Monografia 0111

Evaluacin de un ensayo colorimtrico como prueba de tamizaje para
Enfermedad periodontal
Por
Michael E. Landzberg
Una tesis presentada de conformidad con los requisitos

para obtener el grado de Master of Science
Departamento de posgrado de Periodoncia
Facultad de Odontologa
En la Universidad de Toronto.
Copyright by Michael E. Landzberg (2009).
Resumen
Ensayo de enjuague bucal para detectar inflamacin y enfermedades
periodontales
Michael E. Landzberg
Maestros de la ciencia, julio de 2009
Departamento de Periodoncia de la Facultad de Odontologa - Universidad de Toronto.
Antecedentes: diagnstico periodontal se basa en factores clnicos observables

intraoral incluyen: sangrado, sondeando profundidades, prdida de adhesin, prdida de
masa sea, y la cantidad de placa y
Tornasol. Objetivo: Correlacionar la cantidad de neutrfilos y un ensayo colorimtrico
de un enjuague bucal con el nivel de enfermedad periodontal. Para usar este ensayo como
una prueba de tamizaje para
La enfermedad periodontal. Mtodos: exmenes periodontal de pacientes con
periodonto sano y enfermedad periodontal fueron realizados (n=125). Dos enjuagues
salina concurrentes, de 20 segundos cada uno, fueron recolectadas. Los neutrfilos se
cuentan en cada lavado. ABTS, un cambio de color de reactivo redox, fue agregado. El
cambio de color fue documentada. Estadstica descriptiva, correlacin de Spearman, VPP,
VPN, la sensibilidad y la especificidad fueron
Se calcula. Resultados: se encontr correlacin estadsticamente significativa entre los
neutrfilos y el cambio de color (r =0.80, p<0.001); VPP y VPN por sangrado fueron
0,74 y 0,73,
Respectivamente. Conclusiones: Existe una correlacin entre los neutrfilos, cambio
de color, y la enfermedad periodontal. El ensayo colorimtrico puede utilizarse como
prueba de tamizaje para la inflamacin periodontal.
I
i
Agradecimientos
Este trabajo no habra sido posible sin el apoyo de muchas personas. En primer lugar, me gustara
agradecer a todos los miembros del laboratorio del Dr. Glogauer, sin los cuales este proyecto habra sido
mucho ms difcil de realizar.
Agradezco a mi supervisor de investigacin, Michael Glogauer, cuya paciencia y comprensin son muy
apreciadas. Dr. Glogauer es una maravillosa persona a consultar con, y nuestras numerosas conversaciones
sobre esta tesis nunca ha fallado a alejarse hacia caminos desconocidos. Sus ideas sobre el tema de esta
tesis y los mtodos de investigacin son la clave para el xito de la investigacin. Me siento realmente
afortunado de haber tenido la oportunidad de trabajar con el Dr. Glogauer.
Me gustara dar las gracias a los miembros de mi comisin, Howard Tenenbaum y Herenia Lawrence. Su
ayuda y sus consejos fueron muy apreciadas.
Mis compaeros Gary Finkleman, Jill Levine, y Amy Yeung hizo los tres aos que pas en este programa
un placer absoluto. He realizado tres de los mejores amigos que poda pedir. Tambin me gustara dar las
gracias a los dems residentes que he tenido el placer de trabajar durante los ltimos tres aos.
Este proyecto no hubiera podido completarse sin la ayuda de la Gradaute periodontales y estudiantes de
pregrado en la Facultad de Odontologa de la Universidad de Toronto, quien me ayud mucho con la
recopilacin de datos para este proyecto.
Los instructores clnicos en el departamento Periodontal graduados estn entre los mejores profesores que
he tenido nunca. Cada uno de mis instructores mostraron cierto inters en mi investigacin y en mi
educacin periodontal. He disfrutado de la conversacin y aprender de cada uno de vosotros, y no poda
haber pedido una mejor experiencia. Agradecimiento especial a Jim Lai por su amor a la educacin, y en
general el Espritu de bondad.
Por ltimo, gracias a mi familia por su amor y apoyo durante este programa. Agradezco todo lo que has
hecho por m, y no estara aqu sin ti.
Espero de verdad que el contenido de esta tesis juegan un papel importante en el futuro de la investigacin
sobre este tema altamente desafiante, que de diagnstico periodontal. Parece que nos estamos acercando
cada da para tener capacidad de diagnstico precisos. Dr. Glogauer prosiga la labor en este campo es
esencial para averiguar cmo pronosticar la progresin de la enfermedad, y es de suma importancia en el
logro de nuestro objetivo final: salvar los dientes!
Ii
Tabla de contenido
Resumen
ii
Agradecimientos .iii
En la lista de figuras
.vi
Abreviaturas viii
Introduccin y exposicin del problema ...1
Revisin de la literatura .3
I. Clasificacin de las enfermedades

periodontales...3
II. Etiologa y patogenia de las enfermedades
periodontales..4
III. Los
neutrfilos...5
A. Ciclo de vida de los neutrfilos y microbiana oxidativo
matando...5
B. El
papel
de
los
neutrfilos
en
la
Enfermedad
Periodontal...8
C. La mieloperoxidasa y su relacin con la enfermedad
periodontal10
IV. Diagnstico periodontal..12
A. Diagnstico
tradicional
de
la
enfermedad
periodontal...12
B. Pruebas
de
diagnstico
suplementario.15
i. Pruebas
microbiolgicas..15
ii. La
deteccin
de
enzimas
HostDerived.16
iii. La deteccin de los productos de la descomposicin del
tejido17
iv. Deteccin
de
los
mediadores
de
la
respuesta
inflamatoria18
V. Resea histrica de la cuantificacin de los

neutrfilos...19
Hiptesis de .22
Objetivos ..22
Materiales y Mtodos : 23
A. Reactivos
23
B. Poblacin de estudio y protocolo clnico
23
C. Cell
Collection,
aislamiento
y
recuento
de
protocolo24
D. Reaccin de color y fotografa26
E. Anlisis estadstico26
Resultados
...28
I
v
A. Estadstica
descriptiva28
B. Relacin entre la gravedad de la Enfermedad Periodontal y los niveles
de
neutrfilos
Oral28
C. Relacin entre los recuentos de neutrfilos y el cambio de color..28
D. Utilidad de la reaccin colorimtrica como instrumento para detectar
inflamacin periodontal29
E. Utilidad de neutrfilos como instrumento para detectar inflamacin
periodontal..31
Discusin
33
Conclusiones
...37
Cifras ...38
Apndice ...59
Referencias .60
Lista de tablas y figuras

Tabla 1. Los datos de filiacin del paciente y las caractersticas clnicas
Tabla 2. Estadstica descriptiva sobre los resultados clnicos primarios y secundarios
La figura 1a. Relacin entre el recuento de neutrfilos y el nmero de sitios que
sangran al sondaje de enjuague (1).
Figura 1b. Relacin entre el recuento de neutrfilos y el nmero de sitios que
La figura 2a. Relacin entre el recuento de neutrfilos y bolsillos de enjuague (1).
La figura 2b. Relacin entre el recuento de neutrfilos y bolsillos de enjuague (2).
Figura 3a. Correlacin entre el recuento de neutrfilos y cambio de color de enjuague
(1).
La figura 3b. Correlacin entre el recuento de neutrfilos y cambio de color de
enjuague (2).
Figura 4. Cambio de color de enjuague durante 10 minutos (enjuague enjuague 1 & 2)
Figura 5. Receptor-operating characteristic curve demostrando el rendimiento
diagnstico de cambio de color en 3 minutos para identificar a los pacientes con 10 o
ms sitios que sangran al sondaje de enjuague (1).
ms bolsillos de enjuague (1).
Figura 7. Ejemplos de muestras de enjuague con ABTS en 3 minutos . A.)No observ
el cambio de color. B&C) Ejemplos de cambios de color a 30 y 40 unidades de cambio
de color respectivamente D&E) Ejemplos de cambios de color mucho ms all del
nivel de umbral.

diagnstico de recuento de neutrfilos para identificar a los pacientes con 10 o ms
sitios que sangran al sondaje de enjuague (1).
diagnstico de recuento de neutrfilos para identificar a los pacientes con 5 o 1
bolsillos (enjuague).
Tabla 3. Caractersticas de cribado de diagnstico 3 minuto los cambios de color de

30 y 40 unidades en la identificacin de pacientes con 10 o ms sitios que sangran al
sondaje de enjuague (1).
V
i
Tabla 4. La sensibilidad, especificidad, VPP y VPN del 30 unidad color cambie en 3

minutos para identificar 10 sangrado al sondaje sitios a travs de subgrupos
demogrficos de enjuague (1).
Tabla 5 . La sensibilidad, especificidad, VPP y VPN del 40 unidad color cambie en 3
minutos para identificar 5 o ms bolsas dentro de subgrupos demogrficos de enjuague
(1).
minutos para identificar 5 bolsillos o ms, a travs de subgrupos demogrficos de
enjuague (1).
Tabla 8. La sensibilidad, especificidad, VPP y VPN del recuento de neutrfilos de 1.1
identificar 10 o ms sangrado al sondaje sitios a travs de subgrupos demogrficos de
enjuague (1).
Tabla 9. La sensibilidad, especificidad, VPP y VPN del recuento de neutrfilos de 1.1
Identificar 5 o ms bolsas dentro de subgrupos demogrficos de enjuague (1).
Tabla 10. Modelado de regresiones logsticas 30 unidad color cambie en 3 minutos
para un diagnstico correcto de 10 sitios de sangrado al sondaje, y 5 o ms bolsillos,
sobre las caractersticas demogrficas y clnicas de enjuague (1).
para un diagnstico correcto de 10 sitios de sangrado al sondaje, y 5 o ms bolsillos,
Tabla 12. Modelado de regresiones logsticas de neutrfilos (1,1 x 10^5) para el
correcto diagnstico de 10 sitios de sangrado al sondaje, y 5 o ms bolsillos, sobre las
caractersticas demogrficas y clnicas de enjuague (1).
Vi
i
Abreviaturas
ABTS: 2,2' -azinobis(3-ethylbenzo-thiazoline-6-sulfonato)
Naranja de Acridina (AO: 3,6-bis[Dimethylamino]cloruro acridium hemi - cloruro de
zinc [ sal])
AST : aspartato aminotransferasa
BANA: benzoil-DL-arginina-naphthylamide
BOP: sangrado al sondaje
CAL: prdida de adhesin clnica
CSF: el factor estimulante de colonias
Fbk: fluido crevicular Ginigval
HBSS: Hanks solucin salina equilibrada
Cift : el colgeno de tipo I carboxi-terminal telopeptide
IL: Interleucina
LAP: periodontitis agresiva localizada
MMP: metaloproteasa de matriz extracelular
NADPH: nicotinamida adenina dinucletido fosfato
Vpn: valor predictivo negativo
: la tasa migratoria Orogranulocytic OMR
PGE 2 : La prostaglandina E 2
PPV: valor predictivo positivo
Viii
Introduccin y exposicin DEL PROBLEMA
La periodontitis es una enfermedad inflamatoria que se extiende a los tejidos de soporte

de los dientes. Esto se traduce en la prdida de ambos el apego del ligamento periodontal
y hueso alveolar de soporte de los dientes. La enfermedad se inicia por Biofilms
bacterianos oral que se desarrollan en el tejido blando de la enca y cavidades entre las
races de los dientes. La periodontitis severa puede ocasionar movilidad dentaria, y la
eventual prdida de dientes[1]. A pesar de ser una enfermedad inflamatoria, es paradjico
que el dolor es raramente presentes haciendo exmenes dentales un factor clave en el
diagnstico precoz y la prevencin. La periodontitis es visto como el resultado de una
compleja interaccin de placa bacteriana y la respuesta del husped, a menudo
modificados por factores de comportamiento[2]. Productos bacterianos actan sobre los
componentes celulares de los tejidos gingivales, activando los procesos celulares que
inducen la destruccin del tejido conectivo periodontal y el hueso alveolar subyacente
[3]. Enfermedad inflamatoria de los tejidos periodontales es relativamente frecuente en
los Estados Unidos, con aproximadamente el 50% de los adultos que exhiben la
gingivitis en 3 o ms dientes, y aproximadamente el 10% de la poblacin adulta que
exhiben la periodontitis en 3 o ms dientes[4].
Las mediciones tradicionales de inflamacin oral y destruccin periodontal incluyen

sangrado al sondaje, profundidad de sondaje nivel adjunto clnico y radiogrfico, la
prdida de hueso. Estas medidas slo proporcionan una informacin sobre el pasado de
destruccin, y niveles inflamatorios actual; no detectar con precisin la enfermedad
actual o predecir el futuro desglose[5-7]. Los esfuerzos de investigacin se han dirigido
hacia el desarrollo de pruebas con el fin de identificar mejor a los pacientes en los cuales
la destruccin del tejido est ocurriendo o puede ocurrir.
Los neutrfilos son un elemento clave de la clula husped en la defensa contra los
microorganismos invasores y jugar un papel en la inflamacin aguda o crnica [8]. Los
neutrfilos estn constantemente entrando en la boca a travs del surco gingival y su
papel en la cavidad oral es controlar la presencia de la bacteria oral[9]. Los neutrfilos,
sin embargo, lanzar productos que son txicos para el host y juegan un papel importante
en la descomposicin de los tejidos periodontales visto en periodontitis. Muchos estudios
se han centrado en el uso de diversas protenas que son liberados por
Los neutrfilos como medio de diagnstico de las enfermedades periodontales; sin

embargo, ninguno de estos se encuentran actualmente en uso en la prctica clnica [10,
11].
Los primeros estudios revelaron que la saliva de los pacientes con periodontitis contiene
elevadas cantidades de neutrfilos[12], y que los neutrfilos migran a la cavidad oral a un
ritmo mayor en presencia de inflamacin [13, 14]. La idea de utilizar la cuantificacin de
los neutrfilos para evaluar el estado de la enfermedad periodontal y la efectividad de la
terapia fue propuesto por primera vez en 1978 [9]. En este estudio se utiliz una
complicada serie de 12 consecutivos de enjuagues orales para cuantificar los niveles de
neutrfilos oral, y encontraron que la prueba dio informacin acerca de la severidad de la
inflamacin. Hasta hace poco, no haba mirado ms estudios a mayor uso o modificacin
de este mtodo en los intentos de identificar o cuantificar las enfermedades periodontales
[15]. Una rpida, sencilla, no invasiva de enjuague bucal que mide con precisin la
gravedad de la enfermedad periodontal y la respuesta al tratamiento ha sido desarrollada
recientemente[15, 16]. Sin embargo, la novela ensayo de enjuague en su formato original
requiere la ayuda de un microscopio para recuento de neutrfilos oral. Adems, los
mtodos descritos se utiliza para correlacionar los niveles de neutrfilos con niveles de
enfermedad, sin embargo, no se aplicaron mtodos estadsticos para determinar la
utilidad de los neutrfilos como prueba de tamizaje para enfermedad periodontal. Los
experimentos descritos en esta tesis se ha diseado para mejorar el mtodo de manera
que pueda ser utilizado de manera ms eficiente en la prctica clnica, eliminando el uso
del microscopio. El objetivo principal de este proyecto es desarrollar un ensayo
colorimtrico simple mediante el cual se produce una reaccin en el enjuague despus de
su recoleccin. Se pretende mostrar que tanto los neutrfilos y reaccin colorimtrica
puede utilizarse como prueba de tamizaje para enfermedad periodontal. Este estudio fue
diseado para mejorar el ensayo anterior mediante el anlisis de la existencia o no de 2
aclarados son necesarios, o si bastara con enjuague 1, haciendo as el ensayo an ms
rpido para administrar en el entorno clnico de las iteraciones anteriores de este sistema.
Revisin de la literatura
I. Clasificacin de las enfermedades periodontales
Las enfermedades periodontales pueden dividirse en dos categoras bsicas, las
enfermedades gingivales y la periodontitis. Las enfermedades gingivales no resultan en la
prdida de insercin periodontal del diente. Las enfermedades gingivales pueden seguir
subcategorized en aquellos que son inducidos por la placa y aquellos que no lo son. La
categora de enfermedad gingival inducida por placa incluye la gingivitis asociada a la
placa solamente, o modificados por factores sistmicos, medicamentos o la malnutricin.
La gingivitis es una dolencia comn de adultos con ms de 50% de los adultos en los
Estados Unidos, exhibiendo la gingivitis en un promedio de 3 - 4 dientes[4]. La no-placa
gingival inducido lesiones incluyen las enfermedades gingivales donde la etiologa de las
lesiones es especfico de bacterias, virus, hongos o genticos, o las lesiones son una
manifestacin de una condicin sistmica[17].
La diferencia clave entre las enfermedades gingivales y las restantes categoras de

