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}ill.
Eteres corona
e(eres corona son una clase de compuestos sinteticos que 'Ingar una reacci6n con compuestos
a iones metalicos (especialmente cationes de metales alca- . de potasio y dibenzo-3-corona-lO,
formando una envoltura con atomos de oxigeno, a traves de mos de oxigeno, siendo la distancia
cuales se enlazan a elios. Los eteres corona se usan como cata- . la parte exterior del complejo se
disolvente
r.,'IE'.w.n nores de transferencia de fase, porque pueden extraer reactivos
acuosolubles en disolventes no polares, donde puede tener
hidrofoblcos, En el complejo
el K+ esta rodeado de 10 atomedia K-O de 288 pm. S610
encuentra en contacto con el
<.
a) Estructura molecular de dibenzo-30-corona-to, b) Estructura tridimensional de su complejo con K+. [Adaptado de M. A. BUSH Y M. R.
TAUTER,
Complexes
.Crystal
Structures
of
AlkaliMetal
J. Chern. Soc.
Disolvente pure
(eluyente)
-,
solutos Ay B
Empaquelado de columna
(lase estacionaria)
en el disolvente
(lase m6vil)
Figura 23.5
Disco poroso
a)
b)
0)
Representaci6n esquemanca de
una separaci6n cromatoqrafica, EI soluto A, que
tiene mayor afinidad que el soluto B por la fase
estacionaria, permanece mas tlempo en la columna.
CS"K
r6Hs
~
N,
C J.T
6&'-5,
C-SH
P _1016
2+~
+ Pb
N-N
H/
Ditizona
(verde)
(lncoloro)
C,(J?
u,
Complejo metico
(rojo)
La ditizona se usa Mucha en extracciones analiticas, para determinaciones colorimetricas de Lones metalicos y para eliminar trazas
de metales de tampones acuosos.
Para esta Ultima aplicaci6n, un tamp6n acuoso se cxtrae repetidas veces con
disoluci6n verde de ditizona en CHCl). Mientras
siguen extrayendose iones metalicos del tamp6n. la fase organica se
tine de tojo. Cuando los cxtractos son verdes. ya se han eliminado
las Ultimas trazas de iones metalicos. En la figura 23.4, vemos que a
un pH dado &610 se pueden extra.er ciertos iones metalicos.
una
.,I
soluto A desciende por la columna mas lentamente que el soluto B, y emerge por 1a
despues del soluto B. De ese modo se -separa una mezcla en sus componeotes por
tografia.
~
En cromatografia la Case m6vil (el disolvente que desciende a traves d~ la .
un lfquido 0 uo gas. La fase estacionaria (la que se encuentra fija en el IOtenor) es .-,,'%''':-,:11':;
malmente un lfquido viscoso enlazado quimicamente a las paredes interiores de 1!D
capilar 0 a la superficie de las partfculas s6lidas empaquetadas dentro de la columna.
nativamente, como se muestra en la figura 23.5, las mismas partfculas s6lidas puedeD ftI
fase estacionaria. En cualquier caso, el reparto de solutes entre las fases m6vil y
ria da lugar a la separaci6n_
EI fluido que entra por la columna se llama eluyente. EI fluido que sale por el
de la columna se llama eluato:
eluyente
entra
---+ COLUMNA
---+ eluato
sale
~6n.
. Las columnas pueden ser empaquetadas 0 tubulares abiertas. Una columna empase llena con partfculas que son la fase estacionaria, como se ve en la figura 23.5.
colurona de tuba abierto es un capilar hueco estrecho cuyas paredes interiores estan
~"'-,I,,"'r'lJ1l)con la fase estacionaria.
EI soluto
Secci6n transversal
de una columna
tubular abierta
se adsorbe
en la superficie de
-e>----
la lase estacionaria
EI soluto se disuelve
en la lase Ifquida con
..
Cromatografia
la
de rsparto
Las rnoleculas
pequeiias penetran
en los poros de las
partlculas
Resina de intercambio
anionieo. 8610 puede
lijar a aniones
Cromatografia
~ '4t
/~
0_-
de exclusion molecular
II
._6
"
y-\",'\.
