ANLISIS DE LA DISTRIBUCIN DE LA MUESTRA EN EL GRADIENTE

Para el anlisis se puede utilizar varios mtodos como es Inspeccin visual,

anlisis flouromtricos y espectrofotomtricos, asi por ejemplo, las bandas
mitocondriales tienen un color caf que las distingue y el DNA en gradientes de
cloruro de cesio y con bromuro de etidio presenta un color rosa. Estas bandas
pueden ser removidas utilizando una jeringa o una pipeta para su anlisis
posterior. En otros casos, las partculas absorben o dispersan la luz, as que, su
posicin puede ser determinada por medicin de la densidad ptica en un
espectrofotmetro.
Asi mismo existen problemas asociados con la medida directa pueden
eliminarse utilizando anlisis colorimtrico o fluorimtrico para diferentes tipos
de macromolculas. Es posible utilizar marcadores para fraccionamiento
subcelular para poder distinguir su banda despus de una centrifugacin.
ANLISIS RADIOQUMICOS DE MUESTRAS
Los anlisis radioisotpicos son convenientes para analizar un gran nmero de
partculas biolgicas. Este mtodo tiene la ventaja de que las fracciones de
inters pueden ser identificadas y recuperadas despus de contarse para
procedimientos analticos posteriores, sin embargo, el uso de estos istopos
exponen al usuario a la radiacin.
APLICACIONES
Cromatografa de Precipitacin Centrfuga
Las muestras de protenas son expuestas a un incremento gradual de
concentracin de sulfato de amonio y precipitado a lo largo del conducto,
entonces se inicia la elusin cromatogrfica disminuyendo gradualmente la
concentracin de sulfato de amonio en el gradiente que causa que las
protenas se disuelvan y precipiten a travs del canal
Este nuevo mtodo elimina varias complicaciones tales como prdida de la
muestra por absorcin y desactivacin causada por el soporte slido y el
arrastre de los precipitados finos a travs de la columna cromatogrfica.
MICROSCOPIO DE POLARIZACIN CENTRFUGA
permite utilizar luz polarizada y observar estructuras finas dinmicas en clulas
vivas que estn expuestas a aproximadamente 11 500 veces la fuerza de
gravedad de la tierra. El espcimen se coloca en un rotor conectado a un
motor, la imagen es apreciada en un microscopio externo y aunque el objeto
est girando, la imagen es capturada por una cmara CCD que esta
sincronizada al rotor de la centrfuga, la imagen tiene una resolucin menor a

una micra y es detectada con una sensibilidad de retardo menor que un

nanmetro.
Separacin de DNA, RNA y Protenas de Ncleos de Fibroblastos de
Hamster.
Los ncleos purificados fueron suspendidos en 6 M de cloruro de guanidino y
10 mM EDTA (pH =
7), despus de este tratamiento las uniones entre cidos nucleicos y protenas
son disociadas. La centrifugacin se llevo a cabo a 35 000 r.p.m. a 20 C por 40
hrs. Tres bandas muy bien separadas fueron colectadas. Los cidos nucleicos
fueron monitoreados por absorcin ultravioleta y las protenas fueron
detectadas por tincin con fluorescena.
SEPARACIN DE DNA EN BASE A LA COMPOSICIN GC CON USO DE
BAMD
El BAMD interacta principalmente con regiones ricas de GC del DNA, la
formacin del complejo BAMD-DNA ocurre bajo vigorosa agitacin de las
soluciones en 0.1 M de sulfato de sodio que contiene 5 mM de buffer de borato
de sodio pH 9.2.
SEPARACIN DE DNA NATIVO Y DESNATURALIZADO CON GRADIENTES
DE DENSIDAD DE TRICLOROACETATO DE RUBIDIO
La separacin de DNA nativo y desnaturalizado fue tan eficiente que uno puede
separar molculas con regiones nicas entrelazadas (hbridos de DNA
imperfectos) de perfectas molculas de doble cadena; tambin es posible
separar molculas circulares intactas de molculas con rupturas en una de las
cadenas o en base a sus diferentes propiedades de desnaturalizacin.
Fraccionamiento de RNA
Si es necesario separar un rango completo de molculas de RNA desde s20,w
= 4S a s20,w = 28S (1:7) en una corrida de centrifugacin se puede utilizar un
gradiente abrupto con una diferencia de concentracin de 25 %, por ejemplo
10 35 % de sacarosa a la mxima velocidad del rotor SW 40 Ti.
SEPARACIN DE DNA PLASMDICO EN ROTORES DE TUBO VERTICAL
Un ejemplo claro de esta separacin esta en un cultivos de E. coli en donde los
cidos nuclecos fueron separados utilizando un procedimiento alcalino. Se
llev a cabo una centrifugacin a 5 000 r.p.m. a 4 0 C en una centrifuga J-6
usando un rotor JS-5.2 con varios adaptadores.
FRACCIONAMIENTO CELULAR POR CENTRIFUGACIN DIFERENCIAL

La centrifugacin es una tcnica que no slo se utiliza en el laboratorio, sino

que tambin se usa a nivel industrial. Por ejemplo es utilizada para purificar y
recuperar aceites, fluidos hidrulicos y enfriadores ahorrando miles de dlares
a la industria. Otra aplicacin es en la industria de alimentos en donde las
centrfugas son utilizadas en muchas operaciones. Por ejemplo en la extraccin
de protenas comestibles de productos vegetales y animales; en la industria
farmacutica cada vez tienen ms auge en procesos de control automatizados.
Las impurezas del caf, t y jugos de fruta son eliminadas con la ayuda de
centrfugas.