UNIVERSIDAD VERACRUZANA

FACULTAD DE BIOLOGIA, XALAPA

E. E.: PROTISTA

MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO

DE PROTISTA

Acadmico: Dra. Ibiza Martnez Serrano,

Dra. Elizabeth Valero Pacheco y
M. en C. Margarito Pez Rodrguez

Fecha de Elaboracin: Junio 2014

Fecha de Modificacin: Julio 2016

UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE BIOLOGA

Este manual de prcticas ha sido tomado de:

Prcticas 1, 2, 3a y 3b.
Aladro-Lubel, M. A. 2009. Manual de prcticas de laboratorio de protozoos. Facultad de
Ciencias. Universidad Nacional Autnoma de Mxico. 124 pp.
Prcticas 4 15.
S/A 2009. Manual de Prcticas Protozoarios y Acelomados. Facultad de Biologa. Universidad
Veracruzana. Xalapa, Veracruz. 71 pp.

Tabla de Contenido

Introduccin ........................................................................................................................................ 1
1. Micrometra..................................................................................................................................... 2
2. Mtodos de recolecta, transportacin y mantenimiento de protozoos dulceacucolas ................ 4
3. Observacin de los protozoos ......................................................................................................... 9
4. Medios de cultivo de protozoos de vida libre ............................................................................... 16
5. Preparaciones temporales ............................................................................................................ 23
6. Preparaciones permanentes ......................................................................................................... 28
7. Foraminferos bentnicos ............................................................................................................. 39
8. Epibiontes de crustceos............................................................................................................... 44
9. Endosimbiontes de anlido e insectos .......................................................................................... 52
10. Epibiontes de peces..................................................................................................................... 59
11. Observacin de Opalinas ............................................................................................................. 66
12.Phylum Porifera ............................................................................................................................ 70
13.Phylum Cnidaria ........................................................................................................................... 73
14. PhylumPlatyhelminthes .............................................................................................................. 79
15. 1. Prctica Extramuro ................................................................................................................. 84
15.2 Protozoarios Asociados a Erizos de Mar. .................................................................................. 89
Bibliografa General ....................................................................................................................... 93

Introduccin
Actualmente el conocimiento terico de biodiversidad y principalmente de los grupos de
organismos que integra a los Protozoarios as como a los Acelomados, han sido apoyados
por diferentes tipos de publicaciones, discutiendo principalmente sus caractersticas, su
biologa, pero sobre todo su posicin taxonmica (Aladro-Lubel, 2006). Este manual
proporciona una informacin general sobre los trabajos prcticos que se pueden
implementar, utilizando material sencillo y de fcil acceso.

El objetivo general del manual es proporcionar a los alumnos la metodologa de estudio de

los protozoos, una gua de prcticas para su observacin en los diferentes hbitats
naturales, as como en los diversos sustratos orgnicos animales y vegetales, y finalmente
una serie de prcticas de carcter experimental.
Los objetivos particulares son:
1) Introducir al alumno en el estudio de los diversos grupos de protozoos, incluyendo
las principales tcnicas de recolecta, mantenimiento en el laboratorio, cultivo,
fijacin y tincin e impregnacin, entre otras.
2) Conocer los diferentes ambientes en que se encuentran y las asociaciones
simbiticas que presentan con una diversidad de organismos.
3) Comprobar con una serie de prcticas experimentales varios de los procesos
biolgicos fundamentales.
En cada prctica se incluye algunas citas bibliogrficas del tema, sin embargo, sera
recomendable continuar la bsqueda bibliogrfica por parte de los alumnos y profesores,
con el fin de enriquecer el conocimiento del tema de estudio y para enfatizar la
importancia que tiene esta actividad en el quehacer cientfico.
Este manual de prcticas ha sido compilado de:
AladroLubel, M. A. 2009. Manual de prcticas de laboratorio de protozoos. Facultad de
Ciencias. Universidad Nacional Autnoma de Mxico. 124 pp. (Prcticas 2-6)
S/A 2009. Manual de Prcticas Protozoarios y Acelomados. Facultad de Biologa.
Universidad Veracruzana. Xalapa, Veracruz. 71 pp. (Prcticas 1, 7-15).
1

1. Micrometra
Introduccin
La unidad de medida para objetos microscpicos, es la micra que equivale a una milsima
de milmetro.
El micrmetro objetivo es un portaobjetos con una escala de uno o dos milmetros,
grabada o fotografiada, dividida en 100 o 200 partes, de manera que cada divisin
corresponde a 0.01 mm, sea 10 micrmetros. Esta escala permite valorar, con cada
objeto, la del micrmetro ocular.
El micrmetro ocular es la escala arbitraria, es decir, sin medida alguna, constituida por
una lnea grabada o fotografiada y dividida en partes iguales numeradas. Debe drsele
valor en micrmetros con el micrmetro objetivo.
La calibracin del micrmetro ocular se logra colocando sobre la platina del microscopio el
objetivo micromtrico y ocular en su sitio. Ambas escalas se enfocan y se hacen coincidir
desde su inicio. Se cuenta el nmero de divisiones del objetivo que correspondan a cierto
nmero de divisiones del ocular.

En la que D es igual al dimetro que se desea conocer y N el numero de divisiones de la

regla que abarca el objetivo.
Objetivo
Habilitarse en la medicin de organismos microscpicos.
Material
Microscopios compuestos
Micrmetro objetivo
Micrmetro ocular
Portaobjetos
Cubreobjetos
Pipetas Pasteur
Preparaciones fijas de diferentes Gneros y/o Especies de Protozoarios.
2

Procedimiento metodolgico
Calibrar el microscopio utilizando los micrmetros objetivo y ocular, segn las indicaciones
siguientes y realizar de la medicin de al menos tres protozoarios.
Mediciones mediante micrmetro objetivo y ocular
El factor de calibracin se calcula de la siguiente manera:

Ejemplo: 10 divisiones del objetivo corresponden a 20 divisiones del ocular, por lo tanto:

Con lo que sabemos que cada divisin del ocular para el sistema ptico usado,
corresponde a 5 micrmetros.
El factor de calibracin se calcula una sola vez para casa objetivo de cada microscopio, de
tal manera que cuando se quiere efectuar una medicin, se realiza con el ocular
micromtrico contando las divisiones que alcanza el objetivo problema y multiplicando
este dato por el factor de calibracin determinado previamente.
1. Anotar el coeficiente micromtrico obtenido para cada uno de los objetivos (10X, 40X y
100X). Sealar con qu tipo de ocular (6X o 10X) se calcul y el nmero del microscopio
calibrado.
2. Anotar las medidas obtenidas para cada organismo.
3. Proceda a medir los distintos organismos proporcionados.
4. Haga un esquema de los organismos medidos y anote las medidas obtenidas.
5. De respuesta a las preguntas anexas a la presente prctica.
Cuestionario
1. Qu entiende por medir un organismo?
2. Cul es la importancia de realizar esta medicin?
3. De qu otra forma podramos medir a los organismos?
Bibliografa
Mille, P.S., Prez Ch. A y R Villaseor. 2001. Biologa de Protozoarios e invertebrados no
artrpodos. IPN

2. Mtodos de recolecta, transportacin y mantenimiento de

protozoos dulceacucolas
Mtodos de recolecta y transporte
La recolecta de protozoos es relativamente sencilla. Se realiza de forma manual
capturando en un frasco limpio y de boca ancha (Fig. 1A), agua del medio que contenga
detritos, animales pequeos, vegetacin, hojas en descomposicin y algas. De esta forma
se obtienen organismos de vida libre, bentnicos y ssiles, incluyendo los que se adhieren
a un sustrato orgnico. Los organismos de vida libre, incluyendo los fotosintticos y los
hetertrofos, pueden ser recuperados fcilmente de la columna de agua; algunos otros se
obtienen directamente del sustrato o entre la vegetacin o detritos. Se sugiere que el
agua y material recolectado ocupen solamente dos terceras partes del volumen del
frasco, dejando un tercio libre.
Tambin pueden ser colocados portaobjetos u otros sustratos artificiales como tiras de
plstico (ver prctica de colonizacin) en los sitios de recolecta, que se mantienen por un
corto periodo y se recuperan para observar organismos ssiles que se fijaron a estos
sustratos.
Para recolectar muestras de sedimentos en lugares someros, se utiliza un cucharn, el
cual se sumerge y arrastra. El sedimento se deposita en un frasco de boca ancha (Fig. 1B) y
se le agrega un poco de agua del medio, teniendo la precaucin de no llenar el frasco por
completo, dejando por lo menos, una tercera parte.
Para los organismos planctnicos se requiere el uso de una red de plancton de abertura
de malla de 20 a 64 m. Se realiza el arrastre de la red en una lancha por un periodo de
10-15 minutos (Fig. 2) y la muestra se coloca en un termo o frasco de boca ancha para ser
trasladada al laboratorio. La revisin de las muestras debe de realizarse inmediatamente
despus de la recolecta.
El registro de los parmetros ambientales de los sitios de la recolecta, tales como el ph,
temperatura, concentracin de oxgeno, entre otros, se debe realizar en el momento de la
recolecta utilizando el equipo o material apropiado, como en el caso de potencimetro o
tiras de pH, oxmetro y termmetro (Fig. 3). Se recomienda el monitoreo de estos
parmetros en el laboratorio en el caso de que se desee realizar algn trabajo ecolgico,
por ejemplo, la sucesin de poblaciones o comunidades de una muestra dada, lo que
permitir establecer la aparicin de las mismas respecto al cambio de las condiciones.
4

En todos los casos, las muestras deben transportarse en una hielera, debidamente
cerradas y etiquetadas con los datos de la localidad, fecha, nombre del colector y en su
caso, anotaciones complementarias.

Fig. 1. A) material necesario para la recoleccin de muestras y B) recolecta de muestras.

Fig. 2. Recoleccin con la red de plancton. A) Frasco, B) abrazadera y C) red de plancton.

Fig. 3. Equipo para la medicin del pH, temperatura y oxgeno.

Mtodos de mantenimiento en el laboratorio

Las muestras deben ser mantenidas en recipientes que ofrezcan, entre otros, la cantidad
de luz y oxgeno necesarios para los protozoos. Se recomienda el uso de cristalizadores o
de acuarios pequeos de los cuales es factible tomar muestras para llevar a cabo el
cultivo. Las muestras que contengan protozoos con pigmentos deben ser colocados en
sitios donde estn expuestos a la luz solar; las muestras de todos los dems protozoos
pueden ser mantenidas en sitios con temperatura y luz artificial y en su caso, con
oxigenacin. En el caso de las amebas, es ms recomendable el uso de cajas de Petri con
una fraccin de la muestra recolectada, mantenidas resguardadas de la luz, a temperatura
ambiente o en estufa a una temperatura de 20-25C (Fig. 4A).
Para el estudio de los protozoos desde diferentes perspectivas, se requiere un
nmero elevado de individuos, los cuales se obtienen preparando diferentes medios que
proporcionan las condiciones para su reproduccin, como son las infusiones, medios de
cultivo elaborados exclusivamente con una mezcla de sales o medios de cultivo
especficos para un gnero o especie (axnico) (ver prctica de medios de cultivo). En
algunos casos, los medios deben ser esterilizados previamente a su uso (Fig. 4B).
Los medios de cultivo deben ser revisados y remplazados constantemente para lo
cual los protozoos se transfieren a medios o infusiones nuevas con el uso de pipetas
Pasteur y en ocasiones pueden ser concentrados a travs de centrifugacin (Fig. 4C).
6

Fig. 4. Equipo de laboratorio: A) estufa, B) olla de presin y C) centrfuga

Para los protozoos que se encuentran adheridos a sustratos orgnicos es

indispensable proveer las condiciones propias para el mantenimiento de los mismos, as
se requiere de oxigenacin constante, temperatura e iluminacin adecuada, alimento
para los metazoos, etc., lo cual permite que las poblaciones no decaigan.
Material
Campo
Oxmetro
Termmetro
Papel ph o potencimetro
Red de plancton
Hielera estndar o de poliuretano
Cubeta
Cucharn
Tijeras
Frascos de boca ancha
Etiqueta
7

Masking-tape
Plumn indeleble

Laboratorio
Microscopio ptico
Microscopio estereoscpico
Estufa
Parrilla
Autoclave u olla de presin
Centrfuga
Acuarios de diferente tamao
Bombas de aireacin
Portaobjetos y cubreobjetos
Caja de Petri de diferente dimetro
Pinzas
Tijeras
Masking-tape
Plumn indeleble
Cristalizadores de diferente dimetro
Tiras de plstico
Pipetas Pasteur
Infusiones (ver medios de cultivo)

Bibliografa
Finlay, B. J., Rogerson, A. y Cowling, A. J. 1988. A beginners guide to collection, isolation,
cultivation and identification of freshwater Protozoa. CCAP. Titus Wilson y Son LTD,
Kendal.
Jahn, T. L., Bovee, E. C. y Jahn, F. F. 1979. How to know the Protozoa.2 da ed. Wm. C.
Brown, Dubuque, Iowa.
Kudo, R. R. 1977. Protozoology.5ta ed. Charles C. Thomas Pub.Springfield.

