I.

CUESTIONARIO V
1. Qu materiales de laboratorio serian los indicados para ser
esterilizados en estos equipos?
Todos aquellos que estn en contacto directo con nuestra muestra o
cultivo, y que puedan contaminar y cambiar el resultado de la
experiencia buscada.
2. Por qu es necesaria la esterilizacin?
Porque permite la eliminacin microbiana y por ende garantiza la no
contaminacin de muestras o cultivos, hechos fundamentales en la
validez de un resultado en el laboratorio.
3. Elabore una tabla indicando otros materiales de laboratorio que se
pueden esterilizar en autoclave y horno esterilizador.
Materiales que se autoclavan
Guantes de Caucho (Hule) 15 minutos
Sondas (base tejida) 15 minutos
Sondas (ltex) 15 minutos
Frascos de Vidrio, Cristalera en General 20 minutos
Agua en frascos 20 minutos
Jeringas de Vidrio 20 minutos
Bandeja 30 minutos
Equipo de transfusin 30 minutos
Paquetes de maternidad 30 minutos
Ropa 30 minutos
Torundas 30 minutos
Paquete quirrgico 45 minutos
Instrumental de acero inoxidable 45 minutos

II.

Materiales que se esterilizan en el horno

Matraces
Vasos de precipitado
Pinzas
Tubos de ensayo
Buretas

CUESTIONARIO VI
1. Qu es agar, de donde se extrae?
El agar-agar es una sustancia presente en algunos vegetales
marinos, extrado principalmente de las algas rojas Gelidium.
Por su alta capacidad para absorber agua, se hincha al contacto
con sta y produce un muclago viscoso que al hervir forma una
gelatina muy firme.

El agar-agar se extrae de las algas rojas Agarophytas,

principalmente de las especies Gelidium y Gracilaria, dando
agares de diversas caractersticas y calidades. Antiguamente,
en Japn, el agar se obtena solamente de algas Gelidium
(Tengusa en japons), pero a finales del s. XIX, debido al gran
consumo mundial, se empez a producir a partir de otro tipo de
algas, principalmente la Gracilaria.
2. Qu es gelatina de donde se extrae?
La gelatina es una protena natural que se obtiene del colgeno
procedente de los tejidos conectivos de animales (la gelatina
vegetal se conoce como agar-agar). Para su obtencin, se
extraen por hidrlisis las protenas del colgeno obtenidas de la
piel, hueso hervido y molido, pezuas, huesos, tendones y
vsceras de ganado vacuno, porcino, ovino, equino y avcola. Es
decir, todo lo que no vale de los animales para venderlos en las
carniceras.
3. Por qu se utiliza agua destilada en la preparacin de
los medios de cultivo?
Porque el agua destilada est libre de otros microorganismos
exteriores y as la prueba de cultivo saldr ms efectiva.
4. Elabore una tabla indicando medio de cultivo, tipo de
medio, azcar fermentable, sistema indicador, bacterias
que se siembran, como se observa la bacteria. (10
medios de cultivo).

Medio de
cultivo

Tipo de
medio

Azucar
fermenta
ble

Sistem
a
indicad
or

Bacterias
que se
siembran

Observacion

Agar
eosina y
azul de
metileno

Diferenci
al

Lactosa
/sacarosa

Agar
tioglicato

Selectivo

Tioglicato
sin
dextrosa

Streptococc
us pyogenes

varios
(presente
s en la
sangre)

Haemophilu
s

Agar
chocolate

Enriqueci
do

Eosina

Todas las
familias de
las
enterobacter
ias

Clostridium
perfringens

Y neisseria

Agar
mueller
hinton

Selectivo
y
diferenci
al

Almidon

Neisseria y
Moraxella

Agar
verde
brillante

Enriqueci
do
Selectivo
y
diferenci
al

levadura

Salmonella

Agar
cetrimida

Selectivo

Pseudomona
s aeruginosa

Agar
nutritivo

Medio
basico

P. mirabilis

Agar
sangre

Diferenci
al y
enriqueci
do

varios
(presente
s en la
sangre)

Estreptococ
os
hemoliticos

Agar
salmonell
a shigella

selectivo
y
diferenci
al

Lactosa

salmonella
shigella

Agar
estafiloco
cos 110

Selectivo
y
diferenci
al

Levadura

E. coli

III.

