principalmente,
mediante los cultivos o la biopsia de crnea. Como uno de
los diagnsticos diferenciales de queratomicosis es la
queratitis bacteriana, la terapia inicial con antibiticos
tpicos slo se justifica cuando no se cuenta con el
soporte del laboratorio. Es por ello que, en el 38% de los
casos que hemos analizado existe el antecedente de
medicacin previa con corticoides y/o antibiticos tpicos
entre el momento en que aparecieron las manifestaciones
y el diagnstico de queratomicosis.
Al respecto, Torres Rodrguez (34) seala que, en
su gran mayora (a veces ms del 50%), los enfermos
reciben tratamiento tpico con corticoides y/o antibiticos
y que, por lo general, el diagnstico definitivo sobreviene
tarde, tanto si se trata de una queratitis mictica como
bacteriana. A menudo, y desafortunadamente, muchos
oftalmlogos piensan en una queratomicosis despus que
una presunta queratitis bacteriana se empeora durante
terapia antibitica.
Nos parece importante sealar que el diagnstico
de las infecciones fngicas requiere que el especialista
pueda establecer la presencia de patologa oftlmica (lo
que requiere de instrumental especial) y pueda obtener
tejido en el que el microorganismo causal sea visualizado
(17). Frente a cualquier lcera corneal es imprescindible
descartar que el agente causal sea un hongo, y si lo es, es
necesario identificar de qu hongo se trata, ya que estos
datos son fundamentales en el enfoque teraputico del
paciente (17).
El traumatismo de crnea es la primera causa de
las queratitis microbianas y siempre existe riesgo de
infeccin mictica cuando el paciente tiene antecedente
de trauma corneal. En nuestro estudio, hemos corroborado
la alta frecuencia de queratitis mictica en pacientes con
traumatismo de crnea por cuerpo extrao (54%), que se
describe en la literatura mundial.
Las infecciones fngicas del ojo han sido
comunicadas en forma progresiva durante las ltimas
dcadas a nivel mundial. Si bien no se trata de las
afecciones ms frecuentes entre las infecciones de la
crnea, la dificultad para su tratamiento, los problemas
para la identificacin etiolgica, la diversidad de
presentaciones clnicas observadas en cada caso, y
tambin los nuevos casos que emergen cada ao, hacen
de esta micosis un importante objeto de estudio. Por ello,
coincidimos con Lek et al.(20), en que es fundamental
conocer la etiologa local de queratitis en una regin
particular ya que guarda relacin con el tratamiento, debido
a que no siempre existen laboratorios especializados y
entonces el diagnstico depende del conocimiento clnico
y el tratamiento instituido, ser, en el mejor de los casos,
emprico.
La incidencia de esta micosis en Tucumn no ha
sido establecida anteriormente. Si bien el diagnstico debe
basarse en un alto nivel de sospecha, sobre todo
atendiendo a los factores de riesgo mencionados y la
evolucin del cuadro clnico, el laboratorio de
microbiologa es el que establece el diagnstico especfico.
CONCLUSIONES
El bajo nmero de pacientes con diagnstico
micolgico confirmado, revela la poca sospecha de esta
infeccin en nuestro medio.
La comprensin de los aspectos epidemiolgicos
regionales, factores de riesgo y agentes etiolgicos
(hongos levaduriformes o filamentosos) son importantes
en la sospecha clnica, prevencin y teraputica apropiada
de estas micosis. En nuestro estudio el principal factor de
riesgo correspondi a traumatismo relacionado con
partculas vegetales.
Si bien varias especies de hongos capaces de crecer
31
 Boletn Micolgico Vol. 23 : 27 - 33
a 37C pueden causar queratomicosis, los hongos que
hemos diagnosticado en Tucumn, pertenecen a tres
especies del gnero Fusarium: F. solani complex, F.
oxysporum y F. verticillioides.
La rpida intervencin del laboratorio es
importante para establecer el diagnstico y tratamiento
adecuado.
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33
Boletn Micolgico Vol. 23 : 35 - 41 2008

ZIGOMICOSIS CUTANEA PRIMARIA POR

Rhyzopus oryzae EN UNA NIA CON LEUCEMIA
LINFOBLASTICA AGUDA TIPO B
(Primary Cutaneous Zygomycosis by Rhyzopus oryzae in a girl diagnosed
with an Acute Lymphoblastic Leukemia B Type)

R. Salim (1), R. Runco (1, 2), C. Alvarez (2), S. Romano (3) & M. Charre (2)
1. Ctedra de Micologa-Fac. de Bioqumica, Qumica y Farmacia
Universidad Nacional de Tucumn Ayacucho 491. (4000) Tucumn. R. Argentina.
2. Lab. Micologa del Hospital del Nio Jess. Pasaje Hungra 750.(4000) Tucumn. R. Argentina.
3. Ctedra de Dermatologa- Fac. de Medicina. U. N. T.
Ayacucho 491. (4000). R. Argentina.
e-mail: rqsalim@rectorado.unt.edu.ar
Palabras claves: zigomicosis cutnea primaria, leucemia, Rhizopus oryzae
Key words:Primary cutaneous zygomycosis, leukemia, Rhizopus oryzae

RESUMEN
La Zigomicosis es una infeccin infrecuente
causada por hongos oportunistas integrantes del orden
Mucorales, que se presenta en pacientes de alto riego
como en: leucemia, linfomas con neutropenia prolon-
gada, cetoacidosis diabtica, malnutricin severa,
ruptura de la integridad de la barrera cutnea y terapia
inmunosupresora. Se presenta un caso de Zigomicosis
cutnea en una paciente peditrica con leucemia linfo-
blstica aguda de tipo B, con severa neutropenia y
tratamiento con corticoides. A los cinco das de su hospi-
talizacin desarroll en el antebrazo (zona de puncin
venosa), una lesin indurada, eritematosa, que progres
y ulcer. A partir de exudados y biopsias del tejido subcu-
-tneo se realizaron exmenes microscpicos directos
con KOH, cultivos en agar Sabouraud y estudio histol-
gico a travs de tcnicas convencionales de hematoxi-
lina-eosina y PAS. Los anlisis de los materiales clnicos
revelaron la presencia de hifas hialinas, no tabicadas,
gruesas, compatibles con un Zygomycete. En todos los
tubos se obtuvo abundante desarrollo de un hongo fila-
mentoso, identificado como Rhizopus oryzae. Posterior-
mente a la escisin quirrgica y tratamiento con
anfotericina B se obtuvo una evolucin favorable del
paciente hasta el presente.
ABSTRACT
Zygomycosis is an infrequent infection caused by
opportunistic fungi which belong to the order Mucorales
and which is present in high risk patients diagnosed
with : leukemia, lymphomas with prolonged neutropenia,
diabetic cetoacidosis, severe malnutrition, rupture of the
entire cutaneous barrier and immunesuppressing
therapy. This paper deals with a case of cutaneous
Zygomycosis in a pediatric patient diagnosed with acute
lymphoblastic leukemia B type, suffering a severe
neutropenia and corticosteroid treatment. On the fifth
day of hospitalization, her forearm (venous puncture
zone) showed an indured, erimatose lesion which
progressed and ulcerated. Collection of exudates and
biopsies of subcutaneous tissue served to carry out direct
microsco-pic examinations with KOH, cultures in
Sabouraud Agar and a histologic study through
conventional hematoxilin-eosin and PAS techniques.
Analyses of the clinical materials revealed the presence
of hyaline, not septated and broad hyphae suitable to a
Zygomycete. In all the tubes there was an abundant
development of filamentous fungus identified as Rhizopus
oryzae. After the surgical scission and treatment with
anfotericine B, the patient showed a favorable evolution
up to now.

INTRODUCCION o zigomicosis. Los gneros y especies de la familia Mucora-

Los hongos del orden Mucorales son los agentes
causantes de lo que clsicamente llamamos mucormicosis
Recibido el 12 de Abril 2008
Aceptado el 8 de Octubre 2008
ceae, son los que causan ms frecuentemente zigomicosis
y de ellos los ms comunes son Rhizopus oryzae y R .
microsporus var. rhizopodiformis. Otros agentes
etiolgicos descritos en el hombre son: Rhizomucor
pusil lus, Absidia corymbifera, Cunninghamella

35
 Boletn Micolgico Vol. 23 : 35 - 41
bertholletiae y con menor frecuencia se diagnostican
casos originados ocasionados por Saksenaea vasiformis,
Mucor circinelloides, M. ramosissimus, Apophysomyces
elegans, Cokeromyces recurvatus y Syncephalastrum
racemosum (20, 21, 23, 29, 32). En pacientes peditricos,
los agentes etiolgicos identificados han sido fundamen-
talmente Rhizopus spp. y espordicamente Absidia spp.
(1, 20, 23, 28, 37).
Los Mucorales no forman parte de la microbiota
residente del hombre. Ocasionalmente es posible
encontrarlos como agentes saprobios de la piel y mucosas
de individuos sanos o de pacientes hospitalizados (14, 21,
22, 35). Esta cualidad, junto con su facilidad para crecer
en los medios habituales para hongos, hace que los cultivos
positivos constituyan, en s mismos, tan slo una
sospecha de infeccin, y que sta deba ser confirmada
por la demostracin de los hongos en los tejidos afectados
(8, 28).
La caracterstica epidemiolgica ms relevante de
los Zygomycetes es su ubicuidad. Han sido identificados
en el medio ambiente hospitalario e incluso en los sistemas
de aire acondicionado, lo que representa, al igual que
Aspergillus spp., una amenaza para la poblacin de
pacientes inmunocomprometidos (35, 36). Las esporan-
giosporas pueden ser vehiculizadas en el mbito
hospitalario por corrientes de aire o por objetos en contacto
directo con los pacientes (gasas, vendas, una variedad de
productos adhesivos usados en su ajuste y bajalenguas
de madera contaminados), que pueden originar infecciones
nosocomiales (7, 9, 12, 22, 25, 32).
La infeccin se adquiere principalmente por
inhalacin de esporas, las que colonizan los senos
paranasales y nasofaringe; ocasionalmente se puede
adquirir por inoculacin cutnea de esporas o ingestin
inadvertida de productos contaminados. No se ha
documentado transmisin de persona a persona (14).
Los factores que predisponen la infeccin por
estos hongos son mltiples. Entre ellos: acidosis
metablica, cetoacidosis diabtica, el uso de Desferoxami-
na, leucemia en fase de neutropenia prolongada, linfoma y
sndrome mielodisplsico, trasplante de rganos slidos
y de precursores hematopoyticos, desnutricin severa,
ruptura de la integridad de la barrera cutnea (ciruga,
traumatismos, quemaduras graves, punciones con agujas
contaminadas, mordeduras o picaduras de insectos,
vendajes contaminados, insercin de catter, pinchazos y
otros tipos de lesiones cutneas, etc.) (12, 13, 17, 23, 25,
26, 29 ,31, 37). Tambin pueden afectar a enfermos bajo
teraputicas inmunosupresoras, nios prematuros y a
infectados por VIH (1, 8, 13, 17, 18, 19, 32, 34, 38).
Despus del contacto con los tejidos, estos
hongos raramente producen infecciones e invasin, y en
una alta proporcin de los casos se comportan como meros
36
2008
colonizadores (32). La integridad de las barreras cutneo-
mucosas y un sistema inmunitario competente son las
primeras lneas de defensa con que se encuentran las
esporas.
La enfermedad se caracteriza por la rpida
invasin de tejidos y estructuras vasculares con las
consiguientes vasculitis y trombosis que conducen a
infartos y necrosis tisular (2, 3, 5, 7, 12, 14, 15, 22, 24, 25, 27,
28, 31, 32, 38). Tpicamente, la infeccin implica el rea
rhino-facial-craneal, los pulmones, el tracto gastrointes-
tinal, la piel, y menos comnmente otros sistemas de
rganos (21, 22).
Se describen seis formas clnicas de mucormicosis:
cutnea, gastrointestinal, pulmonar, rinocerebral,
diseminada y una forma miscelnea, que engloba
localizaciones como endocarditis, miocarditis, meningitis,
absceso cerebral, endoftalmitis, cistitis, peritonitis,
osteomielitis, artritis, miositis y pielonefritis (14, 20, 29,
32). En nios se han descrito principalmente las formas
cutnea e intestinal en neonatos y las formas pulmonares
y rinocerebral en pacientes diabticos e inmunocompro-
metidos (1, 17, 37, 38).
La zigomicosis cutnea primaria se clasifica en:
superficial, nodular, y gangrenosa. En cualquier caso, se
inicia como vesculas o pstulas que pronto se transfor-
man en lceras o escaras.
El tipo superficial es poco sintomtico y tiene el
aspecto de una lcera que no sana. El tipo gangrenoso
muestra una progresin fulminante con extensin hacia
los tejidos profundos. Otras formas incluyen prpura,
induracin y ulceracin con formacin de escara. En la
periferia de las lesiones cutneas, generalmente existen
reas de celulitis que pueden ser intensamente dolorosas
a la palpacin, aunque algunas zonas pueden ser
insensibles debido a la necrosis (19). Pueden ser rpida-
mente agresivas, incluso frente al desbridamiento apro-
piado y al tratamiento mdico (32).
En el husped immunocompetente, se manifiesta
con vesculas o pstulas que eventualmente progresan
formando costras (12). Por el contrario, en el paciente
inmunocomprometido las lesiones, rojas e induradas,
progresan formando costras negras que, al desprenderse,
dejan lceras grandes. La preferencia angioinvasiva de
los zygomycetes, con la consecuente diseminacin por
debajo de las estructuras cutneas, culmina con la necrosis
rpida y progresiva no slo de los tejidos cutneos y
subcutneos, sino tambin de la grasa, msculos,
tendones, el hueso adyacente y seguir un curso fulminante
(3, 12, 15, 23, 26, 30, 31).
Frente a este tipo de lesiones cutneas, se debe
realizar diagnstico diferencial con infecciones bacterianas
necrotizantes, aspergilosis, tuberculosis, sfilis y otros
procesos granulomatosos. El diagnstico de zigomicosis
 Zigomicosis cutnea primaria por Rhyzopus oryzae - R. Salim et al.

se establece por la demostracin de las hifas en el material

de biopsia.
En este trabajo describimos los aspectos
histolgicos y clnicos de una zigomicosis cutnea primaria
causada por Rhizopus oryzae en el antebrazo de una
paciente peditrica con leucemia linfoblstica aguda de
tipo B, con severa neutropenia y tratamiento con
inmunosupresores.

CASO CLINICO

Paciente femenina, de 2 aos de edad, residente

en Alto Verde, Concepcin, (Tucumn R. Argentina)
consulta por cuadro clnico de 15 das de evolucin, con
Fig. 2. Hifas cenocticas en el examen directo (KOH
lesin ampollar en la regin submaxilar izquierda, tos y 10%) de muestra de exudado seropurulento
fiebre persistente. Es medicada con Cefalexina (140/mg/
kg/da) durante 9 das. Debido a la mala evolucin de la
lesin, fiebre persistente y disminucin de peso, se decide
su internacin en el Hospital de Concepcin. El da 20 de
febrero de 2008 ingresa febril, con palidez mucocutnea,
poliadenopata latero-cervical, supraclavicular izquierda,
axilar e inguinal y hepatoesplenomegalia. Es tratada con
Clindamicina y Dipirona. Despus de recibir los resultados
de laboratorio se diagnostica pancitopenia febril. Es
derivada con urgencia al Hospital del Nio Jess el 22/2/
2008. A su ingreso impresiona como una paciente en estado
general grave, hemodinmicamente compensada, con
sndrome linfoproliferativo y absceso submaxilar izquierdo
de etiologa desconocida.
Con diagnstico presuntivo de leucemia, es Fig. 3. Hifas anchas no tabicadas, Coloracin HE (100X)
derivada a la Sala de Inmunodeprimidos. Presenta
poliadenopatias mviles y dolorosas a la palpacin,
petequias en los miembros inferiores y tumefaccin
eritematosa en regin submaxilar izquierda. Es medicada
con Ceftazidima, Amikacina y Clindamicina. Sus exmenes

Fig. 4. Aspecto micromofolgico (Guegun 40X)

de laboratorio iniciales mostraron: leucocitos 25.000 cel;

clulas blsticas 97%, linfocitos 2%, monocitos 1%,
hemoglobina 6,20 g/dl, hematocrito 19,6% y plaquetas
18000. Se observa marcada hipocroma y anisocroma.
Fig. 1. Zigomicosis cutnea primaria con necrosis glicemia normal; protenas totales 8.6 g/dl, urea 0.42 g/L;

