You are on page 1of 17

UNIVERSIDAD DE LA COSTA, CUC

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS AMBIENTALES


FACULTAD DE INGENIERIA AMBIENTAL

Anlisis macro y microscpico de microorganismos degradadores de suelos contaminados con


hidrocarburos del municipio de Sabanalarga- Atlntico
Bray Carlos Cepeda Nevis,Socarras Alberto, Zambrano Yanelis.
Margarita Castillo Ramrez. Grupo: BD-21 Octubre-2016/ 28 Octubre- 2016
Laboratorio microbiologaUniversidad de la costa, CUC
RESUMEN

La actividad econmica de hoy en da es


muy alta, desde grandes industrias hasta
pequeos emprendedores, para el caso de
talleres mecnicos, las personas con pocos
recursos improvisan un taller en cualquier
espacio como medio para subsistir, esto de
una manera general no tiene ningn
problema, pero desde un punto de vista
ambiental, va a tener graves consecuencias,
ya que no se tiene un manejo adecuado de
dichos residuos, los cuales son vertidos al
suelo afectan sus minerales y algunas formas
de
vida,
afortunadamente
algunos
microorganismos pueden sobrevivir y
degradar dichos contaminantes.
El derrame de hidrocarburos al suelo tiene
impactos en la actividad de los
microorganismos, y afectan la funcionalidad
del ecosistema.
Esta prctica de laboratorio se centr en la
identificacin
de
microorganismos
degradadores de suelos contaminados por
hidrocarburos.

Para llevar a cabo esta prctica se realiz la


toma de una muestra de suelo en un taller
mecnica del municipio de SabanalargaAtlntico; luego se traslad dicha muestra al
laboratorio en el cual se procedi a realizar
el
aislamiento
de
microorganismos
sembrando directamente la muestra de suelo
y dejando en incubacin por un lapso de 48
horas, pero en esta experiencia duro 1
semana. Transcurrido este tiempo se llev a
cabo la identificacin de microorganismos
teniendo
en
cuenta
caractersticas
macroscpicas y microscpicas para lo cual
se obtuvo como resultado.
Abstract
Economic activity today is very high, from
large industries to small entrepreneurs, in the
case of mechanical workshops, people with
few resources improvising a workshop in
any space as a means to survive, this in a
general way has no problem but from an
environmental point of view, it will have
serious consequences, since there is no
proper management of these wastes, which

UNIVERSIDAD DE LA COSTA, CUC


DEPARTAMENTO DE CIENCIAS AMBIENTALES
FACULTAD DE INGENIERIA AMBIENTAL

are discharged into the soil affect its


minerals and some forms of life, thankfully
some microorganisms can survive and
degrading said contaminants. The oil spill to
the ground has impacts on microbial activity,
and affect the functionality of the ecosystem.
This lab focused on identifying degrading
microorganisms soils contaminated by
hydrocarbons. To carry out this practice
taking a soil sample in a mechanical
workshop
of
the
municipality
of
Sabanalarga-Atlantic was made; then the
sample to the laboratory in which we
proceeded to perform the isolation of
microorganisms directly sowing the soil
sample and incubation for leaving within 48
hours moved, but this experience lasted 1
week. After this time was carried out the
identification of microorganisms given for
macroscopic and microscopic characteristics
which result was obtained.
Objetivos
Objetivo general

Identificacin de microorganismos
presentes en suelos contaminados
por hidrocarburos del municipio de
Sabanalarga-Atlantico.

Objetivo especficos

Aplicar tcnicas de muestreo de


suelos que faciliten el aislamiento de
microorganismos presentes.
Reconocer microorganismos segn
su estructura macro y microscpica.
Aislar
microorganismos
potencialmente biodegradadores de
suelos
contaminados
por
hidrocarburos.
Introduccin

De acuerdo con el decreto 1521 de 1998,


expedido por el Ministerio de Minas y
Energa, las estaciones de servicio son:
establecimientos
destinados
al
almacenamiento
y
distribucin
de
combustibles lquidos derivados del petrleo
y/o gaseosos y gas licuado del petrleo
(GLP), para vehculos automotores a travs
de equipos fijos (surtidores) que llenan
directamente los tanques de combustible.
Entre los impactos significativos, adversos o
benficos, dentro de las diferentes etapas de
una estacin de servicio se encuentran: la
contaminacin del suelo. (Gua de Manejo
Ambiental para Estaciones de Servicio de
Combustible (1999,)
La industria de los hidrocarburos, siempre se
ha caracterizado por tener un alto potencial
de contaminacin, y se le ha sealado como
una de las principales causas de destruccin
de los ecosistemas relativos de la plantas y
suelos, por todas las actividades diarias que

