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RESUMEN
Los anlisis llevados a cabo en las uvas permiten determinar el potencial fenlico disponible,
si bien la tcnica de vinificacin ser lo que finalmente establezca el contenido fenlico de los
vinos. Segn los resultados obtenidos, el potencial fenlico de las muestras de uva
procedentes del viedo VR, en el punto de recogida de madurez, es mayor que el de las
muestras procedentes del viedo VT. No obstante, el menor contenido en flavanoles de las
primeras podra conducir a vinos con menor astringencia. Las muestras recogidas en el
segundo punto de muestreo en ambos viedos se caracterizan por una prdida de material
fenlico, marcada por el importante descenso en el contenido en antocianos. El
comportamiento desde el punto de vista fenlico de las muestras de uva recogidas en madurez
en el viedo VR es muy prximo al comportamiento de las muestras de uva recogidas en
sobremadurez en el viedo VT.
El perfil antocinico y la eficacia del efecto de la copigmentacin se revelan de gran
importancia a la hora de definir las caractersticas cromticas de los vinos. As, las muestras
de vino obtenidas partir de las uvas VRM presentan mayor contenido en antocianos, en
concordancia con el mayor potencial antocinico observado en las uvas; pero la cromaticidad
(cantidad de color) de los mismos es menor de lo que caba esperar de acuerdo con este
contenido. Esto se pone especialmente de manifiesto en las medidas tericas de cromaticidad
que corresponderan a los vinos en ausencia de copigmentacin. La elevada tasa de
copigmentacin que presentan estos vinos (ms del 50%) aumenta considerablemente la
cantidad de color de los mismos, mostrando as su eficacia. Las muestras de vino obtenidas a
partir de las uvas VTM presentan menor contenido en antocianos pero mayor cromaticidad
que las muestras obtenidas partir de las uvas VRM. Proponemos como la causa ms probable,
las diferencias en el perfil antocinico observadas. Asimismo, en estas muestras el efecto de la
copigmentacin tiene menor repercusin sobre la cromaticidad, ya que no se observan
diferencias significativas entre la cromaticidad terica de los vinos sin copigmentar y de los
vinos copigmentados.
INTRODUCCIN
La determinacin de la fecha ptima de vendimia sigue siendo hoy motivo de preocupacin
en las bodegas. El seguimiento de la madurez tecnolgica permite disponer de informacin
sobre el grado alcohlico probable y acidez; pero la elaboracin de vinos de calidad precisa
no slo de una adecuada proporcin de azcares y cidos, sino tambin niveles apropiados de
compuestos fenlicos y aromticos. Los compuestos fenlicos de la uva son responsables del
1
color, flavor, cuerpo y estructura de los vinos tintos. Estos compuestos no evolucionan de la
misma manera que los azcares durante la maduracin y generalmente su concentracin
mxima no coincide con la mxima concentracin de azcares (Maujean et al., 1983).
Adems, este desfase entre madurez tecnolgica y fenlica se hace cada vez ms marcado
como consecuencia del cambio climtico, dando lugar a vinos desequilibrados, demasiado
amargos o astringentes, con colores pobres o irregulares (Zamora, 2006, Bergqvist et al.,
2001). Se han llevado a cabo numerosos estudios que describen las modificaciones que sufre
la uva durante la maduracin en cuanto a contenido en azcar, cidos y compuestos fenlicos
(Harbertson et al., 2002; Ryan y Revilla, 2003). En general, en estos estudios se realizan
determinaciones poco especficas de polifenoles totales (mtodo de Folin-Ciocalteau,
determinacin de la absorbancia a 280 nm, etc.) junto con la determinacin
espectrofotomtrica del contenido en antocianos. No obstante, durante la maduracin existen
patrones de evolucin desiguales para las diferentes familias fenlicas por lo que se hace
necesario seguir profundizando en el tema con el objetivo de llegar a conocer cmo incide el
cambio climtico en la composicin fenlica de las uvas y del vino y las repercusiones sobre
la estabilidad del color.