3. Observacin de los protozoos

En el estudio taxonmico de los protozoos, es imprescindible seguir una serie de pasos
con el fin de llegar a una identificacin adecuada de la (s) especie (s), por lo que es
importante tomar en cuenta las siguientes consideraciones:
1. La observacin en vivo de los organismos es fundamental y no puede ser
sustituida por slo la observacin de los organismos teidos e impregnados. Ambas
observaciones son fundamentales en el estudio de los protozoos.
2. Para la observacin de los protozoos en vivo, se recomienda las tcnicas
microscpicas de campo claro y obscuro, la utilizacin de los microscopios de contraste
diferencial y de fases, este ltimo, es satisfactorio para las especies muy planas. La
revisin preliminar de la muestra recolectada, bajo el microscopio estereoscpico es
recomendable, para localizar a los protozoos, especialmente las especies grandes.
3. Para la observacin microscpica de los protozoos, se debe tomar una cantidad
mnima de la muestra recolectada con una pipeta Pasteur, inmediatamente despus se
agrega una gota sobre el portaobjetos (2.6 x 7.6 cm), y sobre sta se coloca el
cubreobjetos (22 x 22 mm o 32 x 22 mm). Slo se requiere una pequea gota para la
observacin de los protozoos, si se excede la cantidad de agua, el cubreobjetos quedar
flotando sobre el portaobjetos, en caso de que esto sucediera, es recomendable utilizar
una pequea porcin de un papel absorbente y colocarlo a un lado de la preparacin para
eliminar el sobrenadante. Algunos protozoos requieren de un tiempo para recuperarse del
paso de la pipeta al portaobjetos y de unos minutos para volverse a activar y poderse
observar, ste es el caso de los protozoos que se encuentran en el detrito, los cuales
requieren de unos minutos para separarse de este. Es importante sealar, que es
indispensable el uso del cubreobjetos para no ensuciar los objetivos y mejorar la calidad
de la imagen. Tanto los portaobjetos como los cubreobjetos debern estar perfectamente
limpios, antes de su uso. Las muestras recolectadas debern ser revisadas lo antes posible,
con el fin de observar el mayor nmero de especies y en su mejor estado morfolgico y
fisiolgico. Cuando las muestras son mantenidas en sus recipientes originales, la mayora
de las especies se encontrarn cerca del sedimento o asociado a la pelcula superficial o
sobre las plantas y animales recolectados, por lo que son los sitios adecuados para la
captura de los protozoos.
4. En la rutina del estudio de los protozoos, primero se debe utilizar la lupa y el
objetivo de 10x, pasando posteriormente al 20x y 40x; es preferible utilizar una
iluminacin moderada.
9

Muchas especies de protozoos, principalmente los ciliados se caracterizan por un

rpido movimiento, por lo que varios autores han sugerido mtodos (fsicos y qumicos)
que permiten retardar el movimiento de stos, con el fin de poder observar varios detalles
estructurales. Ejemplos de estos son: el sulfato de nquel al o.1% (qumico) que los
inmoviliza y la metilcelulosa o resina Polyox (fsico) las cuales incrementan la viscosidad
del medio, disminuyendo por lo tanto la movilidad de los ciliados (Fig. 1). Sin embargo, el
uso de stos puede cambiar la forma de la clula o causar alteraciones posteriores de
varias estructuras.

Fig. 1. Preparacin para la observacin de los protozoos.

Otros mtodos son utilizados para inmovilizar a los protozoos, uno muy sencillo es el
usar una porcin pequea de papel absorbente a un lado del cubreobjetos para quitar el
exceso de lquido, de esta manera el cubreobjetos se empuja contra el portaobjetos y los
protozoos quedan atrapados, pudindose observar durante varios minutos, antes de que
se distorsionen. Si es necesario se puede agregar a un lado del cubreobjetos una gotita del
lquido, para liberar los protozoos de su compresin terminal.
Un mtodo sugerido por vario autores es el de colocar los organismos en un
portaobjetos y sobre ste un cubreobjetos, al cual previamente se le pone en los cuatro
extremos una porcin mnima de vaselina, posteriormente se presiona sobre estos cuatro
extremos con el mango de una aguja de diseccin, hasta que los ciliados sean retenido
firmemente entre el portaobjeto y el cubreobjeto (Fig. 2 A, B, C). A medida que aumenta
la presin los ciliados disminuyan su movimiento y se observan ms transparentes,
permitiendo a su vez la localizacin de varios orgnulos como aparato nuclear, vacuola
contrctil, en muchos casos el aparato oral y extrusomas entre otros.

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Fig. 2. Preparacin utilizando vaselina en los cuatro extremos del cubreobjetos.

Varias especies de ciliados son muy frgiles y se distorsionan o fragmentan

realizando este procedimiento de presin, por lo que su observacin se deber hacer
directamente utilizando objetivos de menor aumento y grabarlos por medio de un video,
con el fin de observar su comportamiento de desplazamiento. En lo general, para todos
los protozoos es importante su registro utilizando para ello una cmara de video y una
cmara fotogrfica adaptada al microscopio.
Adicionalmente, se debe hacer un esquema de los organismo en estudio, incluyendo
el mayor numero de estructuras visibles, as como, la medicin de los organismos
(longitud y anchura) y los orgnulos que los caracterizan (ver medicin).
5. Con el objetivo de obtener mayor nmero de individuos es importante elaborar
diferentes medios de cultivos, los cuales promovern la reproduccin de muchas de las
especies que se encuentran en la muestra recolectada (ver medios de cultivo).
6. Despus de la observacin en vivo de los protozoos (Fig. 3 A y B), as como su
registro iconogrfico, fotogrfico y video, es fundamental llevar a cabo diferentes tcnicas
de tincin e impregnacin (ver tcnicas). Los protozoos teidos conservados en las
preparaciones permanentes, tambin se les registrar iconogrfica y fotogrficamente.
Tanto los organismos en vivo como los procesados con las diferentes tcnicas, debern se
medidos, utilizando para ello un microscopio calibrado (ver medicin de los protozoos).
7. Si es posible, el uso del microscopio de barrido tambin es recomendable porque
permite tener una imagen tridimensional de los organismos, as como detalles de su
morfologa externa, los cuales no se revelan con otros medios.

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Fig. 3. Microscopios A) ptico y B) estereoscpico.

Medicin de los protozoos

Es de suma importancia en el estudio de los protozoos, conocer el tamao que tienen. Se
puede tener una estimacin aproximada (1) o una ms precisa (2). La unidad de medicin
utilizada para los protozoos es el micrmetro (la millonsima parte del metro o la
milsima parte del milmetro).
1. Con un ocular de 10x y un objetico de 10x, el dimetro de campo del microscopio
es de 1,600 m. S un organismo ocupa la mitad del dimetro de campo, ste tendr
aproximadamente un tamao de 800 m. S el organismo ocupa una 1/5 parte de campo,
medir ms o menos 320 m (Fig. 4). Con un objetivo de 40x, ocular 10x, el dimetro de
campo es de 372 m, si l organismo ocupa la mitad del campo, el organismo medir
alrededor de 186 m y si ocupa 1/5 parte tendr cerca de 75 m.

Fig. 4 Medicin aproximada de los protozoos con un objetivo 10x y ocular 10x.
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2. Para calibracin del microscopio se requiere de una reglilla ocular micromtrica y

una reglilla objetivo micromtrica. Estas se colocan respectivamente en el tubo ocular y en
la platina del microscopio. Se enfocan ambas y centran ambas haciendo coincidir en
ambos extremos ambas escalas, colocndolas paralelamente y sobrepuestas. Con mucho
cuidado y observando muy bien, ver que otras divisiones de la dos reglillas coinciden
exactamente, si con varias, se debe tomar la ms alejada de las primeras. Se cuentan las
divisiones que coinciden en ambas reglillas (Fig. 5). Las divisiones de la reglilla objetivo se
multiplican por 10 de entre el nmero de divisiones de la reglilla ocular. Si por ejemplo,
encontramos que 16 divisiones de la reglilla del ocular corresponden a 23 de la reglilla
objetivo tendremos:
Coeficiente micromtrico=

= 14.3 m

Esta cifra representa el valor en micrmetros de cada una de las divisiones del
micromtrico ocular. Debe calibrarse de la misma forma con los otros objetivos del
microscopio 40x y 100x, para este ltimo se usa el aceite de inmersin para enfocar la
reglita del objetivo. Al observar al microscopio un objeto que se a va a medir, se utiliza la
reglita ocular calibrada (cada divisin de esta corresponde a determinado nuero de
micrmetros ej. 14.3) se cuentan el numero de divisiones que ocupa el objeto a medir y se
multiplican por el coeficiente micromtrico. De esta manera se obtendr la medida en
micrmetros del objeto. Siempre debe usarse en el microscopio que se calibr y con las
mismas lentes y tubo, con la finalidad de que las medidas no varen.

Fig. 5 Calibracin del microscopio, utilizando las reglillas ocular y objetivo (modificado del
manual de Carl Zeiss de Mxico).
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Registro iconogrfico, fotogrfico y video se los protozoos

Es de suma importancia que adems de observar a los protozoos, se tengan varias formas
de registro de las especies. Una de ellas, la ms simple, es hacer un dibujo a lnea. Al
realizar el dibujo de un objeto de estudio, en este caso de los protozoos, nos permite
registrar un mayor nmero de detalles, como su forma, posicin de los orgnulos
intracitoplsmicos (ncleo, citosoma, vacuolas contrctiles incluyendo su dimensin),
orgnulos de locomocin (tamao, grosor, densidad y posicin de los flagelos y cilios), y
de esta maneta tener una imagen mental que ser recordada. Cuando se tenga la
oportunidad de volverlos a observar en vivo, otras anotaciones como el comportamiento
de la vacuola contrctil, el contenido de las vacuolas digestivas, patrones d locomocin, la
estructura del citosoma y la presencia de extrusomas deben ser tambin contempladas. Al
hacer un dibujo completo de una especies es necesario incluir sus medidas (ver medicin
de los protozoos) y observar varios individuos repetidamente e incluir el color que tienen
los diversos orgnulos citoplsmicos. Algunos autores sugieren que los dibujos de cada
una de las especies se hagan en tarjetas blancas, anotando su tamao y su clasificacin
correspondiente y de esta manera ordenarlos taxonmicamente. Se pueden incorporar
adicionalmente otros datos (al reverso), como el nombre y caracterizacin del lugar donde
se recolect y la fecha y posteriormente se irn incorporando los datos de las nuevas
recolecciones en donde se observ y la fecha.
Para hacer dibujos con ms precisin, existen accesorios microscpicos como la
cmara lcida o clara, con la cual se puede elaborar un dibujo detallado y proporcionado
del organismo, previamente inmovilizado. Con la cmara lcida se logra reflejar el papel
en donde se va a elaborar el esquema y la punta del lpiz dentro del campo microscpico
donde se encuentra el organismo, facilitando de esta manera el dibujo.
Existen actualmente una gran cantidad de accesorios microscpicos adaptados a los
microscopios que nos permiten tener el registro de los protozoos en fotografas y videos.
Todo este material es fundamental para el estudio completo de las diferentes especies de
protozoos.
Tanto el dibujo como la toma de fotografas debe realizarse de los organismos vivos
como los que has sido tratados con las diversas tcnicas de coloracin e impregnacin, en
el caso de los organismos en vivo se pueden utilizar diferentes tcnicas microscpicas
como contraste de fases, diferencial campo claro y obscuro.

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Material
Microscopio ptico con contraste diferencial y de fases
Reglillas ocular y objetivo micromtricas
Cmara lcida
Microscopio estereoscpico
Cmara fotogrfica adaptada al microscopio
Cmara fotogrfica adaptada al microscopio
Videograbadora y casetes
Portaobjetos y cubreobjetos
Pipetas Pasteur y goteros
Aguja de diseccin
Vaselina
Sulfato de Nquel al 1%
Metilcelulosa
Papel absorbente
Infusiones diversas (ver medios de cultivo)
Colorantes vitales (ver preparaciones temporales)
Colorantes supravitales (ver preparaciones permanentes)

Bibliografa
Aguilar, M. M., Coutio, B.B. y Salinas, R. P. 1996. Manual general de tcnicas histolgicas
y citoqumicas. Las prensas de Ciencias. Facultad de Ciencias UNAM.
Finlay, B. J., Rogerson, A.yCowling, A. J. 1988. A beginners guide to collection, isolation,
cultivation and identification of freshwater Protozoa. CCAP.Titus Wilson y Son Ltd,
Kendal.
Foissner, W. 1991.Basic light ans scanning electron microscopic methods for taxonomic
studies of cilliatedprotozoa.Europ. J. Protistol. 27:313-330.
Jahn, T. L., Bovee, E. C. y Jahn, F. F. 1979. How to know the Protozoa.2da ed. Wm. C. Brown,
Dubuque, Iowa.
Kudo, R. R. 1977. Protozoology.5ta ed. Charles C. Tjomas Pub. Springfield.
Patterson, D. J. y Hedley, S. 1992. Free-living freshwater Protozoa.AcolourGuide.Wolfe
Pub. Ltd, England.

15

4. Medios de cultivo de protozoos de vida libre

Introduccin
Los medios de cultivo proporcionan a los protozoos un microhbitat adecuado. Para que
un medio tenga resultados positivos, requiere de condiciones biolgicas, qumicas y fsicas
adecuadas, similares a las del ambiente natural.
Los cultivos pueden favorecer un nivel poblacional adecuado y mantenerse por un
tiempo razonable. Se clasifican frecuentemente de acuerdo con la presencia y ausencia de
otros organismos acompaantes de la especie que se pretende cultivar.
Polixnico. El cultivo contiene varias especies, en el caso de que no se conozca su
identidad se le denomina agnotoxnico o agnotobitico.
Monoxnico. El cultivo contiene adems de la especie que se intenta cultivar, otra
especie la cual frecuentemente es su alimento.
Axnico. En el cultivo slo est presente la especie que se desea cultivar. Los
organismos se alimentan de los nutrientes en solucin del medio de cultivo, el cual
proveer de todos los requerimientos nutricionales de la especie en estudio.

Material
Microscopio ptico
Microscopio estereoscpico
Autoclave u olla de presin
Perilla elctrica
Muestras de agua recolectadas en diferentes localidades
Portaobjetos y cubreobjetos
Frascos de boca ancha de 1 L
Frascos de boca ancha de 50 ml
Cajas de Petri
Cristalizadores de 1 L
Cristalizadores de 250 ml
Tubos de ensayo
Tapas de vidrio esmerilado
Pipetas Pasteur con bulbo
Vasos de precipitado de 250 ml
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Vasos de precipitado de 1 L
Vasos de precipitado de 50 ml
Rollo de plstico adherente
Rollo de papel encerado
Ligas
Algodn no absorbente
Etiquetas adherentes
Granos de arroz
Granos de cebada
Granos de chcharo
Granos de maz
Granos de trigo
Paja
Suelo de jardn
Tamices 16, 8, 3.4 mm

Cultivos polixnicos
El cultivo Polixnico permite la observacin de la diversidad de protozoos que se pueden
encontrar en una muestra recolectada en un cuerpo de agua y es el que se sugiere para
iniciar a los alumnos en el conocimiento de los protozoos.
Se recolecta una muestra de agua y sedimento en un ambiente dulceacucola como
Xochimilco, Chapultepec u otro cuerpo de agua (ver mtodos de recolecta) utilizando los
frascos de 1 litro. Tambin puede ser adecuada el agua de floreros, que tenga ms o
menos 5-8 das de haberse colocado las flores, o el agua de acuarios (anotar en la etiqueta
la localidad o procedencia de la muestra, as como la fecha).
En el laboratorio se hace una revisin preliminar, observando bajo el microscopio
preparaciones frescas de las muestras, y con ayuda de la bibliografa especializada de hace
una determinacin preliminar de los diferentes protozoos observados.