UNIVERSIDAD DE LA COSTA, CUC


DEPARTAMENTO DE CIENCIAS AMBIENTALES
FACULTAD DE INGENIERIA AMBIENTAL

conlleva toda esta cadena productiva. El


suelo es un recurso natural no renovable,
con una funcin importante en la vida y en
el desarrollo de la humanidad. Este es el
punto ms sensible de las actividades de
exploracin, perforacin y explotacin, ya
que siempre son los principales afectados
por los diversos residuos que genera la
industria petrolera, ms conocidos como
residuos peligrosos.
Los derrames producidos por hidrocarburos
son una de las principales fuentes de
contaminacin de suelos y agua ya que
ocasionan perturbaciones en los ecosistemas
al afectar su estructura y bioprocesos. Este
tipo de contingencias ambientales originan
efectos directos sobre la biota, ya que los
hidrocarburos
contienen
compuestos
qumicos txicos que producen daos a
plantas animales y humanos, pero
principalmente sobre las poblaciones de
microorganismos, los cuales presentan parte
importante del ecosistema y son claves para
los procesos biogeoqumicos (vasudevan y
rajaram,2001)
Segn RD 5/2009 se entiende como suelo
contaminado
Aquel cuyas caractersticas han sido
alteradas negativamente por la presencia de
compuestos qumicos de carcter peligroso

de origen antropognico, en concentraciones


que superan los Niveles Genricos de
Referencia y que conllevan a un riesgo
inaceptable para la salud humana o el medio
ambiente, de acuerdo con los criterios y
standards definidos por dicho decreto y que
ha sido declarado como tal por la
Administracin competente mediante.
S. Narvez, M. Gmez, M. Martnez.
(2008) en su trabajo de investigacin
titulado Seleccin de bacterias con
capacidad degradadora de hidrocarburos
aisladas a partir de sedimentos del caribe
colombiano. Instituto de Investigaciones
Marinas y Costeras (INVEMAR). El cual
tuvo como objetivo realizar aislamientos
bacterianos en medio mnimo de sales
suplementado con hidrocarburos (ACPM o
petrleo crudo) como nica fuente de
carbono. Obteniendo como resultado que un
cultivo mixto degrad el 68.6 % de los
hidrocarburos alifticos con preferencia de
los n-alcanos de cadena larga (C12- C31),
alcanzando un crecimiento mximo de 3.13
x 109 UFC / mL; e identificando las cepas
mediante los sistemas bioqumicos BBL
crystal y API 50 CHB/E como bacterias
correspondientes a los gneros Klebsiella,
Chromobacterium,
Flavimonas,
Enterobacter, Pseudomonas y Bacillus.
La contaminacin medioambiental de suelos
producidos por el derrame de hidrocarburos
es un asunto cada vez ms comn. Esta
contaminacin de suelos es un hecho

UNIVERSIDAD DE LA COSTA, CUC


DEPARTAMENTO DE CIENCIAS AMBIENTALES
FACULTAD DE INGENIERIA AMBIENTAL

frecuente que se ve en talleres de mecnica,


estaciones de servicio.
Las estaciones de servicios son unas de las
fuentes de contaminacin del suelo por
gasolina, as como tambin los talleres de
mecnica. Ya que est llega al suelo por
medio de diferentes actividades realizadas
en dichos lugares (al momento del
mantenimiento de los puntos de depsito del
hidrocarburo, etc.) as como tambin al
momento de la distribucin.
Cuando se presenta una contaminacin del
suelo por hidrocarburos (gasolina) son varias
las acciones a emprender para remediar los
sitios afectados como lo es: Excavacin del
suelo
contaminado,
excavacin
y
tratamiento del suelo, biorremediacin
Pasiva, In Situ, bioVentilacin, Separacin
de vapores. (Gua de Manejo Ambiental para
Estaciones de Servicio de Combustible
1999, p.5).
En esta prctica se realiza la identificacin
de microorganismos presentes en suelos
contaminados por hidrocarburos del
municipio de Sabanalarga-Atlantico.
Antecedentes

