INSTITUTO TECNOLGICO SUPERIOR DE CALKIN EN EL

ESTADO DE CAMPECHE
I N G E N I E R A B I O Q U M ICA
QUINTO SEMESTRE

PRCTICA: OBSERVACIN DE LAS FASES DE LA MITOSIS

EN LA RAZ DE CEBOLLA
DOCENTE: IVN ALFREDO
ESTRADA MOTA

CINTHYA DEL CARMEN CHAN DZIB

4867
FARIDI CANDELARIA MARTIN CANCHE4862
JOS DEL CARMEN ORTEGN DZIB4889
PEDRO PABLO PECH NOH4912
JENNIFER ABIGAIL UC CENTENO5014
GRUPO: 5 A

CALKINI, CAMPECHE A 22 DE NOVIEMBRE DEL 2016

Introduccin

En el siguiente documento se presenta una prctica de la observacin de las fases de la mitosis

en la raz de cebolla. El proceso de reproduccin celular conocido con el nombre de mitosis,
puede ser estudiado eligiendo un material constituido por clulas que se hallen en continua
divisin.1

Esta condicin la renen los meristemos terminales o primarios, tales como los que se encuentran
en

el

pice

de

las

races.1

Aunque el corte de la raz de cebolla captura muchas clulas en diferentes fases del ciclo celular,
se tubo presente que el ciclo es un proceso contino observado seguidamente en el microscopio.

De forma tal que los cientficos han dividido el proceso en 5 fases, cada una caracterizada por
importantes eventos, pero estas divisiones son arbitrarias: Interface, Profase, Metafase, Anafase
y Telofase.3

De manera que Esta prctica tuvo como objetivo utilizar unas sencillas tcnicas para poder
determinar que fases de la mitosis se observan en las muestras realizadas.

Sabiendo que el resultado esencial de la mitosis es la continuidad de la informacin hereditaria

de la clula madre en cada una de las dos clulas hijas.4
Dicha prctica se realiz mediante un manual que el profesor nos proporcion, este consista en
varios pasos que nos guiaban a su realizacin y la obtencin de resultados satisfactorios.

[1]

ndice

INTRODUCCIN...1

OBJETIVOS DE LAPRCTICA...3

MARCO TERICO4

DIAGRAMA EXPERIMENTAL..12

MATERIALES...13

PROCEDIMIENTO..13

RESULTADOS.15

DISCUSIN..16

CONCLUSIN.18

BIBLIOGRAFA19

[2]

OBJETIVO DE LA PRCTICA.

Objetivo general.

Observar las diferentes fases de la mitosis en un tejido en crecimiento, de clulas

existentes en el meristemo apical de la raz de la cebolla.

Objetivos especficos.

[3]

Promover el crecimiento de races de cebolla sumergidas en agua.

Localizar el meristemo de la raz.

Efectuar el proceso de tincin.

Efectuar el proceso de squash.

MarcoTerio

La mitosis es la divisin del ncleo de una clula eucarionte en dos ncleos idnticos entre
s y con respecto al ncleo parental. El proceso de la mitosis, si bien es continuo, puede
verse como una serie de eventos (profase, prometafase, metafase, anafase y telofase)
durante el cual las cromtides hermanas se separan en los cromosomas hijos, alrededor
de los cuales vuelven a formarse los ncleos. Una vez que se han formado dos ncleos
idnticos, la clula se divide en dos por citocinesis.5

Fig. 1- La mitosis como divisin de una clula dando como resultado dos clulas hijas.5

En 1882, un anatomista alemn llamado Walther Flemming desarroll tinciones que le

permitieron observar, por primera vez, el comportamiento de los cromosomas durante la
mitosis y la citocinesis (de hecho, Flemming acu los trminos mitosis y cromatina).
Durante el periodo entre una divisin celular y la siguiente a Flemming le pareci que la
clula simplemente estaba creciendo de tamao. Pero ahora sabemos que muchos
sucesos crticos tienen lugar durante esta etapa de la vida de una clula. 6
La mitosis es hermosamente precisa. Da como resultado dos ncleos idnticos entre s y
con el ncleo parental en cuanto a la constitucin de los cromosomas y, por lo tanto, en la
constitucin gentica. Luego, los dos ncleos deben aislarse en clulas separadas, lo cual
requiere la divisin del citoplasma. 7
Despus de la citocinesis, ambas clulas hijas contienen todos los componentes de una
clula completa. La mitosis asegura la distribucin precisa de los cromosomas. Por el
contrario, los orgnulos como ribosomas, mitocondrias y cloroplastos, no necesitan ser
distribuidos en forma equivalente entre las clulas hijas en tanto algunos de ellos estn
presentes en ambas clulas; de acuerdo con ello, no existe un mecanismo de una precisin

