Determinacin de cido ascrbico por espectrofotometra

Cervantes R. 1, Pimentel K. 2, Pinzn S. 3.

Universidad autnoma de Chiriqu, facultad de ciencias naturales y exactas, escuela de
farmacia, laboratorio de analtica 225, profesora Lilibeth Miranda

Resumen

aquella que tiene la energa requerida para

mover un electrn desde un nivel de energa
inferior a uno superior.

H
O es O idntica
La ley de Beer
a la ley de
C
Bouguer, excepto porque est expresada en
OH
OH
O trminos
de la concentracin.
La cantidad de
4
4
O 1 O
O C
1 O
HO
HO
5
5
luz absorbida es proporcional al nmero de
3
2
3
2
O C
molculas
absorbentes
por las que pasa la
HO
OH
O
O
H
C
O
H
luz. Siendo Ley de Beer: A=
c id o d e h id r o a s c r b ic o
HO C H
Bc Siendo el coeficiente de extincin, es
caracterstico
deC H 2 una
sustancia
en
OH
condiciones definidas de longitud de onda,
Las bandas de absorcin uv/visible se deben
c id o d ic e t o g u l n ic o
disolvente y temperatura. En la prctica, el
a transiciones electrnicas en la regin de
coeficiente de extincin medido tambin
200nm a 780nm. La radiacin ultravioleta
depende
de
las
caractersticas
del
(UV) y visible comprende slo una pequea
instrumento utilizado. Por esta razn,
parte del espectro electromagntico, que
normalmente
no
se
utilizan
valores
incluye otras formas de radiacin como radio,
predeterminados del coeficiente de extincin
infrarrojo (IR), csmica y rayos X. Cuando la
para anlisis cuantitativo. En su lugar, se
radiacin interacciona con la materia, pueden
construye una curva de calibracin o curva
ocurrir varios procesos como reflexin,
de trabajo para la sustancia a analizar,
dispersin,
absorbancia,
utilizando una o dos disoluciones patrn con
fluorescencia/fosforescencia
(absorcin
concentraciones conocidas del analito. Para
remisin) y una reaccin fotoqumica
transiciones electrnicas, la diferencia de
(absorbancia y rotura de enlaces).En general,
energa entre los estados fundamentales y
cuando se miden espectros UV-visible, slo
excitados, es relativamente grande. Por
es deseable que ocurra absorbancia. Como
tanto, a temperatura ambiente, es muy
la luz es una forma de energa, la absorcin
probable que todas las molculas estn en
de la luz por la materia causa que aumente el
estado electrnico fundamental. La absorcin
contenido de energa de las molculas (o
y vuelta al estado fundamental, son procesos
tomos).La energa potencial total de una
rpidos y el equilibrio se alcanza muy
molcula, generalmente se representa como
rpidamente. Por consiguiente, la absorcin
la suma de sus energas electrnica,
de luz UV-visible es cuantitativamente muy
vibracional y rotacional. La cantidad de
exacta. La simple relacin lineal entre la
energa que una molcula posee en cada
absorbancia y la concentracin y la relativa
forma no es un continuo, sino una serie de
facilidad de medida de la luz UV-visible, ha
niveles o estados discretos. En algunas
hecho de la espectroscopa UV-visible la
molculas y tomos, los fotones de luz UV y
base de miles de mtodos analticos
visible tienen suficiente energa para causar
cuantitativos. Un espectrofotmetro es un
transiciones entre los diferentes niveles. La
instrumento para medir la transmitancia o
longitud de onda de la luz absorbida es

absorbancia de una muestra, en funcin de la

longitud
de
onda
de
la
radiacin
electromagntica. Los componentes clave de
un espectrofotmetro, son:
Una fuente que genera una banda ancha de
radiacin electromagntica
Un dispositivo de dispersin que selecciona
una longitud de onda particular (o
Ms correctamente, una banda de ondas) de
la radiacin de la fuente
Un rea de muestra
Uno o ms detectores para medir la
intensidad de la radiacin.

Objetivos

Aplicar
la
tcnica
de
espectrofotometra en el anlisis de la
muestra de inters farmacutico.

Palabras claves
Espectrofotometra, paracetamol, soluciones,
absorcin.