Marco terico
ESTRUCTURA Y COMPONENTES DEL
SUELO
El suelo se define como la parte superior de
la corteza terrestre, y est compuesto por
componentes minerales (meteorizacin de
las rocas), componentes orgnicos (humus y
derivados, biomasa viva y muerta), gas (aire
en el espacio existente en los poros), y agua
envolviendo partculas y el espacio capilar
(Figura I.2). En trminos generales, est
formado por un 50 % de espacio libre (la
mitad del espacio poroso ocupada por gases
y la otra mitad por lquidos); un 40-50 % de
slidos minerales (meteorizacin de las
rocas) y un 0,5-5% de materia orgnica
(humus y derivados, biomasa viva y muerta)
(Brock y Madigan, 2000).
Los componentes minerales y la materia
orgnica se distribuyen en el espacio
generando una estructura porosa. Los poros
pueden contener agua o aire, de manera que
existen tres fases: slida, lquida y gaseosa.
El agua contenida en los poros del suelo
contiene sales minerales y nutrientes y es el
medio en el cual se puede desarrollar la
actividad
metablica
de
los
microorganismos que lo colonizan. El
contenido en agua de un suelo puede oscilar
enormemente, afectando dicha actividad.

UNIVERSIDAD DE LA COSTA, CUC


DEPARTAMENTO DE CIENCIAS AMBIENTALES
FACULTAD DE INGENIERIA AMBIENTAL

ESTUDIO
DE
MICROBIANA

Figura 1. Esquema de la disposicin en el


espacio de los agregados constituyentes de
un suelo.
Fuente: Das, R. L
El suelo es fundamental e irremplazable;
coordina el crecimiento de las plantas de los
ecosistemas terrestres y mantiene los ciclos
biogeoqumicos,
ya
que
los
microorganismos del suelo degradan
virtualmente todos los componentes
orgnicos, inclusive los compuestos
xenobiticos y polifenlicos persistentes.
Las poblaciones que habitan el suelo
incluyen a la macrofauna, mesofauna,
microfauna y microflora. Cabe sealar que
el 80-90 % de las reacciones biolgicas en el
suelo son mediadas por microorganismos
(Nannipieri y Badaluco, 2003) siendo las
bacterias y los hongos los que llevan a cabo
estas reacciones. (Das. R. L, 2011).

LA

DIVERSIDAD

La diversidad microbiana es un trmino


general que comprende la diversidad
gentica, que es la cantidad y distribucin de
la informacin gentica de las especies
microbianas; la diversidad de las bacterias y
los hongos que forman parte de las
comunidades microbianas; y la diversidad
ecolgica, que es la variacin en la
estructura de las comunidades, la
complejidad de las interacciones, el nmero
de niveles trficos y el nmero de
agrupaciones. As, la diversidad microbiana
incluye el nmero de las distintas especies
bacterianas y fngicas (riqueza) y su
abundancia relativa en la microflora del
suelo (Kennedy y Smith, 1998).
Es importante tener en cuenta que solo un 110 % de los microorganismos del suelo son
realmente cultivables. Los estudios clsicos
de
diversidad
microbiana
basados
nicamente
en
el
aislamiento
de
microorganismos representaran tan slo una
parte minoritaria de la diversidad real
existente (Torsvik y col., 2003). Es probable
que tan reducido margen de cultivo sea
debido a la interdependencia entre
microorganismos, a la imposibilidad de
crear las condiciones ambientales que
enfrentan realmente los microorganismos en
el suelo, y tambin el hecho que algunos
microorganismos son cultivables tan slo
bajo ciertas condiciones fisiolgicas (Heuer
y col., 2001).

UNIVERSIDAD DE LA COSTA, CUC


DEPARTAMENTO DE CIENCIAS AMBIENTALES
FACULTAD DE INGENIERIA AMBIENTAL

Las tcnicas dependientes de cultivo


presentan una importante ventaja, que es la
posibilidad de obtener cultivos puros, tiles
para estudios posteriores, y permiten obtener
informacin
acerca
de
actividades
metablicas de inters. (Das. R. L, 2011).
SUELOS
CONTAMINADOS
HIDROCARBUROS