37
 Boletn Micolgico Vol. 23 : 35 - 41
GPT 45 U/L. El laboratorio de Microbiologa inform
hemocultivo negativo, E. coli en urocultivo y Staphy-
lococcus aureus en el exudado del absceso submaxilar. Al
examen micolgico directo del exudado no se observaron
elementos fngicos ni se aislaron hongos en los medios
de cultivo especficos.
A los cinco das de su hospitalizacin (27/2/08),
desarroll en el antebrazo derecho, correspondiendo a la
zona de puncin venosa, una lesin indurada, eritematosa,
que progres y en cinco das se ulcer (3/3/08). La lesin,
de 7 por 5 cm, dolorosa, trpida, irregular, de bordes
policclicos e hipertrficos, centralmente necrtica,
rodeada de piel eritematosa que presentaba un fondo
irregular con exudado seropurulento (Fig. 1). Se realiz
toma de muestra por puncin aspiracin de la lesin y
sangre que se enviaron para examen bacteriolgico y
micolgico (directo y cultivos). Los hemocultivos fueron
negativos. Los cultivos bacterianos fueron positivos para
S. aureus meticilino resistente. Al examen micolgico
directo (KOH, Giemsa y Gram) se observaron hifas hialinas
cenocticas semejantes a Zygomycetes (Mucorales)
resultado que fue inmediatamente informado al mdico
tratante (Fig.2). Se inici tratamiento con antibiticos
parenterales (Ceftazidima y Amikacina), sin presentar
mejora. A las 72 h de incubacin a 37 C en los cultivos en
Agar Sabouraud Glucosa (SGA), se obtuvo el desarrollo
de colonias lanosas y blanquecinas de un hongo
filamentoso, hialino, con hifas cenocticas, compatible con
Rhizopus sp. Respecto a este resultado se mantuvo
conducta expectante.
Dos das despus (5/3/08), se recibi muestra de
una escarectoma de la lesin necrtica para anlisis
microbiolgico. Al examen micolgico directo nuevamente
se observaron hifas hialinas cenocticas. En los cultivos
en SGA a las 72 h de incubacin a 37 C se obtuvo, otra
vez, el desarrollo de colonias lanosas y blanquecinas de
un hongo filamentoso, hialino, con hifas cenocticas,
posteriormente identificado como Rhizopus oryzae (Fig. 3
y 4). Se informaron los cultivos de hongos como positivos
y ante el diagnstico presuntivo de zigomicosis, el da 6/
3/08 se realiz exresis quirrgica amplia y se inici
medicacin con Anfotericina B liposomal (1,5mg/Kg/dia)
por vas intravenosa y tpica, ms limpiezas quirrgicas
cada 3-4 das manteniendo terapia antibacteriana. El da
13/03/08 se recibi nuevo material de tejido subcutneo
necrtico y msculo para estudios micolgicos e histopa-
tolgicos. El examen directo y cultivos de la muestra de
msculo fueron negativos mientras que el anlisis
microscpico del tejido subcutneo volvi a revelar hifas
idnticas a las muestras anteriores. Nuevamente se obtuvo
cultivo puro de R . oryzae, en todos los cultivos del tejido
subcutneo.
El estudio histopatolgico, a travs de tcnicas
38
2008
convencionales de hematoxilina-eosina y PAS, revel ex-
tensas reas de necrosis en dermis e hipodermis con
presencia de abundantes hifas no septadas y anchas
penetrando la dermis y los vasos sanguneos, confirmando
el diagnstico micolgico (Fig. 2).
Como complemento de la terapia antifngica, la
zona fue lavada en reiteradas oportunidades con solucin
salina fisiolgica estril y tratamiento topico con el
antifngico, repitindose los aseos quirrgicos. Se
procedi a la ampliacin quirrgica y repeticin de las
limpiezas curativas cuando se consider necesario.
Con diagnstico final de Leucemia Linfoblstica
Aguda Tipo BII y zigomicosis cutnea primaria, a la fecha,
la paciente presenta una evolucin ligeramente favorable
y contina con quimioterapia especfica para LLA,
tratamiento antifngico con Anfotericina B y aseos
quirrgicos peridicos. Por su pronstico reservado, se
evala la posibilidad de su traslado a Buenos Aires.
Estudio Micolgico
Al examen microscpico directo de las muestras
con KOH al 10%, coloracin de Gram y Giemsa, se
observaron abundantes hifas hialinas, no septadas, anchas
como cintas, de 10-20 m de dimetro, con ramificaciones
en ngulo recto.
Las muestras fueron sembradas en Agar
Sabouraud Glucosa (SGA) adicionado de Penicilina (50
U.I./ml) y Estreptomicina (80 g/ml), e incubadas a 37 C.
El diagnstico microbiolgico se bas en la observacin
macro y micromorfolgica de las colonias en SGA. A partir
de las 72 h se observ en todos los tubos abundante
desarrollo de un hongo de crecimiento rpido. Las colonias
cubrieron prcticamente toda la superficie del medio de
cultivo, con micelio areo denso, algodonosas, de aspecto
consistente, al principio blancas, despus gris oscuras
que se fueron ennegreciendo con el transcurso de los das,
anverso claro, tpicas de los integrantes del gnero
Rhizopus (Fig.3).
Para la observacin macro y micromorfolgica se
resembr la cepa en Agar Malta siguiendo la metodologa
de Schipper (27). Colonias caf grisceas, esporangiforos
caf-grisaceos, rizoides cafesosos, esporangioforos y
estolones hasta 1200 m de largo y de 9-15 m de ancho,
solitarios o agregados en grupo, frecuentemente
ramificados. Esporangios cafesosos a negros, globosos
a subglobosos, lisos a finamente espinosos, 55-130 m;
columelas elipsoidales a ovoides de base trunca, 40-100
m de alto, de color gris; esporangiosporas esfricas,
ovoides o irregulares, estriadas, plidas, 4-8 m de largo.
Clamidosporas escasas, globosas a elipsoidales.
Zigosporas ausentes. Crecimiento ptimo a 37C, mximo
42-43C . No crece a 45C. Determinacin final: Rhizopus
oryzae (Fig. 4).
 Zigomicosis cutnea primaria por Rhyzopus oryzae - R. Salim et al.
DISCUSION
La presentacin clnica de la zigomicosis cutnea
es variable, sin embargo, los signos clave que deben
advertir al clnico son la necrosis y la rapidez del curso
evolutivo (25). Una herida en cuyo margen aparece una
necrosis progresiva en un paciente con factores de riesgo,
debe orientar hacia zigomicosis. La triada constituida por
necrosis cutnea, progresin veloz del cuadro, junto con
los factores de riesgo del paciente, debe alertar al mdico
sobre un cuadro grave. La sospecha clnica de esta entidad,
su estudio mediante examen directo de la escara, y el
procesamiento rpido del material de biopsia para estudio
convencional y cultivo, son determinantes para instaurar
el tratamiento con la mayor celeridad posible, lo que
redundar en un mejor pronstico de esta grave enferme-
dad (8).
Los Zygomycetes espordicamente forman parte
de la microbiota saprofita normal de la piel y mucosas y
crecen fcil y rpidamente en los medios de cultivo (22).
Por esto, se explica que su diagnstico no se puede
establecer slo por la positividad de los cultivos, sino que
resulta indispensable demostrar la invasin fngica en los
tejidos, para lo que se requieren procedimientos agresivos
como la obtencin de biopsia de tejidos (5, 22). La invasin
del tejido por hongos no tabicados mostrando reas de
necrosis e infartos con vasculitis, trombosis y hemorragias
caractersticas de esta enfermedad constituye la prueba
determinante de esta micosis (25, 28, 29), y su cultivo es
definitivo para la identificacin final del agente (8).
A pesar de que el diagnstico de la zigomicosis
se basa en exmenes histopatolgicos, es necesario tener
en cuenta que stos no suelen estar disponibles en forma
rpida. Esta limitacin justifica que, en algunas series,
hasta el 50% de los casos slo fueron diagnosticados post
mortem (16,18). Por ello, el examen micolgico directo de
la escara es de gran rendimiento diagnstico y en slo
unos minutos orientar hacia esta posibilidad.
En un estudio que reuni datos de 50 hospitales
de Espaa, el aislamiento de Zygomycetes fue muy bajo,
demostrando que menos del 8% de los pacientes con
cultivo positivo estaban realmente infectados, mientras
que la gran mayora presentaban colonizacin o contami-
nacin de laboratorio (33). An as, consideramos que, si
bien la trascendencia del cultivo puede ser baja, el
aislamiento de estos hongos tiene importancia si se
considera el tipo de lesin y procedencia de la muestra
clnica. La observacin de abundantes hifas hialinas no
tabicadas junto al aislamiento de un zygomycete debe ser
la voz de alarma para el seguimiento de los pacientes de
riesgo, aun cuando su carcter ambiental les permite
colonizar pacientes sin causar enfermedad, o contaminar
los cultivos en el propio laboratorio.
La literatura mdica nacional es escassima acerca
de esta patologa. Al presente carecemos de datos confia-
bles sobre la frecuencia de esta micosis en la Repblica
Argentina. De un estudio que integra los datos de pato-
loga fngica generados por un nmero importante de
laboratorios distribuidos a lo largo de todo el pas, surge
que el porcentaje de muestras derivadas para diagnstico
micolgico es bajo. Entre enero y diciembre de 2004, tan
slo 0,78% de los casos correspondieron a zigomicosis lo
que probablemente no refleja la incidencia de esta patologa
en la Argentina (4).
Por otra parte, el diagnstico de especie
hasta ahora no pareca tener mayor trascendencia clnica;
sin embargo, existen diferencias significativas de
susceptibilidad in vitro de los distintos gneros y especies
de la familia Mucoraceae a los azoles, lo que podra
traducirse dentro de los prximos aos en importantes
decisiones teraputicas (6, 30).
Como todas las especies de Mucorales
presentan hifas anchas no septadas que se ramifican en
ngulo recto, y adems causan invasin vascular, para su
identificacin es necesario realizar un diagnstico
morfolgico en cultivos.
El diagnstico serolgico no es til para detectar
infecciones por Zygomycetes. stos comparten varios
determinantes antignicos, lo que dificulta la distincin
entre especies e incluso entre gneros (32).
Las tcnicas moleculares para la deteccin de
zigomicosis invasora son escasas y se emplean fundamen-
talmente para determinar asignaciones taxonmicas.
Aunque estas herramientas pueden ser tiles en los
estudios epidemiolgicos de brotes de zigomicosis, se
conoce mal su rendimiento en el diagnstico primario (10,
11).
En el caso clnico que presentamos concurrieron
varios factores de riesgo para el desarrollo de zigomicosis
cutnea: leucemia, neutropenia severa, infeccin bacteriana
mixta y tratamiento inmunosupresor. Consideramos, junto
a Chandra (3), del Palacio (5) y Runco (25) que en estos
casos los pacientes presentan una evolucin rapidsima y
generalmente fulminante.
Habitualmente, la imposibilidad de llegar a un
diagnstico que permita el tratamiento oportuno de esta
patologa, induce a la medicacin emprica del paciente lo
que aumenta, innecesariamente, su situacin de riesgo.
En estos ltimos aos se ha descrito un incremento
importante en la incidencia de esta enfermedad en
instituciones aisladas o unidades especficas alcanzando
un 8% en pacientes con leucemia. Este aumento del nmero
de casos se produce generalmente en pacientes y unidades
donde se administra con exceso profilaxis antibacteriana
de amplio espectro, sin la sospecha de una micosis (33).
39
 Boletn Micolgico Vol. 23 : 35 - 41
CONCLUSIONES
La triada constituida por necrosis cutnea, gran
agresividad y rpida evolucin, principalmente en
pacientes inmunocomprometidos, debe poner al mdico
en alerta sobre una posible patologa fngica. La sospecha
clnica y los criterios de infeccin fngica probable o
posible son determinantes para establecer el diagnstico
apropiado, an frente a la negatividad del examen directo
y los cultivos. La observacin de abundantes hifas hialinas
no tabicadas y el aislamiento de un zygomycete deben ser
una voz de alarma cuando se trata de enfermos inmuno-
comprometidos. La demora en el diagnstico produce un
impacto desfavorable en la toma de decisiones teraputicas
acertadas.
AGRADECIMIENTOS
Los autores agradecen al Dr. Eduardo Piontelli por
haber realizado la identificacin de R.oryzae y por sus
sugerencias en la elaboracin de este manuscrito.
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41
Boletn Micolgico Vol. 23 : 43 - 47 2008
ASPERGILOSIS CEREBRAL: REPORTE DE CASO
(Brain aspergillosis: a case report)
(2) Medicina Interna. Clnica de Occidente S.A. Cali. Colombia.
Palabras claves: Aspergilosis cerebral, aspergilosis invasiva.
Keywords: Brain aspergillosis, invasive aspergillosis.
RESUMEN
En los ltimos aos la incidencia por infecciones
de hongos del genero Aspergillus han aumentado de
forma significativa como consecuencia del incremento
de pacientes con estados de inmunodepresin,
fundamentalmente por la alta incidencia de SIDA y por
el mayor empleo de tratamientos inmunosupresores. Las
aspergilosis son infecciones infrecuentes en el sistema
nervioso central, constituyendo el 4% de las enferme-
dades invasoras, tratandose de una entidad grave, con
un pobre pronstico (mortalidad mayor del 95%). Se
presenta un caso clnico de un paciente masculino de 48
aos, con miocardiopatia dilatada terminal que fue some-
tido a transplante cardiaco, tratamiento inmunosupresor
y profilaxis antimicrobiana. Despus de su alta ( 23 das
post cirugia), regresa con compromiso del sensorio y
focalidad neurolgica, por lo que se practica RNM que
evidenci lesin microangiopatica, con edema y realce
perifrico anular. Cultivos microbiolgicos negativos y
LCR dentro de lo normal. Posteriormente (10 das
despus del ingreso) empeora su condicin neurolgica
e imagenolgica, por lo que se realiz biopsia estereo-
taxica obtenindose exmenes directos negativos e
histologa sin evidencia de microorganismos, sin
embargo, en los cultivos se obtuvo Aspergillus fumigatus.
Se inici tratamiento con Voriconazol con buena respues-
ta inicial, pero posteriormente empeora su condicin
neurolgica y general, con signos y sntomas de rechazo
del transplante cardiaco, falleciendo a los 62 das
postransplante.
Recibido el 18 de Diciembre 2008
Aceptado el 30 de Diciembre 2008
Eduardo Contreras Ziga (1)
Gloria Elena Posadan (2)
Sandra Ximena Zuluaga Martnez (3)
(1) Medicina Interna Universidad del Valle.
Cali. Colombia. Correspondencia: edo11@hotmail.com.
Direccin: Calle 4 No, 65 14. Cali. Colombia.
(3) Cirujano general. Angiografa se Occidente SA.
Cali. Colombia.
SUMMARY
In recent years the incidence of fungal infections
of the genera Aspergillus have increased significantly
as a result of the increase in patients with immuno-
compromised states, primarily by the high incidence of
AIDS and the increased use of immunosuppressive
treatments. The aspergillosis infections are rare in the
central nervous system, constituting 4% of invasive
disease, in the case of a serious entity with a poor
prognosis (mortality greater than 95%). We report a case
of a 48-year-old male patient with terminal dilated
cardiomyopathy underwent heart transplantation,
immunosuppressive therapy and antimicrobial
prophylaxis. After his high (23 days post-surgery), is
back with commitment and focal neurologic
consciousness, so that is practiced MRI showed
microangiopathic injury, edema and peripheral
enhancement cancel. Microbiological cultures and
negative CSF within normal. Later (10 days after
admission) her neurological condition worsened and
imagery, so stereotactic biopsy was obtained and
histology tests negative without direct evidence of
microorganisms, however the culture was positive to
Aspergillus fumigatus. Voriconazole treatment started
with good initial response, but later his condition
worsened neurological and general signs and symptoms
of heart transplant rejection, died 62 days
postranplantation.
INTRODUCCION
En la ltima dcada se ha producido un incremento
sustancial de los casos de aspergilosis invasiva como
consecuencia de la generalizacin de tratamientos
43
 Boletn Micolgico Vol. 23 : 43 - 47
inmunosupresores cada vez ms potentes. Este incremento
en la frecuencia de esta enfermedad no se ha visto
acompaado de una reduccin en la mortalidad, que sigue
siendo elevada (1, 2).
La aspergilosis pulmonar es, sin duda, la forma
clnica ms frecuente de presentacin de esta entidad,
seguida por la sinusitis, la infeccin del rbol traqueo-
bronquial y la del sistema nervioso central (2, 10).
La aspergilosis cerebral puede verse en un 4% hasta
un 20% de las formas invasivas. El diagnstico precoz de
la infeccin por Aspergillus del Sistema Nervioso Central
(SNC) es un gran desafo, donde la sospecha clnica
fundamentada es clave por la alta letalidad de la entidad
an con tratamiento oportuno. La importante dificultad
diagnstica es favorecida por algunas caractersticas de
la entidad: baja incidencia, compromiso de individuos
inmunocomprometidos que presentan mltiples infec-
ciones, manifestaciones neurolgicas clnicas e image-
nolgicas inespecficas y mtodos diagnsticos
etiolgicos de resultados tardos (1, 3, 4).
CASO CLINICO
Paciente masculino, de 48 aos de edad, con
antecedentes de miocardiopata dilatada idioptica, por la
que fue sometido a transplante cardaco, recibiendo dentro
del protocolo de manejo perioperatorio profilaxis antibi-
tica con Ceftriaxona y Vancomicina, adems de bolos de
Metilprednisolona. Se adicion Micofenolato Mofetil y
Ciclosporina. Tambin se inicio profilaxis con Trimetropin-
sulfametoxazol (TMS), Aciclovir, Nistatina y Pirimetamina
(seronegativo para anticuerpos contra Toxoplasma gondii).
Se realizaron ecocardiogramas transtorcicos que
evidenciaban adecuado funcionamiento del injerto. Se
realizaron 2 biopsias endomiocrdicas (Semana 1 y 2)
negativas para rechazo celular del injerto. El paciente es
dado de alta a los 18 das despus del transplante para
seguir con Ciclosporina, Prednisolona, Micofenolato
Mofetil, Aciclovir, Nistatina, ASA, Omeprazol, Calcio,
Calcitriol, Enalapril, Metoprolol, TMS.
El paciente reingresa a los 23 das postransplante
por 72 horas de evolucin de malestar general, disnea
subjetiva e irritabilidad. Al examen fsico se encontr en
regular estado general, TA 126/72 mmHg, Fc:100 l.p.m.,
Fr:18, sin hallazgos anormales al examen fsico. Paraclnicos
evidencian sodio: 118mEq/lt, potasio: 5.2mEq/lt. Resto de
los estudios dentro de lmites normales. Ecocardiograma
evidencia hipertrofia marcada del ventrculo izquierdo con
fraccin de eyeccin del 65% 24 horas despus del ingreso:
A pesar de la correccin de las alteraciones
hidroelectrolticas, se observa mayor deterioro neurol-
gico, confusin y desorientacin.
A los 25 das postrasplante: Se observa mutista, no obe-
44
2008
dece ordenes, hay respuesta plantar flexora bilateral y
marcado temblor distal en miembros superiores. Se realiza
una resonancia magntica cerebral (RMN) (Fig. 1, 2, 3)
observndose mltiples lesiones secundarias a
microangiopata con edema perilesional y realce perifrico
anular. Se solicita una tomografa de trax sin lesiones
especficas. Los hemocultivos fueron negativos y
Galactomannano fue negativo en dos oportunidades. EL
fisicoqumico y citolgico del LCR estaba dentro de los
parmetros normales, con cultivo negativo.
El paciente evoluciona en forma favorable durante
los siguientes 7 das.
A los 32 das postrasplante: Control escanogrfico (Fig. 4
y 5) evidencia mejora parcial de las lesiones. El paciente
permaneci con temblor distal pero con mejora neurolgica
importante.
A los 37 das postrasplante: Presenta episodio convulsivo,
relajacin de esfnteres, sialorrea y desviacin de la mirada.
Se realiza nueva resonancia magntica cerebral que muestra
aumento del edema perilesional, aparicin de nuevas
lesiones con efecto de masa y realce perifrico (Fig.6 y 7).
A los 40 das postrasplante: Se realiza biopsia cerebral
estereotxica obteniendo abundante material purulento.
El examen directo del material coloreado con Gram fue
negativo; en el estudio histolgico se observo necrosis
sin evidencia de microorganismos.
A los 44 das postrasplante: El paciente se deteriora
neurolgicamente, presenta hemiparesia. El reporte
preliminar del cultivo es informado como positivo para un
hongo filamentoso el cual, posteriormente fue tipificado
como un Aspergillus fumigatus. Se inicia tratamiento con
Voriconazol 4 mg/kg cada 12 horas.
A los 50 das postrasplante: El paciente mejora
neurolgicamente, queda secuela de hemiparesia
izquierda. Se realiza control escanogrfico que evidencia
mejora de todas las lesiones previas excepto una a nivel
de de hemisferio cerebral izquierdo.
A los 55 das postrasplante: El paciente presenta disnea
progresiva, cifras tensionales bajas y disminucin de
fraccin de eyeccin (30%) mediante ecocardiograma.
Teniendo en cuenta la mejora neurolgica y radiolgica
del paciente, se reajusta dosis de esteroide para manejo
del rechazo celular con compromiso Hemodinmico.
A los 60 das postrasplante: Empeoramiento de hemiparesia
izquierda y disartria. Se realiza nuevo estudio image-
nlogico (Fig. 8 y 9) que evidencia sangrado intraparen-
 Aspergilosis cerebral: reporte de caso - E. Contreras et al.

Figuras 1 - 9 Estudio imagenlogico. Fig.1, 2, 3. Mltiples lesiones secundarias a microangiopata con edema
perilesional y realce perifrico anular a los 25 das post transplante Fig. 4, 5. Control escanogrfico a los 32 das .
Fig. 6, 7. Control escanogrfico a los 37 das. Fig. 8, 9. Control escanogrfico a los 60 das.

quimatoso con sangre en el sistema ventricular y DISCUSION

desviacin leve de lnea interhemisfrica.
Se le realizo a drenaje neuroquirrgico urgente del El primer caso de Aspergilosis en seres humanos fue
hematoma cerebral. El paciente fallece 2 das despus (37 descrito en 1842 por Bennet en Edimburgo. Sin embargo
das postransplante cardiaco). los casos descritos correspondan a personas inmuno-