'
Cromatogralia
G>
moleculas
seeliminan
de afinidad
simple mente
a la
,,I
La cromatografia
una
La cromatografia
de reparto utiliza una fase estacionaria liquida, en forma de
pelfcula de alto punto de ebullicion sobre la superficie de un sopone solido, que en
matografia de gases es, tipicamente, la cara interna de una columna de CrC.m~lt~:rafratt~
sflice. EI soluto esta en equilibrio entre el lfquido estacionario y la fase rnovil, que
cromatografia de gases el gas que fluye.
A. J. P. Martin y R. L. M. Singe recibieron el premio Nobel en 1952 por su trabajo pionero sobre
cromatograffa de reparto Ifquidolfquido en
1941.
Cromatografia
de intercambio '>jonico. En este tipo de cromatografia
existen
como -S03
0 cationes como -N(CH3)j, covalentemente
unidos ala fase eSlllCJO"i.*~
solida, que de ordinario es una resina. Los iones en disoluci6n de carga
atrafdos a la fase estacionaria por fuerzas electrostaticas. La fase m6vil es un
Cromatografia
de exclusion molecular. Esta tecnica, tambien llamada cr(J.nultol"IIa~~
mtracion por gel 0 de permeacion por gel, separa moleculas por su tamafio, Las
culas de mayor tamafio pasan mas rapidamente que las de menor tamano. A
de ofras formas de cromatografia, no hay una interacci6n atractiva entre la fase
narias y el soluto en el caso ideal de una exclusion molecular. En su Iugar. la fase
lfquida 0 gaseosa pasa a traves del gel poroso. Los poros son bastante pequeOOs
excluir a los solutos grandes, pero no a los pequeiios. Las moleculas grandes
largo sin entrar en los poros. Las molecules pequeiias tardan mas tiempo en pasar
ves de la columna porque penetran dentro del gel, y por consiguiente deben
mas volumen antes de abandonar la columna.
Cromatografia
de afinidad. Esta forma de cromatografia, que es la mas selectiva,
interacciones especfficas entre una clase de moleculas de solute y una segunda molleCll""~.
que esta unida covalentemente
(inmovilizada) en la fase estacionaria. Por C.JCI:np~~
molecula inmovilizada podria ser un anticuerpo unido a una protein a ilptprrnl""""
pasa a traves de la columna una mezcla que eontiene un millar de protein as, 5610
tefna que reacciona con el anticuerpo se fija a la columna. Despues de lavar los
solutos de la columna, se libera .la proteina deseada modificando el pH 0 la fuerza
La velocidad con que la fase m6vil pasa a !raves de una columna cromatogriifica se
expresar como caudal 0 como velocidad lineal de flujo. Consideremos un
cromatografia de liquidos, en el que la columna tiene un diiimetro de 0,60 cm ,._....,.."'"
0,30 em) y la fase m6vil ocupa el 20% del volumen de la columna. Cada centflDl~~
longitud de la columna tiene un volumen de ('Trr2 X longitud) = '!T(0,30 cm)2(1
0,283 mL, de los cuaies el 20% (= 0,0565 mL) es fase m6vil (disolvente). El
este caso 0,30 mUmin, nos dice cuantos mL de- disolvente atraviesan la columna
minuto. La velocidad lineal de nujo nos dice cuantos centimetros recorre el ,1;." ........ ~~
dentro de la columna en un minuto. Como 1 em de columna contiene 0,05.9 5 mL de
m6vil, 0,30 mL ocuparian (0,30 mL)/(0,056 5 mL/cm) = 5,3 cm de columna. La
lineal de flujo que corresponde a 0,30 mUmin es 5,3 em/min.
El cromatog.rama
Los solutos eluidos de una columna croma((')griifica se observan con alguno de los
detectores que se describen en los capitulos siguientes,. Un cromatograma
es la
tacion de la-respuesta del detector en funci6n del tiempo de eludon. La figura 23.7
tra]o que podria observarse cuando una mezcla de octano, nonano y una muestra
cida se separan por cromat6grafia de gases, que se describe en el capitulo "iuuiClnlC\~~
tiempo de _retenc,ion, lp de un componente es el tiempo que transcurre desde la
de una mezcla en la columna hasta que ese componente llega a1 detector. La .
correspondiente,
volumen de retencion,
Vr, es el volumen de fase m6vil necesanl
eluir un soluto deterrninado de la columna.