CON

Durante las maniobras de extraccin,


procesamiento y transporte de los
hidrocarburos,
los
suelos
estn
continuamente sometidos a derrames
accidentales. Cuando un suelo recibe un
derrame cambia sus caractersticas, tanto
qumicas como biolgicas. Desde el punto
de vista qumico, la principal modificacin
consiste en un incremento enorme del
contenido de carbono (C). Este aporte de C
altera la relacin C:N:P. Desde el punto de
vista biolgico, la presencia de los
hidrocarburos en un suelo causa una
reduccin notable de la diversidad de las
comunidades que lo habitan (Castle y col.,
2006).
A nivel biolgico los hidrocarburos resultan
un factor de stress (adicional a los existentes
en el suelo) que condiciona el desarrollo de
los diferentes componentes de la comunidad
microbiana, permitiendo el crecimiento de
aquellas poblaciones con capacidades
metablicas adecuadas (y que pueden
utilizar la presencia del hidrocarburo como
fuente de C y E), obligando a permanecer en
formas de resistencia a otros (aquellos que
pueden tolerar la presencia del hidrocarburo

pero no pueden aprovecharla como una


ventaja, al menos en ciertas condiciones) y
eliminando a aquellos que resultan sensibles.
Los
suelos
contaminados
suelen
diferenciarse en dos categoras, Suelos
contaminados en forma aguda o Suelos
contaminados en forma crnicas, en base a
su grado y tiempo de exposicin a los
contaminantes. Un suelo prstino (sin
exposicin previa a los hidrocarburos) que
recibe de manera repentina una gran dosis de
hidrocarburos puede ser definido como
suelo contaminado en forma aguda. (Das.
R. L, 2011).
El aporte repentino del contaminante
condicionar el desarrollo de diferentes
miembros de la comunidad microbiana,
permitiendo
el
establecimiento
y
colonizacin de los mejores adaptados a la
nueva condicin. As mismo, y segn la
composicin qumica del contaminante, este
se distribuir en la matriz segn procesos de
adsorcin a las partculas del suelo,
percolado a zonas ms profundas, y/o
eliminado por volatilizacin. Por el otro
lado, un suelo que sufri un evento de
contaminacin que ocurri hace tiempo o
que recibe un evento de contaminacin
constantemente, pueden considerarse como
un suelo contaminado en forma crnica.
Los suelos crnicos se distinguen de los
agudos porque en los primeros se pueden
encontrar proporciones significativas de
microorganismos
adaptados
a
las
condiciones de stress generado por la

UNIVERSIDAD DE LA COSTA, CUC


DEPARTAMENTO DE CIENCIAS AMBIENTALES
FACULTAD DE INGENIERIA AMBIENTAL

contaminacin y por lo tanto capaces de


tolerar y degradar los contaminantes.
Estos microorganismos han logrado
colonizar el suelo consumiendo las
fracciones
disponibles
y
fcilmente
degradables. Consecuentemente y con el
transcurso el tiempo, las fracciones
disponibles se irn agotando y se acentuarn
los procesos de adsorcin. Este proceso de
envejecimiento se produce por una serie
de fenmenos como son: la adsorcin con la
materia particulada del suelo dentro de
pequeos poros (0.2-0.8 m) inaccesibles
para las bacterias; la absorcin a la materia
orgnica del suelo; la baja difusividad de los
compuestos, principalmente desde los
microporos; la disolucin en fases lquidas
no acuosas (en ingls NAPLs); la formacin
de uniones covalentes con la materia
orgnica e inorgnica del suelo o bien su
dispersin en aguas subterrneas de sitios
contaminados (Nannippieri y col., 2003).
Si bien el aprovechamiento de la
biodegradacin
bacteriana
de
los
hidrocarburos es una va posible para lograr
la limpieza de suelos contaminados, la
reducida
biodisponibilidad
de
estos
compuestos constituye una de las principales
limitaciones del proceso debido a que se
encontrarn poco accesibles para los
microorganismos (Kanaly y Harayama,
2000).
Una alternativa aplicable a suelos
crnicamente contaminados es optimizar el
potencial degradador de esta microbiota

autctona, con la nivelacin de los nutrientes


esenciales
para
su
crecimiento
y
supervivencia. Con la intencin de superar la
barrera que representa la baja disponibilidad
del contaminante, actualmente han sido
publicados numerosos trabajos sobre las
estrategias que han desarrollado los
microorganismos aislados bajo condiciones
limitantes del hidrocarburo. (Nannippieri y
col., 2003). La aplicacin de estos
microorganismos como inoculantes en
suelos crnicos, podra resultar en la exitosa
reduccin del contaminante.
BIORREMEDIACIN
DE
SUELOS
CONTAMINADOS CON HIDROCARBUROS:
UNA TECNOLOGA AMIGABLE

En las ltimas dcadas, con el objetivo de


eliminar
hidrocarburos
de
suelos
contaminados, se han desarrollado diferentes
estrategias econmicamente atractivas y ms
amigables con el medio ambiente que los
mtodos fsicos/qumicos disponibles. Todas
ellas se basan en el aprovechamiento de las
capacidades
metablicas
de
los
microorganismos
para
degradar
los
contaminantes y reciben el nombre genrico
de procesos de biorremediacin. La
biorremediacin podra definirse como una
biodegradacin asistida y controlada que
provee
una
solucin
definitiva,
diferencindose de otras tecnologas que
solo proveen una solucin temporal
mediante el aislamiento y contencin del
contaminante (Das. R. L, 2011).