El color de un vino tinto joven depende, en gran medida, de su composicin en antocianos,
cuya inestabilidad constituye un factor intrnseco que afecta con el tiempo al color, el cual
cambia desde el rojo-azulado de los tintos jvenes hasta el anaranjado-pardo de los muy
envejecidos. Como consecuencia de su reactividad, los antocianos del vino desaparecen
gradualmente, a la vez que se forman nuevos pigmentos ms estables, que son los
responsables finales del color del vino envejecido. En este sentido, los procesos de
copigmentacin pueden favorecer una posterior asociacin covalente que dara lugar a la
formacin de compuestos de condensacin entre antocianos y las molculas que actan como
copigmento (Brouillard y Dangles, 1994). Asimismo, estos procesos podran afectar a la
mayor o menor extraccin de compuestos fenlicos durante las primeras etapas de la
vinificacin (Boulton 2001).
En disoluciones acuosas o hidroalcohlicas, como es el vino, los antocianos existen bajo
diversas formas estructurales en equilibrio condicionado por el pH (Figura 1). Dentro de stas,
slo los cationes flavilio, predominantes a pH muy cidos, poseen color rojo (Brouillard,
1982), por lo que al pH del vino (3,2 a 4,0) la mayor proporcin de antocianos se encuentra en
formas incoloras o dbilmente coloreadas.
2
Figura 1.- Equilibrios de los antocianos en funcin del pH.
3
Este fenmeno comporta la asociacin preferencial y no covalente de las formas
coloreadas de los antocianos (cationes flavilio rojos y/o bases anhidras azuladas) con otros
compuestos, fenlicos o no, para formar complejos de apilamiento vertical, mantenidos por
enlaces de baja energa (Van der Waals, interacciones hidrofbicas) y que se estabilizan por
disposicin de las molculas de azcar en la parte externa, entre las cuales se establecen
uniones por puentes de hidrgeno (Figura 2).
H2O
H2O
copigmento
H2O H2O
antociano
Glu
H2O H2O
copigmento
Las molculas de agua no pueden acceder al interior de estos complejos y, de este modo, se
evita la hidratacin de los antocianos y su decoloracin, haciendo que los equilibrios se
desplacen hacia las formas coloreadas de los antocianos. Esto tiene como consecuencia
normalmente el incremento de color, que se vuelve algo ms violceo. Como copigmentos
pueden actuar sustancias de origen diverso: flavonoides (incluyendo los propios antocianos),
aminocidos, cidos orgnicos, polisacridos, etc., que no tienen que ser necesariamente
coloreadas, pero que deben poseer o poder adoptar una configuracin planar para poder
asociarse con los antocianos (Brouillard et al., 1990; Dangles y Brouillard, 1992).
Este tipo de interacciones de baja energa explica la intensidad de color y variedad de matices
que presentan flores y frutos, en intervalos de pH donde los antocianos son normalmente
incoloros, pero se pensaba que no eran importantes en el vino, debido a la relativamente baja
concentracin de antocianos (en comparacin con la existente en medios vacuolares) y al
efecto destructor que el alcohol posee sobre los complejos de copigmentacin. Sin embargo,
numerosos ensayos experimentales han comprobado su viabilidad en sistemas modelo que
reproducen las condiciones fsico-qumicas del vino.
El objetivo del trabajo que se presenta es el estudio de la composicin fenlica detallada de
uvas y vinos de la variedad Tempranillo procedentes de viedos situados en dos zonas
climticas diferentes, zona continental y zona mediterrnea, que podran ser representativas
del cambio climtico. Este trabajo se enmarca dentro de la propuesta CENIT-DEMETER que
plantea conocer el efecto del cambio climtico en el proceso de maduracin de la baya y en la
calidad del vino de manera integral y evaluar el efecto paliativo que pueden tener distintas
tcnicas vitivincolas.
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MATERIALES Y MTODOS
Muestras. Se dispona de muestras de uvas Vitis vinifera de la variedad Tempranillo
procedentes de viedos de Bodegas Roda y de Bodegas Torres, situados en zona climtica
continental (VR) y en zona climtica mediterrnea (VT) respectivamente. En el viedo VT se
realizaron dos tomas de muestra: en el momento de madurez tecnolgica (30/09/2008) (VTM)
y en sobremadurez (27/10/2008) (VTS). En el viedo VR las muestras se recogieron antes de
madurar (26/09/2008) (VRP) y en madurez tecnolgica (08/10/2008) (VRM). Las muestras de
uva se recogieron por triplicado.
