UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS

DEPARTAMENTO ACADMICO DE BIOLOGA
BIOTECNOLOGIA GENERAL

PRCTICA N 10
PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO PARA LA OBTENCIN DE
ANTOCIANINAS

ALUMNA: CUZCO BOBADILLA, CYNTHIA CATHERINE

PRACTICA N 10:

PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO PARA LA OBTENCIN DE

ANTOCIANINAS
I.

INTRODUCCIN
Una parte importante del cultivo in vitro son los Medios de Cultivo ya que en ellos se
encuentran las sustancias necesarias para el crecimiento y desarrollo de los tejidos
vegetales. Un medio de cultivo es una solucin acuosa en donde se encuentran disueltas
sales minerales que aportan los elementos esenciales Macronutrientes (N, P, K, S. Ca y
Mg) y Micronutrientes (Fe, B, Mn, Zn, Cu, Mo, y Co). Normalmente es imprescindible
una fuente de carbono, generalmente la sacarosa, debido a la escasa actividad
fotosinttica de los tejido in vitro. Adems, el medio puede ser enriquecido con
Aminocidos, Vitaminas y Reguladores del Crecimiento. (1)
El medio inorgnico ms empleado es la mezcla de sales diseada por Murashige y
Skoog (MS). Este medio se puede completar con glucosa, vitaminas, auxinas y/o
citoquininas para el cultivo de distintos tipos de tejidos y clulas. La caracterstica
distintiva del medio MS es su alto contenido de sales, especialmente las sales de K y de
N. Tambin utiliza B, Mn y Zn en cantidades altas. La manipulacin de los niveles de
auxina y citocinina va a influenciar la respuesta en cuanto a morfologa de los tejidos;
esta respuesta puede variar desde la formacin de tejido calloso no diferenciado, hasta la
formacin de races, yemas, o embrioides (2)
Los reguladores de crecimiento juegan un papel importante en el desarrollo de plantas,
determinando patrones de crecimiento, desarrollo de rganos, arquitectura de la planta y
diferenciacin celular. Dado el amplio rango de efectos de los reguladores de
crecimiento sobre las plantas, se ha investigado tambin la participacin que estos
tienen sobre la produccin de metabolitos secundarios en cultivos celulares. (3)
En el caso de las auxinas como el 2,4D, se ha observado que stas inducen la
diferenciacin de las clulas y disminuye la tasa de crecimiento celular promoviendo la
sntesis de fenoles (4).
El objetivo de la presente prctica fue lograr la preparacin de medios de cultivo para la
posterior obtencin de antocianinas.

II.

MATERIALES
Probeta
Pipeta
Matraz
Agua destilada
Medio de cultivo semi-slido de Murashige y Skoog (10 cc)
Sacarosa (3%)
cido indol actico (AIA) (50 ppm)
Agar (0.8)
Cocina elctrica
5 frascos de penicilina limpios
Papel aluminio
Autoclave

III.

MTODOS
Clculos para los volmenes a utilizar
1. Como primer paso se determin el volumen de medio de cultivo a preparar este paso
se realiza teniendo en cuenta el tamao del recipiente que utilizaremos, para la
prctica utilizamos 5 pequeos frascos de penicilina por alumno, depositando en
cada uno 2 ml de medio. (200 ml en total)
2. La cantidad de Medio de cultivo semi-slido de Murashige y Skoog (10 cc) para
preparar 200 ml de medio de cultivo fue de 15 ml. Se dividi 200 ml entre la
concentracin de 10.
3. En cuanto 2,4 - D (50 ppm) se utiliz 4 ml para preparar 200 ml de medio de
cultivo. Para determinar la cantidad a utilizar fue aplicada la frmula C1 V1 = C2 V2
4. Como fuente de energa se utiliz sacarosa (3%), para preparar 200 ml de medio de
cultivo se utiliz 6 gramos.
5. En cuanto al Agar (0.8) se determin que para la cantidad de medio a preparar deba
utilizarse 1.6 gr.
Preparacin del medio de cultivo
1. En una probeta se colocaron 80 ml de agua destilada, 20 ml de M y S, 6 gr de
azcar, 4 ml de 2,4 - D, para luego ser completado los 200 ml de medio con agua
destilada. Todo esto se disolvi hasta lograr la transparencia.
2. Esta mezcla fue trasladada a un matraz para ser calentado posteriormente, conforme
se realizaba este paso, se fue agregando 1.6 gramos de Agar y se disolvi en calor
hasta obtener una mezcla transparente.
3. Posteriormente se dispens los 2 ml de medio de cultivo en cada uno de los 5
frascos de penicilina. Luego se empaquetaron y rotularon, para posteriormente ser
llevados a la autoclave.