UNIVERSIDAD DE LA COSTA, CUC


DEPARTAMENTO DE CIENCIAS AMBIENTALES
FACULTAD DE INGENIERIA AMBIENTAL

Esta tecnologa utiliza microorganismos,


componentes celulares o enzimas libres, con
el fin de lograr la mineralizacin o bien una
transformacin parcial del contaminante en
sustancias menos txicas o inocuas para el
medio ambiente y la salud humana. Aunque
no todos los compuestos orgnicos son
susceptibles a la biodegradacin, los
procesos de biorremediacin se han utilizado
con xito para tratar suelos o lodos y
sedimentos contaminados (Lina, 2010)
incluso de ambientes fros (Ruberto, 2009).
Al igual que otras tecnologas de
remediacin, la biorremediacin puede
realizarse in situ, es decir en el mismo lugar,
u on site lo cual implica excavar el material
y tratarlo dentro del rea afectada. Otra
alternativa es el tratamiento ex situ, donde se
puede excavar el material y trasladarlo fuera
del lugar contaminado. La biorremediacin
in situ es la ms aplicada ya que trata el
contaminante en el lugar, aprovechando la
capacidad
degradadora
de
los
microorganismos autctonos del sitio
(Velasco y Volke Seplveda, 2003).
FACTORES QUE CONDICIONAN LA
BIORREMEDIACIN DE UN SUELO
La biodegradabilidad de una mezcla de
hidrocarburos presente en un suelo
contaminado depende de diversos factores
como son: la presencia de una comunidad
microbiana degradadora potencialmente
activa, la estructura molecular del
contaminante,
su
concentracin
y
biodisponibilidad, y factores ambientales

como la, temperatura, el pH, humedad del


suelo, presencia de aceptores de electrones,
y la existencia de nutrientes inorgnicos
(fuente de N y P) disponibles.
EL PH, TEMPERATURA
Cada cepa microbiana tiene un determinado
rango de tolerancia a factores ambientales
como son: la temperatura, el pH y la
salinidad, los cuales pueden afectar al
crecimiento y actividad de las poblaciones
microbianas. En consecuencia, cuanto
mayor sea la diversidad de microorganismos
existentes, potencialmente mayor ser el
rango de tolerancia. No existen unas
condiciones preestablecidas que sean
ptimas en todos los casos, pero en trminos
generales los rangos ptimos para la
biodegradacin son: pH entre 6-8 y
temperaturas entre 20-30 C (Alexander,
1999).
La variacin del pH del suelo afecta a la
actividad microbiana y tambin a la
solubilizacin y adsorcin/absorcin de los
contaminantes y de los iones. Las formas
catinicas (NH4+, Mg2+ , Ca 2+) son ms
solubles a pH cido mientras que las formas
aninicas (NO3 - , NO2 - , PO4 3- Cl- ) son
ms solubles a pH alcalino (Sharpley, 1991).
En general, el pH ptimo para el crecimiento
de las bacterias hetertrofas es neutro (pH 68), mientras que es ms cido para los
hongos (pH 4-5) La temperatura es uno de
los factores ambientales ms importantes
que afecta la actividad metablica de los
microorganismos
y
la
tasa
de

UNIVERSIDAD DE LA COSTA, CUC


DEPARTAMENTO DE CIENCIAS AMBIENTALES
FACULTAD DE INGENIERIA AMBIENTAL

biodegradacin. La humedad del suelo


puede limitar de forma severa la
biodegradacin,
fundamentalmente
en
suelos
superficiales
afectados
por
oscilaciones importantes en el contenido de
agua.
No obstante el nivel ptimo de humedad
depende de las propiedades de cada suelo, el
tipo de contaminacin y si la biodegradacin
es aerbica o anaerbica. Un dficit de agua
puede disminuir el transporte de nutrientes y
de contaminantes, as como tambin la
migracin bacteriana a travs del suelo. El
exceso de agua en un suelo desplaza el aire
residente en los poros del suelo, generndose
con
mayor
facilidad
condiciones
anaerbicas, al agotarse el oxgeno disuelto
en agua (Menn y col., 2000).