CUESTIONARIO VII

1. Cundo realizara cultivo por diluciones?

Si el microorganismo que se busca en un cultivo mixto se encuentra en
mayos cantidad que cualquiera de los otros microorganismos, es posible
obtenerlo en cultivo puro mediante una serie de diluciones en tubo, del
medio de cultivo apropiado. Cuando la muestra este muy diluida
contendr solamente la bacteria que buscamos. Aunque es recomendable
confirmar mediante el procedimiento de la siembra en placa la pureza del
cultivo que se aisl de la manera descrita.
2. Como se realizan los cultivos por diluciones en alimentos y agua,
explique.
El recuento por dilucin proporciona una idea del nmero de organismos
vivos presentes en una muestra que son capaces de multiplicarse en un
medio lquido determinado. Se elige un medio lquido capaz de mantener
el crecimiento de las bacterias que se estn estudiando. Este mtodo se
utiliza cuando se sospeche un nmero muy bajo de grmenes.
Mtodo

Hacer diluciones del alimento al 1/10. 1/100. 1/1000 o ms si fuera

necesario. (ver protocolo de diluciones).

Poner 1 mL de la ltima dilucin en cada uno de los tubos de la ltima

serie.

Hacer lo mismo con las dems diluciones de manera ascendente .

Incubar el tiempo necesario y a la temperatura adecuada segn el que

queramos investigar.

Pasado el tiempo de incubacin hacer la lectura y anotar el nmero de

tubos positivos de cada serie.

Consultar las tablas de probabilidad con el nmero de tubos positivos,

Estos resultados se expresarn como nmero ms probable de
microorganismos por gramo o mililitro de alimento.

3. Que otras formas de siembra existe, explique.

Siembra con rastrillo
Sobre placa de Petri, con agar adecuado y con una muestra lquida. Tambin se
utiliza cuando previamente se ha incubado en un caldo de cultivo. Utilizado para
realizar recuentos bacterianos.
Con pipeta Pasteur esterilizada o micropipeta
Se extrae pequea cantidad de lquido, se deposita sobre el agar y se esparce
utilizando rastrillo en base a una varilla de vidrio.
Siembra con asa de cultivo
Para traspasar colonias bacterianas de un agar a otro y en siembra de algunas
muestras semislidas y lquidas. Adems para siembra de tubos:
.
Siembra en profundidad o picadura
Asa hasta el fondo del agar. Para observar crecimiento de bacterias en la
profundidad de ste.
Siembra en placa por diseminacin en superficie
Para obtener colonias aisladas. Depositar asada de la muestra o cepa sobre
superficie del medio de cultivo. Desde el borde de la placa, hacia el centro de
ella en zig-zag.
Siembra con Trula
Con trula de algodn estril, se pasa en distintas direcciones sobre agar en placa
de Petri, girndola sobre si misma. Para siembra de secreciones y
antibiograma.

IV.

CUESTIONARIO VII

1. Debido a que mecanismos se producen pigmentos en

algunas colonias?
Se debe a que su formacin es dependiente de la presencia de
la luz, composicin del sustrato y la temperatura de incubacin.
Por ejemplo hay bacterias capaces de sintetizar pigmentos que
se observaran tanto en medios generales como en medios con
otros sustratos.
Tenemos a los Micrococcus, tales como M. luteus y M. roseus
producen colonias de color amarillo o rosa, respectivamente,
cuando crecen sobre un medio slido
Estn las Pseudomonas que sintetizan, segn su especie,
distintos pigmentos como por ejemplo la piocianina que azulea
los cultivos permitiendo su identificacin. La fluorescena o
pioverdina hace que las colonias adquieran un color verde
fluorescente. Este pigmento lo posee Pseudomonas
fluorescens.
.