La fase m6vil no retenida atraviesa la columna en el min~o
tiempo posi~le, ue
nado como tm El tiempo de retencion ajustado de un soluto es la difereoCUl en
t;-------I
k--~------~------------__
t
Tiempo de
CH4
23.7
Figura
Cromatograma de gases esquematico que muestra c6mo se miden los tiempos
de retenci6n.
in ecci6n
Tiempo
--+
hemp<> que tarda un soluto en atravesar toda la columna y el que emplea un disolvente no
de retencion ajustado:
(23.14)
Ct
t'r2
=-
(23.15)
t:,
1'(2 > I." y por tanto Ct > 1. Cuanto mayor es la retencion relariva, mayor es la sepat.1Cwn
entre los dos componentes. La retencion relativa es bastante independiente del cauy por consiguiente se puede usar como una ayuda para identificar los picos cuando se
~~~'jlIVllm;,~uvariaciones de caudal.
Para cada pico de un cromatograma se define el factor de capacidad, k', como
(23.16)
de capacidad:
Cuantomas tiempo permanece un componente en la columna, mayor es su factor de capaPara controlar el funcionamieftlo de una columna determinada, una buena practica
medir periodicamente el factor de capacidad de un patron, el numero de platos (ecua23.28) y Ia asirnetrfa del pico (figura 23.13). Los cambios de estos parametres reflejan
degradacion de la columna.
.
--
Parametres de retendon
inyectaen un cromat6grafo de gases una mezcla de benceno, tolueno y metano. El metadio un pico muy agudo a los 42 segundos, mientras que el benceno tarda 251 segundos
en aparecer, y el tolueno 333 segundos. Hallar el tiempo de retencion ajustado y el factor
1
de capacidad de cada solute y la retencion relativa. .
.:WCION
Benceno: t;.
t, - tm
251 - 42
t: = 333 -
209 s
Tolueno:
Tolueno: k'
42
291 s
tr -
= ---tm
tm
251 - 42
42
5,0
333 - 42
42
6,9
La retenci6n
333 - 42
r;(benceno)
251 - 42
a=
La definici6n
de capacidad
dada en la ecuaci6n
I 39
'
23.16 es equivalente
a dccir
k'
tiempo
Veamos por que es asf, Si el soluto pasa todo su tiempo en la fase rnovil ~ nuda en I~ fa...:
estacionaria, se eluira, por definici6n, en un tiempo tJ11' Haciendo I,. = I", en la CI:UaL"il)n
23.16, resulta k' = 0, porque el soluto no esta nada en la fase estacionaria. SU[longamm que
el soluto pasa el mismo tiempo en la fase estacionaria que en la fase mcn il. En esc <':<1\0. el
tiempo de retenci6n sera t, = 2tm, Y k' = (2tm - tm)/tm = I. Si el soluto pasa tre-, vece-,m;i,
tiempo en ta fase estacionaria que en la fase m6vil, t, = 4 1m Y k' = (41111 - 1",)/1", = J
Si el soluto pasa tres veces mas tiempo en la fase estacionaria que en la rase Illli\ II.
habra el triple de moles de soluto en la fase estacionaria que en la fa\c 1110\"ilen un
momenta dado. EI cociente de la ecuaci6n 23.17 es equivalente a:
Tiempo
Tiempo
coeficiente
de particlon = K = _"
Cm
t;
k'
Vs
K-'
Vm
G(
Ec.23.16
t, - tm
I;
tm
Inl
con el coeficiente de reparto y 10, \ lllt.'lmene, de lak' cc K, la retencion relativa tarnbicn ,e puede exprc-
sar como
Fundamento f{sico de fa cromatograf{a.
Cuanto mayor es el cociente de coelicientes
de reparto entre la lase m6vil y la lase estacionaria, mayor es la separaci6n entre dos
componentes de una mezcla.