Taller mecnico 4 esquinas


Sabanalarga- Atlntico

AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS:
Materiales:
Muestra de suelo 10 gr
Esptula
Balanza digital
3 Caja Petri
Cinta
Agar Sabouraud
Agar Plate count

Metodologa
rea de estudio

guante y tapaboca, est fue depositada en un


frasco previamente esterilizado y se
procedi a refrigerar.

Mechero

de

Toma de muestra
El estudio fue realizado en el laboratorio de
ciencias ambientales de la Universidad de la
costa, la muestra de suelo fue tomada en un
taller de mecnica del municipio de
Sabanalarga-Atlntico.
Dicha muestra fue tomada 24 horas antes de
la realizacin de la prctica, se tomaron las
medidas preventivas como fue el uso de

Siembra de la muestra

De la muestra tomada en el taller


mecnica 4 esquinas del municipio
Sabanalarga se procedieron a masar
gramos, los cuales fueron depositados
una caja Petri.

Autor: Yanelis Zambrano

de
de
10
en

UNIVERSIDAD DE LA COSTA, CUC


DEPARTAMENTO DE CIENCIAS AMBIENTALES
FACULTAD DE INGENIERIA AMBIENTAL

En un frasco que contena 90 ml de solucin


salina fueron disueltos los 10 gramos de la
muestra tomada, se agito hasta obtener una
solucin homognea.

Luego de tener las diluciones listas se


procedi a agregar el medio de cultivo (agar
sabouraud) en cada una de las cajas Petri,
estas fueron agitadas suavemente para que la
mezcla sea uniforme.

Autor: Nevis Cepeda

Autor: Carlos Bray

Se tomaron 3 cajas Petri en las cuales se


adicionaron siembras de diluciones entre 10-4,103
y 10-2, con la ayuda de una micro pipeta estril
fueron tomados 1 ml para cada una.

Por ltimo, se pas a etiquetar cada una de


las cajas para ser identificadas, y se dej por
una semana la siembra.

A
utor: Carlos Bray

Autor: Yanelis Zambrano


Ya pasada la semana de haber realizado la
siembra, se hizo la identificacin

UNIVERSIDAD DE LA COSTA, CUC


DEPARTAMENTO DE CIENCIAS AMBIENTALES
FACULTAD DE INGENIERIA AMBIENTAL

macroscpica y microscpica de los


microorganismos presentes en la muestra
Segn la identificacin macroscpica
realizada se encontraron bacterias y hongos,
los
cuales
sern
estudiados
microscpicamente para una identificacin
ms precisa.
Identificacin microscpica en bacterias.
Para la identificacin de las bacterias se pas
a flamear el asa en aro y los portaobjetos, ya
teniendo esto listo se procedi a aplicar una
pequea cantidad superficial de la muestra
en uno de los portaobjetos con la ayuda del
asa en aro.

Autor: Alberto Socarras


Luego se procedi a llevar la muestra a la
rejilla para hacer la tincin de gram.

Autor: Nevis Cepeda


Autor:Nevis Cepeda
Ya colocada la muestra en el portaobjetos,
est fue llevado al calor para mayor fijacin.

A la muestra se le agrego un 1 ml de cristal


violeta y se dej por 60 segundos.

UNIVERSIDAD DE LA COSTA, CUC


DEPARTAMENTO DE CIENCIAS AMBIENTALES
FACULTAD DE INGENIERIA AMBIENTAL

Autor: Carlos Bray


Pasado los 60 segundos se enjuago la
muestra y se agreg 1 ml de lugol y tambin
fue dejado por 60 segundos, el cual tambin
se le adiciono agua.

Autor: Nevis Cepeda


Se agreg alcohol de gram a la muestra por
15 segundos, transcurridos los segundos de
espera, adicionamos safranina por 60
segundos.

Autor: Yanelis Zambrano


Se pas a secar la muestra y se le adiciono
por ultimo aceite de inmersin para pasarla
al microscopio.

Autor: Nevis Cepeda


La muestra fue llevada al microscopio para
la identificacin de la bacteria.

Autor: Alberto Socarras

UNIVERSIDAD DE LA COSTA, CUC


DEPARTAMENTO DE CIENCIAS AMBIENTALES
FACULTAD DE INGENIERIA AMBIENTAL

Identificacin microscpica en hongos.


Para la identificacin de hongos se tom un
portaobjeto previamente flameado y se
coloc una gota de colorante azul, con la
ayuda de
cinta adhesiva muy
superficialmente se procedi a tomar la
muestra de la colonia del hongo formado.