Preparacin de infusiones
Las infusiones de granos y hojas de plantas aumentan la cantidad de compuestos
orgnicos que estimulan el crecimiento bacteriano y como consecuencia el crecimiento de
los protozoos, en especial de flagelados y ciliados bactervoros.
17

El agua que se utiliza para las infusiones puede ser la recolectada en el medio
natural, o agua de la llave o agua destilada. Algunos recomiendan utilizar agua mineral
embotellada (no carbonatada) la cual provee una composicin qumica adecuada. El agua
del medio natural debe contener muy poca contaminacin de compuestos qumicos o
residuos animales la cual se filtra inmediatamente despus de su recolecta y
posteriormente se hierve por unos minutos. La utilizacin del agua de la llave es muy
frecuente, pero debe tener un bajo contenido de metales. Se recomienda que cualquier
agua que se utilice, se hierva y se deja por un da para que se acumule el oxgeno disuelto,
antes de que sean inoculados los organismos.
Algunos substituyen el agua por una solucin de sales conocida como medio Chalkley:
Cloruro de sodio
Cloruro de potasio
Cloruro de calcio
Agua destilada

0.1 g
0.004 g
0.006 g
1000 ml

Infusin de paja
a) En un vaso de precipitados colocar 1 L de agua corriente con 10 g de paja y poner a
hervir en una parrilla durante 5 minutos.
b) Dejar que se sedimente la paja y se enfre completamente.
c) En una caja de Petri o en un tubo de ensayo o en un frasco pequeo agregar 1 parte de
la infusin de paja (el sobrenadante) con 4 partes de la muestra recolectada.

Infusin de trigo, cebada o chcharo

a) En un vaso de precipitado se coloca de 25-35 ml de agua de la llave con 3 granos de
trigo o cebada o chcharo y se pone a hervir por 5 minutos.
b) Dejar enfriar completamente.
c) En una caja de Petri o en un tubo de ensayo o en un frasco pequeo agregar 1 parte de
la infusin y granos de trigo, cebada o chcharo con 4 partes de la muestra recolectada.

Infusin de maz

18

a) En un vaso de precipitado de 25-50 ml de agua de agua de la llave con un grano de maz

y se pone a hervir por 10 minutos. Despus hacerle una pequea perforacin al grano.
b) Dejar enfriar completamente
c) En una caja de Petri o en un tubo de ensayo o un frasco pequeo agregar 1 parte de la
infusin con el grano con 4 partes de la muestra recolectada.

Infusin de arroz
a) En el caso de utilizar granos de arroz (3 granos por 25-30 ml de agua) se recomienda
que se agreguen despus que haya hervido el agua para que no se desintegren, o se
colocan en el agua hervida fra y se dejan dos das antes de ser agregados a la muestra. Si
se utiliza arroz con cscara se siguen los mismos pasos que las infusiones de trigo, cebada
y chcharo.
b) Los granos se pueden esterilizar, slo pasndolos rpidamente por una flama, esto
eliminar a los hongos y caros que se encuentren en la superficie.
c) Tambin se pueden hervir los granos, dejarlos enfriar y colocarlos directamente a la
muestra recolectada. Es importante sealar que no se utilicen ms granos que los
recomendados en las proporciones anteriores.

Extracto de suelo
Se utiliza el suelo como medio de cultivo, el cual no debe ser muy cido, no contener
mucha materia orgnica, ni alta concentracin de sales. Se recomienda el suelo de
jardines calcreos o suelo agrcola, el cual se seca directamente al sol e en un cuarto
caliente. Se le quitan las piedras y se pulveriza en partculas lo ms finas posible o tambin
se pueden tamizar, utilizando los tamices de 16, 8, 3.4 mm.
a) El suelo se mezcla con el agua en una proporcin de 220 ml de agua por 35 g de
suelo utilizando un cristalizador de 250 ml, o si se utilizan tubos de ensayo, se colocan 15
ml de agua por 2 g de suelo.
b) En un cristalizador hervir el agua varias veces. Para algunos autores el uso del
autoclave es importante (a 15 psi, 121C por 15 minutos) por obtener ms sustancias en
solucin y por una eliminacin total de los organismos que contiene el suelo.
Posteriormente se deja por lo menos una semana antes de usarse.
19

c) Cuando el medio est completamente limpio con un color amarillo profundo

dorado a plido se decanta y filtra o se puede usar con el sedimento en el fondo (cultivo
bifsico).
d) Agregar 1 parte de la muestra.
A este medio se le puede agregar unos granos e cebada hervidos, con la finalidad de
promover un rpido crecimiento bacteriano. Se pueden utilizar otros granos, pero si se
usan granos de arroz, deben agregarse despus que hirvi el agua, para que no se
desintegren. Existen varias modificaciones para este procedimiento como el colocar un
poco de carbonato de calcio debajo del suelo en los tubos de ensayo, debido a que
algunos medios pueden ser muy cidos.
En general, algunos autores consideran que los organismos aumentan su nmero
ms rpidamente en las infusiones de granos, aunque si el extracto de suelo se coloca en
cristalizadores ms grandes, esto permitir ms estabilidad despus de que se alcanza un
alto nivel de organismos. Tambin sugieren que para algunos gneros como Paramecium
y Stentor si las poblaciones empiezan a bajar, se deben poner algunos individuos en una
infusin en una caja de Petri y cuando el nmero de organismos haya aumentado en la
infusin, inocularlos en un cristalizador con extracto de suelo.

Recomendaciones
Los medios de cultivo en general pueden durar varios meses, pero es muy importante en
consideracin los siguientes puntos:
1) Todo el material deber estar perfectamente limpio, para lo cual se recomienda
que se laven y enjuaguen perfectamente, algunos autores recomiendan el uso de
desinfectantes o la autoclave.
2) Los frascos, tubos de ensayo, cajas de Petri o cristalizadores, en donde se
encuentran los cultivos, debern cubrirse, con el objeto de retardar la evaporacin y sobre
todo evitar la contaminacin por pequeos insectos, esporas de hongos y bacterias,
dejando que pase slo el oxgeno. Para cubrir los medios de cultivo se utiliza plstico
adherente, en el caso de los cristalizadores tambin se utilizan tapas de vidrio esmerilado
o papel encerado el cual se asegura con una liga. A los tubos de ensayo se les coloca antes
en la abertura una porcin de algodn no absorbente.
3) Los cultivo s debern mantenerse en lugares sombreados retirados de los rayos
solares directos y si es posible en un lugar con orientacin norte.
20

4) La temperatura es un factor muy importante. Los protozoos como otros

organismos tienen un intervalo de temperatura donde pueden vivir y una temperatura
ptima donde se desarrollaran mejor. Varios protozoos tienen un intervalo de
temperatura muy amplio y generalmente se multiplicaran ms rpidamente hacia la parte
superior del intervalo, pero sin llegar al lmite. Sin embargo, es importante considerar que
una rpida multiplicacin llevar a una rpida disminucin del alimento y a una
acumulacin de productos de desecho. Para mantener un cultivo adecuadamente se
recomienda que a) el cultivo se deje por varios das a una temperatura que de un buen
nmero de protozoos y despus mantenerlo a una temperatura ms baja; este mtodo
prolongara la vida del cultivo y no ser necesario subcultivarlos frecuentemente b) idear
un mtodo para mantener los cultivos permanentemente a una temperatura moderada,
varios autores recomiendan una temperatura promedio de 20C.
5) Cuando se inocula a un medio de cultivo nuevo (subcultivo) utilizando una pipeta,
se debern transferir e mayor nmero de organismos, teniendo cuidado de no transferir
grandes cantidades del medio de cultivo viejo. Es importante sealar que una gran
variedad de protozoos pueden cultivarse, utilizando estos medios de cultivo, para algunos
ser ms fcil su crecimiento que para otros, por ejemplo aquellos protozoos que crecen
en altas concentraciones de bacterias en estos medios crecern sin mayor esfuerzo, en
cambio para algunas especies con necesidades nutricionales especficos, se requerir de
medios especiales para su cultivo. Todos los protozoos tienen algunos requerimientos
bsicos que deben ser considerados para el cultivo de determinada especie, por lo que el
siguiente paso sera cultivar diferentes especies de protozoos por separado, tomando en
cuenta lo anterior. Existen actualmente una gran variedad de medios monoxnicos y
axnicos especficos para varios gneros de protozoos (ver medios de cultivo para
amebas).
6) En cada uno de los frascos, tubos de ensayo, cajas de Petri o cristalizadores en
donde se encuentran los cultivos, anotar en una etiqueta los siguientes datos:
Fecha
Tipo de infusin (arroz, maz, trigo, paja, chcharo o cebada)
Localidad

Bibliografa
Finlay, B. J., Rogerson, A.y Cowling, A. J. 1988. A beginners guide to collection, isolation,
cultivation and identification of freshwater Protozoa. CCAP.Titus Wilson y Son Ltd,
Kendal.
21

Kudo, R. R. 1977. Protozoology.5ta ed. Charles C. Tjomas Pub. Springfield.

Lee, J. J. y Soldo, A. T. 1992. Protocols in Protozoology.Society of Protozoologists. Allen
Press, Lawrence.
Page,

F.
1981.
The
culture
and
use
teaching.LavenhamPressLimited, Lavenham.

22

of

free-living

Protozoa

in

5. Preparaciones temporales
Introduccin
En las preparaciones temporales se utilizan los colorantes vitales y en su elaboracin no se
incluye fijacin, deshidratacin, aclaramiento ni montaje. A la gota con los protozoos que
se estn observando en vivo, se le coloca directamente una pequea gota del colorante
vital o se le agrega por capilaridad en uno de los extremos del cubre objetos. Son varios
los colorantes que se utilizan con la finalidad de destacar varios orgnulos citoplasmticos
(Tabla 1 y figs. 1-3). Generalmente los colorantes se preparan en solucin alcohlica o
acuosa (Tabla 2).

COLORANTE

ESTRUCTURA QUE TIE

Azul de cresil brillante

Aparato parabasal

Azul de metileno

Grnulos citoplasmticos, ncleo

Azul de toluidina cc

Cilios, flagelos

Lugol

Almidn, glicgeno, cilios, flagelos, (quistes vivos)

Nigrosina

Citoplasma, membranas, tricocistos, vacuolas contrctiles, flagelos y cilios

Rojo Congo

Vacuolas digestivas (indicador)

Rojo neutro

Vacuolas contrctiles

Verde de Metilo

Ncleos, mitocondrias, cromosomas, ncleo

Verde Jano

Mitocondrias

Verde rpido

Citoplasma, ncleo (colorante de contraste)

Violeta de metilo

Citoplasma, cilios, flagelos, mitocondrias, ncleo, plastos

Tabla 1. Algunos colorantes para la observacin de los principales orgnulos de los

protozoos.

23

Tablas 2. Preparacin de algunos colorantes.

AZUL DE METILENO

VERDE JANO

Azul de metileno.1 g

Verde Jano0.1 g

Agua destilada..100 ml

Agua destilada1000 ml

AZUL DE TOLUIDINA

VERDE DE METILO

Solucin acuosa al 0.5%

Solucin
Verde de metilo1 g
Agua destilada100 ml

Acidulado
cido actico glacial..1 ml
Agua destilada.100 ml
Verde de metilo..0.5 g

LUGOL

VERDE RPIDO

Yodo..0.4 g

Solucin A:

Yoduro de potasio4.0 g

Solucin saturada de verde rpido en

alcohol absoluto.1 ml

Agua destilada100 ml

Metilcelosolve en igual cantidad de alcohol

etlico absoluto1 ml
Si el Lugol est muy concentrado rebajar
24

con agua destilada 50:50

Alcohol etlico absoluto.25 ml

Aceite de clavo75 ml
Mezclar ambas soluciones

ROJO CONGO

AZUL CRESIL BRILLANTE

Rojo Congo.....................0.1 g

Solucin stock al 1% en alcohol absoluto

Agua destilada..100 ml

Diluirlo 10 veces para utilizarlo

Colocar una gota en el porta objetos
Evaporar el alcohol, colocar una gota de
organismos y dejar de 5-10 minutos.

ROJO NEUTRO

VIOLETA DE METILO

Rojo neutro.1 g

Violeta de metilo..1 g

Agua destilada..100 ml

Agua destilada.100 ml

En general se puede diluir de 1:10,000 y hasta 1:180,000 con agua destilada o agua del
medio donde viven los protozoos.
Lo ms adecuado es hacer pruebas para determinar la mejor concentracin del colorante
en relacin con el tiempo de supervivencia de organismos en estudio.

25

Fig. 1. En el gnero Euplotesse encuentra el macroncleo den forma de banda. Colorante

vital verde metilo, 40x.

Fig. 2. Se observa el macroncleo de Paramecium color verde. Colorante vital verde de

metilo, 40x.

Fig. 3. Las vacuolas de Parameciumse observan de color azul despus de varios minutos de
haber sido aplicado un colorante indicador como el rojo congo. Adicionalmente se
observan principalmente en la parte anterior la expulsin de los tricocistos. 40x.
26

En el siguiente organigrama se detallan los pasos a seguir en lo referente a las tcnicas de

tincin de los protozoos.
RECOLECCIN DE
LA MUESTRA

Preparaciones
Temporales

Preparaciones
permanentes

En el portaobjetos
coloca una gota de
colorante

Fijacin

Agregar una gota

y/o un corte de la
muestra

Tincin
Diferenciacin

Lavado

Lavado
Mezclar
Deshidratacin
Cubrir con un
cubreobjetos

Aclaracin

Sellar los cuatro lados del

cubreobjetos con vaselina

Montaje
Etiquetado

Bibliografa
Aguilar, M.M., Coutio, B.B. y Salinas, R.P. 1996. Manual general de tcnicas histiolgicas
y citoqumicas. Las prensas de Ciencias. Facultad de Ciencias UNAM.
Gavio, G.T., Jurez, L.C. y Figueroa, T.H.H. 1980. Tcnicas biolgicas selectas de
laboratorio y campo. Ed. Limusa. Mxico.
Kudo, R. R. Protozoologa. 1era ed. En espaol. C.E.C.S.A. Mxico.

27

6. Preparaciones permanentes
Introduccin
No existe un solo mtodo que pueda revelar todos los detalles necesarios para una buena
descripcin de protozoos. Asimismo, un mtodo de tincin no es igualmente apropiado
para todos los tipos de protozoos. Las buenas descripciones generalmente demandan, por
lo menos la observacin en vivo, una impregnacin de nitrato de plata y protargol o
carbonato de plata.
Adems es importante para los detalles realizar dibujos y tomar fotografas.
Al final del captulo se incluyen una serie de microfotografas que ilustran las diferentes
tcnicas.

