PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATLICA DEL ECUADOR

ESCUELA DE BIOANLISIS
LABORATORIO DE BIOQUMICA CLNICA III
INFORME N1
Nombre: Francisco Sigcho
Fecha entrega: 21/11/2015

Fecha Realizada: 13/11/2015

TEMA: Determinacin de TSH

1. INTRODUCCIN:
La TSH es una hormona secretada por la pituitaria anterior que incrementa la secrecin de
tiroxina y de triyodotironina. Tiene efectos importantes en la glndula tiroides entre los
cuales estn: protelisis de la tiroglobulina para liberar hormonas tiroideas en sangre
circulantes. Su secrecin est regulada por TRH que se produce en el hipotlamo y se dirija
a la adenohipfisis para la liberacin de TSH (Guyton and Hall, 2011). La determinacin de
esta hormona puede realizar mediante ELISA que incluye el uso de anticuerpos especficos
contra la hormona y al final se forma un efecto sndwich que nos dar la concentracin
debido a que la reaccin produce un cambio de color que es proporcional a la cantidad de
hormona en la muestra. (Guzmn, 2004)
2. PROCEDIMIENTO:
a) Preparar el reactivo de trabajo mezclando la solucin A en cantidades iguales con la
solucin B, en este caso se utiliz 2 ml de cada solucin para preparar el reactivo de
trabajo.
b) Preparar la solucin de lavado diluyendo 5 ml de la solucin de lavado concentrada
hasta un volumen de 250 ml con agua destilada.
c) Pipetear 50 uL de los calibradores y del suero problema en cada pocillo.
d) Pipetear 100 uL del reactivo enzimtico en cada pocillo.
e) Agitar suavemente para mezclar bien y cubrir con parafilm.
f) Incubar durante 60 minutos a temperatura ambiente y en oscuridad.
g) Descartar el contenido de los pocillos por decantacin.
h) Lavar 3 veces con 350 ml de solucin de lavado previamente preparada.
i) Tener mucho cuidado de eliminar completamente todo el lquido.
j) Aadir 100 uL de reactivo de trabajo, previamente preparado, en cada pocillo.
k) Incubar durante 15 minutos a temperatura ambiente en oscuridad.
l) Aadir 50 uL de solucin stop en cada pocillo y mezclar suavemente.
m) Leer la densidad ptica a 450 nm y calcular los resultados. Se recomienda la medida
bicromtica con un filtro de referencia de 620-630 nm

3. Curva de calibracin:

Densidad ptica
Persona
Persona
A
B
0,017
0,021

Concentracin
(U/mL)
0

0.057

0.060

0.5

0.190

0.187

2.5

0.339

0.359

0.648

0.745

10

1.170

1.404

20

2.014

2.229

40

Densidad
ptica
Muestra

0,062

Concentr
acin
(U/mL)
1,07

Concentra
cin
interpolar
0,60

4. Validacin
Para poder realizar la validacin de la curva es necesario observar al calibrador G es decir
el que tiene la concentracin de 40, si este calibrador tiene una absorbancia mayor a 1,3 la
curva si puede ser validada. En este caso el calibrador G tiene una absorbancia de 2,014 por
lo cual si puede ser utilizada.
Otro requerimiento para validar la curva es que por lo menos esta pase por cuatro puntos
diferentes dentro de la linealidad, como se observa en la grfica adjunta si es vlida la curva
de calibracin.
5. Clculos
=

1 0
1

0.648 0.359
10 5
0.289
=
5
= 0,0578
=

F = 1/m
F=1/0,0578
F= 17,30
[TSH] = 17,30 * 0.062
[TSH]= 1,07 IU/ml

Valor de
referencia
0,39-6,16

6. Conclusiones
La TSH es un buen indicador de la funcin tiroidea as como de la capacidad de secrecin
por parte de la adenohipfisis, y aparte es un buen marcador fisiolgico de las hormonas
tiroideas por lo cual es necesaria su cuantificacin en el laboratorio. (Fauci et al., 2009)
Para calcular la concentracin de la muestra es necesario realizar una curva de calibracin y
validarla mediante el mtodo designado por la casa comercial, como en este caso es
necesario observar el calibrador G para poder validar la curva de calibracin.
En este caso la concentracin de la muestra se calcul mediante el uso de un factor
calculado a partir de la pendiente trazada en la curva de calibracin previamente realizada y
aparte se relaciona con el valor observado al interpolar la absorbancia. En el primer caso la
concentracin fue de 1,07 y en el segundo fue de 0,60 por lo cual observamos que la
relacin entre estos dos resultados es variable por lo cual se reporta el valor calculado que
es un mejor estimador al tomar en cuenta la calibracin realizada previamente.
7. Recomendaciones
El lavado del ELISA es necesario hacer con cuidado y del pocillo de menor concentracin
al de mayor contraccin para evitar cualquier contaminacin y tambin evitar dejar
cualquier burbuja o con gotas debido a que esto puede generar interferencias indeseables.
Es recomendable hacer el ensayo por duplicado, es decir, tanto los calibradores como la
muestra correr dos veces para as poder obtener una mejor curva de calibracin y un
resultado ms confiable.
8. Bibliografa
Fauci, A., Kasper, D., Araiza Martinez, M. and Harrison, T. (2009). Harrison. Mexico:
McGraw-Hill.
Guyton, A. and Hall, J. (2011). Tratado de fisiologia medica. Madrid: Elsevier.
Guzmn, E. (2004). Las pruebas de Elisa. Gaceta Mdica de Mxico, 140, pp.48-49.

DIAGNSTICO CLNICO Y MICROBIOLGICO

Andrs Hurtado S13-246-Quito Sur
Telf.: 2336918 - 0995000914

REPORTE DE RESULTADOS
DATOS PERSONALES:
PACIENTE: Francisco Sigcho
FECHA: 13/11/2015

EDAD: 20 aos
CDIGO: FJSG

DETERMINACIN

RESULTADO

VALOR DE REFERENCIA

Concentracin de TSH

1, 07 IU/ml

0,39-6,16 IU/ml

Observaciones:
Mtodo utilizado: Enzimoinmunoensayo

Validado por: FRANCISCO SIGCHO