45
 Boletn Micolgico Vol. 23 : 43 - 47
competentes donde se presentaba como una enfermedad
granulomatosa. No fue sino hasta 1950, cuando el uso de
los esteroides y medicamentos citotxicos se introdujo en
la prctica diaria que se reconoci su papel como
enfermedad oportunista y en 1953 se describe el primer
caso de Aspergillosis Invasora (AI) en un paciente
inmunocomprometido (1, 2).
En pacientes trasplantados de corazn la incidencia
de esta infeccin parece ser menor que en pacientes
trasplantados de otros rganos como hgado y pulmn.
Sin embargo la mortalidad es igual de alta en estos
pacientes y las dificultades existentes en cuanto al
diagnstico y manejo antimictico son tambin similares
(1, 3).
Se han identificado algunos factores de riesgo para
desarrollar esta infeccin, tanto en pacientes
transplantados de corazn como de otros rganos. Dentro
de estos factores se destacan el uso de esteroides a altas
dosis, el uso de antibiticos pretransplante, la colonizacin
previa por Aspergillus, complicaciones quirrgicas, el
exceso de inmunosupresin, el rechazo crnico, la
enfermedad por CMV, la ocurrencia en la institucin de un
episodio de Aspergillosis invasora en los dos meses
previos o posteriores al trasplante y la necesidad de
retrasplante (2, 4, 5).
La especie aislada con mayor frecuencia es A.
fumigatus y la importancia de otras especies es menos
dramtica aunque se han diagnosticado infecciones por
A. niger, A. flavus y A .terreus (3).
La incidencia de Aspergillosis invasiva en trasplan-
tados cardiacos oscila entre 1 y 15%, con una frecuencia
en promedio de 5.2%, representando el 69.8% de las
infecciones micticas, siendo la infeccin mas frecuente
en su grupo (4, 6).
La Aspergillosis cerebral ocurre en el 10 a 40% de
las infecciones invasivas, sin embargo, es raro el
compromiso aislado cerebral y es generalmente el resultado
de diseminacin desde otro rgano, generalmente los
pulmones (2).
La mortalidad en trasplante cardiaco es del 53-78%
con aspergillosis invasora y cercana al 100% si compromete
el sistema nervioso central (4).
La infeccin se presenta con mayor frecuencia
durante los primeros meses postransplante. El riesgo
disminuye en forma importante despus del primer ao de
transplante. Se ha observado una frecuencia de infeccin
en los primeros 3 meses postransplante de 0.15 episodios/
paciente/mes y disminuye hasta 0.05 episodios/paciente/
mes despues de los tres meses (5, 7).
El SNC puede afectarse de distintas maneras en
esta infeccin, incluyendo la formacin de abscesos o
granulomas en el parnquima cerebral, aracnoiditis difusa,
infartos cerebrales o medulares, aneurismas micticos o
46
2008
abscesos epidurales espinales (4, 7, 8).
La aparicin de abscesos cerebrales es un signo
ominoso. Generalmente el paciente presenta sntomas
focales. Cuando Aspergillus invade el sistema nervioso
central por va hematgena las hifas producen oclusin
vascular o pueden atravesar las paredes capilares
produciendo infarto hemorrgico que puede evolucionar
a un infarto sptico con cerebritis y formacin de abscesos.
La distribucin ms comn suele ser las regiones irrigadas
por la arteria cerebral media y por la arteria cerebral anterior
(1, 2, 6).
Los sntomas son inespecficos, y a pesar de su
propensin a realizar invasin vascular los hemocultivos
suelen ser negativos.
El diagnostico suele ser un reto y hasta el 18% de
los pacientes se diagnostican post mortem. La dificultad
en el diagnstico tiene varias razones:
1. En primer lugar la aspergillosis tiene presentaciones
atpicas e inespecficas que hacen primero pensar en otras
infecciones que son adems ms frecuentes (2, 9).
2. Se presenta en un amplio y variado grupo de personas
algunos de los cuales estn expuestos por mucho tiempo
al patgeno y otros que solo se exponen un tiempo corto
(3, 8).
3. No hay un solo mtodo diagnstico. Se requieren varios
exmenes y descartar otras infecciones antes de confirmar
esta infeccin, cuyo patrn de oro para diagnosticarla es
histopatolgico y/o por cultivos y de cuya rapidez en el
diagnstico y tratamiento, depender la vida del paciente
(7, 9).
El tratamiento de eleccin de la enfermedad
invasora es el Voriconazol a una dosis de 8 mg/kg/da.
Algunos expertos recomiendan como alternativa la
administracin de Anfotericina liposomal en dosis elevadas
(10 mg/kg/da) basndose en estudios que demuestran
una mayor eficacia sin mayor toxicidad. Tambin es posible
la utilizacin de Caspofungina (la nica Equinocandina
comercializada en nuestro pas hasta el momento) que ha
demostrado su utilidad en tratamientos de rescate (8, 9).
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Boletn Micolgico Vol. 23 : 49 - 66 2008
APORTES MORFOTAXONOMICOS EN EL GENERO
Aspergillus Link: CLAVES PARA LAS ESPECIES
AMBIENTALES Y CLINICAS MAS COMUNES
(Morphotaxonomic contributions in the genus Aspergillus Link:
keys for the most common environmental and clinical species)
Palabras clave: Aspergillus, claves especies comunes.
Key words: Aspergillus, key common species.
RESUMEN
Se condensan los principales alcances en el
gnero Aspergillus y las metodologas de diagnstico
morfo-taxonmico de las especies ms comunes de
utilidad para el miclogo en reas clnicas y ambien-
tales. Se aporta informacin bibliogrfica actualizada
para las determinaciones polifsicas de las especies y
algunas claves morfofisiolgicas tentativas en ciertos
taxa de importancia mdica, con nfasis en la Seccin
Fumigati.
INTRODUCCION
Las especies de Aspergillus Link, se
consideran entre los organismos de ms amplia
distribucin cosmopolita, capaces de colonizar una gran
variedad de substratos en los diferentes nichos
ecolgicos del suelo; en general, son frecuentes en climas
tropicales y subtropicales pero disminuyen en los climas
fros, mientras algunas epecies son restringidas a hbitat
especficos. Se consideran contaminantes comunes de
varios substratos, en especial alimentos, granos, suelos
(salinos, cultivados, desrticos y de pastoreo), bosques
subtropicales deciduos y ambientes internos, entre otros.
Un buen nmero de sus integrantes tiene
importancia ecolgica, gentica, biotecnolgica, sin
olvidar sus aspectos patognicos y micotoxicognicos
relacionados con el hombre y otros mamferos (Powell
et al., 1994).
Se reconoce a Link (1809) como al autor que
valid al gnero (CINB), a pesar que Micheli (1729) fue
el primero que lo describi. En el siglo XX se publicaron
varias monografas del gnero (Thom & Church, 1926;
Recibido el 1 de Septiembre 2008
Aceptado el 28 de Noviembre 2008
Eduardo Piontelli L.
Universidad de Valparaso, Escuela de Medicina,
Ctedra de Micologa, Casilla 92 V, Valparaso Chile
eduardo.piontelli@uv.cl
ABSTRACT
The main information about the Aspergillus
genus together with methodologies for the morphotaxo-
nomic diagnosis of the most common species useful for
the mycologist in clinical and environmental areas are
here condensed. An updated bibliography is forwarded
in order to carry out polyphasic identification of the
species as well as tentative morphophysiological keys
in some taxa having medical significance with emphasis
in Section Fumigati.
Thom & Raper, 1945), pero la ms completa en su poca
y an consultada fue la escrita por Raper & Fennel en el
ao 1965, que incluy varias nuevas especies; sin
embargo, a pesar de incluir la diagnosis latina de las
nuevas especies, no designaron las especies tipo,
describiendo adems los teleomorfos bajo el mismo
nombre de los anamorfos (Aspergillus). Los aportes
posteriores fueron agregando nuevas especies y
reordenaron el gnero hacia una lnea ms acorde al
Cdigo Internacional de Nomenclatura Botnica (CINB)
dilucidando sus relaciones con los teleomorfos de
Aspergillus. Las nuevas especies descritas desde 1965
fueron publicadas en la literatura por Samson (1979, 1992,
1993, 2000) y otros autores (Al Musallan, 1980;
Christensen, 1981-1982, entre otros), aportndose al
mimo tiempo varios mtodos de identificacin.
La taxonoma tradicional del gnero se basa
principalmente en sus caracteres fenotpicos y fisiol-
gicos, los cuales han aportado satisfactorias delimita-
ciones de las especies, sin embargo, existen variaciones
morfolgicas en varias secciones que han llevado a
controversias en sus esquemas taxonmicos. En el
nuevo siglo 21, Aspergillus y sus teleomorfos han sido
recientemente investigados con mtodos polifsicos
(morfolgicos, fisiolgicos y moleculares) para examinar
49
 Boletn Micolgico Vol. 23 : 49 - 66
Cabeza radiada biseriada
Filides Mtulas
Vescula
Conidios
Conidiforo
Estipe
Clula pi
Figura 1. Estructuras morfolgicas en el gnero Aspergillus: cabezas radiadas y colomnares, tipos de
vesculas, clula pie, clulas Hlle
la variabilidad entre sus especies (Samson & Pitt, 2000;
Samson et al, 2006; Samson & Vargas, 2007).
Las especies de Aspergillus se estudian
mediante sus caractersticas macro y micromor-
folgicas, junto a caracteres de crecimiento en diferentes
medios de cultivo, perfiles de extrolitos (micotoxinas) y
tcnicas moleculares, tales como; secuencias del gen
de la b-tubulina, calmodulina y actina, mientras otras
tcnicas de anlisis como, amplificacin de DNA poli-
mrfico al azar (RAPD) entre otras, han sido utilizadas
(Geiser et al., 2000-2004 -2007; Balajee et al., 2005; Prin-
gle et al., 2005; Samson et al., 2007; Varga et al., 2007)
En clnica, los anlisis moleculares e inmuno-
lgicos han sido un avance prometedor en el
diagnstico rpido, sin embargo, la microscopa y los
cultivos (con un adecuado entrenamiento profesional),
siguen siendo las herramientas esenciales no solo en
este campo, sino en muchos otros (McClenny, 2005).
Las secciones de Aspergillus Fumigati, Circum-
dati, Flavi y Nigri, contienen los ms importantes pat-
genos humanos, sin embargo, A. fumigatus fue conside-
rado como el nico y ms importante Aspergillus
patognico conocido dentro de la Seccin Fumigati,
una situacin que ha cambiado recientemente con
reportes clnicos que incluyen, Neosartorya pseudofis-
50
2008
Cabeza columnar monoseriada
Tipos de vesculas
Globosa Piriforme
Espatulada Clavada
Clulas Hlle
cheri, A. lentulus (resistente a mltiples antifngicos)
y A. undagawe (Neosartorya) como patgenas relacio-
nadas con A. fumigatus (Balajee et al.,2005). Los
estudios moleculares han revelado frecuentes errores
en la identificacin de A. fumigatus cuando se usa
solamente la morfologa, sin otros datos fisiolgicos de
apoyo, especialmente en cepas de baja esporulacin
(Balajee et al., 2006).
b) Caractersticas macroscpicas.
Estas son importantes en la clasificacin
subgenrica, tales como el color de los conidios, que se
observa en placas de Petri en los diferentes medios de
cultivo (debido a su utilidad en la clasificacin
subgenrica); el color puede variar desde el negro,
blanco, amarillo, ocre, azul verde, o una mezcla de ellos,
por lo que es recomendable emplear a veces una tabla
de colores determinada. Las colonias pueden producir
gotas de lquidos en su superficie, ya sea incoloras o
con diferentes tonalidades, as como pigmentos de
varios colores en el reverso de la colonia, si stos son
solubles difunden al agar. El dimetro de las colonias
(en mm), es otra caracterstica fisiolgica til, debido a
que las especies del gnero pueden variar en su
habilidad de crecer a diferentes potenciales de agua, y a
 Aportes morfotaxonmicos en el gnero Aspergillus Link: claves para las especies ms comunes - E. Piontelli
diferentes temperaturas en medios estandarizados.
Algunas especie pueden producir en los culti-
vos estructuras de variado tamao, pero observables a
simple vista o bajo la lupa estereoscpica, de aspecto
generalmente redondo, de diversos colores y consis-
tencia firme, llamadas esclerocios (Seccin: Candidi,
Circumdati, Flavi, Nigri), pero tambin pueden
presentarse cleistotecios (ascomata), principalmente de
los gneros Eurotium, Neosartorya y Emericella).
c) Caractersticas microscpicas
Aspergillus es un gnero anamrfico que
produce esporas asexuales (conidios, mitosporas)
sobre estructuras especializadas caractersticas que se
componen de un: conidiforo (estipe) que se dilata en el
pice, formando una vescula de diferentes formas (Fig.
1). Las vesculas pueden variar en tamao y forma, desde
esfricas (globosas), clavadas, piriformes y espatula-
das. La vescula nace sobre un corto o largo pie,
usualmente aseptado, liso o rugoso y que se une a la
hifa portadora generalmente en ngulo recto mediante
Ascos y ascosporas
a ras), llamadas clulas de Hlle, generalmente
Ascos y ascos-
poras
b formacin de cleistotecios (Ascomycota, Pezizomyco-
Clulas Hlle
Ascos y ascosporas
c Emericella (Seccin Nidulantes, Fig. 2b)
Figura 2. Principales tipos de ascomata en
teleomorfos de Aspergillus.
a) Eurotium, b) Emericella, c) Neosartorya.
una estructura en forma de T invertida llamada clula
pie (Fig.1), que forma parte integral del estipe. La clula
pie y el estipe son comnmente llamados conidiforos,
que apicalmente terminan siempre en una vescula
dilatada, la cual puede dar origen en su superficie a 1 o
2 tipos de estructuras ya sea en una sola alineacin de
filides (monoseriados o uniseriados), que son las clula
conidigenas, que originan siempre conidios secos o
presentar una segunda estructura bajo las filides
llamadas mtulas (biseriadas) que pueden sostener 1
a 10 filides c/u (Fig.1). Algunos taxa pueden ser
monoseriados y biseriados a la vez, mientras otros son
estrictamente monoseriados o biseriados. Ambas
estructuras (filides y mtulas) se forman sincrnica-
mente en la superficie de la vescula pudindola cubrir
parcial o totalmente. Las vesculas, falides y mtulas (si
estas ltimas estn presentes), junto con los conidios,
forman lo que llamamos cabeza conidial, la cual por la
disposicin de los conidios puede ser de aspecto
columnar o radiado (redonda). Pueden presentarse
situaciones intermedias, como columnar laxa, que forma
varias columnas divergentes o radiada laxa, con cortas
columnas que abren la cabeza radiada, pero mantienen
el aspecto redondo. Algunos miembros del gnero
pueden producir clulas de gruesa pared y de variado
tamao (siempre mayores que los conidios o mitospo-
entremezcladas con el micelio o asociadas a las formas
sexuales del gnero (ej.Cleistotecios de Emericella). Si
bien es cierto que su funcin parece ser protectiva,
pueden actuar tambin como propgalos de dispersin.
d) Presencia de teleomorfo.
Algunos miembros del gnero son capaces de
reproducirse sexualmente en cultivos mediante la
tina, Eurotiomycetes, Trichocomaceae), que contienen
ascosporas formadas en ascos ms o menos redondos,
evanescentes, dispuestos desordenadamente en el
centrum. El tipo de ascoma, tamao, forma, estructura,
superficie y color de las ascosporas, son importantes
en la determinacin de los taxa. Actualmente se con-
sideran 11 gneros teleomrficos dentro del gnero ana-
mrfico Aspergillus y sus subgneros (Tabla 1).
Chaetosartoria (Seccin Cremei)
Dichlaena y Eurotium (Seccin Aspergillus, Fig. 2a)
Fennellia (Seccin Flavipedes),
Hemicarpenteles, Sclerocleista y Warcupiella
(Seccin Ornati),
Neopetromyces (Seccion Circumdati), Neosartorya
(Seccin Fumigati, Fig. 2c), Petromyces (Seccin Flavi).
e) Produccin de Micotoxinas
Los Aspergillus no se han considerado como
causa de enfermedades en las plantas, sin embargo,
algunas especies son responsables de algunos proble-
51
 Boletn Micolgico Vol. 23 : 49 - 66 2008.

Tabla 1. Nomenclatura de los taxa infragenricos del gnero Aspergillus y sus Secciones
(Modificada de Gams et al., 1985 y Klich, 2002).

Subgnero Secciones*
Aspergillus Aspergillus (A. glaucus grupo).Teleomorfo Eurotium, cleistotecios
Uniseriados, xeroflicos, amarillos
conidios gris-verdosos Restricti (A. restrictus grupo). Crecimiento lento en los medios

Fumigati Fumigati (A. fumigatus grupo).Conidios gris verde a azul verdosos

Uniseriados,vesculas pre- Cervini (A. cervinus grupo). Conidios naranja claros a gris naranja
dominantemente piriformes,
conidios gris-verdes, azul-verde a naranja

Ornati Ornati (A. ornatus grupo)

Uniseriados, conidios gris verdosos,
amarillo-verdosos u oliva-caf

Clavati Clavati (A. clavatus grupo) (Incluida en Fumigati por Peterson, 2008)
Uniseriados, vesculas clavadas,
conidios gris-verdosos

Nidulantes Nidulantes ( A. nidulans grupo). Estipe corto cafesoso, clulas Hlle a

Biseriados, conidios de
colores variables
menudo presentes. Teleomorfo Emericella, ascosporas rojo prpura.
Versicolor (A. versicolor grupo). Estipe hialino a caf, conidios verdes,
verde grises o azul verdosos. (Incluida en Nidulantes por Peterson 2008).
Usti (A. ustus grupo). Estipe caf, conidios caf a oliva, rugosos.
Terrei (A. terreus grupo). Estipe hialino, conidios naranja caf a ante.
Flavipedes (A. flavipes grupo). Estipe hialino a caf claro, conidios
blancos a crema.

Circumdati Wentii (A. Wentii grupo).Conidios color ante, amarillo-caf o oliva-caf.

Uni o biseriado, vesculas Flavi (A. Flavus grupo). Estipe rugoso, conidios amarillo verde a oliva-caf .
esfricas o piriformes Nigri (A. niger grupo). Estipe liso, conidios oscuros cercanos al negro.
Circumdati (A. ochraceus grupo).Predominantemente biseriados, conidios
amarillos, ante u ocrceos.
Candidi (A. candidus grupo). Conidios blancos o cercanos al blanco.
Cremei (A. cremeus grupo). Conidios caf, amarillos o azul verdosos.
Sparsi (A. sparsus grupo).Conidios gris plido a oliva-ante.
Stilbothamnium (especies que forman sinnemata)
Ochracxeoroseus Ochraceoreosei (A.ochraceoroseus y A.rambelli).
Biseriados, vescula redonda, conidios gris-amarillentos (Frisvald et al., 2005) incluyen ambas especies bajo el
subgnero Circumdati, por su incapacidad de crecer a 37C y sus extrolitos)
(*La resolocin filogentica limitada de algunas especies y secciones aconseja el uso de ms genes adicionales
para determinar sus relaciones).

mas de contaminacin en productos vegetales ya sea
en precosecha, cosecha, post cosecha y almacena-
miento (A. niger, A. flavus, A. parasiticus, A. ochra-
ceus, A. carbonarius, A. alliaceus, entre otros)( Perrone
et al., 2007).
El mayor problema reside en la presencia de
micotoxinas contaminantes en alimentos y piensos.
donde varias de estas se han identificado y la ms
importante son las aflatoxinas y la ocratoxina A (Vargas
et al., 2004). Las aflatoxinas B1, B2, G1 y G2, por su
poder carcinognico son consideradas las ms
hepatotxicas (Bennet & Klich, 2003), por el riesgo en
salud humana y animal, debido a la contaminacin de
productos en precosecha: maz, algodn, soja, man,
nueces y por ciertos residuos que aparecen en la leche
debido al consumo por los animales de piensos
contaminados. La ocratoxina A es una potente
nefrotoxina que adems posee propiedades carcino-
gnicas, teratognicas e inmunotxicas en ratas y
posiblemente en humanos. Puede contaminar alimentos,
tales como granos, legumbres, caf, frutas secas,
cerveza, vino y carnes: las especies ms productoras
pertenecen a la seccin Circumdati y Nigri (Ver Frisvald
et al., 2007).

52
 Aportes morfotaxonmicos en el gnero Aspergillus Link: claves para las especies ms comunes - E. Piontelli

Tabla 2. Aspergillus productores de Aflatoxinas y sus subgneros y 22 secciones. Posteriormente Peterson

extrolitos quelantes ( Frisvald et al., 2005) (2008), agrega nuevos cambios en un anlisis de
secuencias de DNA desde 4 locus. La Tabla 1, mantiene
Aflatoxi- Acido Acido la estructura clsica con algunas modificaciones.*
Acido
Especies nas Cyclopia- Asper-
Kojico glico
znico h) Medios de cultivo para la identificacin de las
B1 G1 especies de Aspergillus.
Se emplean por lo general 3 a 5 medios de cultivo
Aspergillus seccin Flavi (Petromyces) 1.- CYA25, Agar Czapek extracto de levadura a
A. bombycis + + +
25C por 7 das.
2.- CYA37. Agar Czapek extracto de levadura a
A. flavus + + + + 37C por 7 das
+ + + +
3.-CY20S. Agar Czapek extracto de levadura ms
A. nomius
20% de sacarosa a 25C por 7 das (para las especies
A. parasiticus + + + + xeroflicas (seccin Aspergillus (Eurotium) y seccin
Restricti).
A. parvisclerotigenus + + + +
4. MEA. Agar extracto de malta a 25C por 7 das.
A. pseudotamarii + + + 5. CZ. Agar Czapek a 25C por 7 das. Es un medio
considerado viejo estandar que an se emplea en muchos
A. toxicarius + + + +
laboratorios y textos y al cual se le agregan trazas de
Aspergillus subgnero Nidulantes (Emericella) metales como el Zn y Cu, cuando el medio no los posee
en su frmula.
E. astellata +
Para cada cultivo, se emplean por lo general 4
E. sp. IBT 21903 + placas de Petri de 100 mm a las cuales se le agregan 25ml
de cada medio de cultivo CYA25, CYA37 (o a ms
E. venezuelensis +
temperatura si es necesario), CYA20S y MEA25. Es
Aspergillus seccin Ochraceorosei importante la profundidad del medio, debido a que la
menor o mayor profundidad puede llevar a ciertos
A. ochraceoroseus +
cambios morfolgicos (Okuda et al., 2000).
A. rambellii + Las placas con sus diferentes medios deben
inocularse en 3 puntos equidistantes del centro mediante
una solucin de conidios disueltos en un medio con
f) Presencia de extrolitos. 0,2% de agar y 0,05 % de Twen 80 (Pitt & Hockin, 1997).
La deteccin de la presencia de extrolitos Los conidios del cultivo a analizar, se mezclan en 1 o 2
(compuestos qumicos), ha sido otro buen aporte en la cc del medio y mediante una micropipeta se depositan
determinacin de las especies, demostrndose que cada 2L en 3 puntos equidistantes de las placas.
aislamiento de Aspergillus presenta un especfico perfil
que agrega una importante informacin para la presencia I) Identificacin rpida de las especies aflatoxignicas
de micotoxinas (Tabla 2). Los extrolitos se analizan de Aspergillus.
mediante el mtodo de HPLC (diode array detection) Un medio especial para la identificacin rpida
(Frisvald & Thrane,1993) modificado por Smedsgaard de potenciales Aspergillus aflatoxignicos (A. flavus y
(1997), retenciones de ndices de alquilfenona y A.parasiticus) en 3 das, es el agar AFPA (Aspergillus
deteccin de una matriz de diodo UV-VIS. Flavus y Parasiticus Agar) (Pitt et al.,1983). Existen otros
medios para distinguir algunas especies de la seccin
g) Subgneros y Secciones de Aspergillus. Flavi (Ver Samson et al., 2004), pero la identificacin en
Enla Tabla 1, los nombres de los grupos segn medios estandar es suficiente para el miclogo con
la antigua clasificacin de Raper & Fennell (1965), estn experiencia.
entre parntesis. Como los grupos no tienen un estatus
bajo el Cdigo Internacional de Nomenclatura Botnica J) Medios de cultivo y frmulas
(ICBN), se han reemplazado por los nombres de subgne-
ros y Secciones (Gams et al., 1985). 1.- Concentrado de Czapek (con trazas de metales)
La posicin de algunas especies y la existencia NaNO3 30 g
de otros subgneros y secciones ha sido cuestionada y KCl 5g
modificada por ciertos autores (Kozakievicz, 1989). MgSO4.7H2O 5g
Peterson (2000), propone eliminar 3 de los FeSO4. TH2O 0, 1 g
subgneros establecidos por Gams et al. (1985), y retener ZnSO4. TH2O 0, 1 g
12 de las 18 secciones, modificar 3 y eliminar 3; Peterson CuSO4. 5H2O 0, 1 g
et al. (2008), con nuevos datos moleculares proponen 8 Agua destilada 100 ml

53
 Boletn Micolgico Vol. 23 : 49 - 66 2008

2.- Agar Czapek Levadura con 20% de Sucrosa (CY20S) K) Claves anexas y su manejo.
K2HPO4 1g Las claves que se detallan a continuacin,
Concentrado de Czapek 10 ml pueden emplearse para determinar los ms comunes
Extracto de levadura 5g aislamientos clnicos o ambientales; no son
Sucrosa 200 g estrictamente dicotmicas y se han completado con la
Agar 15 g informacin ms significativa y descriptiva de cada
Agua destilada 1L especie, para facilitar en cierta medida una mejor
identificacin para las personas que no poseen literatura
3.- Agar Czapek Levadura (CYA25, CYA37) taxonmica de las especies ms comunes de Aspergillus,
K2HPO4 1g una situacin que hemos observado en algunos
Concentrado de Czapek 10 ml laboratorios de nuestro pas. La lectura de estas claves
por su mayor informacin anexa, pueden alargar el
Extracto de levadura 5g tiempo de bsqueda de una especie, en especial si un
Sucrosa 30 g aislamiento no corresponde plenamente con las
Agar 15 g descripciones, sin embargo, si ciertos aspectos son
Agua destilada 1L coincidentes, se recomienda buscar en las referencias
las descripciones completas en la seccin que
4.- Agar Czapec Dox (CZ) corresponde. Las claves son siempre orientativas y es
K2HPO4 1g necesario hacer coincidir la descripcin final con las
Concentrado de Czapek 10 ml monografas en la literatura.
Sucrosa 30 g Antes de usar las claves, observe bien las colo-
Agar 17, 5 g nias y haga preparaciones desde 2 medios diferentes
Agua destilada 1L porque pueden presentarse algunas caractersticas
diferentes (ej. el color del conidiforo, tamao de las
5.- Agar extracto de Malta (MEA) vesculas, rugosidad de los conidios, etc.). El Lactofenol
Extracto de malta en polvo 20 g puede alterar los dimetros de los conidios y a veces es
Peptona 1g preferible medir las estructuras en agua. Si un aislamiento
Glucosa 20 g se presenta como biseriado y monoseriado, considere
Agar 20 g como vlidas las estructuras dominantes. Si el
Agua destilada 1L aislamiento esporula pobremente expngalo a la luz por
varios das (Aspergillus es sensitivo a la luz) o cultvelo
en medios pobres (papa zanahoria (PZ), o Agar avena
(OA).

L) Algunos textos a consultar : Raper & Fennel, 1965;

Klich, 2002; Samson & Pitt, 2000; Samson et al., 2004;
Samson & Vargas 2007 u otros trabajos citados en las
referencias.

54
 Aportes morfotaxonmicos en el gnero Aspergillus Link: claves para las especies ms comunes - E. Piontelli

Clave general de las especies ms comunes de

Aspergillus en diferentes ambientes
(Modificada de Samson et al., 2004 y Klich, 2002) Dibujos no a escala.