Retenci6n
relativa:
,U'" coelicienlt"
r:'
En el ejemplo anterior, el gas metano dio un pico agudo a 42 s, mientras que cl bencc~lO
cis6 251 s. La columna cromamgn'ifica tubular abierta tiene un diametro intenDr de 2=,0f.l r'
d 'pc,(l
Y esm recubierta en su eara interior con una capa de fase estacionaria de 1.0 fJ.i11 c~, . I
.
.
InO\I.
Estimar el coeficiente de reparto (K = C/Cm) del benceno entre la fase eSlncl(1lwna ~
y calcular la fracci6n de tiempo que el benceno pasa en la fase m6vil.
\!ecesitamos
ri(li'.
______Pared de la columna
----24<'
.m
J'
de la columna
= 1TI'T
Area de lu seccion
a las areas relativas de las secciotrun- \ cr-ales. porque cada fase se extiende por todo el tubo. Por tanto. VJV1I1 = (7.8 X
It!: jJ.IllC)/1 U)3 X 10" urn ') = 0.016 I. En el ejemplo anterior se vio que el factor de capa,'IJaJ del I .cnceno es
Ill"
t, -
till
= --
251 - 42
42
tm
5,0
V,
KVI11
=?
5,0
K(0,OI61)
K = 310
=?
Para hall.u' la fraccion de tiempo que pasa en la fase movil, se utili zan las ecuaciones 23.16
12J17:
A'
t, -
t;
till
=---=-
t, = k'tlll
'111
till
fN: mov il c,
k'
\'r)Il/ll/en
de retencion,
5,0
+ I
0,17
tJ~lcnnin;jdo de la columna.
\iJ/IIl1/ell de retencion:
V, =
tr'lIv
Del'rditlOlrio. las cromatograffas se hacen con fines anolificos (para separar e iclentificar
mediI' Ip\ componentes de una mezcla) 0 prepamtil'os (para purificar una cantidad signilicativ;t de un componente de una mezcla). La cromatograffa analftica normal mente se
reilliza t'llil columnas Im'gas y estrechas. Para conseguir una buena separacion en cromuIllgraffa preparativa. se Llsan columnas mas gruesas, que permiten mayores cargas
I,
Iflgura 23.8).
IN.]
Ecuacion de
escalado:
Masa mayor
Masa menor
rnasa,
(el simbolo
ex:
mantener constante
flujo:
a')
la velocidad lineal de
cabal,
2 mg
O,SOcm
radio
" de columna =
mayor
radio,
significa es 'proporcional
20 mg
masa2 = (rad~02)2
1,58 cm
masa,
Dos faetores determinan ~l~grado con que se pueden separar los compuestos por cromll~;;,
grafia. Uno es la diferencia de tiempos de eluci6n de los respectivos picos: cuanto mas
tantes sean, mejor sera la separaci6n. El otro factor es la anchura de los picos: cuanto
anchos sean los picos, peor sera la separaei6n. Este apartado explica e6mo medir 18
cia de una separaei6n.
Resoludon
1
Al pasar p~r la columna cromatografica, los solutos tienden a difundirse segun una
siana, de desviaci6n estandar o (figura 23.9). Cuanto mas tiempo pasa el soluto
ell
\I
1\
I
.. 'I.
Punto de inflexi6n (Ia
poreion de la curva de
mayor pendiente)
~-----
1=0
Tiempo 0 volumen
W=
4(; ~----_.,
(inyeccion)
Figura 23. 9
_____________
_J
2<1---1
1-3<1-1
Resoluci6n
=0,50
Resoluci6n
=0,75
\
\
I
\
/
/
I---
4<1-----1
-----
6<1----+-1
Besolucton
Resolucion
= 1,50
= 1,00
"iii
,,:::
OJ
C/l
'"
Tiempo-
Tiempo-
rayadas.
.:Tt.....
m."" mas ancha se hace la banda. Las formas habituales de medir la anchura de banda
(I) la anchura Win, medida a una altura igual a a1 mitad de la altura del pico, y (2) la
en la base w, medida entre los cortes de las tangentes trazadas en los flancos de
pendiente. A partir de la ecuaci6n 4-3 de un pico gaussiano
= 2,35 a
En
y W =
cromatograffa
se puede demostrar
que
4a.
se define la resolucton entre dos picos como
.,
Resolucion
D.tr
=-
/1Vr
= --
wm
wm
0,589Llt,
= ---~
(23.23)
wll2m
00nde
Resolucion
Illr
=-
wm
424 - 407
~(13
+ 16)
1,17
}6D
/Columna
Principio
-u._~
------...:..::,!