Tcnica de Giemsa
Tincin utilizada frecuentemente para parsitos, destacndose su ncleo y flagelos.
Reactivos
Colorante de Giemsa
Alcohol metlico
30 ml
Glicerina
10 ml
Giemsa
0.25 ml
Mezclar y conservar el colorante en un frasco oscuro.
Metanol absoluto.
Blsamo de Canad o euparal.
Procedimiento
1.- Hacer frotis y dejar secar al aire.
2.- Para fijas a los protozoos, cubrir el frotis con metanol absoluto, durante minuto,
escurrir
3.- Teir con el colorante de Giemsa de 1-30 minutos. Escurrir y revisar la intensidad
de la coloracin bajo el microscopio.
4. Lavar con agua destilada y escurrir.
5. Lavar con agua corriente y escurrir.

28

6. Dejar secar al aire.

7. Montar en blsamo de Canad o euparal.

Tcnica de hematoxilina de Harris

Para diferenciar ncleo y citoplasma.
Reactivos
Fijador Nissenbaum
Cloruro mercrico o bicloruro de mercurio
(Sol. Acuosa saturada-60 g en un litro de agua destilada)
cido actico glacial
Formol comercial
t-butanol
Formol al 5%
Cloruro de magnesio al 8%
Hematoxilina de Harris (Sigma)
Alcohol etlico 50%, 70%, 96% y absoluto
Xilol
Blsamo de Canad o euparal

10 ml
2 ml
2 ml
10 ml

Procedimiento
1. Colocar en un portaobjetos una gota concentrada de organismos y agregar una
gotita de cloruro de magnesio al 8%-10 minutos, principalmente para los ciliados
contrctiles-, dejar secar la gota con la finalidad que de que los protozoos queden
adheridos al portaobjetos. Se puede utilizar para la adhesin de los organismos al
portaobjetos la albmina que se indica en la siguiente tcnica.
2. Agregar 1 gota de fijador Nissenbaum o formol al 5% durante 5 minutos.
3. Lavar con agua destilada dos cambios de 5 minutos.
4. Teir con la Hematoxilina de Harris 5 minutos. Agregarla slo donde estn los
organismos.
5. Lavar con agua de la llave. Escurrir.
6. Lavar con agua destilada. Escurrir.
29

7. Deshidratar con alcoholes 50%, 70%, 96%, 5 minutos cada uno, y dos cambios con
alcohol absoluto de 5 minutos cada uno.
8. Aclarar con xilol dos cambios cada 5 minutos cada uno.
9. Montar con blsamo de Canad o euparal.

Tcnica tricrmica (Modificacin de Masson)

Para diferenciar el ncleo, orgnulos citoplasmticos y de locomocin.
Reactivos
Albumina-glicerol de Mayer
Albmina filtrada
30 ml
Glicerol
20 ml
Formol comercial
3 gotas
Se diluye la mezcla (9 ml) con agua destilada (1ml)
Fijador Schaudinn
Solucin saturada de
Cloruro de mercurio
66 ml
Alcohol absoluto o de 96%
33 ml
Alcohol actico glacial
1 ml
Mordente (mezclar en 100 ml de etanol al 70% - 1 minuto)
Yodo
7.0 g
Yoduro de potasio
5.0 g
Colorante (Mezclar en 100 ml de agua)
Cromotropo 2R
0.6 g
Verde rpido
0.15 g
Verde brillante
0.15 g
cido fosfotngstico
0.7 g
cido actico 1 ml (por 100 ml de agua)
Alcohol acidificado
Alcohol de 95%
10 ml
cido actico glacial
1 gota
Alcohol 70%, 100%
Xilol
Blsamo de Canad o euparal
Procedimiento
30

1. Colocar una gota de albmina sobre el portaobjetos y se hace un frotis y dejar

secar.
2. Concentrar a los organismos y agregar una gota sobre la albmina.
3. Fijar los protozoos con Schaudinn por 10 minutos.
4. Agregar el mordente 1 minuto.
5. Dos cambios de alcohol de 70%, cada uno por 1 minuto.
6. Agregar el colorante de 2-6 minutos.
7. Diferenciar con alcohol de 95% acidificado de 5-10 segundos.
8. Sumergir dos veces en alcohol de 100%, 1 minuto cada uno.
9. Xilol de 1-3 minutos.
10. montar en blsamo de Canad o euparal.

Tcnica Nigrosina-cloruro de mercurio-formol (NMF) de Borror (1968, 1969)

Para destacar cinetosomas, cilios, fibras citoplasmticas y ornamentaciones
superficiales.
Reactivos
Cloruro de magnesio 8%
Fijador-colorante
Solucin Nissenbaum
Solucin acuosa saturada de bicloruro de mercurio
cido actico glacial
t-butanol
Formol comercial
Mezclar y conservar la solucin en un frasco oscuro
Solucin Deroux-Faidy
Formol comercial
Nigrosina
Agua destilada
Mezclar y conservar la solucin en un frasco oscuro

31

10 ml
2 ml
10 ml
2 ml

40 ml
4g
100 ml

Mezclar 12 partes de solucin Nissenbaum y una parte de solucin Deroux-Faidy y

conservar la solucin en un frasco oscuro. Esta mezcla se prepara en el momento que se
va a utilizar.
Alcoholes 70%, 80%, 96%, 100%
Xilol
Blsamo de Canad o euparal
Procedimiento
1. Concentrar los protozoos: centrifugar el cultivo o la muestra durante 2-5 minutos
a 150-500 rpm, esto depender del tipo de protozoos en estudio y decantar el
sobrenadante o utilizar una pipeta Pasteur y bajo el microscopio estereoscpico recolectar
los protozoos y concentrarlos en un vidrio de reloj.
2. Colocar con una pipeta 1-2 gotas del concentrado sobre un portaobjetos y agregar
cloruro de magnesio al 8% por 5-10 minutos, principalmente para lo ciliados contrctiles.
Se puede dejar la preparacin durante 5-10 minutos para que se evapore el lquido y se
adhieran los organismos al portaobjetos o se agrega al fijador-colorante inmediatamente
despus del cloruro de magnesio.
3. Aadir 2-3 gotas del fijador-colorante a una altura de 2-3 cm, en posicin
perpendicular a la preparacin.
4. Despus de uno segundo, agregar varias gotas del fijador-colorante en uno de los
extremos del portaobjetos, dejando que corra al centro del portaobjetos, despus de 15 25 segundos, escurrir el exceso.
5. Deshidratar en alcoholes 70%, 80%, 96% y absoluto, de 3-5 minutos en cada uno.
6. Aclarar con Xilol (dos cambios 5 minutos en cada uno).
7. Montar en blsamo de Canad o euparal.

Tcnica de nitrato de plata en seco de Klein (1926, 1958)

Para destacar el sistema de lneas argnticas (argiroma)
Reactivos
Nitrato de plata 5%
Blsamo de Canad o euparal
Opcional: Cloruro de magnesio 8% (para especies muy contrctiles)
32

Generalmente para esta tcnica se utiliza una lmpara de rayos ultravioleta.

Procedimiento
1. Colocar una gota de cultivo sobre un cubreobjetos, est se extiende con una aguja de
diseccin y se deja secar.
2. Introducir el cubreobjetos en una solucin de nitrato de plata al 5% durante 5 minutos.
3. Lavar en agua destilada dos veces.
4. Colocar el cubreobjetos en una caja Petri con agua destilada baja la lmpara de rayos
ultravioleta durante 5 minutos. Colocar una hoja debajo de la caja Petri.
5. Lavar con agua destilada.
6. Dejar secar al aire.
7. Montar con blsamo de Canad o euparal.

NOTA: Si los ciliados son muy contrctiles utilizar cloruro utilizar cloruro de
magnesio al 8% como primer paso, antes de sacar la gota. Si no se tiene lmpara de
rayos ultravioletas se deja la preparacin directamente expuesta a los rayos solares
despus del nitrato de plata. Otros recomiendan nitrato de plata al 2% durante 6-8
minutos. Otros dejan el nitrato de plata en la preparacin y la colocan bajo los rayos
solares por 10 minutos.

Tcnica de protargol de Silva-Neto (Modificacin de las tcnicas de protargol de Tuffrau,

1964, 1967)
Para detectar el aparato nuclear, cinetosomas, cilios, cinetodesmata, fibras corticales y
citoplsmicas.
Reactivos
Fijador Stieve (preparar antes de usarse; los componentes se pueden guardar)
Bicloruro de mercurio saturado (disolver 60 g de HgCl2 en un litro de agua
destilada y hervida)
38 ml
Formol comercial
10 ml
cido actico glacial (=cido actico concentrado)
3 ml
Hipoclorito de sodio 3%
gotas
33

Albumina de Mayer
Albmina filtrada
30 ml
Glicerol
20 ml
Formol comercial
3 gotas
Se diluye la mezcla (9 ml) con agua destilada (1 ml)
Alcohol absoluto-formol concentrado (8:2)
Protargol al 0.8-1%
(Esparcir sobre la superficie del agua y dejar que se disuelva el protargol son
mezclar y calienta en una estufa de temperatura constante).
Revelador
Sulfito de sodio
2.5 g
Agua destilada
50 ml
Se disuelve y se agrega hidroquinona
0.5 g
Tiosulfato de sodio al 2.5%
Alcoholes de 50 al 100%
Xilol
Blsamo de Canad o euparal
Procedimiento
Para los primeros cuatro pasos se puede utilizar la centrifuga.
1. Concentrar a los protozoos (baja velocidad y unos segundos).
2. Quitar el exceso de agua.
3. Fijar con Stieve 2o minutos. Tambin se pude fijar con Bouin, glutaraldehido al
2.5% o tetrxido de osmio al 2%*.
4. Lavar tres veces en agua destilada. Agregar en los dos ltimos lavados 3 gotas de
hipoclorito de sodio al 3%. Observar en el microscopio que se hayan aclarado.
5. Lavar otras tres veces o ms.
6. Los protozoos se colocan en el portaobjetos y se agrega un pequea gota de
albminaglicerol. El material se distribuye homogneamente y se deja secar a
temperatura ambiente por varias horas o se mete a la estufa a 40-50 C.
7. Antes de la impregnacin, cubrir la preparacin con una mezcla alcohol-formol
(8:2) dejar 1 minuto y lavar 2 minutos, dejar secar. Este procedimiento evita que se
desprendan las clulas.
34

8. Para la impregnacin se puede usar una charola de vidrio, con una tapa. En el
fondo se pone un papel filtro hmedo y se distribuyen las preparaciones secas sobre ste.
Con una pipeta se cubren las preparaciones con protargol al 0.8-1%. La charola se pone en
la estufa a 45-50 C por 30-60 minutos, dependiendo el tamao del protozoo. Evitar que el
protargol se evapore.
9. Lavar las preparaciones una por una con agua destilada y pasar rpidamente al
revelador, 10-20 segundos.
10. Lavar rpidamente con agua destilada y observar la impregnacin bajo el
microscopio. Si es necesario, se puede dejar ms tiempo en el revelador, el cual puede
variar en concentracin.
11. Cuando se alcanza la impregnacin deseada, se pasa al tiosulfato de sodio 2.5%,
30 segundos para fijar la impregnacin.
12. Lavar con agua destilada 1 minuto. S la impregnacin decrece, se coloca
nuevamente en el revelador.
13. Deshidratar en una serie de alcoholes de 50-100%, 3 minutos en cada uno.
14. Xilol, tres cambios de 3 minutos.
15. Montar con blsamo de Canad o euparal.

*Los fijadores utilizados por el autor varan segn las especies:

Fijador Stieve para Lacrymaria olor, Spirostomumminus,
Paramecium Aurelia, EuploteswoodruffiyFebrea salina.
Bouin alcohlico para Diophrysappendiculata y Colepssp.
Glutaraldehido al 2.5% para Trichinymphasp.y las opalinas.
Tetroxido de osmio al 2% para Tracheloraphisphoenicopterus.

Colpodacucullus,

Tcnica de Carbonato de plata piridinado de Fernndez-Galiano (1976)

Para destacar aparato nuclear, cinetosomas, cilios, cinetodesmata, extrusomas, fibras
corticales y citoplsmicas.
Reactivos
Formol
Piridina
35

Solucin de Ro-Hortega
Solucin acuosa de nitrato de plata al 10%
50 ml
(Se coloca en un frasco)
Solucin acuosa carbonato de sodio al 5%
150 ml
(sta se va agregando poco a poco a la solucin de nitrato de plata,
agitndola constantemente)
Agregar amoniaco al 25%, gota a gota y agitar hasta que el precipitado se
disuelva, teniendo en cuenta de no agregar en exceso. Agregar agua destilada
hasta un volumen total de 750 ml. La solucin es estable por varios aos.
Solucin de proteasa-peptona
Agua destilada
96 ml
Proteasa-peptona (bacteriolgica)
4g
(Esparcirla sobre la superficie del agua y dejar que se disuelva sin mezclar)
Formol
0.5 ml
Desechar si se coloniza con bacterias y hongos
Tiosulfato de sodio al 5%
15 ml
Procedimiento
1. Colocar en una cpsula de porcelana 3 ml de cultivo.
2. Fijar con 3 gotas de formol por 2 minutos.
3. Agregar 10 gotas de piridina.
4. Agregar 2 ml de la solucin de Ro-Hortega.
5. Agregar 10-15 gotas de proteasa-peptona con dos gotas de formol.
6. Agregar 20 ml de agua destilada.
7. Calentar sobre una placa de calentamiento a 60 C, hasta obtener un color
amarillo-Pardo (color de cognac).
8. Vaciar el contenido a otra cpsula de porcelana que contenga 15 ml de tiosulfato
de sodio al 5%.
9. Lavar con agua destilada (varios cambios). Para ello se utiliza una pipeta Pasteur,
teniendo cuidado de no tomar el material que est depositado en el fondo de la capsula,
donde se encuentran los especmenes impregnados.
10. tomar una gota del fondo de la cpsula y ponerla sobre el portaobjetos y cubrirla
con el cubreobjetos.
36

En esta tcnica, los ciliados son observados en preparaciones temporales, a partir de

las cuales se toman fotografas.
Se si se desea obtener preparaciones permanentes:
1. Los protozoos se colocan en el portaobjetos y se agrega una pequea gota de
albmina-glicerol. El material se distribuye homogneamente y se deja secar a
temperatura ambiente por varias horas o se mete a la estufa a 40-50 C.
2. Cubrir la preparacin con una mezcla alcohol-formol (8:2) dejar 1 minuto y lavar 2
minutos, dejar secar.
3. Deshidratar en una serie de alcoholes de 50-100%, 3 minutos cada uno.
4. Xilol, tres cambios de 3 minutos.
5. Montar con blsamo de Canad o euparal
NOTA: Existen otros medios de montaje sintticos y neutrales, adicionales al blsamo de
Canad y el euparal, los cuales pueden ser utilizados, por lo que se recomienda consultar a
los proveedores para su orientacin.