Asimismo, se dispona de muestras de vino correspondientes a la vinificacin por triplicado
de las uvas recogidas en el momento ptimo de madurez en los dos viedos anteriormente
sealados. Las muestras se obtuvieron al final de la fermentacin alcohlica, se sulfitaron y
estabilizaron en nevera durante tres semanas antes de proceder a su anlisis.
Extraccin y aislamiento de compuestos fenlicos.
En las uvas, las semillas y los hollejos se separaban manualmente. Los compuestos fenlicos
del hollejo se extrajeron mediante una disolucin MeOH/HCl (0.1%). Las semillas fueron
extradas con MeOH/H2O (75:25). El aislamiento de flavanoles y cidos fenlicos del hollejo y de los
vinos se llev a cabo de acuerdo con Garca-Marino et al., 2006.
Anlisis HPLC-DAD-MS. El anlisis de compuestos fenlicos se llev a cabo en un
cromatgrafo lquido de alta eficacia Hewlett-Packard serie 1100, y la deteccin se hizo
mediante un detector de diodos. En la separacin cromatogrfica de los flavanoles y de los
cidos fenlicos se utiliz una columna C18 de fase reversa Spherisorb S3 ODS-2, 3 m,
150 4,6 mm (Waters, Ireland) termostatizada a 25C. En la de antocianos y flavonoles se
us una columna C18 de fase reversa Aqua, 5 m, 150 4.6 mm (Phenomenex, Torrance,
CA, USA) termostatizada a 35C.
Las condiciones cromtogrficas utilizadas en el anlisis de flavanoles y cidos fenlicos
fueron las siguientes. Eluyentes: (A) cido actico 2,5%, (B) cido actico 2,5%-acetonitrilo
(90:10, v:v), y (C) acetonitrilo de grado HPLC (Merck, Darmstad, Germany). Se estableci el
siguiente gradiente de elucin: desde 0 a 100% de B durante 5 min, desde 0 a 15% de C
durante 25 min, desde 15 a 50% durante 5 min, e isocrtico 50% de C durante 5 min, con un
flujo de 0,5 mLmin-1. La deteccin se llev a cabo a 280 nm (flavanoles) y 330 nm (cidos
fenlicos).
Las condiciones cromtogrficas utilizadas para el anlisis de antocianos y flavonoles fueron
las siguientes. Eluyentes: (A) una solucin acuosa (0,1%) de cido trifluoroactico (TFA)
(Merck, Darmstad, Germany) y (B) acetonitrilo 100% de grado HPLC, estableciendo el
siguiente gradiente de elucin: isocrtico 10% de B durante 3 min, desde 10 a 15% de B
durante 12 min, isocrtico 15% de B durante 5 min, desde 15 a 18% de B durante 5 min,
desde 18 a 30% de B durante 20 min, y desde 30 a 35% de B durante 5 min, a un flujo de 0,5
mLmin-1. La deteccin se llev a cabo a una longitud de onda de 520 nm (antocianos) y 360
nm (flavonoles).
El anlisis por ESI-MS se realiz con un detector de masas FinniganTM (Thermoquest, San
Jose, CA, USA) equipado con una fuente API mediante ionizacin por electroespray (ESI). El
sistema HPLC estaba conectado al espectrmetro de masas a travs de la clula de salida del
DAD. Tanto el gas envolvente como el gas auxiliar eran nitrgeno. Las condiciones del
espectrmetro para la identificacin de los diferentes polifenoles se recogen en la tabla 1. Los
espectros fueron almacenados en modo positivo y negativo entre m/z 120 y 1500. El
espectrmetro de masas fue programado para hacer series de 3 registros consecutivos: un
espectro de masas completo, un registro MS2 del in ms abundante en el primer espectro y
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un MS3 del in ms abundante en el espectro MS2. La energa de colisin utilizada era de
45%.
Tabla 1. Condiciones de anlisis del espectrmetro de masas para la identificacin de los
compuestos fenlicos de los vinos estudiados.