[4]

comparable con la de la mitosis para proporcionar igual cantidad de orgnulos en las clulas
hijas. La distribucin desigual de componentes citoplasmticos durante el desarrollo puede
tener importancia funcional para las dos nuevas clulas.5
Fases del ciclo celular
La mitosis es solo una parte del ciclo celular (Fig. 2). De hecho, la fase mittica (M), que
incluye la mitosis como la citocinesis es, por lo general, la parte ms corta del ciclo celular.
La divisin celular mittica se alterna con una etapa mucho ms larga llamada Interfase,
que con frecuencia abarca cerca del 90% del ciclo celular. Durante la interfase la clula
crece y copia sus cromosomas en preparacin para la divisin celular. La interfase puede
dividirse en subfases: La fase G1 (primer intervalo), la fase S (sntesis) y la fase G2
(Segundo intervalo). Durante las tres subfases. La clula crece y produce protenas y
orgnulos citoplasmticos como las mitocondrias y el retculo endoplasmtico. 6

Fig. 2. El ciclo celular. En una clula en proceso de divisin, la fase mittica (M) se alterna con la interfase o
perodo de crecimiento. La primera parte de la interfase llamada G, va segunda de la fase S,cuando los
cromosomas se duplican, la ltima parte de la interfase se llama G2. En la fase M, la mitosis divide el ncleo y
distribuye sus cromosomas de manera equilibrada y la citocinesis divide el citoplasma para producir dos clulas
hijas.6

Profase l
Durante Ia profase l de la meiosis l se producen acontecimientos citolgicos y genticos
decisivos. En la profase l suelen registrarse intercambios entre cromosomas homlogos por

[5]

entrecruzamiento (crossing over). El entrecruzamiento, un trmino introducido por Morgan

y Carttel en 1912, es un proceso citolgico complejo por el cual algunas partes de los
cromosomas de origen materno y paterno intercambian segmentos de DNA. Esto genera
nuevas combinaciones de segmentos cromosmicos (recombinacin gentica).7
-Los cromosomas se enrollan ms y pueden ser vistos al microscopio.
-Cada cromosoma duplicado se ve como un par de cromtidas hermanas unidas por el
duplicado, pero no separado centrmeros.
-El nuclolo desaparece durante la profase.
-En el citoplasma, el huso mittico, consistente de microtbulos y otras protenas, formados
entre los dos pares de centriolos, al tiempo que migran a los polos de la clula.
- La membrana nuclear desaparece al final de la profase. Esto da la seal para el inicio de
una subfase llamada prometafase.
-En la prometafase, el huso entra en el rea del ncleo. Estructuras especializadas
llamadas cinetcoros se forman en los centrmeros de los cromosomas; ciertos
microtbulos del huso microtbules cinetocricos pegados a los cinetcoros.7

Fig. 3 Profase. Los cromosomas se hacen visibles, el nuclolo desaparece, el huso mittico se forma y la
membrana nuclear desaparece.7

[6]

Fig. 4 Los cromosomas. Se condensan y la membrana nuclear desaparece. 7

Metafase
La metafase es la fase de la mitosis y de la meiosis que sucede despus de la profase en
donde esta pierde la envoltura y aparecen los microtbulos del huso acromtico (tambin
llamado meitico) o mittico.
Este alineamiento equilibrado en la lnea media del huso se debe a las fuerzas iguales y
opuestas que se generan por los cinetocoros hermanos. El nombre "metafase" proviene del
griego que significa "despus". 8
- Los centrosomas estn en los polos opuestos de la clula.
-Los cromosomas, estn altamente enrollados y condensados, y se arreglan en un plano
equidistante de los dos polos en la placa de la metafase.
- Para cada cromosoma, los quinetcoros de las cromtidas hermanas estn en los polos
opuestos y cada uno est unido a un microtbulo cinetocrico viniendo de cada polo.7

Fig.5 Metafase. Los cromosomas se ordenan en la placa de la metafase y se unen al ya completamente

formado huso. 7

[7]

Fig. 6 Los cromosomas, gruesos y enrollados se alinean en el centro de la clula en la placa de la metafase.
Las fibras del huso estn unidas a los cromosomas.7

Anafase
Anafase, del griego (arriba) y (fase), es una fase de la mitosis y meiosis en
una clula

eucariota,

en

la

que

los

cromosomas duplicados

son

separados.