Bibliografa
Aladro-Lubel, M.A., Martnez-Murillo, M.E y Mayn-Estrada, R. 1990. Manual de ciliados
psamfolos marinos y salobres de Mxico. Cuaderno 9. Instituto de Biologa.
Universidad Nacional Autnoma de Mxico.
Finalay, B.J., Rogerson, A. y Cowling, A.J. 1998. A beginners guide to collection, isolation,
cultivation and identification of freshwater protozoa.CCAP.Tutis Wilson y Son Ltd,
Kendal.
Foissner, W. 1991.Basic light and Scanningelctron microscopic methods for taxonomic
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Lee, J.J., Small, E., Lynn, D., y Bovee, E. 1985. Some techniques for collecting, cultiving and
observing protozoa.En: Lee, J., Hutner, S. y Bovee, E. (eds). An illustrated guide to the
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37

Lpez-Ochoterena, E. y Serrano-Limn, G. 1997. Manual de tcnicas protozoolgicas.

Universidad Autnoma de Tlaxcala y Sociedad Mexica de Historia Natural, A.C.
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Page,

F.
1991.
The
culture
and
use
teaching.LevenhampressLimited, Levenham.

38

of

free-living

Protozoa

in

7. Foraminferos bentnicos
Introduccin
Los foraminferos son protozoos que presentan tamaos que van de menos de milmetros
hasta algunos que alcanzan a medir 10 cm o un poco ms. Se caracterizan por tener
estructuras extracelulares conocidas con el nombre de testas, las cuales son parecidas a
caparazones y estn compuestas por una cmara (unicelulares) o por ms (multiloculares)
(Fig.1), estas ltimas presentan una variedad de arreglos. Las cmaras estn separadas por
tabiques denominadas septos, adems presentan formenes (perforaciones) y un orificio
conocido con el nombre de abertura y es precisamente por estas dos ltimas estructuras
por donde salen los pseudpodos de tipo granuloreticulpodos; la mayora de la masa
citoplsmica sale por la abertura. De acuerdo a la composicin qumica, las testas pueden
ser calcreas, arenosas y silceas. Los foraminferos se caracterizan por presentar ciclos de
vida muy complejos. La mayora son marinos y bentnicos y los foraminferos planctnicos
se distinguen por sus cmaras globosas como Globigerina.
Por su gran cantidad en el medio marino, son importantes en la reconstruccin
paleogeogrfica, en las condiciones del medio marino de pocas pasadas, como ndices de
localizacin de pozos petrolferos.

Objetivo
Generales
Conocer la diversidad morfolgica de los foraminferos bentnicos y elaborar una
placa de montaje para su conservacin.
Particulares
Identificar por lo menos a nivel de familia o gnero los foraminferos en estudio.
Separar los foraminferos de una muestra de arena.
Elaborar una placa de montaje sencilla.

Material
Microscopio estereoscpico
Muestra de arena con foraminferos
39

Vidrio de reloj o caja Petri

Agujas de diseccin
Pincel
Cajita de cartn
Portaobjetos
Cartulina Negra
Papel Cascarn
Tijeras
Perforadora
Plumn indeleble
Barniz de uas transparente
Pegamento
Procedimiento
1. Coloque en una caja de Petri una pequea porcin de la muestra de arena y
obsrvela bajo el microscopio estereoscpico. Con la ayuda de una aguja de diseccin o
pincel se esparce la muestra y se localizan las testas de los foraminferos. Utilizando la
aguja o pincel (algunos mojan la punta) se seleccionan y se separan una por una las testas
y se colocan en una cajita de cartn o en un vidrio de reloj.
2. La elaboracin sencilla de una placa de montaje para foraminferos (Fig. 2) se
realiza de la siguiente manera: Se cortan dos rectngulos del mismo tamao de un
portaobjetos, una de cartulina negra y el otro de papel cascarn; el primero se pegar
directamente sobre el portaobjetos, al segundo se le hacen peroraciones simtricas y
regulares con una perforadora (por ejemplo dos filas de seis orificios cada una), teniendo
la precaucin de no perforar un espacio razonable del lado izquierdo para poder anotar
los siguientes datos: nombres cientficos de los foraminferos (se sugiere que se haga una
abreviacin de ellos), localidad, fecha.
Este rectngulo de papel cascarn perforado se pega sobre el rectngulo de
cartulina negra previamente colocado y pegado sobre el portaobjetos.
Para montar a los foraminferos en la placa, se recolectan de la cajita de cartn o
vidrio de reloj, utilizando el microscopio estereoscpico y la punta de un pincel
ligeramente mojado o una aguja de diseccin y se trasladan un por uno a los diferentes
orificios de la placa. Para su adhesin se utiliza una mnima cantidad de barniz de uas. Si
se tienen varios individuos de una especie, estos se pueden colocar juntos en el mismo
orificio, con una ligera distancia entre ellos. Una vez que todos los foraminferos estn
colocados y pegados en sus correspondientes orificios, as como hechas las anotaciones
40

correspondientes: nombre cientfico*, localidad y fecha de muestreo, se puede pegar

sobre el rectngulo de papel cascarn perforado un portaobjetos para proteger a los
foraminferos montados. Al reverso de la preparacin se anota el nombre de los alumnos
que elaboraron la placa.

*para

la determinacin de la familia o gnero o especies de foraminferos se utilizar

la literatura especializada necesaria.

Fig. 1. Conjunto d testas de foraminferos multiloculares, 40x.

41

Fig. 1. Placa sencilla de foraminferos.

Cuestionario
1. Selecciones tres especies de foraminferos y haga un dibujo de cada una de sus
testas sealando sus principales estructuras.
2. Mencione las principales formas en que se disponen las cmaras de las testas y
haga un dibujo de cada una de ellas.
3. Cul es el ciclo de vida de un foraminfero?

Bibliografa
Boltovskoy, D. 1981. Atlas de zooplancton del Atlntico Sudoccidental y mtodos de
trabajo con zooplancton marino. Pub. Esp. Inst. Nac. Invest. Desarr. Pesq. Mar de
plata, Argentina.
Cushma, J.A. 1959. Foraminifera, Their classification and economic use.4ta ed. Harvard
University Press, Cambridge, Massachusetts.
Hausman, K y Hlsman, N. 1996.Protozoology. Georg TheimVerlag, Stuttgart.
Lee, J.J., Leedale, G.F y Bradbury, P. (eds.). 2000. An illustrated guide to protozoa. 2da Ed.
Society of Protozoologist. Allen-Press, Kansas.
42

Loeblich, A.R. Jr. y Tappan, H. 1988. Foraminifera genera and their classification. Van
Nostrand Reinhold, New York. 2 Vols.
Sen Gupta, B.K. 2002.Modern foraminidera.Kluwer Academic Pub. Dordrecht, The
Netherlands.
Sleigh, M.A. 1989.Protozoa and other Protist.Cambridge Univ. Press.Cabrigde.

43

8. Epibiontes de crustceos
Introduccin
La epibiosis es la relacin facultativa en la cual, uno de los miembros (epibionte) se
adhiere a un hospedero o basibionte. Esta relacin no implica dependencia de ninguno de
los miembros; sin embargo, en ocasiones se torna especfica, de tal manera que el
epibionte ocupar exclusivamente como sustrato a un taxn o incluso una regin del
cuerpo del basibionte.
En la naturaleza, numerosos organismos establecen una relacin epibitica. Los
protozoos ciliados son, sin duda, un taxn relevante y han sido observados sobre
diferentes basibionte como son: fanergamas acuticas, algas, crustceos (anfpodos
(Figs. 1 y 2), ispodos, cladceros, coppodos, decpodos), moluscos, etc.
Los grupos de ciliados que ms frecuentemente establecen relaciones epibionticas
con crustceos corresponden a los peritricos, donde gneros como Epistylis, Vorticella,
Zoothamnium, Carchesium, ConthuriayLagenophrys (Fig. 3 y 4), han sido ampliamente
documentados. Los suctores, grupo de ciliados que carecen de ciliatura en su fase adulta,
tambin albergan una serie de especies Epibiontes, como aquellas incluidas en los gneros
Acineta, Tokophrya, Trichophryay Dendrocometes (Fig. 5 A y B). Cada taxn de ciliados
muestra una serie de adaptaciones morfofisiolgicas que lo posibilita para establecerse
sobre el exoesqueleto o branquias de su basibionte.
En el caso de la epibiosis entre protozoos ciliados y crustceos, se ha documentado
el papel funcional de basibionte y del epibionte. El basibionte, invertebrado acutico
perteneciente al phylum Arthropoda, provee el substrato adecuado para la fijacin del
epibionte. Provee adems, el flujo continuo de agua que proporciona al ciliado las
partculas de alimento y el oxgeno necesario para su metabolismo. Asimismo, el ofrece un
refugio adecuado (debido a la arquitectura del crustceo, por ejemplo las setas de los
pereipodos) que lo protege contra los depredadores. El epibionte, puede ser considerado
inocuo o causante de alguna anomala; poco se ha documentado del dao fsico que
provoca el contacto del ciliado sobre el exoesqueleto o las branquias. Entre los daos
indirectos que pueden provocar se tiene un entorpecimiento en la locomocin del
basibionte, y en grado extremo, puede interferir en el intercambio gaseoso si la carga de
Epibiontes es muy alta. Sin embargo, en la epibiosis, el grado de importancia difiere con
relacin a la continuidad de la especie como Epibiontes o si su presencia es ocasional. Esto
implica una diferencia en el grado de especificidad del epibionte por su basibionte, de tal
manera que es posible distinguir especies que se adhieren a una amplia gama de
44

substratos (por ejemplo Acineta tuberosa y Vorticella campnula), los que se adhieren
exclusivamente a substratos animales (Epistylis branchiophila) y los que se asocian
exclusivamente a un grupo particular de basibionte y/o regiones del cuerpo (por ejemplo
especies de Lagenophrys).

Objetivos
Generales
Conocer el tipo de asociacin denominada Epibiosis entre protozoos ciliados y
crustceos.
Particulares
Caracterizar las especies de ciliados Epibiontes que utilizan como sustrato a
diferentes grupos de crustceos.
Establecer la distribucin espacial de los Epibiontes en el cuerpo de los Basibiontes
Comparar las comunidades de ciliados adheridos a la superficie corporal externa de
diferentes crustceos.

Material
Microscopio ptico
Microscopio estereoscpico
Lupa
Muestras de agua que contengan diversos crustceos y vegetacin
Portaobjetos excavados y cubreobjetos
Acuario
Bomba de aeracin
Pincel
Pipeta Pasteur
Agujas de diseccin
Bistur
Pinzas de diseccin
Charola de diseccin
Colorantes vitales
Colorantes supravitales
Blsamo de Canad
45

Procedimiento
1. En un cuerpo de agua, por medio de un arrastre con un frasco o bolsa de malla,
recolecte una muestra que contenga diversos crustceos.
2. Coloque la muestra en una bolsa de plstico y aada vegetacin del medio y agua.
3. Traslade la muestra al laboratorio y colquela en un acuario con oxigenacin
constante.
4. En una charola de diseccin, utilizando una lupa o un microscopio estereoscpico,
separe los crustceos con la ayuda de un pincel o pipeta Pasteur. Posteriormente coloque
cada crustceo en un portaobjetos excavado con agua del acuario. Determine el grupo al
cual pertenece el ejemplar.
5. Realice la diseccin del basibionte para obtener por separado los diferentes
apndices o regiones corporales.
6. Observe al microscopio ptico para detectar la presencia de ciliados Epibiontes.
Con la ayuda de bibliografa, identifique el grupo al cual pertenece el epibionte. Utilice
colorantes vitales para destacar diferentes caracteres. De ser necesario emplee diferentes
tcnicas microgrficas para establecer la identidad especfica de los protozoos (ver
practica de tcnicas).
7. Vace los datos en la hoja de registro (Tabla 1). Utilizando estos datos, elabore: a)
esquema general de la distribucin espacial de los Epibiontes para cada basibionte y b)
cladograma de presencia/ausencia por casa especie de epibionte y para casa basibionte.
8. Catalogue el grado de especificidad de cada epibionte tomando en cuenta su
presencia en uno o ms basibionte y la regin del cuerpo o apndice donde se observ
adherido.

46

Fig. 1. Fotografa de un anfpodo.

Fig. 2. Esquema de la anatoma de un anfpodo.

Fig. 3. Ciliado colonial; en vivo, 10x.

47

Fig. 4. Ciliado lorigado Lagenophryssp. ; En vivo, 20x.

Fig. 5. Suctores A) Acineta sp. 20x. B) Dendrocometes sp. 4. Tcnica de hematoxilina de

Harris.

Cuestionario
1. Describa los mecanismos utilizados por los basibiontes para a) eliminar sus
Epibiontes, b) para adquirir los epibiontes.
2. Documente la relacin entre el ciclo de vida de los ciliados epibiontes con el de los
crustceos basibiontes.
3. Seale la repercusin de la epibiosis entre protozoos ciliados y crustceos.
4. Mencione los caracteres que se utilizan para la identificacin de los protozoos
ciliados
que
se
adhieren
al
exoesqueleto
de
los
crustceos.
48

Tabla 1. Registro de ciliados epibiontes en crustceos.