enfermedades periodontales es que este ltimo grupo todos han asociado la prdida del
soporte seo de los dientes. La periodontitis ha sido recientemente subcategorized como
crnica, agresivo, o como una manifestacin de la enfermedad sistmica. Periodontitis
crnica pueden clasificarse ms bien como localizados (menos del 30% de los sitios estn
involucrados) o generalizada (ms del 30% de los sitios afectados). Periodontitis agresiva
tambin pueden clasificarse como localizado o generalizado sobre la base de la extensin
de la enfermedad. Ambos pueden ser tipificadas de acuerdo a la gravedad como leve (1-2
mm de CAL), moderada (3-4 mm de CAL), o severa ( 5 mm de cal)[17].
Periodontitis crnica es la forma ms comn de la periodontitis. Existe una gran

variacin en la prevalencia de periodontitis en toda la literatura, segn la definicin de
enfermedad utilizados en el estudio particular [18]. Se estima que su prevalencia como
medida como la prevalencia de bolsas periodontales mayores de 4 mm en un promedio
de 3-4 dientes es de aproximadamente 30% en los Estados Unidos [4, 18, 19].
Clnicamente, la periodontitis crnica
Se presenta con prdida de hueso alveolar, inflamacin de la enca, sangrado al sondaje

suave, y la posible movilidad dentaria y prdida.[17] La enfermedad se caracteriza por
tasas variables de progresin, con diversos episodios de quiescencia y actividad.[20]
La periodontitis agresiva se presenta de una manera diferente clnicamente de

periodontitis crnica, con resultados especficos que son caractersticos de esta
enfermedad. Esta enfermedad se presenta con una rpida prdida de insercin periodontal
y destruccin del hueso alveolar, generalmente con una incoherencia entre la cantidad de
depsitos microbianos y la severidad de la destruccin. Normalmente existe agregacin
familiar de casos, y debe haber ausencia de otras enfermedades sistmicas o condiciones
que pueden predisponer a la enfermedad periodontal. La periodontitis agresiva es
comnmente asociada con elevados niveles de anticuerpos sricos y recuentos de
Aggregatibacter
actinomycetemcomitans
posiblemente
Porphyromonas
gingivalis . Puede haber tambin anomalas en la funcin o el nivel de actividad de

ciertos leucocitos. La forma localizada de la periodontitis agresiva se presenta
tpicamente con una aparicin circumpubertal y est localizado a los primeros molares y
los incisivos. La forma generalizada afecta tpicamente a pacientes menores de 30 aos, e
involucra al menos tres otros dientes a los primeros molares y los incisivos[21].
II. Etiologa y patogenia de las enfermedades periodontales
La inflamacin y la prdida de datos adjuntos que caracteriza a la periodontitis es el
resultado de la interaccin de diversos factores, sin embargo, para que este proceso de
enfermedad para ser iniciado, los microorganismos deben estar presentes en la cavidad
oral y especficamente en el surco gingival. A pesar de cientos de especies de bacterias
orales se han muestreado e identificados en el surco, muy pocas de estas especies posess
la virulencia responsables los factores que son responsables de iniciar el proceso de
destruccin periodontal.[22] para que una especie que tiene un efecto perjudicial sobre la
salud del periodonto, deben presentar con algunos de los factores que le confieren
patogenicidad, tales como la capacidad de colonizar, para evadir las defensas del
husped, o para producir sustancias que causan la destruccin del tejido.
Ginigivitis ha sido descrito como tener 3 distintas etapas histopatolgicas [23].

Inicialmente, las bacterias y sus productos derivados se acumulan en el surco gingival. La
vasodilatacin produce en
Los tejidos adyacentes al surco, que proporciona un mayor transporte de clulas

inflamatorias. Tanto las bacterias y sus productos proporcionan estmulos quimiotctica
para la migracin de leucocitos neutrfilos, principalmente, en el sitio de la infeccin.
Estas clulas son principalmente responsables de controlar la infeccin antes de la
participacin de las clulas inflamatorias crnicas.[24] Los neutrfilos liberar colagenasa,
resultando en la degradacin enzimtica del colgeno en los tejidos gingivales. En la
segunda etapa, los linfocitos T migrar al sitio en grandes nmeros, as como clulas
plasmticas y macrfagos. La continua destruccin de los tejidos gingivales se produce y
se caracteriza por la alteracin de los fibroblastos residentes citoptico. La tercera etapa
se caracteriza por la presencia de grandes cantidades de clulas plasmticas y linfocitos
B. En la mayora de los pacientes, y en la mayora de los sitios, esta fase permanece
estable por largos perodos de tiempo sin progresar a mayor destruccin tisular
(periodontitis).
Un componente clave de la progresin del proceso de destruccin periodontal es la

respuesta inflamatoria del husped. La funcin del plasma factores tales como
complemento y de inmunoglobulinas es controlar la infeccin. Sin embargo, estos
factores no siempre son capaces de controlar adecuadamente la actividad de los
microorganismos invasores[25], resultando en la progresin de la gingivitis periodontitis.
III. Los neutrfilos
A. Ciclo de vida de los neutrfilos y matar microbios oxidativo
Los neutrfilos son producidos en la mdula sea a partir de clulas madre pluripotentes a
partir del linaje mieloide, que se originan como hemocytoblasts. Hemocytoblasts tambin dar
lugar a la estirpe linfoide de clulas, finalmente dando lugar a los linfocitos y las clulas
plasmticas. Las clulas madre mieloides eventualmente dar lugar a los neutrfilos,
basfilos, eosinfilos y monocitos. Una clula madre mieloide primero madura en un
myeloblast, que da lugar a la promyelocyte, el myelocyte, la meta-myelocyte, la banda
celular, y finalmente, despus de aproximadamente 2 semanas de maduracin, el neutrfilo.
[26] Aproximadamente 10
11
los neutrfilos son producidos en la mdula sea de un adulto
sano diariamente, y aproximadamente 10
12
en presencia de inflamacin aguda. La
maduracin de los leucocitos neutrfilos y otros se encuentran bajo el control de diversas

citocinas como las interleucinas y estimulantes de colonias
Factores (CSF). La vida media en la circulacin de neutrfilos maduros es de 4-8 horas y

de 1-4 das en el tejido[26].
Con el fin de neutrfilos antimicrobiana para llevar a cabo sus funciones, primero debe
migrar a su eventual sitio de actividad. Este proceso es iniciado por la presencia de
bacterias, que conduce a la activacin de mastocitos residentes. Los mastocitos como
molculas de sealizacin de liberacin de histamina, que causa un incremento de la
dilatacin y permeabilidad de las clulas endoteliales en sus cercanas.[26] El flujo de
sangre en el buque se ralentiza, y los neutrfilos mover a la periferia del buque. Este
proceso se llama 'margination'. Una vez que estn cerca de la superficie endotelial,
"rolling" comienza, por el cual el neutrfilos interactan con forro de la nave a travs de
una glicoprotena de superficie celular, la L-selectina. Este proceso permite que los
neutrfilos sean expuestos a mediadores inflamatorios como la IL-1, histamina y C5a,
que a su vez estimula a las clulas endoteliales expresan P-selectina y E-selectina que
vinculan a los neutrfilos, conduciendo a una mayor rodando a lo largo de la pared del
vaso,[27]. Fuerte adhesin a la pared vascular est mediada a travs de las integrinas
transmembrana como antgeno asociado con la funcin leucocitaria-1 (LFA-1), que se
une a las molculas de adhesin intercelular -1 y -2 (ICAM-1 e ICAM-2). El aumento de
la expresin de las integrinas es estimulada por citoquinas que son secretados por el
endotelio estimulado. Este proceso se conoce como "adherencia". Los neutrfilos
comenzar ahora el proceso de 'diapedesis', la migracin a travs del revestimiento
endotelial. Logran esto por aplastamiento con el fin de pasar a travs de las uniones
intercelulares. La molcula de adhesin celular Platelet-Endothelial-1 (CD31) interviene
en este proceso. Para que finalmente pase a los tejidos vecinos del vaso sanguneo, los
neutrfilos luego secretan la gelatinasa que degrada el colgeno de la membrana basal.
[27].
Los neutrfilos ahora empezar a migrar hacia el rea de la infeccin microbiana. Esto se
consigue siguiendo un gradiente de quimioatractantes tales como el factor de necrosis
tumoral alfa (TNF-a), interleucinas y N-formil-methionyl pptidos (fMLP).[27] Una vez
en el interior de los tejidos, la funcin del neutrfilo es liberar sustancias txicas, y
phagocytose y matar a los microbios. La fagocitosis es el proceso por el cual el neutrfilo
envuelve e interioriza una partcula a travs de la formacin de una vescula conocida
como phagosome. El
La ingestin de los microorganismos est mediada por las inmunoglobulinas y

complemento de fragmentos, que se adsorben a la superficie de las bacterias y les
permiten ser reconocida por protenas superficiales como los receptores Fc en los
neutrfilos.
Una vez que los neutrfilos phagocytosed tiene un organismo invasor, su funcin es
destruir la materia ingerida. Esto se logra a travs de la fusin de los grnulos con la
phagosome, formando un phagolysosome [28, 29]. La fusin de estos grnulos con el
phagosome resulta en la destruccin de la phagosome su contenido. Los grnulos
neutrfilos son de cuatro tipos, siendo la principal de ellas la peroxidasa + o grnulos
azurof licos. Entre el contenido de los grnulos azurof licos son protenas con accin
antimicrobiana
directa
(ej.:
Las
defensinas,bactericida-permeabilidad
azurocidin
increading, protenas), proteasas (elastasa, catepsinas) y la mieloperoxidasa (MPO), que

se expresa slo en neutrfilos y monocitos [29]. Como mieloperoxidasa juega un papel
central en esta tesis, que se examinar ms adelante en mayor detalle.
El neutrfilo descanso deriva su energa de la gluclisis anaerobia.[25] Una vez que ha

sido activado, el consumo de oxgeno de la clula aumenta 100 veces mediante una
explosin respiratoria.[30] Esta alternativa a la gluclisis es conocida como la hexosas
monofosfato shunt. Esta ruta representa la fuente principal de oxgeno reactivo dentro de
los neutrfilos, y principalmente es catalizada por la enzima nicotinamida adenina
dinucletido fosfato (NADPH oxidasa), lo cual reduce el oxgeno anin superxido en la
reaccin
NADPH + 2 o 2
2O2
+H
+ NADP
El anin superxido txicos potentally rpidamente se convierten en perxido de

hidrgeno en el medio celular por la superxido dismutasa en la reaccin
2o2
+2H
H2O2 +O2
El perxido de hidrgeno es un agente oxidante dbil, pueden inactivar algunas protenas

y en altas concentraciones es bactericida, pero lo ms importante es que pueden ser
utilizados por peroxidasas tales
Como mieloperoxidasa a fin de crear una mayor sustancia antimicrobiana con un muy
alto potencial comburente, hipoclorito, a travs de las siguientes reacciones:
Cl
+H2O2+H
HOCL
H + OCL
H 2 O + HOCL
-
Las especies reactivas del oxgeno creado por el sistema NADPH oxidasa directamente
efectos bactericidas y proporcionar el sustrato para matar oxidativa y no oxidativa de
protenas antimicrobianas[25]. Hay una colaboracin dentro del neutrfilo entre
oxidantes y granulados para daar las protenas ingeridas microbios[29]. Un nivel
significativo de existe redundancia en los mecanismos de la matanza de los neutrfilos.
La mayora de las bacterias son eliminadas mediante una combinacin de enzimas y
productos de telefona mvil, que asegura que la mayora de las bacterias mueren, ya que
algunos pueden ser resistentes a un determinado mecanismo de muerte[25].
B. El papel de los neutrfilos en la enfermedad periodontal