Las cromtidas son entonces desplazadas a polos opuestos de la clula en divisin por
el huso mittico o meitico, para que cada clula hija herede una copia de cada
cromosoma. La anafase es tambin cuando los cromosomas alcanzan su nivel mximo de
condensacin. 8
-La anafase comienza cuando los centrmeros duplicados de cada par de las cromtidas
hermanas se separan, y las nuevas cromosomas hermanas se van moviendo a los polos
opuestos de la clula, debido a la accin de huso.
- Dependiendo de donde est localizado el centrmero a lo largo del cromosoma, una forma
caracterstica aparece durante el movimiento del cromosoma. Se observa una forma
de V o J.
- Al final de la anafase, un juego completo de cromosomas se agrupa en cada polo de la
clula. 7

[8]

Fig. 7 Metafase. Las cromtidas hermanas se separan, y las nuevas cromosomas hermanas se mueven a los
polos opuestos de la clula.7

Fig. 8 Los cromosomas. Se han separado y se mueven hacia los polos.7

Telofase.
La telofase (del griego , que significa "finales") es la reversin de los procesos que
tuvieron lugar durante la profase y prometafase. Es decir, todo vuelve al principio y se repite
el proceso. 5
Mientras las fibras del huso se dividen formndose la famosa llamada mona lisa alrededor
de los cromosomas, una nueva membrana nuclear, dentro del cual los cromosomas se
encargan de originar los nuevos ncleos. 8
- Los juegos de cromosomas se agrupan en los dos polos.
-Los cromosomas empiezan a desenrollarse y eventualmente asumen el aspecto extendido
caracterstico de la interfase.
- Una membrana nuclear se vuelve a formar alrededor de cada juego de cromosomas, el
huso desaparece y se forma el nuclolo. La divisin nuclear por mitosis est completa en
este punto.
- En la citoquinsis, la divisin del citoplasma, usualmente est en progreso antes de que
la divisin nuclear se complete. En las clulas animales, la citoquinsis involucra a la
formacin de una hendidura o surco resultante de la divisin de la clula en dos.7

[9]

Fig. 9. Telofase. Los juegos de cromosomas se agrupan en los polos opuestos, la membrana nuclear se vuelve
a formar alrededor de cada juego y la citoquinsis (divisin del citiplasma) sigue generalmente. 7

Fig. 10 Los cromosomas en la telofase, estn en los polos y son ms difusos. La membrana nuclear se vuelve
a formar. El citoplasma se divide.

Tejidos del crecimiento o meristemos

Otra gran diferencia entre Ios animales y los vegetales se encuentra en su sistema de
crecimiento. Mientras que en los animales cada rgano crece a partir de clulas de sus
propios tejidos hasta alcanzar un tamao determinado, en los vegetales todos los tejidos
originan a partir de tejidos concretos llamados meristemos. Adems, los vegetales crecen
constantemente, aunque existe lmite en su tamao caracterstico de cada especie. A este
fenmeno se le denomina crecimiento indeterminado. No obstante, algunos rganos de las
plantas, como las hojas, alcanzan un tamao mximo, es decir, su crecimiento es
determinado, como les ocurre a los animales.

Las clulas de los meristemos estn en

constante divisin, por lo que apenas llegan a tener pared celular.

[10]

Fig. 11 Tejido meristemtico de la cebolla. Clulas en mitosis, es un proceso que ocurre en el ncleo de las
clulas eucariotas y que precede inmediatamente a la divisin celular, consistente en el reparto equitativo del
material hereditario (ADN) caracterstico. 5

Tipos de meristemos
-Meristemos apicales. Se localizan en el extremo de las races, tallos y en sus
ramificaciones. Producen un crecimiento primario o en longitud. Tambin se pueden
encontrar otros tipos de meristemos primarios, llamados intercalares. Que se localizan en
los nudos y entrenudos del tallo. 5
- Meristemos laterales. Producen un crecimiento secundario o en grosor. Se disponen como
un cilindro hueco entre otros tejidos y hacen aumentar el dimetro del tallo y de la raz. 5

Figura 12.- Tipos de meristemos, Meristemos apicales: Los primeros meristemos en aparecer durante el
desarrollo del cuerpo vegetativo de una planta vascular estn localizados en la punta de tallos y races. Debido
a su localizacin, estos meristemos son llamados meristemos apicales. Meristemos laterales: Son los
responsables del crecimiento radial (secundario). Dan lugar a xilema, floema y parnquima secundario
(cmbium) y a parnquima cortical y suber (felgeno).5

[11]

DIAGRAMA EXPERIMENTAL
OBSERVACION DE LAS FASES DE LA MITOSIS EN RAIZ DE CEBOLLA

promover el
crecimiento
de raz.