Basibionte:

Localidad:

Fecha

Nombre

REGISTRO DE CILIADOS EPIBIONTES EN LAS REGIONES DEL CUERPO DE LOS BASIBIONTES

Nmero
Basibionte

Cabeza,
antenas y
partes bucales

Pereionitos y
pereipodos

Pleonitos y
plepodos

Uronitos y
urpodos

49

Telson

Otros

Notas

50

Bibliografa
Fernndez-Leborans, G. y Tato-Porto, M.L. 2000. A review of the species of protozoan
epibionts on crustaceans. I. Peritrich Ciliates. Crustaceana, 73(6): 643-683.
Hausmann, K. y Hlsmann, N. 1996. Protozoology. Georg TheimVerlag, Stuttgart.
Kudo, R. R. 1977. Protozoology.5ta ed. Charles C. Thomas Pub. Springfield.
Lee, J.L., Leedale, G.F. y Bradbury, P.C. (eds). 2000. An illustrated guide to the Protozoa.
Society of Protozoologist, Lawrence.
Mayn-Estrada, R. y Aladro-Lubel, M.A. 1998. Tres especies de Suctores (Protozoa:
Ciliophora) ectosimbiontes de acocil Cambarelluspatzcuarensis. An. Inst. Biol.
UNAM. Ser. Zool., 69(1): 1-12.
Mayn-Estrada, R. y Aladro-Lubel, M.A. 2002. Distribution and prevalence of 15 species of
epibiontsperitrich ciliates on the crayfish Cambarelluspatzcuarensisvillalobos, 1943
in lakePtzcuaro, Michoacn, Mexico.Crustaceana, 74(11): 1213-1224.
Mayn-Estrada, R. y Aladro-Lubel, M.A. 2006.LagenophryslenticulaandL. patina
(Peritricha), epibionts of Hyalella Azteca (Amphipoda).A study using scanning
electron microscopy to reveal detail of the loricaaperture.Protistology 4(4): 339-345.
Sleigh, M.A. 1989.Protozoa and other protists.Cambridge Univ. press. Cambridge.
Wahl, M. 1989. Marine epibiosis.I. Fouling and antifouling: some basic aspects. Marine
EcologyProgress Series, 58: 175-189.

51

9. Endosimbiontes de anlido e insectos

Introduccin
Varios grupos de protozoos establecen algn tipo de simbiosis con otros organismos. En
los integrantes del reino Animal, la asociacin se establece con vertebrados o con
invertebrados. Dentro de estos ltimos, algunos miembros del phylumAnnelida,
particularmente loe oligoquetos conocidos como lombrices de tierra, pertenecientes a la
clase Clitellata, albergan a protozoos como son las gregarinas.
Los artrpodos donde se incluyen los insectos, como son los chapulines (orden
Orthoptera), termitas (orden Isoptera) y cucarachas (orden Blattodea) establecen
simbiosis con representantes de varios grupos de protozoos, como son los
hipermastiginos, tricomondidos y gregarinas.
Los protozoos Parabaslidos, incluyen los grupos denominados hipermastiginos y
tricomondidos. Los hipermastiginos se caracterizan por poseer numerosos flagelos que
se insertan en la regin anterior de los organismos, alineados longitudinal o espiralmente;
los cuerpos parabasales aparecen como mltiples. Presentan adems axostilos. Sus ciclos
de vida incluyen una reproduccin de tipo asexual por fisin binaria. Habitan
exclusivamente en el intestino de insectos que se alimentan de madera y presentan
bacterias asociadas intra y extracelularmente. Como ejemplos de hipermastiginos se
pueden citar los siguientes gneros: Trichonympha, Barbulanympha, Joenia, Lophomonas.
Los tricomondidos poseen de cuatro a seis flagelos, axostilo, costa y membrana
ondulante. Un ejemplo de simbionte de termitas esMixotrichaparadoxa, el cual presenta
cuatro flagelos que actan en la locomocin como organelos gua en forma coordinada
con numerosas espiroquetas, localizadas en la superficie celular.
Los apicomplexos se caracterizan por poseer un complejo apical con tres
componentes diferenciables morfolgicamente: el conoide, el complejo anular y un par de
orgnulos denominados roptras. Las gregarinas, un grupo incluido dentro de los
apicomplexos son parsitos obligados de varios grupos de animales, habitando en el
intestino o cavidades del cuerpo de anlidos, artrpodos, moluscos, equinodermos y
tunicados, de lo cuales los hexpodos como las cucarachas y chapulines, son los
hospederos ms frecuentes, albergando por ejemplo a Monocystislumbrici, sin embargo
los efectos del parasitismo se conocen solo en pocas especies.

52

Objetivos
Generales
Conocer los grupos de protozoos Endosimbiontes de invertebrados (anlidos e
insectos).
Particulares
Observar y caracterizar los grupos de hipermastiginos, tricomondidos y gregarinas.
Aplicar tcnicas de estudio de organismos endosimbiontes.

Material
Microscopio ptico
Microscopio estereoscpico
Lombriz de tierra de tierra previamente purgada
Termitas
Cucaracha
Portaobjetos y cubreobjetos
Frascos de vidrio con tapa
Pipetas Pasteur
Vidrio de reloj
Caja de Petri
Caja de Petri con cera
Navaja de un solo filo o bistur
Agujas de diseccin
Alfileres
Algodn
Mechero
Solucin salina 0.75%
Acetato de etilo
Alcohol etlico 50%
Cloroformo
Colorantes vitales
Colorantes supravitales
Blsamo de Canad

53

Procedimiento
Diseccin de oligoqueto (lombriz de tierra)
1. Recolecte a las lombrices y colquelas en un frasco a cuyo fondo se le adiciono
una capa de papel higinico hmedo y trozos pequeos de este mismo material. Este
procedimiento de purga permitir que el contenido del aparato digestivo sea remplazado
paulatinamente por el papel higinico y sea factible la localizacin de los rganos internos.
2. Previo a la diseccin, sacrifique a la lombriz con cloroformo o alcohol etlico 50%
en una cmara hmeda, lo que permitir que la lombriz no se contraiga.
3. Coloque a la lombriz en una caja de Petri con cera. Realice un corte medioventral
y longitudinal, con la ayuda de un bistur o navaja de un solo filo, hasta el nivel del clitelo.
Separe cuidadosamente la epidermis y fije los extremos con alfileres, colocando estos en
posicin oblicua (Figs. 1 y 2).
4. Corte los tabiques peritoneales que se localizan entre cada uno de los segmentos.
5. Distinga el aparato digestivo, los corazones y localice los tres pares de vesculas
seminales (Fig. 3). Separe estas ultimas en una caja de Petri o vidrio de reloj que contiene
solucin salina 0.75%.
6. En un portaobjetos coloque una gota del contenido de las vesculas seminales,
solucin salina y colorante vital; coloque un cubreobjetos y observe al microscopio ptico.
7. Distinga las diferentes fases del ciclo de vida de Monocystis, u otro gnero
asociado a la lombriz (Fig. 4).
8. Para elaborar preparaciones temporales o permanentes, coloque una gota con el
contenido de las vesculas en un portaobjetos, seque con calor (mechero) y fije con
alcohol y aada hematoxilina de Harris (ver practica de tcnicas); seque nuevamente con
calor; aada blsamo de Canad y coloque un cubreobjetos para observar al microscopio.

Diseccin de termita
1. Despus de la recolecta de las termitas, proceda a su sacrificio utilizando
cloroformo en una cmara cerrada.
54

2. Coloque las termitas en una caja de Petri con cera y sujtela firmemente con
alfileres. Coloque una aguja de diseccin entre el trax y el abdomen y separe este ultimo
en un vidrio de reloj con solucin salina 0.75%.
3. Macere cuidadosamente el abdomen, elimine los restos de cutcula y elabore una
preparacin temporal para observar los hipermastiginos y tricomondidos (Figs. 5 y 6).
4. Utilice colorante vitales para relatar los orgnulos. Elabore preparaciones
permanentes utilizando algunas de las tcnicas (ver preparaciones permanentes).
Diseccin de una cucaracha*
1. Recolecte a la cucaracha y depostela en un frasco cuya tapa tenga perforaciones
para la entrada de aire.
2. En el frasco, introduzca un algodn impregnado con acetato de etilo (maneje el
acetato con cuidado) y mantenga el frasco cerrado por 15 minutos la tapa no debe tener
perforaciones.
3. Coloque a la cucaracha en un acaja de Petri con cera, en posicin ventral y
sujtela con alfileres. Realice un corte longitudinal y medioventral, con la ayuda de una
navaja de un solo filo o con bistur (Fig. 7). Una vez abierto el abdomen, reconozca el
aparato digestivo y seprelo para colocarlo en un vidrio de reloj con solucin salina 0.75%.
Corte un fragmento y macerelo para colocarlo en un portaobjetos, observe al microscopio
y localice las gregarinas (Fig. 8). Utilice los colorantes vitales para destacar los orgnulos
de los simbiontes.

55

Fig. 1. Esquema de la diseccin de la lombriz de tierra. (pg.85)

Fig. 2. Extremo anterior de la

lombriz; en vivo.

Fig. 3. Diseccin de la lombriz en

donde se observan las vesculas
seminales.

56

Fig. 4. Gregarnidos de las vesculas seminales de la lombriz. A) gametoquiste, 20x b)

esporoquiste; en vivo, 40x.

Fig. 5. Hipermastiginos endosimbiontes de las termitas; en vivo, 40x.

Fig. 6. Tricomondido asociado a las

termites; en vivo, 40x.

Fig. 7. Diseccin d la cucaracha en

sonde se observa parte del intestino.

57

Fig. 8. Gregarnido (esporoquiste) endosimbionte de la cucaracha; en vivo, 40x.

Cuestionario
1.- Seale las caractersticas morfolgicas de cada uno de los organismos observados que
representan adaptaciones a la endosimbiosis.
2.- Describa el tipo de simbiosis de cada uno de los organismos observados.
3.- Fundamente la importancia que revisten estos organismos como endosimbiontes en
sus hospederos.

Bibliografa
Brusca, R. C. y Brusca G. J. 2003. Invertebrates.Sinauer Inc. Pub., Sunderland.
Guillan, P. J. y Cranston, P. S. 2000. The insects.An outline of Entomology. Blackwell Sci.,
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Kudo, R. R. 1977. Protozoology.5ta ed. Charles C. Thomas Pub. Springfield.
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Society of Protozoologists, Lawrence.
Sleigh, M. A. 1989.Protozoa and other Protists.Cambridge Univ. Press.Cmbridge.

58

10. Epibiontes de peces

Introduccin
El trmino acuicultura se define como el arte de multiplicar y cultivar los animales y
plantas acuticas; engloba las actividades que tienen por objetivo principal, la produccin
de especies acuticas, bajo condiciones controladas o semicontroladas por el hombre, se
trate de plantas, de animales de agua dulce, salobre o salada.
La acuacultura se centra sobre todo en cuatro grandes categoras de producciones:
las algas (esencialmente cultivadas en el sudeste asitico), los moluscos, los crustceos y
los peces, objeto de esta prctica.
Hoy en da, la acuacultura es el rea del sector de produccin alimenticia con el
mayor crecimiento a nivel mundial, en 1980 tan solo el 9 por ciento del pescado para el
consumo humano proceda de la acuacultura, esta cifra se ha elevado hoy al 43 por ciento,
segn el estudio del estado mundial se la acuicultura 2006 de la FAO, lo cual equivale a
45.5 millones de toneladas de pescado anuales, con un valor de 63 000 millones de
dlares. Mxico produce aproximadamente 204 012 toneladas anuales de pescado, se las
cuales 58 660 toneladas son producidas en cultivos dulceacucolas. De igual manera la
produccin de peces ornamentales, registr en el ao 2000 una ganancia de 900 millones
de dlares a nivel mundial.
La actual expansin de la acuicultura intensifica la comercializacin y la produccin,
trayendo consigo el aumento de enfermedades, lo que requiere soluciones para evitar
prdidas econmicas y el desarrollo social a nivel mundial. Cifras del Banco Mundial
indican que, en el mundo, la acuacultura ha llegado a perder hasta tres millones de
dlares al ao por diversas enfermedades, algunas ya endmicas, que no fueron tratadas
de manera oportuna.
El cultivo de peces dulceacucolas, en particular en sistema intensivo, ya sea con
fines alimenticios u ornamentales, favorece la proliferacin de ciertos parsitos y el
consecuente desarrollo de fenmenos patolgicos. Existen alrededor de 16 gneros de
ciliados asociados con los peces dulceacucolas, ya sea como parsitos o comensales,
facultativos u obligatorios, sin embargo, tres de ellos: Ichthyophthirius, Trichodina y
Chilodonella (Fig. 1) son los principales causantes de enfermedades que en ocasiones
pueden conducir a la muerte de sus hospederos.
Las infecciones comienzan, a menudo, cuando se produce una inmunosupresin
debido a una variacin brusca de temperatura, posiblemente en combinacin con niveles
59

de amonio crticamente elevados o debido a factores relacionados con el estrs

ambiental, como cambios bruscos en las condiciones fisicoqumicas del agua, entre otros.
Los peces pueden albergar una o ms especies de ciliados ectosimbiontes
simultneamente; en ocasiones solo ciertas reas del pez son afectadas, por ejemplo las
branquias o la piel, y en el caso de los parsitos, obtienen su alimento de estos tejidos u
rganos del hospedero.

Objetivos
Generales
Identificar las especies de ciliados asociados (epibiontes) a peces ornamentales
(japoneses Carassiusauratus y pez gato Corydorapaleatus).
Particulares
Determinar las especies de ciliados y cuantificar el nmero de ciliados en muestras
totales de moco de piel y branquias de los peces.
Evaluar los daos tisulares producidos por los ciliados asociados en la piel y
branquias de los peces.

Material
Microscopio ptico calibrado para la medicin de micrmetros (m)
Microscopio estereoscpico
Contador digital (4 dgitos)
5 ejemplares de peces de ornato Carassiusauratus (japoneses) o Corydorapaleatus
(pez gato) con agua original de la pecera.
Portaobjetos y cubreobjetos
Agujas de diseccin
Verde de metilo acuoso al 1%

Procedimiento
1. Observe a los peces en el microscopio estereoscpico, detectando lesiones,
hemorragias, produccin excesiva de moco, etc.
60

2. Obtenga las muestras totales del moco de la piel (en vivo) y de las branquias
(despus de descerebrar) mediante raspado con portaobjetos, agregue unas gotas de
agua de pecera y elabore un frotis, monte la preparacin con cubreobjetos y observe al
microscopio.
3. Revise la preparacin temporal, abarcando toda el rea del cubreobjetos.
4. Una vez localizaos los ciliados asociados, observe los aspectos morfolgicos y
fisiolgico esenciales (locomocin, contraccin, nutricin, reproduccin, entre otros) y
cuantifquelos (elaborar tablas).
5. Resalte el aparato nuclear (macroncleo (s) y microncleo (s)), empleando una
gota de verde de metilo acuoso al 1%.
6. Mida los ejemplares de ciliados, en los libres nadadores y anchura de la clula; en
peritricossesilinos (solitarios o coloniales, p. ej. Vorticella, Epistylis) longitud y anchura de
los zooides, dimetro de la abertura peristomal, anchura del labio peristomal, longitud del
pednculo, dimetro de la escpula y longitud de la colonia (en su caso); en
peritricosmobilinos (tricodnidos) dimetro de la clula, del disco adhesivo y del anillo
denticulado, grosor de la membrana del borde, longitud de los dentculos y grados de la
espiral adoral.
7. Cuantifique el nmero de ciliados en las preparaciones temporales (muestras
totales de moco de piel y branquias) de los peces (Tabla 1). Calcule prevalencia,
abundancia e intensidad promedio (ver Margoliset al. 1982).
8. Haga un esquema detallado de los organismos.
9. Identifique mediante la bibliografa especializada a nivel de gnero y/o especie.