_--=+"-'-----!
_!_
_I
/\
Perfil de concentraci6n
Fig ra 23.11
u
Ensanchamiento de una banda, que es estrecha al principio, a medida
viesa una columna crornatoqraftca,
.
que
Difusi6n
..~
r~
Definicion de
coeficiente de difusion:
.
Flujo
(mOl)
m2.s
"'" J
de
-D dx
La
constante de proporcionalidad
(D) es el coeficiente de difusion, y el signa
indica que el flujo se produce de la region de mayor concentracion a la de menor COIIeIIiIISfi(.
traci6n. En la tabla 23.1 figuran algunos coeficientes de difusion representatives. La
sion en liquidos es 1()4 veces menor que la difusion en gases. Las macromoleculas, co;lIO~~;'~i
ribonucleasa y la albumina, se difunden a una velocidad de 10 100 veces menor'l-'::'r.':...,.,.,I',
moleculas pequeiias.
Concentraci6n
alta
Concentracf6n
baja
(Tabla 23.1
I Coeficlentes
Soluto
Flujo=
H2O
Sacarosa
Glicina
moles por m2
porsegundo
CHPH
Ribonucleasa
(MF 13 7(0)
-.
Posici6n = x
Concentraci6n
Figura 23.12
=c
Albiimina de suero
(MF 65 000)
x+ dx
c-dc
12
CCI4
N2
CS2(g)
2(g)
H+
OH-
uNa+
K+
CI-
I-
de difusi6n representativos
Disolvente
H2O
H2O
H2O
H20' H20 (293 K)
H20 (293 K)
Hexane
.Heptano
CC14
Aire (293 K)
Aire (273 K)
H2O
H2O
H2O
H2O
H2O
H2O
H2O
a 298 K
Coeficiente de difusion
2,3 x 10-9
0,52 X 10-9
1,1 X 10-9
10-9
' 1,6
0,12
x 10-9
0,059 X 10-9
4,0
10-9
10-9
3,2 X
3,4 X 10-9
1,0 X 10-5
10-5
1,8
9,3
5,3
1,0
1,3
2,0
2,0
2,0
X 10-9
X 10-9
10-9
X 10-9
X 10-9
X 10-9
X 10-9
Si un .luto ernpieza a pasar por la columna en forma de una capa infinitarnenre estreJc /II Ill' ,It:" por unidad de area de secci6n transversal de la columna. y se dispersa por
\ "lnisnll1 de difusi6n a rnedida que atraviesa la columna. el perfil gaussiano de la banda
nl(p'~cde(.k,LTibir mediante la ecuaci6n
'h,1
,(
i/)(iJlcll(/lIII~'l/t()
,r(l/llll/(lgl'tlil(,(1
de la ba~,eI{/
par d!fuSIOI1:
vandar de la banda:
(J
V2iSi
,._
L.! c(uaciLin 23,26 nos dice que la desviaci6n
JIfw,i<in vale
lineal II, (Ill"
-ru.
a2
= Hx
u;
ii,
t
Altura de plato
== H
111<11
Uv
u.
= caudal (volumen/tiempo)
= velocidad
La eapat.:idad de una columna para separar componentes de una mezcJa rnejora al disminuir la altura de plato. Decimos que Ulla columna eficaz tiene mas platos te6ricos que
una colUllllla ineticaz, Los distintos solutos que pasan a traves de una misma columna tienl'n lIifel'l.:ntcs alturas de plato, porque tienen diferentes coeficientes de difusi6n. Las altur:1\lie pIal" I:!ncromatograffa de gases valen entre 0, I Y I mm, en cromatograffa de JfquiJo, de alIa dicacia (HPLC) valen aproximadamente
10 J.Lm, yen electroforesis capilar,
nl.:nosde I J.L1ll.