Condiciones del mtodo para la
CIDOS
identificacin de compuestos ANTOCIANOS FLAVANOLES
FENLICOS
fenlicos en vinos
Flujo del gas envolvente (Lmin-1) 1.2 1.2 1.2
Flujo del gas auxiliar (Lmin-1) 6 6 6
Fuente de voltage (kV) 4.50 4.50 2.50
Voltaje del capilar (V) 26 11 -10
Temperatura del capilar (C) 195 200 175
RESULTADOS Y DISCUSIN
En la figura 3 se presenta el contenido global de antocianos (mg/Kg uva) en los hollejos de las
muestras de uva analizadas. Las muestras maduras correspondientes al viedo situado en la
zona climtica continental (VRM) tienen mayor contenido en antocianos que las procedentes
del viedo situado en la zona climtica mediterrnea (VTM). Por otra parte, en los dos
viedos se observa la misma tendencia, disminucin del contenido de antocianos, en la
segunda fecha de recogida (VTS y VRM) respecto a la primera fecha de recogida (VTM y
VRP, respectivamente).
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Uvas-Ensayos Clima Mediterraneo/ Continental
4500
4000
3500
mg/kg de uva (Pigmentos)
3000
2500
2000
1500
1000
500
0
Total Glucosilados Acilados
Figura 3. Contenido global de antocianos (mg/Kg uva) en los hollejos de las muestras de uva
analizadas.
En relacin al contenido en flavonoles, tambin las muestras procedentes del viedo VR
presentan mayor contenido que las muestras procedentes del viedo VT y al igual que en los
antocianos, existe la misma tendencia en el segundo muestreo, en relacin al primero, en los
dos viedos. Si bien en el caso de los flavonoles, la tendencia no era la misma que la
observada en los antocianos ya que el contenido en flavonoles tiende a aumentar (Figura 4).
600
500
mg/kg de uva (Flavonoles)
400
300
200
100
0
Total D. Miricetina D. Quercetina D. Isorhamnetina
Figura 4. Contenido global de flavonoles (mg/Kg uva) en los hollejos de las muestras de uva
analizadas.
7
Uvas-Ensayos Clima Mediterraneo/ Continental
160
140
120
100
80
60
40
20
0
Total H. benzoicos H. cinmicos
250
200
150
100
50
8
Tambin el contenido en flavanoles de las semillas de uva apunta en el mismo sentido. Como
se observa en la figura 7, la tendencia en ambos viedos en el segundo muestreo con relacin
al primero, es la misma. Asimismo, al igual que ocurra con los flavanoles de los hollejos, las
muestras maduras procedentes del viedo VT tienen mayor contenido que las procedentes del
viedo VR.
900
800
mg/kg de uva(Flavan-3-oles) Semilla
700
600
500
400
300
200
100
Figura 7. Contenido global de flavanoles expresados en mg/Kg uva presentes en las semillas
de las muestras de uva analizadas.
Como se muestra en la figura 8, de acuerdo con el mayor contenido en antocianos presente en
las uvas procedentes del viedo VR, los vinos elaborados a partir de estas uvas presentan
mayor contenido en antocianos que los vinos elaborados con las uvas del viedo VT.
Asimismo, el contenido medio de monoglucsido de malvidina en aquellos vinos es
sensiblemente mayor.
Vinos-Ensayos Clima Mediterraneo/ Continental Vinos-Ensayos Clima Mediterraneo/ Continental
1000
mg/L de vino (Pigmentos)
2000
mg/L de vino (Pigmentos)
800
1500
600
1000
400
500
200
0 0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Total Glucosilados Acilados
9
Vinos-Ensayos Clima Mediterraneo/ Continental Vinos-Ensayos Clima Mediterraneo/ Continental
700
Flavonoles)
150 500
mg/L de vino ((Fl
400
100
300
200
50
100
0 0
Total D. Miricetina D. Quercetina D. Isorhamnetina Total Procianidinas Prodelfinidinas
VTM VRM
220
200
mg/L de vino (cidos Fenlicos)
180
160
140
120
100
80
60
40
20
0
Total H. benzoicos H. cinmicos
VTM VRM
60
50
% Copigmentacin
40
30
20
10
10
presentes en el vino. Hay que recordar que este antociano se encontraba en mayor proporcin
en los vinos procedentes de uvas VRM que en los procedentes de uvas VTM.
En relacin a los parmetros de color CIELAB, como se puede observar en la figura 11, las
muestras presentan una tonalidad (hab) rojo-azulada. El valor del croma (C*ab), parmetro que
puede ser interpretado como cantidad de color, es ms elevado en las muestras de vino
procedentes de las uvas VTM. Hay que sealar que aunque estos vinos presenten un
contenido en antocianos menor, el pH ligeramente inferior de los mismos, podra explicar este
dato. En concordancia con la mayor cantidad de color, estos vinos son ms oscuros (menor
valor de L*).