61

Tabla 1. Cuantificacin de ciliados en piel y branquias de los peces.

Gnero de ciliado

PEZ 1

PEZ 2

PEZ 3

PEZ 4

PEZ 5

Nmero
de
ejemplares
Piel/Branq.

Nmero de
ejemplares
Piel/Branq.

Nmero de
ejemplares
Piel/Branq.

Nmero de
ejemplares
Piel/Branq.

Nmero de
ejemplares
Piel/Branq.

Amphileptussp.

Chilodonellasp.

Ichthyophthiriussp.

Apiosomasp.

Trichodinasp.

Colepssp.

62

Tetrahymenasp.

Epistylissp.

Carchesiumsp.

Vorticellasp.

Colpodasp.

63

Fig. 1. Microfotografas de Trichodinasp., IchthyophthiriusmultifiliisyChilodonellasp.,

principales ciliados parsitos de peces cultivados.

64

Cuestionario
1) Realice la bsqueda hemerogrfica de un artculo de investigacin reciente (no anterior
a 2005), ya sea en Mxico o en el extranjero sobre alguno de los siguientes parsitos de
peces dulceacucolas: Ichthyophthiriussp, Trichodinasp, O Chilodonellasp; elabore un
resumen en espaol y entregue la fotocopia del artculo.
2) Investigue sobre los mtodos de control de los tres gneros mencionados en la
pregunta anterior, tanto en acuarios como en granjas acucolas

Bibliografa
Barnab, G. 1996. Bases biolgicas y ecolgicas de la acuicultura. Ed. Acribia, S. A.
Zaragoza, Espaa.
Baudin-Laurencin, F. y Vigneuelle, M. 1996. Patologas de las explotaciones acucolas. En:
Bernab, G. (ed.). Bases biolgicas y ecolgicas de la acuicultura. Ed. Acribia.
Zaragoza Espaa, pp. 469-487.
Bondad-Reantaso, G. M., Subasinghe, R. P., Richar, J. A., Kazuo, O., Supranee, C., Adlard,
R., Tan, Z. y Shariff, M. 2005. Disease and health management in Asian
aquaculture.Veterinary Parasitology, 132:249-272.
Bruno, D. W. y Stamps, D. J. 1987.Saproleniasis of atlantic salmon, Salmosalar L., fry. J.
Fish Diseases, 10:513-517.
Ewing, M. S. y Kocan, C. M. 1986.Ichthyophthiriusmultifiliis (Ciliophora) development in gill
epithelium.J.Protozool., 33(3): 369-374.
FAO 2006. El estado mundial de la pesca y la acuacultura. Organizacin de las Naciones
Unidas para la Agricultura y la Alimentacin (FAO), Roma, Italia.
Hoffman, G. L. 1987. Ciliates of freshwater fiches, En: Kreier, J. P. (ed.). Parasitic
Protozoa.Vol. 2. Academic Press, New York, pp. 583-632.
Margolis, L., Esch, G. W., Holmes, J. C., Kuris, A. M. y Schad, G. A. 1982. The use of
ecologicalterms in Parasitology. J. Parasitol., 68(1): 131-133.
SAGARPA 2003. Anuario Estadstico de Pesca 2003. Secretara de Agricultura, Ganadera,
Desarrollo Rural, Pesca y Alimentacin.
Schperclaus, W. 1992.Fish Diseases.Vol.1 y 2.Balkema, Rotterdam.
65

11. Observacin de Opalinas

INTRODUCCIN
Los protozoos opalnidos u opalinas fueron descubiertos por Leeuwenhoek en los albores
de la microscopa. Estos organismos se parecen superficialmente a los ciliados y al
principio fueron clasificados como tales, pero su morfologa, su manera de dividirse y su
ciclo biolgico son diferentes a los ciliados.
Son endocomensales del intestino grueso de ranas y sapos principalmente; se han
encontrado algunas especies en urodelos, reptiles y en peces.
Son organismos muy aplanados, de forma oval a alargada, su cuerpo esta uniformemente
cubierto de cilios distribuidos en hileras longitudinales. La mayora de los opalnidos
presentan un gran nmero de ncleos iguales, aunque existen algunos gneros que solo
poseen dos ncleos iguales (Protoopalina). Carecen de boca, su nutricin es saprozoica;
algunos sufren plasmotoma y sexualmente por anisogamia.

OBJETIVO
Observar algunos Gneros representativos de esta clase: Opalina, Protoopalina y
Cepedea.
Observar y conocer las estructuras morfolgicas que los caracterizan.
Elaborar preparaciones permanentes.
MATERIAL
Biolgico:
Rana
Cristaleria:
Caja Petri
Cubre objetos
Pipeta Pasteur o gotero
Portaobjetos
Vaso de precipitado de 250 ml
Vidrio de reloj
Equipo:
Microscopio compuesto
66

Microscopio de diseccin
Lmpara
Sustancias:
Agua acidulada
Agua amoniacal
Agua destilada
Alcoholes graduales
Blsamo de Canad
Cloroformo
Eosina
Fijador de Schaudinn
Formol al 10%
Hematoxilina de Harris
Solucin salina al 0.7%
Xilol
Varios:
Alfileres
Algodn
Charola de diseccin con parafina o lminas de unicel de 25 x 25 cm
Estuche de diseccin
Mechero
Tela de asbesto
Tripie
PROCEDIMIENTO METODOLGICO
1. En un frasco colocar la rana, introducir un algodn impregnado de cloroformo,
tapar el frasco y esperar unos minutos.
2. Una vez anestesiada, colocar la rana en una charola de diseccin con la superficie
ventral hacia arriba, sujetndola con alfileres.
3. Hacer un corte medio ventral y dos transversales (anterior y posterior) para dejar
expuestos los rganos internos. Localizar el intestino grueso y extraer la Procin terminal
de ste (cloaca).
4. Colocar la cloaca en una caja Petri, cubrir con solucin salina y disgregar con las
agujas de diseccin.
5. Tomar una muestra y hacer una preparacin temporal, observar al microscopio.
6. Localizar las Opalinas, observar la forma de su cuerpo, su movimiento,
esquematizar y sealar sus estructuras principales (nmero de ncleos, ciliatura y hoz). En
base a las caractersticas antes mencionadas indicar el o los Gneros observados.
67

7. Puede utilizar verde de metilo para resaltar los ncleos y Nigrosina para observar
la disposicin de los cilios. (No utilizar dos colorantes en la misma preparacin).
8. Elaborar una preparacin permanente utilizando la Tcnica Hematoxilina
Eosina.

CUESTIONARIO
1. Mencione las caractersticas morfolgicas que distinguen a los Opalnidos.
2. Explique por qu los Opalnidos no se agrupan dentro de los Ciliofora a pesar de
que presentan cilios.
3. Describa el ciclo de vida de Opalina. Qu relacin existe entre el ciclo
reproductor al anfibio y la divisin de las opalinas?
4. Explique si en estos protozoarios existe especificidad hospedatoria. Cite ejemplos.
5. Realice una investigacin bibliogrfica en relacin a los estudios realizados sobre
este grupo. Anexe fotocopia de dos trabajos o artculos.

BIBLIOGRAFA
Jahnm T.L., Bovee, Z.C. and F.F. Janhn.1979. How to know the protozoa. W.M.C. Brown
Co. Dubuque Iowa. 279 pp.
Martnez Prez J.A. y M.E Gutierrez. 1985. Introduccin a la Protozoologa. Trillas. Mxico.
207 pp.
Sleigh, M.A. 1979. Biologa de los Protozoarios. De. Blume, Madrid. 339pp
Smyth J. D. 1994.Introduction to Animal Parasitology.Cambridge Univ. Press. 553 pp.

68

Fig. 1. Ciclo de vida de Opalina ranarum en una Rana temporaria (Smyth J. D. 1994)

69

12.Phylum Porifera
Introduccin
Son animales pluricelulares, individuales o coloniales, su cuerpo est formado por
una agregacin laxa de clulas de aspecto masenquemtico. Su cuerpo est formado por
poros (ostlos y osculos), con canales y cmaras que sirven para el paso del agua.
Presentan simetra radial o sin simetra, epidermis de clulas aplanadas con
pinacocitos; gran parte de las cavidades internas tapizadas por clulas flageladas con
embudo o collas (Coanocitos), que provocan las corrientes de agua; una matriz protenica,
gelatinosa, llamada mesohilo (mesoglea) contiene amebocitos de varios tipos y elementos
esquelticos. Esqueleto de espculas cristalizadas, calcreas o silceas, o bien proteico
(espongina), o combinacin de espculas silceas y espongina.
No tienen verdaderos rganos no tejidos; la digestin es intracelular; excrecin y
respiracin por simple difusin. Todos los adultos son ssiles. Se reproducen
asexualmente por gemacin o bien por gmulas y sexualmente, mediante vulos y
espermatozoides; las larvas, flageladas (anfiblstula y paranqumula), nadan libremente.
Todos son acuticos, la mayora de las ms de 5000 especies de esponjas son
marinas, aunque unas 150 viven en aguas dulces.
Objetivo
Conocer algunos de los Gneros representativos de la Clase Demospongia, as como
los elementos que constituyen su exoesqueleto.
Elaborar una preparacin permanente de espculas y fibras de espongina.
Material
Biolgico
Ejemplares de esponjas
Sustancias
cido ntrico concentrado
Cloro comercial
Rojo neutro
Alcoholes (30, 50, 70, 96%)
Xilol
Blsamo de Canad
70

Cristalera
Portaobjetos
Cubreobjetos
Vasos de precipitado
Equipo
Microscopio ptico
Microscopio estereoscpico
Pinzas de diseccin
Goteros
Mechero
Tripie
Tela de asbesto
Procedimiento metodolgico
1. Observacin e identificacin de esponjas microscpicas
a) observar y esquematizar ejemplares representativos de la Clase Demospongiae,
sealando sus estructuras principales (Pinacordemis, ostiolos, sculos).
2. Elaboracin de una preparacin permanente de espculas y fibras de espongina
a) Para fibras de espongina:
Realizar un corte sagital y otro transversal de la esponja, los cortes deben ser muy
finos.
Colocar el corte en un portaobjetos y agregar agua o una gota de rojo neutro; cubrir
la preparacin y observar las fibras de espongina y su arreglo.
b) Para espculas:
Hervir un trozo de esponja en acido ntrico concentrado, o colocarlo en cloro
comercial, decantar y aadir agua de la llave, repetir este proceso (lavado) varias veces.
Deshidratar en alcoholes graduales (en cada paso dejar sedimentar), hasta alcohol
absoluto.
Tomar muestra, colocar en un portaobjetos, dejar secar el alcohol y montar.
Cuestionario
1. Esquematice los tipos estructurales que se presentan en el PhylumPorifera.

71

2. Mencione los tipos celulares que se presentan en este grupo y la funcin de cada
uno de ellos.
3. Mencione las caractersticas que se toman en cuenta para la clasificacin de las
esponjas y describa como es su clasificacin
4. Describa la importancia ecolgica, econmica y mdica que presentan los
integrantes de este Phylum.

Bibliografa
Alcolado Menndez, P. 1986. Las esponjas. Editorial Cientfico Tcnica. La Habana,
Cuba. 56 pp.
Jessop, N.M. 1991. Zoologa, Invertebrados. Interamericana. Mc Graw Hill. Espaa294 pp.
Gmez, L.P., 1982. Estudio sistemtico de las esponjas marinas de Puerto Morelos,
Quintana Roo, Mxico. Tesis profesional. Fac. Ciencias U.N.A.M. 111 pp.
Green, G. 1977. Sinopsos taxonmica de 13 especies de esponjas del arrecife, La
Blanquilla, Veracruz, Ver. Mxico. Ann. Centro de Ciencias del Mar y Limnologa, Mx.
4(1):79-98.
Meglitsch, P.A. 1978. Zoologa de invertebrados. H. Blume. Madrid. 906 pp.

72

13.Phylum Cnidaria
Introduccin
El filo Cnidarios toma su nombre de las clulas llamadas Cnidocitos que contienen
orgnulos urticantes (nematocistos).
Son animales completamente acuticos, algunos de agua dulce, pero la mayora
marinos. Presentan simetra radial, dos tipos bsicos de individuos el plipo y medusa; su
cuerpo formado de dos capas, epidermis y gastrodermis, con mesoglea (diblsticos);
algunos son considerados como triblsticos ya que la mesoglea presenta clulas y tejido
conectivo (ectomesodermo).
Presentan boca rodeada de una corana de tentculos que comunica con la cavidad
gastrovascular (con frecuencia ramificada o dividida por septos).
Se reproducen asexualmente por gemacin (plipos) o sexualmente por gametos
(medusas y algunos plipos); formas sexuales monoicas o dioicas; Larva Plnula;
segmentacin holoblastica. No presentan sistema excretor y respiratorio, presentan un
plexo nervioso subepidrmico con sinapsis simtricas y asimtricas, con algunos rganos
sensoriales.
Objetivo
Conocer la morfologa de algunos Gneros representativos de las Clases que integran el
Phylum (Clase Hidrozoa, Scyphozoa y Anthozoa).
Clase Hidrozoa
Material
Biolgico
Ejemplares de hidroideos: Obelia, Aglaophenia, Physalia, MIllepora.
Hidromedusas: Aglauray/o Liriope.
Equipo
Microscopio ptico
Microscopio estereoscpico.