La altura de plato es la longitud a2/x, donde a es la desviacion estandar de la banda
~au~,ii1nlllit.: la tigura 23.9, y x es la distancia recorrida a traves de la columna. Para un
,oIUIOqUt' ,ale de una columna de longitud L. el numero de platos te6ricos (N) en toda la
cnlumna e, la longitud L dividida por la altura de plato:
L
Lx
N=-=-=-=H
a1
a1
16U
IV1
\lIlIIero
16~~ =
w-
f~?)
a-
donde I, r, el tiempo de retencion del pico y IV es la anchura en la base en la figura 23.9 ell
IlIlidade.1 de fiempo. Si usamos la anchura a la mitad de altura en lugar de la anchura en la
base. re"lilla
\'Iimero de platos en una columna:
5,55t~
N=-wT/2
t,
TIempo_
SOlUCION
N
16t2
_r
w2
=N =
132
1,57 X 1()4
12,2m
16.4072
-1,-57-X-l()4-
0,78 rom
N='
41,7(t/wo
AlB
donde
wO,1
1)2
1,25
B)
..
reso IuClon
= -VN( "Y 4
ex
\IN
ex
V[
VN(ex-ex-=4
f)(
1)
resoluci6n
Resoluci6n
+k2J<., )
entre dos
,/
exes la retenci6n
relativa de 10&
k2
Vi fiB1l1R,!jr~.
ex,
_________________________________
- _J
00
o
o
2
3
Phe-Ds
23.14
Figura
Separaci6n de L-fenilalanina
0,5 mM y t-fenilanatlna-D,
0,5 mM despues de
repetidos ciclos en un par de eolumnas Hypersil
C8 por eromatografia Ifquida (25 em x 4,6 mm),
eluidas con una mezela 10:90 aeetonitrilo:agua
como eluyente.
EI aqua contenia
Na2S04
25 mM y 0,1% de acldo trifluoroacetlco . [Tomado
de K. LAN Y J. W. JORGENSEN, -Pressure-mduced
Retention Variations in Reversed-F'hase AlternatePumping Recycle Chromatography, Anal. Chern.,
1998, 70,2773.)
Numero de pasos
5
5
10
15
10
La ecuaci6n 23.30 nos dice tambien que la resoluci6n aumenta al aumentar (1, y asimismo al aumentar el factor k Para cambiar la retenci6n relativa, (1, hay que cambiar la
f1Se estacionaria en cromatografia de gases 0 bien la fase estacionaria y la fase m6vil en
cromatografia de lfquidos. Recordemos que (1 esta relacionada con los coeficientes ge
repruto de los dos solutos en las dos fases .(ecua~i6n 23.20). Por eso al cambiar la naturafaa de las fases se cambia (1. Un aumento del factor de capacidad, k2" tambien determina
aumento de resoluci6n. Aumentar el factor de capacidad es equivalente a aumentar la
frac.ci6nde tiempo que pasa un soluto en la fase estacionaria, Hay un limite practice de
aumento del factor de capacidad, porque los tiempos de retencion se hacen demasiado
A1!rnnldesy los picos demasiado anchos. En la tabla 23.2 se resumen las ecuaciones
uneortaates en cromatografia.
2.
mas
Dos solutes tienen una retenci6n relativa (1 = 1,08 y tienen los factores de capacidad k~ =
Yk2 =; 5,4. El mimero de platos te6ricos es practicamente el mismo para ambos comi,Cuantos platos se necesitan
lucian de 3>O? Si la altura de plato es 0,20 mm, i,que longitud debe tener la columna para
IIIlaresoluci6n de 1,5?
Usando la ecuaci6n 23.30 resulta:
Resolucion
.
1.5
VN(I,08
- 1)(
5,4 )
4
1,08
1 + 5,2
=> N
una cromatografia
La varianza es aditiva:
(23.31)
La varianza
estandar,
es aditiva,
pero no la desviaci6n
(Tabla 23.2
I Resumen
de ecuaciones cromatograficas
Magnitud
/ Coeficiente
vTiempo
Ecuacion
de reparto
de retenci6n
Volumen de retenci6n
V Factor
Parametres
de capacidad
Cs = Concentraci6n
Cm = Concentraci6n
ajustado
Vr = t.-u;
k' = t;ltm = KV.rV
relativa
Niimero de platos
t;2
kz
K2
t;J
k;.