Marco terico
La vitamina C, o cido ascrbico, es un
compuesto hidrosoluble de 6 tomos de
carbono relacionado con la glucosa. Su papel
biolgico principal parece ser el de actuar
como cofactor en diversas reacciones
enzimticas que tienen lugar en el
organismo. El cido ascrbico acta como
coenzima de las hidroxilasas de prolina y
lisina, encargadas de hidroxilar la lisina y
prolina en el protocolgeno, modificacin
necesaria para que ste pueda formar los
enlaces cruzados para formar las fibrillas de
colgeno. En este sentido, la vitamina C es
importante para el mantenimiento del tejido
conjuntivo normal, para la curacin de

heridas y para la formacin del hueso, ya que

el tejido seo contiene una matriz orgnica
con colgeno. En su condicin de agente
reductor, el cido ascrbico posee otras
propiedades importantes, que parecen ser no
enzimticas. Por ejemplo, ayuda a la
absorcin del hierro al reducirlo a su estado
ferroso en el estmago; protege la vitamina
A, vitamina E y algunas vitaminas B de la
oxidacin; tambin favorece la utilizacin del
cido flico ayudando a la conversin del
folato en tetrahidrofolato o mediante la
formacin de derivados poliglutamato del
tetrahidrofolato. Finalmente, la vitamina C es
un antioxidante biolgico que protege al
organismo del estrs oxidativo provocado por
las especies oxigeno reactivas.
La mayor parte de sntomas de la carencia
de vitamina C se puede relacionar
directamente con sus papeles metablicos.
Entre los sntomas de carencias leves de
vitamina C se encuentran la facilidad para
producir heridas, debido al incremento de la
fragilidad de los capilares. El escorbuto est
asociado con una disminucin en la
capacidad de curar heridas, osteoporosis,
hemorragias y anemia.
La vitamina C se encuentra principalmente
en alimentos de origen vegetal y puede
presentarse en dos formas qumicas
interconvertibles: cido ascrbico (forma
reducida) y cido dehidroascrbico (forma
oxidada), siendo ambas formas funcionales
biolgicamente y mantenindose en equilibrio
fisiolgico. Si el cido dehidroascrbico es
hidratado
se
transforma
en
cido
dicetogulnico, no activo biolgicamente,
siendo esta transformacin irreversible. Esta
hidratacin ocurre espontneamente en
disolucin neutra o alcalina.

Materiales y reactivos
Tabla#1.
Materiales
Espectrofotom
etro UV
Celdas de
cuarzos
Policial
Matraces
aforado
Probeta
Pipetas
volumtricas
Vasos
qumicos

Cantid
ad
1

Capacid
ad

1cm

1
2

--------100500mL
100mL
10mL

1
1
2

fase acuosa

100250mL

Fase experimental

pasar al volumetrico de 50mL

aforar con el acido oxalico

Resultados
A. Preparacion de la muestra
Pesamos 0,3659g de vitamina C agragamos
acido oxalico al 5% homogenizamos y
llevamos a un matraz de 100mL
1g-------100mL

pesar la vitamina

0,3659gX
aforar en un matraz agregar 50mL de
acido oxalio
extraer una alicuota de 5mL verter en otro
matraz y aforar.
tomar 25ml de la vitamina +diclorofenol
(gota a gota)hasta obtener un color rosado.

X= 365.94mg
365.94mg------100mg
X-----------------10mg
X= 36,594mg
1mg--------1000mg

esperar 2 minutos aadir 25mL de eter en

un embudo de separacin

X------------36,594mg
X=0,0365g
Condensacion

lavar
agregar 5mL de acido
oacalico
lavar nuevamente
agregar 10mL de acido
oxalico

Medimos la absorvancia de las soluciones en

el fotometro a 520nm.

( AM AMBL ) xR
0,095 A0 Ax 50 mcg
x 200=
x 200=1
0,0190 A
( AP APBL )
1mg-------1000mcg
X-----------1000mcg
X=1mg/mL.