Conidios y conidiforos

1 - Colonias blancas, negras, amarillas, caf o de colores grises..........................2

- Colonias en algn tono de verde, verde amarillo o azul verdoso......10

2. - Cabezas conidiales de color blanco a amarillo plido a menudo hmedas;

predominantemente biseriadas, cabezas reducidas a veces presentes;
dimetro de las colonias en CYA25 13-20 mm, MEA25 8-15 mm, CYA37 sin
crecimiento; vesculas predominantemente ms grandes que 15 m (10-
40); mtulas que cubren toda la superficie de la vescula; conidios
globosos a ovoides lisos 2,5-4 m. Esclerocios prpura a negros a veces
presentes.................. A.candidus Link
(Una especie similar como A. tritici Mehrotra & Basu, presenta colonias ms
amarillas, es capaz de crecer en CYA37, 7-21 mm; vesculas 5-11mm y conidios
levemente rugosos. Seguramente por su capacidad de crecer a 37C se ha con-
fundido con A.candidus en algunos tipos de micosis: ver Vargas et al., 2007c )
- Cabezas conidiales de color blanco a amarillo plido o crema; dimetro de
las colonias en CYA25 20-38 mm, MEA25 20 (o menos)-38, CYA37 y
CYA20S menores de 55mm; predominantemente biseriadas; vesculas
mayoritariamente menores de 15 m; mtulas que cubren uno o dos tercios
de la superficie de la vescula; conidios globosos, lisos a finamente rugosos
2,5-3,5m. Clulas Hlle a veces presentes; cleistotecios amarillos raramente
presentes (Fennellia nivea)......................................A.niveus Blochwitz
- Cabezas conidiales amarillas, con algn tono de caf o negro ...... 3

3. - Cabezas conidiales caf oscuras a negras; biseriadas (uniseriadas), dime-

tro de las colonias en CYA37 50-70 mm; conidios globosos, irregularmente
rugosos a finamente rugosos, con crestas y surcos 3,5-5 m
........................A. niger complex van Tieghem (ver Tabla.3 para la
diferencia con otras especies de la seccin Nigri, Samson et al., 2007b)
- Cabezas conidiales no caf oscuras a negras pero de colores oliva, amarillo-
caf, u otros tonos ms plidos del caf ................. 4

4 - Cabezas conidiales columnares, a menudo de color canela-caf a caf

rosado; biseriados; dimetro de las colonias en CYA37 y CYA20S 60-70
mm; mtulas angostas compactadas (2-2,5 m) que cubren las 3/4 de la
vescula; conidios globosos a elipsides, lisos 2 -2,5m. Clulas globosas
hialinas (aleuroconidios) adheridos lateralmente en las hifas sumergidas
usualmente presentes................................. A. terreus Thom aggregates
(Es un taxa con alta variabilidad gentica con varias especies crpticas incluidas
en los aislamientos considerados como A.terreus, Vargas et al., 2005; Lass- Flrl
et al.2007 y otros estudios en preparacin).
- Cabezas conidiales no columnares, de color amarillo o caf.................5
Aleuroconidio
5. - Cabezas conidiales oliva a caf claro; dimetro de las colonias en CYA 25
36-43 mm, MEA25 35-46 mm, CYA37 sin crecimiento; biseriadas; estipe
caf; clulas Hlle a menudo presentes en forma de salchicha; conidios
esfricos, de paredes muy rugosas 3,2-4,5 m. Reaccin de Ehrlich (-).
Buen crecimiento en CREA, con micelio amarillo tenue sin produccin de Clulas
cido............................. A.ustus (Bainier) Thom & Church Hl le
(A . calidoustus Vargas et al., 2005, es una especie similar que se aisla en clnica y
se ha confundido con A.ustus, crece bien en CYA37 entre 20-35mm; reaccin de
Ehrlich de color violeta, dbil a moderado crecimiento en CREA con micelio
hialino y sin produccin de cido. Ver la descripcin de los 7 integrantes de la

55
 Boletn Micolgico Vol. 23 : 49 - 66 2008

seccin Usti en Houbraken et al., 2007). Conidios y conidiforos

- Cabezas conidiales no de color oliva, estipe hialino, amarillo o caf

plido clulas de Hlle ausentes.......... .........6

6. - Cabezas conidiales en tonos amarillo, biseriadas; estipe rugoso;

conidios lisos a finamente rugosos ...................7
- Cabezas conidiales en tonos ocrceos, crema o ante; biseriadas;
estipe rugoso; conidios lisos a finamente rugosos 8
- Cabezas conidiales en tonos amarillo-caf o color cobre olivceo uni
y biseriadas; estipe rugoso o liso; conidios rugosos o con tubr-
culos, pared interna y externa visible o no................9

7. - Cabezas conidiales en amarillo intenso; radiadas que se abren en

columnas; colonias en CYA25 30-50 mm, MEA 25 40-60 mm, CYA37
0-25 mm, biseriados, estipe rugoso, abundantes esclerocios amarillos
a naranja, conidios globosos a elipsides, lisos a finamente rugosos
2,5-3(-4) m .........................A. auricomus (Guegen) Saito
- Cabezas conidiales en amarillo pastel intenso, radiadas, que se abren
en columnas; colonias en CYA25 45-60 mm, MEA 25 45-56 mm, CYA37
20-30 mm, biseriados, estipe rugoso, abundantes esclerocios blancos
a color ante; conidios esfricos, lisos a finamente rugosos 2,5-
3(3,5)m.................................................... A. sclerotiorum Huber.

8. - Estipes largos generalmente sobre los 1000 m en MEA, rugosos,

incoloros a amarillentos a caf hacia el pice; colonias en CYA25 39-
59 mm, MEA 44-55 mm, CYA37 0-35 mm; biseriados, mtulas que
cubren la vescula entera; conidios globosos a ampliamente elip-
sides lisos a finamente rugosos 2,5-3 (-4,5)m. Esclerocios cuando
estn presentes, rosados a prpura........................ A.ochraceus K.Wil.

- Estipes ms cortos, generalmente menores de 800 m en MEA, rugosos,

incoloros a amarillentos a caf hacia el pice; colonias en CYA25 30-
50 mm, MEA 33-60 mm, CYA37 20-37mm; biseriados, mtulas que
cubren casi la vescula entera; conidios globosos a ampliamente
elipsides lisos a finamente rugosos 3-3,5 (4) m. Esclerocios
esfricos a elongados, de color amarillo, ante a colores
caf........................................................................ A.melleus Yukawa

9. - Cabezas conidiales radiadas que se separan en columnas, de color

bronce a caf con la edad; colonias en CYA25 55-70 mm, MEA 65-70
mm, CYA37 40-70 mm; uni o biseriadas; estipe largo 600-1500 o ms
x 12- 20m, incoloro, rugoso; mtulas o filides que cubren la vescula
entera; conidios en cadenas largas que se mantienen unidas,
globosos, conspicuamente ornamentados y rugosos con pared
externa e interna visible, 5,5- 8 m..................... A tamarii Kita

(A.caelatus Horn,1977, tiene un color amarillo ms intenso en el reverso

en CYA25 que A.tamarii y estipes ms cortos en MEA (menores de
1000 m). A.pseudotamarii Ito, produce aflatoxinas y en CZ 37C el
dimetro de las colonias son menores de 33 mm, ver Ito et al., 2001).

- Cabezas conidiales radiadas que se separan en columnas, de color

amarillo grisceo a oliva caf, biseriadas; dimetro de las colonias
en CYA25 25-35 mm, MEA 25-35(40) mm, no crece en CYA37 ; estipe
largo generalmente sobre los 1000 m (hasta 3000) x 12- 25m, incolo-
ro, de pared lisa o a veces ligeramente rugosa hacia el pice. Conidios

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 Aportes morfotaxonmicos en el gnero Aspergillus Link: claves para las especies ms comunes - E. Piontelli

globosos, subglobosos a elipsides, lisos a rugosos, con crestas, 4-

5 (-6) m, sin una doble pared visible.................... A.wentii Wehmer

10. - Colonias verde oscuro,crecimiento en CYA25 40-60 mm, MEA 53-65

mm,CYA37, de 50 mm o ms; conidiforos cortos, caf, biseriados
con mtulas que cubren la mitad superior de la vescula; conidios
esfricos, lisos a finamente rugosos 3-4 m. Cleistotecios de Eme-
ricella a menudo presentes, globosos, de paredes de color rojo
oscuras al madurar, recubiertas de clulas de Hlle de color amarillo
a ante. Ascosporas (maduran a las 2 semanas), redondas a lenticulares
en vista lateral, rojo prpura, lisas, 4-6 x 3-4 m con 2 rebordes finos
longitudinales de cerca de 1 m en vista lateral Emericella nidulans
(Eidam) Vuill., anamorfo A. nidulans (Eidam) G.Winter
(La especie relacionada Emericella quadrilineata se diferencia slo por
tener ascosporas lisas con 4 rebordes longitudinales, mientras E. rugulosa,
presenta ascosporas ampliamete lenticulares 5-6,5 x 3-4,5 m, de paredes
generalmente rugosas, pero a veces lisas en algunos aislamientos, con 2 Clulas
rebordes finos longitudinales y crece ms lentamente en CYA25 10-17 (- Hlle
33)mm y MEA25 12-20 (-42) mm,que las 2 anteriores.Ver Klich, 2002).

- Colonias verde oscuro a gris verdoso amarillento, cleistotecios ausentes

o presentes (excluyendo Emericella) ............................... 11
Asco y ascosporas
11. - Colonias restringidas en CYA y MEA25 entre 15-25 mm, CYA20S 14-
30 y CYA37 0-17mm, cleistotecios presentes o ausentes.................12
- Colonias muy restringidas en CYA y MEA25 (<15mm o < de 10 mm en
7 das), que crecen ms rpido en CYA20S a los 7- 14 das, no crecen
a 37C ; cleistotecios ausentes .......................................... ...13
- Colonias no restringidas, mayores de 30 mm en CYA y MEA,
cleistotecios ausentes ...................................................................... 15

12 - Colonias de color verde oscuro con tonos amarillentos variables, Clulas

cabezas biseriadas, radiadas, estipe incoloro, amarillento a caf claro; Hlle
mtulas que cubren la mitad superior hasta los 2/3 de la vescula;
conidios globosos a subglobosos, finamente a conspicuamente
rugosos 2-3,5 (4,5) m, clulas Hlle raramente presentes, cleisto-
tecios ausentes............................. .A. versicolor (Vuill.) Tiraboschi
- Colonias de color gris verdoso a verde oscuro, de crecimiento ms
rpido, generalmente > de 15mm en CYA y MEA25, gris verdosas a
verde oscuro, cabezas conidiales uniseriadas estrictas, cleistotecios
amarillos presentes, con ascos evanescentes de 8 ascosporas;
clulas de Hlle ausentes ...................................................................14

13. - Colonias en colores plidos, gris verdosas, cabezas radiadas al inicio,

despus variables; crecimiento en CYA y MEA25 raramente exceden
los 8 mm, estipe incoloro, liso, vesculas uniseriadas subglobosas a
espatuladas 9-25 m; conidios semiesfricos a elipsoides, finamente
a francamente rugosos, los conidios elipsoides miden 3-5,5(6) x 3-4
m, los esfricos 3-5 m.................................. A. penicillioides Speg.
- Colonias grises a verde oscuro; cabezas conidiales columnares;
crecimiento en CYA y MEA 25, raramente exceden los 13mm; estipe
liso o finamente rugoso, incoloro con vesculas uniseriadas; filides
que cubren solo la parte superior de la vescula, conidios cilndricos
cuando nacen, posteriormente elipsoidales a piriformes, generalmente
rugosos 4-7 x 3-4 (-5,5) m. .......................... A . restrictus G..Smith
(A. penicillioides y A. restrictus se aislan y cultivan mejor en medios de
baja actividad de agua (DG18 , CYA20S, MA20-40G), permitiendo una
mejor identificacin). Conidios y conidiforos

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 Boletn Micolgico Vol. 23 : 49 - 66 2008

Asco y
14. - Cleistotecios amarillos de Eurotium con una sola capa de clulas
ascosporas
angulares parenquimatosas, rodeados de hifas,especialmente en
cultivos viejos y en CYA20S con dimetros de 30-45 (60) mm (como
mnimo el doble que en CYA y MEA25), no crece a 37C; ascosporas
que maduran en 14 das, lenticulares, lisas, a menudo con un surco
central, 5-6,5 x 3-5 m. Cabezas conidiales radiadas, estipe incoloro,
de pared lisa o rugosa, filides que cubren las 3/4 partes de la vescula;
conidios espinosos, variables en tamao, esfricos, elipsoides, o
apiculados, finamente rugosos a espinosos, 5-8 (11) x 5-7m
..............Eurotium herbariorum Link,(anamorfo A.glaucus Link)
(E. repens y E. rubrum son 2 especies estrechamente relacionadas con E.
herbariorum. La primera difiere por la formacin de ascosporas sin surcos
distintivos, mientras E. rubrum tiene surcos ms notorios y sus hifas
Pared del ascoma
adquieren colores ladrillo a rojo con la edad. Domsch et al.,1980, consideran
a estas 2 especies como sinnimos de E. herbariorum).

- Cleistotecios amarillos de Eurotium con una sola capa de clulas

Ascos y
angulares parenquimatosas, rodeados de hifas, especialmente en
ascosporas
cultivos viejos en CYA20S, con dimetros de 34-60 mm (como mnimo
el doble que en CYA y MEA25); ascosporas incoloras, de paredes
rugosas que maduran en 14 y 21 das, lenticulares, con un surco
central y 2 rebordes longitudinales, 4,5-6, x 3,5-4 m. Cabezas conidiales
radiadas a columnares, estipe incoloro a levemente caf, liso, filides
que cubren los 2/3 de la vescula; conidios, esfricos a subglobosos,
finamente rugosos a espinosos 4-5 (-7) m .Eurotium amstelodami
Mangin (anamorfo A. vitis Novobr.)
- Cleistotecios amarillos de Eurotium con una sola capa de clulas
angulares parenquimatosas, rodeados de hifas, especialmente en
cultivos viejos en CYA20S, con dimetros de 45-68 mm (como mnimo
el doble que en CYA y MEA25); ascosporas incoloras, lisas, que
maduran en 7-14 das, lenticulares, con 2 rebordes longitudinales Pared del
Asco ma
salientes en forma de polea, 4,5-5,5 (7) x 3,5-4 m. Cabezas conidiales
radiadas, estipe incoloro a cafesoso, liso; filides que cubren los 2/3
Asco y
de la vescula; conidios, variables en tamao, desde globosos, ovoides ascosporas
a piriformes, finamente rugosos a espinosos, 4-5 (-7) x 3-4m
................... ..........Eurotium chevalieri L.Mangin (anamorfo: A.
chevalieri Ibid.)

15. - Cabezas conidiales amarillo-verde a amarillo o verde oscuro...... 16

- Cabezas conidiales azules a azul verdoso oscuro a grisceo............ 20

16. - Cabezas conidiales uni o biseradas, conidios lisos a finamente

rugosos ...........................................................................................17
- Cabeza conidiales predominantemente uniseriadas, conidios conspi-
cuamente rugosos .............................18

17. - Cabezas conidiales radiadas a columnares; que permanecen de color

oliva verde a verde amarillento en el tiempo en CYA25; dimetro de
las colonias en todos los medios y temperaturas mayores de 50 mm;
estipe rugoso, incoloro, a veces en tonos caf plidos; vesculas bi-
seriadas generalmente en un 20%, pero variable; en MEA a
veces, enteramente uniseriadas; mtulas/filides que cubren los
de la vescula; conidios globosos a elipsoides 3- 6 (-8) m. Esclerocios
generalmente presentes, redondos de colores caf, violeta a negros
.........................................................................................A. flavus Link
(Las poblaciones de A flavus, presentan a menudo aislamientos con 2 tipos
de tamao de esclerocios, unas llamadas cepas L superiores a 400m y
otras llamadas cepas S inferiores a los 400 m, estas ltimas producen
Conidios y conidiforos

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 Aportes morfotaxonmicos en el gnero Aspergillus Link: claves para las especies ms comunes - E. Piontelli

gran cantidad de aflatoxinas B. Las especies relacionadas como A.nomius,

se distingue de A.flavus por producir aflatoxinas B, G y producir esclerocios
alargados, mientras la rara especie A.bombycis crece lentamente en CYA37
(0-37 mm en 7 das) y presenta un estipe liso).
- Cabezas conidiales radiadas a laxamente columnares, de color gris
amarillento que se tornan oliva caf con el tiempo en CYA25;carac-
tersticas de crecimiento similares a A.flavus, estipe rugoso, incolo-
ro, vesculas predominantemente uniseriadas, pero a veces lo con-
trario (biseriadas); mtulas/filides que cubren la mitad o ms de
la vescula; conidios globosos a elipsoides 4-8,5 (-10) m .................
......................................................................A.oryzae (Ahlburg) Cohn.
(Se considera actualmente a A. oryzae no como una especie diferente, sino
un ecotipo diferente de A.flavus).

18. - Conidios globosos, usualmente entre 3,5-6 m en dimetro (rugosos);

colonias que mantienen un color amarillo verdoso oscuro o tonali-
dades verdes en el tiempo en CIA25; cabezas conidiales usualmen-
te radiadas; estipe incoloro, finamente a muy rugoso.............
.................................................................A.parasiticus Speare
- Conidios globosos, usualmente 5-8 m en dimetro, colonias
usualmente de color bronce a caf en el tiempo en CYA 25....... 19

19. - Cabezas conidiales radiadas a laxamente columnares, de color oliva a

caf en CYA25, predominantemente uniseriadas; estipe incoloro liso
a rugoso; filides/mtulas que cubren la mitad de la vescula; conidios
de paredes finas, rugosas pero sin tubrculos sobresalientes, de colo-
res oscuros 5,5-7 m ......... A. sojae Sakaguchi & Yamada ex Murak Sin dibujo
(Esta especie se asla prcticamente slo de las fermentaciones del koji).
- Cabezas conidiales radiadas que se abren en cortas columnas de color
caf verdoso intenso o amarillo caf en CYA25, uni y biseriadas, con
estipe rugoso incoloro; filides/mtulas que cubren usualmente la
vescula entera; conidios rugosos, de paredes gruesas, con las 2
paredes visibles, ornamentados con tubrculos de colores oscuros,
5,5-8 m ........................................................ A.tamarii Kita

20. - Colonias de crecimiento reducido en CYA37 (2-10) mm; cabezas coni-

diales radiadas predominantemente biseriadas, de un color azul
verdoso, a turquesa; en CYA25 semejante a colonias de Penicillium;
colonias menores de 35 mm en CYA25 y CYA20S; estipe incoloro a
caf plido (menores de 500 m de largo); en el micelio areo se pre-
sentan cabezas conidiales pequeas, semejando penicillios; conidios
esfricos rugosos a espinosos, 3-4 (4,5) m....................................
............................................A. sydowii (Bain. & Sart.) Tom & Church

- Colonias de regular crecimiento en CYA37, menores de 30 mm; cabezas

conidiales radiadas a clavadas, que se abren en columnas con la
edad; estrictamente monoseriadas; colonias en CYA25 y CYA20S
mayores de 35mm; estipes largos y anchos (con promedios mayores
de 1000 x 10-30m), de paredes lisas, incoloros a levemente caf cerca
del pice; vesculas tpicamente espatuladas con reas frtiles de
hasta 250 m de largo; conidios lisos, mayoritariamente elipsoidales,
a veces apiculados a cilndricos, 3-6 x 2,5-4 m ... A.clavatus Desm.
(A.giganteus Wemer, tiene mayor crecimiento en MEA25 (43-65 mm),
estipe de 2 tipos, 2-3 (-4) mm o varios cent. Vesculas ms anchas, de 2
tipos; en conidiforos cortos 30-50m y en largos de 120-180 m. Para una
revisin taxonmica de la seccin Clavati ver Vargas et al, 2007b)

- Colonias de gran crecimiento en CYA37, mayores de 55 mm de Conidios y

conidifo ros
dimetro.............................................................................................. 21

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 Boletn Micolgico Vol. 23 : 49 - 66 2008

21. - Cleistotecios presentes, tomentosos, hialinos a crema, con ascosporas Asco y Conidiforo
ascosporas y conidios
hialinas, lenticulares a esfricas con borde sobresaliente 5-8 x 4-5
m. Anamorfo semejante a A.fumigatus presente, con cabezas
columnares, vesculas piriformes, monoseriadas; conidios esfricos
a elipsoidales, lisos a finamente rugosos, 2,5-3,5 x 2-3 m .
............................. Neosartorya fischeri* (Wehmer) Malloch & Cain
(anamorfo A . fischerianus Samson & W.Gams)
(Ver diferencias con otras especies del gnero en Clave N2)

- Cleistotecios ausentes; cabezas conidiales columnares, con vesculas

ampliamente clavadas, estipe incoloro a gris cerca del pice; vesculas Asc omata
uniseriadas con filides que cubren la mitad o la tercera parte de la Ascospora
vescula, dispuestas en forma paralela con el eje del estipe; conidios al SEM
globosos a ampliamente elipsoides, lisos a finamente rugosos o
espinosos 2-3 m en dimetro ........................ A. fumigatus Fresen.
(Es una de las especies de gran distribucin en una amplia variedad de
substratos y ambientes; es el ms comn oportunista patgeno en humanos
y otros mamferos, ver clave N2 para diferenciarla de otras especies
semejantes del subgnero Fumigati).