KJ
a=-=-=-
16t;
5.55t;
N=-=-w2
(j2
Altura de plato
Los subindices
H=-=-
1 y 2 se refieren ados
solutes
'
w = Anchura
wIn
en la base
a rnitad de altura
wJn = Anchura
L
rr = Desviaci6n
estandar deJabanda
Resoluci6n
Resoluci6n
At,
=-
Wm
AV,
= --
Wm
wm
Resoluci6n
VN (--)
a-I
= -4
a
k2 )
( --I+k:n
= Anchura
Niimero de platos
= Retencion
'kz = Factor de
a
k:n =
relativa
deteccion:
(J'2
inyecci6n
(J'2
detector
---
(At)2
12
a::
Una banda que sale de una columna a un caudal de 1,35 mUmin tiene una aochura
de altura de 16,3 segundos. La muestra se aplic6 en forma de un pequefio segrne_n~
volumen de 0,30 mL, Y el volumen del detector es 0,20 mL. Hallar las varianzas 10
sail"
das en la inyecci6n y en la detecci6n. l,CuaJ sena la anchura a la mitad de altura si el en
chamiento ocurriese s610 en la columna?
.
ill)
La figura 23.9 nos dice que la anchura a mitad de altura vale win = 2,35a. Por
la varianza total observada es
a~bs =
WI/?)2
( 2,35
(163)2
2,;5
48,11 82
,....,......
es
'~~
a2
inyeccidn
11(1
'6
myecc. n
12
13 3
= _'_
= 148182
2
12
'
+2
a detector
'*
6,58
mL/min)
acolumna = 5,17 s
EI peor ensanchamiento de banda que se puede dar se debe al gran espacio muerto que
pueden tener algunas columnas preparadas en el propio laboratorio, en cuyo caso cada
gota que sale de la columna se rnezcla con un volumen significativo de eluato que ya
wste en el espacio muerto de la columna. Para minimizar el ensanchamiento de banda, se
minimizar los espacios muertos y la longitud de los tubos. Las rnuestras se deben
i!tl.'..'1"~unifonnemente en forma de una zona estrecha, y haeerlos entrar en la columna
de mezclar con el eluyente,
B
u~
7'
Caminos
multiples
Difusi6n
longitudinal
CUx_
,.
(23.33)
<,
Tiernpo
de equilibro
donde u..c es la velocidad lineal de flujo y A, B Y C son constantes para una columna y una
estacionaria dadas. Al cambiar la columna y la fase estacionaria, cambian los valores
A, B y C. La ecuacion de van Deemter nos dice que existen mecanismos de ensanchallliento de banda que son proporcionales a la velocidad de flujo, otros inversamente prorV"-LV"i:U\;:S
a la velocidad de flujo, y finalmente otros independientes
de la velocidad
13).
En las- columnas ernpaquetadas, todos estos terminos contribuyen al ensanchamiento
de banda. En columnas tubulares abiertas, el termino de camino multiple (A) es 0, de
lIlanera que el ancho de banda disrninuye y la resolucion aumenta. En electroforesis capiJar (capitulo 26), tanto A como C tienden a 0, reduciendose asf la altura de plato a valores
!lOr debajo de una micra y permitiendo separaciones extraordinarias.
lase
Columnas empaquetadas: A, B, C
0
Columnas tubulares abiertas: A = 0
Electroforesis capilar: A = C = 0
10
9
8
, ,
A+ -
Ux
Deemter
+ Cu.
_-
--y-- -
->
'1'Ei'i
Dilusi6n
/Iongitudlnal
------
01 the Parameters
Equation-,
J. Chem.
cd.,
1982, 59,290.J
Difusi6n longitudinal
Si se aplicase una fina banda de soluto, en forma de disco, en el centro de la colum.~.
banda se ensancharfa lentamente a medida que las molecules difunden desde la
mayor concentracion dentro de Ia banda hacia regiones de menor concentraci6n en
des de la misma. Este ensanchamiento por difusi6n de una banda se llama difusiOn
tudinaI, porque la difusi6n tiene lugar a 10 largo del eje de la columna, y
.--~''':.
toda la banda pasa a 10 largo de la columna por el flujo del disolvente (figura 23.16).
