UNIVERSIDAD NACIONAL DEL LITORAL

FACULTAD DE Cs. VETERINARIAS

CTEDRA DE FISIOLOGA- AO 2009
TRABAJO COMPLEMENTARIO N 2

DIFUSIN,
OSMOSIS,
ERITROSEDIMENTACIN.

FROTIS

SANGUNEO,

MICROHEMATOCRITO

PRIMERA PARTE:
TEMA: DIFUSIN Y SMOSIS
MATERIALES:
Tubos de ensayo, gradilla, solucin colorante (azul de metileno o tinta china), agua
destilada, hielo, bao termosttico, eritrocitos lavados de bovino, solucin de
cloruro de sodio al 0,9%, solucin glucosada al 50 %, pipetas, portaobjetos,
cubreobjetos, timer(cronmetro).
DIFUSIN
1) Difusin es el proceso mediante el cual las molculas de un soluto determinado
tienden a alcanzar una distribucin homognea en la solucin en la que se
encuentran, desplazndose gracias a la energa cintica de sus partculas desde
el lugar de mayor al de menor concentracin. La velocidad con la que un soluto
difunde est modificada por diferentes variables como ser : espesor de la
membrana, liposolubilidad, nmeros de canales presentes en la membrana,
temperatura, peso molecular de la sustancia, cantidad de soluto , capacidad de
disociacin, carga elctrica del soluto.
ACTIVIDAD DEL ALUMNO
TCNICA :
En tres tubos de ensayo de 15 ml coloque 10 ml de agua, en el caso del tubo N 3 el
agua deber estar bien fra o agregrsele hielo , luego de esta operacin a cada
uno de los tubos se le debe agregar una gota de colorante.
Tubo N 1 Colocar en bao termosttico.
Tubo N 2 Dejar a temperatura ambiente
Tubo N 3 Dejar a baja temperatura
Esperar 1-2 minutos y observar: Tiempo de difusin del colorante en cada tubo.
Comente y explique las causas de las diferencias que haya encontrado.

Colorante

Colorante

_____ 10 ml
H2O

TUBO N 2
Bao Termosttico

_____ 10 ml
H2O

TUBO N3
T Ambiente

TUBO

Colorante

_____ 10 ml
H2O

Baja Temp.

OSMOSIS
2) Osmosis: movimiento de molculas de agua a travs de membranas
semipermeables, regulada fundamentalmente por gradientes de concentracin y
potencial elctrico a cada lado de la membrana.
Aplicando estos principios especficamente al comportamiento de las clulas rojas de la
sangre ante diferentes gradientes de concentracin de los diversos lquidos a los que
pueden ser expuestos y conociendo que existen soluciones isotnicas , hipotnicas
e hipertnicas con respecto al contenido de la clula , observaremos los cambios
morfolgicos que sufren los eritrocitos como consecuencia de las diferencias de
concentracin con dichas soluciones.
ACTIVIDAD PARA EL ALUMNO
TCNICA
En una gradilla coloque tres tubos de ensayos, agregue dos mililitros de las siguientes
soluciones, una en cada tubo:
Tubo N 1 Solucin de Cloruro de Sodio al 0,9%.
Tubo N 2 Solucin de Glucosa al 50 %.
Tubo N 3 Agua destilada.
Luego agregue 1 ml de glbulos rojos lavados de bovino en cada tubo, mezcle
suavemente por inversin, deje reposar durante 15 minutos. Transcurrido este tiempo
en un porta objetos coloque una gota y observe al microscopio, realice la misma
operacin con el contenido de cada tubo.

Comente y explique lo observado en el microscopio respecto a la morfologa de los

eritrocitos y relacione el efecto de cada una de las soluciones. Diferencie crenacin de
hemlisis y reconozca a cada una de las soluciones como isotnica, hipotnica e
hipertnica.