Procedimiento metodolgico
73

1. Observar y elaborar un esquema de Aglaophenia y/o Obelia y sealar las

siguientes estructuras: Hidrocaulo, cenosarco, perisarco, hidroteca, gastrozoides,
dactiolozoides y gonozoides.
2. Esquematizar la hidromedusa y sealar las siguientes estructuras: Umbrela,
tentculos y bulbos tentaculares, estatocistos, manubrio, boca, canales radiales y circular,
gonadas.
3. Millepora, es un hidrozoario colonial denominado falso coral o coral de fuego, el
cual se caracteriza por presentar un exoesqueleto de Carbonato de Calcio, similar al que
presentan los corales madrepricos de la clase Anthozoa. Esquematizar y observar
detenidamente la forma de la colonia y esquematizar la Fragata portuguesa Physalia,
sealar las siguientes estructuras: flotador o pneumatforo, gonozoides, gatrozoides y
tentculos.
Clase Scyphozoa
Material
Biolgico
Ejemplares de: ChrysaorayStomolophus
Equipo
Microscopio ptico
Microscopio estereoscpico.
Procedimiento metodolgico
1. Elaborar esquemas de los ejemplares y sealar en ellos las siguientes estructuras: Boca,
brazos orales, bolsa gstrica, gnadas, tentculos, ropalia.
Cuestionario
1. Describa la importancia ecolgica, econmica y mdica de las medusas
2. Seale la importancia de la larva plnula en la filogenia del Phylum.
Clase Anthozoa
Material
Biolgico
Ejemplares de Anemonas de Mar
Madreporarios: Oculina, Diploria, Siderastrea, Montastrea.
Corales blandos: Gorgonia, Plexaurella
Equipo
74

Microscopio ptico
Microscopio estereoscpico
Procedimiento metodolgico
1. Las anemonas (plipos solitarios) se caracterizan por presentar externamente un disco
basal, una columnela y una boca rodeada de una corona de tentculos una faringe y una
cavidad gastrovascular septada, con filamentos libres o acantia. Pertenecen a la subclase
Zoantharia y al Orden Actiniaria. Esquematizar los ejemplos y sealar las estructuras
mencionadas.
2. En la subclase Zoantharia, Orden Madreporaria o Scleractinia se incluyen plipos
coloniales que presentan un exoesqueleto calcreo. Esquematizar los ejemplares y
observar la forma de la colonia y las cavidades septadas donde se alojaban los plipos.
3. Gorgonia y Plexaurellia son Gneros pertenecientes a la subclase Alcyonaria y al orden
Gorgonacea. Observar y esquematizar.
Cuestionario
1. Mencione las caractersticas de importancia taxonmica en las subclases de la clase
Anthozoa.
2. Explique la importancia que presenta el tener una larva planctnica en estos
organismos ssiles.
3. Describa como quedara estructurada una cadena trfica en un arrecife coralino.}
4. Describa cuales son los factores que revisten importancia en la distribucin de los
arrecifes.

75

76

77

78

14. 1. Prctica Extramuro

Introduccin
En el medio marino, las costas rocos constituyen un sustrato firme, que se caracteriza
bsicamente por presentar perfil muy irregular, pero adecuado para el desarrollo de una
gran diversidad de poblaciones, representadas fundamentalmente por invertebrados
sedentarios o ssiles.
En estos sustratos los organismos presentan patrones de zonacin o de distribucin, que
se explica tomando en cuenta la influencia, de factores abiticos y las interacciones
biticas. Entre los primeros se pueden mencionar caractersticas tales como la pendiente,
la orientacin, conformacin, etc., que son variables, por lo que afectan el desarrollo de
las poblaciones; sobre este factor actan los ciclos de mareas, la temperatura, el oleje, la
salinidad y la desecacin, causas importantes que detrminan la presencia de los
organismos en este hbitat.
Las interacciones biticas como son la alimentacin, que en los organismos herbvoros
depende del gran desarrollo de fitobentos, la competencia por el sustrato y la
depredacin son preponderantes para la zonacin de los organismos en los litorales rocos.
En general se reconocer que se pueda dar una regla absoluta en cuanto a la composicin
faunstica y florstica caracterstica de cada zona, pues la distribucin de los organismos
depende tanto de la latitud como de la interaccin de las mareas y de las olas.

Objetivo
Determinar la composicin, abundancia y distribucin de la fauna (invertebrados) que
tipifica el litoral rocoso del medio marino de Punta Delgada, Veracruz.
Se conocern y utilizarn mtodos y tcnicas de colecta para algunos grupos de
invertrebrados.
Se conocern y aplicaran algunas tcnicas y mtodos de muestreo.

79

Material
Para campo (por equipo):
Mapas de la localidad
Guas de campo para el reconocimiento de los invertebrados
1 libreta y 1 lpiz
2 estacas de 1.70 m
1 estaca de 2.10 m
15 m. de hilo de camo o nylon
1 cinta mtrica
1 cuchillo o navaja
3 marcos de madera de 20 x 20 cm
20 ligas y para etiquetas de colgar
10 bolsas de plstico medianas (30 cm)
10 bolsas de plstico chicas (10 cm)
1 plomada
1 cubeta con tapa
Salvavidas (chaleco), visor y snorkel
Para el proceso de datos:
Papel milimtrico
1 regla
1 calculadora
Plumones de colores
Guas, claves para identificar, artculos y libros de consulta.
Procedimiento metodolgico
En el campo:
1. Observe determinadamente la zona de trabajo, seleccione el sitio donde se puede
realizar el transecto y represntelo grficamente en su libreta.
2. Coloque las estacas, la primera de 1.70 m. donde se inicia la franja de las litorinas, la
tercera de 2.10 m. en donde aparecen los erizos o hasta donde las condiciones de trabajo
lo permitan, la segunda estaca se coloca en un punto intermedio entre las dos estacas
previamente colocadas. Tienda el hilo nylon lo ms recto posible, si se puede, nivele con
respecto a la lnea de costa. Tome la distancia con ayuda de una plomada y la cinta
mtrica entre el hilo y el sustrato cada 20 cm (Fig. 1) no olvide tomar la primera medicin
80

en al estaca que se ha colocado sobre la franja de las litorinas. Anote los datos obtenidos
en una libreta.
3. Ponga los marcos de madera sobre el sustrato, iniciando en la primera estaca,
reconozca los organismos encontrados y cuntelos, anote los datos en su libreta de la
siguiente manera:
CUADRANTE N1
Organismo

Nmero total de individuos

por especie

Recolectado (S o No)

Especie 1

10

Especie 2

20

No

Especie 3

20

No

Esto se realiza de manera continua desde la primera estaca hasta la tercera, por lo tanto
se estudiaran tantos cuadrantes como se necesiten para abarcar la distancia total de
transecto, si se tiene una longitud de 4m., se estudiarn 20 cuadrantes de 20 x 20 cm. Al
terminar cada cuadrante, revise que todos los datos estn debidamente anotados en su
libreta.
4. En caso de no poder identificar algn organismo in situ, desprndalo cuidadosamente
con el cuchillo o navaja para poderlo meter en un bolsa de plstico agragando un poco de
agua del medio, anote en una etiqueta sus datos (n de organismo, fecha, localidad, n de
cuadrante), colquela en la cubeta previamente cerrada con una liga para poderla
transportar al laboratorio donde se proceder a su identificacin con la ayuda de la
bibliografa especializada.
Procesamiento de Datos:
1. Grafique en el papel milimtrico los puntos de muestro cada 20 cm. Contra la altura del
hilo para poder obtener el perfil del litoral rocoso estudiado (Fig.2).
2. Para determinar la distribucin de los organismos a lo largo del transecto, maneje los
datos de la siguiente manera:
a) Obtenga el total de los organismos de especie X en todos los cuadrantes del transecto
(que representar el 100% de la especie X), cuente los organismos de esta especie en
cada cuadrante y obtenga su porcentaje respecto al total de la especie correspondiente.

81

Esto se har para cada especie de organismo encontrado por orden de aparicin, como en
el siguiente ejemplo:

CUADRANTE 1

N de organismos observados

Porcentaje

Littorinasp.

30

60

Littorianasp.

20

40

Nerita sp.

10

33

Purpura patula

10

33

Nerita sp.

20

66

Purpura patula

20

66

CUADRANTE 2

CUADRANTE 3

Por lo tanto en el cuadrante n 1 con Littorina sp.

50 100% Donde 50= N total de Littorinas en el transecto
30 X
30= N de Littorinas en el cuadrante 1.
El porcentaje de Littorina sp. En el cuadrante 1 es igual a 60%
Realizar el mismo procedimiento para cada una de las especies en cada uno de los
cuadrantes.
b) Trace una escala como la que se sugiere e la figura 2, para representar el porcentaje de
cada especie en el transecto.
c) grafique en el papel milimtrico, puntos de muestreo (cuadrante1, 2, 3, etc.) contra el
porcentaje de organismos de especie por orden de paricin (Fig. 2), de esta manera se
obtendr una grafica de barras, donde se podr representar la distribucin de los
organismos encontrados en el transecto.
3. Haga un grafica de la curva acumulativa de las especies encontradas en el transecto
contra el rea acumulativa (fig. 3), tomando como ejemplo la siguiente tabla.
82

N de especies
adicionales que
se presentan en
cada cuadrante

N acumulativo
de especies
adicionales

N de
cuadrante

rea acumulativa
(cm2)

N total de
especie por
cuadrante

20

40

60

80

100

120

140

Con esta curva se puede analizar el valor principal de un juego de mediciones para una
variable ecolgica, en este caso sera el nmero de especies encontradas en relacin al
sustrato. En trabajos ecolgicos por lo menos se necesitan estudiar dos zonas con
condiciones muy semejantes para poder comparar la riqueza especifica en relacin a la
variable ecolgica.
Bibliografa
Aladro Lubel, M.A., Martnez Murillo, M.E., Lira Galera, I.E. y V.E Rojas Ruiz. 1992. Guas de
practicase campo. Protozoarios e invertebrados estuarinos y marinos. AGT editor,
S.A.
Barnes, D.R. 1990. Zoologa de invertebrados. Interamericana, Mc Graw Hill. 5. Ed.
Mxico. 900pp.
Britton, J.C y B. Morton. 1989. Shore ecology of Gulf of Mexico. University of Texas press.
Autin.400 pp.
Freeman, W.H y B. Bracegirdle. 1982. Atlas de Estructura de invertebrados. Paraninfo, S.A.
Madrid. 129 pp.

83

14.2 Protozoarios Asociados a Erizos de Mar.

Introduccin
Mucho se ha estudiado acerca de la ecologa de los protozoarios de vida libre y
algunos parsitos en humanos o en animales con importancia socioeconmica, sin
embargo, poco se conoce al respecto de protozoarios asociados a invertebrados.
Los animales multicelulares proporcionan un nmero considerable de hbitats para
los protozoarios asociados, presentndose diversos tipos de simbiosis.
Los factores que limitan su presencia, abundancia y distribucin son los mismos que
afectan a los organismos de vida libre, pero la interaccin de estos factores es ms
compleja, ya que se ven afectados indirectamente por las condiciones a las que se
encuentra expuesto el hospedero, que se reflejan en sus fluctuaciones fisiolgicas
internas.
Las necesidades ms obvias de un simbionte son: el alimento y el oxgeno; aun
cuando en el hospedero existe alimento disponible el simbionte es selectivo, lo que trae
como consecuencia a que se encuentre especficamente en diferentes regiones del
aparato digestivo, en liquido clomico o que sea intracelular, etc. En cuanto al oxgeno,
pueden ser anaerbicos obligados y facultativos, de igual importancia son otros factores
fsicos y qumicos como el pH, la temperatura CO2 y tal vez cierto contenido de vitaminas.
Una de las asociaciones ms frecuentes es las que se da entre los ciliados y el erizo
de mar, como en el caso de Metopus, Plagiopyla, Cyclidium y Euplotes del aparato
digestivo de los erizos.

Objetivo
Determinar los ciliados presentes en el intestino de los erizos de mar de Gnero
Echinometra.

84

Material
Campo
2 Frascos de boca ancha
1 cubeta con tapa
250 mm de agua de mar
Laboratorio
Microscopio ptico
Microscopio estereoscpico
Portaobjetos y cubreobjetos
Estuche de diseccin
Alfileres
Charola de diseccin
3 Pipetas Pasteur con bulbo
Agua de mar filtrada
2 Cajas Petri
Anestsico: cloruro de magnesio: solucin al 8% en agua dulce o destilada
Colorantes vitales: verde de metilo acuoso al 1% y azul de metileno
Claves para identificar y libros de consulta.
Procedimiento metodolgico
Campo
Recolectar por equipo de ejemplares de erizo de mar de Gnero Echinometra y
colocarlos en la cubeta con agua de su medio, transprtalos al laboratorio vivos.
Laboratorio
1. Anestesiar a los erizos de mar con una solucin isotnica de cloruro de magnesio.
2. Despenda las espinas o crtelas con unas tijeras.
3. Cortar con unas tijeras a la altura del ecuador la testa del erizo, para obtener dos
mitades iguales con los bordes lisos.
4. En la regin oral se localiza la boca con sus 5 dientes, esta se contina con la
cavidad bucal la cual contienen la linterna de Aristteles o aparato masticador. La faringe
y esfago ascienden a partir de la boca, atravesando la linterna, el anillo acufero y
continua sus camino ascendente plegndose sobre si mismo para continuarse con el
intestino que da dos vueltas: una que constituye el intestino delgado proximal y la otra en
direccin opuesta que corresponde al intestino grueso distal, el cual desemboca en el
recto y este en el ano situado en el periprocto en la regin aboral.
5. Localizar y extraer el aparato digestivo, colocarlo en una caja Petri y cubrirlo con
agua de mar previamente filtrada.
85

6. Abrir con unas tijeras el aparato digestivo, con una pipeta tomar una muestra del
contenido intestinal y colocarlo en un portaobjeto aadiendo si es necesario una gota de
agua de mar filtrada, colocar encima un cubre objeto.
7. Observar en el microscopio ptico la preparacin, utilizando el objetivo 10X,
localizar a los ciliados. Esquematizar cada uno de los protozoarios observados y
determinar los Gneros con ayuda de bibliografa especializada.
8. Elaborar varias preparaciones utilizando colorantes vitales para resaltar algunas
estructuras que sern de utilidad para su identificacin.
9. Elaborar una preparacin permanente y presentar el listado de los Gneros de
ciliados endocomensales presentes en el intestino del erizo de mar.
Bibliografa
Aladro Lubel, M.A., Martnez Murillo, M.E., Lira Galera, I.E. y V.E. Rojas Ruiz. 1992. Gua de
prcticas de campo. Protozoarios y vertebrados estuarinos y marinos. AGT editor,
S.A.

Metopus

Plagiopyla

Euplotes

Cyclidium

86

87

Bibliografa General
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