Clave N2 morfofisiolgica (tentativa) para la determinacin de las especies del subg-

nero Fumigati con y sin produccin de cleistotecios en cultivos (7 das de incubacin).
(Para una descripcin completa (polifsica) de las especies de importancia ya sea ecolgica como
clnica, debe consultarse Hong et al., 2005; Balajee et al., 2007 y Samson et al., 2007)

1. - Ausencia de cleistotecios en cultivos .....................2

- Presencia de cleistotecios en cultivos ........ ................................ 12

2. - Conidios en MEA verde grises a azul verdosos, dispuestos en

columnas................................................................................................ 3
- Conidios en MEA rosados a prpura rojo en masa, dispuestos en co-
lumnas cortas, crecimiento en CYA37 16-19 m (mximo 42C); vesculas
pequeas en forma de pera y dispuestas en ngulo recto (al igual que
A.viridinutans y A.duricaulis) 10-18 m de ancho, conidios globosos,
espinulosos 2,8-3,5m ........................... Aspergillus brevipes Smith
(Se ha aislado en Australia y se asemeja a A. duricaulis)

3. - Cabezas conidiales predominantemente clavadas, colonias en CYA37C

menores que 30 mm.. Vea Aspergillus clavatus Desm.(clave anterior)
- Cabezas conidiales predominantemente piriformes, espatuladas, subglo-
bosas a globosas; colonias en CYA 37C mayores o menores de 55 mm
........................................................................... 4

4. - Colonias que crecen a 50C ................................ 5

- Colonias que no crecen a 50C.... ................6

5. - Colonias en CYA37 60-75 mm; crecimiento a 50C pero no a 10C; ca-

beza conidial columnar, estipe 50-350 x 3,5-10 m (generalmente entre
6-10 m de ancho); vescula piriforme a subclavada 10-26m; conidios
2-3,5m, globosos a elipsoides, lisos a finamente rugosos (Es la espe-
cie ms patognica en humanos) .....Aspergillus fumigatus Fresenius
(Especies similares: A. fumigatiaffinis, A. fumisinnematus, A. lentulus,
A. novofumigatus, A. viridinutans). Conidios y conidiforos

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 Aportes morfotaxonmicos en el gnero Aspergillus Link: claves para las especies ms comunes - E. Piontelli

- Colonias en CYA37 50-70 m o ms; crecimiento a 50C y a 10C; cabeza

conidial columnar corta, estipe 80-100 x 4-7 m, vescula globosa o en
forma de matraz, 15-25 m de ancho; filides que cubren los de la ves-
cula, conidios 2,5-3m subglobosos, lisos (aislado en Corea del Sur)
........... Aspergillus turcosus Hong, Frisvald & Samson

6. - Colonias que crecen hasta 45C, crecimiento a 10C negativo o positivo

......................................................................................................... 7
- Colonias que crecen hasta los 42C .......... .......................... 10

7. - Crecimiento negativo a 10C; presencia de sinnema en el tiempo e hifas

funiculosas areas; crecimiento en CYA 37 57-61 mm; estipe hasta 210 x 6-
8,5 (-10) m; vescula hemiesfrica 16-20 (-25) m; conidios ampliamente
elipsoidales, verruculosos, 2,8-2,3 x 2,4-2,8 m (patognico en humanos)
..............................................Aspergillus fumisynnematus Horie et al.
(Distribucin: Brasil, Venezuela, Espaa. Especies similares: A. fumigatiaffinis,
A. fumigatus, A. lentulus, A. novofumigatus)

- Crecimiento positivo a 10C, ausencia de sinnema e hifas funiculosas en el

tiempo ......................... ..............................................................................8

8. - Crecimiento lento en CREA (ver Tabla 3*), sin produccin de cido ......... 9

- Crecimiento lento en CREA con produccin de cido (las dems especies

integrantes de la clave no producen cido en CREA, salvo A.fumigatus,
que a veces puede presentar una dbil produccin); crecimiento positivo a
10C; crecimiento en CYA37 65-70 mm; estipe, 6-8 m diam.; vesculas
globosas a subglobosas 18-24 m; conidios 2-3m globosos a subglo-
bosos, lisos ........ Aspergillus fumigatiaffinis Hong, Frisval & Samson
(Distribucin: USA, Espaa. Especies similares: A. fumigatus, A. lentulus,
A. novofumigatus).

9. - Crecimiento positivo a 10C; conidiacin pobre pero abundante en algunos

aislamientos; crecimiento en CYA37 54-70 mm, estipe 20-500 x 4-6 (-7) m,
a veces sinuoso y constreido; vescula 10-25 m, globosa a piriforme,
usualmente subglobosa; conidios globosos a ampliamente elipsoidales,
lisos a finamente rugosos 2-3,2 m (patognico en humanos)..................
...... Aspergillus lentulus Balajee & Marr
(Distribucin cosmopolita. Especies similares: A. fumigatiaffinis, A.fumigatus,
A. fumisinnematus, A. novofumigatus, A. viridinutans).

- Crecimiento positivo a 10C; crecimiento en CYA37 49-52 mm; estipe 50-

500 x 4-7 mm, vescula subglobosa a forma de matraz, relativamente ancha
(13) 15-30 m, Conidios 2,5-3 m, elipsoidales, lisos...............................
............................. Aspergillus novofumigatus Hong, Frisvald & Samson
(Se ha aislado solamente en las islas Galpagos y en Ecuador. Especies similares:
A. fumigatiaffinis, A. fumigatus, A. fumisinnematus, A. lentulus )

10. - Crecimiento en MEA 25, menor de 30 mm en 7 das ............................11

- Crecimiento en MEA25 mayor que 30 mm en 14 das (60-70 mm); estipe
corto 50-30 x 1,2-2,2 m; vesculas pequeas 4-8,5 m; irregularmente glo-
bosas; conidios globosos, finamente rugosos 2,5-3,5 m (Caractersticas
distintivas: crecimiento lento, reverso negruzco en CYA y filides en racimo
en un lado de la vescula)... Aspergillus unilateralis Thrower
(Distribucin: Australia)
Conidios y conidiforos

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 Boletn Micolgico Vol. 23 : 49 - 66 2008

11. - Crecimiento en MEA25 11-14 mm; estipe 20-35x 3,3-4,4 m; vescula subglo-
bosa a forma de matraz, 7,5-12, que se desva en ngulo recto; conidios
globosos, finamente rugosos, 2-2,6m....Aspergillus viridinutans Ducker
& Thrower (patgeno en humanos).
(Distribucin: Australia, Sri Lanka, Zambia, Rusia, Chile)

- Crecimiento en MEA25 20-22 mm; estipe 5-50 x 3,5-5,5 m ; vesculas en

forma de matraz 7-14 m; conidios (2,8)3-3,2 (-3,3) m, globosos,
equinulados............ Aspergillus duricaulis Raper & Fennel
(Distribucin: Argentina. Especie similar: A.brevipes)

12. - Colonias en CYA25 mayores de 40 mm ...................................13

- Colonias en CYA25 menores de 40 mm ..................15
a
13. - Ascosporas lenticulares, con un patrn reticulado de crestas irregulares d
7-8 x 3-4 m; conidios subglobosos a elipsoides, finamente rugosos, 2-
2,5 o hasta 3m, cuando globosos. Colonias en CYA25 45-68 mm ........... b
........ Neosartorya fischeri (Wehmer) Malloch & Cain (anamorfo:
Aspergillus fischeranus Samson & W.Gams)
(Especie cosmopolita, patgena en el hombre y otros mamferos. Especie similar:
c
N.tatenoi)
a
(Leyenda: a. Asco y ascosporas, b. Ascospora vistas al SEM,
c.Ascomata en cultivo, d. Conidiforo y conidios)
c
- Ascosporas lenticulares espinosas, verrucosas o tuberculadas .. 14

14. - Colonias en CYA25 60-70 mm.Ascosporas sin un patrn reticulado de

crestas irregulares, la ornamentacin superficial corresponde a colgajos b
triangulares de tejido; conidios globosos a subglobosos lisos, 3-4 m .........
.........Neosartorya pseudofischeri Peterson (anamorfo Aspergillus
thermomutatus (Paden) Peterson. (Especie aparentemente cosmopo-
lita, patgena en humanos)
(Leyenda: a. Asco y ascosporas, b. Ascospora vista al SEM, a
c. Conidiforo y conidios)
c
- Colonias en CYA25 41-70 mm. Ascosporas lenticulares, 4,5 m, espinosas, b
con espinas de varios tamaos (<0,5 hasta 7 m) o con proyecciones en la
parte convexa, con 2 crestas ecuatoriales separadas y anchas; conidios
globosos, finamente rugosos, 2-2,5 m Neosartorya spinosa (Raper
& Fennell) Kozakiewicz (anamorfo: Aspergillus spinosus Kozakiewicz)
(Aparentemente cosmopolita. Leyenda: a. Asco y ascosporas, b.Ascos-
pora vista al SEM, c. Conidiforo y conidios)

15. - Colonias en CYA25 12-14 mm, en CYA37 27-30 mm. Ascosporas lenticulares,
finamente reticuladas 4,5-5 m, con 2 crestas ecuatoriales poco separadas;
conidios pequeos, globosos a subglobosos 2-2,5 m, lisos a finamente a
c
rugosos .......... Neosartorya hiratsukae Tsubouchi & Hori (anamorfo:
A. hiratsukae Tsubouchi & Hori).(Distribucin, Japn, Brasil,Corea del
Sur. Especies similares: N. fischeri, N. tatenoi )
(Leyenda: a. Asco y ascosporas, b. Ascospora vista al SEM,
c. Conidiforo y conidios)
b

62
 Aportes morfotaxonmicos en el gnero Aspergillus Link: claves para las especies ms comunes - E. Piontelli

- Colonias en CYA25 33-36 mm, en CYA37 61-65 mm. Ascosporas lenticulares

de superficie tuberculada, con 2 crestas ecuatoriales a menudo irregulares
5-5,5 x 4-5 m; conidios subglobosos a ampliamente elipsoides, lisos 2,6-
a
3,2 x 2,4-2,6 m. .Neosartorya udagawae Horie, Miyaji & Nishim.
(anamorfo: Aspergillus udagawae Horie, Miyaji & Nishim.)
c
(Distribucin: Brasil USA, Espaa, Japn.Especies similares: N. aureolata,
A. viridinutans) b
(Las especies de Neosartorya son ms de 20, slo se presentan en las
claves las ms comunes en distribucin y las 5 encontradas como pat-
genas oportunistas en el hombre. Para la descripcin de todas las especies
ver Samson et al., 2007)
(Leyenda: a. Asco y ascosporas, b. Ascospora vista al SEM,
c. Conidiforo y conidios)

Tabla 3. Algunas caractersticas morfofisiolgicas de utilidad para las diferentes especies de Aspergillus de
la seccin Nigri. Modificado de Samson et al., 2007. (Los datos de secuencias del gene calmodulina permiten
distinguir todas las especies de la seccin)

Especies Conidios Superficie Vescula Temp. CREA* Reaccin de

Uniseriadas m m maxC prod.ac. Ehrlich
crecimiento*

A. aculeatinus 2,5-4,5 finam.rugosa 45-80 36 3 -3 -

A. aculeatus 3,5-5 finam.rugosa 60-80 36 2 -3 -
A. japonicus 3,5-5 finam. rugosa 20-35 36 3 -1 -
A. uvarum 3-4 espinosos 20-30 36 1 -1 -

Especies
Biseriadas

A. brasiliensis 3,5-4,5 espinosos 30-45 40 4 -4 ++ amarillo

A. carbonarius 7-9 espinosos 40-80 36 3 -3 -
A. costaricarensis 3,1-4,5 finam. rugosa 40-90 40 5 -5 ++++ azul
A. ellipticus 3,5-5-5 lisos-finam.rug. 75-100 30 2 -2 -
A. foetidus 3,5-4,5 lisos-finam.rug. 50-80 40 4 -4 ++ amarillo
A. heteromorphus 3,5-5 espinosos 15-30 33 2 -2 ++++ amarillo
con halo prpura
A. homomorphus 5-7 espinosos 50-65 36 2 -2 idem anterior
A. ibericus 5-7 finam.espinosa 50-60 40 3 -3 ++ amarillo
A. lacticoffeatus 3,4-4,1 lisos 40-65 40 3 -1 -
A. niger 3,5-5 finam.rugosa 45-80 40 5 -5 ++ amarillo
A. piperis 2,8-3,6 finam.rugosa 40-55 40 5 -5 -
A.sclerotiicarbonarius 4,8-9,5 finam.espinosa 45-90 33 0 -0 -
A. sclerotioniger 4,5-6-4 finam.rugosa 30-50 36 4 -2 + violeta,esclerocios
A. tubingensis 3-5 finam.espinosa 40-80 40 1 -1 -
A. vadensis 3-4 lisos 25-35 40 5 -5 -

* El mdio de cultivo agar creatina sucrosa (CREA) permite ver el crecimiento y la produccin de cido (es de color
violeta prpura y cambia al amarillo con la produccin de cido). Los nmeros del 1 al 5 en forma gradual, indican
el tamao del halo o de la colonia, siendo el 1 el ms pequeo; el cero indica que no hay crecimiento.
La composicin del medio es: Creatina (1H2O) 3 g; Sucrosa 30 g; KCL 0,5 g; MgSO4.7H2O 0,5 g; FeSO4.7H2O
0,01g; K2HPO4.3H2O 1,3 hasta 1,6 g; Prpura de bromocresol 0,05 g; agar 15 g; Agua destilada 1000 mL. pH.final
8 0,2, ajustarlo despus de autoclavarlo.

63
 Boletn Micolgico Vol. 23 : 49 - 66
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66
 Boletn Micolgico Vol. 23 : 67 - 73 2008
AEROMICOTA DE AMBIENTES INTERNOS:
COMPARACION DE METODOS DE MUESTREO
(Aeromycota in indoor environment:sampling methods comparison)
Rojas, T.I.(1), Martnez, E.(2), Aira, M.J. (3)& Almaguer, M.(1)
Palabras clave: Hongos, atmsfera, interiores, muestreo
Key words: Fungi, atmosphere, indoor, sampling
RESUMEN
El procedimiento de muestreo utilizado para
determinar el grado de contaminacin fngica en
ambientes internos, difiere segn los autores. Por ello,
con el fin de conocer si el mtodo utilizado por nuestro
grupo de investigacin, es comparable con otras
metodologas, se ha realizado un estudio comparativo
con varios sistemas de captacin de esporas del aire,
incluyendo equipos volumtricos (Aeroscope Chirana,
System Air Sampler, Burkard Personal Culture) as como
el mtodo tradicional por sedimentacin. Los resultados
obtenidos muestran que apenas existen diferencias
cuando se utilizan los sistemas volumtricos, sin
embargo, el mtodo por sedimentacin ha sido menos
eficaz, tanto desde el punto de vista cuantitativo como
cualitativo. Mientras, el mtodo directo por hisopado,
resulta un buen complemento para determinar la fuente
de contaminacin. Tambin se ha determinado la hora
del da con mayor carga fngica, que se localiza al
medioda y tras el anlisis de varios medios de cultivo,
se concluye que el Agar Glucosa de Sabouraud resulta
adecuado para este tipo de investigaciones.
INTRODUCCION
Uno de los aspectos de inters para los
investigadores que realizan estudios de aeromicologa
ambiental, y en concreto en el interior de edificios, es
conocer si el procedimiento de trabajo se asemeja a los
Recibido el 20 Octubre 2008
Aceptado el 27 Noviembre 2008
(1) Departamento de Microbiologa y Virologa. Facultad
de Biologa. Universidad de La Habana (Cuba)
(2)Laboratorio Central de Cuarentena Vegetal
Centro Nacional de Sanidad Vegetal, La Habana (Cuba)
(3)Departamento de Botnica, Facultad de Farmacia,
Universidad de Santiago (Espaa)
ABSTRACT
The sampling method used to determine the degree
of fungal contamination in indoor environment differs,
according to some authors. Therefore, with the purpose
of knowing if the method used by our research team is
comparable to other methodologies, a comparative study
with various systems used to capture air spores has been
carried out which include volumetric equipment
(Aeroscope Chirana, System Air Sampler, Burkard
Personal Culture) as well as the traditional method by
sedimentation. Results have revealed that there is fairly
some difference when volumetric systems are used; as to
the sedimentation method, it has proved to be less effective
both in the quantitative and qualitative point of view.
On the other hand, direct method through sprinkling
becomes a suitable tool to establish the source of
contamination. Moreover it has been recorded the time
of day when the greatest fungal load occurs, this being
at noon so after the analysis of several culture media it
has been concluded that Sabouraud Agar Glucose is
suitable for this kind of research
estndares, con el fin de poder relacionar los resultados
propios con los obtenidos por otros autores. En aquellos
pases en los que esta lnea de investigacin y en general,
la aerobiologa, est organizada en Redes de trabajo o
network, son stas las encargadas de la publicacin de
protocolos (Aira et al., 2005; Galn et al., 2007), lo que
facilita el desarrollo de una metodologa comn. Sin
embargo, este no siempre es el caso y los investigadores
desarrollan su trabajo adaptndose a los medios
disponibles, desconociendo si finalmente sus resultados
67
 Boletn Micolgico Vol. 23 : 67 - 73
son comparables a otros, aunque hayan sido realizados
en el mismo territorio.
Los estudios sobre contaminacin fngica
realizados en Cuba, en este tipo de ambientes, son cada
vez ms numerosos y abarcan una amplia variedad de
locales (museos, oficinas, viviendas, etc.), segn el objetivo
particular de cada estudio (Garca, 1997; Fernndez et al.,
1998;Airaet al., 2002; Rojas et al., 1993, 2002; Acosta et
al., 2003; Borrego et al., 2008). Por el contrario, no son
muchos los trabajos que abordan el procedimiento
metodolgico (Rojas, 1998), por lo que en el presente
estudio se incluye un anlisis comparativo con diferentes
mtodos y equipos de muestreo, a diferentes horas del da
y con varios medios de cultivo.
Para colectar las esporas del ambiente, tradicio-
nalmente se ha usado un mtodo gravimtrico o de
sedimentacin, exponiendo al aire durante un cierto tiempo
una placa de Petri con medio de cultivo, pero hoy en da se
prefieren los equipos de captacin volumtrica que hay
en el mercado, ya que a su sencillo funcionamiento, se
une la ventaja de su autonoma y fcil transporte. As mismo
resulta recomendable completar este tipo de estudios con
el muestreo directo (por hisopado) ya que permite iden-
tificar, con mayor precisin, la fuente de contaminacin
ms prxima.
Tambin la hora en que se realiza el muestreo,
normalmente se acomoda a las condiciones especficas de
cada estudio, sin embargo, consideramos importante
determinar cul es la ms adecuada en cada caso, lo cul
estar relacionado con las condiciones climticas (y
microclimticas) del lugar. En cuanto al medio de cultivo
usado en el muestreo no hay un acuerdo unnime entre
los distintos autores, por lo que se ha realizado tambin
un estudio comparativo con los ms recomendados para
este tipo de investigacin.
MATERIALES Y METODOS
El estudio se llev a cabo en varios locales
(museos, bibliotecas, almacenes) de la ciudad de La Habana
(Cuba), sin embargo, ya que no se trata de ofrecer los
resultados especficos de los mismos, sino profundizar en
los aspectos metodolgicos, omitindose su descripcin
por resultar irrelevante para este trabajo.
Los equipos de captacin volumtrica que se han
evaluado, han sido: un Aeroscope Chirana (AERO), un
System Air Sampler (SAS) y un Burkard Personal Culture
(BPC). Todos ellos permiten la incorporacin de una placa
de Petri con medio de cultivo y cada fabricante facilita
instrucciones precisas, tanto en relacin a su correcto
manejo, como en la forma de recuento de las colonias y su
transformacin a unidades formadoras de colonias (ufc/
m3), que ha sido la expresin utilizada para cuantificar la
68
2008
Muestreo en tres Muestreo en cinco
3 1 2
2 3
1 4 5
Figura 1. Esquema del diseo utilizado en los
muestreos
contaminacin fngica. Por su parte, para el mtodo
gravimtrico se han seguido las recomendaciones de
Omeliansky (OME) calculando el nmero de ufc/m3 segn
el mtodo descrito en NRP-201 (1987).
El diseo experimental para validar el mtodo de
muestreo, se enfoc para averiguar preferentemente la
eficacia del equipo AERO, por ser el de uso ms habitual
en nuestro laboratorio. Para ello, se realizaron dos
muestreos en dos locales diferentes, combinando el uso
de dicho equipo con los dems. En todos los muestreos
se sigui un diseo diagonal tomando 3 5 puntos de
acuerdo a la superficie de los mismos, segn Norma
FEDECAI-01 (2007), tal como se seala en la Figura 1, y
realizando tres rplicas en cada punto.
Adems del muestreo ambiental realizado por
captacin de esporas del ambiente, se han tomado muestras
por el mtodo de hisopado (NRP-201, 1987) a los sustratos
y/o objetos presentes en el interior de los locales. En
ambos casos, y con el fin de valorar las posibles
variaciones entre ambos mtodos, se procedi al estudio
de las colonias, identificando a nivel de gnero de acuerdo
a Barnett & Hunter (1998). Para los gneros ms
abundantes se siguieron los criterios de identificacin de
Ellis (1971, 1976), Klich & Pitt (1994), Ho et al. (1999) y Pitt
(2000).
En cuanto a los medios de cultivo, se han valorado
los cuatro siguientes, M1 (Agar Extracto de Malta
suplementado con peptona y glucosa (ACGIH, 1989); M2
(Agar Extracto de Malta+7,5% NaCl); M3 (Agar Papa
Dextrosa +7,5% NaCl) y M4 (Agar Glucosa de Sabouraud)
y el estudio en el tiempo se realiz muestreando cada hora
entre las 7 a.m. y las 4 p.m.
Los resultados obtenidos se han valorado
estadsticamente, aplicando el test de Students, la Prueba
de Kruskall-Wallis y/o la prueba de Scheff del paquete
informtico StatSoft, Inc. (2001).
RESULTADOS Y DISCUSION
El sistema AERO se prob frente a los dos sistemas
volumtricos (SAS y BPC) y el mtodo gravimtrico (OME)
en dos locales diferentes (L1 y L2). Los resultados
 Aeromicota de ambientes internos: Comparacin de mtodos de muestreo - Rojas et al.