IV.

RESULTADOS

Frascos de penicilina conteniendo el medio de cultivo M y S (1962) con 2,4 - D,

terminado el autoclavado.

V.

DISCUSIN:

El medio de cultivo se debe elegir segn el objetico perseguido, para este caso lo q se
buscaba era obtener era la produccin de antocianinas a partir de la piel o cascara del
fruto del arndano, por ello el medio basal de Murashige y Skoog 1962 conjuntamente
mezclado con un fitorregulador de tipo auxina (2, 4 D) fue el ms adecuado.
Se ha encontrado que la concentracin inicial de sacarosa afecta el crecimiento, el
consumo de nutrientes y la produccin de metabolitos secundarios. La sacarosa adems
de actuar como principal fuente de carbono, tambin puede afectar la produccin de
metabolitos secundarios, ya sea incrementando el contenido intracelular o la
concentracin final del metabolito. (5)
Las fitohormonas son compuestos sintetizados por la planta que pueden actuar a bajas
concentraciones, mediando procesos de sealizacin relacionados con el crecimiento, la
diferenciacin o la respuesta a factores ambientales. stas tienen diversos efectos que
pueden llegar a afectar el crecimiento, el patrn de consumo de nutrientes, la
acumulacin intracelular y la produccin de metabolitos secundarios. El problema en
este tipo de estrategia es encontrar el tipo de hormona que afecta la produccin del
metabolito de inters; otro factor importante es que el efecto hormonal depende tambin
del medio de cultivo y de la presencia de otras hormonas, tal que para ser exitoso deben
combinarse todos estos factores para obtener un efecto significativo. (5)

VI.

CONCLUSIONES

VII.

Se logr realizar la preparacin del medio de cultivo M y S (1962) para la

obtencin de antocianinas.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

1. Ramrez M, Urdaneta. A, Len S. 2002. Establecimiento in vitro de explantes

adultos del guanbano (Annona muricata L.) tratados con hipoclorito de sodio. Rev.
Fac. Agron. 19(1). Caracas
2. Murashige, T. ; Skoog, F. 1962. A revised medium for rapid growth and bioassays
with tobacco tissue cultures. Physiol. Plant, 15: 473-497.
3. Dios-Lpez, Alonso de, Montalvo-Gonzlez, Efigenia, Andrade-Gonzlez, Isaac, &
Gmez-Leyva, Juan Florencio. (2011). Induccin de antocianinas y compuestos
fenlicos en cultivos celulares de jamaica (Hibiscus sabdariffa L.) in vitro. Revista
Chapingo. Serie horticultura, 17(2), 77-87. Recuperado en 28 de febrero de 2016, de
http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1027152X2011000200002&lng=es&tlng=es.
4. KOKUBO, T.; AMBEONO, Y.; NAKAMURA, M.; ISHIDA, H.; YAMAKAWA, T.;
KODAMA, T. 2001. Promotive effect of auxins on UDPglucose: flavonol
glucosyltransferase activity in Vitis sp cell cultures. Journal of Bioscience and
Bioengineering 91: 564569.

5. Arias Zabala, Mario, Angarita Velsquez, Mnica Juliana, Aguirre Cardona, Ana
Maria, Restrepo Flrez, Juan Manuel, & Montoya Vallejo, Carolina. (2009).
ESTRATEGIAS PARA INCREMENTAR LA PRODUCCIN DE METABOLITOS
SECUNDARIOS EN CULTIVOS DE CLULAS VEGETALES. Revista Facultad
Nacional de Agronoma, Medelln, 62(1), 4881-4895. Retrieved February 28, 2016,
from
http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S030428472009000100015&lng=en&tlng=es. .