2. Elabore una tabla indicando las caractersticas de las

colonias de las siguientes bacterias en el medio de
cultivo:

BACTERIA

E. coli

Salmonella

Klebsiella

Azotobacter

TAMAO

Colonias
medianas

Colonias
grandes

Colonias
grandes

Colonias
medianas

FORMA

circular

circular

irregular

redonda

BORDE

redondeado

entero

ondulados

Circular

ELEVACIN

Convexa

convexa

Plano
convexa

convexa

COLOR

Verde
metlico

grisceas

rosas

crema

LUZ TRANSMITIDA

Opaco

Bordes

opaco

Borde azuloso

transparente
LUZ REFLEJADA

brillante

opaco

brillante

opaco

BACTERIA

Pseudomon
a auriginosa

Staphylococus Clostridium Clostridiu

aurius
tetani
m
botulinum

Streptococos
epidermidis

TAMAO

Colonias
grandes

Colonias
medianas

Colonias
grandes

Colonias
grandes

Colonias
pequeas

FORMA

elptica

Circular

redonda

redonda

Elptica

BORDE

irregular

redondeado

enteros

lobulado

redondeado

ELEVACIN

convexa

convexa

elevada

elevada

convexa

COLOR

Plomo
metlico

blanco

Blanco
crema

Blanco
crema

Blanco
griseado

LUZ
TRANSMITID
A

Opaco

Opaca

traslucida

opaca

Traslucida

LUZ
REFLEJADA

Brillo metlico brillante

brillante

opaca

Opaco
brillante

V.

CUESTIONARIO IX-X
1. Describa cada uno de los tipos de filtro mencionados.
Filtro de tipo buja.- Constituidos por tierras de diatomea, despus de
usarse deben cepillarse y hervirse con agua estril, pueden ser de 3
tipos de acuerdo al tamao del poro: ordinario, fino e intermedio.
Filtros de porcelana.- Hechos en porcelana, sin vidrios y con varios
tamaos de poros, por el ms fino pasan nicamente ciertos virus
pequeos.
Filtros Seitz o discos filtrantes de asbesto.- Constituidos por
asbesto de tipo crislito (qumicamente de silicato magnsico)
insertados en un recipiente metlico conectado a un Erlenmeyer y
conectados a una bomba de vaco, el disco tiene varios grados de
porosidad: clarificacin, normal y especial.
Filtro de vidrio sintetizado.- Similar al anterior pero el disco est
echo de vidrio finamente molido y fundido para conseguir la adherencia
de las partculas.
Filtros de membranas.- Compuestos por celulosa o de sus steres
(nitrato de celulosa, acetato de celulosa) y politetrafluoretileno. Las
membranas tienen varios dimetros y porosidad vara entre 8 y 0.01
micras.
2. Describa la tcnica del antibiograma
Consiste en el estudio de la sensibilidad o resistencia de determinado
microorganismo (o grupo de ellos) a varios antibiticos. Se puede
utilizar para tratar un patgeno, aadir a alimentos, en definitiva para
saber cmo se comporta un germen frente a determinado antibitico.
El antibiograma se puede hacer tanto en medio lquido como en medio
slido. En nuestro caso vamos a utilizar un agar ordinario pero
modificado de manera que grmenes y antibiticos puedan difundir
correctamente: agar de Muller-Hinton.
Se utilizan para poner los antibiticos, unos discos impregnados que
llevan unas letras que nos indican el antibitico del que se trata y un
nmero que indica la concentracin en mg/ml que tena la disolucin en
la que se impregnaron.
Ej: Cloranfenicol a concentracin 30mg/ml
Adems utilizamos unas pinzas para poner los discos sobre el agar.
Pipetas estriles para sembrar la placa. Un hisopo estril para extender
por la superficie el inculo. Y asa de siembra y mechero para esterilizar.