Autor: Alberto Socarras


Resultado
En la muestra de suelo
encontramos
los
microorganismos:

Autor: Nevis Cepeda


Se procedi a
colocar la cinta muy
cuidadosamente encima del colorante (azul
de lactofenol) que estaba en el portaobjeto.
Luego se pas a colocar la muestra en el
microscopio con objetivo de 40X y 100X,
con el fin de buscar estructuras
representativas que nos ayudaran a la
identificacion.

analizada
siguientes

Para la identificacin del hongo presente en


la muestra se us la informacin brindada en
clases y para constatar la informacin se
utilizaron los resultados obtenidos en el
artculo desarrollo de tcnicas innovadoras
para
mejorar
la
degradacin
de
hidrocarburos estudio por: Helena Prez
Berazatgui donde se encontr que el hongo
presente es: Levadura (Cryptococcus).

UNIVERSIDAD DE LA COSTA, CUC


DEPARTAMENTO DE CIENCIAS AMBIENTALES
FACULTAD DE INGENIERIA AMBIENTAL

Segn las caractersticas encontradas en las


bacterias analizadas en el artculo hongos y
bacterias limpian suelos contaminados con
hidrocarburos podemos notar similitud en
morfologa y tincin, lo que nos indica que
la bacteria presente en nuestra prctica es
Pseudomonas putida.

A la izquierda se encuentra nuestra muestra


y a la derecha encontramos la muestra
tomada como referencia.

UNIVERSIDAD DE LA COSTA, CUC


DEPARTAMENTO DE CIENCIAS AMBIENTALES
FACULTAD DE INGENIERIA AMBIENTAL

Anlisis de resultado
Para mayor identificacin a continuacin se
mostraran las caractersticas obtenidas
macroscpicas y microscpicas de la
muestra de suelo tomada en el taller de
mecnica de Sabanalarga- Atlntico.
Macroscpico
Caractersti Hongos
cas
Forma
Redonda,
E. Forma
L-F, HRizoide.
Consistenci Algodonos
a
os.
Color
Rojo, Gris,
Negro y
Blanco.
Elevacin
Elevada.

Aspecto del
micelio
Tamao
Borde
Superficie

Transparen
cia

Bacteria
s
Redond
a.

Tabla 1. Caractersticas macroscpicas


microorganismos encontrados.

Microscpico
Caractersticas
Hongos
Morfologa.
Cosos, Diplococos,
Estafilococo.
Coloracin de GRAM
Gram-Positivas.
Tabla 2. Caractersticas microscpicas
de microorganismos encontrados.

En hongos:
Viscosa.
Blanco.

Convexa
.

Algodonos
o.

En bacterias:
Peque
o.
Liso.
No
present
a.
No
present
a, color
slido.

de

UNIVERSIDAD DE LA COSTA, CUC


DEPARTAMENTO DE CIENCIAS AMBIENTALES
FACULTAD DE INGENIERIA AMBIENTAL

Marinas y Costeras (INVEMAR). Santa Marta.


Recuperado
de:
http://www.scielo.org.co/pdf/mar/v37n1/v37n1a04
YANINE. H. B (2010). Evaluacin de la diversidad de
bacterias degradadoras de hidrocarburos aisladas de
suelos de las cuencas de los ros Otn y la Vieja.
Bogot
D.C.
Recuperado
de:
http://www.bdigital.unal.edu.co/2526/1/186260.2010.p
df
DE MESA, J. B. L., Quintero, G., Vizcano, A. L. G.,
Cceres, D. C. J., Riao, S. M. G., & Garca, J. M.
(2006). Bioremediacin de suelos contaminados con
hidrocarburos derivados del petrleo. Recuperado de:
http://www.unicolmayor.edu.co/invest_nova/NOVA/AR
TREVIS1_5.pdf

Conclusiones
Durante la investigacin del proyecto se
estudiaron en la literatura diferentes
microorganismos capaces de degradar
hidrocarburos los cuales toman un papel
muy importante en la biorremediacin una
tcnica que es de gran eficiencia y que hoy
por hoy es utilizada en muchas ocasiones en
este proceso. Para este proyecto se lograron
caracterizar
los
microorganismos
macroscpicamente, falta
Referencias
NARVEZ, S. F, Gmez, M., Martnez, M. M. (2008).
Seleccin de bacterias con capacidad degradadora
de hidrocarburos aisladas a partir de sedimentos del
caribe colombiano. Instituto de Investigaciones