Es bien sabido que los neutrfilos son una parte esencial de la respuesta de host ptimo
para los microbios [29], y que desempean un papel clave en la patogenia de la
periodontitis[31] , proporciona defensas contra los organismos infecciosos. Una vez que
los neutrfilos han alcanzado la bolsa periodontal, se forma una pared que separa el
avance de la placa frontal desde el epitelio[25]. Los estudios clnicos de trastornos de
neutrfilos sistmicas han demostrado que las condiciones que afectan a la funcin o
nmero de celular de los neutrfilos son a menudo asociados con frecuentes o graves
infecciones microbianas[29], y el aumento de la susceptibilidad a la rpida y grave
destruccin periodontal [25, 32, 33], y varios estudios in vitro han mostrado los
neutrfilos en pacientes con periodontitis se hiper-reactiva, liberando considerablemente
ms IL-1 , y generar niveles elevados de especies reactivas del oxgeno [34].
En el sitio periodontal sano, los neutrfilos se encuentran en el epitelio y en la base del

surco. En presencia de bacterias subgingival, el nmero de neutrfilos en el surco se
incrementa, resultando en un estado de inflamacin gingival. Una vez en el surco, la
Los neutrfilos agregado y forma una pared que separa la placa de masa y el epitelio[24].
A fin de que los neutrfilos para llegar al sitio de la infeccin, deben migrar a travs de la
matriz extracelular. Para ello, los neutrfilos liberar colagenasa, miembro de la
metaloproteasa de matriz extracelular (MMP), la familia en la matriz, lo que facilita su
movimiento a travs del colgeno de la matriz extracelular rica.[35] Un desequilibrio
entre la ruptura del tejido conectivo y su reparacin puede llevar a la ruptura total de los
tejidos periodontales visto en periodontitis. La funcin de los neutrfilos en este caso
para combatir la placa bacteriana infecciosa, sin embargo en el proceso tambin
contribuyen a la descomposicin del tejido periodontal.[35] Otras enzimas y el contenido
de los grnulos neutrfilos como elastasa y las especies reactivas del oxgeno que se
utilizan para fines de matar las bacterias tambin son secretados en el espacio
extracelular y pueden contribuir al dao de la matriz extracelular y clulas husped
adyacente en el proceso. Los pacientes con enfermedad periodontal progresiva mostraron
mayores niveles de colagenasa[36], las especies reactivas de oxgeno[37], y
-glucuronidase, que participa en la degradacin de la matriz extracelular [11], que en
pacientes sanos.
Una inadecuada respuesta inmunitaria a los infractores las bacterias pueden tener graves
consecuencias perjudiciales. Defectos en la cantidad o la funcin de los neutrfilos, que
son adquiridos, heredado, o inducida por frmacos puede conducir a un aumento de la
tasa y el grado de destruccin periodontal. Un adulto sano tiene un recuento de
neutrfilos absolutos entre 1.8-8.0 x 10
por litro de sangre. Como el recuento de
neutrfilos disminuye el riesgo de infeccin aumenta. Hay muchas enfermedades

asociadas con una disminucin en la cantidad de neutrfilos circulantes, tales como
neutropenia cclica, crnica benigna, Neutropenia Severa Neutropenia congnita, y sent
el sndrome. Estas enfermedades estn asociadas con periodontitis severa y la prdida
prematura de dientes[38].
Defectos asociados con la capacidad de los neutrfilos para proporcionar proteccin para el
host tambin puede resultar en un aumento de la susceptibilidad a la enfermedad periodontal.
Por ejemplo, la deficiencia de adhesin leucocitaria tipo I (LAD-I) es una enfermedad
congnita asociada con una deficiencia en las integrinas y, por lo tanto, en la capacidad de los
neutrfilos para enlazar a las paredes de los vasos sanguneos. Estos neutrfilos no puede
migrar hacia los tejidos a los sitios de infeccin. Estos pacientes tienen
La periodontitis severa que afecta su denticin temporal y permanente[39]. Un defecto en

la glucoprotena sialyl Lewis-x (SLeX,) se denomina LAD-II, y ocasiona una
disminucin en la laminacin de los neutrfilos, y por lo tanto una reduccin en el enlace
a las paredes de los vasos sanguneos. Quimiotctica de los neutrfilos, las deficiencias
han sido reportados en el sndrome de Papillon-Lefevre[40] y el sndrome de ChediakHigashi sndrome[41]. La disfuncin de los neutrfilos conduce a la periodontitis severa
en ambos de estos sndromes.
Defectos en la funcin de los neutrfilos tambin han sido relacionados con periodontitis
agresiva localizada (LAP). Quimiotaxis de neutrfilos y/o fagocitosis normalmente estn
comprometidos en estos pacientes[42]. Curiosamente, aparte de la destruccin
periodontal, no parece que haya otras manifestaciones de los defectos de los neutrfilos
en estos pacientes. Las deficiencias en la quimiotaxis de neutrfilos, adherencia, y
fagocitosis han demostrado desempear un papel significativo en el aumento de la
prevalencia de la destruccin periodontal exhibidos en pacientes diabticos[43]. Estas
deficiencias se han atribuido a factores de protena en el suero que unen los receptores de
neutrfilos y evitar la fagocitosis. Clnicamente, los diabticos con peor control
glucmico exhiben ms rpida y severa de la progresin de la periodontitis[43].
C. La mieloperoxidasa y su relacin con la enfermedad periodontal
La mieloperoxidasa es un hemo-contienen las protenas que posee actividad
antimicrobiana potente[44], y representa entre el 1 y el 5% del peso seco del
neutrfilo[45]. MPO es el producto de un solo gen aproximadamente 11 kb de tamao,
conteniendo 11 intrones y 12 exones, que est localizado en el brazo largo del
cromosoma 17. La traduccin es un producto de aproximadamente 80 kD protena, la
cual es modificada para la enzymmaticaly apoproMPO inactivos. Hem se subesequently
aadido, convirtiendo as a la proMPO enzimticamente activas. MPO madura pesa
aproximadamente150 kD[45]. Hay tres principales formas isomricas de mieloperoxidasa
en neutrfilos que son todos idnticos: enzimticamente MPO I, II, MPO y MPO III. [46]
Sntesis de la MPO se inicia en la etapa de desarrollo premyelocyte neutrfilos, y termina

en el comienzo de la etapa myelocyte[45]. Aunque es producida en neutrfilos y
monocitos, que contienen grnulos MPO generalmente se pierde cuando los monocitos
10
En macrfagos maduros en el tejido[45]. La mieloperoxidasa es considerado uno de los

principales elementos que intervienen en la actividad antibacteriana de clulas
fagocitarias. MPO es producida en el phagosome en concentraciones en exceso de
aquellos que median la muerte bacteriana. Se ha sugerido que la MPO funciona
principalmente para mantener una baja concentracin de perxido de hidrgeno en la
phagosome, preservando la funcin del grnulo proteasas que de lo contrario podra
sufrir inactivacin mediada por el oxidante irreversible si el perxido de hidrgeno
acumulado
en
el
phagosome[29].
La
mieloperoxidasa
es
secretada
tanto
intraphagosomally y extracellularly, estimulada por los neutrfilos[46].
Parecera lgico que una deficiencia de mieloperoxidasa estara relacionado con una
significativa morbilidad y mortalidad como resultado de enfermedades infecciosas, sin
embargo, 1 de cada 2000 a 4000 personas en EEUU y Europa son deficientes en la
mieloperoxidasa [29], pero estos pacientes tienen pocas complicaciones infecciosas
bacterianas clnica[47]. Parece existir un aparato mediante el cual los neutrfilos utilizar
otros mecanismos de defensa para compensar la falta de la mieloperoxidasa[29].
Desde la primera vez que se sugiri para su uso en la evaluacin de la enfermedad

periodontal[48], la mieloperoxidasa ha sido medido en el fluido gingival crevicular como
indicador potencial de la enfermedad periodontal [49-53], y se ha demostrado que
aumenta en presencia de enfermedad periodontal y la inflamacin sistmica en pacientes
sanos[50, 54-57]. Una elevacin de la mieloperoxidasa en periodontitis agresiva en
comparacin con periodontitis crnica ha demostrado [28, 58], lo que sugiere que la
actividad de los neutrfilos anormalmente alta es la causa del aumento en la
concentracin de mieloperoxidasa en el fluido crevicular de estos pacientes [44]. Los
autores sugieren que el oxgeno-dependiente en el metabolismo de los neutrfilos pueden
servir como un marcador para la diferenciacin cualitativa de inflamacin
periodontal[44]. Sin embargo, otro estudio ha sugerido que el aumento en la cantidad de
MPO y la actividad de la enfermedad est relacionada con un aumento en la cantidad de
neutrfilos en lugar de un aumento en la produccin o la actividad de MPO en s[54].
Este estudio sugiere tambin que el aumento de la presencia de la MPO probablemente
refleja el grado de inflamacin gingival en lugar de periodontitis. Terapia periodontal ha
demostrado producir una disminucin significativa de la actividad MPO en el GCF[5052]. En la actividad de la mieloperoxidasa
11
GCF ha demostrado ser reducida en los pacientes diabticos en comparacin con

pacientes sistmicamente sanos[59]. Adems, recientemente se ha comprobado que hay
un diferencial de mieloperoxidasa isoformas de liberacin en respuesta a diferentes
bacterias orales, sin embargo, el mecanismo de este y su relacin con la patogenia
periodontal permanece desconocida.[46]
La mieloperoxidasa acta como un potente oxidante. La mayora utiliza ampliamente los

mtodos colorimtricos para medir la capacidad oxidante se basan en el uso de 2,2'
-azinobis(3-ethylbenzo-thiazoline-6-sulfonato) (ABTS), que es una molcula incolora
que oxida a un caracterstico color azul-verde[60]. La mieloperoxidasa actividad puede
ser detectado mediante el uso de ABTS[61].
IV. Diagnstico periodontal

A. Diagnstico tradicional de enfermedad periodontal
Los exmenes de diagnstico se evalan mediante clculos estadsticos basados en el
teorema de Bayes. La sensibilidad de una prueba se refiere a la probabilidad de una
prueba positiva dado que la enfermedad est realmente presente. La especificidad de una
prueba es la probabilidad de prueba negativo, dado que la enfermedad no est presente.
El valor predictivo positivo (VPP) es la probabilidad de tener la enfermedad dado un
resultado positivo y el valor predictivo negativo (VPN) es la probabilidad de no tener la
enfermedad dado un resultado negativo. Los valores de sensibilidad, especificidad, VPP
y VPN sera de 1,00 en una perfecta prueba de diagnstico. En el cuidado de la salud,
pruebas perfecta no existe. Para una prueba de diagnstico clnicamente relevantes para
la enfermedad periodontal, una sensibilidad y una especificidad de 0,70 se considera muy
aceptable[62].
Los objetivos principales en el proceso de diagnstico de la enfermedad periodontal son

para determinar la presencia o ausencia de la enfermedad, y cuantificar la gravedad de la
enfermedad y su nivel actual de actividad de la enfermedad, as como para pronosticar el
riesgo de progresin de la enfermedad en el futuro. El examen periodontal clnica
tradicional, que incluye evaluaciones de ya presente el dao a los tejidos periodontales,
as como medidas de inflamacin periodontal (por ejemplo, sangrado), es til para
determinar la ubicacin y la gravedad de los enfermos los tejidos periodontales. Estas
medidas son rentables y fciles de usar. Sin embargo,
12
Estas medidas de examen no medir el nivel actual de la actividad de la enfermedad con

un buen grado de fiabilidad ni son capaces de predecir el futuro desglose periodontal[62].
La presencia de clnica de la inflamacin suele estar indicado por el cardenal signos de

enrojecimiento, calor, hinchazn, dolor y prdida de la funcin. Inflama los tejidos
periodontales pueden exhibir estos signos, aunque no todos son utilizados para evaluar la
presencia de inflamacin periodontal. Diversas medidas de inflamacin periodontal se
han propuesto. El ndice gingival de Le [63] describe los cambios en los tejidos blandos
gingivales basndose en la inspeccin visual y la luz el sondeo del surco gingival. Los
criterios para el ndice gingival zona: 0 = normal las encas; 1 = inflamacin leve, leve
cambio de color, el edema leve, no hay sangrado al sondaje; 2 = inflamacin moderadaenrojecimiento, edema, acristalamiento con sangrado al sondaje; 3 = inflamacin severamarcado enrojecimiento y edema, ulceracin y hemorragia espontnea. Un problema con
este tipo de ndice es que es categrico y, por lo tanto, las cifras no representan una
cantidad especfica. Inflama los tejidos gingivales tienden a sangrar al sondaje suave
debido a micro ulceraciones en el epitelio sulcular[62]. Sangrado al Sondaje es un signo
de inflamacin comnmente utilizados en el diagnstico de las enfermedades
periodontales, y es el primer signo de gingivitis, anteriores a la presentacin de la
decoloracin y la hinchazn[64]. Se trata de un objetivo firme, como sangrado est
presente o no es[65]. La presencia de grandes cantidades de neutrfilos en el surco
gingival que no es fcil salir del sitio pueden conducir a la presencia de supuracin en
aplicacin de una suave presin en los tejidos periodontales con el lado de una sonda
periodontal o dedo[62]. Supuracin es un signo de infeccin en curso, pero algunas
personas muestran que esta es una placa y no pus.
Estos signos de inflamacin no puede ser utilizado para distinguir continua destruccin
periodontal claramente, y no ayudan a predecir el futuro de la actividad de la
enfermedad. El enrojecimiento y la inflamacin gingival son caractersticas tanto de la
gingivitis y la periodontitis, y las escalas mencionadas no puede utilizarse para
diferenciar entre los dos[5], y se ha encontrado que el sangrado al sondaje tiene una
sensibilidad de 0.29 y VPP de 0,06 [66]. Es un pobre predictor de ruptura periodontal.
Esto es debido en parte a las variaciones en el sangrado al sondaje con presiones de
sondeo variable[67]. Supuracin no es frecuentemente observada y
13
Es un pobre predictor de la progresin de la enfermedad[68]. Ninguna de las pruebas

tradicionales para la inflamacin gingival tienen suficiente sensibilidad y especificidad
como para ser utilizado como una prueba de diagnstico para la actividad de la
enfermedad periodontal.
Hay varios tipos de formas de medir el dao que se ha causado al periodonto por una
historia o presencia de enfermedad periodontal. El instrumento ms comn utilizado para
medir la cantidad de destruccin (via nivel adjunto clnico) es la sonda periodontal.
Profundidad de sondaje es una medida de la profundidad de penetracin de la sonda mide
desde el margen gingival libre tras la insercin suave en el surco gingival. La exactitud y
reproducibilidad de estas medidas puede ser influenciada por muchos factores, tales
como la fuerza de sondeo, angulacin, sonda tipo, la posicin y el estado de salud
gingival[69-73]. Bolsas periodontales profundas actan como un reservorio de patgenos
periodontales y es difcil para el paciente y el mdico para limpiar. La extraccin
completa de la placa subgingival en los bolsillos que son mayores a 5mm de profundidad
es improbable[74].
Nivel adjunto clnico se determina aadiendo la medida de la recesin a la profundidad