EI termino Btu; de la ecuaci6n 23.33 se debe a la difusi6n longitudinal.
rapido es el flujo lineal, menos tiempo pasa en la columna, y menor en:,anch,unieneUI~lk~1
produce por difusi6n. La ecuaci6n 23.26 nos dice que la varianza debida a la
l'CI~.:~1j
(J'2 =
2D t
m
(J'2
2DmL
=--
2Dm
HD=-=--=L
Ux
B
Ux
pasar
Direcci6n de paso
altura
de flujo.
It uansjerenci_:!.de masa,
Cs
C=
2k'
d2
3(k'
1)2 Ds
1 + 6k'
llk'2
24(k'
1)2
(23.35a)
r2
Dm
(23.35b)
donde k' es el factor de capacidad, d es el espesor de la fase estacionaria y D. es el coeficiente de difusion del soluto en la fase estacionaria. AI disminuir el grosor de la fase estacionaria (tf) disminuye la altura de plato debida a transferencia de masa, y aumenta la eficacia, debido a que el soluto puede difundirse mas rapidamente desde las partes mas
II'OJfuociasde la fase estaeionaria haeia la fase movil. AI disminuir el radio de la columna
(r) se reduce la altura de plato, porque disminuye la distancia que debe reeorrer el soluto
por difusion hasta alcanzar la fase estacionaria.
La altura de plato debida a la transferencia de masa disminuye tambien aumentando la
temperatura, porque aumenta el coeficiente de difusion del soluto en la fase estacionaria. En
figura 23.18, un aumento de temperatura permite que la velocidad lineal de flujo aumente
en un factor de 5 ntientras se mantiene eonstante la resolucion. Esto es posible porque a
ttmperatura elevada aumenta la velocidad de transferencia de masa entre las fases.
3
4
2
0,4
0,6
0,8
Equilibrio lento
(CUx)
(23.35)
0,2
Anchura de banda
es
l00C
5mLlmin
Fase
estacionaria
4
30C
1 mLlmin
369
Tiemoo (min)
12
Anchura de banda
despuas de un
cierto recorrido
nempo
__
eua.-
Figura 23.19
Anteriormente
Division, 1968).]
difusi6n turbulenta.
El termino A de la ecuaci6n de van Deemter (ecuaci6n 23.33) se debe.a multiples ~"'_ ., ..,,~
sobre las cuales no. existe una teorfa clara, La figura 23.19 es una explicaci6n gr8tica
una de ellas. Dado. que algunos caminos de flujo son mas largos que otros, las mollecu.
que entran en la columna a un mismo tiempo por la izquierda se eluyen a diferentes
PDS por la derecha. Por simplicidad, se engloban diversos fenomenos en la constame A
Ia ecuaci6n.
Comparada con columnas empaquetadas,
columnas tubulares abiertas pueden dar:
las
1. Mayor resoluci6n
ex ---
area
longitud
mas largas.
2. Menores alturas de plato, 10 que significa
mejor resoluci6n.
Longitud de columna, L
Velocidad lineal de gas
Altura de plato para el oleato de metilD
FactDr de capacidad, k', para el oleato de metilo
Platos te6ricos, N
Resoluci6n del estearatD de metilo y del oleato de metilo
Tiempo de retenci6n del Dleato de metilD
2,4
8 cmls
0,73 mm
58,6
3290
1,5
29,8 min
;ia
mas
OH
I
-Si - 0-
Cs = concentraci6n
estacionaria
Cm = concentraci6n
La sobrecarga produce picos que van au mentando gradualmente, y acaban de forma abrup-
tao
Se presentan largas colas cuando algunos puntas retienen el soluto con mas fuerza que otros.
OR
I
Si -
+ (Cli:lhSiNHSi(CH3)3
Hexametildisilacina
Superficie protegida
(23.36)
~I~
/
Tiempo
t-K:~~~~te
-s
K aumenta
Figura 23.20
Isotermas comunes
forma de
las band as que resultan en cromatograffa.