ERITROCITOS LAVADOS 1 ml

_____ 1 ml

_____ 1 ml

ClNa
0,9%

_____ 1 ml

Glu
50%

Tonicidad
Isotnico

Hipotnica

H2O

Hipertnica

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SEGUNDA PARTE

TEMA: FROTIS SANGUINEO, MICROHEMATOCRITO, ERITROSEDIMENTACIN

MATERIALES
Centrifuga para microhematocrito. Varilla de vidrio. Agujas. Coleccin de agujas,
tipos, conos, medidas, bisel, butterfly. Jeringas descartables, de vidrio, de metal.
Pipetas hematolgicas. Anticoagulantes, EDTA, Citrato, oxalato y heparina. Maneas de
sujecin, mocheta y mordaza. Banda de Esmarch. Tijera, desinfectante y algodn.
Portaobjetos comunes. Portaobjeto extensor esmerilado. Tubo de Wintrobe. Pipetas
Pasteur. Jeringas con agujas de infiltracin (120). Capilares para microhematocrito
heparinizados y no heparinizados. Tabla de Kaneko. Regla milimetrada. Centrifuga
internacional. Muestra de sangre. Tubos de Khans. Agua destilada. Detergente.
Alcohol. Cepillos. Algodn. Mechero o plastilina.
FROTIS SANGUNEO: Extendido de sangre entera , que se realiza sobre un
portaobjetos , con diferentes fines diagnsticos.
El objetivo de realizar una extensin de sangre perifrica o frotis sanguneo es obtener una delgada capa
de sangre sobre un portaobjeto, que luego ser teido con una coloracin especfica con el fin de poder
evaluar la proporcin de cada leucocito ( formula leucocitaria relativa o FLR) y la morfologa de las
clulas sanguneas y derivados celulares (leucocitos, eritrocitos y plaquetas).
Los frotis sanguneos deben realizarse inmediatamente cuando se utilizar sangre fresca, o dentro de las 23 horas de la extraccin si se aade anticoagulante (preferiblemente EDTA, ya que no produce
deformacin de las clulas)

RECUERDE: para obtener un buen frotis sanguneo:

* Usar una gota de sangre pequea.
* Usar portaobjetos perfectamente limpios, desengrasados y secos.
* Usar portaobjetos extensor de bordes lisos.
* Secar rpidamente (al aire) para evitar la crenacin de los eritrocitos.
A-MTODO
1) colocar una gota de sangre, en un lado y en el centro de un portaobjeto, bien
limpio y desengrasado, previamente rotulado con una identificacin del animal
2) colocar otro portaobjeto sobre el primero unos mm por delante de la gota de
sangre con una inclinacin de 45 con respecto al porta horizontal
3) desplazarlo hacia atrs hasta que tome contacto con la gota de sangre y permitir
que por capilaridad la gota se extienda a lo largo del borde del portaobjeto
extensor.
4) Deslizar el porta con el que se hace la extensin hacia el lado contrario de donde
se coloc la gota de manera suave y rpida para permitir que la sangre quede
extendida. Solo debe pasarse una vez, de forma continua e ininterrumpida.
5) Secar el frotis al aire lo ms rpido posible con movimiento en forma de abanico,
nunca soplando o por calor. La desecacin rpida evita la deformacin de las
clulas sanguneas.

6) Teir y observar al microscopio. (actividad que se realizar en el prximo trabajo

complementario).
EL FROTIS SERA MAS GRUESO A MAYOR VELOCIDAD EN LA EXTENSION; MAS
DELGADO A MENOR NGULO ENTRE PORTAOBJETOS.

Tcnica de
frotis

PARTES DE UN FROTIS

CARACTERSTICAS DE UN BUEN FROTIS

* Uniforme, de aspecto liso y homogneo.
* Bordes largos, rectos y que no lleguen a los bordes del portaobjetos.
* Eritrocitos situados en una sola capa.

B - EVALE EL FROTIS OBTENIDO

C - REPITA SI NO SATISFACE LAS CONDICIONES
D - ENTREGUE AL DOCENTE
Mtodos de los dos cubreobjetos:
MATERIALES: Dos cubres sin grasa limpios y secos
1) Colocar en uno una pequea gota de sangre en el centro del cubre
2) Sujetarlo por los vrtices e invertirlo colocndolo sobre el otro cubre
rotndolo 45
3) Por capilaridad se extiende la gota
4) Secar

HEMATOCRITO: Porcentaje de la sangre que corresponde a su parte celular ( glbulos