muestran que no existen diferencias significativas en 2003) y algunos autores le reconocen ciertas ventajas con
cuanto a los niveles de contaminacin fngica, en el primer respecto a otros modelos; a sealar la homognea distri-
caso, mientras que al comparar AERO con OME, el sistema bucin de las esporas en la placa (debido a la rotacin de
volumtrico se muestra mucho ms eficaz, ya que recoge sta bajo la hendidura) y la posibilidad de poder usar
prcticamente el doble de unidades formadoras de colonias diferente volumen de aire dependiendo de la anchura de la
(Figura 2). rejilla utilizada, lo cual facilita seleccionar la misma de
Estos resultados coinciden con otros autores que acuerdo a los niveles esperados (Portnoy et al., 2004).
sealan que el mtodo por sedimentacin en placas no Mas recientemente se han desarrollado nuevos
permite comparar de forma favorable los resultados modelos, basados en el mismo principio que el equipo
obtenidos por otros mtodos de muestreo (Buttner & AERO (STA-100, 203 y 204, entre otros), los cuales son
Stetzenbach, 1993; Caneva et al., 2004). utilizados con frecuencia en estudios ambientales de
Los equipos volumtricos SAS y BPC, son edificios, industria farmacutica, hospitales, laboratorios
utilizados con frecuencia en estudios aerobiolgicos (Bellin de cosmticos y de alimentos (Horn, 2005).
& Schillinger, 2001; Aira et al., 2007) debido, entre otras Para evaluar la eficacia del equipo AERO, esta vez
ventajas, a su poco peso en comparacin con el equipo desde el punto de vista cualitativo, se realiz un nuevo
AERO. Pese a ello, dicho equipo es utilizado de manera muestreo para compararlo con SAS y OME, identificando
frecuente, tanto en ambientes de interior (Blomquist et al., los aislamientos a nivel de gnero. Los resultados
1984; Klanova, 2000) como de exterior (Medrela- Kuder, obtenidos (Figura 3) muestran que los gneros Asper-
gillus, Cladosporium y Penicillium fueron los ms
ufc/m 3 AERO SAS abundantes en cuanto a unidades formadoras de colonias,
2000 a no presentndose tampoco diferencias significativas entre
a ambos sistemas volumtricos, pero s entre el equipo AERO
1500
1000 a y el mtodo OME, tanto para Aspergillus como para
a
500 Penicillium.
0 El hecho de que dichas diferencias no afecten al
L1 L2 gnero Cladosporium, lo atribuimos a la dimensin de los
conidios que son ms grandes que los de Aspergillus y
uf/cm 3 AERO OME Penicillium y por tanto, tienen un mayor tamao
aerodinmico, ya que de acuerdo con Caneva et al. (2004),
2000
1500
la micobiota del aire colectada depender, entre otros
1000 factores, del tamao y forma de las partculas, del
b b movimiento del aire circundante, mientras la sedimentacin
500 a a
0 no favorece la representacin de hongos con esporas
L1 L2 pequeas.
En el mismo sentido, Pasanen et al. (1991), sealan
ufc/m 3 AERO BPC que en la depositacin de las esporas hay que tener en
cuenta el tamao aerodinmico, que aumentar con el
2000 a a incremento de la humedad relativa del aire, el que favorecer
1500 la rpida cada de las partculas de mayor tamao. Por lo
1000 a a tanto, teniendo en cuenta los resultados obtenidos con el
500
0
Aeroscope Chirana, coincidimos con lo sealado por
Burge & Solomon (1987) en que este mtodo es eficiente
L1 L2
en la colecta de microorganismos ambientales.
Leyenda.- AERO (Aeroscopio Chirana), Al representar las especies ms abundantes en los
SAS (Sistem Air Sampler), locales muestreados, a partir de las esporas del ambiente
BPC (Burkard Personal Culture), (con el equipo AERO) o de las recogidas por hisopado
OME (Omeliansky), (Tabla 1), se observan diferencias considerables, tanto en
L1 y L2 (locales de muestreo) el nmero de especies identificadas (28 ambiente vs. 22
por hisopado) como en su frecuencia relativa. As especies
Figura 2. Valores promedios de ufc/m3 obtenidos en la como Aspergillus flavus, A.niger, Cladosporium clados-
comparacin de diferentes mtodos de muestreo (letras porioides, C. sphaerospermum y Penicillium citrinum,
no comunes indican diferencias significativas de p<0,05, son ubicuas en todos los locales muestreados mientras
segn test de Students) en las muestras de hisopado su frecuencia relativa oscila

69
 Boletn Micolgico Vol. 23 : 67 - 73 2008

Figura 3. Valores promedios de ufc/m3 de los gneros identificados con diferentes mtodos de muestreo (letras no
comunes indican diferencias significativas de p<0,05, segn Prueba de Kruskall-Wallis para Cladosporium y
prueba de Scheff para Aspergillus y Penicillium

entre un 17-50%. Por su parte, Aspergillus tamarii y los gneros Aspergillus, Penicillium y Cladosporium
Cladosporium herbarum tienen una mayor presencia en fueron los ms abundantes, independientemente del medio
los sustratos muestreados que en el aire. Estos resultados
pueden ser tiles para localizar la fuente de contaminacin
del local y valorar la influencia del aporte del aire exterior Tabla 1. Comparacin de la frecuencia relativa (F.R.%)
en aquellos que tengan comunicacin con el exterior. de las especies identificadas en el ambiente y en los
La evaluacin del medio de cultivo tambin se sustratos
realiz desde un doble punto de vista, cuantitativo y AERO Hisopado
(F.R. %) (F.R%)
cualitativo. En el primer aspecto, se observa que el medio
M2 logr la mayor eficiencia aunque no muestra diferencia Aspergillus caespitosus 11 8
significativa desde el punto de vista estadstico con M3, Aspergillus candidus 33 16
pero s con M1 y M4. El medio M3 no difiere con ninguno Aspergillus clavatus 33 16
de los medios evaluados (Figura 4). Aspergillus flavus 100 50
Se debe sealar que M1 es el medio recomendado Aspergillus fumigatus 55 25
para este tipo de estudios segn la ACGIH (1989), el cual Aspergillus niger 100 42
present los valores ms bajos de recuperacin y ninguna Aspergillus ochraceus 11 --
diferencia significativa desde el punto de vista estadstico Aspergillus oryzae 44 25
con M4. Aspergillus parasiticus 11 --
Para evaluar los resultados desde el punto de Aspergillus puniceus 11 --
vista cualitativo, se identificaron los aislamientos
Aspergillus scleriotorum 22 --
realizados a nivel de gnero. En la Figura 5 se observa que
Aspergillus sydowii 33 25
ufc/m 3 Aspergillus tamarii 22 42
a Aspergillus terreus 67 33
440 ab
330 Aspergillus ustus 22 --
b
220 b Aspergillus wentii 22 --
110
Aspergillus versicolor 55 25
Cladosporium cladosporioides 100 42
0
M1 M2 M3 M4 Cladosporium herbarum 14 17
Cladosporium oxysporum 71 33
M1 (agar extracto de malta suplementado con peptona y Cladosporium sphaerospermum 100 17
glucosa), M2 (agar extracto de malta+7.5% NaCl), M3 (agar Penicillium chrysogenum 86 50
papa dextrosa+7.5% NaCl), M4 (agar glucosa de Sabou-
Penicillium citrinum 100 17
raud)
Penicillium corylophylum 29 17
Figura 4. Valores promedios de ufc/m3 obtenidas con Penicillium glabrum 71 33
Aeroscope Chirana en diferentes medios de cultivos Penicillium janthinellum 14 8
(letras no comunes indican diferencias significativas, Penicillium purpurogenum 71 8
segn Prueba de Scheff para p<0,05) Penicillium simplicissimun 71 8

70
 Aeromicota de ambientes internos: Comparacin de mtodos de muestreo - Rojas et al.

ufc/m 3 M1 M2 M3 M4
200 a
a
150 ab a
b ab
100 b ab b b
50
b b
0
Aspergillus Cladosporium Fusarium Levadura Nigrospora Paecilomyces Penicillium

Figura 5. Niveles promedios de ufc/m3 de hongos y levaduras en diferentes medios de cultivo (letras no comunes
indican diferencias significativas, segn Prueba de Scheffe para p<0,05)
de cultivo, resultando ms eficaz M2 para Aspergillus y proceso la elevada humedad un aspecto que justifica que
Penicillium y M3 para Cladosporium. encontremos picos de mxima concentracin a las 7 de la
Ambos medios no presentaron diferencias en maana ya que las ventanas del Local (L1) permanecen
cuanto a la significacin estadstica para la colecta de los abiertas durante la noche.
tres gneros evaluados. El resto de los medios (M1 y M4) De todas formas, al calcular los valores promedio
no presentan diferencias entre s y difieren de M2. Sin de contaminacin en ambos muestreos, la hora de mayor
embargo, atendiendo a la diversidad que es capaz de concentracin fngica result las 12h, con 3327 ufc/m 3,
recuperar cada uno de los medios, M1 y M4 son los ms con valores muy prximos a los obtenidos a las 11h (3086
adecuados ya que en M2 no se representaron las ufc/m3), por lo que esta franja horaria podra ser la ms
levaduras ni los gneros Paecilomyces ni Nigrospora, y conveniente. Este comportamiento coincide con los
en M3 no se obtuvo Paecilomyces y se recuperan bajos resultados obtenidos por Shadzi et al. (1993), al estudiar
niveles de Fusarium. zonas urbanas de Irn durante un ao, en las cuales
Teniendo en cuenta los aspectos anteriores, podra encontraron que la mayor concentracin de hongos se
recomendarse el uso de M4 (agar glucosa de Sabouraud), present en el medioda y al final de la maana y con el
ya que aunque no es el medio donde se obtiene los patrn de periodicidad diurna descrito para Cladospo-
mayores niveles, los valores obtenidos estn en el mismo rium, por Shenoi & Ramalingam (1975) quienes sealan
orden (10 2) que los de M2 y M3 y es el medio que que durante las horas del medioda sus niveles son
conjuntamente con M1 detecta la mayor variabilidad mayores.
fngica del ambiente. Adems su eficiencia en la
recuperacin y variabilidad obtenida no difieren de las de
M1 (medio recomendado por la ACGIH, 1989). u fc/m 3 L1
Al revisar la bibliografa relativa a este tema, se 6400
concluye que no hay un acuerdo, ya que para algunos 4800
autores el Agar Extracto de Malta +7,5% NaCl (M2), no es
3200
adecuado para promover la esporulacin (Morring et al.,
1983; Verhoeff et al., 1990), recomendndose suplementarlo 1600
con peptona y glucosa (Hunter et al., 1988; ACGIH, 1989) 0
o usar Agar glucosa de Sabouraud (Medina et al., 1999; 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
Pepeljnjak & Segvic, 2003).
Finalmente para averiguar si pueden ocurrir u fc/m 3 L2
variaciones significativas segn el momento en que se 6400
recogen las muestras, se realiz un muestreo cada hora 4800
entre las 7a.m. y las 4 p.m. en los dos locales (L1 y L2). Los
resultados obtenidos (Figura 6) sealan que las horas en 3200
las que se alcanza un mayor nivel de contaminacin son 1600
las 7, las 12 y las 11h. (L1) y las 11, 12 y 14h (L2), aunque 0
no se encontraron diferencias significativas entre ellas 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
(Tabla 2).
Muchos hongos liberan sus esporas durante la Figura 6.- Niveles promedios de ufc/m3 (L1 y L2, locales
noche y primeras horas de la maana favoreciendo a este de muestreo)

71
 Boletn Micolgico Vol. 23 : 67 - 73 2008

Tabla 2. Comparacin de ufc.m-3 en ambos locales (L1 y three houses in Havana (Cuba). Grana 41:114-118
L2) a diferentes horas (letras no comunes indican
Aira, M.J.; Jato, V.; Iglesias; Rodrguez-Rajo, F.J.; Mndez,
diferencias significativas, segn Prueba de Scheff J.; Albelda, Y.; He rvs, M .; Piontelli, E. & Stc higel, A.M .
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influenciadas por parmetros ambientales (temperatura,
humedad, corrientes de aire, etc), caractersticas del local
(sustratos, ventilacin, limpieza, etc.) siendo tambin una
variable importante la micobiota predominante en el aire
exterior (Shelton et al., 2002).
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73
Boletn Micolgico Vol. 23 : 75 - 85 2008

MICROHONGOS OPORTUNISTAS
ASOCIADOS AL MUSGO POMPON DESECADO
(Sphagnum magellanicum BRID.) EN CHILE
(Opportunistic microfungi associated to the desiccated pompon moss
(Sphagnum magellanicum Brid.) in Chile)

Eduardo Piontelli, Rodrigo Cruz & Valia Vivar

Universidad de Valparaso, Escuela de Medicina,
Ctedra de Micologa Casilla 92 VC, Valparaso , Chile
email <eduardo piontelli@uv.cl>

Palabras claves: Sphagnum magellanicum, microhongos,Asperguillus fumigatus, Trichoderma longibrachiatum

Key words: Sphagnum magellanicum, microfungi , Asperguillus fumigatus, Trichoderma longibrachiatum

RESUMEN muestras a 25 y 35 C, pero a pesar de su ausencia

Se analiz la presencia de propgulos fngicos comercial de este musgo en Chile, debido a la sobrevi-
en muestras secas del musgo Sphangnum magellanicum
provenientes de 2 localidades de la zona Sur del pas
(39 y 41S), mediante cultivos en agar agua y agar
Sabouraud a temperaturas de 25 y 35C con muestras
recin colectadas (2007) y almacenadas un ao a
temperatura ambiente (2008). Nuestro objetivo fue
determinar previo a la comercializacin de este vegetal
desecado, la presencia/ausencia del complejo Sporothrix
schenckii u otras especies oportunistas consideradas
como un riesgo en salud pblica en la comunidad de
microhongos filamentosos viables en el tiempo en este
musgo. En la primera muestra (41S, 2007), a 25C, en
ambos medios, se observ un total de 31 gneros y 36
especies. Los gneros con mayor frecuencia en orden
decreciente y en ambos medios fueron: Penicillium,
Cladosporium, Trichoderma y Mucor representando
aproximadamente el 70% del total de presencia, mientras
en las muestras sembradas un ao despus, fueron en
orden decreciente: Aspergillus, Trichoderma, Peni-
cillium y Gelasinospora, con un total de presencia del
75,4%. A 35C en ambas muestras la presencia de taxa
se redujo a 4-5 gneros donde las principales especies
fueron A. fumigatus complex y T. longibrachiatum con
altos porcentajes, Penicillium spp. y Gelasinospora
caulospora. Se destaca un raro aislamiento de
Neosartorya quadricincta.
Ningn integrante del complejo Ophiostoma
stenoceras-Sporothrix schenckii se detect en las
Recibido el 17 de Julio 2008
Aceptado el 23 de Septiembre 2008
deben tomarse precauciones en el manejo y distribucin
vencia en el tiempo de ciertos hongos oportunistas, como
los integrantes del complejo A. fumigatus y T.
longibrachiatum.
ABSTRACT
The presence of fungal propagules in desiccated
samples of Sphangnum magellanicum moss collected
from two southern zones of the country (39 and 41S)
was analyzed by means of water agar and Sabouraud
agar, at 25 and 35C temperatures using freshly gathered
samples (2007) and stored for a year at room temperature
(2008). Our aim was to determine, prior to the marketing
of this desiccated vegetable, the presence/absence of the
Sporothix schenckii complex or other opportunistic
species which are considered to be a risk in public health,
in the community of filamentous microfungi that are
viable with time in this moss. The first sample (41S,
2007),at 25C, in both media revealed 31 genera and 36
species as a total. Genera most frequently found, in decre-
asing order, were: Penicillium, Cladosporium,
Trichoderma and Mucor, which represented about 70%
of the overall occurrence, whereas samples cultured one
year later showed, in decreasing order, the presence of :
Aspergillus, Trichoderma, Penicillium and Gela-
sinospora, meaning a 75.4% occurrence. At 35C, the
presence of taxa became reduced in both samples to 4-5
genera, main species being A. fumigatus complex and T.
longibrachiatum in high percentages, Penicillium spp.
and Gelasinospora caulospora. Besides, it is remarkable
a rare isolation of Neosartorya quadricincta.

75
 Boletn Micolgico Vol. 23 : 75 - 85
None component of the Ophiostoma stenoceras-
Sporothrix schenkii complex was detected in samples
at 25 and 35 C yet although its absence, caution must
be made in handling and commercial distribution of this
moss in Chile due to the survival in time of certain
opportunistic fungi such as those found in the A.
fumigatus complex and T.longibrachiatum.
INTRODUCCION
Las brifitas son consideradas como el segundo
gran grupo de plantas terrestres y las nicas con fase
gametofitica haploide dominante, presentan gran
potencialidad de dispersin mediante esporas o
propagacin vegetativa. Son presumiblemente polifilticas
y por ende consideradas como un grupo no natural que
incluye los musgos (Briophyta), hepticas (Marchan-
tiophyta) y las antocerotas (Anthocerotophyta). A pesar
de ser muy diferentes entre ellas en estructura, son muy
similares en sus ciclos de vida (Frahm, 2008). El gnero
Sphagnum contiene una gran cantidad de especies de
musgos de amplia distribucin cosmopolita que ocupan
1/3 de la superficie de los suelos en el planeta (Turetsky
et al.,2002). Las especies de Sphagnum, incluyendo S.
magellanicum Brid. (Sphagnopsida, Sphangnales,
Sphangaceae), se denominan comnmente en la zona sur
del pas como: musgo pompn, musgo de turberas, musgo
de pantano o esfagno, mientras en los pases anglosajones
generalmente como Sphagnum moss. En la zona sur de
Chile, sus poblaciones son integrantes de las turberas
referidas tambin como pomponales o adis, las cuales
se forman despus de la tala, raza o quema de bosques, en
sitios anegados que rpidamente son colonizados por este
vegetal, cubriendo un rea geogrfica aproximada de unas
500.000 hectreas. Su distribucin silvestre se presenta
en extensas formaciones edficas en franjas territoriales
desde la novena a la duodcima regin (Ramrez, 1990;
Figueroa et al., 1999; Villaroel et al., 2002; Teneb & Dollenz,
2004). Las turberas, son ambientes naturales inundados
caractersticos de regiones climticas templadas y fras,
las que se desarrollan sobre terrenos con restriccin de
drenaje, donde este musgo forma un sustrato esponjoso
continuo, impregnado de agua, asociado a numerosas
especies vasculares arbreas y herbceas adaptadas a este
ambiente (Teneb & Dollenz, 2004).
El empleo comercial de Sphagnum deshidratado
es bastante amplio: en vendajes quirrgicos, apsitos,
empacado de plantas, as como tambin en forma de turba
como combustible, como absorbente de aceites, derivados
del petrleo y como descontaminante de metales pesados
y pesticidas entre otros usos (Villaroel et al., 2002).
El conjunto de microhongos filamentosos
frecuentes que intervienen en la senescencia y descompo-
76
2008
sicin de las turberas en las poblaciones de Sphagnum,
han sido estudiados solamente en algunas zonas
geogrficas (Thorman et al., 2001- 2003- 2004; Tsuneda et
al., 2001; Hambleton et al., 2003; Markus et al., 2002 -
2004; Rice et al., 2006), sin embargo, la importancia
ambiental de estos musgos tiene relevancia en la literatura
micolgica mdica internacional y en especial en USA,
por ser considerado uno de los hbitat comunes de un
hongo dimrfico saproftico y geoflico que integra el
complex Sporothrix schenckii, causante de varios brotes
endmicos de una micosis crnica subcutnea granulo-
matosa denominada esporotricosis (Powell et al., 1978;
Dixon et al., 1991). Esta micosis se presenta generalmente
en una forma linfocutnea limitada, que puede diseminarse
a otros sistemas orgnicos en pacientes con graves
deficiencias inmunes (Jaffar et al., 1998).
En Chile, la esporotricosis es aparentemente una
micosis rara, debido a que solo se ha detectado en la zona
central del pas en 2 casos clnicos autctonos en 1950 y
1984 (en Piontelli, 1995), recientemente en lesiones nasales
en un perro (Muoz et al., 2006) y como saprfito en uas
de gato (Thomson & Cerda, 2008), pero no existen
referencias sobre la distribucin de su agente en un
ambiente determinado. Frente a la ausencia de una
informacin geogrfica y epidemiolgica de este patgeno
primario y debido a que la gran cobertura del musgo S.
magellanicum en la zona sur podra reunir condiciones
favorables para su permanencia y distribucin, nuestro
objetivo fue: determinar previo a la comercializacin de
este vegetal desecado y en una localizacin geogrfica
particular, la presencia/ausencia del complejo S. schenckii
u otras especies consideradas como un riesgo en salud
pblica en la comunidad de microhongos filamentosos que
permanecen viables en el tiempo en este musgo.
MATERIALES Y METODOS
a) Localizacin geogrfica de las muestras. La mayor
parte de las muestras del musgo se obtuvieron el mes de
febrero 2007, desde un distribuidor comercial (1. muestra)
en el pueblo de Tegualda (Comuna de Fresia) en la Regin
de los lagos (app. 41 S) y en la zona de Valdivia (2 muestra
menor, app. 30S). Las muestras se refrigeraron a 4-6 grados
hasta su procesamiento los primeros das de Marzo.
La primera muestra correspondi a ms de medio saco
del substrato (aproximadamente unos 6 kilos) obtenido
del lugar de secado de este musgo, representando un
conjunto de diversas muestras provenientes de zonas
precordilleranas y en un radio de 60 Km alrededor del
pueblo de Tegualda. Mientras la segunda (250 g) obtenida
en Marzo 2007, provino de una localidad cercana a Valdivia,
procesndose ambas a fines del mes de Marzo, previa refri-
geracin por 5 das a 4- 6 C.
Microhongos oportunistas asociados al musgo pompom desecado Sphagunum magellanicus Brid. en Chile
b) Metodologa de siembra de la 1 muestra. Con pinzas
que se esterilizaban a la llama, se tomaron trozos del musgo
al azar desde la muestra principal, los cuales se depositaron
en bolsas de plstico estriles hasta confeccionar 19
muestras de aproximadamente 100g c/u, luego con tijera
esterilizada a la llama se troz el substrato en cada muestra
en partes de no ms de 2-3 cm de largo, para permitir una
buena siembra directa en la superficie de 2 medios de
cultivo en placas de Petri de 10 cm (en duplicado): uno
con agar agua y otro en agar Sabouraud, ambos con
Cloramfenicol 250 mg /L. Para detectar la viabilidad de las
esporas o micelios presentes en el substrato, los trozos
del musgo seco (8-10 trozos), se distribuyeron de manera
equidistante directamente sobre la superficie de las placas
en ambos medios y se incubaron a 25C durante 10 das
en oscuridad, mantenindose los cultivos hasta 30 das a
temperatura ambiente (17-22C) con el rgimen alterno de
luz y oscuridad diaria, esto ltimo para detectar el posible
crecimiento de hongos de lento desarrollo, en especial en
agar agua.
Paralelamente se sembr solo en agar Sabourad con
Cloramfenicol con la misma tcnica descrita un set en
duplicado de otras 19 placas que se incubaron por 10
das a una temperatura de 35C ( 1C), para observar la
posible presencia de hongos mesfilos, termotolerantes o
termfilos, capaces de crecer a esa temperatura.
El sobrante de la primera muestra se mantuvo
protegido en su contenedor a temperatura ambiente
durante 1 ao, para luego separar (nuevamente en el mes
de Marzo) 9 muestras de unos 100 g tomadas al azar (con
el mismo procedimiento descrito anteriormente) las cuales
se sembraron en duplicado en placas de agar Sabouraud
con Cloramfenicol, incubndose a 25 C durante 10 das
en oscuridad, y mantenindose los cultivos hasta 30 das
a temperatura ambiente (17-22C) con el rgimen alterno
de luz y oscuridad diaria.
c) Mtodos de siembra de la segunda muestra. Debido a la
poca cantidad de muestra obtenida desde la zona de
Valdivia, sta no pudo subdividirse en submuestras,
sembrndose con la misma tcnica anterior solo en 9 placas
de agar Sabouraud con Caf. a temperatura de 35C ( 1C),
durante 7-10 das en oscuridad, para detectar la presencia
de hongos mesfilos, termotolerantes o termfilos.
d) Observacin de los cultivos y anlisis de presencia
fngica. Los hongos que se desarrollaron en las diferentes
muestras, medios de cultivo, temperaturas y tiempos,
fueron enumerados bajo la lupa estereoscpica mediante
su frecuencia de aparicin, asignndole un Puntaje de
presencia de gnero o especie (PP): 3 puntos =
Dominante (mas de 7 colonias dentro de una placa; 2
puntos = Frecuente (de 3 a 6 colonias dentro de una placa)
- E. Piontelli et al.
y 1 punto = Espordico (1 a 2 colonias en la misma placa).
Para las placas duplicadas que proporcionaron valores
diferentes, se consider como valor de PP a la que
presentaba mayor frecuencia. Estas categoras pretenden
proporcionar un valor estimativo que represente en el total
la frecuencia de cada taxa.
Las observaciones macroscpicas de los cultivos
a temperaturas de 25 y 35C se efectuaron bajo lupa
estereoscpica a los 7-10-20 y 30 das mientras los a
temperaturas de 35C a los 5 y 15 das. Las observaciones
microscpicas se hicieron con preparaciones en lactofenol
en un microscopio ZEISS con ptica DIC. Cuando fue
necesario el empleo de cultivos adicionales, se efectaron
los especificados en las monografas de cada gnero, en
especial Aspergillus (subgnero Fumigati), Trichoderma
y algunos Penicillium (Domsh et al., 1980; Klich, 2002;
Samson et al., 2007; Gams & Bisset, 1998; Samuels et al.,
1998; Pitt, 2000). No todos los integrantes de algunos
gneros se determinaron al nivel de especie, principalmente
se clasificaron los considerados como oportunistas y los
ms frecuentes.
RESULTADOS
a) Muestra 1, a 25C - ao 2007. En las 19 muestras
analizadas en los 2 medios de cultivo la micota presente
en agar agua, fue mayor que en agar Sabouraud con un
total de 21 gneros y 28 especies y 18 y 20 respecti-
vamente, obtenindose un total de 31 gneros y 36 especies
en ambos medios (Tabla 1). Ocho taxa que no se detectaron
en agar agua se presentaron en agar Sabouraud, mientras
13 que se presentaron en agar agua no lo hicieron en agar
Sabouraud y 18 taxa estuvieron presentes en ambos
medios. Los integrantes de los gneros con una frecuencia
mayor del 10% fueron en agar agua: Penicillium (36,8%),
Cladosporium (14,7%) Trichoderma (13%) y Mucor
(12,3%). Estos, representaron el 76,8% del total de
presencia. Los mismos gneros se obtuvieron en agar
Sabouraud con porcentajes semejantes, salvo en
Cladosporium con un porcentaje menor (10,9%) (Figura
1, Tabla 1) representando sus integrantes un 69,1% del
total de presencia (Tabla 1).
Las especies con mayor nmero de frecuencia de
presencia (sobre el 5%) en agar agua fueron: Penicillium
glabrum (14,4%), Cladosporium cladosporioides (12%),
Trichoderma harzianum complex (10%), Penicillium
brevicompactum (7%), Mucor racemosus (6%) y Absidia
glauca (5,4%). En agar Sabouraud, hubo semejanzas en la
presencia de Penicillium glabrum, Trichoderma harzia-
num complex y Mucor racemosus, mientras C.clados-
porioides y P. brevicompactum disminuyeron. Aumen-
taron su presencia A.glauca (9,3%) y Mortierella rama-
nniana (6,1%) (Tabla 1).
77
 Boletn Micolgico Vol. 23 : 75 - 85 2008