de sondaje. Prdida de datos adjuntos clnica puede resultar en movilidad dentaria, que
normalmente se mide segn una escala desarrollada por Miller (1950) donde M1 =
primera seal distinguible de movimiento superior al normal; M2 = movimiento de la
corona hasta 1 mm en cualquier direccin; M3 = movimiento de la corona ms de 1mm
en cualquier direccin y/o la depresin vertical o la rotacin de la corona en el
zcalo[75].
Las radiografas dentales pueden ser tambin utilizados para evaluar el hueso de soporte
y destruccin periodontal. Las radiografas pueden ser comparados con el tiempo para
revelar la cantidad de hueso perdido a lo largo del tiempo. Radiografa de sustraccin
digital ha mejorado significativamente en la radiografa convencional en trminos de la
capacidad para detectar cambios en el nivel del hueso alveolar o densidad. Con la
radiografa convencional, el 30% de la masa sea debe ser perdido para la prdida sea
para ser reconocible al ojo desnudo[76]. Con la radiografa, la sustraccin digital cambia
tan poco como el 5% en la densidad de hueso puede ser detectado[77].
14
Ninguna de las pruebas anteriores se puede utilizar para detectar la enfermedad activa, y
no son tiles para predecir el futuro desglose. Profundidad de sondaje ha demostrado
tener una sensibilidad de 0,26 y un VPP de 0,11[78] con respecto a la prediccin de
futuras prdidas de datos adjuntos. Las radiografas pueden ser utilizados para identificar
la enfermedad activa, ni pueden ser utilizados para distinguir entre los casos tratados y
los no tratados. Bolsas periodontales o movilidad dentaria no pueden ser evaluadas en
radiografas[79]. Radiografa de sustraccin ha mejorado nuestra capacidad para detectar
cambios mnimos en los niveles de hueso alrededor de los dientes, sin embargo
superposiciones precisas de las radiografas es difcil y requiere mucho tiempo. Cuando
se usa solo o en combinacin, las pruebas comnmente utilizadas para el diagnstico
periodontal son inadecuados para medir la actividad de la enfermedad y el riesgo de la
progresin.
B. Pruebas de diagnstico suplementario
Cantidades significativas de investigacin se han centrado en el desarrollo de pruebas
para identificar periodontitis activas con precisin o para predecir el riesgo de prdida de
la adhesin futura de los pacientes. Estas pruebas se han clasificado sobre la base de qu
parte de la etiopatogenia de la enfermedad periodontal son diseados para detectar[62].
I. Pruebas microbiolgicas
Se han desarrollado varias pruebas que se centran en la deteccin de la presencia de
patgenos periodontales. Fcil cultivo, las sondas de ADN, y las reacciones en cadena de la
polimerasa son tcnicas que se han utilizado para detectar estos patgenos[5]. Un estudio
utilizando ensayos inmunofluorescente eran detectar A. actinomycetemcomitans, P.
intermedia, y
P. gingivalis en muestras de placa negra hall que los pacientes con P. intermedia o P.
gingivalis presentes tenan una mayor prevalencia de sitios con prdida de adhesin
periodontal severa en comparacin con pacientes no infectados[80].
Las bacterias en la placa dental se sabe que poseen diversos factores de virulencia que
provocara la destruccin de los tejidos periodontales mientras que ayuda a las bacterias a
eludir las defensas del husped. La deteccin de algunos de estos factores de virulencia
ha sido intentada con el fin de diagnosticar la enfermedad periodontal con ms precisin.
Las enzimas bacterianas constituyen una categora de factores de virulencia que ha sido
examinado. La ms abundante de las proteasas producidas por el ligamento periodontal
15
Los agentes patgenos son la tripsina y dipeptidyl proteasas. Eley y Cox (1995)[81, 82]
Se encontr que los niveles de estas enzimas bacterianas correlacionadas con parmetros
clnicos en pacientes con enfermedad periodontal, y que todos los pacientes mostraron
una reduccin de las enzimas casi a cero tras el tratamiento periodontal no quirrgico y
de instrucciones de higiene oral. La deteccin de enzimas bacterianas tambin ha sido
utilizado en el pasado para dictar el tratamiento de la enfermedad periodontal. Los
patgenos periodontales T. denticola, P. gingivalis y T. forsythensis , todos poseen
proteasas que hidrolizan benzoil-DL-arginina-naphthylamide (Bana). Esta propiedad de
estas bacterias se utiliz en una prueba llamada la prueba Bana. Loesche et al. (1990)
[83] Se encontr que el uso del antibitico metronidazol en pacientes que presentaron un
resultado positivo en la prueba de Bana ha reducido la necesidad de tratamiento
quirrgico periodontal.
El uso de evaluaciones microbiolgicas como una herramienta de deteccin tiene varios

peligros asociados. La enfermedad periodontal es causada por una infeccin mixta, lo
que hace la deteccin de especies presentes desafiantes. Muchas de las especies presentes
en la placa bacteriana son difciles para la cultura. Bacterias periodontales patgenos
conocidos han sido encontrados en sitios periodontales sanos mediante sondas de ADN
para la deteccin de bacterias[84]. Algunos organismos pueden colonizar la bolsa
periodontal como resultado de las enfermedades, en lugar de tomar un papel
patognico[85]. Estos y otros hallazgos han llevado a la conclusin de que la presencia o
ausencia de patgenos periodontales en la placa no puede ser utilizado para distinguir
entre sitios de sano y enfermo[5]. No existen pruebas slidas para apoyar el uso de
pruebas microbiolgicas para el diagnstico de la enfermedad periodontal[86].
Ii. La deteccin de enzimas Host-Derived
Las enfermedades periodontales son mediadas por la respuesta del host a ofender a los
microorganismos que estn presentes en el bolsillo. Identificacin de ciertas enzimas
derivadas de host para el diagnstico de la enfermedad periodontal ha sido un rea de
investigacin. Para las pruebas de esta naturaleza para ser til, la recoleccin de muestras
de estas enzimas debe aplicarse de una manera fcil y no invasiva de la moda. Los
exmenes de sangre se han utilizado para identificar diversas manifestaciones sistmicas
de la enfermedad periodontal, sin embargo los dentistas prefieren el anlisis de lquidos
orales tales como la saliva o el fluido gingival crevicular (FGC) [87].
16
El GCF es un exudado inflamatorio que contiene las protenas de suero, mediadores

inflamatorios, productos de degradacin, metabolitos, microbiolgicos y proteinasas[87].
GCF est presente en pequeas cantidades en los tejidos gingivales sanos[88], y el flujo
de la GCF aumenta en presencia de inflamacin y disminuye despus de la resolucin de
la enfermedad[89]. Diversas tcnicas estn disponibles para la coleccin de GCF. Lavado
gingival involucra la perfusin de una solucin en la grieta, sin embargo GCF desde
sitios individuales no puede ser analizado independientemente, y esta tcnica es
tcnicamente exigente[87, 90]. Las micropipetas se han utilizado para recopilar GCF,
proporcionando una muestra individual sin diluir con un volumen cuantificable, sin
embargo puede tomar hasta 30 minutos para recoger una muestra de un sitio uninflamed.
Las tiras de papel de filtro son un rpido, fcil, no invasivo para recoger muestras del
marco. Estas tiras, junto con un dispositivo como el Periotron, pueden ser utilizados para
analizar el volumen recogido desde sitios especficos[91]. Tanto la saliva y el GCF han
sido reunidas y evaluadas para detectar la presencia de varias protenas de acogida[87].
Una correlacin entre unstimulated - actividad glucuronidase salival y parmetros
clnicos
de la enfermedad periodontal ha sido demostrado [11]. Aspartato
aminotransferasa (AST), un indicador de muerte celular, ha demostrado ser elevada en el

GDF en periodontitis en un modelo animal[92]. La colagenasa de neutrfilos (MMP-8),
la actividad se ha demostrado un aumento en el GCF de pacientes con enfermedad
periodontal, y a disminuir tras el xito de la terapia periodontal basada en una
disminucin en el nmero de bolsillos superiores a 5mm[10]. Los niveles elevados de
actividad elastasa y colagenasa salival fueron encontrados en un estudio de pacientes con
periodontitis adulta[93].
Iii. La deteccin de los productos de la descomposicin del tejido
Los productos de la descomposicin de los tejidos han sido probados para su uso como
ayuda para el diagnstico. El colgeno de tipo I carboxi-terminal telopeptide (CIFT) es
un producto de la resorcin sea y, por tanto, un marcador de ruptura del tejido. Cift
niveles significativamente mayores han sido encontrados en pacientes periodotitis
comparados con los controles, y los niveles se correlacionan con parmetros clnicos de
la enfermedad. El tratamiento de la periodontitis reduce los niveles de ICTP al de
controles sanos[94]. La osteocalcina es la ms abundante y no-protena colagenosa en
hueso. Ha sido investigado como un marcador de destruccin periodontal, sin embargo
no significativos
17
Diferencia podra encontrarse en sus niveles en el GCF entre enfermos y sanos.[95].
Iv. Deteccin de mediadores de la respuesta inflamatoria.

Tambin hay posibilidades de diagnstico para la deteccin de los mediadores de la
respuesta inflamatoria. Las prostaglandinas desempean un papel crucial en el
reclutamiento de leucocitos. Los neutrfilos activados producen grandes cantidades de
prostaglandina, y por lo tanto niveles de prostaglandinas puede reflejar el nivel de
activacin de clulas inflamatorias[96]. La prostaglandina E 2 (PGE 2 ) niveles en el GCF
se han encontrado ser mayor en pacientes con periodontitis comparado con pacientes con
gingivitis[97]; sin embargo, una variabilidad significativa en los niveles de PGE 2 se
observ entre los sitios y los pacientes. Un estudio longitudinal de tres aos mostr que
los niveles de PGE 2 podra utilizarse como un indicador de la destruccin del tejido
periodontal, con un doble elevacin detectado en pacientes con desglose periodontal
activa. Boca llena de PGE
niveles fueron utilizados en este estudio, impidiendo la
prediccin del desglose en sitios especficos[96]. Esta prueba de diagnstico requiere el

uso de una tcnica de radioinmunoanlisis que no est disponible en el entorno clnico.
Ms recientemente, un kit de inmunoensayo comercialmente disponible fue utilizado
para evaluar el efecto del tratamiento periodontal en la PGE 2 niveles, sin embargo, no se
encontraron correlaciones significativas entre los niveles de PGE 2 y parmetros
clnicos[98].
Las citoquinas son protenas que actan como clulas mensajeros de sealizacin y
juegan un papel importante como mediadores de la inflamacin. Interleucina-1 (IL-1) es
una citocina. Existe en dos formas, IL-1 e IL-1 [5]. La sntesis y liberacin de
citocinas representa un componente de destruccin del tejido periodontal, por lo tanto
pruebas diagnsticas encaminadas a la deteccin o la cuantificacin de citocinas han sido
estudiados. Niveles significativamente ms altos de IL-1 se han encontrado en
pacientes con enfermedad y los elevados niveles correlacionados con los parmetros
clnicos de la enfermedad[89]. El anlisis de la concentracin de citoquinas en el GCF,
sin embargo, es complicado debido a las bajas concentraciones de GCF en pacientes
sanos. Una prueba en la que se identifica a los pacientes con un compuesto especfico
polimorfismo del gen de la IL-1 se encuentra disponible comercialmente. Los pacientes
positivos para este genotipo son 6,7 veces ms propensos a tener una enfermedad grave
que el genotipo de los pacientes negativos[99]. La utilidad de esta prueba es cuestionable,
18
Sin embargo, por varias razones. La prevalencia del genotipo-individuos positivos vara
considerablemente entre los distintos grupos tnicos. Muchos pacientes que son
genotipo-positivos no tendr la enfermedad periodontal, como la enfermedad es multifactorial. Una enfermedad grave puede estar presente en el genotipo de los pacientes
negativos. Por estas razones, las pruebas genticas no es muy til como herramienta de
diagnstico para la enfermedad periodontal[100].
V. Resea histrica de la cuantificacin de los neutrfilos

La cantidad de glbulos blancos en la saliva es un tema que tiene una larga historia de
investigacin. Los primeros estudios mostraron una variacin significativa en la cantidad
de leucocitos en la saliva de pacientes distintos[12], y que hubo un mayor nmero de
leucocitos en la saliva de pacientes con enfermedad periodontal que en pacientes
sanos[101] y los nmeros ms bajos en pacientes desdentados[102]. Basndose en estos
hallazgos, se sugiri que los recuentos de leucocitos puede ser importante en la
evaluacin de condiciones patolgicas periodontales[102]. No obstante, el origen de los
leucocitos en la saliva queda claro en este momento.
Investigaciones sobre el origen de los neutrfilos salival fue llevado a cabo, y se lleg a
la conclusin de que la fuente principal de los leucocitos en la cavidad oral es el surco
gingival, y que otras reas de la boca como las amgdalas, la lengua y la mejilla
contribuir muy pocas clulas [103]. Tambin se encontr que la gran mayora de estos
leucocitos fueron los neutrfilos[103-105]. Los autores sugirieron que los leucocitos
fueron capaces de migrar a travs de la no-tanto queratinizado pocket epitelio en la
presencia de bacterias debido a cambios en la permeabilidad del epitelio. Nuevos
estudios confirman el origen de los leucocitos como las hendiduras gingivales aislando la
enca y los dientes con frulas de acrlico[106]. Tambin se ha demostrado que tras la
plena boca extracciones, los recuentos de leucocitos en la saliva disminuy
drsticamente, apoyando ms la premisa de que el surco gingival es donde la mayora de
los leucocitos entrar en la cavidad oral[107].
Los estudios se realizaron en un intento de determinar el mecanismo de liberacin de

neutrfilos en la cavidad oral mediante la recogida de enjuagues de serie, sin embargo,
estos estudios no
19
Determinar el mecanismo que trataron de dilucidar. El autor, sin embargo, observe que
despus de un nmero de enjuagues, nmeros de neutrfilos se estanc, y consideraba
que este representa la tasa de migracin de leucocitos en la boca[14], que l denomin la
"tasa migratoria Orogranulocytic" (OMR). El OMR se calcul sumando el nmero
promedio de orogranulocyets presentes en la serie de enjuagues secuencial despus de
una meseta a nivel de las clulas fue alcanzado. La tcnica participan doce secuencial de
27 segundos enjuagues con solucin salina, con un perodo de tres segundos para la
expectoracin y sustitucin fresco con solucin salina. Las celdas se cuantificaron
mediante un Coulter counter. OMR fue calculada en pacientes con diferentes grados de
enfermedad periodontal, y estaba decidido a ser un ndice fiable de determinacin de la
tasa de migracin orogranulocyte en la cavidad oral. La OMR tambin se encontr
correlacin con los niveles de inflamacin gingival [13, 14]. Otros estudios encontraron
una alta correlacin entre el ndice gingival y OMR, que la OMR en pacientes
desdentados fue casi cero[108], que la OMR estaba relacionada con el nivel de
inflamacin, pero no a la presencia de placa o clculo, y que exista una correlacin entre
profundidades de bolsillo y OMR[104]. Otro estudio modific el protocolo original
mediante el uso de solucin salina equilibrada Hanks (HBSS) para el enjuague y un
hemocitmetro para cuantificacin de los neutrfilos. Este estudio demostr que existen
normalmente de bajo nmero de leucocitos en la salud y el desarrollo de la gingivitis se
tradujo en un aumento en la OMR[106]. Este estudio, sin embargo, no encontr una
correlacin directa entre el ndice gingival y el OMR recuentos leucocitarios y lleg a la
conclusin de que no poda ser utilizada como un ndice de la enfermedad periodontal. Se
realiz otro estudio que examin el cambio en OMR tras el tratamiento periodontal, y se
comprob que el hecho OMR disminuyeron despus de la terapia periodontal. Los
pacientes que haban embolsarse residual tras tratamiento continuado tienen una elevada
OMR. Este estudio tambin revel una diferencia altamente significativa en los recuentos
de leucocitos entre sanos y sujetos de control en el primer lavado de la serie[9]. Los
autores sugirieron que el primero enjuague puede tener valor en su propia como una
prueba de la severidad de la enfermedad. Un reciente estudio utiliz dos enjuagues con
15 mL de HBSS y combinado los dos aclarados antes de cuantificacin de los neutrfilos
utilizando un hemocitmetro[15]. Este estudio mostr que los neutrfilos son orales
pueden ser recopilados en un rpido de moda y que esta tcnica es un mtodo confiable
para la cuantificacin de los neutrfilos. Adems, significativamente elevados de
neutrfilos se encontraron en pacientes con enfermedad severa,
20
Y estos recuentos reducida en pacientes que no respondieron bien al tratamiento

quirrgico periodontal.
Otros estudios han cuantificado neutrfilos oral utilizando diversas tcnicas. Un estudio
utiliz tiras absorbentes en las hendiduras gingivales y encontraron niveles elevados de
neutrfilos en el bolsillo ms profundo y sangrado de los bolsillos y una disminucin de
los neutrfilos no quirrgico periodontal[109]. Otro estudio utilizado y lavado
intracrevicular tcnica para la recogida de los neutrfilos, y encontr una reduccin
estadsticamente significativa en el nmero de leucocitos despus del tratamiento[110].
Un estudio ms reciente examen de los neutrfilos en la placa de muestras de sitios
profundos sugiere que el uso de una sonda periodontal para el diagnstico de la
enfermedad periodontal pueden mejorarse mediante la cuantificacin de clulas blancas
de la sangre en las muestras de placa. Sin embargo, esta tcnica requiere el uso de un
microscopio en el consultorio dental[111].
21
Hiptesis
Los neutrfilos cuantificado oral desde un enjuague bucal es un prctico, rpido y no

invasivo mtodo de screening para la inflamacin y enfermedades periodontales
Una reaccin colorimtrica pueden aplicarse a un enjuague bucal que se
correlacionan con el nmero total de neutrfilos en el enjuague
La reaccin colorimtrica se puede utilizar como mtodo de screening para la
inflamacin y enfermedades periodontales
Objetivos
1) Para probar la aplicacin de la cuantificacin de los neutrfilos y una reaccin

colorimtrica como prueba de tamizaje para enfermedades periodontales
2) Correlacionar los niveles de enfermedad periodontal con niveles de neutrfilos desde
un breve enjuague bucal
3) Correlacionar los niveles de neutrfilos desde un enjuague bucal con el nivel de
cambio de color en la reaccin colorimtrica
22
Materiales y Mtodos
A. Reactivos
Suero salino estril al 0,9% se utiliz para todos los enjuagues orales
Solucin salina balanceada de Hank (HBSS + Ca + Mg) fue utilizado para la

resuspensin de muestras (Universidad de Toronto) Servicios de preparacin de medios
ABTS: [3,6-bis(dimethylamino) acridium hemi(cloruro de zinc cloruro de sal)] (AO;
Sigma Chemical, Burlington, Ontario, Canad)
ABTS SOLUCIN:
8,75 mL 10% Triton
1mm o 17,5 mL de solucin tampn de citrato

