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Dpto. de Biologa
Estudio de la mitosis
Introduccin.
La divisin celular es un proceso por el cual a partir de una clula madre se producen dos
clulas hijas que gentica, estructural y funcionalmente son iguales entre s e iguales a la
propia clula madre. Ello se debe a que han recibido, excepto en el caso de procesos
anormales, la misma informacin gentica de la clula madre y, por lo general en la
mayora de los organismos la misma cantidad de citoplasma y orgnulos.
Este fenmeno se produce tanto en procariotas como en eucariotas. En los procariotas y
eucariotas unicelulares o de vida libre la divisin celular es el proceso por el cual se
propaga la informacin gentica y aumenta el nmero de individuos de la poblacin,
mientras que en los organismos pluricelulares la divisin celular es esencial para el
desarrollo del organismo a partir del zigoto y para la reparacin de las clulas que han
muerto por desgaste o por lesiones ocurridas en los tejidos.
Existen diferencias entre la divisin celular de procariotas y eucariotas derivadas de la
distinta estructura y de la diferente cantidad de ADN que poseen estos tipos de clulas. En
las clulas eucariotas el proceso de divisin es ms complejo debido a la existencia de un
ncleo en el que se almacena la cromatina condensada en forma de cromosomas que, en
algunos casos, pueden ser muy numerosos.
El mecanismo utilizado para la divisin celular se denomina mitosis, aunque es el
mecanismo que afecta al material gentico. Normalmente este mecanismo se contina
con la divisin del citoplasma denominada citocinesis.
El objeto de la presente prctica es identificar las clulas que se encuentran en mitosis y
las distintas fases de sta mediante la tincin y observacin de meristemos de raz de
cebolla. Una vez identificadas las fases de la mitosis, se puede calcular el ndice mittico y
la distribucin porcentual de cada una de las fases mitticas de meristemos de raz de
cebolla crecidos en diferentes condiciones. Con estos datos realizaremos un informe a
modo de trabajo de investigacin explicando la metodologa utilizada, los objetivos,
resultados y comentarios al respecto.
Ciclo celular.
El ciclo celular es una secuencia regular y repetitiva de crecimiento y divisin celulares
que sufren todas las clulas. La duracin de este ciclo es variable y depende
del tipo celular, del organismo y de factores externos como la temperatura, factores de
crecimiento, nutrientes y toxinas.
El ciclo celular consta de cinco fases: G1, S, G2, mitosis y citocinesis (Figura 1). Las tres
primeras fases se agrupan en lo que se denomina interfase durante la
cual la clula se prepara para realizar la divisin celular formada por las dos ltimas fases.
La funcin de las fases de la interfase quedan resumidas de la siguiente forma:
Fase G1.- Durante esta fase se desarrolla una alta actividad bioqumica cumpliendo con
las distintas funciones que la clula presente en el organismo. Normalmente, en un
organismo pluricelular, las clulas, que no se dividen normalmente salvo en presencia de
ciertos factores de crecimiento, se enquistan en una subfase denominada G0. La fase G0
indica nicamente que las clulas no se encuentran en un ciclo contnuo de crecimiento y
duplicacin. En un organismo diploide, la cantidad de ADN en el ncleo es de 2n.
Fase S.- Cuando las clulas se encuentran en un ciclo continuo de crecimiento y divisin
celular o reciben una seal extracelular adecuada, pasan a duplicar la cantidad de ADN y
sintetizar una serie de protenas encargadas de la compactacin del ADN. Por lo tanto, al
final de la fase S, una clula de un organismo diploide ha pasado a tener una dotacin
doble de ADN. No se puede decir que sea tetraploide (4n) sino que sigue siendo diploide
pero con cada uno de los cromosomas duplicados, las indicaremos como 4c.
Fase G2.- Las clulas han terminado la sntesis de ADN (4c) y se preparan para sufrir el
complejo proceso de la divisin celular. En esta fase se sintetizan las protenas necesarias
para llevar a cabo la mitosis y se concluye la duplicacin y separacin del centriolo en
clulas animales.
Tincin de Feulgen
II.
Tincin orcena-cido actico
1. Corte los ltimos 10mm de cada raz (entre 10:00 a.m. y 12:00 m.d.) y colquelos
en la fijador de tejido Carnoy durante 24 horas).
2. Enjuague los pices de cebolla (fijados) en agua destilada por 30 segundos.
3. Coloque las races en un tubo Ependorf que contenga unos 2mL de HCl 1% por 10
min. (esto se hace para romper la pared celular).
4. Mientras transcurre el tiempo anterior, corte y conserve la porcin del pice de raz
que posea un tejido blanquecino (casi 2-3 mm del extremo de la raz) y deseche el
resto.
5. Transferir los pices a agua destilada y dejarlos all 30 segundos (enjuague).
6. Coloque el tejido sobre un portaobjetos e inmediatamente agregue dos gotas de
aceto-orcena* sobre ste.
7. Coloque un cubreobjetos sobre el tejido y caliente la muestra suavemente por 1
minuto, por medio de toques intermitentes sobre la superficie de una plancha de
calentamiento o (durante este tiempo vigile que el tejido permanece humedecido
con el colorante, no permita que hierva ni que se seque; agregue ms colorante si
es necesario). Esta etapa es opcional (el calentamiento intensifica la tincin).
8. Coloque un trozo de papel toalla sobre el cubreobjetos; presione fuerte y
cuidadosamente por medio de un borrador de lpiz (esta tcnica se llama
"extendido por aplastamiento" o "squash" ). Recuerde que mientras est ms
aplastado, las clulas se separarn ms unas de las otras y se encontrarn en el
mismo plano, distinguindose mejor las distintas etapas de mitosis.
Bibliografa
G1,
G1,
G1,
G1,
G2, S, M y citocinesis
M, G2, S y citocinesis
S,, M, G2 y citocinesis
S, G2,M y citocinesis
Cromosomas hermanos
cromosomas homlogos
comosomasa sexuales
cromtidas hermanas