40
% P e n ic illiu m s p p .
35
C la d o s p o r iu m s p p .
30
T r ic h o d e r m a s p p .
25

20 M u co r sp p .

15 A s p e r g illu s s p p .

10 G e la s in o s p o r a s p .

0
Ag ar a gu a 20 07 Agar S ab. 2007 Ag ar S ab . 2008

Figura 1. Frecuencia de integrantes de gneros comunes aislados en dos medios de cultivo a 25C
en los aos 2007 y 2008 desde Sphagnum magellanicum desecado.
No se observ la presencia de Sporothrix schen- (16,4%), G.caulospora (13,6%), P. glabrum (9,1%)
ckii ni otro representante de las Ophiostomataceae en el Penicillium spp. (8,2%)(mayoritariamente integrantes del
seguimiento de las muestras en el tiempo (30 das). subgnero Penicillium) y M. racemosus (5,7%) ( Figura
2, Tabla 1).
b) Muestra 1, a 25C sembrada un ao despus (2008) La frecuencia de presencia de los integrantes de
slo en agar Sabouraud. En las 9 muestras en duplicado los gneros en las muestras sembradas en los 2 medios en
el nmero de gneros (13) y especies (16) disminuy en el ao 2007 comparadas con las sembradas en A.S. en el
referencia a las del ao 2007 y los integrantes de los 2008 (Tabla 1), permiten observar que A. fumigatus
gneros con una frecuencia mayor del 10% fueron: complex, G. caulospora y T. longibrachiatum aumentaron
Aspergillus (23,6%), Trichoderma (20%), Penicillium, notoriamente su presencia; disminuyeron M. racemosus,
18,2%) y Gelasinospora (13,6%), con un total de presencia P. glabrum, Penicillium spp. y T harzianum y no se
del 75,4%. Se observaron diferencias en la presencia de presentaron A. glauca, P. brevicompactum y ningn
todos los gneros ms frecuentes con respecto al ao Cladosporium (Tabla 1, Fig. 2).
2007, destacndose la ausencia de los integrantes de
Cladosporium (Figura 1, Tabla 1). Las especies con mayor No se detect la presencia de Sporothrix
nmero de frecuencia de presencia (sobre el 5%) fueron: schenckii ni otro representante de las Ophiostomataceae
A . fumigatus complex (21,8%), T. harzianum complex en las muestras en el tiempo (30 das).

%
25
2 1 Abs. glauca
11 2 A. fum igatus com p.
20 3 C. cladosporioides
8 4 G. caulospora
4
15 9 5 M ort. ram anniana
3
10 6 M ucor racem osus
8 9
10 1 7 P. brevicom pactum
6 7 8 P. glabrum
5
5 4 6 9 Penicillium spp.
2 10
11 10 T. harzianum
11 T. longibrachiatum
0
2007 2008
Figura 1. Frecuencia de especies comunes aisladas en dos medios de cultivo a 25C
en los aos 2007 y 2008 desde Sphagnum magellanicum desecado.

78
Microhongos oportunistas asociados al musgo pompom desecado Sphagunum magellanicus Brid. en Chile - E. Piontelli et al.

Tabla 1. Frecuencia de hongos aislados en S. magellanicum desecado, en dos medios de culti-

vo; Agar Agua (A.A.) y Agar Sabouraud (A.S.) a 25 y 35C, en los aos 2007 y 2008
Fresia 2007 Fresia 2008 Vald. 2007
TAXA FUNGICOS A.A. 25C A.S. 25C A.S. 25C A.S. 35C A.S. 35C
fr. % fr. % fr. % fr. % fr. %
Absidia glauca Hagem 16 5,4 23 9,3
Acremonium strictum W. Gams complex 1 0,3
Acremonium sp. 2 0,7 1
Alternaria alternata (Fr.) Keissler complex 2 0,7
Amphobotrys ricini (N.F. Buchw.) Hennebert 2 0,8 2 1,8 3 2,7
Aspergillus fumigatus Fr. complex 3 1,0 7 2,8 24 21,8 46 41,8 15 29,4
Aspergillus sclerotiorum G.A. Huber 2 0,7 2 1,8
Aureobasidium pullulans (De Bary) Arnaud var. pullulans 2 0,7
A. pullulans (De Bary) Arnaud var. melanigenum 2 0,7
Beauveria bassiana (Bals.-Criv.) Vuill. 1 0,3
Bipolaris sp. 1 0,4
Botrytis cinerea Pers. 3 1,0 2 0,8
Chalara sp. 2 1,8
Chaetomium sp. 1 0,9
Cladosporium cladosporioides (Fr.) de Vries 36 12,0 20 8,1
Cladosporium sphaerospermum Penzing 8 2,7 5 2,0
Cladosporium sp. 2 0,8
Clonostachys rosea f. rosea Schroers et al. 3 1,2
Curvularia clavata B.L. Jain 2 0,7
Curvularia sp. 1 0,3
Epicoccum nigrum Link 2 0,7
Fusarium oxysporum Schlech.:Fr. 2 1,8
Gelasinospora calospora (Mouton) C. Moreau & Moreau 9 3,0 4 1,6 15 13,6 7 6,4
Geomyces pannorum (Lin.) Sigler & Carmich. 3 1,0 7 2,8 3 2,7
Malbranchea sp. 1 0,3
Mortierella ramanniana (Mller) Linnem. 12 4,0 15 6,1
Mucor hiemalis Wehmer 13 4,3 9 3,6 2 1,8
Mucor racemosus Fres. 19 6,4 14 5,7 3 2,7
Mucor plumbeus Bon. 5 1,7 5 2,0 3 2,7
Neosartorya quadricincta (J.L. Yuill) Malloch & Cain 1 0,2
Nodulisporum sp. 1 0,4
Oidiodendrum griseum Robak 3 1,2
Penicillium brevicompactum Dierckx 21 7,0 12 4,9
Penicillium decumbens Thom 10 3,3 4 1,6 4 3,6
Penicillium glabrum (Wehmer) Westling 43 14,4 39 15,8 10 9,1
Penicillium purpurogenum Stoll 1 0,3 1 0,9
Penicillium spp. 36 12,0 31 12,6 9 8,2 18 16,4 9 17,6
Phoma sp. 2 0,8
Piptocephalis sp. 1 0,3 1 0,4
Rhizopus stolonifer (Ehrenb:) Lind. 2 1,8
Rhizopus oryzae Went & Prinsen Geerlings 3 2,7
Stemphylium botriosum Sacc. 1 0,3
Thamnidium elegans Link 3 1,2
Trichoderma harzianum Rifai complex 30 10,0 26 10,5 18 16,4
Trichoderma longibrachiatum Rifai 3 1,0 2 0,8 2 1,8 22 20,0 21 41,2
Trichoderma viride Pers. 2 0,7 1 0,9
Trichoderma spp. 4 1,3 2 0,8 1 0,9 2 1,8
Ulocladium consotiale (Thm.) E.G. Simmons 2 1,8
Micelio sin fructificar 2 2 1 0,9 8 7,3 5 9,8
Total del Puntaje de presencia (PP) 299 247 110 110 51
Taxa fngicos aislados 33 27 22 9 4

79
 Boletn Micolgico Vol. 23 : 75 - 85
c) Muestra 1 a 35C en agar Sabouraud. En las 9 muestras
en duplicado, la presencia de gneros y especies se redujo
a 5 y 5 respectivamente, siendo los taxa dominantes: A.
fumigatus complex (41,8%), T. longibrachiatum (20%),
Penicillium spp.(16,4%) (integrantes principalmente de 2
subgneros Penicillium y Aspergilloides ) y G. caulos-
pora (6,4%) (Tabla 1). No se observ la presencia de
Sporothrix schenckii en las muestras en el tiempo (15
das).
d) Muestra 2 a 35C en agar Sabouraud. En las 9 mues-
tras, la presencia de gneros y especies se redujo a 4 y 3
respectivamente, siendo los taxa dominantes: T.
longibrachiatum (41,2%), A. fumigatus complex (29,4%),
Penicillium spp. (integrantes principalmente de los
subgneros Penicillium y Aspergilloides)(17,6%).
Neosartorya quadricincta se present una sola vez en
una muestra (Tabla 1). No se observ la presencia de S.
schenckii en las muestras en el tiempo (15 das).
La alta presencia de A.fumigatus complex en las 2
muestras a 35C permiti un estudio morfofisiolgico
adicional de 10 cepas seleccionadas al azar, las cuales se
compararon entre si y con 2 cepas aisladas de pacientes
con aspergilosis pulmonar. Las 12 cepas crecieron a 50-
51C y solo 1(de la muestra 1) lo hizo a 9-10C. A pesar de
la variacin morfolgica observada en algunas de las cepas
ambientales, en especial en la forma de sus vesculas (Fig.
1A), la extensin de las filides sobre estas y el largo de
sus cabezas columnares (2 cepas con cabezas columnares
muy cortas), estos datos no permitieron su inclusin en
especies diferentes y se prefiri determinarlas a todas como
integrantes de A. fumigatus complex.
Descripcin de Neosarorya quadricincta:
Dimetro de las colonias a los 7 das en CYA 33-40 mm,
MEA25:55-61mm, OA (agar avena) 50-52 mm, CYA37 56-
63 mm. Color en CYA ante claro, con leves tonos verdes,
flocosas, reverso blanco a crema. En agar Malta y agar
avena colonias flocosas, similares en colores, ante en el
centro con tonalidades verde oscuras en la periferia por el
crecimiento del anamorfo (ms notorio en OA), reverso
crema.
En OA,Cabezas columnares cortas y laxas.
Anamorfo; estipe 350-450 x 3-8m, dimetro de las
vesculas 13-24(promedio 19), conidios elpticos a
globosos, microtuberculados 2-3m. Teleomorfo:
Cleistotecios de color ante claro, 240-285m, pseudopa-
renqimatosos, de paredes delgadas de color caf oscuro,
ascos subglobosos a ovoides, 11-15 x 10-11,5 m,
ascosporas elpticas en visin lateral y redondas en visin
frontal, con 4 crestas ecuatoriales, 2 prominentes en el
centro y 2 menos prominentes lateralmente, reticuladas,
5,5 - 6,5 x 4 - 5 m (Figura 2).
80
2008
DISCUSION
La decomposicin de las brifitas en la naturaleza
es lenta, debido a los compuestos secundarios que ellas
producen (Asakawa,1990), especialmente compuestos
fenlicos con funciones desconocidas, pero con capa-
cidad de inhibir la herbivora de micro y macrofauna, la
germinacin de las esporas de los hongos y el crecimiento
bacteriano cuando la superficie de la hoja se humedece
(Tadesse, 2002). Esta situacin, no se debe exclusivamente
a los compuestos secundarios sino en especial en el
gnero Sphagnum, a las bajas concentraciones de
nutrientes en sus hojas, como nitrgeno y fsforo (Aert,
et al., 1999; Turetsky, 2003).
La fuente de agua y nutrientes para los turbales
proviene slo de las preciptaciones, y el esfagno, que
posee una alta capacidad para su retencin (8 a 10 veces
su peso), contribuye a formar un sistema cerrado ombro-
trfico (Damman, 1978). Si bien es cierto, que las condi-
ciones climticas de alta humedad y el agua son impor-
tantes en la distribucin de esta especie, sus rangos de
pH entre 4 y 6, considerados moderados con respecto a
las dems especies del gnero (Andrus, 1986), resultan
adecuados para la mayora de una micota asociada al
terreno, de gran importancia en sus procesos de senes-
cencia y descomposicin.
Una variedad de hongos parasticos y saprof-
ticos se han registrado en las brifitas vivas y en descom-
posicin, incluyendo representantes del gnero
Sphagnum, en orden decreciente desde los Ascomycota
y sus anamorfos a los Zygo y Basidiomycota (Frankland,
1974; Redhead, 1981; Moreau, 2002; Thormann, 2003).
Incluso trabajos recientes en las turberas empleando slo
tcnicas moleculares con aislamientos directos de micelios
o esporas capaces de germinar, siguen demostrando una
dominancia de ascomicetos (Artz et al., 2007) y general-
mente con presencia de taxa de rpido crecimiento y gran
produccin de esporas, como las especies de Penicillium,
Cladosporium, Verticillium, Mortierella y Mucor,
reportadas en cultivos estandar; prevalencia que se explica
por su fcil desarrollo en estos medios (Thormann, 2006).
El caso contrario sucede con los basidiomicetos, los cuales
no se detectan prcticamente en los estudios basados
en cultivos, a pesar de la ocurrencia de sus fructificaciones
en los ecosistemas de turberas (Felix, 1988; Thorman, 2004).
Sin embargo, a pesar que los musgos son an
un hbitat poco analizado en relacin a los hongos, en
algunas especies de Sphagnum vivas y en descompo-
sicin (en especial en S. fuscum), se ha encontrado una
amplia comunidad fngica mayoritariamente saprotrofa
con escasos patgenos, probablemente debido a su
habilidad de utilizar un amplio rango de fuentes carbo-
nadas, tales como la celulosa, los cidos tnicos y la pectina
Microhongos oportunistas asociados al musgo pompom desecado Sphagunum magellanicus Brid. en Chile
(Thorman et al., 2001, 2003, 2004; Tsuneda et al., 2001;
Hambleton et al., 2003; Markus et al., 2002 -2004; Rice et
al., 2006).
El conjunto de hongos en S. fuscum, en gradientes
de descomposicin en el tiempo, ha sido estudiado en
Canad por Thorman et al. (2001), los cuales encontraron
una mayor frecuencia de hongos comunes del suelo
(Penicillium tomii, Trichoderma viride, T. harzianum,
Mortierella ramanniana y Mucor hiemalis), una
situacin muy similar a la nuestra y la de otros estudios
sobre turberas (referencias en Thorman et al., 2001). Pero
debemos aclarar que a pesar de que geogrficamente
nuestras muestras fueron tomadas en latitudes hemisfri-
cas con ciertas semilitudes, la metodologa que empleamos
no se refiri a las etapas de descomposicin de S. magella-
nicum, sino a la sobrevivencia y presencia en el tiempo de
los diferentes propgulos de dispersin despues de su
secado al sol sobre mallas levantadas del suelo, en un
proceso previo a su comercializacin.
Si a pesar de la metodologa, comparamos los
gneros encontrados con los de Thormann et al., 2001
observamos una buena coincidencia en la presencia de
algunos de ellos, pero con una mayor diversidad en
nuestros aislamientos (31 gneros), con un buen porcen-
taje de taxa que se han aislado consistentemente en tierras
de turberas en el mundo por su tolerancia a bajos pH y
temperaturas, condiciones de suelos inundados y capaci-
dades enzimticas (grupos funcionales) de utilizar fuentes
carbonadas, pectinas, celulosa, gelatina y almidn pero
con escasa capacidad de utilizar cido tnico ( Thorman et
al., 2001, 2003; Swift, 2005).
Las especies aisladas a temperaturas de incu-
bacin de 25C (ao 2007), que representaron casi un es comentada por Samsom et al. (2006, 2007). Sin embargo,
tercio de la comunidad especialmente en agar Sabouraud,
fueron las integrantes de los Mucorales, siguiendole en
importancia las especies de Penicillium, Trichoderma y
Cladosporium, todos habitantes comunes del suelo o
material vegetal senescente (Domsch et al., 1980). La pre-
sencia espordica de Geomyces pannorum (Onygenales),
Gelasinospora caulospora (Sordariales), Aspergillus
fumigatus (Eurotiales) y Botrytis cinerea (Leotiales),
tambin se asocia a los diversos hbitat del suelo y los 3
primeros no parecen ser comunes en Sphagnum
(Thormann et al., 2001, 2003, 2004), as como otros que
deben su presencia posiblemente a cambios vegeta-
cionales en la turbera (Artz et al., 2007) o al manejo de
este musgo para su traslado comercial a otras zonas
ecolgicas.
En la micota obtenida un ao despus (2008), se
observ una disminucin en el nmero de gneros y (Samsom et al., 2006, 2007).
especies, pero con notables aumentos del porcentaje de
A. fumigatus complex, G. caulospora y T. harzianum
- E. Piontelli et al.
complex (Tabla.1). Esta situacin, puede asociarse a los
efectos inhibitorios sobre la esporulacin fngica de los
componentes de este musgo en el tiempo en parte de la
micota presente (Tadesse, 2002) y a la mayor capacidad de
sobrevivencia de sus mito y meiosporas durante el
almacenaje, lo que podra ser una desventaja para las
especies de Mucorales y Penicillium que disminuyeron
su presencia y la ausencia de Cladosporium. Sin embargo,
Rhizopus stolonifer y R.oryzae, slo se presentaron
despus del almacenaje en el tiempo.
La clara disminucin de taxa en el substrato cul-
tivado a 35C, en las 2 muestras (ao 2007), favoreci
solo el crecimiento de pocas especies mesfilas y termoto-
lerantes, con notable aumento de A. fumigatus, T. longi-
brachiatum y algunos integrantes del gnero Penicillium
(mayoritariamente del subgnero Penicillium). A. fumi-
gatus es un reconocido termotolerante que crece a una
temperatura optima de 45 con mxima de 53 y una mnima
11C (Samson et al., 2007) y T. longibrachiatum (seccin
Longibrachiatum), crece y produce la mayor cantidad de
conidios entre los 30-40C (Samuels et al., 1998). De estas
2 ltimas especies oportunistas A. fumigatus princi-
palmente, es el causante comn de varias infecciones en
el hombre y los animales y T .longibrachiatum se consi-
dera entre los hongos emergentes que presentan mani-
festaciones clnicas diversas, en especial peritonitis debido
a dialisis peritoneal (De Hoog et al., 2000; Kredics et al.,
2003).
Los aislamientos de A. fumigatus fueron variables
en su macro y micromorfologa, lo que dificulta su
diferenciacin solamente en base a datos fentico de las
otras especies estrechamente relacionadas, situacin que
A. fumigatus se caracteriza por sus vesculas subcla-
vadas, mientras A. lentulus, A. fumigatiaffinis, A. novofu-
migatus y A. turcosus tienen usualmente vesculas
globosas. A. fumigatus crece a 50C pero no a 10C. y A.
turcosus lo hace a 10C y tambin a 50C. Al comparar las
cepas aisladas, varias presentaron una mezcla de vesculas
clavadas a esfricas (Fig. 1A) y los rangos de sus dimetros
junto con los conidiforos (datos no incluidos) fueron
variables, pero no permitieron una clara diferenciacin de
los integrantes del complex A. fumigatus.
Geneticamente A. fumigatus parece ser una especie
muy homognea claramente separada de otras relacio-
nadas cuando se emplean secuencias de genes que
incluyen b-tubulina, actina y calmodulina. Es por esto que
el empleo de las secuencia de multigenes es una determi-
nante crtica para la delineacin del complex A. fumigatus
Se destaca la capacidad de sobrevivencia de
Amphobotrys ricini, anamofo de Botryotinia ricini
81
 Boletn Micolgico Vol. 23: 75 - 85 2008

