02/05/2014

MEDIOS DE CULTIVO

1.1.-Concepto de fermentacin
Proceso de fermentacin:
MICROORGANISMOS
Bacterias, levaduras , hongos

MEDIO DE CULTIVO

CONDICIONES AMBIENTALES

MICROORGANISMO

CO2

PRODUCTO
Intra o extra celular

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Importancia de la fermentacin en la
biotecnologa.
Procesos de fermentacin en alimentos:

Naturales o espontneas (fermentacin del

cacao,ensilado).
Inoculadas ( vino, yogurt).
Procesos de fermentacin en medios de cultivo:

Produccin de biomasa (protena unicelular,

levadura de pan, levadura de cerveza).
Obtencin de metabolitos primarios (
alcohol, cidos orgnicos) y secundarios (
enzimas, polisacridos).

CARACTERSTICAS DE LOS
MEDIOS DE CULTIVO:
Contener los elementos para la sntesis celular y para la
formacin de producto
Medio ambiente favorable para el crecimiento y/o
formacin del producto.
Econmicamente rentable.
Mxima produccin.
Adaptacin constante al proceso de fermentacin.

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Criterios utilizados en la
formulacin del medio.(II)

Recuperacin del producto.

Eliminacin de la represin catablica.
Materiales de fcil disposicin en cantidad suficiente.
Bajos costos de transporte.
Impedir que las impurezas dificulten la recuperacin de
producto.

INFLUENCIAS DEL MEDIO :

1.- En el crecimiento celular.

2.- En el procesado posterior.
3.- En la fisiologa y morfologa de los
microorganismos.

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INFLUENCIA DEL MEDIO EN

EL CRECIMIENTO CELULAR.
Los microorganismos necesitan:

Carbono
Nitrgeno
Minerales
Factores de crecimiento
Agua
Oxgeno(aerobios)

Microorganismos

Biomasa
Biosntesis y
mantenimiento celular

Condiciones medioambientales:
pH, Temperatura...

INFLUENCIA EN EL
PROCESADO POSTERIOR:

Subproductos

proceso de recuperacin ms caro y

complejo. (Procesos de purificacin de productos y

tratamiento de desechos).
Necesidad de adicionar antiespumantes
Problemas en el procesado de productos asociados con el
crecimiento microiano

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INFLUENCIA DEL MEDIO EN LA

FISIOLOGA Y MORFOLOGA DE LOS
MICROORGANISMOS.
Las condiciones relacionadas con el medio que han
demostrado tener influencia en la morfologa :
pH

Viscosidad

Cationes
divalentes

Agentes
quelantes

Morfologa

Polmeros
aniticos

Presencia de
slidos

Agentes
tensoactivos

CATIONES DIVALENTES: inducen el crecimiento en forma

de grnulos, sus efectos pueden contrarrestarse con AGENTES
QUELANTES.
La presencia de cationes influye en la floculacin de las
levaduras (importante en su sedimentacin y eliminacin en
la produccin de bebidas alcohlicas no destiladas).
El manganeso afecta a la composicin celular de la pared
celular de A. Niger.
AGENTES TENSOACTIVOS: Algunos aumentan la
velocidad de secreccin de los enzimas microbianos
extracelular.
NITRGENO: niveles bajos inducen la formacin de esporas.
AMINOCIDOS: niveles elevados inhiben la formacin de
esporas.

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CONTROL DEL
PROCESO:VARIABLES
.
1.-PH
2.-ESPUMA
3.-OXGENO
4.-TEMPERATURA
5.-REGULACIN DE LA
FORMACIN DE PRODUCTO.

Medios de fermentacin microbiana

Los compuestos petroqumicos (
hidrocarburos, alcoholes y cidos)
Cuando el petrleo era barato.
En la actualidad: materias primas
renovables que contienen azcar y
almidn y menos grasas y aceites.
Futuro: los productos de la hidrlisis de la
lignocelulosa las materias primas ms
importantes en los procesos de la
fermentacin .( La lignocelulosa representa
el 50% de la produccin anual mundial de
biomasa).

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Medios de cultivo de clulas animales.