Partimos de un cultivo puro de 48 horas. La cepa es potencialmente

patgena de humano y como crece en nuestro cuerpo, la incubacin se
ha hecho a 37C. Vamos a sembrar 0.5ml que cogemos con la pipeta
(agitando para resuspender las clulas del fondo) y lo vertemos sobre
la placa. Con el hisopo estril extendemos bien el inculo por toda la
superficie de la placa. Con las pinzas cogemos los cuatro discos de
antibiticos y los ponemos en la placa bien separados entre s y de los
bordes.
La placa se pone a incubar 48 horas a 37C y en posicin invertida. Tras
la incubacin va a aparecer toda la superficie llena de colonias y
alrededor de cada disco aparecer o no un halo de inhibicin
dependiendo de que el germen sea sensible a ese antibitico.
El tamao del halo nos va a permitir conocer el grado de sensibilidad al
antibitico o si es resistente. Puede aparecer un pequeo halo aun
siendo resistente, esto se debe a la alta concentracin de antibitico en
el medio inmediato al disco.
3. Explique sobre la actividad de los quimioterapicos
Los quimioterpicos son sustancias con actividad antimicrobiana
(microbicida o microbiosttica) con toxicidad suficientemente baja
como para poder ser administrados a un organismo por la va
adecuada, hasta alcanzar y mantener concentraciones eficaces en los
tejidos.
Las propiedades deseables de un quimioterpico
siguientes:

ideal seran las

1) Que tenga toxicidad selectiva, es decir, actuar segn el principio de

bala mgica que daa al microorganismo respetando al hospedador
2) Que sea microbicida, es decir, que mate o inactive irreversiblemente
el microorganismo, provocando la prdida total de viabilidad. En el
mundo
real,
sin
embargo,
hay
muchos
quimioterpicos
microbiostticos. En estos casos, los sistemas de defensa natural del
hospedador (mecanismos de inmunidad) hacen el resto, eliminando el
agente microbiano previamente inhibido por el quimioterpico.
3) Los microorganismos susceptibles no deberan desarrollar
resistencias al quimioterpico. Pero desgraciadamente, en muchos
casos, al cabo de un tiempo de uso del antimicrobiano comienzan a
surgir cepas microbianas resistentes al mismo. La quimioterapia es una
autntica escalada de armamentos entre los microorganismos y los
humanos, en los que ante una nueva arma de estos ltimos los
microbios pueden responder al cabo del tiempo con estrategias de
resistencia, lo que obliga a un uso racional de los quimioterpicos, y a
una bsqueda continua de nuevos agentes.

4) Que el quimioterpico sea efectivo contra un amplio espectro de

microorganismos. Pero no existe (ni existir) un solo agente capaz de
inhibir a todos los microorganismos. Algunos antibiticos son de amplio
espectro, pero no son eficaces contra todos los microorganismos. Por
otro lado, existen quimioterpicos de espectro estrecho, pero muy
selectivos contra ciertas bacterias que son patgenas importantes.
5) Que no sea alergnico, y que no tenga efectos secundarios.
6) Que permanezca de forma activa en plasma, tejidos, etc. durante el
tiempo necesario. A ser posible, que sea soluble en agua y que alcance
pronto la concentracin teraputica en los tejidos.
4. Explique la actividad de los diferentes tipos de radiaciones
Radiaciones infrarrojas: Mtodo usado en los centros de salud para
esterilizar material e instrumentos de vidrio y metlicos por tiempos no
mayores de 30 minutos desde el inicio hasta que se enfra el material,
esta radiacin alcanza temperaturas de 190C. Los microorganismos
mueren por la oxidacin como consecuencia del calor generado.
Radiaciones U.V.: Son germicidas en una longitud de onda de 260 a
270nm. Son efectivas contra bacterias no esporuladas pero algunas
esporas pueden sobrevivir si el tratamiento no se aplica con un tiempo
efectivo. Este mtodo de esterilizacin es usado en el laboratorio de
microbiologa para desinfectar superficies, aire, aguas, reas de ciruga
y cuartos estriles, no se trata de un agente esterilizante muy
adecuado pues tiene bajo poder de penetracin especialmente en
atmsferas con excesiva cantidad de polvo o en aguas sucias.
Los rayos X:Son pocamente usados debido a su alto poder de
penetracin que no ha permitido usar protectores eficaces para los
operarios, ya que son altamente letales para microorganismos, as
como para formas de vida superiores, actan ionizando las molculas a
su paso especialmente el DNA nuclear y sobre los componentes vitales
de la clula. Su aplicacin mxima en microbiologa es para producir
mutantes microbianos.
Los rayos gamma: Es an ms enrgica que los rayos X y ms eficaces
aunque acten de igual manera, tienen menor longitud de onda (