A B

Figura 1. A. -Forma de las vesculas de algunos de los integrantes del complejo Fumigatus aisladas en S. magella-
nicum y recubrimiento por las falides de las 2/3 de stas. B.- Conidios simpodiales hialinos y aleuroconidios
dematiceos de S. schenckii complex, aislado en Eucalyptus.
(Godfrey)Whetzel (Sclerotinaceae), el moho gris agente
causal del dao de inflorecencias y semillas de la
oleaginosa llamada higuerilla (Ricinus communis L.) y la
presencia en la muestra 2 de un aislamiento de Neosarto-
rya quadricincta (anamorfo A. quadricingens. Kozak.)
Esta ltima especie no parece haberse aislado en el cono
sur de Sudamrica (Samson et al., 2007) y se describe su
morfologa en resultados, destacando que este ecotipo
present ascosporas levemente mayores a las sealadas
en la bibliografa (Fig. 2).
La ausencia de miembros de las Ophiostomata-
les, en especial de los integrantes del complex Ophiostoma
stenoceras-Sporothrix schenckii (de Meyer, 2008), es una
situacin que debe considerarse con cautela debido a que
se han analizado solo partes del rea de crecimiento de S.
magellanicum, por lo que no podemos aseverar su total
ausencia. En Chile, slo en la zona central, se han detectado
2 casos autctonos de esporotricosis en el hombre, entre
los aos 1950 y1984 (en Piontelli, 1995), recientemente se
ha detectado un caso en un agricultor en Santiago (M.C
Daz, comunicacin personal) y otro caso desde lesiones
nasales en un canino (Muoz et al. 2006), asi como su
aislamiento como agente saprfito en uas de gato
(Thomson & Cerda, 2008). Sin embargo, en todos ellos se
desconocen las fuentes de infeccin. Otra posible eviden-
cia de la presencia de este complejo en esta ltima zona,
fu detectada en especies de Eucalyptus y asociada a un
coleptero (Ectinogoniua buquetti Spin.), sin poder obte-
nerse la cepa pura por estar mezclada con O. stenoceras.
Sin embargo, por el tamao y la abundante produccin de
sus conidios ssiles oscuros (Fig 1B), puede ser sugerente
de S.brasiliensis (Piontelli et al.,2006 ; Marimn et al.,
2007).
En la actualidad la esporotricosis se ha detectado
en muchos pases y algunas de sus regiones son conside-
radas endmicas para este agente infeccioso, principal-
mente en USA, Canad, Japn, Sudfrica, India, Australia,
Mxico, Uruguay, Brasil, Argentina, Colombia, Per y
Guatemala. La adquisicin del agente causal segn la
literatura, proviene desde varios ambientes naturales, tales
como: el suelo, restos de plantas, musgos (Sphagnum),
plantas exticas, espinas, tallos de rosas, madera, heno,
aire, agua, insectos y otras fuentes. Incluso varios animales
domsticos y roedores son portadores de este hongo,
entre ellos gatos y perros, pero no se consideran como
reservorios naturales; por esta razn, la esporotricosis se
asocian con actividades en ambientes externos relaciona-
das con: floristas, agricultores, jardineros, trabajadores
de viveros de plantas, leadores, etc., donde al parecer, el
sustrato muerto de Sphagnum (Zhanf & Andrews, 1993),
se considera entre los hbitat ms comunes y por ende
una fuente de contagio humana y animal para este hongo
dimrfico (Powell et al., 1978; Travassos & LLoyd, 1980
Dixon et al., 1991; Vismer & Hull, 1997; Jaffar et al., 1998;
Lopes-Bezerra, 2006; Mehta et al., 2007)
Mediantes estudios moleculares se ha
demostrado que la estructura de la poblacin de S. schen-
ckii,est integrada filogenticamente por un conjunto de
varias especies (ms de 5 especies putativas) prevalentes
en distintas reas geogrficas, que pueden incluso
identificarse slo con tecnicas morfofisiolgicas ( Marimon
et al., 2006-2007; OReilly & Atman, 2006). De Meyer et
al.(2008), mediante estudios taxonmicos y filognicos,

82
Microhongos oportunistas asociados al musgo pompom desecado Sphagunum magellanicus Brid. en Chile - E. Piontelli et al.

Figura 2. Neosartorya quadricincta. 2,1-2, 2-2,3.- Holomorfo en cultivo en OA, CYA, MA. 2,4.- Conidiforos,
vesculas, filides, conidios y un asco en OA. 2,5.- Ascoma, ascos y anamorfo en OA. 2,6 -2,7 -2,8 -2,9.- Asco
y ascosporas mostrando las 2 crestas prominentes y las 2 bandas laterales. En 2,8.- Se aprecia al mismo
tiempo la rugosidad de la ascospora en vista lateral. 2,10.- Conidiforos, vesculas, filides, conidios en MA.
Barra = 10 m

83
 Boletn Micolgico Vol. 23 : 75 - 85
describieron 3 nuevas especies en el complex O.stenoceras-
S.schenckii, desde la madera y el suelo, confirmando al
mismo tiempo que las cepas patgenas en humanos forman
un conjunto de varias especies crpticas.
La ausencia de patgenos primarios en S. ma-
gellanicus del complejo S.schenkii en las zonas mues-
treadas, es una situacin favorable desde el punto de vista
de un substrato considerado una fuente de infeccin en
varias partes del mundo. A pesar de lo limitado de nuestro
muestreo, aporta nueva informacin sobre la riqueza de
sus propgulos como remanentes de posibles grupos
funcionales fngicos asociados a este musgo. Con
referencia a su importancia en salud pblica y debido a las
particulares propiedades fsicas que exhibe este substrato
deben tomarse precauciones en su manejo y distribucin
comercial en Chile, debido a la sobrevivencia en el tiempo
de ciertos hongos oportunistas, en especial los integrantes
del complejo A. fumigatus.
Agradecimientos. Se agradece al Sr. Oscar Castro de la
ciudad de Tegualda (Comuna de Fresia) la gentileza de
haber proporcionado toda la muestra 1.
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85
Boletn Micolgico Vol. 23 : 87 - 91 2008
NOTAS SOBRE EL GENERO Geastrum PERS. EN CHILE
CENTRAL
(Notes on the genus Geastrum Pers. in Central Chile)
Unitat de Microbiologia, Facultat de Medicina i Cincies de la Salut,
Universitat Rovira i Virgili, Sant Lloren 21, 43201 Reus (Tarragona), Espaa.
Palabras clave: Geastrales, Geastrum, Distribucin
Key words: Geastrales, Geastrum, Distribution
RESUMEN
Se reporta el hallazgo de Geastrum campestre, G.
fornicatum y G. pectinatum en la zona central de Chile.
Junto a la descripcin e ilustraciones de estas especies,
se comentan aspectos de su ecologa, taxonoma y
distribucin. G. campestre es nuevo para el catlogo
micolgico chileno.
INTRODUCCION
Geastrum Pers. (Geastrales) es un gnero
cosmopolita de basidiomicetos gasteroides que crecen en
suelo o madera, y que segn Hawksworth et al. (1995)
incluira unas 50 especies. Las fructificaciones de este
gnero son inicialmente globoides o con forma de bulbo,
y su peridio consta de dos capas, denominadas exo- y
endoperidio. En la madurez el exoperidio se rasga desde el
pice en forma estrellada, dejando ver el endoperidio, que
libera los propgulos a travs de un ostolo apical rodeado
de un peristoma (Calonge, 1996, 1998). Pese al llamativo
aspecto de sus carpforos, por el cual son conocidos en
otros pases como estrellas de tierra o earthstars
(Gerhardt et al., 2000; Bates, 2004), y a ser hongos
relativamente frecuentes en el centro y sur de Chile, las
especies de Geastrum han sido an poco estudiadas en el
pas (Montagne, 1850; Espinosa, 1917; Lazo, 1972, 2001).
El estudio taxonmico de basidiocarpos
recolectados en Chile Central permiti identificar tres
especies de Geastrum, Geastrum campestre Morgan,
Geastrum fornicatum (Huds.) Hook y Geastrum
pectinatum Pers. En el presente trabajo, junto a la
descripcin e ilustraciones de estas especies, se comentan
aspectos sobre su ecologa, taxonoma y distribucin.
Recibido el 12 Mayo 2008
Aceptado el 23 Agosto 2008
Hugo Madrid L.
Tel: 34-977759350, E-mail: hugo.madrid@urv.cat
ABSTRACT
Geastrum campestre, G. fornicatum, and G.
pectinatum are reported from Central Chile. Descriptions
and illustrations of these species are provided with
comments on their ecology, taxonomy and distribution. G.
campestre is new to Chile.
MATERIAL Y METODOS
Los carpforos fueron recolectados desde suelo,
en las localidades de Santiago (Regin Metropolitana) y
Guacarhue (VI Regin). Para la observacin de estructuras
microscpicas de las especies estudiadas, se realizaron
preparaciones de la gleba en KOH 3% y lactofenol. Las
medidas de las esporas incluyen la ornamentacin. Las
colecciones se conservan en el herbario de la Seccin
Botnica del Museo Nacional de Historia Natural de Chile
y en el herbario particular del autor.
RESULTADOS Y DISCUSION
Geastrum campestre Morgan, Amer. Naturalist 21:
1027. 1887 (Figuras 1 A-B)
Material estudiado: En suelo de un cerro, bajo
Acacia caven (Mol.) Mol. Guacarhue, VI Regin, Provincia
de Cachapoal, Chile. 26-junio-2006. SGO153511.
Macroscopa: Carpforos de 34-41 mm de dimetro
x 14-16 mm de altura. Exoperidio rasgado en 7-9 rayos
higroscpicos. La capa micelial adhiere abundantes restos
vegetales y tierra. Capa carnosa de color caf, persistente,
agrietada. Capa fibrosa blanquecina. Endoperidio de color
blanco sucio, globoide, sobre un corto pedicelo, spero al
tacto, de superficie verrugosa al examinarlo bajo la lupa.
Peristoma fuertemente surcado.
87
 Boletn Micolgico Vol. 23 : 87 - 91
Microscopa: Esporas globosas de 6-8 m de
dimetro, verrugosas. Capilicio liso de 5-6 m de dimetro,
amarillento plido.
Observaciones: G. campestre se diferencia
fcilmente del resto de las especies de Geastrum citadas
de Chile por su endoperidio fuertemente verrugoso
(Calonge, 1998; Lazo, 2001). En el material estudiado, el
endoperidio se mostraba muy spero en estado fresco,
cuando los basidiomas an estaban bien hidratados por
la humedad del suelo y por gotas de roco. Sin embargo,
tras secar los basidiomas esta cualidad se haca menos
evidente al tacto.
La literatura consultada menciona un hongo muy
parecido a G. campestre, llamado G.. pouzarii V.J. Stank,
conocido de Europa y Asia. Esta especie tambin posee
rayos higroscpicos, peristoma surcado, endoperidio
verrugoso y esporas fuertemente ornamentadas (Moreno
& Lad, 1984; Calonge, 1996; Esqueda et al., 2003). Calonge
(1998) seal que, por su similitud con G. campestre, G.
pouzarii debera considerarse como una variedad de dicha
especie, para la cual propuso el nombre G. campestre var.
pouzarii (V.J. Stank) Calonge, caracterizada por sus
esporas algo menores (5-7 m diam.) y por la presencia de
fisuras radiales en la cara externa de la capa fibrosa. Otras
especies (an no reportadas de Chile), con las cuales G.
campestre podra confundirse son G. berkeleyi Massee y
G. kotlabae V.J. Stank. A nivel macroscpico, G. berkeleyi
es muy similar a G. campestre, con endoperidio verrugoso
y peristoma surcado, pero posee rayos no higroscpicos.
Adems sus esporas no superan los 7 m de dimetro
(Calonge 1996; Bates, 2004). G. kotlabae tiene rayos
higroscpicos y peristoma surcado, pero el endoperidio
es farinoso y sus esporas tampoco exceden los 7 m de
dimetro (Calonge, 1998).
G. campestre se ha reportado previamente de
Estados Unidos, Mxico, Australia, Europa, Sudfrica y
Bolivia (Bates, 2004; Rocabado et al., 2007). Esta especie
crece en el suelo, en reas despejadas, en pastizales o
entre la hojarasca, bajo especies de Acacia Mill., Juniperus
L., Pinus L., Prosopis L. y Quercus L. (Smith, 1951; Jeppson,
1987; Calonge et al., 1992; Moyersoen & Demoulin, 1996;
Calonge, 1998; Bates, 2004). El material estudiado,
recolectado de suelo bajo Acacia caven (espino), un
rbol autctono de la zona central de Chile, constituye un
nuevo registro para el catlogo micolgico nacional.
Geastrum fornicatum (Huds.) Hook., Fl. Londinensis
4: 575. 1821 (Figura 1 C)
Material estudiado: En suelo, entre la hojarasca de
planifolio no determinado. Santiago, Cerro San Cristbal,
Regin Metropolitana, 4-octubre-2005. SGO153512.
Macroscopa: Carpforos inicialmente globoide-
deprimidos. En la madurez, los carpforos abiertos alcanzan
88
2008
39-54 mm de dimetro x 45-65 mm de altura. Exoperidio
rasgado en 4 rayos no higroscpicos. La capa micelial
forma en el suelo una estructura gruesa y resistente, similar
a una copa, que adhiere restos vegetales, tierra y piedre-
cillas, sobre la cual se apoyan las puntas de los rayos de la
capa fibrosa. Capa fibrosa de color caf, con restos secos
de la capa carnosa adheridos a su superficie. Endoperidio
de 13-18 mm de dimetro x 9-12 mm de altura, globoide, de
color gris a caf oscuro, sobre un pedicelo de hasta 3 mm
de longitud. Peristoma fimbriado, no delimitado.
Microscopa: Esporas de 4,3-5,8 m de dimetro,
globosas, verrugosas, de color caf. Capilicio de 4-11 m
de dimetro, de color caf, con paredes gruesas.
Observaciones: G. fornicatum se caracteriza por
poseer carpforos abovedados, peristoma fimbriado, mal
delimitado o sin delimitar, capa micelial ciatiforme hipogea
y esporas verrugosas (Calonge, 1984; Ochoa, 1993; Bates,
2004; Leite et al., 2007). Es un hongo frecuente en el Cerro
San Cristbal, Santiago, donde fue observado en varias
oportunidades entre los aos 2005 y 2006.
En Chile se han reportado 2 especies de Geastrum
con fructificaciones abovedadas, G. fornicatum y G. jurei
Lazo, muy similares entre s. De acuerdo a Lazo (1972, 2001),
estos hongos pueden diferenciarse si se observan el
endoperidio y el peristoma, siendo ambas estructuras
concoloras en Geastrum fornicatum, mientras que en G.
jurei el peristoma es de color caf grisceo plido y el
endoperidio es caf oscuro con tintes violceos. Calonge
(1998), en su monografa de hongos gasteroides ibricos,
menciona 2 especies adicionales, hasta el momento no
reportadas de Chile, con las que podra confundirse G.
fornicatum, stas son G. welwitschii Mont. y G.
quadrifidum Pers.:Pers. A diferencia de G. fornicatum, G.
welwitschii posee una capa micelial ciatiforme epigea, que
no adhiere restos del sustrato y tiene un rizomorfo bin
desarrollado. Por otra parte, G. quadrifidum se distingue
de G. fornicatum por poseer un peristoma bien delimitado.
G. fornicatum es un taxn humcola que fructifica
bajo planifolios, tales como Quercus, Acacia y Prosopis
(Ochoa, 1993; Calonge, 1998; Bates, 2004). En Chile, este
hongo se distribuye por las zonas central y austral (Lazo,
2001). G. fornicatum tambin se ha reportado de Estados
Unidos, Mxico, Europa, Sudfrica, Australia, Brasil y
Argentina (Ochoa, 1993; Calonge, 1998; Bates, 2004; Leite
et al., 2007).
Geastrum pectinatum Pers. ex Pers., Syn.
Meth. Fung.: 132.1801 (Figura 1 D-E)
Material estudiado: En suelo. Santiago, Cerro San
Cristbal, Regin Metropolitana, 11-junio-2006. SGO
153513.
Macroscopa: Carpforos de 28-38 mm de dimetro
x 14-32 mm de altura. Exoperidio abierto en 10-12 rayos no
 Notas sobre el gnero Geastrum Pers. en Chile Central - H. Madrid
.

Figura 1. Basidiocarpos de: A, B. Geastrum campestre; C. G. fornicatum, en distintas etapas de maduracin; D, E. G.

pectinatum. La flecha en E seala las tpicas estras en la apfisis que caracterizan a esta especie.

higroscpicos, recurvados. La capa micelial adhiere color gris a beige, algo farinoso, de 10-13 mm de dimetro
abundantes restos vegetales y tierra. Capa fibrosa de color x 7-12 mm de altura, sobre un pedicelo de 1-2 mm de altura.
caf, con la superficie interna parcialmente cubierta por Peristoma cnico, surcado. Apfisis estriada.
restos secos de la capa carnosa. Endoperidio globoide, de Microscopa: Esporas de 7- 8 m de dimetro,

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 Boletn Micolgico Vol. 23 : 87 - 91
globosas, de color caf, fuertemente verrugosas. Capilicio
de 56 m de dimetro, de color caf claro, con paredes
gruesas.
Observaciones: G. pectinatum es un hongo fcil de
reconocer en el campo, caracterizado por sus rayos no
higroscpicos, peristoma surcado y apfisis estriada
(Breitenbach & Krnzlin, 1986; Martn, 1988; Castro et al.,
1993; Baseia et al., 2003; Calonge et al., 2005). La presencia
de estras radiales en la apfisis permite diferenciar a G.
pectinatum de especies similares, tales como G. striatum
DC. y G. nanum Pers. (no reportadas de Chile) (Calonge,
1998). Las dimensiones de las esporas muestran gran
variabilidad en G. pectinatum. A modo de ejemplo se puede
mencionar que Baseia et al. (2003) encontraron, en material
colectado en Brasil, medidas esporales de 4-4,5 m,
incluyendo la ornamentacin, mientras que Breitenbach
& Krnzlin (1986), en su monografa de hongos de Suiza,
describen esporas de 4-6 m de dimetro, sin considerar la
ornamentacin, compuesta por verrugas de hasta 1 m de
longitud. El material chileno estudiado se acerca ms a la
descripcin dada por estos ltimos autores.
G. pectinatum crece en suelo. Segn Baseia et al.
(2003), la distribucin de esta especie abarca Estados
Unidos, Mxico, Argentina, Brasil, Blgica, Francia,
Espaa, Inglaterra, Noruega, Suecia, Islas Aland, Australia,
Sudfrica, El Congo y China. En Chile, Espinosa (1917)
cita esta especie como Geaster pectinatus, sin precisar la
localidad.
AGRADECIMIENTOS
A las seoras Elizabeth Barrera, Mlica Muoz e
Ins Meza, de la Seccin Botnica del Museo Nacional de
Historia Natural de Chile, por las facilidades otorgadas
para el trabajo de laboratorio. Al Dr. Eduardo Piontelli, de
la Facultad de Medicina de la Universidad de Valparaso,
por facilitar informacin sobre la distribucin de especies
estudiadas. A la seorita Laura Clavijo, por su colaboracin
tcnica. A los expertos que han revisado el manuscrito
original, por sus valiosos comentarios.
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Boletn Micolgico Vol. 23 : 100 2008
CURSO
HONGOS EN ALIMENTOS Y AMBIENTES
INTERNOS
Universidad de Valparaso, Escuela de Medicina, Ctedra
de Micologa. Valparaso. Chile 3-7 Agosto 2009
Curso intensivo terico prctico (41 horas), orientado a
profesionales que se desempean en el area de la micro-
biologa, para capacitar a profesionales (Ingenieros en
alimentos, tecnlogos, biolgos, qumicos farmaceticos
u otros) en el manejo bsico de la taxonoma fngica a nivel
de gneros y especies en hongos filamentosos.
Contenidos del curso:
Generalidades de los hongos, morfologa, fisiologa y
ecologa. Sistemas reproductivos, tipos de propgulos de
100
dispersin, nociones de sistemtica. Grupos taxonmicos
a incluir: representates de los Mucorales, Eurotiales,
Hypocreales, Sordariales y sus anamorfos asociados. Pa-
trones de conidiognesis, sistemtica actual de los gne-
ros Aspergillus, Penicillium y Fusarium. Mtodos de cul-
tivo.
Laboratorio: Manejo de lupa estereoscpica para la ob-
servacin de colonias fngicas en diferentes medios de
cultivo y ambientes (aire, vegetacin, alimentos, suelo,
etc.). Preparaciones microscpicas para la identificacin a
nivel de gnero y especie en los medios especficos co-
rrespondientes. El laboratorio abarca el 80% de las horas
del curso. Cupo: 20 personas.
Inscripciones e informaciones: Fono 32-2507370, Fax 32-
2507375, @mail: anamaria.carreno@uv.cl