O
10.0625 mL ABTS/solucin de citrato
ABTS (600 mg/36 mL de solucin tampn de

citrato 0,05mm) o 115 L H 2 O 2
Naranja de Acridina (3,6-bis[Dimethylamino] cloruro acridium hemi - cloruro de zinc
[sal]) (AO; Sigma Chemical; Burlington, Ontario), un marcador lisosomal de

fluorescencia que da un caracterstico patrn de tincin fluorescente en neutrfilos y
ayuda a diferenciarlos de otros componentes celulares, se agreg a las muestras antes de
recuento de neutrfilos
B. Poblacin de estudio y protocolo clnico:
Este estudio fue aprobado por las juntas de revisin cientfica y tica en la Universidad
de Toronto. Los pacientes en este estudio fueron reclutados de la Graduate periodontales
y clnicas de pregrado en la Facultad de Odontologa de la Universidad de Toronto (63
hembras y 61 varones, con una edad media de 55.36 +/- 15,23 aos). El protocolo del
estudio fue
23
Explic a cada paciente, y se obtuvo el consentimiento por escrito. Una carta de

informacin fue dada a todos los pacientes para explicar la naturaleza del proyecto.
Historial mdico fue revisado y actualizado. Cualquier paciente con enfermedad
sistmica que pudiera afectar a la funcin de los neutrfilos, como el virus de la
inmunodeficiencia humana (VIH) o trastornos hematolgicos fueron excluidos del
estudio. Slo los pacientes que no haban experimentado raspado y alisado radicular en
los 3 meses anteriores fueron aceptadas. Un completo examen de tejidos blandos orales
fue realizado, y cualquier paciente que exhiben una visible lesin oral, incluyendo
cualquier ulceracin de los tejidos blandos y caries rampante, fue excluido del estudio. Se
realiz un examen periodontal, y se registraron los siguientes parmetros: Bolsas
periodontales (profundidad de sondaje mayor de 5 mm) [10] y sangrado al sondaje (6
sitios por diente). Los pacientes fueron asignados a uno de tres categoras de acuerdo con
su consumo de tabaco: los fumadores actuales y ex fumadores (ahumado dentro de los
ltimos 11 aos) y no fumadores (no fumado dentro de los ltimos 11 aos). Consulte la
tabla 1 para los datos de filiacin del paciente.
C. Cell Collection, aislamiento y recuento de protocolo:
El protocolo que se utiliza para recoger y recuento de neutrfilos oral era una
modificacin de trabajos anteriores [15]. Se pidi a los pacientes que enjuagar con 5 mL
de solucin salina al 0,9% durante 20 segundos y expectorate en un tubo Falcon 50 mL.
Despus de un periodo de espera de 2 minutos, un segundo enjuague fue tomada y se
almacenan por separado en un tubo Falcon desde el primer lavado. Todos los enjuagues
fueron tomadas antes del examen periodontal.
Todas las muestras fueron procesadas dentro de 5 horas de recogida. Enjuagar las
muestras fueron primero girar a 2500 RPM durante 5 minutos, en una centrifugadora. El
sobrenadante fue retirado de los tubos con una pipeta de 5mL y luego descarta. El pellet
fue resuspendido en 5,0 mL HBSS. 1,0 mL de esta suspensin fue removido y 4ul de
naranja de acridina fue aadido a los 1,0 mL. AO acta como un marcador lisosomal,
permitiendo que los neutrfilos debe distinguirse de otras clulas mediante microscopa
de fluorescencia. 10 uL de esta suspensin fue luego pipetted en un hemocitmetro y, a
continuacin, los neutrfilos fueron contadas visualmente mediante microscopa de
fluorescencia (microscopio Orthoplan Leitz Wetzlar, Alemania). Los neutrfilos
24
Se contaron en 16 cuadrculas de cada esquina del hemocitmetro para cada muestra. Los
neutrfilos se distingue fcilmente de otras clulas y los desechos por la caracterstica
tincin de sus ncleos multilobulated.
El clculo de la concentracin se basa en el volumen debajo de la cubierta resbalar en el

hemocitmetro. Una plaza grande, ni un milmetro cuadrado (ver el diagrama ms abajo)
tiene un volumen de 0,001 mL (longitud x anchura x altura; IE: 0.1cm x 0.1cm x 0,01
cm).
Paso 1 - contar el nmero de neutrfilos en cada cuadrado exterior

Paso 2 - La concentracin de clulas por mL = total de conteo celular en cuadrados de 4
x 2500 x factor de dilucin ejemplo contaba 237 neutrfilos total x 2500 x 10 = 5 925
000 clulas/mL
25
D. Reaccin de color y fotografa
Los restantes 4,0 mL de suspensin celular fue una clara muestra de poros en la jarra y se
par delante de una caja de luz dental. 1,0 mL de solucin ABTS fue agregado para
enjuagar las muestras y deja actuar durante 10 minutos. ABTS es una sustancia qumica
que reacciona con la enzima lisosomal y cambia de color. Una cmara digital Nikon D80
se utiliz para fotografiar las soluciones una vez aclarado previo a la adicin de ABTS y
posteriormente cada minuto hasta el final de los 10 minutos de tiempo de reaccin. Todas
las fotografas fueron tomadas en el mismo lugar, bajo las mismas condiciones de
iluminacin y con el mismo manual de los ajustes de la cmara. ImageJ, un dominio
pblico, basada en Java Software de procesamiento de imagen fue utilizado para medir el
promedio de la intensidad del color de una seleccin representativa de los enjuagues en
cada fotografa.
E. Anlisis estadstico
Se calcularon estadsticas descriptivas para todas las caractersticas demogrficas y

clnicas, resultados y factores de diagnstico utilizando medios, medias y desviaciones
estndar de las variables continuas, y frecuencias y porcentajes para factores categricos.
Debido a la naturaleza altamente sesgados positivamente de neutrfilos una
transformacin logartmica utilizada para normalizar la distribucin antes de anlisis
inferencial. Neutrfilos fueron tomados de dos enjuagues; examinar las diferencias entre
los dos enjuagues, plegando prueba F de la homogeneidad de las varianzas se utiliza para
probar si las diferencias en la varianza o la propagacin de las dos distribuciones, as
como una prueba de t pareada para examinar las diferencias de tendencia central.
La correlacin de Spearman se utiliz para examinar la asociacin entre el registro

transformado neutrfilos tanto para los enjuagues y el nmero de sitios con sangrado al
sondaje, as como nmero de bolsillos superiores a 5mm de profundidad. La correlacin
de Spearman, una tcnica no-paramtrica, se utiliz para explicar la distribucin no
normal de los dos resultados.
El cambio de color a cada minuto se calcula tomando la diferencia entre el ndice de

color en cada minuto de su valor basal en el tiempo cero. Aumento proporcional en el
cambio de color a lo largo del tiempo se compar entre lavado y enjuague 1 2 mediante
un test de Fisher para
26
Proporcionalidad, examinar las diferencias en el perfil de cambio de color a lo largo del

tiempo. La correlacin de Spearman se utiliz tambin para examinar la relacin entre el
cambio de color y recuento de neutrfilos para enjuagues con 1 y 2.
Caractersticas operativas del receptor (ROC) se construyeron curvas de mirar el

diagnstico (o cribado) caractersticas de tres minutos en el cambio de color, y el
recuento de neutrfilos para identificar a los pacientes con 10 o ms sitios que sangran al
sondaje, y por separado, cinco o ms bolsillos con una profundidad de 5mm o superior.
Las curvas ROC mostrar la sensibilidad (eje y) y uno menos la especificidad (eje x) una
herramienta de cribado. En la metodologa, el ROC estndar sugiere el punto de corte
ptimo para una herramienta de diagnstico que se considera como el punto de la curva
que se encuentra ms cerca de la esquina superior izquierda (que representa una exactitud
perfecta). Sugerido para cada punto de corte, la sensibilidad, especificidad, valor
predictivo positivo (VPP) y valor predictivo negativo (VPN) y sus intervalos de
confianza del 95% fueron calculados. A fin de calcular la VPP y VPN, las estimaciones
de la prevalencia en la poblacin de los resultados debe ser incorporado. Para 10 o ms
sitios, sangrado al sondaje, la prevalencia en la poblacin se estimaba en 50%, mientras
que para cinco o ms bolsillos con 5mm de profundidad o ms, una prevalencia del 10%
de la poblacin utilizaba.
Para determinar si las caractersticas de diagnstico vari entre los subgrupos de la

muestra del paciente, la sensibilidad, especificidad, VPP y VPN para cada punto de corte
sugeridos y sus intervalos de confianza del 95% se calcularon por separado para cada
sexo, grupo de edad (de 20 a 49, 50 a 64, 65 +), presencia o ausencia de diabetes y
tabaquismo (actual, anterior, y no fumador).
Para identificar posibles predictores de precisin, los participantes se separaron en el

diagnstico correcto (positivos verdaderos y negativos verdaderos) y diagnstico
incorrecto (falsos positivos y falsos negativos) y regresin logstica fue usada como
modelo para el correcto diagnstico de sexo, grupo de edad, la presencia o ausencia de
diabetes y tabaquismo. Todos los anlisis estadsticos se realizaron en SAS versin 9.2, y
una tasa de error tipo I de 0,05 utilizacin se utiliza para indicar la significacin
estadstica.
27
Resultados
A. Estadstica descriptiva
Significa neutrfilos desde los dos 22 enjuaga (toma 2 minutos aparte) fueron de 3,90 X
10
/mL y 2,77 X 10
/mL respectivamente. La prueba F plegada por la homogeneidad
de las varianzas no mostraron diferencias significativas entre el logaritmo de las

distribuciones de los neutrfilos de la primera y segunda enjuague (F(118,118) = 1,11; p
= 0,581). Adems, una prueba de t pareada para las diferencias en las medias de recuento
de registro revel tambin que los enjuagues fueron similares (t(119) = 0.91; p = 0.363).
Los niveles promedio de sangrado al sondaje, y el nmero de cavidades estn detallados
en la tabla 2.
B. Relacin entre la gravedad de la Enfermedad Periodontal y los niveles de
neutrfilos Oral
El anlisis se ha realizado con el fin de dilucidar la relacin entre el nivel de neutrfilos

en los enjuagues orales y la gravedad de la enfermedad periodontal. Para tener en cuenta
la distribucin no normal de sangrado al sondaje sitios y sondear las profundidades, la
correlacin de Spearman se utiliz para examinar las relaciones entre el recuento de
neutrfilos y el nmero de sitios de sangrado, y recuento de neutrfilos y el nmero de
bolsillos. Despus de la transformacin logartmica de los neutrfilos (debido a la
naturaleza asimtrica de los condes) la correlacin de Spearman mostr una correlacin
positiva significativa (Figuras 1a y 1b) entre los recuentos de neutrfilos y el nmero de
sitios sangrado al sondaje tanto en la primera como en la segunda los enjuagues (r = 0,42;
p<0,001 y r = 0,47; p <0,001). Adems, el anlisis de la correlacin de Spearman mostr
una asociacin significativa (Figuras 2a y 2b) entre los recuentos de neutrfilos y el
nmero total de bolsillo superior o igual a 5 mm en ambos los enjuagues (r = 0,49;
p<0,001 y r = 0,59; p<0,001).
C. Relacin entre los recuentos de neutrfilos y el cambio de color
La relacin entre los neutrfilos y el cambio de color se evalu mediante la correlacin
de Spearman . Una muy fuerte correlacin positiva fue encontrada entre el cambio de
color y el nivel de neutrfilos en la primera (Figura 3a) y el segundo (Figura 3b) los
enjuagues. Los coeficientes de correlacin fueron r s = 0,80; p<0,001 y r = 0,78; p<0,001
respectivamente.
28
Aunque hubo una correlacin ligeramente mayor para enjuague 2 frente a enjuagar 1, la
diferencia entre los coeficientes de correlacin no fue estadsticamente diferente (p =
0.902). Estadsticamente, no hubo diferencia en la diferencia proporcional a lo largo del
tiempo (p = 0.348) (Figura 4). Tambin se puede ver en esta figura que la tasa a la cual la
reaccin ocurre es ms rpido en los primeros minutos, y luego disminuye. Por lo tanto,
dada la similitud entre los perfiles de cambio de color (Figura 4) y la relacin
significativa con recuento de neutrfilos (Figuras 3a y 3b), no parece haber ninguna
ventaja de usar un segundo enjuague durante un primer lavado. Con el aumento de la
funcionalidad de administrar slo un enjuague a un paciente frente a 2 enjuagues
separada, proponemos el uso de slo un enjuague primario. Por lo tanto inform de todas
las posteriores se realizaron anlisis con el enjuague primario solamente.
D. Utilidad
de
la
como
instrumento de
administracin oral
cribado
reaccin colorimtrica
para
La inflamacin
A fin de determinar la utilidad de la reaccin colorimtrica como una herramienta de
cribado para la deteccin de la inflamacin oral, valores predictivos positivos y
negativos, la sensibilidad y la especificidad fueron determinados a diferentes niveles de
cambio de color, en un tiempo de reaccin de 3 minutos. Consulte el apndice para la
documentacin de este anlisis. Sobre la base de los datos en el apndice A y creacin de
curvas ROC (Figuras 5 y 6) el rango de 30 a 40 unidades de cambio de color se ha
determinado que el rango que representa el equilibrio ptimo entre sensibilidad y
especificidad para la deteccin de sangrado y bolsillos, y, por lo tanto, estos niveles
fueron analizados como puntos de corte para la prueba de tamizaje (Figura 7). Sangrado
al Sondaje de 10 o ms sitios fue escogido como el punto de corte para la prueba de
diagnstico. Este es un nmero de sitios clnicamente relevante, ya que este nmero
puede considerarse que representa una inflamacin localizada del periodonto. Asimismo,
el punto de corte de 5 bolsillos (sondear las profundidades de ms de 5mm) fue elegido
como un nmero clnicamente relevantes de sondear las profundidades - Deteccin de
unos pocos bolsillos (ie: periodontitis localizada) sera til clnicamente. La reaccin
colorimtrica no rindi una prueba de cribado til para sondear las profundidades (ver
Apndice A). Resultados utilizando 5 o ms sondear las profundidades superiores o
iguales a 5mm sern presentados aqu.
29
Utilizando una ley de corte de 30 unidades con cambio de color y 10 sitios que
sangraba sobre el sondeo, VPP, VPN, la sensibilidad y la especificidad fueron de 0,74,
0,73, 0,73 y 0,75 respectivamente (tabla 3). Con un punto de corte de 40 unidades de
cambio de color, estos valores fueron de 0,79, 0,72, 0,69 y 0,81 (Tabla 3). Los intervalos
de confianza para su anlisis en ambos umbrales de cambio de color se superponen y, por
consiguiente, no existe una diferencia estadsticamente significativa entre el nivel
utilizando como punto de corte para la prueba de tamizaje.
Los valores predictivos positivos para nmero de bolsillos 5mm no son lo