SUEROS UTILIZADOS :
Suero fetal de ternera como medio de cultivo de clulas
de mamfero .
INCONVENIENTES: Existencias limitadas y alto
precio.
Sueros de ternera, ternera recin nacida y caballo.
FORMAS DE UTILIZAR LOS SUEROS:
Suero entre un 5-10% del volumen del medio de
cultivo, puede reducirse al 1-2%.

Medios de cultivo de clulas animales

FUNCIONES DEL SUERO EN LOS MEDIOS DE
CULTIVO.
Proporciona hormonas y factores de crecimiento
necesarios para la funcin celular.
Suministra los factores necesarios para la unin al
soporte.
Acta como agente tamponante.
Se une e inactiva o secuestra compuestos txicos.
Contienen protenas ligadoras que estabilizan y/o
transportan nutrientes y hormonas a la clula.
Suministra nutrientes para el metabolismo de la clula.
Contiene inhibidores de proteasas.
Contiene elementos traza ( Selenio..)

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Medios de cultivo de clulas vegetales.

COMPOSICIN QUMICA DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

DE CLULAS VEGETALES:
Fuente de carbono orgnico.
El ms comn la sacarosa, tambin mono y disacridos como
glucosa, fructosa, maltosa y lactosa.
Fuente de nitrgeno.
Nitratos, a veces tambin sales amnicas.
Algunas clulas necesitan nitrgeno orgnico en aminocidos (
positivo en las primeras etapas del crecimiento microbiano).
Sales orgnicas.
Reguladores del crecimiento.
Hormonas vegetales (auxinas, que inducen la divisin celular).
Citoquininas ( Regulacin del crecimiento en plantas).

MANTENIMIENTO DE LOS MEDIOS .

El medio de almacenamiento y subcultivo de cepas industriales clave

debe ser diseado para:
Conserve las caractersticas necesarias que permitan la
capacidad de produccin particular.
Minimicen la variacin gentica

POR QU UTILIZAR MEDIOS DE MANTENIMIENTO?

CEPAS

METABOLITOS
TXICOS

EFECTOS
DESESTABILIZANTES

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2.- ESTERILIZACIN DE CULTIVOS.

OBJETIVOS:

Evitar el desarrollo de microorganismos patgenos.

Evitar el desarrollo de microorganismos alterantes.
Incrementar la reproducibilidad del proceso (rendimiento,
pureza y tiempo de produccin).
MTODOS DE ESTERILIZACIN:

Calor hmedo (autoclave o chorro de vapor).

Calor seco
Radiacin ( Rayos X ,UV)
Esterilizacin qumica con lquidos o gases.
Filtracin (filtros de superficie o de profundidad).
Nuevos mtodos ( altas presiones, campos elctricos)

DONDE SE CONTROLA LA
ESTERILIDAD?
Mantener la pureza del inculo.
Esterilizar el medio de cultivo y los aditivos.
Esterilizar el material en contacto con el medio ( recipiente,
fermentador, vlvulas y conductos)
Esterilizar los gases entrantes y salientes.
Manterner las condiciones aspticas durante la
manipulacin.
Contruccin apropiada del biorreactor para su
esterilizacin y para la prevencin durante la fermentacin.

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TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO

De acuerdo a la funcin que desempean:
Generales; Crece todo tipo de m/o. Ej: agar soya,
agar nutritivo.
Selectivos: Solo permiten crecer un m/o. Ej: agar
tiosulfato, citrato, sales de bilis, sacarosa para el
Vibrio.
Diferenciales: Permiten distinguir dos o ms
bacterias por tipo de colonia. Ej: agar eosina
azul de metileno para coliformes y E. coli.
De mantenimiento: Preservan la cepa por algn
tiempo.

TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO

De acuerdo con el tipo de componentes:
MEDIO SINTTICO:
Se preparan a partir de compuestos puros en
proporciones definidas.
Su mayor aplicacin es en el rea de la
investigacin.
Son reproducibles y fciles de manejar.
Son translcidos, producen poca espuma.
Buena recuperacin del m/o.
Costo elevado.

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TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO

De acuerdo con el tipo de componentes:
MEDIO COMPLEJO:
Se preparan a partir de ingredientes de origen
natural.
Su composicin no est totalmente definida.
Su composicin vara con el tiempo, el lugar y la
forma de almacenamiento.
Son baratos.
Se utilizan en los procesos industriales.
Necesidad de estandarizacin.

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