Discusion
El AA se clasifica como una vitamina
hidrosoluble, razn por la cual es abundante
en frutas cuyo contenido de agua es superior
al 50 %; esta vitamina se degrada muy
fcilmente por cambios de temperatura,
incidencia de la radiacin y concentracin de
oxgeno. Su extraccin de fuentes naturales
debe realizarse en medio cido y con la
mnima cantidad de radiacin.
Lo primero que se realizo fue Para la
solucin patrn se peso 0.01g de cido
ascrbico se aforo en un matraz de 50mL
con acido oxlico se extrajo una alcuota a
la que se le aadi 50mL de agua.
Despus se peso cierta cantidad de acido
ascrbico se aforo en un matraz al que se le
adiciono 50mL de acido oxlico se extrajo
5mL se aforo nuevamente en un matraz de
100mLseguido de esto en la segunda parte
se tomo 25ml de la vitamina c (acido
ascrbico) se adiciono ? De diclorofenol
(gota a gota) hasta que se tornara de color
rosado, luego se espero aproximadamente
2minutos ara aadirle25mL de ter en un
baln de destilacin, se formaron dos fases
una acuosa y la otra entrica la acuosa se
paso a un volumtrico de 50mL y se aforo
con acido oxlico, la otra fase se lavo y se
agrego 5mLm de acido oxlico nuevamente
se formaron dos fases se lavo el recipiente y
se aadi 10mL de acido oxlico.
En general, cuando se miden espectros UVvisible, slo es deseable que ocurra
absorbancia. Como la luz es una forma de
energa, la absorcin de la luz por la materia
causa que aumente el contenido de energa
de las molculas (o tomos). La energa
potencial
total
de
una
molcula,
generalmente se representa como la suma
de sus energas electrnica, vibracional y
rotacional. La cantidad de energa que una
molcula posee en cada forma no es un
continuo, sino una serie de niveles o estados

discretos. En algunas molculas y tomos,

los fotones de luz UV y visible tienen
suficiente energa para causar transiciones
entre los diferentes niveles. La longitud de
onda de la luz absorbida es aquella que tiene
la energa requerida para mover un electrn
desde un nivel de energa inferior a uno
superior. Generalmente se piensa que
Lambert (1760) formul la primera ecuacin
matemtica sobre este efecto, aunque ahora
parece que se le adelant Bouguer en 1729.
La expresin matemtica es:
T= I/I0=-kb.
Donde Io es la intensidad incidente, I es la
intensidad transmitida, e es la base de los
logaritmos naturales, k es una constante y b
es el paso ptico (normalmente en
centmetros). La ley de Beer es idntica a la
ley de Bouguer, excepto porque est
expresada en trminos de la concentracin.
La cantidad de luz absorbida es proporcional
al nmero de molculas absorbentes por las
que pasa la luz. Siendo Ley de Beer: A= bc
Siendo el coeficiente de extincin, es
caracterstico
de
una
sustancia
en
condiciones definidas de longitud de onda,
disolvente y temperatura. En la prctica, el
coeficiente de extincin medido tambin
depende
de
las
caractersticas
del
instrumento utilizado. Por esta razn,
normalmente
no
se
utilizan
valores
predeterminados del coeficiente de extincin
para anlisis cuantitativo. En su lugar, se
construye una curva de calibracin o curva
de trabajo para la sustancia a analizar,
utilizando una o dos disoluciones patrn con
concentraciones conocidas del analito. Para
transiciones electrnicas, la diferencia de
energa entre los estados fundamentales y
excitados, es relativamente grande. Por
tanto, a temperatura ambiente, es muy
probable que todas las molculas estn en
estado electrnico fundamental. La absorcin
y vuelta al estado fundamental, son procesos
rpidos y el equilibrio se alcanza muy
rpidamente. Por consiguiente, la absorcin
de luz UV-visible es cuantitativamente muy

exacta. La simple relacin lineal entre la

absorbancia y la concentracin y la relativa
facilidad de medida de la luz UV-visible, ha
hecho de la espectroscopa UV-visible la
base de miles de mtodos analticos
cuantitativos.

como va de administracin ms utilizada. La

vitamina C es el trmino genrico para el
cido L-ascrbico y su forma oxidada cido
deshidroascrbico, ambos muestras actividad
de vitamina C. Las dos formas pueden
convertirse con facilidad una en la otra.

Conclusion

BIBLIOGRAFA

El cido ascrbico en estado seco es estable

con el aire. En preparados farmacuticos y
en muchos productos naturales, la vitamina
se oxida por exposicin al aire y a la luz.
Posee un fuerte poder reductor, las
soluciones acuosas se oxidan rpidamente al
aire, la reaccin se exalta en medio alcalino y
en presencia de indicios de metales,
principalmente hierro y cobre. Debe
conservarse en recipientes bien cerrados
protegido de la luz y la humedad. Para su
uso mdico se usa en forma de comprimidos,

Skoog D. Holler j. Nieman T. Principios

de Anlisis
Instrumental,
quinta
edicin.Mc Graw Hill. Espaa. 2001.
Rubinson K. Rubinson J. Anlisis
Instrumental. Pearson educacin, S.A.
2001.
QUAM:
2000.P1.
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EURACHEM/CITAC
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Quantifying Uncertainty in Analytical
Measurement. Second edition.