suficientemente altos para usar como una prueba de deteccin precisa, como se muestra
en la Tabla 3, con un punto de corte de 5 o ms bolsillos y 30 o 40 unidades de cambio de
color as como se muestra en el Apndice A para el resto del anlisis de corte.
A fin de determinar si las diversas caractersticas demogrficas y sistmica afecta a la

utilidad de esta prueba como una herramienta de cribado para el sangrado al sondaje,
sensibilidad, especificidad, VPP y VPN para cada punto de corte sugeridos y sus
intervalos de confianza del 95% se calcularon por separado para cada sexo, grupo de
edad (de 20 a 49, 50 a 64, 65+), presencia o ausencia de diabetes y tabaquismo (Tablas 4
y 5). No se encontraron diferencias significativas con respecto a cualquiera de estos
valores, independientemente de su sexo, edad, tabaquismo y diabetes. Debido a los
tamaos pequeos de la muestra en el grupo de diabetes, y los fumadores actuales y ex
fumadores, evaluar las diferencias en el rendimiento diagnstico fue difcil. Un anlisis
similar para esta prueba como una herramienta de cribado para sondear las profundidades
no revelaron diferencias significativas entre grupos demogrficos (Tablas 6 y 7).
Se realiz regresin logstica para ver si alguna filiacin o las caractersticas clnicas de
los pacientes fueron asociados con el diagnstico correcto, mientras que simultneamente
el ajuste para todos los dems factores medidos. Mediante el cambio de color de la
unidad 30 y unidad 40, por separado, el cambio de color en tres minutos como punto de
corte el diagnstico, slo la diabetes fue significativamente relacionados con el
diagnstico correcto (Cuadros 10 y 11). Las probabilidades de un diagnstico correcto de
10 sangrado al sondaje sitios entre los pacientes diabticos se redujo en 88% en el
cambio de color de 30 unidades, y en un 94% en el cambio de color de 40 unidades, en
comparacin
con
las
probabilidades
de
no diabticos
fueron
correctamente
diagnosticados (p=0,020 y p=0,015), respectivamente. Un
30
Tendencia similar se observa para los diabticos con las probabilidades de ser
diagnosticado correctamente con respecto a sondear las profundidades son mucho ms
pequeas que las probabilidades de una no-diabticos, sin embargo, esta asociacin no
fue estadsticamente significativa en el nivel alfa = 0,05. Tambin se observ que las
probabilidades de que una mujer se diagnostic correctamente con 5mm bolsillos
tambin puede ser reducida, en comparacin con los hombres sin embargo esto no fue
estadsticamente significativo, aunque se acerc a la significacin (p=0,066 y p=0,074
respectivamente).
E. Utilidad de neutrfilos como instrumento para detectar inflamacin oral
A fin de determinar la utilidad de los neutrfilos como una herramienta para la deteccin
de la inflamacin oral, valores predictivos positivos y negativos, la sensibilidad y la
especificidad fueron determinadas por puntos de corte de 10 o ms sitios que sangraba
sobre el sondeo y 5 o ms sondear las profundidades superiores o iguales a 5mm, en
diversos recuentos de neutrfilos, en un tiempo de reaccin de 3 minutos. Consulte el
apndice B para obtener la documentacin completa de este anlisis. Sobre la base de los
datos en el apndice B y la creacin de curvas ROC (Figuras 8 y 9), un punto de corte
5
para el recuento de neutrfilos de 1,1 X 10 clulas/mL fue elegido como representando

el equilibrio ptimo entre sensibilidad y especificidad de una prueba de tamizaje. Vpp y
VPN, la sensibilidad y la especificidad fueron de 0,79, 0,73, 0,70 y 0,81 (Tabla 3)
respectivamente cuando el screening de sangrado al sondaje. Cuando el tamizaje para
sondear las profundidades, los valores correspondientes son 0,20, 0,96, 0,71, y 0,69
(Tabla 3).
Como con la reaccin colorimtrica, la determinacin de si las caractersticas

demogrficas y sistmica afecta a la utilidad de esta prueba fue llevada a cabo. No hay
una relacin significativa entre cualquier caracterstica demogrfica o sistmica y
resultados de prueba fue encontrado (Tablas 8 y 9).
Se realiz regresin logstica para ver si alguna filiacin o las caractersticas clnicas de
los pacientes fueron asociados con el diagnstico correcto, mientras que simultneamente
el ajuste para todos los dems factores medidos. Slo la presencia de diabetes fue
significativamente relacionadas con el correcto diagnstico del sangrado al sondaje
(Tabla 12). Las probabilidades de un diabtico fueron correctamente diagnosticados de

10 sitios de sangrado al sondaje fue 88% menor en comparacin con el
31
Las probabilidades de un no-diabticos diagnosticados correctamente (p=0,031). Una

tendencia similar se observa para los diabticos con las probabilidades de ser
diagnosticado correctamente con respecto a sondear las profundidades son mucho ms
pequeas que las probabilidades de una no-diabticos, sin embargo, esta asociacin no
fue estadsticamente significativa en el nivel alfa = 0,05.
32
Discusin
Los mtodos tradicionales de deteccin de enfermedad periodontal que involucra el uso

de una sonda periodontal insertada en el surco gingival. Este examen incluye las
mediciones de profundidades de sondaje periodontal, sangrado al sondaje y nivel adjunto
clnico. Aunque este examen da un retrato preciso de la condicin del periodonto en el
momento del examen, es incapaz de detectar si hay ruptura en curso, y es imposible
predecir con precisin la probabilidad de ruptura periodontal futura[62]. Muchos
aspectos de la patogenia de la enfermedad periodontal han sido examinados para su uso
como posibles pruebas de diagnstico y como predictores de activo o futuro desglose,
pero ninguno de ellos se encuentran actualmente en uso en la prctica clnica[112].
Una prueba rpida y precisa, que puede identificar y calificar la condicin inflamatoria y
enfermedad periodontal la condicin de la cavidad oral es necesaria pero no est
disponible actualmente. Los neutrfilos son conocidos por ser un factor clave
responsables de la inflamacin y destruccin visto en la enfermedad periodontal, y hay
una creciente evidencia sugiere que la recoleccin y cuantificacin de los neutrfilos, que
estn presentes en la cavidad oral puede ser capaz de proporcionar una prueba de esta
naturaleza[15, 111]. Este estudio fue diseado para mejorar las tcnicas de un estudio
anterior de este laboratorio[15] agregando una reaccin colorimtrica para el enjuague de
los neutrfilos, para hacer la prueba ms fcilmente aplicables en el entorno clnico. As
mismo, hemos buscado mejorar an ms a los mtodos anteriores al tratar de usar slo un
enjuague, en lugar de los dos que fueron aclarados utilizados anteriormente. Adems, este
estudio fue diseado para probar la aplicacin de la cuantificacin de los neutrfilos y la
reaccin colorimtrica como prueba de tamizaje para enfermedad periodontal.
La labor realizada previamente en nuestro laboratorio [15] demostraron que es posible

recoger y cuantificar los neutrfilos de la cavidad oral mediante un rpido y no invasivo
mtodo de enjuague bucal. Ese estudio mostr tambin que la coleccin de los
neutrfilos de la cavidad oral de pacientes es consistentemente reproducible. Utilizando
un enfoque similar, una relacin significativa entre la gravedad de la enfermedad
periodontal, medido por el nmero total de sitios que sangraba sobre el sondeo o el
nmero total de sondear las profundidades
33
Los cuales fueron superiores a 5mm y bsicamente duplica o est de acuerdo con las
conclusiones anteriores. Sin embargo, algunas variaciones del enfoque original, fueron
utilizados en lugar de combinar ambos 2 aclarados utilizado en el mtodo original, la lava
se analizaron por separado a fin de determinar si era necesario utilizar dos enjuagues,
enjuague o si uno de ellos sera suficiente para propsitos de diagnstico. En este sentido,
no hubo diferencias significativas entre los recuentos de neutrfilos, tomada de la
primera y segunda aclarados. Aunque no existen diferencias notables entre los 2
enjuagues separadas se formul la hiptesis de que cuando se analiz por separado a lo
largo del tiempo, los hallazgos podran todava neutrfilos producen diferentes
dependiendo del estado relativo de salud o enfermedad de los sujetos en los tejidos
periodontales. Por lo tanto, en los anlisis restantes evaluaciones individuales de
neutrfilos en ambos los enjuagues se realizaron con el fin de determinar si un enjuague
o los otros podran ser superiores en diferenciar entre pacientes sanos y pacientes que
muestran inflamacin periodontal.
Una muy fuerte correlacin positiva fue encontrada entre el cambio de color reacciones
estudiadas en la primera y segunda muestras de enjuague y los respectivos niveles de
neutrfilos en cada lavado. Esto corrobora an ms los resultados que el cambio de color
de una muestra de enjuague puede ser utilizado como un sustituto para el recuento de
neutrfilos, realizar el enjuague de neutrfilos potencialmente tiles en el entorno clnico,
donde las mediciones directas de los niveles de neutrfilos oral requerira un
microscopio, y por lo tanto debe ser prctica. En paralelo con los recuentos de neutrfilos
real, no hubo diferencias significativas en las reacciones de color cuando se comparan la
1
y2
rinses forma obtenida del mismo paciente (figura 4). Dados estos resultados,
parece que no hay necesidad de utilizar un enfoque de dos-enjuague, lo que simplifica

considerablemente este ensayo neutrfilos hacindola an ms propicias para su uso en el
consultorio dental. En este sentido, una vez que qued claro que no hubo diferencias
significativas en los datos obtenidos cuando se utiliza un nico o doble enfoque enjuague
bucal se decidi que a partir de este punto, todos los ensayos se basa en el aclarado
inicial slo directa y, adems, contando los neutrfilos se consider innecesario en la
mayora de los casos.
34
Los neutrfilos y ensayo colorimtrico detectar con precisin la presencia de sangrado al

sondaje en 10 o ms sitios. Adems, los altos valores predictivos positivos y negativos, la
sensibilidad y especificidad muestran que esta prueba es un excelente predictor de la
presencia de sangrado al sondaje, haciendo que la reaccin colorimtrica una excelente
prueba de diagnstico para la inflamacin oral[62]. A pesar de la utilidad de este ensayo
colorimtrico para la medicin del nmero de neutrfilos oral, los datos an no
necesariamente muestran que puede ser utilizado como una herramienta de deteccin
para identificar periodontitis en pacientes que muestran profundas profundidades de
sondaje periodontal, lo que significa que el valor predictivo positivo (VPP) del ensayo de
profunda probings es baja. Esto puede explicarse de varias maneras. En general, la
prevalencia de periodontitis es baja y profundas profundidades de sondaje periodontal en
la poblacin general es de aproximadamente el 10%[4], lo que hace difcil para cualquier
prueba de deteccin de esta enfermedad a tener un alto VPP. Dicho esto, los datos de
prueba se correlacionaban bien con, y predijo la presencia de sangrado al sondaje, pero
nuevamente, esto tambin puede haber enmascarado de la capacidad potencial de esta
prueba para detectar la profundidad de sondaje periodontal, como cada paciente con un
nmero alto (5 o ms) de profundas profundidades de sondaje tambin mostraron diez o
ms sitios de sangrado.
Tambin fue interesante ver que los diabticos, de los cuales se sabe que estn en mayor
riesgo de periodontitis severa que y no diabticos, no pudo ser diagnosticada tan
exactamente con esta prueba como los no diabticos. Se ha demostrado que disminuye
los niveles de mieloperoxidasa en diabticos[59]. Esto puede ser un factor que contribuye
a la capacidad de diagnstico ms pobres insinuado en los pacientes diabticos. Muy bien
podra ser que este ensayo de enjuague funcionar bien para el cribado de inflamacin
oral en una poblacin diabtica; sin embargo, la prueba puede necesitar ser alterados para
que sea til. Un mayor tiempo de espera antes de leer el cambio de color, o un punto de
corte diferente el cambio de color puede ser requerida para el cribado de pacientes
diabticos. Habiendo dicho esto, esto tambin podra ser un problema de 'POWER' en
contraposicin a la insensibilidad de la prueba, ya que slo un pequeo nmero de
diabticos fueron incluidos en el grupo de estudio. Claramente una investigacin
adicional de esta cuestin en los diabticos va a ser importante.
35
La enfermedad periodontal, los exmenes realizados en este estudio fueron realizados por
una variedad de examinadores, incluidos los estudiantes de odontologa de pregrado y
posgrado residentes periodontal. En algunos estudios, el uso de los no-examinadores
calibrados puede ser mirado como una limitacin a los resultados. En todo caso, esta
fuente potencial de variacin habra enmascarado cualquier enjuague los atributos
positivos de la prueba, y el hecho de que, a pesar de ello, se obtuvieron resultados
positivos, se pone an ms de relieve la solidez de este ensayo colorimtrico de
neutrfilos. Esto puede ser mirado como una caracterstica positiva del diseo del
estudio, como la prueba de deteccin es destinada para su uso por parte de muchos
profesionales que no estn calibrados en trminos de su examen periodontal.
Una de las limitaciones de este tipo de estudio es el hecho de que es muy difcil
cuantificar el color y el cambio de color que sufre el ABTS reactivo es aquella en la que
se oscurece a travs de un espectro de tonos de azul. A fin de poner a prueba la reaccin
colorimtrica desarrolladas en este estudio como una herramienta de cribado, fotografas
digitales fueron tomadas como se haya producido la reaccin y analizados mediante el
software de creacin de imgenes. Sobre la base de los datos de las curvas ROC (figuras
5 y 6), los valores de 30 y 40 unidades de cambio del colour exhibi el equilibrio ptimo
entre sensibilidad y especificidad de esta prueba. Decidimos probar ambas como posibles
puntos de corte para la prueba, ya que se decidi que este rango es bastante similar en
color al nivel visual, haciendo difcil para un mdico para distinguir visualmente los
colores de esta gama de uno a otro. Esto aade una cierta flexibilidad en la lectura de los
resultados de la prueba. Es relativamente fcil distinguir entre los niveles de color ms
all de aproximadamente 40 unidades de cambio de color y debajo de aproximadamente
30 unidades de cambio de color. Sin embargo, los examinadores agreeability entre si o no
el cambio de color en 3 minutos representa un negativo o positivo de la prueba no se
realiz y deben ser examinadas en otros estudios.
Hay un problema importante en el diagnstico de las enfermedades periodontales Actualmente no hay formas de saber si un paciente va a exhibir desglose periodontal. Los
resultados de este estudio muestran que los neutrfilos desde un rpido enjuague nico
puede utilizarse para cuantificar la presencia de inflamacin oral, como exhibidos por
sangrado al sondaje del surco gingival. Adems, la adicin de un reactivo colorimtrico
para el enjuague puede utilizarse para
36
Probar con precisin la presencia de inflamacin periodontal. Ms estudios a largo plazo