Vinos-Ensayos Clima Mediterraneo/ Continental
hab
C*ab
L*
-10 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90
Figura 11. Parmetros colorimtricos CIELAB L*, hab y C*ab, correspondientes a las muestras
de vino estudiadas.
VRM VTM
60
50
40
Color pH 3,6
30
20
10
0
L* C*ab Cab*20 hab
-10
Figura 12. Parmetros colorimtricos CIELAB L*, hab y C*ab, correspondientes a las muestras
de vino a pH 3,6. Cab*20 es el valor terico de cromaticidad que correspondera a los vinos
sin copigmentacin.
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AGRADECIMIENTOS
Los autores agradecen al MICINN la financiacin a travs del proyecto Cenit DEMETER.
Asimismo, agradecen al Dr. Jordi Coello la realizacin del anlisis de componentes
principales.
REFERENCIAS
- Bergqvist, J., Dokoozlian, N., Ebisuda, N. 2001. Sunlight exposure and temperature effects
on berry growth and composition of Cabernet Sauvignon and Grenache in the Central San
Joaquin Valley of California. Am. J. Enol. Vitic. 52: 1-7.
- Boulton, R. 2001. The copigmentation of anthocyanins and its role in the color of red wine:
A critical. Review. Am J Enol Vitic. 2001. 52: 67-87.
- Brouillard, R. (1982). Chemical structure of anthocyanidins. En Anthocyanins as food
colors (Markakis, P., ed.). Academic Press, N. York. p. 1-40.
- Brouillard, R.; Dangles, O. 1994. Anthocyanin molecular interactions: the first step in the
formation of new pigments during wine aging? Food Chem., 51, 265-271.
- Brouillard, R.; Wigand, M.C.; Cheminat, A.1990. Loss of colour, a prerequisite to plant
pigmentation by flavonoids. Phytochemistry, 29, 3457-3460.
- Dangles, O.; Brouillard, R. 1992. A spectroscopic method based on the anthocyanin
copigmentation interaction and applied to the quantitative study of molecular complexes. J.
Chem Soc. Perkin Trans 2, 247-257.
- Escribano-Bailn, M.T.; Gutierrez-Fernandez, Y.; Rivas-Gonzalo, J.C.; Santos-Buelga, C.
1992. Characterization of procyanidins of Vitis vinifera variety Tinta del Pais grape seeds. J.
Agric. Food Chem. 40: 1794-1799.
- Garca-Marino, M.; Rivas-Gonzalo, J.C.; Ibanez, E.; Garcia-Moreno, C. 2006. Recovery of
catechins and proanthocyanidins from winery by-products using subcritical water extraction.
Anal. Chim Acta. 563: 44-50.
- Gonzlez Manzano, S. 2007. Antocianos y flavanoles en uvas y vino. Influencia de la
composicin en los procesos de copigmentacin y estabilidad del color. Tesis doctoral.
Universidad de Salamanca.
- Harbertson, J.F.; Kennedy, J.A.; Adams, D.O. 2002. Tannin in skins and seeds of Cabernet
Sauvignon, Syrah, and Pinot noir berries during ripening. Am. J. Enol. Vitic. 53:54-59.
- Heredia, F.J. lvarez, C. Gonzalez-Miret, M.L. Ramirez, A. 2004. En, CromaLab, anlisis
de color. Registro General de la Propiedad Intelectual SE-1052-04, Sevilla, Spain.
- Maujean, A., Brun, O. Vesselle, G., Bureau, G Boucher, J.M. Cousin, M. 1983. Etude de la
maturation des cpages champenois. Modles de prvision de la date de vendange. Vitis. 22:
137150.
- M. Melgosa, M. Hita, E. Poza, A.J. Alman, D.H. Berns, R.S. 1997. Suprathreshold color-
difference ellipsoids for surface colors Color Res. Appl., 22: 148-155.
- Ryan, J.M.; Revilla, E 2003. Anthocyanin composition of Cabernet Sauvignon and.
Tempranillo grapes at different stage of ripening. J. Agric. Food Chem. 51: 3372-3378.
- Zamora, F. 2006. El cambio climtico; una amenaza para nuestra vitivinicultura. Enlogos.
39: 28-31.
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