1010 a10 12 nm), atractivos para esterilizar material de alto grosor o

volumen, elmaterial de vidrio tiende a presentar un color pardusco. Se
emplean dosfuentes para generar estos rayos: el Cobalto-60 y el Cesio137 producidospor reacciones atmicas. La desventaja de este mtodo
es la accin continua de los istopos por lo cual no se puede suspender
cuando se quiera.
Los rayos catdicos: Son usados para esterilizar material quirrgico,
drogas, y otras cosas en pases avanzados. La ventaja es que el

material se puede esterilizar a temperatura ambiente despus de haber

sido empaquetado. La ventaja es que esta radiacin se genera con
aparatos que se pueden conectar o desconectar cuando se requiera. La
desventaja es que tiene bajo poder de penetracin por lo que se aplica
en artculos de pequeo tamao. El tiempo de esterilizacin es de unos
pocos segundos.
5. Describa el fundamento del agar Mac Conkey.
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios
para el desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono
fermentable, y la mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los
agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora
gram positiva. El agar es el agente solidificante.
Por fermentacin de la lactosa disminuye el pH alrededor de la colonia.
Esto produce un viraje del color del indicador de pH ( rojo neutro), la
absorcin en las colonias, y la precipitacin de las sales biliares, los
microorganismos no fermentadores de la lactosa producen colonias
incoloras.

VI.

CUESTIONARIO XI

1. Indique que tipo de microorganismos podemos encontrar

en suelos contaminados
Helicobacter pylor
Pseudomonas fluorescentes
Escherichia coli
Staphylococcus
2. En insectos como moscas, y cucarachas que podemos
encontrar?
Helicobacter pylor
Escherichia coli
3. Que medios de cultivo son los ms indicados para los
microorganismos ambientales y entero bacterias?
Pylori, Agar
Eosina-azul de metileno, Agar
SMAC CT, Agar
4. Indique el fundamento de los medios de cultivo para
moscas y cucarachas.

Pylori, Agar: determina la presencia de la bacteria Helicobacter

pylor que provienen de aguas contaminadas.
SMAC CT, Agar: permite hallar colonias de Escherichia coli las
cuales provienen de suelos contaminados, y pueden
encontrarse en las patas de moscas y cucarachas.

5. Discutir resultado del anlisis:

50C: Crecieron abundantes colonias de diferentes colores,

tamaos y forma.
75C: Se observ una disminucin de colonias con respecto a las

de 50C.
100C: Se observaron una considerable disminucin de colonias,

aunque a esta temperatura se esper que no crecieran bacterias.

Factores qumicos:
Sal: Se observaron diversas colonias de diferentes colores, a pesar

de que la sal acta como un inhibidor.

Azcar: Se observaron abundantes colonias, a pesar de que la

azcar acta como un inhibidor.

Cristal violeta: Se observaron a lo ms 7 colonias de color
violera, las cuales resistieron al inhibidor.