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UNIVERSIDAD CATLICA ANDRS BELLO GUAYANA

Escuela de Ingeniera Civil
Manual de Prcticas Operativas
Laboratorio Ingeniera Sanitaria
CDIGO
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USO DEL MICROSCOPIO OPTICO

Manual del microscopio ptico ( para uso del

laboratorio de Ingeniera Sanitaria de la UCABGuayana)

El microscopio ptico
El microscopio normal u ptico est formado por dos lentes. El objeto que se quiere
estudiar se coloca en la platina. La luz procedente del objeto penetra en el
microscopio por el objetivo, que desempea la funcin de una lupa; es decir,
produce una imagen muy ampliada del objeto. Esta imagen se modifica mediante
otro sistema de lentes, el ocular. El aumento final conseguido es igual al producto
de los aumentos del objetivo por los del ocular. En el microscopio ptico este
aumento tiene un lmite, que se denomina "poder de resolucin" y que es
aproximadamente de 1200 aumentos.
Recomendaciones para principiantes:
Debes colocar tu microscopio en una mesa fija, de modo tal que puedas sentarte
con comodidad para ver el ocular sin estirarte o apoyarte.
Trata que la mesa sea lo suficientemente grande como para colocar sobre ella todo
el material que necesites para trabajar. Debes colocar tu microscopio en una mesa
fija.
El objeto que se desea examinar (lquidos, plantas, insectos, clulas animales o
vegetales, etc.) debe colocarse en un portaobjetos, que es una lamina de vidrio de 1
mm de espesor y a continuacin se cubre con un cubreobjetos, un cuadrado de 2 cm
de
lado
o
un
circulo
con
esa
medida
de
dimetro.
Practica hasta que tengas la certeza de saber para qu lado debes mover la perilla de
enfoque, para hacer subir o bajar las lentes. En algunos microscopios, al mover el
tornillo toda la platina sobe o baja, en vez de hacerlo el puente.

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USO DEL MICROSCOPIO OPTICO

Para comenzar, selecciona siempre la lente de menor aumento que te permite ver
mejor el objeto y encontrar fcilmente la parte que ms te interesa observar.
Coloca el portaobjeto sobre la platina de manera tal que la parte que quieres
observar se encuentre bajo la lente. Utiliza los broches para fijar el portaobjeto en su
sitio.
Observa desde un costado la platina y mueve la perilla de enfoque para acercar la
lente, luego mira a travs del microscopio y sube las lentes girando la perilla de
enfoque hasta que el objeto entre en foco y su imagen se vuelva ntida y clara.
Ten cuidado !!! No bajes la lente mientras estas mirando por el microscopio.
Podrs golpear el portaobjeto y romperlo o romper la lente.

Partes del microscopio ptico

1 * Ocular: lente situada cerca del ojo del observador. Ampla la imagen del objetivo.
2 * Objetivo: lente situada cerca de la preparacin. Ampla la imagen de sta.
3 * Condensador: lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparacin.
4 * Diafragma: regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
5 * Foco: dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

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6 * Lente ocular: Capta y amplia la imagen formada en los objetivos.

7 * Tubo: es una cmara oscura unida al brazo mediante una cremallera.
8 * Revlver: Es un sistema que coge los objetivos, y que rota para utilizar un objetivo u
otro.
9 * Tornillos macro y micromtrico: Son tornillos de enfoque, mueven la platina hacia
arriba y hacia abajo. El macromtrico lo hace de forma rpida y el micromtrico de forma
lenta. Llevan incorporado un mando de bloqueo que fija la platina a una determinada altura.
10 * Platina: Es una plataforma horizontal con un orificio central, sobre el que se coloca la
preparacin, que permite el paso de los rayos procedentes de la fuente de iluminacin
situada por debajo. Dos pinzas sirven para retener el portaobjetos sobre la platina y un
sistema de cremallera guiado por dos tornillos de desplazamiento permite mover la
preparacin de delante hacia atrs o de izquierda a derecha y viceversa. En la parte
posterior de uno de los laterales se encuentra un nonius que permite fijar las coordenadas de
cualquier campo ptico; de esta forma se puede acudir a l cuando interesa.

Manejo del microscopio ptico

1. Colocar el objetivo de menor aumento en posicin de empleo y bajar la platina
completamente. Si el microscopio se recogi correctamente en el uso anterior, ya debera
estar en esas condiciones.
2. Colocar la preparacin sobre la platina sujetndola con las pinzas metlicas.
3. Comenzar la observacin con el objetivo de 4x (ya est en posicin) o colocar el de 10
aumentos (10x) si la preparacin es de bacterias.
4. Para realizar el enfoque:
a. Acercar al mximo la lente del objetivo a la preparacin, empleando el tornillo
macromtrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a travs del ocular, ya