1.- CEBOLLA
Cortar y
colocar en
caja Petri.

2.- Raz de la cebolla.

Aclarar con
vinagre

Calentar 3
veces.

4.- Races aclaradas.

Agregar
orceina

Reposar.

Calentar 3
veces hasta
ebullicin.

5.- Races teidas con

orceina.
Cortar los
meristemo
s

6.- Meristemo
Colocar en
porta objetos

Realizar
Squash

7.-Observar
microscopio

FIN

[12]

al

MATERIALES
Tabla 1.- Materiales, Reactivos y equipos empleados.

Reactivos

Materiales

Equipos

Orceina

Vidrio de reloj de 12 cm de Microscopio

dimetro.

ptico.

Agua destilada

Base de bistur con hoja.

Mechero de llama

Vinagre de cocina

Portaobjetos.

binocular

Cubreobjetos.
Pinza de diseccin

con

dientes.
Papel filtro.
Caja de cerillos.
Raicillas de cebolla.

Procedimiento para la observacin de la mitosis de la raz de cebolla.

1.- Se coloc un bulbo de cebolla (al que previamente se le eliminaron las races secas)
sobre un recipiente (se procur que no sea sumergido por completo), para conseguir races
en crecimiento. Se llen el vaso con agua hasta que toco superficialmente la zona donde
crecieron las raicillas. Se dej reposar por 8 das.
2.- Se cortaron las races a ms de un 1 cm con el bistur, sin perder la punta (meristemo)
y se tomaron las raicillas con unas pinzas, se colocaron en un vidrio de reloj.
3.- Se aclararon las races con 6 mL de vinagre casero blanco de alcohol de caa (al 5%
de acidez expresado como cido actico metabisulfito), por medio de una pipeta Pasteur,
se coloc el cido en las races.
4.- Previamente se encendi el mechero y se calent suavemente las raicillas 3 veces en
el vidrio de reloj, hasta la emisin de vapores, evitando la ebullicin.
5.- Se mantuvo las raicillas cubiertas durante unos minutos, aadiendo vinagre si se
evapora del todo.

[13]

6.- Se elimin el vinagre, aadiendo orcena, y se calentaron las raicillas, manteniendo las
stas cubiertas por el colorante durante unos minutos, se aada colorante si se evapora
del todo.
7.- Se calentaron las raicillas hasta ebullicin 2-3 veces, se cortaron los ltimos 2 o 3 mm
de la parte del pice (ubicando el meristemo).
8.- Un meristemo se coloc en el portaobjetos y se realiz el squash o aplastamiento con
ayuda de un cubreobjetos y papel filtro. Para ello, el meristemo se cubri con el
cubreobjetos y con pedazo de papel de filtro doblado se presion con el dedo pulgar la
preparacin para aplastar el tejido y eliminar el exceso de colorante. En cualquier caso, se
evit que el cubreobjetos se deslizara sobre el portaobjetos en el curso de la presin, y se
consigui una monocapa de clulas para que la luz pase a travs de ella.
9.- Se observ al microscopio. Al principio con un aumento pequeo, para localizar las
clulas meristemticas mejor teidas y en un solo plano. Luego, con mayor aumento, tratar
de identificar clulas en cada una de las fases mitticas.

[14]

Resultados
A travs de esta prctica realizada se obtuvo como resultado la apreciacin visual de la
mitosis, en el meristemo de una raz de cebolla, cuya base se mantuvo en contacto con el
agua durante 4 5 das, nos proporcion una abundante cantidad de raicillas jvenes, todas
ellas teidas con orcena muy apropiadas para la obtencin de muestras destinadas a la
observacin de las figuras de la mitosis.
como se puede observar en la figura:

A)

B)

C)

D)

Fig. 13 Clulas en mitosis. A) Se observa el primer aspecto del meristemo a travs del microscopio a 4x, se
aprecia la fuerte tincin del meristemo con un poco de la clula un tanto menos visible, con tiras de fibra
encontradas en el tallo. B) Se observan estructuras de la clula a 10x en el microscopio, se puede ver parte
del ncleo de manera difusa. C) Es la clula observada a 40x a travs del microscopio, se aprecian varias
clulas juntas y parte del ncleo en cada una de ellas. D) Se observa el meristemo a 100x en el microscopio,
se puede apreciar ampliamente las clulas, se aprecia el ncleo en cada una de ellas, sobresale por ser la
parte resaltada en rojo por la tincin.