ITURBE, R. A y Prez, G. C. (2005). Calidad del


suelo en un sitio contaminado de gasolina y sometido
a un proceso de limpieza. Recuperado de:
http://proyectos2.iingen.unam.mx/Proyectos_2005_20
06/07/7.4.4.pdf
Gua de Manejo Ambiental para Estaciones de
Servicio de Combustible. (1999). Recuperado de:
http://www.siame.gov.co/siame/documentos/Guias_A
mbientales/Gu%C3%ADas%20Resoluci%C3%B3n
%201023%20del%2028%20de%20julio%20de
%202005/HIDROCARBUROS/Guia%20de
%20manejo%20ambiental%20para%20estaciones
%20de%20servicio%20de%20Combustible.pdf
Brock D. y Madigan M. 2000. Microbiologa (8va.
edicin). Prentice Hall Hispanoamericana. S.A.
Mexico.
Das R. L (2011). Biorremediacin de suelos
contaminados por hidrocarburos en das fros y
templados.
Recuperado
de:
http://sedici.unlp.edu.ar/bitstream/handle/10915/1808
2/Documento_completo.pdf?sequence=1

UNIVERSIDAD DE LA COSTA, CUC


DEPARTAMENTO DE CIENCIAS AMBIENTALES
FACULTAD DE INGENIERIA AMBIENTAL

Kennedy, A.C. & Smith, K.L. 1998. Soil microbial


diversity and the sustainability of agricultural soils.
Plant and Soil, 170, 7586.
Torsvik, V., L. Ovreas y T. F. Thingstad. 2003.
Prokaryotic Diversity - Magnitude, Dynamics and
Controlling Factors. Science. 296:1064-1066.
Heuer, H., Wieland, G., Schonfeld, J., Schnwalder, A.,
Gomes, N.C.M. & Smalla, K. 2001. Bacterial
community profiling using DGGE or TGGE analysis.
In: Environmental Molecular Microbiol-ogy: Protocols
and Applications (ed. P.A. Rochelle), pp. 177190.
Castle, D. M., M. T. Montgomery and D. L. Kirchman.
2006. Effects of naphthalene on microbial community
composition in the Delaware estuary. FEMS Microbiol.
Ecol. 56, 5563.
Nannipieri, P. and Badalucco, L. 2003. Biological
processes. In: Pro-cesses in the Soil Plant System:
Modelling Concepts and Applications (eds D.K. Bembi
& R. Nieder). The Haworth Press, Binghamton, NY, in
press.
Kanaly R. A. y Harayama S. 2000. Biodegradation of
High-Molecular-Weight
Polycyclic
Aromatic
Hydrocarbons by Bacteria. J. Bacteriol. 182:20592067.
Ruberto L. 2009. Biodegradacin de hidrocarburos
alifticos y aromticos en suelos expuestos a bajas
temperaturas. Las bacterias antrticas como
herramienta de biorremediacin. Tesis doctoral.
Facultad de Farmacia y Bioqumica. UBA.
Velasco, J.A. y Volke Seplveda, T.L. 2003. El
composteo: una alternativa ecolgica para la
biorremediacin de suelos en Mxico. Gaceta
Ecolgica. 66: 41-53.
Sharpley, A. N. 1991. Efect of soil pH on cation and
anion solubility. Commun. Soil. Sci. Plant Anal.
22:1391-1399.

Menn, F-M., J. P. Easter y G. S. Sayler. 2000.


Bacterial
activity
enhancement
and
soil
decontamination. In H.J.Rehm, G.Reed, A.Phler and
P.Stadler, editors, Biotechnology. Environmental
processes II. Soil decontamination. Wiley-VCH.
Weinheim. pp. 425-439.
Harayama, S. 1997. Polycyclic aromatic hydrocarbon
bioremediation design. Curr. Opin. Biotechnol. 8: 268273.
Harayama, S., H. Kishira, Y. Kasai, y K. Shutsubo.
1999.
Petroleum
biodergadation
in
marine
environments. J. Mol. Microbiol. Biotechnol. 1:63-70.
Johnsen A. R., Wick L.Y. y Harms H. 2005. Principles
of microbial PAH-degradation in soil. Environ Pollut.
133:7184.
Menn, F-M., J. P. Easter y G. S. Sayler. 2000.
Bacterial
activity
enhancement
and
soil
decontamination. In H.J.Rehm, G.Reed, A.Phler and
P.Stadler, editors, Biotechnology. Environmental
processes II. Soil decontamination. Wiley-VCH.
Weinheim. pp. 425-439.

You might also like