rojos , glbulos blancos , plaquetas), por ejemplo si un individuo tiene un
hematocrito de 45 , se entiende que el 45% del volumen sanguneo son clulas y el
resto plasma .
MATERIALES: tubo de Wintrobe. Dimetro uniforme de 3 mm. y calibrado en doble
escala de 10 cm. con divisiones milimtricas. Pipeta de Wintrobe con pera de goma,
puede ser reemplazada por una pipeta Pasteur o bien por una jeringa y aguja de
infiltracin (mas de 10 cm de largo). Centrifuga, sangre con anticoagulantes.
MTODO
1- Tome la muestra de sangre con la pipeta o jeringa y aguja.
2- Introduzca la pipeta hasta el fondo del tubo en posicin vertical.
3- Llene el tubo, levantando la pipeta al mismo tiempo, pero sin sobrepasar el limite
de la columna de sangre, evitando as la formacin de burbujas de aire.
4- Enrase en el lmite superior de la columna graduada (0-10).
5- Centrifugue a 3000 r.p.m. durante 30 minutos, hasta volumen constante entre dos
lecturas.
6- Lea observando la separacin de los componentes sanguneos.
En la actualidad este mtodo ha sido reemplazado por la tcnica de Microhematocrito
MICROHEMATOCRITO:
MATERIALES
1- Algodn, alcohol.
2- Capilares heparinizados para microhematocrito (75 x 1 mm.)
3- Mechero de gas o plastilina.
4- Centrifuga (12.000 r.p.m.).
5- Lector de Kaneko.
MTODO
1- Cargue el tubo con sangre obtenida directamente por puncin venosa o en su
defecto del frasco de la muestra de sangre (con anticoagulante) manteniendo el tubo
en posicin horizontal.
2- Limpie con algodn el exterior del tubo.
3- Obture el extremo libre de sangre, colocando sobre la llama azul del mechero
mientras lo rota entre los dedos. Tambin puede utilizarse plastilina.
4- Centrifugue a 12.000 r.p.m. durante 3 a 5 minutos.
5- Lea utilizando la escala de referencia de Kaneko o con regla milimetrada.

VENTAJAS DEL MICROHEMATOCRITO

* Se puede obviar la extraccin de sangre venosa.

* Se obtienen resultados en 5 minutos.
* Valores globulares ms exactos y constantes.
*Por la rapidez y facilidad de la tcnica se lo puede utilizar para controles seriados
inmediatos.

TUBO DE MICROHEMATOCRITO

PLASMA

CAPA FLOGSTICA
CAPA DE GLBULOS ROJOS

ESPECIE
CANINO
FELINO

HEMATOCRITO %
37 - 55
24 - 45

EQUINO
BOVINO
OVINO
CAPRINO
PORCINO

32 - 55
30
24 - 50
24 - 48
32 - 50

ERITROSEDIMENTACIN
FUNDAMENTO:
Si se deja reposar sangre que contiene anticoagulante , los glbulos rojos van
descendiendo lentamente quedando por encima de ellos una capa de plasma. El
tiempo que dura la sedimentacin es muy constante para cada especie y en individuos
normales. La velocidad de sedimentacin depende de mltiples factores que pueden
afectar al eritrocito al plasma o a ambos , siendo algunos de ellos :
Particularidades propias de la especie
Nmero de clulas
Forma de las clulas
Tensin superficial
Contenido de fibringeno
Globulinas
Tipo y concentracin de anticoagulante
VENTAJAS
Facilidad de realizacin.
En equinos, caninos y felinos es una prueba muy sensible.
DESVENTAJAS
Requiere cantidades importante de sangre.

No puede aplicarse en todas las especies, por ejemplo vacunos y porcinos

reaccionan dbilmente a esta prueba.
ACTIVIDAD PARA EL ALUMNO
TCNICA:
Se utiliza el mtodo Westergreen el cual consiste en que la sangre (2ml) con citrato
(0,4 ml al 3,8 %), se introduce en pipetas de precipitacin (o de Westergreen)
graduadas en milmetro que se coloca en un soporte vertical o inclinado ( lo cual acelera
la velocidad de sedimentacin) a temperatura ambiente. Se observa al cabo de
diferentes lapsos de tiempo los mililitros de plasma formado.
VALORES DE REFERENCIA: mtodo vertical expresado en milmetros
Equinos
10min
Razas de deporte 4-18
Razas de trabajo 0-60

30min
3-60
50-150

1h
2hs
30-110
100-160

70-150
120-160

Caninos
Felinos

1h
0-2
1h

2hs
2-10
2hs

0-2

24hs
19-35
3hs

2-10

19-35

BIBLIOGRAFIA
Dukes, H.; Swenson, M. Fisiologa de los animales domsticos. 4ta edicin. Ed. Aguilar. Madrid. 1977.
Guyton, A. Tratado de Fisiologa Mdica. 8va edicin. Ed. Interameriana. Madrid. 1991.
Harper, H. Manual de qumica Fisiolgica. 7a edicin. Ed. El Manual Moderno. Mxico. 1980.
Kolb, E. Fisiologa Veterinaria. 2da edicin. Ed. Acribia, Zaragoza. 1976.
Schalm, O. Hematologa Veterinaria. Ed. Hemisferio Sur. 1981.
Material ofrecido por la ctedra.
William J. Reagan, Teresa G. Sanders, Denis B. DeNicola (Eds.), "Atlas de Especies Domsticas
Comunes", Editorial Harcourt.
Willard, Md; Tvedten, H. Diagnstico clnico patolgico prctico en los pequeos animales, Intermdica,
2004.
Rebar, A.H. Interpretacin del hemograma canino y felino. Nestl Purina PetCare Company 2003