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que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparacin pudindose daar

alguno de ellos o ambos.
b. Mirando, ahora s, a travs de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de
la preparacin con el macromtrico y, cuando se observe algo ntido la muestra,
girar el micromtrico hasta obtener un enfoque fino.
5. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debera estar ya casi enfocada y suele ser

suficiente con mover un poco el micromtrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de
objetivo se perdi por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo
anterior y repetir la operacin desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca
distancia de la preparacin y por ello es fcil que ocurran dos tipos de percances:
incrustarlo en la preparacin si se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con
aceite de inmersin si se observa una preparacin que ya se enfoc con el objetivo
de inmersin. Nota: Por qu se utiliza aceite de inmersin cuando se emplea el objetivo
de
mayor
aumento
de
un
microscopio
ptico
(100x)?
Respuesta:
a) Los objetivos de mayor aumento, tienen una distancia focal muy pequea y adems la
primera lente del objetivo es de pequeo dimetro.
b) Los rayos que desde la muestra se dirigen al objetivo atraviesan el vidrio del cubre
objeto y al pasar al aire se separan de la normal. Algunos rayos incluso sufren reflexin
total en la interface vidrio-aire
c) Solo llega al microscopio una pequea parte de la luz que parte de la muestra, con el
problema que conlleva para la visin.
d) Al intercalar, entre el objetivo y el cubre objeto una gota de aceite de cedro, de ndice de
refraccin casi igual al vidrio, los rayos emergentes ya no se apartan de la normal, sino que
continan su camino sin desviacin, consiguiendo as que una mayor cantidad de luz llegue
al
objetivo,
mejorando
notablemente
la
visin.
"Fsica
General".
Joaqun
Catal
de
Alemany.
Valencia
1961
Antonio Gros. Ceuta (Espaa)

6. Empleo del objetivo de inmersin:

a. Bajar totalmente la platina.

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b. Subir totalmente el condensador para ver claramente el crculo de luz que nos
indica la zona que se va a visualizar y donde habr que echar el aceite.
c. Girar el revlver hacia el objetivo de inmersin dejndolo a medio camino entre
ste y el de x40.
d. Colocar una gota mnima de aceite de inmersin sobre el crculo de luz.
e. Terminar de girar suavemente el revlver hasta la posicin del objetivo de
inmersin.
f. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente
toca la gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se
adosara a la lente.
g. Enfocar cuidadosamente con el micromtrico. La distancia de trabajo entre el
objetivo de inmersin y la preparacin es mnima, aun menor que con el de 40x por
lo que el riesgo de accidente es muy grande.
h. Una vez se haya puesto aceite de inmersin sobre la preparacin, ya no se puede
volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se manchara de aceite. Por tanto,
si desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y repetir la operacin desde el
paso 3.
i. Una vez finalizada la observacin de la preparacin se baja la platina y se coloca
el objetivo de menor aumento girando el revlver. En este momento ya se puede
retirar la preparacin de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de
inmersin en posicin de observacin.
j. Limpiar el objetivo de inmersin con cuidado empleando un papel especial para
ptica. Comprobar tambin que el objetivo 40x est perfectamente limpio.

Mantenimiento y precauciones
1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posicin de
observacin, asegurarse de que la parte mecnica de la platina no sobresale del borde de la
misma y dejarlo cubierto con su funda.

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2. Cuando no se est utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda
para evitar que se ensucien y daen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se
debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo.
3. Nunca hay que tocar los lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente
con un papel de filtro o, mejor, con un papel de ptica.
4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se est utilizando el microscopio.
5. Despus de utilizar el objetivo de inmersin, hay que limpiar el aceite que queda en el
objetivo con pauelos especiales para ptica o con papel de filtro (menos recomendable).
En cualquier caso se pasar el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el
aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de
alcohol-acetona (7:3) o xilol . No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si se
aplican estos disolventes en exceso se pueden daar las lentes y su sujecin.
6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macromtrico, micromtrico,
platina, revlver y condensador).
7. El cambio de objetivo se hace girando el revlver y dirigiendo siempre la mirada a la
preparacin para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo
agarrndolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se est observando a travs del
ocular.
8. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algn lquido,
secarlo con un pao. Si se mancha de aceite, limpiarla con un pao humedecido en xilol.
9. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesin prctica
y, al acabar el curso, encargar a un tcnico un ajuste y revisin general de los mismos.

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Ejemplo de aplicacin

Unstained cells of E. coli viewed by phase microscopy. about 1000X magnification

Caractersticas del microscopio Optima XSZ-207(Laboratorio de Ingeniera Sanitaria
UCAB-Guayana)

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USO DEL MICROSCOPIO OPTICO

Cabeza binocular tipo Seidentopf con inclinacin a 45, rotatorio 360. Portaoculares con
distancia interpupilar variable entre 55 - 57 mm.
Oculares 1 par 10xWF.
Objetivos acromticos 4x/N.A 0,10, 10x/N.A 0,25, 40x(r)/N.A 0,65 y 100x(r)/N.A1.25
Ocular / objetivo

4X

10X

40X

100X

10X

40X

100X

400X

1000X

Bibliografa:

Manual de laboratorio de microbiologa bsica. Autores:

Bayona, Arias, Serrano, Poutoi, Muoz. Pontificia Universidad
Javeriana. Bogot, Colombia

Manual de prcticas de Ingeniera Sanitarias. Asapchi.

Universidad Catlica Andrs Bello, Caracas , Venezuela

Preparado: Ing. Antonio Serijas; UCAB-Guayana