[15]

DISCUSIN

En esta prctica, realizamos ms que nada las diferentes observaciones que se le hicieron
a las distintas muestras de las raicillas, para poder escoger la mejor muestra y obtener
buenos resultados y observar de manera clara la fase de la mitosis en los meristemos de
las races de la cebolla. De acuerdo a los resultados se observ como primer aspecto la
clula con un objetivo de 10x, con el objetivo 40x se apreci un acercamiento ms grande
de la clula y la dispersin de ellas por todo el campo que abarca el microscopio y su ncleo
que se observa de manera difusa, en los objetivos oculares de 100x se observaron
claramente las clulas, en excepcin de las fases de la mitosis.
Con base a nuestros resultados y el motivo de no observar las fases de la mitosis se debi
a la incorrecta forma del procedimiento de aclaramiento de raz; al momento de calentar las
raicillas con el vinagre se realiz ms de tres veces, en algunos casos se dej ebullir y a la
mala ejecucin de la tcnica del squash; ya que no se le aplico la presin adecuada para el
respectivo rompimiento del meristemo.
El aclaramiento de raz con vinagre nos sirve para ensuavisar los meristemos de la raz de
cebolla y as obtener una tincin profunda ya que al momento de aadir orceina se tie
favorablemente para la observacin de distintas fases de divisin celular.
En la prctica MITOSIS EN CLULAS MERISTEMTICAS PRIMARIAS DE RAZ
DE CEBOLLA, nos indica que, para obtener buenos resultados, Se cortan los pices de
las raicillas (unos 2 mm) y se los colocan en una solucin de cido actico al 45%, se
calienta hasta ebullicin, se deja enfriar y se repite la operacin. De esta manera las raicillas
se ponen bastante transparentes. Seguidamente colocamos el material sobre un
portaobjetos, en el extremo del mismo y hacemos un squash, esto es colocar sobre el
material un cubreobjetos y envolver con servilleta de papel luego apoyar en portaobjetos
sobre una superficie plana y con el pulgar hacer presin sobre el lugar donde est el
cubreobjetos, presionar lo ms que se pueda para que se disgregue el material, hecho esto
se despega el cubreobjetos con cuidado tratando que quede la mayor parte del material
quede en el portaobjetos, el cubreobjetos que siempre queda con material se puede volver
a realizar la operacin en el portaobjetos un poco ms arriba de donde la hicimos la primera
vez Se deja secar al aire y se procede a teir. Para la observacin se coloca una gota de
vaselina lquida sobre la muestra extendindola bien. Se observa con lente panormica de
10X y luego con 40x cuando localizamos una imagen mittica.9
En la prctica ESTUDIO DE LA MITOSIS se emple la tcnica del squash la cual consiste
en cubrir la preparacin con un cubre objetos. Se deja caer sobre la muestra tapada el
[16]

borrador de un lpiz o el mango de una pinza de diseccin, de modo que la preparacin se

extienda debajo del cubre objetos (ver figura 14). Se debe sostener el cubre objeto por el
borde, para evitar el desplazamiento de lmina al momento de dejar caer el lpiz o la aguja
de diseccin. Se coloca la lmina dentro de una toalla doblada de papel absorbente. Se
elimina el exceso de colorante, tocando con cuidado el rea alrededor del cubre objetos
(ver figura 15-a), y se procede a realizar el squash, presionando suavemente con el pulgar,
por encima del papel, el cubre objetos (ver figura 15-b), evitando el desplazamiento y
ruptura del mismo.10

Fig. 14 Colocacin del cubre objetos y

dispersin de la muestra10

Fig. 15 Tcnica del squash. Se indica el modo de realizar

el aplastamiento.10

De acuerdo a los resultados obtenidos el equipo sugiere que para practicas futuras se
emplee las mismas tcnicas de aclaramiento de raz utilizadas en la prctica MITOSIS EN
CLULAS MERISTEMTICAS PRIMARIAS DE RAZ DE CEBOLLA y de igual forma
utilizar las mismas tcnicas de squash empleadas en la prctica ESTUDIO DE LA
MITOSIS, con el fin de obtener buenos resultados.9, 10

[17]

Conclusiones.

Se concluye que se observaron los ncleos de las clulas del meristemo, pero no se cumpli
el objetivo de la prctica que consista en Observar las diferentes fases de la mitosis en un
tejido en crecimiento, de clulas existentes en el meristemo apical de la raz de la cebolla.

[18]

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

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