sobre la base de estos mtodos son necesarios, y de hecho pueden demostrar que la carga
inflamatoria oral puede predecir quin va a romper en el futuro.
Conclusiones
Los datos obtenidos en este estudio demuestran que los niveles de neutrfilos
desde un nico enjuague bucal se correlacionan significativamente con los niveles
de enfermedad periodontal y el nivel de cambio de color en la reaccin
colorimtrica tambin se correlaciona con niveles de enfermedad periodontal
El enjuague oral de ensayo colorimtrico es til como prueba diagnstica para la

inflamacin periodontal exhibidos en pacientes de 10 o ms sitios con sangrado al
sondaje
37
Tabla 1. Los datos de filiacin del paciente y las

caractersticas clnicas
Factor
La muestra (n = 124)
Sexo N (%)
- Hembra
- Macho
La edad en aos de
media (std)
Tabaquismo N (%)
- No Fumador
- ex fumador
- fumador actual
Diabetes N (%)
- S.
- No
63 (50,8)
61 (49,2)
55.36 (15,23)
88 (72,1)
13 (10,7)
21 (17,2)
12 (9.7)
112 (90,3)
38
Tabla 2. Estadstica descriptiva sobre los resultados clnicos primarios y

secundarios
Resultado
Signifi Standard Mediana

ca
Desviacin
Mnimo
Mximo
Recuento de neutrfilos,
enjuague
6
(1 x 10 )
Recuento de neutrfilos,
enjuague
6
(2 x 10 )
Nmero de bolsillos
Sangrado al Sondaje
(# sitios)
3.90
7.09
1.23
62.63
2.77
6.32
0.85
60.50
15,73
49,03
23,33
39,03
4.50
38.00
0
0
112
148
39
5
4
B3
O
P
In
ici
ar
s
e
si
R s = 0,42
R = 0.42
2
1
-4
-2
Recuento de PMN log (x 10^6)
La figura 1a. Relacin entre el recuento de neutrfilos y el nmero de sitios que

5
4
B3
O
P
In
ici
ar
s
e
si
R s = 0,47
R = 0,47
2
1
-4
-2
Recuento de PMN log (x

10^6)
Figura 1b. Relacin entre el recuento de neutrfilos y el nmero de sitios que

40
5
4
Bolsill
os3
Log2
R
0.49
Rs=
0,49
1
0
-4
-2

10^6)
La figura 2a. Relacin entre el recuento de neutrfilos y bolsillos de

enjuague (1).
5
4
Bolsill
os3
Log2
R = 0,59
R s = 0,59
1
0
-4
-2

10^6)
La figura 2b. Relacin entre el recuento de neutrfilos y bolsillos de

enjuague (2).
41
10
M5
in
ut
o
s
A
la
s
3
C
a
m
bi
ar
R = 0 .80
= 0,80
C
ol
or
-5
-4
-2
Recuento de PMN log (x 10^6)
Figura 3a. Correlacin entre el recuento de neutrfilos y cambio de color de

enjuague (1).
6
M4
in
ut
o
s
A
la
s
3
C
a
m
bi
ar
2
R s = 0,78
R = 0,78
C0
ol
or
-2
-4
-2

10^6)
La figura 3b. Correlacin entre el recuento de neutrfilos y cambio de color de

enjuague (2).
42
150
D 100
e
s
d
e
la
l
n
e
a
d
e
b
a
s
e
C 50
a
m
bi
o
d
e
n
di
c
e
C
ol
or
0
0
Tiempo (minutos)
1
2 Enjuague enjuague
Figura 4. Cambio de color de enjuague durante 10 minutos (enjuague

enjuague 1 & 2)
10
43
Sugiri
Corte ptimo
entre 30 y 40
unidades

ms sitios que sangran al sondaje de enjuague (1).
44
Sugiri
Corte ptimo
entre 30 y 40
unidades

ms bolsillos de enjuague (1).
45
Figura 7. Ejemplos de muestras de enjuague con ABTS en 3 minutos. A.)No observ

el cambio de color. B&C) Ejemplos de cambios de color a 30 y 40 unidades de cambio
de color respectivamente D&E) Ejemplos de cambios de color mucho ms all del
nivel de umbral.
46
Sugiri Corte
ptimo = 1,1 x
10^5

diagnstico de recuento de PMN para identificar a los pacientes con 10 o ms
sitios que sangran al sondaje de enjuague (1).
47
Sugiri Corte
ptimo = 1,1 x
10^5

diagnstico de recuento de PMN para identificar a los pacientes con 5 o 1
bolsillos (enjuague).
48
Tabla 3. Caractersticas de cribado de diagnstico 3 minuto los cambios de color de

30 y 40 unidades en la identificacin de pacientes con 10 o ms sitios que sangran al
sondaje de enjuague (1).
Diagnostic
Sensibilidad
Resultado
Positivo
Especificida Predictive
d
Negativo
Predictive
Factor
10 sitios
Purga
De sondaje
5 bolsillos
Valor
Valor
Proporcin
[IC 95%]
Proporcin
[IC 95%]
Proporcin
[IC 95%]
Proporcin
[IC 95%]
0.73
[0.65, 0.81]
0.75
[0.67, 0.83]
0.74
[0.66, 0.82]
0.73
[0.65, 0.81]
Color
Cambiar
1.1 x 10^5
0.69
[0.61, 0.77]
0.81
[0.74, 0.88]
0.79
[0.72, 0.86]
0.72
[0.64, 0.80]
PMN
Contar
Unidad 30
0.70
[0.60, 0.80]
0.81
[0.73, 0.89]
0.79
[0.70, 0.88]
0.73
[0.64, 0.82]
Color
Cambiar
Unidad 40
0.81
[0.74, 0.88]
0.59
[0.50, 0.68]
0.18
[0.11, 0.25]
0.97
[0.94, 1.00]
Color
Cambiar
1.1 x 10^5
0.77
[0.70, 0.84]
0.71
0.68
[0.60, 0.76]
0.69
0.21
[0.14, 0.28]
0.20
0.96
[0.93, 0.99]
0.96
[0.63, 0.79]
[0.60, 0.78]
[0.03, 0.38]
[0.87, 1.00]
Unidad 30
Color
Cambiar
Unidad 40
PMN
Contar
* El valor predictivo positivo y valor predictivo negativo dependen de la prevalencia
de la enfermedad en la poblacin. Una prevalencia de 50% para 10 sitios sangrado al
sondaje, y 10% para 5 o ms bolsas de 5 mm ha sido asumida.
49

Factor
N
Sensibilidad Especificida PPV
El NPV
d
Proporcin Proporcin
Proporcin
Proporcin
[IC 95%]
[IC 95%]
[IC 95%]
[IC 95%]
Sexo
-F
62
0.69
[0.56, 0.83]
0.75
[0.62, 0.88]
0.74
[0.60, 0.87]
0.71
[0.58, 0.84]
-M
61
0.79
[0.67, 0.92]
0.75
[0.62, 0.88]
0.76
[0.63, 0.89]
0.78
[0.66, 0.91]
- 20 a 49
36
0.84
[0.69, 0.99]
0.67
[0.47, 0.86]
0.72
[0.53, 0.90]
0.81
[0.64, 0.97]
- De 50 a 64
40
0.73
[0.58, 0.88]
0.67
[0.50, 0.83]
0.69
[0.53, 0.85]
0.71
[0.56, 0.87]
- 65 +
25
0.60
[0.37, 0.83]
0.67
[0.45, 0.88]
0.64
[0.42, 0.86]
0.63
[0.40, 0.85]
- S.
12
0.60
[0.28, 0.92]
0.50
[0.17, 0.83]
0.55
[0.22, 0.87]
0.56
[0.23, 0.88]
- No
111
0.77
[0.67, 0.87]
0.80
[0.70, 0.90]
0.79
[0.69, 0.89]
0.78
[0.67, 0.88]
- Actual*
20
0.69
[0.44, 0.94]
Na
Na
Na
- Antiguo
13
0.33
[0.04, 0.63]
1.00
1.00
0.60
[0.30, 0.90]
- No Fumador
88
0.77
[0.67, 0.87]
0.80
[0.70, 0.90]
0.79
[0.69, 0.89]
0.78
[0.67, 0.88]
Grupo de edad
La diabetes
Tabaquismo
* Todos los fumadores actuales tenan 10 o ms sitios de sangrado al sondaje.

Evaluacin de la especificidad, VPP y VPN no eran posibles.
50
Tabla 5 . La sensibilidad, especificidad, VPP y VPN del 40 unidad color cambie en 3

Factor
N
Sensibilidad Especificida PPV
El NPV
d
Proporcin Proporcin
Proporcin
Proporcin
[IC 95%]
[IC 95%]
[IC 95%]
[IC 95%]
Sexo
-F
62
0.70
[0.60, 0.80]
-M
61
0.71
[0.61, 0.80]
- 20 a 49
36
0.79
[0.62, 0.96]
- De 50 a 64
40
0.65
[0.49, 0.82]
- 65 +
25
0.60
[0.37, 0.83]
0.75
[0.62, 0.88]
0.18
[0.07, 0.30]
1.00
0.74
[0.60, 0.87]
0.46
0.31, 0.61]
1.00
0.71
[0.58, 0.84]
0.38
[0.24, 0.53]
0.83
[1.00, 1.00]
0.67
[0.50, 0.83]
0.67
[0.45, 0.88]
0.50
[1.00, 1.00]
0.66
[0.50, 0.83]
0.64
[0.42, 0.86]
0.62
[0.67, 0.98]
0.66
[0.49, 0.82]
0.63
[0.40, 0.85]
0.71
[0.17, 0.83]
0.92
[0.85, 0.98]
Na
[0.30, 0.93]
0.90
0.83, 0.97]
Na
[0.42, 1.00]
0.78
[0.69, 0.87]
Na
1.00
[1.00, 1.00]
0.87
[0.78, 0.95]
1.00
[1.00, 1.00]
0.84
[0.75, 0.93]
0.60
[0.30, 0.90]
0.75
[0.64, 0.86]
Grupo de edad
La diabetes
- S.
12
0.80
[0.54, 1.00]
- No
111
0.74
[0.64, 0.84]
- corriente
20
0.69
[0.44. 0.94]
- Antiguo
13
0.33
[0.04, 0.63]
- No Fumador
88
0.71
[0.60, 0.82]
Tabaquismo

51

minutos para identificar 5 o ms bolsas dentro de subgrupos demogrficos de enjuague
(1).
Factor
N
Sensibilida Especificida PPV
El NPV
d
d
Proporcin Proporcin
Proporcin Proporcin
[IC 95%]
[IC 95%]
[IC 95%]
[IC 95%]
Sexo
-F
62
-M
61
0.83
[0.76,
0.90]
0.83
[0.76,
0.90]
0,59 [0,50;
0,68]
0,58 [0,49;
0,67]
0.19
[0.11,
0.26]
0.18
[0.11,
0.25]
Grupo de edad
- 20 a 49
36
- De 50 a 64
40
- 65 +
25
0.93
[0,85.
1.00]
0.81
[0.69,
0.93]
0.75
[0.58,
0.92]
0,50 [0,33;
0,67]
0,63 [0,48;
0,78]
0,53 [0,33;
0,72]
0.17
[0.04,
0.30]
0.20
[0.07,
0.32]
0.15
[0.01,
0.29]
La diabetes
- S.
12
- No
111
0.67
[0.40,
0.93]
0.90
[0.84,
0.95]
0,67 [0,40;
0,93]
0.73
[0.53,
0.92]
1.00
0,78 [0,60;
0,96]
0.83
0,56 [0,45;
0,66]
0,62 [0,53;
0,71]
0.18
[0.00,
0.40]
0.21
[0.13
0.28]
Tabaquismo
- corriente
20
- Antiguo
13
- No Fumador
88
[0,75.
0.91]
0,60 [0,32;
0,88]
0.27
[0.07,
0.46]
0.22
[0.00,
0.45]
0.17
[0.09,
0.25]
0,97
[0,94;
1,00]
0,97
[0,94;
1,00]
0,99
[0,94;
1,00]
0,97
[0,91;
1,00]
0,95
[0,86;
1,00]
0,95
[0,82;
1,00]
0,98
[0,96;
1,00]
0,96
[0,88;
1,00]
1.00
0,97
[0,93;
1,00]
52

minutos para identificar 5 bolsillos o ms, a travs de subgrupos demogrficos de
enjuague (1).
Factor
N
Sensibilida Especificidad PPV
El NPV
d
Proporcin Proporcin
Proporcin Proporcin
[IC 95%]
[IC 95%]
[IC 95%]
[IC 95%]
Sexo
-F
62
-M
61
0.79
[0.69,
0.90]
0.80
[0.69,
0.91]
0.66
[0.54, 0.78]
0.71
0.59, 0.83]
0.20
[0.10,
0.31]
0.23
[0.12,
0.35]
0.97
[0.92, 1.00]
0.97
[0.92, 1.00]
Grupo de edad
- 20 a 49
36
- De 50 a 64
40
- 65 +
25
0.93
[0.85.
1.00]
0.71
[0.57,
0.85]
0.75
[0.58,
0.92]
0.67
[0.51, 0.83]
0.69
[0.54, 0.83]
0,49
[0.29, 0.68]
0.24
[0.09,
0.38]
0.20
[0.08,
0.33]
0.14
[0.00,
0.28]
0.99
[0.95, 1.00]
0.96
[0.89, 1.00]
0.95
[0.86, 1.00]
La diabetes
- S.
12
- No
111
0.67
[0.40,
0.93]
0.85
[0.79,
0.92]
0.50
[0.22, 0.78]
0.70
[0.61, 0.78]
0.13
[0.00,
0.32]
0.24
[0.16,
0.32]
0.93
[0.79, 1.00]
0.98
[0.95, 1.00]
Tabaquismo
- corriente
20
- Antiguo
13
- No Fumador
88
0.73
[0.53,
0.92]
1.00
[1.00,
1.00]
0.78
[0.69,
0.87]
0.78
[0.60, 0.96]
0.60
[0.32, 0.88]
0.67
[0.56, 0.77]
0.27
[0.07,
0.46]
0.22
[0.00,
0.45]
0.21
[0.12,
0.29]
0.96
[0.88, 1.00]
1.00
[1.00, 1.00]
0.96
[0.92, 1.00]
53
Tabla 8. La sensibilidad, especificidad, VPP y VPN de recuento de PMN 1.1

identificar 10 o ms sangrado al sondaje sitios a travs de subgrupos demogrficos
de enjuague (1).
Factor
N
El NPV
d
Proporcin Proporcin
Proporcin Proporcin
[IC 95%]
[IC 95%]
[IC 95%]
[IC 95%]
Sexo
-F
62
-M
61
0.68
[0.54,
0.82]
0.68
[0.54,
0.82]
1.00
[1.00, 1.00]
0.62
[0.47, 0.77]
1.00
[1.00,
1.00]
0.64
[0.50,
0.79]
0.76
[0.63, 0.88]
0.66
[0.52, 0.80]
Grupo de edad
- 20 a 49
36
- De 50 a 64
40
- 65 +
25
0.70
[0.51,
0.89]
0.62
[0.45,
0.79]
0.67
[0.45,
0.89]
1.00
[1.00, 1.00]
0.83
[0.70, 0.96]
0.67
[0.45, 0.89]
1.00
[1.00,
1.00]
0.78
[0.64,
0.93]
0.67
[0.45,
0.89]
0.77
[0.59, 0.95]
0.69
[0.53, 0.85]
0.67
[0.45, 0.89]
La diabetes
- S.
12
- No
111
0.60
[0.28,
0.92]
0.70
[0.60,
0.80]
0.75
[0.47, 1.00]
0.83
[0.75, 0.91]
0.71
[0.41,
1.00]
0.80
[0.72,
0.89]
0.65
[0.34, 0.96]
0.73
[0.64, 0.83]
Tabaquismo
- corriente
0.79
20
[0.57,
1.00]
Na
Na
Na
- Antiguo
0.56
1.00
13
[0.25,
1.00
[1.00,
0.69
0.87]
[1.00, 1.00]
1.00]
[0.41, 0.98]
- No Fumador
0.67
0.84
88
[0.55,
0.87
[0,75.
0.73
0.79]
[0.79, 0.95]
0.93]
[0.61, 0.84]
54
Tabla 9. La sensibilidad, especificidad, VPP y VPN de recuento de PMN 1.1

