UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA

FACULTAD DE CIENCIAS
Departamento de qumica
Bioqumica
Por: Angelo Crtes, Javier Esteban Moreno, disson Abdiel Rodrguez, Wilmer Alexnder Sierra

SOLUCIONARIO CASO 7. Caracterizacin de la enzima piruvato

carboxilasa de Methanobacterium thermoautotrophicum.
Solucin punto 1.
Solucin tem a)

Reaccin Piruvato

Reaccin global

Solucin tem b)
Cuando hay glcidos se sintetizan grasas para la reserva. Si no hay glcidos, el
ciclo ctrico va a estar destinado a formar oxalacetato. El oxalacetato es
importante cuando no hay glucosa, porque va a ser utilizado para la
gluconeognesis. En ese caso el ciclo sera anablico.
La sntesis de acetilCoA ocurre en la mitocondria. Pero la acetilCoA es
impermeable a la membrana mitocondrial y la sntesis de cidos grasos es en
el citoplasma, por lo que hay que transformarla en citrato (AcetilCoA +
Oxalacetato), el que s es permeable a la membrana mitocondrial. El citrato se
vuelve a transformar en AcetilCoA y oxalacetato. Como suponemos que se est
en una alta concentracin de glucosa, vuelve a la membrana. El oxalacetato
con NADH + H+ (el que se libera de la glicolisis, as se regenera NAD+ oxidado,
el que es indispensable para la glicolisis) se transforma en malato, el que s
puede entrar a la mitocondria, donde puede ser retransformado en
oxalacetato, liberndose NADH + H+. Con este sistema se ha sacado la
acetilCoA y se han ingresado hidrgenos para energa. Esto permite mantener3
vas metablicas funcionando: glicoltica, sntesis de lpidos y ciclo ctrico.

Solucin tem c)
La piruvato carboxilasa contiene biotina como coenzima. La biotina funciona
como acarreador de dixido de carbono. La biotina forma con la enzima un
enlace covalente con un grupo psilon amino de la apoenzima formando el
sitio activo (Las carboxilasas se sintetizan como apocarboxilasas, carentes de
biotina y la forma activa se produce por la unin covalente de la biotina al

grupo amino de un residuo de lisina de la apocarboxilasa, reaccin catalizada

por la holocarboxilasa sintetasa). Esta unin covalente de la biotina se conoce
como biocitina. La ruptura del enlace de alta energa del ATP, conduce la
formacin del intermediario apoenzima-biotina-CO2; este complejo de alta
energa carboxilar al piruvato para formar oxalacetato

Solucin punto 2.

Solucin punto 3.
En general no es claro, cmo el uso de la electroforesis puede ser til
para realizar un diagrama de la enzima, sin embargo, lo nico que
podemos extraer es que la electroforesis separa los aminocidos o
fracciones de estas presentes en la enzima. Para este caso la enzima al
tener un peso molecular de 540 kD y en no-denaturante se observa una
fraccin en 132 kD y para denaturante se observan dos franjas, en
aproximadamente 50kD y otro en aproximadamente 80 kD. Por medio
de estas franjas, sera posible con los pesos moleculares identificar de
qu aminocido o fracciones de los mismos se est hablando.

Solucin punto 4.
Solucin tem a)
En general se sabe que la avidina se une con mucha afinidad con la
biotina, que en este caso es una coenzima de la piruvato carboxilasa
(PYC). Se puede considerar que la adivina es una glucoprotena
antagonista de la biotina, la cual se une con gran afinidad para formar
un derivado insoluble que impide su biodisponibilidad [1]. Por tal razn
es de esperarse que la actividad de la piruvato carboxilasa, que
inicialmente no era evidente, sino hasta que haba presencia de biotina,
se observe nula, pues la biotina ya no estara biodisponible para su
accin coenzimtica.

Solucin tem b)
En definitiva, la actividad de PYC es dependiente del ATP, pues como se
observa en la tabla, al sustituir este nucletido por otro, la actividad de
la enzima es completamente nula, por tal razn se necesita de la
presencia de esta coenzima para que se de la actividad de la PYC. Con
los resultados de la tabla se puede concluir que ningn otro nucletido
pude sustituir el ATP, ya que no se registr actividad alguna de los
nucletidos de remplazo.
Por otro lado, al adicionar otros nucletidos se observa que la actividad
respecto a la de control, aumenta para AMP, CTP y UTP, pero disminuye
para ADP, GTP e ITP. En general se puede entender a groso modo que los
nucletidos que disminuyen la actividad enzimtica, puede formar
complejos con la enzima y pueden actuar de manera inhibitoria de la
accin de la misma enzima, por otro lado, los nucletidos que aumentan
la actividad enzimtica, por el contrario, pueden acentuar la produccin
de oxalacetato y por lo tanto as permiten que la actividad enzimtica
sea ms efectiva.

Solucin tem c)

En general se observa que el efecto de otros metabolitos del ciclo de

Krebs sobre la accin enzimtica es minimizar dicha accin enzimtica.
El ATP, la biotina y en general las condiciones de la reaccin enzimtica,
se puede ver afectada por las interacciones entre los sustratos aadidos
y el sustrato presente, ya sea por algn tipo de competencia entre los
metabolitos presentes y el piruvato, tambin teniendo en cuenta que las
reacciones enzimticas en muchos casos pueden ser reversibles y el ATP
actuar como precursor de otras reacciones que se den en el medio
estudiado.

Solucin tem d)
Se observa que el remplazo del Mg2+ por otros cationes de igual carga
como el Mn2+, Co2+ y Zn2+ tiene un efecto de disminucin de la actividad
enzimtica, hasta el caso extremo del Zn2+ donde la accin enzimtica
es inhibida por completo. Se puede extraer que la mayora de reacciones
enzimticas son muy especficas y requieren de cofactores y condiciones
especficas para que la reaccin se lleve a cabo. El metal puede activar
el sustrato, por ejemplo, Mg2+ con ATP, acoplar la enzima directamente o
entrar en equilibrio con la enzima explotando su carga inica para
producir una unin ms favorable con el sustrato o un mejor ambiente
cataltico [2]. En general se sabe que la especificidad del metal es muy
alta, por tal razn se explica que el cambio del metal afecta de manera
significativa la reaccin enzimtica.

Solucin punto 5.
Este tipo de bacteria, pueden utilizar el CO 2 como fuente de carbono y
tambin como aceptor de electrones, reduciendo a metano y
produciendo ATP. Para lograr hacerlo, el dominio de Carboxilasa
dependiente de ATP, biotina-carboxilasas, un grupo prosttico de biotina
vinculado a un residuo de lisina especficos en el dominio de la protena
portadora-carboxilo-biotina. Por ello es que el residuo de lisina se
conserva en esa posicin, pues es all donde se permite que se den
dichas combinaciones entre la PYC y la biotina.

BIBLIOGRAFA.

[1].http://www.ecured.cu/Avidina
[2].https://nutricionpersonalizada.wordpress.com/2010/04/20/cofactores_
enzimaticos_inorganicos/