Identificar 5 o ms bolsas dentro de subgrupos demogrficos de enjuague (1).
Factor
N
El NPV
d
Proporcin Proporcin
Proporcin Proporcin
[IC 95%]
[IC 95%]
[IC 95%]
[IC 95%]
Sexo
-F
62
-M
61
0.72
[0.61,
0.83]
0.70
[0.58,
0.82]
0.74
[0.63, 0.85]
0.62
[0.49, 0.75]
0.24
[0.13
0.34]
0.17
[0.07,
0.27]
0.96
[0.91, 1.00]
0.95
[0.89, 1.00]
Grupo de edad
- 20 a 49
36
- De 50 a 64
40
- 65 +
25
0.75
[0.60,
0.90]
0.57
[0.42
0.72]
0.88
[0,75.
1.00]
0.20
[0.06,
0.34]
0.23
0.79
[0.10,
[[0,66 a 0,92] 0.36]
0.19
0.59
[0.04,
[0.40, 0.78]
0.35]
0.67
[0.51, 0.83]
0.96
[0.89, 1.00]
0.94
[0.87, 1.00]
0.98
[0.92, 1.00]
La diabetes
- S.
12
1.00
[1.00,
1.00]
0.00
[0.00, 0.00]
- No
111
0.76
0.70
0.10
[0.00,
0.27]
0.22
[0.14,
0.96
[0.93, 1.00]
0.68, 0.84]
[0.61, 0.79]
0.30]
Tabaquismo
- corriente
20
- Antiguo
13
- No Fumador
88
0.75
[0.56,
0.94]
0.88
[0.70,
1.00]
0.67
[0.57,
0.77]
0.67
[0.46, 0.88]
0.60
[0.32, 0.88]
0.71
[0.61, 0.81]
0.20
[0.03,
0.38]
0.20
[0.00,
0.42]
0.20
[0.12,
0.29]
0.96
[0.87, 1.00]
0.98
[0.90, 1.00]
0.95
[0.90, 1.00]
55

para el correcto diagnstico* de 10 sitios de sangrado al sondaje, y 5 o ms bolsillos,
Factor
Interceptar
Sexo
-F
Sangrado al Sondaje
Beta (se)
O**
P-value
[IC 95%]
1.749
(1,169)
0.241
Bolsillos de 5 mm
Beta (se)
O**
[IC 95%]
0,152
(0.920)
-0.633
(0.540)
-0.830
(0,451)
-M
Edad
0.00 (ref)
-0.013
Continuous
(0,020)
0.53
[0.18,
1.53]
1.00
0.99
[0.95
1.03].
La diabetes
- S.
- No
Fumar
0.515
0,066
0.00 (ref)
-0,003
(0,016)
0.44
[0.18,
1.06].
1.00 1.00
0.00 (ref)
0.12
[0.02,
0.71]
1.00
0.082
-1.470
(0,845)
0.00 (ref)
0.23
[0.04,
1.20]
1.00 -
0.820
- corriente
0,436
(0,849)
- Antiguo
-0.228
(0,740)
- No
0.00 (ref)
1.55
[0.29,
8.16]
0.80
[0.19,
3.39]
1.00
0.386
-0.135
(0.609)
0,869
(0.662)
0.00 (ref)
0.87
[0.26,
2.88]
2.39
[0.65
8.72]
1.00 -
* El correcto diagnstico fue definido como verdadero positivo o negativo verdadero.

Diagnstico incorrecto fue definida como falsos positivos o falsos negativos.
** O: Odds ratio; IC: intervalo de confianza
56
0,833.
[0.97
1.03].
0.020
-2.14
(0,918)
P-value

para el correcto diagnstico* de 10 sitios de sangrado al sondaje, y 5 o ms bolsillos,
Factor
Interceptar
Sexo
-F
Sangrado al Sondaje
Beta (se)
O**
P-value
[IC 95%]
1.017
(1,125)
0.659
Bolsillos de 5 mm
Beta (se)
O**
[IC 95%]
0.004
(0.932)
-0.234
(0.530)
-0.816
(0,456)
0.44
[0.18, 1.08]
0.00 (ref)
-0,003
1.00 1.00
(0,016)
[0.97, 1.03].
-M
Edad
0.00 (ref)
-0.008
Continuous
(0,019)
0.79
[0.28,
2.24]
1.00
0.99
[0.96,
1.03].
La diabetes
- S.
- No
Fumar
0.682
0.074
0.015
-2.840
(1.170)
0.00 (ref)
0.06
[0.01,
0.58]
1.00
0.967
(0.910)
- Antiguo
-0.011
(0.724)
- No
0.00 (ref)
2.63
[0.44,
15.64]
0.99
[0.24,
4.09].
1.00
-1.362
(0.848)
0.26
[0.05, 1.35]
0.00 (ref)
1.00 0,306
0.005
(0.610)
1.01
[0.30, 3.32]
1.009
(0.662)
2.74
[0.75, 10.04]
0.00 (ref)
1.00 -

57
0,830
0.108
0.564
- corriente
P-value
Tabla 12. Modelado de regresiones logsticas de neutrfilos (1,1 x 10^5) para el

correcto diagnstico* de 10 sitios de sangrado al sondaje, y 5 o ms bolsillos, sobre las
caractersticas demogrficas y clnicas de enjuague (1).
Sangrado al Sondaje
Beta (se)
O**
P-value
[IC 95%]
-0.032
(1.088)
0,822
Bolsillos de 5 mm
Beta (se)
O**
[IC 95%]
-0.895
(1.030)
-F
-0.116
(0.516)
-0.654
(0.464)
0.52
[0.21, 1.29]
-M
0.000
(ref)
0.005
1.00
Edad
0.00
(ref)
0.006
Continuous
(0,019)
(0,017)
[0.97, 1.04].
Factor
Interceptar
Sexo
0.89
[0.32,
2.45]
1.00
1.01
0.758
[0.97
1.04].
La diabetes
0.158
1.01
0.031
- S.
-2.117
(0.981)
- No
0.000
(ref)
0.12
[0.02,
0.82]
1.00
Fumar
1.878
(0,957)
- Antiguo
-0.263
(0,708)
- No
0.000
(ref)
6.54
[1.00,
42,66]
0.77
[0.19,
3.08]
1.00
-1.139
(0,846)
0.32
[0.06, 1.68].
0.000
(ref)
1.00
0,272
0,593
(0.598)
1.81
[0.56, 5.84]
0.932
(0.653)
2.54
[0.71, 9.13]
0.000
(ref)
1.00

58
0.740
0,178
0,128
- corriente
P-value
Apndice
La sensibilidad, especificidad, VPP y VPN de lavado de 1 a 3 minutos
3 minutos
Color
5 o ms bolsas de 5mm o superior

Sensitivit Specificit
PPV
10 o ms sitios sangrado al sondaje
El Sensitivit Specificit
NPV
PPV
El
NPV
Cambiar
Y
0.003
0.9608
0.0351
0.0996
0.8895 0.9851
0.0625
0.0998
0.9544
11.498
0.9412
0.4035
0.1492
0.9841 0.8508
0.5000
0.0950
0.9437
22.014
0.8431
0.4912
0.1555
0.9657 0.7761
0.6250
0.0897
0.9331
29.269
0.8431
0.5965
0.1884
0.9716
0.7463
0.7500
0.0889
0.9366
33.034
0.8235
0.6316
0.1990
0.9699 0.7313
0.7500
0.0873
0.9331
33.880
0.8235
0.6491
0.2068
0.9707 0.7164
0.7500
0.0856
0.9297
37.958
0.7843
0.6667
0.2073
0.9653 0.7015
0.7500
0.0840
0.9263
39.508
0.7843
0.6842
0.2163
0.9662
0.6866
0.7500
0.0824
0,9229
44.800
0.7843
0.7018
0.2261
0.9670 0.6866
0.8125
0.0835
0.9284
53.970
0.7059
0.7018
0.2082
0.9555 0.6269
0.8125
0.0768
0.9159
82.150
0.6667
0.7368
0.2197
0.9521 0.5970
0.8125
0.0734
0.9098
93.740
0.6275
0.7719
0.2341
0.9491 0.5672
0.8750
0.0710
0.9100
100.029
0.6078
0.7895
0.2429
0.9477 0.5373
0.8750
0.0675
0.9044
119.733
0.5294
0.8421
0.2714
0.9415 0.4627
0,9375
0.0595
0.8972
129.492
0.4902
0.8597
0.2796
0.9382 0.4328
0,9375
0.0559
0.8921
140.946
0.4118
0.8597
0.2458
0.9293 0.3881
1.0000
0.0511
0.8910
150.208
0.3137
0.9123
0.2844
0,9229 0.2687
1.0000
0.0360
0.8724
159.327
0.2549
0.9123
0.2441
0.9168 0.2388
1.0000
0.0321
0.8679
171.407
0.1961
0.9298
0.2369
0.9124 0.1791
1.0000
0.0243
0.8590
180.121
0.1373
0,9474
0.2247
0.9081 0.1194
1.0000
0.0163
0.8503
190.029
0.0588
0.9825
0.2715
0.9038 0,0299
1.0000
0,0041
0.8375
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Evaluacin de un ensayo colorimtrico como prueba de tamizaje para

Una tesis presentada de conformidad con los requisitos

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Antecedentes: diagnstico periodontal se basa en factores clnicos observables

I. Clasificacin de las enfermedades

V. Resea histrica de la cuantificacin de los

Lista de tablas y figuras

Figura 8. Receptor-operating characteristic curve demostrando el rendimiento

Tabla 3. Caractersticas de cribado de diagnstico 3 minuto los cambios de color de

Tabla 4. La sensibilidad, especificidad, VPP y VPN del 30 unidad color cambie en 3

Introduccin y exposicin DEL PROBLEMA

La periodontitis es una enfermedad inflamatoria que se extiende a los tejidos de soporte

Las mediciones tradicionales de inflamacin oral y destruccin periodontal incluyen

se han centrado en el uso de diversas protenas que son liberados por

Los neutrfilos como medio de diagnstico de las enfermedades periodontales; sin

La diferencia clave entre las enfermedades gingivales y las restantes categoras de

Periodontitis crnica es la forma ms comn de la periodontitis. Existe una gran

Se presenta con prdida de hueso alveolar, inflamacin de la enca, sangrado al sondaje

La periodontitis agresiva se presenta de una manera diferente clnicamente de

gingivalis . Puede haber tambin anomalas en la funcin o el nivel de actividad de

Ginigivitis ha sido descrito como tener 3 distintas etapas histopatolgicas [23].

Los tejidos adyacentes al surco, que proporciona un mayor transporte de clulas

Un componente clave de la progresin del proceso de destruccin periodontal es la

los neutrfilos son producidos en la mdula sea de un adulto

sano diariamente, y aproximadamente 10

en presencia de inflamacin aguda. La

maduracin de los leucocitos neutrfilos y otros se encuentran bajo el control de diversas

Factores (CSF). La vida media en la circulacin de neutrfilos maduros es de 4-8 horas y

La ingestin de los microorganismos est mediada por las inmunoglobulinas y

increading, protenas), proteasas (elastasa, catepsinas) y la mieloperoxidasa (MPO), que

El neutrfilo descanso deriva su energa de la gluclisis anaerobia.[25] Una vez que ha

El anin superxido txicos potentally rpidamente se convierten en perxido de

El perxido de hidrgeno es un agente oxidante dbil, pueden inactivar algunas protenas

B. El papel de los neutrfilos en la enfermedad periodontal

En el sitio periodontal sano, los neutrfilos se encuentran en el epitelio y en la base del

por litro de sangre. Como el recuento de

neutrfilos disminuye el riesgo de infeccin aumenta. Hay muchas enfermedades

La periodontitis severa que afecta su denticin temporal y permanente[39]. Un defecto en

Sntesis de la MPO se inicia en la etapa de desarrollo premyelocyte neutrfilos, y termina

En macrfagos maduros en el tejido[45]. La mieloperoxidasa es considerado uno de los

intraphagosomally y extracellularly, estimulada por los neutrfilos[46].

Desde la primera vez que se sugiri para su uso en la evaluacin de la enfermedad

GCF ha demostrado ser reducida en los pacientes diabticos en comparacin con

La mieloperoxidasa acta como un potente oxidante. La mayora utiliza ampliamente los

IV. Diagnstico periodontal

Los objetivos principales en el proceso de diagnstico de la enfermedad periodontal son

medidas son rentables y fciles de usar. Sin embargo,

Estas medidas de examen no medir el nivel actual de la actividad de la enfermedad con

La presencia de clnica de la inflamacin suele estar indicado por el cardenal signos de

Es un pobre predictor de la progresin de la enfermedad[68]. Ninguna de las pruebas

Nivel adjunto clnico se determina aadiendo la medida de la recesin a la profundidad

examinado. La ms abundante de las proteasas producidas por el ligamento periodontal

El uso de evaluaciones microbiolgicas como una herramienta de deteccin tiene varios

El GCF es un exudado inflamatorio que contiene las protenas de suero, mediadores

de la enfermedad periodontal ha sido demostrado [11]. Aspartato

aminotransferasa (AST), un indicador de muerte celular, ha demostrado ser elevada en el

Diferencia podra encontrarse en sus niveles en el GCF entre enfermos y sanos.[95].

Iv. Deteccin de mediadores de la respuesta inflamatoria.

niveles fueron utilizados en este estudio, impidiendo la

prediccin del desglose en sitios especficos[96]. Esta prueba de diagnstico requiere el

V. Resea histrica de la cuantificacin de los neutrfilos

Los estudios se realizaron en un intento de determinar el mecanismo de liberacin de

Y estos recuentos reducida en pacientes que no respondieron bien al tratamiento